JP6968465B1 - 冷蔵処理黄麹菌胞子の活性化方法 - Google Patents
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Abstract
Description
また、本発明は、活性化黄麹菌胞子の調製方法、醸造食品製造用麹の製造方法、及び醸造食品の製造方法を提供することを課題とする。
(I)黄麹菌胞子の活性化方法
(I−1)冷蔵処理黄麹菌胞子を、含水率50%以下の状態で30〜45℃の条件で加温する工程を有する、黄麹菌胞子の活性化方法。
(I−2)前記加温時間が少なくとも1時間である、(I−1)に記載する活性化方法。
(I−3)前記黄麹菌胞子の活性化が、冷蔵処理により低下した黄麹菌胞子の発芽力の回復である、(I−1)または(I−2)に記載する活性化方法。
(I−4)前記黄麹菌胞子の活性化が、再冷蔵処理による発芽力低下の抑制である、(I−1)または(I−2)に記載する活性化方法。
(II−1)冷蔵処理黄麹菌胞子を、含水率50%以下の状態で30〜45℃の条件で加温する工程を有する、活性化黄麹菌胞子の調製方法。
(III−1)(I−1)〜(I−4)のいずれか方法で活性化された黄麹菌胞子、または(II−1)の方法で調製された活性化黄麹菌胞子を冷蔵保存することを特徴とする、活性化黄麹菌胞子の保管方法。
(IV−1)下記の工程を有する、醸造食品製造用麹の製造方法:
(I−1)〜(I−4)のいずれかの方法で活性化された黄麹菌胞子、(II−1)の方法で調製された活性化黄麹菌胞子、または(III−1)の方法で冷蔵保管された活性化黄麹菌胞子を、種麹として炭水化物原料及び/又はタンパク質原料に接種して培養する工程。
(IV−2)前記醸造食品が醤油または味噌である、(IV−1)に記載する製造方法。
(V−1)(IV−1)または(IV−2)に記載する製造方法で得られた醸造食品製造用麹を麹原料として用いる醸造食品を製造する、醸造食品の製造方法。
また本発明の方法で、黄麹菌胞子を一旦活性化すると、その後の冷蔵処理によっても胞子の発芽力は損なわれないため、発芽力を維持した状態で冷蔵保管する方法としても有用である。
本発明は、冷蔵処理された黄麹菌の胞子(これを、本発明では「冷蔵処理黄麹菌胞子」と称する)を活性化して、低下した発芽力を回復する方法である。
当該方法は、冷蔵処理黄麹菌胞子を、含水率50%以下の状態で30〜45℃の温度条件で加温することで実施することができる。
種麹は、胞子に加えて菌糸や培養基を含有するものであってもよいが、乾燥した種麹(菌糸や培養基を含む)を、例えば、80メッシュと150メッシュ位の2段階の振盪篩いに掛けて培養基及び菌糸を除去することで、胞子のみを回収することもできる。
なお、実験例で示すように、黄麹菌胞子の発芽率と当該胞子に含まれるトレハロースとの間には正の相関関係が認められる。このため、本発明の黄麹菌胞子の活性化方法は、黄麹菌胞子のトレハロース含量を増加させる方法ということもできる。また、冷蔵処理により低下した胞子中のトレハロース含量を回復する方法ということもできる。トレハロース含量を回復することで、冷蔵処理により低下した黄麹菌胞子の発芽力を回復促進させることができ、製麹に有効に使用することが可能になる。
本発明が提供する製麹方法は、前述する方法で活性化された黄麹菌胞子を種麹として用いることを特徴とする。具体的には、前記方法で活性化された黄麹菌胞子(以下、「活性化黄麹菌胞子」と称する)を炭水化物原料及び/又はタンパク質原料に接種して培養する工程を有することを特徴とする。なお、ここで対象とする活性化黄麹菌胞子には、前述する方法で一旦活性化した黄麹菌胞子を、再度冷蔵保管した黄麹菌胞子も含まれる。
これらの原料は、前記活性化黄麹菌胞子の添加(植菌)に際して、予め粉砕及び含水させて加熱処理をしておくことが好ましい。含水及び加熱処理としては、制限されないものの、蒸す、茹でる、水炊きする、含水後に電磁波処理若しくは遠赤外線処理する等の湿熱処理方法を挙げることができる。当該方法には、蒸す等の湿熱処理することで炭水化物原料に含まれる澱粉をアルファ化する方法が含まれる。
培養期間中、必要に応じて、培養物を撹拌してもよい。特に、麹菌は好気性菌であることから、撹拌(切り返し撹拌)若しくは振盪するか、または別の方法で通気を行いながら、培養することが好ましい。
培養は、麹培養の定法に従って行うことができる。例えば、古来の麹箱を用いて培養する方法、円盤型製麹機やドラム式製麹機などの製麹機械を用いる方法などを挙げることができる。
前記の製麹方法で得られた醸造食品製造用麹は、定法に従って、所望の醸造食品に製造に使用することができる。
つまり、本発明によれば、前記の製造方法で得られた醸造食品製造用麹を用いて醸造食品を製造する工程を有する、醸造食品の製造方法を提供することができる。対象とする醸造食品は、前述するように、制限されないものの、醤油、味噌、清酒、焼酎、味醂、食酢、発酵調味料、及び麹漬け食品などを例示することができる。好ましくは醤油、及び味噌である。
以上、本明細書において、「含む」及び「含有する」の用語には、「からなる」及び「から実質的になる」という意味が含まれる。
(1)処理黄麹菌胞子の調製
黄麹菌(Aspergillus oryzae、HL15株:非冷蔵処理物、含水率50%以下、ヒガシマル醤油株式会社所有)を、パン粉と小麦フスマと水とを1:1:1(質量比)の割合で混合して調製した固体培地(殺菌処理済み)に植菌し、定法に従って、30±1℃の条件で4日間培養した。
培養後、一部を培地ごと4℃に設定した冷蔵庫に入れて、菌がコンタミしないように冷蔵保管した。
前記の方法で調製した黄麹菌胞子(培養直後の未冷蔵処理黄麹菌胞子、出麹直後)、冷蔵保管から1日目、1週間目、2週間目、3週間目、1ヶ月目、2ヶ月目、及び3ヶ月目の黄麹菌胞子(冷蔵処理黄麹菌胞子)のそれぞれを、滅菌水に懸濁し、これを滅菌した固形の麹汁培地に塗布植菌した。なお、麹汁培地は、麹1kgに対して水4L加え、55℃で15時間糖化した後、濾過して得られた濾液に寒天を加えて調整した麹汁培地を、滅菌後、冷却固化させたものを使用した。
これを、30℃で4時間培養し、その時点で発芽している黄麹菌胞子の数から発芽率を求めた。具体的には、顕微鏡にて200個の黄麹菌胞子を観察し、胞子全体の数に対する発芽胞子の数の割合(百分率)を発芽率(%)とした。
図1(A)に示すように、冷蔵保管することで黄麹菌胞子の発芽率が低下することが確認された。また発芽率の低下の程度は、保管期間が長くなるにつれて大きくなることが確認された。
前記の方法で調製した黄麹菌胞子(培養直後の未冷蔵処理黄麹菌胞子、出麹直後)、冷蔵保管から1日目、1週間目、2週間目、3週間目、1ヶ月目、2ヶ月目、及び3ヶ月目の黄麹菌胞子(冷蔵処理黄麹菌胞子)のトレハロース含量を下記の方法で測定し、黄麹菌胞子の乾燥物1gあたりの量に換算した。
[トレハロース含量の測定方法]
・黄麹菌胞子を50mL容量の遠心管に入れ、蒸留水を加えて激しく懸濁する。
・懸濁液をろ紙を用いてろ過し、70℃で完全に乾燥する。
・乾燥した胞子を、1質量%濃度になるように蒸留水で懸濁する。
・懸濁液を沸騰浴中で15分間加熱して抽出する。これを3回繰り返す。
・得られた抽出物を合わせて、遠心分離(10,000rpm、10分間)に掛ける。
・得られた上清を蒸留水で10倍希釈し、0.45μm孔のフィルターにかける。
・ろ液を30μL容量のエッペンに取り、内部標準液として0.01%のスクロース溶液30μlを同時に加え、DRY BLOCK BATHにて乾固する。
・メトキシアミン塩酸塩(20mg/ml、ピリジン溶液)100μLを加え、30℃で90分間インキュベートする。
・インキュベート後、50μLのMSTFAを加え、37℃で30分間インキュベートしたのち、下記条件のGC/MSに供する。
カラム:SH-Rxi-5sil MS,30m×0.25mm(i.d.)、膜厚0.25μm
昇温条件:80℃(2min保持)→330℃(15℃/min)→330℃(13min保持)
注入方法:スプリット スプリット比1:3
注入量:1μl
図1(B)に示すように、冷蔵保管により、黄麹菌胞子のトレハロース含量も減少する傾向が認められた。
(1)冷蔵処理黄麹菌胞子の加温処理と、その発芽率の測定
実験例1と同様にして培養調製した黄麹菌胞子を、4℃で1ヶ月間暗所に保管した冷蔵処理黄麹菌胞子を、30〜55℃の各温度条件に設定した恒湿恒温槽内で1時間加温処理した。その後、実験例1に記載するように、固体培地(滅菌固体麹汁培地)に植菌して、30℃で4時間培養し、発芽率(%)を測定した。
結果を図2(A)に示す。
図2(A)に示すように、4℃で冷蔵保管した冷蔵処理黄麹菌胞子(加温処理なし、図中、「4℃」と表記)の発芽率は61%であったのに対して、冷蔵処理黄麹菌胞子を45℃以下、好ましくは30℃〜45℃の温度条件で加温することで発芽率が回復することが確認された。一方、55℃まで加温すると、発芽率の回復は認められず、むしろ低下することが確認された。
なお、上記実験後の冷蔵処理黄麹菌胞子の含水率(105℃で24時間加熱して、その前後の質量から計算)はいずれも50%以下であった。このことから、前記の加温処理は、冷蔵処理黄麹菌胞子の含水率が50%を超えない条件であることを確認した(以下の実験例3〜4も同じ)。
上記で処理した冷蔵処理黄麹菌胞子のトレハロース含量を、実験例1と同様の方法で測定し、黄麹菌胞子の乾燥物1gあたりのトレハロース含量(mg)を求めた。結果を図2(B)に示す。
図2(B)に示すように、4℃で保管した冷蔵処理黄麹菌胞子(加温処理なし、図中、「4℃」と表記)のトレハロース含量は20.6mg/g乾燥胞子であったのに対して、これを45℃以下で加温することでトレハロース含量が増加することが確認された。一方、55℃まで加温すると、トレハロース含量の増加は認められず、むしろ低下することが確認された。
(1)冷蔵処理黄麹菌胞子の加温処理と、その発芽率の測定
実験例1と同様にして4℃で1、2及び3ヶ月間暗所保管した冷蔵処理黄麹菌胞子を、37℃の恒湿恒温槽内で3〜48時間加温処理した。その後、実験例1に記載するように、固体培地(滅菌固体麹汁培地)に植菌して、30℃で4時間培養し、その発芽率(%)を測定した。1、2及び3ヶ月間冷蔵保管した冷蔵処理黄麹菌胞子の発芽率を、加温時間毎に測定した結果を、それぞれ図3−1(A)、(B)及び(C)に示す。
図3−1(A)〜(C)に示すように、1〜3ヶ月間冷蔵保管することで低下した冷蔵処理黄麹菌胞子(加温処理なし、図中、「0h(4℃保管)」と表記)の発芽率は、37℃で3〜48時間、加温処理することでいずれも回復することが確認された。また37℃の加温条件下では3〜24時間、特に10〜20時間の加温処理により高い回復効果が得られ、それよりも長く加温してもそれ以上の効果は認められず、むしろ徐々に発芽率の回復効果が低下する傾向が認められた。
上記で処理した各冷蔵処理黄麹菌胞子のトレハロース含量を、実験例1と同様の方法で測定し、黄麹菌胞子の乾燥物1gあたりのトレハロース含量(mg)を求めた。結果を図3−2(D)、(E)及び(F)に示す。
図3−2(D)、(E)及び(F)に示すように、4℃で冷蔵保管した冷蔵処理黄麹菌胞子(加温処理なし、図中、「0h(4℃保管)」と表記)のトレハロース含量は、加温することで増加することが確認された。
(1)冷蔵処理黄麹菌胞子の加温及び再冷蔵処理と、その発芽率の測定
実験例1と同様にして4℃で1ヶ月間暗所保管した冷蔵処理黄麹菌胞子を、37℃の恒湿恒温槽内で16時間(1晩)加温処理した。その後、再び、温度4℃に調整した恒湿恒温槽内で1週間〜1ヶ月間保管した(再冷蔵処理)。次いで、実験例1に記載するように、固体培地(滅菌固体麹汁培地)に植菌して、30℃で4時間培養し、各黄麹菌胞子の発芽率(%)を測定した。結果を図4−1(A)に示す。
図4−1(A)に示すように、冷蔵保管することで低下した冷蔵処理黄麹菌胞子(図中、「冷蔵保管」と表記)の発芽率は、加温処理することで回復し(図中、「加温直後」の結果参照)、回復した発芽率は、その後、再度冷蔵保管(1週間、2週間、3週間、1ヶ月)しても、高い状態のまま維持されることが確認された。
上記で加温処理した再冷蔵処理黄麹菌胞子の糖アルコール(トレハロース、マンニトール、エリスリトール、グリセロール)の含量を、実験例1と同様の方法で測定し、黄麹菌胞子の乾燥物1gあたりの糖アルコール含量(mg)を求めた。具体的には、対象の黄麹菌胞子を0.01%濃度になるように蒸留水に懸濁し、沸騰水浴で15分間の加熱処理を3回行い、糖アルコールを抽出して、含量を測定した。結果を図4―1(B)及び図4−2(C)〜(E)に示す。
図4−1(B)に示すように、再冷蔵処理黄麹菌胞子のトレハロース含量は、発芽率の回復と同様に、加温処理することで増加し(図中、「加温直後」の結果参照)、増加したトレハロース含量は、その後、再度冷蔵保管しても高い状態のまま維持されることが確認された。このように、黄麹菌胞子の発芽力とトレハロース含量との間には相関関係が認められたものの、他の糖アルコール含量との間には相関関係は認められなかった。
Claims (6)
- 4℃以下の温度条件下で1週間以上冷蔵保管された冷蔵処理黄麹菌胞子を、含水率50%以下の状態で30〜45℃の条件で1時間以上加温する工程を有する、黄麹菌胞子の活性化方法。
- 4℃以下の温度条件下で1週間以上冷蔵保管された冷蔵処理黄麹菌胞子を、含水率50%以下の状態で30〜45℃の条件で1時間以上加温する工程を有する、活性化黄麹菌胞子の調製方法。
- 請求項1の方法で活性化された黄麹菌胞子、または請求項2の方法で調製された活性化黄麹菌胞子を冷蔵保存することを特徴とする、活性化黄麹菌胞子の保管方法。
- 下記の工程を有する、醸造食品製造用麹の製造方法:
請求項1の方法で活性化された黄麹菌胞子、請求項2の方法で調製された活性化黄麹菌胞子、または請求項3の方法で保管された活性化黄麹菌胞子を、種麹として炭水化物原料及び/又はタンパク質原料に接種して培養する工程。 - 前記醸造食品が醤油または味噌である、請求項4に記載する製造方法。
- 下記の工程を有する、醸造食品の製造方法:
請求項1の方法で活性化された黄麹菌胞子、請求項2の方法で調製された活性化黄麹菌胞子、または請求項3の方法で保管された活性化黄麹菌胞子を、種麹として炭水化物原料及び/又はタンパク質原料に接種して培養する工程、
前記工程で製造された醸造食品製造用麹を麹原料として用いて醸造食品を製造する工程。
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