JP6952188B2 - ジオトリカム変異株およびその用途 - Google Patents
ジオトリカム変異株およびその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6952188B2 JP6952188B2 JP2020517363A JP2020517363A JP6952188B2 JP 6952188 B2 JP6952188 B2 JP 6952188B2 JP 2020517363 A JP2020517363 A JP 2020517363A JP 2020517363 A JP2020517363 A JP 2020517363A JP 6952188 B2 JP6952188 B2 JP 6952188B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fermentation
- strain
- geotricum
- red
- geomyces
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/40—Colouring or decolouring of foods
- A23L5/42—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
- A23L5/46—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using dyes or pigments of microbial or algal origin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
PDA 固体培地:ジャガイモ200g、グルコース20g、寒天15g、水1000mL、
PDA液体培地:ジャガイモ200g、グルコース10g、水1000mL。
正確にl.0gの土壌サンプルを計量し、9ml滅菌水を含む試験管に入れ、振盪によりサンプルを完全に分散させ、1:10の土壌溶液から1mlの土壌溶液を取り9mlの滅菌水を加えて1:100の土壌溶液を調製し、このようにして、1:1000の土壌希釈溶液を調製する。
100ulの土壌希釈溶液をPDA培地プレート上に均一に塗布し、15℃で3〜4日間培養し、培地上で成長したコロニーを観察し、赤色色素を生成する可能性のある真菌株を取り出す。
予備スクリーニングによって得られた赤色色素を生成する可能性のある単一コロニーを、接種針で新しいPDA培地プレート上にスポットして培養し、コロニーの直径に対する赤い円の直径の比(HC値)が大きいコロニーを選択する。
再スクリーニングされた株を、新しいPDA培地プレートに接種し、ストリークし、15℃で3〜4日間培養し、培地上に成長したコロニーを観察し、ストリークを3回以上繰り返し、顕微鏡で何回も連続して単一形態の菌体を観察したため、株は分離および精製されることが分かる。
7mlの滅菌水を培養皿に加えて、ST1、ST2、およびST3の単一コロニーを接種リングでこすり、培養皿を回転させてプレート上の細菌を滅菌水に完全に分散させ、ピペットを使用して菌懸濁液をPDA液体培地に加え、接種量を10%にし、15℃、120r/minで12日間培養し、発酵液を8000r/minで5min遠心分離し、上澄み液を光路長1cmの石英キュベットに入れ、発酵液のOD525を分光光度計で測定する。その中、ST2株の発酵上澄み液のOD525値が最も高く、24.6に達した。これは、出願人によってスクリーニングし得られた3つの真菌の中でST2の赤色色素の収量が最も高いことを示している。
ST2株をPDA培地プレート上に接種し、15℃で10日間培養し、コロニーの直径は8〜12mmである。
コロニー形態:ST2株のコロニー初期階段で白く、発生の後期階段でフクシアになり、形状が丸く、平らに広がり、中央が平らで、胞子の茎が短く、コロニーの表面がふわふわしているか、ほとんど粉状であり、胞子の成長の後期階段でスチールグレーになり、コロニー裏面が初期階段で無色で、その後かすかな黄色に変わり、最後的にはフクシアに変わる。
上記のPDA培地プレート上から100mgのST2株の菌糸を掻き取り、カラスビーズの付いた2mLの遠心管に入れ、750μLのCTAB抽出液(2% w/v CTAB、1mol/L NaCl, 0.1mol/L Tris、0.02mol/L EDTA)を加え、遠心管をPrecellys 24 ホモジナイザーに置き遠心研磨し、液体を1.5mLの遠心管に移し、1.5μLのメルカプトエタノールを加え、65℃の水浴を2時間行い、750μLのクロロホルム:イソアミルアルコール(24:1 v/v)を加え、転倒混和し、室温、10000g、15minで遠心分離し、上層の液体を収集して、TaKaRa DNA フラグメント精製キットで精製し、精製したDNAを-20℃で保存する。プライマーを使用して、ITSシーケンスを増幅する。PCR反応の条件は、94℃で5min、94℃で30s、55℃で30s、72℃で1min予備変性し、30回繰り返し、72℃で10min伸長した。
gggg cctc cggt gatc gcct gggt tgcc gcag gcct cccg ggta acct acca ccct ttgt ttat taca cttt gttg cttt ggcaggcc tgcc ctcg ggct gctg gctc cggc cggc gagc gctt gcca gagg acct aaac tctg tttg tcta tact gtct gagtacta tata atag ttaa aact ttca acaa cgga tctc ttgg ttct ggca tcga tgaa gaac gcag cgaa atgc gata agta atgtgaat tgca gaat tcag tgaa tcat cgaa tctt tgaa cgca catt gcgc cccc tggt attc cggg gggc atgc ctgt ccga gcgtcatt acaa ccct caag ctca gctt ggta ttgg gccc cgcc gacc cggc gggc ccta aagt cagt ggcg gtgc cgtc cggctccg agcg tagt aatt cttc tcgc tctg gagg tccg gtcg tgtg ctcg ccag caac cccc aatt tttt tcag gttg acct cggatcag gtag ggat accc gctg aact taag cata tcaa taag cgga ggaa
atca ttac agta gtcg cctg ggtt gccg caag gcct cccg ggta acct acca ccct ttgt ttat taca cttt gttg cttt ggcaggcc tgcc ctcg ggct gctg gctc cggc cggc gagc gctt gcca gagg acct aaac tctg tttg tcta tact gtct gagtacta tata atag ttaa aact ttca acaa cgga tctc ttgg ttct ggca tcga tgaa gaac gcag cgaa atgc gata agta atgtgaat tgca gaat tcag tgaa tcat cgaa tctt tgaa cgca catt gcgc cccc tggt attc cggg gggc atgc ctgt ccga gcgtcatt acaa ccct caag ctca gctt ggta ttgg gccc cgcc gacc cggc gggc ccta aagt cagt ggcg gtgc cgtc cggctccg agcg tagt aatt cttc tcgc tctg gagg tccg gtcg tgtg ctcg ccag caac cccc aatt tttt tcag gttg acct cggatcag gtag ggat accc gctg aact taag cata tcaa taag cgga ggaa
出願人はジオトリカムST2 菌懸濁液をPDA液体培地に加え、接種量を10%とし、15℃、120r/minで12日間培養し、発酵液の色変化を毎日一定の時間に観察および記録し、発酵液からサンプルを取り、8000r/min、5min遠心分離し、上澄み液を光路長1cmの石英キュベット中に入れ、発酵液のOD525を分光光度計で測定し、同時にGeomycessp.wnf-15Aと対照し、具体的な結果を表1に示す。
ジオトリカムST2菌懸濁液をPDA液体培地に加え、接種量を10%とし、15℃、120r/minで3.5日間培養し、種溶液を得た。
150Lの発酵槽中にPDA液体培地、消泡剤を加え、蒸気滅菌し、15°Cに冷却し、10%の接種量に従って、種溶液を発酵槽中に入れ、発酵パラメータについては、15℃、110r/min、空気流量50-100LPMである。12d連続し発酵培養し、発酵液中からサンプルを取り、8000r/min、5minで遠心分離し、上澄み液を光路長1cmの石英キュベット中に入れ、発酵上澄み液のOD525値を分光光度計で測定する。同時にGeomyces sp.wnf-15Aと対照する。
上記150Lの発酵槽発酵から得られた発酵液を遠心分離ボルト中に入れ、7500r/min、15minで遠心分離し、上澄み液を200メッシュのふるいで濾過して菌体を除去し、得られたろ液は粗色素液であった。
ただし、Aは試料溶液の実測吸光度を示し、cは試料溶液の濃度を示し、単位はグラム/ミリリットル(g/ml)であり、100は濃度換算係数である。
実施例2の前記粗色素液を、DPH-722 マクロポーラス吸着樹脂を使用して色素を吸着し、飽和吸着が達成された後クロマトグラフィーカラムに装填し、15mL/minの流量で2つのカラムを洗浄し、その後同様の速度で70%エタノールを使用して色素を溶出し、溶出液を収集する。収集した色素溶出液を回転蒸発に供してエタノールを除去し、次いで真空凍結乾燥して、黄色色素である黄褐色の固体粉末を得た。この粉末は水溶性で、黄色の着色剤として使用できる。
ただし、Aは試料溶液の実測吸光度を示し、cは試料溶液の濃度を示し、単位はグラム/ミリリットル(g/ml)であり、100は濃度換算係数である。
プラズマ中の活性粒子を微生物として使用し、微生物の細胞壁/膜の構造および透過性を変化させ、遺伝子の損傷を引き起こし、さらに微生物遺伝子シーケンスおよびその代謝ネットワークを大幅に変化させ、最終的に微生物を変異させる。
75%のアルコールを使用して操作台の内部を拭き、紫外線ランプをオンにして20分間滅菌し、突然変異誘発操作の前にヘリウム(He)を通過させて機械の予熱を行う。
100μLの突然変異誘発処理された胞子懸濁液をそれぞれPDA培地プレート中に入れ、均一に塗布し、コロニーがわずかに赤くなるまで15℃で培養し、合計102個の赤くなった単一コロニーを選択し、それぞれPDA液体培地中に入れ、15℃、120r/min、振とうフラスコ条件下で12d培養し、各株菌発酵上澄み液のOD525値をそれぞれ測定し、同時に開始株ジオトリカムST2を対照群とする。
Claims (7)
- 寄託番号はCCTCC NO: M2019086であり、細胞の外部へ赤色色素と黄色色素を分泌できることを特徴とするジオトリカムST2。
- 発酵による赤色色素の生産に用いられる請求項1に記載のジオトリカムST2。
- 請求項1に記載のジオトリカムST2を発酵株として使用することを特徴とする赤色色素を生産する発酵方法。
- 前記発酵方法は、振とうフラスコ発酵と発酵槽発酵を含むことを特徴とする請求項3に記載の発酵方法。
- 前記発酵方法で使用される培地の成分およびその含量は、それぞれグルコース10g/L、ジャガイモ200 g/Lであることを特徴とする請求項4に記載の発酵方法。
- 前記発酵方法では発酵温度が15℃であり、発酵時間が12dであることを特徴とする請求項4に記載の発酵方法。
- 発酵による黄色色素の生産に用いられる請求項1に記載のジオトリカムST2。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910186603.8 | 2019-03-12 | ||
CN201910186603.8A CN110257253B (zh) | 2019-03-12 | 2019-03-12 | 一种地丝霉突变菌株及其应用 |
PCT/CN2019/111010 WO2020181765A1 (zh) | 2019-03-12 | 2019-10-14 | 一种地丝霉突变菌株及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021511779A JP2021511779A (ja) | 2021-05-13 |
JP6952188B2 true JP6952188B2 (ja) | 2021-10-20 |
Family
ID=67913419
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020517363A Active JP6952188B2 (ja) | 2019-03-12 | 2019-10-14 | ジオトリカム変異株およびその用途 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11584940B2 (ja) |
JP (1) | JP6952188B2 (ja) |
CN (1) | CN110257253B (ja) |
WO (1) | WO2020181765A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110257253B (zh) * | 2019-03-12 | 2022-05-20 | 方龙 | 一种地丝霉突变菌株及其应用 |
CN110643519A (zh) * | 2019-10-29 | 2020-01-03 | 华东理工大学 | 紫红色素高产的南极真菌突变株、其选育方法及其应用 |
CN110643520A (zh) * | 2019-10-29 | 2020-01-03 | 华东理工大学 | 高产南极紫红色素的南极真菌Geomyces sp.突变株及其应用 |
CN116637112B (zh) * | 2023-06-09 | 2023-11-03 | 临沂大学 | 南极红色素在制备治疗和预防高尿酸血症药物中的应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3990067B2 (ja) * | 1999-04-05 | 2007-10-10 | 長谷川香料株式会社 | 天然色素の精製方法 |
CN104804007B (zh) * | 2015-03-14 | 2017-01-18 | 王能飞 | 一种南极真菌呈色化合物 |
CN110257253B (zh) * | 2019-03-12 | 2022-05-20 | 方龙 | 一种地丝霉突变菌株及其应用 |
-
2019
- 2019-03-12 CN CN201910186603.8A patent/CN110257253B/zh active Active
- 2019-10-14 US US16/759,928 patent/US11584940B2/en active Active
- 2019-10-14 JP JP2020517363A patent/JP6952188B2/ja active Active
- 2019-10-14 WO PCT/CN2019/111010 patent/WO2020181765A1/zh active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US11584940B2 (en) | 2023-02-21 |
JP2021511779A (ja) | 2021-05-13 |
CN110257253B (zh) | 2022-05-20 |
US20210363549A1 (en) | 2021-11-25 |
CN110257253A (zh) | 2019-09-20 |
WO2020181765A1 (zh) | 2020-09-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6952188B2 (ja) | ジオトリカム変異株およびその用途 | |
CN106011005B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌t600及其菌剂制备方法和应用 | |
Bhagobaty et al. | Enzymatic activity of fungi endophytic on five medicinal plant species of the pristine sacred forests of Meghalaya, India | |
CN114410489B (zh) | 一株异常威克汉姆酵母cap5菌株及其应用 | |
CN112920956A (zh) | 一株球孢白僵菌bd01菌株及其发酵方法和应用 | |
CN109609491A (zh) | 一种高效产春雷霉素的小金色链霉菌诱变和筛选方法 | |
CN110016440B (zh) | 紫红曲霉及其筛选方法与用途 | |
CN106190898B (zh) | 一种溶解池塘甲藻的蜡样芽孢杆菌jzbc1的工业化液体发酵方法 | |
Giraldo et al. | Influence of the algal microbiome on biofouling during industrial cultivation of Nannochloropsis sp. in closed photobioreactors | |
WO2024021482A1 (zh) | 一种可稳定产生臭豆腐气味物质的凝结芽孢杆菌 | |
WO2023016387A1 (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其在制备1-脱氧野尻霉素中的应用 | |
CN108410778B (zh) | 一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法 | |
CN109609388A (zh) | 一种黑曲霉及其应用 | |
CN108004154B (zh) | 腥掷孢酵母菌17wy1、其微生物制剂及其在小麦白粉病防治中的应用 | |
CN106011004B (zh) | 一种固氮微生物g96及其菌剂制备方法和应用 | |
CN110055183B (zh) | 一种扩展青霉及其应用 | |
CN113817653A (zh) | 一株荧光假单胞菌BsEB-1及其应用 | |
CN110760529B (zh) | 小球藻内生菌的编码基因及其扩增用特异性引物 | |
CN110305797B (zh) | 一株花青素产生菌株cj6及其应用 | |
CN114540221A (zh) | 产中性蛋白酶芽孢杆菌和利用其生产中性蛋白酶的方法 | |
CN106167771B (zh) | 一种巨大芽孢杆菌d122及其菌剂和菌剂制备方法 | |
CN114196557B (zh) | 一种蓝莓天然酵母Bob1及其筛选方法和应用 | |
CN115305222B (zh) | 一种芽孢杆菌菌株及其应用 | |
CN114410485B (zh) | 一种降解土壤中聚氨酯的真菌菌株及其应用 | |
CN115786131B (zh) | 一种矢车菊素生产菌株及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20210323 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20210422 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210518 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210602 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210803 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210817 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210831 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210927 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6952188 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |