JP6932036B2 - 細胞撮像方法、細胞撮像装置、粒子撮像方法および粒子撮像装置 - Google Patents
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Description
実施形態1は、光の照射により細胞から生じた蛍光を撮像して複数の画像を取得し、取得した複数の画像に基づいて細胞の3次元画像を生成する細胞撮像装置に本発明を適用したものである。撮像対象の細胞は、たとえば、血中循環腫瘍細胞(CTC:Circulating Tumor Cell)、血管内皮細胞(CEC:Circulating Endothelial Cell)、血管内皮前駆細胞(EPC:Endothelial Progenitor Cell)、間葉系幹細胞(MSC:Mesenchymal Stem Cell)、造血幹細胞(HSC:Hematopoietic Stem Cell)、抗原特異的T細胞等の細胞が挙げられる。
実施形態2の集光光学系50は、位相変調素子55が、ダブルヘリックスPSFを形成する位相変調素子に置き換えられている。「ダブルヘリックスPSF」とは、スパイラル点像分布関数の1種であり、1つの起点から生じた光を2つの焦点に結像させる点像分布関数のことである。実施形態2では、図5(a)に示した位相変調パターンが、ダブルヘリックスPSFを形成する位相変調パターンに置き換えられる。実施形態2のその他の構成は、実施形態1と同様である。
上記実施形態1、2では、複数の細胞を同時に撮像する構成について説明したが、撮像画像の歪み補正について発明を抽出することも可能である。この場合、必ずしも、複数の細胞が同時に撮像されなくともよく、1つの細胞のみがライトシート11を横切るように試料がフローセル40に流されてもよい。
11 ライトシート
11a シート面
20 光源
30 照射光学系
31 光学レンズ
32 回転機構部
40 フローセル
40a、40c 外側面
41 流路
50 集光光学系
55 位相変調素子
60 撮像素子
61 撮像面
81 処理部
Claims (29)
- ライトシートをフローセルに対して形成し、
前記フローセルに複数の細胞を含む試料を流し、
前記ライトシートを通過する複数の細胞から生じた光を、シングルヘリックス点像分布関数に基づく位相変調によって被写界深度を拡大する位相変調素子を介して撮像素子で受光し、前記複数の細胞を撮像する、細胞撮像方法。 - 前記ライトシートを、試料の流れ方向に対して垂直でなく傾けて形成する、請求項1に記載の細胞撮像方法。
- 複数の細胞を前記ライトシートに同時に通過させ、前記複数の細胞から生じた光を撮像素子で受光する、請求項1または2に記載の細胞撮像方法。
- 撮像した前記複数の細胞を含む撮像画像に対し、前記位相変調素子により生じる撮像画像の歪みを補正する、請求項1ないし3の何れか一項に記載の細胞撮像方法。
- 前記撮像画像の歪みを補正する工程において、前記撮像画像を構成する画像要素を、それぞれ、前記シングルヘリックス点像分布関数に基づく位置ずれを補正する位置へと移動させる、請求項4に記載の細胞撮像方法。
- 前記撮像画像の歪みを補正する工程において、前記画像要素を取得した撮像面上の位置と前記ライトシートとの距離に基づいて、前記画像要素を移動させる、請求項5に記載の細胞撮像方法。
- 前記撮像画像の歪みを補正する工程において、前記画像要素を取得した撮像面上の位置と前記ライトシートとの距離に応じた方向および距離で、前記画像要素を移動させる、請求項6に記載の細胞撮像方法。
- 前記画像要素は、画素ごとに取得される画像要素である、請求項5ないし7の何れか一項に記載の細胞撮像方法。
- 前記撮像画像の歪みを補正する工程において、前記ライトシートとの距離が同じ画素列により取得された前記画像要素を、前記画素列と前記ライトシートとの距離に応じた方向および距離で移動させる、請求項8に記載の細胞撮像方法。
- 複数の細胞を含む画像を複数撮像し、
撮像した複数の撮像画像から前記複数の細胞の3次元画像を含む画像を生成する、請求項1ないし9の何れか一項に記載の細胞撮像方法。 - 前記画像を生成する工程は、撮像面における前記細胞の像の位置を補正する工程を含み、
前記位置を補正する工程において、少なくとも前記フローセルにおける前記細胞の移動量と前記試料の流れ方向に対する前記ライトシートの角度とに基づいて、撮像面における前記細胞の像の移動量を算出し、
算出した前記移動量と、前記細胞の移動に伴い取得した一連の前記撮像画像とに基づいて、前記3次元画像を生成する、請求項10に記載の細胞撮像方法。 - 前記画像を生成する工程は、撮像面における前記細胞の像の大きさを補正する工程を含み、
前記大きさを補正する工程において、前記試料の流れ方向に対する前記ライトシートの角度に基づいて、前記撮像画像の大きさを補正し、
大きさが補正された画像に基づいて、前記細胞の前記3次元画像を生成する、請求項10または11に記載の細胞撮像方法。 - 複数の細胞を含む試料を流すためのフローセルと、
光源と、
前記光源から出射された光からライトシートを前記フローセルに対し形成するための照射光学系と、
シングルヘリックス点像分布関数に基づく位相変調によって被写界深度を拡大させる位相変調素子を有し、前記フローセルを流れる複数の前記細胞から生じた光を集光するための集光光学系と、
前記集光光学系により集光された前記複数の細胞から生じた光を受光し、前記複数の細胞を撮像するための撮像素子と、を備える、細胞撮像装置。 - 前記撮像素子により取得された撮像画像を処理する処理部を備え、
前記処理部は、前記位相変調素子により生じる前記撮像画像の歪みを補正する処理を実行し、歪み補正後の前記撮像画像に基づいて、前記複数の細胞を含む画像を生成する、請求項13に記載の細胞撮像装置。 - 前記処理部は、前記撮像画像を構成する画像要素を、それぞれ、前記シングルヘリックス点像分布関数に基づく位置ずれを補正する位置へと移動させることにより、前記撮像画像の歪みを補正する、請求項14に記載の細胞撮像装置。
- 前記処理部は、前記撮像画像を構成する画像要素を、前記画像要素を取得した撮像面上の位置と前記ライトシートとの距離に基づいて移動させることにより、前記撮像画像の歪みを補正する、請求項15に記載の細胞撮像装置。
- 前記処理部は、前記画像要素を取得した撮像面上の位置と前記ライトシートとの距離に応じた方向および距離で、前記画像要素を移動させることにより、前記撮像画像の歪みを補正する、請求項16に記載の細胞撮像装置。
- 前記画像要素は、前記撮像素子の画素ごとに取得される画像要素である、請求項15ないし17の何れか一項に記載の細胞撮像装置。
- 前記処理部は、前記ライトシートとの距離が同じ画素列により取得された前記画像要素を、前記画素列と前記ライトシートとの距離に応じた方向および距離で移動させることにより、前記撮像画像の歪みを補正する、請求項18に記載の細胞撮像装置。
- 前記位相変調素子は、空間光変調器、デフォーマブルミラーまたは位相板である、請求項13ないし19の何れか一項に記載の細胞撮像装置。
- 前記撮像素子により取得された撮像画像を処理する処理部を備え、
前記処理部は、前記撮像画像に基づいて、前記複数の細胞の3次元画像を含む画像を生成する、請求項13ないし20の何れか一項に記載の細胞撮像装置。 - 前記処理部は、
少なくとも前記フローセルにおける前記細胞の移動量と前記試料の流れ方向に対する前記ライトシートの角度とに基づいて、前記撮像素子の撮像面における前記細胞の像の移動量を算出し、
算出した前記移動量と、前記細胞の移動に伴い取得した一連の前記撮像画像とに基づいて、前記3次元画像を生成する、請求項21に記載の細胞撮像装置。 - 前記処理部は、前記試料の流れ方向に対する前記ライトシートの角度に基づいて、前記撮像画像の大きさを補正し、大きさが補正された画像に基づいて、前記複数の細胞を含む前記3次元画像を生成する、請求項21または22に記載の細胞撮像装置。
- 前記ライトシートのシート面は、前記フローセルの外側面に対して垂直である、請求項13ないし23の何れか一項に記載の細胞撮像装置。
- 前記集光光学系の光軸は、前記試料の流れ方向に対して垂直である、請求項13ないし24の何れか一項に記載の細胞撮像装置。
- 前記照射光学系の光軸と前記集光光学系の光軸とが互いに垂直である、請求項13ないし25の何れか一項に記載の細胞撮像装置。
- 前記照射光学系は、
第1方向における光の収束と、前記第1方向と交わる第2方向における光の収束とが異なるように前記光源から出射された光を収束させる光学レンズと、
前記光学レンズにおける前記照射光学系の光軸を中心に前記光学レンズを回転させる回転機構部と、を備える、請求項13ないし26の何れか一項に記載の細胞撮像装置。 - ライトシートをフローセルに対して形成し、
前記フローセルを流れる粒子から生じた光を、シングルヘリックス点像分布関数に基づいて光の位相を変調する位相変調素子を介して撮像し、
前記位相変調素子により生じる撮像画像の歪みを補正する、粒子撮像方法。 - 粒子を含む試料を流すためのフローセルと、
光源と、
前記光源から出射された光から、ライトシートを前記フローセルに対し形成するための照射光学系と、
シングルヘリックス点像分布関数に基づいて光の位相を変調することにより被写界深度を拡大させる位相変調素子を有し、前記フローセルを流れる前記粒子から生じた光を集光するための集光光学系と、
前記集光光学系により集光された光を受光するための撮像素子と、
前記位相変調素子により生じる撮像画像の歪みを補正する処理部と、を備える、粒子撮像装置。
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