JP6883569B2 - タンパク質及びポリアルコキシ脂肪族化合物を含む組成物 - Google Patents

Description

多くの場合、タンパク質の水溶液を提供することが望まれる。そのような水溶液は、長期間安定したままでいることが望まれる。安定性の欠如には、例えば、次のプロセス：タンパク質の変性またはタンパク質分子の凝集うちののいずれか、またはそれらの両方が含まれる。

ＵＳ５，６３５，４６１は、以下の式を有する陰イオン界面活性剤を記載している。

タンパク質の水溶液に改善された安定性を提供する界面活性剤を提供することが望まれる。そのような界面活性剤とタンパク質との混合物を提供することも望まれ、該混合物は、タンパク質の水溶液を形成することができ、該溶液は、良好な安定性を有する。

以下は、本発明の要旨である。

本発明の第１の態様は、構造（Ｉ）を有するポリアルコキシ脂肪族化合物であり、

式中、Ｒ^１は、脂肪族基（ｆａｔｔｙ ｇｒｏｕｐ）であり、Ｒ^２は、Ｈまたは置換もしくは非置換ヒドロカルビル基であり、ｎは０〜５であり、Ｘ^１はＳまたはＮＨであり、Ｘ^２はＯ、Ｓ、またはＮＨであり、Ｒ^３は、構造（ＩＩ）及び構造（ＩＩＩ）の重合単位を含むポリマー基である。

ｎが２以上である場合、様々なＸ_１基は、互いに異なり得るか、もしくは互いと同じであり得るか、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ｎが２以上である場合、様々なＲ^２基は、互いに異なり得るか、もしくは互いと同じであり得るか、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。

本発明の第２の態様は、１つ以上のタンパク質及び１つ以上のポリアルコキシ脂肪族化合物を含む組成物であり、前記タンパク質の前記ポリアルコキシ脂肪族化合物に対する重量比は、０．０５：１〜２００：１であり、前記ポリアルコキシ脂肪族化合物は、構造（Ｉ）を有し、

式中、Ｒ^１は、脂肪族基であり、Ｒ^２は、Ｈまたは置換もしくは非置換ヒドロカルビル基であり、ｎは０〜５であり、Ｘ^１はＯ、Ｓ、またはＮＨであり、Ｘ^２はＯ、Ｓ、またはＮＨであり、Ｒ^３は、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の重合単位を含むポリマー基である。

以下は、本発明の詳細な説明である。

本明細書において使用する場合、以下の用語は、その文脈が明確に示さない限り、指定された定義を有する。

ポリアルコキシ化合物は、構造−（−Ａ−Ｏ）_ｍ−を有する１つ以上の基を含む化合物であり、式中、ｍは、３以上であり、Ａは、非置換アルキル基である。基Ａは、直鎖、分岐鎖、環状、またはそれらの組み合わせであり得る。様々な−（−Ａ−Ｏ）−基の中でも様々なＡ基は、互いと同じであるか、または異なり得る。

脂肪族化合物は、１つ以上の脂肪族基を含む化合物である。脂肪族基は、８個以上の炭素原子を含む基であり、これらの各々は、その基内の他の炭素原子のうちの１つ以上と結合している。ポリアルコキシ脂肪族化合物は、ポリアルコキシ化合物及び脂肪族化合物の両方である化合物である。

ヒドロカルビル基は、水素及び炭素原子を含む基である。非置換ヒドロカルビル基は、水素及び炭素原子のみを含む。置換ヒドロカルビル基は、水素及び炭素以外に１つ以上の原子を含む１つ以上の置換基を含む。

ポリマー基は、より小さい化学的繰り返し単位の反応生成物からできた比較的大きい基である。ポリマー基は、５００以上の数平均分子量を有する。ポリマー基は、直鎖、分岐鎖、星形、輪、超分岐鎖、架橋、またはそれらの組み合わせである構造を有し得、ポリマー基は、単一の種類の繰り返し単位を有し得るか（「ホモポリマー基」）、またはポリマー基は、２種類以上の繰り返し単位を有し得る（「コポリマー基」）。コポリマー基は、ランダムに、順序通りに、ブロックで、他の配向で、またはそれらの任意の混合物もしくは組み合わせで配向された様々な種類の繰り返し単位を有し得る。

互いと反応してポリマー基の繰り返し単位を形成することができる分子は、本明細書で「モノマー」として知られる。そのようにして形成される繰り返し単位は、本明細書でモノマーの「重合単位」として知られる。１つ以上のポリマー基を含む化合物は、ポリマーである。

タンパク質は、重合単位がアミノ酸の重合単位であるポリマーである。アミノ酸は、ペプチド結合によって一緒に結合している。タンパク質は、１つ以上のアミノ酸の２０個以上の重合単位を含む。用語、タンパク質には、直鎖ポリペプチド鎖及びポリペプチド鎖を含むより複雑な構造が含まれる。

タンパク質の分子が溶解した個々の分子の形態で連続的液体媒質全体にわたって分散している場合、タンパク質は、液体媒質中の溶液中にある（または同義的に、液体媒質に溶解している）と考えられる。タンパク質は、連続的液体媒質の重量に基づいて６０重量％以上の量の水を含有する場合、水に溶解しているとみなされる。

化学基は、４．５〜８．５のｐＨ値が存在する場合、化学基がそのｐＨ値の水と接触しているときに、５０モル％以上のそれらの化学基がイオン形態で存在するような、イオン基である。

緩衝液は、（ｉ）陽子を受け取って、その化合物の共役酸を形成する能力を有する化合物であって、その化合物の共役酸は、９未満のｐＫａを有する、化合物、または（ｉｉ）陽子を放出する能力を有する化合物であって、該化合物は５超のｐＫａを有する、化合物のいずれかである。

ある比率が本明細書でＸ：１以上であるといわれるとき、これは、その比率がＹ：１（ここでＹはＸ以上である）であることを意味する。例えば、ある比率が３：１以上であるといわれるとき、該比率は３：１または５：１または１００：１であり得るが、２：１ではあり得ない。同様に、ある比率が本明細書でＷ：１以下であるといわれるとき、これは、その比率がＺ：１（ここでＺはＷ以下である）であることを意味する。例えば、ある比率が１５：１以下であるといわれるとき、該比率は１５：１または１０：１または０．１：１であり得るが、２０：１ではあり得ない。

本発明の組成物は、構造（Ｉ）を有するポリアルコキシ脂肪族化合物であり、

式中、Ｒ^１は脂肪族基であり、Ｒ^２はＨまたは置換もしくは非置換ヒドロカルビル基であり、ｎは０〜５であり、Ｘ^１は、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、Ｘ^２は、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、Ｒ^３は、構造（ＩＩ）及び構造（ＩＩＩ）の重合単位を含むポリマー基である。

好ましくは、Ｒ^１は、置換もしくは非置換脂肪族基である。置換脂肪族基の中でも、好ましい置換基は、ヒドロキシルである。より好ましくは、Ｒ^１は、非置換脂肪族基であり、より好ましくは、Ｒ^１は、非置換アルキル基である。好ましくは、Ｒ^１は、直鎖である。好ましくは、Ｒ^１は、９個以上の炭素原子、より好ましくは１０個以上有する。好ましくは、Ｒ^１は、２２個以下の炭素原子、より好ましくは２０個以下、より好ましくは１８個以下、より好ましくは１６個以下有する。

好ましくは、Ｘ^１は、ＯまたはＮＨ、より好ましくはＮＨである。好ましくは、Ｘ^２は、ＯまたはＮＨ、より好ましくはＮＨである。

好ましくは、Ｒ^２は、２０個以下の原子、より好ましくは１５個以下を有する。好ましくは、Ｒ^２が水素ではない場合、Ｒ^２は、１つ以上の炭素原子を含む。好ましくは、Ｒ^２は、水素または非置換炭化水素基のいずれか、より好ましくは、Ｒ^２は、水素、非置換アルキル基、または唯一の置換基が非置換芳香族炭化水素基であるアルキル基のいずれかである。非置換アルキル基の中でも、好ましいのは、メチルである。唯一の置換基が非置換芳香族炭化水素基であるアルキル基の中でも、好ましいのは、−ＣＨ_２−（Ｃ_６Ｈ_５）であり、ここで、−（Ｃ_６Ｈ_５）は、ベンゼン環である。好ましくは、Ｒ^２は、構造（ＩＶ）を有する化合物が

２０個の標準生物アミノ酸のうちの１つであるように選択される。

好ましくは、Ｒ^３は、６００以上、より好ましくは８００以上の数平均分子量を有する。好ましくは、Ｒ^３は、１０，０００以下、より好ましくは５，０００以下、より好ましくは３，０００以下、より好ましくは２，５００以下、より好ましくは２，０００以下、より好ましくは１，５００以下の数平均分子量を有する。好ましくは、基Ｒ^３は、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のランダムコポリマー、または（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のブロックコポリマーのいずれかであり、より好ましくは、基Ｒ^３は、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のランダムコポリマーである。好ましくは、−Ｒ^３は、構造−Ｒ^４−ＣＨ_３を有し、ここで、Ｒ^４は、構造（ＩＩ）及び構造（ＩＩＩ）の重合単位を含むポリマー基である。好ましくは、Ｒ^４は、構造（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）に加えて、他の重合単位を有しない。

好ましくは、ｎは、０または１である。

構造（ＩＩ）の単位の構造（ＩＩＩ）の単位に対するモル比（本明細書において「ＰＯ／ＥＯ比」）を特徴づけるのが有用である。好ましくは、ＰＯ／ＥＯ比は、０．０１：１以上、より好ましくは０．０２：１以上、より好ましくは０．０５：１以上、より好ましくは０．１：１以上である。好ましくは、ＰＯ／ＥＯ比は、２：１以下、より好ましくは１．５：１以下、より好ましくは１：１以下、より好ましくは０．５：１以下である。

好ましくは、構造（Ｉ）の化合物は、イオン基を有しない。

構造（Ｉ）の化合物は、任意の方法によって作製され得る。好ましい方法は、構造ＮＨ_２−Ｒ^３を有する化合物を、構造Ｖの化合物

及び構造ＶＩの化合物から選択される化合物と反応させることであり、

式中、Ｘ^３は、Ｏ、Ｓ、またはＮＨである。Ｒ^１、Ｘ^２、Ｒ^２、Ｒ^３、及びｎの選択は、上述のものと同じである。好ましくは、Ｘ^３は、Ｏである。

構造（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態を作製するより好ましい方法は、以下の通りである。第１のステップにおいて、塩化アシルをアミノ酸と反応させて、以下のカルボキシル官能脂肪酸アミドを形成する。

次いで、第２のステップにおいて、カルボキシル官能脂肪酸アミドを、以下のアミン末端ポリアルコキシ化合物と反応させ、

式中、ＰＯは構造（ＩＩ）であり、ＥＯは構造（ＩＩＩ）である。

構造（Ｉ）の化合物の好ましい使用は、１つ以上のタンパク質及び構造（Ｉ）の１つ以上の化合物を含有する組成物中での使用である。

好ましいタンパク質は、アミノ酸の４０個以上の重合単位、より好ましくは１００個以上の重合単位を有する。

好ましいタンパク質は、モノクローナル抗体、成長因子、インスリン、免疫グロブリン、ポリクローナル抗体、ホルモン、酵素、ポリペプチド、ペプチドの融合物、グリコシル化タンパク質、抗原、抗原サブユニット、またはそれらの組み合わせから選択される。好ましいタンパク質は、疾病または病態を治療するか、またはワクチンとして機能するための治療有効性を有する。食品組成物もしくは洗浄組成物または、コーティング配合物に有益な効果を有するタンパク質も企図される。

好ましくは、タンパク質の構造（Ｉ）の化合物に対する重量比は、０．１：１以上、より好ましくは０．２：１以上、より好ましくは０．５：１以上、より好ましくは０．９：１以上である。好ましくは、タンパク質の構造（Ｉ）の化合物に対する重量比は、１５０：１以下、より好ましくは１００：１以下である。

タンパク質及び構造（Ｉ）の化合物の両方を含有する配合物を作製する好ましい方法は、水、１つ以上のタンパク質、構造（Ｉ）の１つ以上の化合物、及び任意の追加の成分を一緒に混合して、タンパク質が水中に溶解した配合物（本明細書で配合物「Ｆ１」と呼ばれる）を作製することである。

好ましくは、配合物Ｆ１の重量に基づいて、配合物Ｆ１中の水の量は、５０重量％以上、より好ましくは６０％重量以上、より好ましくは７０重量％以上である。

配合物Ｆ１中、好ましくは、凝集した粒子が液状媒質中に分散したとしても、タンパク質の分子は凝集して大きな粒子にならない。好ましくは、タンパク質分子を含有するあらゆる凝集した粒子が存在する場合、そのような粒子の体積平均直径は、１０ｎｍ以下、より好ましくは６ｎｍ以下である。

配合物Ｆ１中、好ましくは、タンパク質の量は、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．９ｍｇ／ｍＬ以上であり、配合物Ｆ１中、好ましくは、タンパク質の量は、４００ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは３００ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは２５０ｍｇ／ｍＬ以下である。

配合物Ｆ１中、好ましくは、構造（Ｉ）の化合物の量は、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．５ｍｇ／ｍＬ以上である。配合物Ｆ１中、好ましくは、構造（Ｉ）の化合物の量は、５０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下である。

配合物Ｆ１は、任意で、１つ以上の追加の成分を含有する。追加の成分は、水、タンパク質、及び構造（Ｉ）を有する化合物以外の化合物である。好ましい追加の成分は、構造（Ｉ）を有しない界面活性剤、糖、塩、緩衝液、アミノ酸、アミノ酸の塩、及びそれらの混合物である。そのような追加の成分が存在するとき、好ましくは、すべての追加の成分の総量は、３００ｍｇ／ｍＬ以下である。

配合物Ｆ１中の含有物に関して、構造（Ｉ）を有しない界面活性剤の中で、好ましいものは、非イオン性界面活性剤、より好ましいものは、モノラウリン酸ソルビタンのポリオキシエチレン誘導体（例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）、ならびにプロピレンオキシドの重合単位の中央ブロック及びエチレンオキシドの重合単位の末端ブロックを有するトリブロックコポリマー（例えばポリオキサマーＦ１２７及びポリオキサマー１８８）である。

配合物Ｆ１中の含有物について、好ましい糖は、スクロース、グルコース、マンノース、トレハロース、マルトース、及びそれらの混合物である。

配合物Ｆ１中の含有物について、好ましい塩は、水素、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、及びそれらの混合物から選択される陽イオンを有する。好ましい塩は、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、及びそれらの混合物から選択される陰イオンを有する。好ましい緩衝液は、水素、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、及びそれらの混合物から選択される陽イオンを有する。好ましい緩衝液は、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、及びそれらの混合物から選択される陰イオンを有する。

配合物Ｆ１中の含有物について、好ましいアミノ酸及びその塩は、リジン、グリシン、アルギニン、ヒスチジン、及びそれらの混合物から選択される。

配合物Ｆ１中、タンパク質を含有する粒子が連続的水溶媒質に溶解することが企図される。配合物Ｆ１中に存在するタンパク質以外の化合物について、各化合物は、他の化合物から独立して、水溶媒質中に溶解して見られ得るか、タンパク質を含有しない分散した粒子中に見られ得るか、タンパク質の溶解した分子の一部またはすべてに結合して見られ得るか、またはこれらの位置のうちの２つ以上の間に分散して見られ得る。

配合物Ｆ１が良好な安定性を有することが企図される。つまり、配合物Ｆ１がタンパク質の変性に抵抗し、かつ溶解した分子が凝集して凝集した粒子になることに抵抗することが企図される。

タンパク質と構造（Ｉ）の化合物との混合物を保管及び／または輸送する一方法は、配合物Ｆ１を作製し、次いで乾燥プロセスにより配合物Ｆ１から水を除去することである。配合物Ｆ１を乾燥させることにより生成される固形物質（本明細書で固形「Ｓ１」と呼ばれる）は、タンパク質を変性させるかまたは他の分解を起こさずに容易に保管及び輸送され得ることが企図される。輸送及び／または保管後、固形Ｓ１は、水と混合されて、配合物Ｆ１の特性と類似した特性を有する溶液を生成し得ることがさらに企図される。

以下は、本発明の実施例である。

手順は、特に明記される場合を除いて、おおよそ２３℃の室温で行った。

以下の用語及び略語を使用する。
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
ＩｇＧ＝免疫グロブリンＧ、一般的にウサギまたはヒト血清から利用可能、以下の実施例において、ＩｇＧ源を記載する。
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＰＯ＝構造（ＩＩ）
ＥＯ＝構造（ＩＩＩ）
ＰＥＡ１＝Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標）Ｍ１０００ポリエーテルアミン（Ｈｕｎｓｔｍａｎ）、１，０００のおおよその分子量、及び３／１９のＰＯ／ＥＯ比
ＰＥＡ２＝Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標）Ｍ２０７０ポリエーテルアミン（Ｈｕｎｓｔｍａｎ）、２０７０のおおよその分子量、及び１０／３１のＰＯ／ＥＯ比

動的光散乱（ＤＬＳ）測定を以下の通り行った。光散乱測定を、Ｗｙａｔｔ ＤｙａｎａＰｒｏ（商標）ハイスループットＤＬＳ器具によって行った。試料を、可変タンパク質濃度で、クエン酸塩生理的食塩水緩衝液（ｐＨ７）中の１ｍｇ／ｍＬ界面活性剤、１５ミリモルのクエン酸ナトリウム、１５０ミリモルのナトリウムクロリド（ｓｏｄｉｕｍ ｃｌｏｒｉｄｅ）で調製した。Ｏｒｅｎｃｉａ（商標）及びＲｅｍｉｃａｄｅ（商標）粉末を、緩衝液よりもむしろ水でもどした。３０μＬの各試料を、明澄な底を有するＡｕｒｏｒａ３８４ウェルブラックシクロオレフィンポリマープレート（Ｂｒｏｏｋｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）のウェル内に置いた。各ウェルの上に、１５μＬのシリコーンオイルを添加した。温度傾斜研究のために、試料を２５℃で平衡させ、次いで０．０５Ｃ／分で８０℃に傾斜をつけた。ＤＬＳ測定を、１サイクル当たり１つのウェル当たり５×３秒の取得でウェルからウェルに循環させて、連続して得た。等温研究のために、試料を１℃／分で４０℃、５０℃、及び最終温度（Ｒｅｍｉｃａｄｅについては５０℃、ＢＳＡについては６５℃、Ｏｒｅｎｃｉａについては７３℃）に傾斜させ、データをおおよそ３６時間にわたって連続的に収集した。

円二色性実験（ＣＤ）を、ＪＡＳＣＯ Ｊ−１５００ ＣＤ分光偏光計によって行った。タンパク質溶液［５％のＢＳＡ（５０ｍｇ／ｍＬ）、及び０．２％のＩｇＧ（２ｍｇ／ｍＬ）］を、ｐＨ７．３の１０ｍＭのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）緩衝液中に調製した。ＢＳＡ試料を、測定前にＰＢＳ緩衝液を用いて１：１０で希釈した。

ナノ示差走査熱量測定（ナノＤＳＣ）を、Ｍｏｄｅｌ ６１００ Ｎａｎｏ ＩＩ ＤＳＣ、Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＵＳＡを使用して行った。試料（典型的には２．５ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液）及び基準（リン酸塩緩衝液）の両方を、０．３ＭＰａ（３バール）の圧力及び１℃／分の走査速度で走査した。走査は、１５℃から１０５℃までであった。

構造（Ｉ）の化合物（「界面活性剤」）の合成を、以下の通り行った。

Ｎ−ミリストイルアミノ酸誘導体を、水酸化ナトリウム及びトリエチルアミンの存在下で、塩化ミリストイルとグリシンとを室温（おおよそ２３℃）で４時間、反応させることによって調製した。Ｎ−ミリストイルアミノ酸誘導体（５ｍｍｏｌ）及びポリエーテルアミン（ＰＥＡ１またはＰＥＡ２のいずれか）（５ｍｍｏｌアミン基）を、攪拌子を含む５０ｍＬ一口丸底フラスコに添加し、凝縮器及びガス入口アダプタをはめた。このフラスコを油浴内に置き、次の通り加熱した。１００℃で１時間、１２５℃で１時間、１５０℃で１時間、１７５℃で１．５時間、及び２００℃で１．５時間。この時間の間、反応温度が１７５〜２００℃に達したら、水発生を観察した。反応混合物を室温（おおよそ２３℃）にまで冷却し、フラスコに真空を加え、次いでフラスコを１００℃で３０分間、１２５℃で３０分間、１５０℃で３０分間、１７５℃で３０分間、及び２００℃で２時間再加熱した。加熱を中止し、反応混合物を室温にまで冷まし、次いでフラスコに窒素を充填した。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、界面活性剤の構造と一致した。

ｎ＝０での構造（Ｉ）の化合物について、塩化ミリストイルを上述の通り、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ樹脂と直接反応させた。

作製した各本発明の界面活性剤において、Ｒ^１−は、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１１ＣＨ_２−であった。Ｘ^１及びＸ^２は両方ともＮであった。Ｒ^３は、メチル基で末端キャッピングした、プロピレンオキシド単位とエチレンオキシド単位とのコポリマーであった。

作製した本発明の界面活性剤は、次の通りである。

注記（１）：Ｒ^２は

であった。

実施例１：ＢＳＡを含有するタンパク質溶液の試験

示される様々な界面活性剤を用いた５ｍｇ／ｍＬのＢＳＡの走査ＤＬＳ。走査速度は、２５から８０℃まで０．０５℃／分であった。界面活性剤は、すべて１ｍｇ／ｍＬであった。走査ＤＬＳにおいて、試料を、温度の関数として体積平均粒子直径に関して試験した。各試料は、最終的には直径の増加を示した。開始の温度（Ｔ_開始）を記録した。より高いＴ_開始は、より安定したタンパク質溶液を意味する。

ＢＳＡ（５ｍｇ／ｍＬ）のナノＤＳＣを、様々な界面活性剤（５ｍｇ／ｍＬ）を用いて行った。熱流に対する温度のナノＤＳＣグラフは、６０℃〜８５℃で「アンフォールディング」ピークと呼ばれるピークを示し、これは、タンパク質が最大速度で変性する温度を示す。アンフォールディングピークの温度（Ｔｍ）を報告する。より高いＴｍは、タンパク質溶液がより安定していることを意味する。

異なる界面活性剤を用いた円二色性（ＣＤ）ＢＳＡ試料（５ｍｇ／ｍＬ）を、７０℃で３０分間、次の熱老化で測定した。ＣＤに対する波長のグラフは、２２２ｎｍでのピークを示し、アルファヘリックスの吸光度を示す。アルファヘリックスピークの減少は、変性を示す。各試料に関して、２２２ｎｍでのＣＤを調査し、最初の試料の値間の差を、７０℃で３０分間の熱老化後の同じ試料の値と比較し、この差をΔＣＤとして報告する。ΔＣＤのより高い絶対値は、より安定しないタンパク質溶液を意味する。

６２℃の１ｍｇ／ｍＬの界面活性剤を用いたＢＳＡ（５ｍｇ／ｍＬ）の等温ＤＬＳも行った。体積平均粒子直径を、時間の関数として測定した。２０００秒での直径（Ｄ２ｋ）を記録した。Ｄ２ｋのより低い値は、より安定したタンパク質溶液を意味する。

結果は以下の通りであった。「ｎｔ」は、試験しなかったことを意味する。

注記（２）：４以下の値は、実験の可変性の観点から、ゼロと同等であるとみなす。

Ｔ_開始の結果において、すべての本発明の実施例は、比較実施例に匹敵するか、または比較実施例よりも優れた安定性を示し、実施例２、３、及び４は、特に比較実施例よりも優れていた。Ｔｍの結果において、すべての本発明の実施例は、比較実施例に匹敵するか、または比較実施例よりも優れた安定性を示し、実施例４は、特に比較実施例よりも優れていた。ΔＣＤの結果において、すべての本発明の実施例は、比較試料よりもはるかに優れた結果を示した。Ｄ２ｋの結果において、試験した唯一の本発明の実施例である実施例４は、比較実施例よりも優れていた。

実施例２：ＩｇＧを含有するタンパク質溶液の試験

走査ＤＬＳを、すべて１ｍｇ／ｍＬの界面活性剤を用いて２５℃から８０℃で、０．０５℃／分で、ウサギの１ｍｇ／ｍＬのＩｇＧを含有するタンパク質溶液に対して行った。Ｔ_開始は、すべての試料について６６℃であったが、温度がＴ_開始を超えて上昇するに従い、実施例１を使用した試料は、すべての他の試料よりもかなり遅い粒子直径の成長を示した。

等温ＤＬＳを、１ｍｇ／ｍＬのウサギＩｇＧで、６５℃で行い、４０００秒での大きさ（Ｄ４ｋ）を報告した。ヒトＩｇＧを使用したＣＤ技法は、６５℃で１８時間の熱老化に起因する２１８ｎｍでの吸光度の変化を比較した。結果は以下の通りであった。

ΔＣＤの結果において、本発明の実施例は、比較実施例よりも優れていた。Ｄ４ｋの結果において、実施例３は、比較実施例よりも優れていた。

実施例３：Ｏｒｅｎｃｉａ（商標）粉末を使用した結果。

ＯＲＥＮＣＩＡ（商標）（アバタセプト）粉末（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂ製）を、処方によって得た。Ｏｒｅｎｃｉａを水で希釈して４ｍｇ／ｍＬにし、Ｔ_開始について走査ＤＬＳによって試験した。また、Ｏｒｅｎｃｉａを水で希釈して１０ｍｇ／ｍＬにし、７３℃での等温ＤＬＳによって試験し、２０時間の時点での直径（Ｄ２０ｈ）を記録した。タンパク質溶液中、Ｄ２０ｈは、時間が経過するに従いより大きく成長する傾向があり、より不安定な溶液は、より高いＤ２０ｈ値に達した。より小さいＤ２０ｈ値は、より安定したタンパク質溶液を意味する。１ｍｇ／ｍＬのＯｒｅｎｃｉａ溶液を、等温ステップ実験で試験し、粒子直径を５０℃で４５時間、続いて６０℃で１５時間で維持している間、時間の関数としてＤＬＳによって測定した。このプロセスの最後の直径（Ｄｓｔｅｐ）を記録した。より小さいＤｓｔｅｐ値は、より安定したタンパク質溶液を意味する。

結果は以下の通りであった。

Ｔ_開始及びＤ２０ｈの結果において、本発明の試料は、比較試料よりも安定したタンパク質溶液を有した。

実施例４：Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標）の試験結果

ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）（インフリキシマブ）粉末（Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ製）を、処方によって得た。Ｒｅｍｉｃａｄｅ粉末を、水中に１ｍｇ／ｍＬに希釈した。走査ＤＬＳを使用して、Ｔ_開始を上述の通り測定した。また、等温ＤＬＳを５０℃で行い、粒子直径が急速に成長し始めた時間（ｔ−ｇｒｏｗ）を書き留めた。結果は以下の通りであった。

本発明の試料は、比較試料に匹敵する性能を示した。

Claims (7)

1. １つ以上のタンパク質及び１つ以上のポリアルコキシ脂肪族化合物を含む組成物であって、前記タンパク質の前記ポリアルコキシ脂肪族化合物に対する重量比は、０．０５：１〜２００：１であり、前記ポリアルコキシ脂肪族化合物は、構造（Ｉ）
   

   

   を有し、式中、Ｒ^１は、脂肪族基（ｆａｔｔｙ ｇｒｏｕｐ）であり、Ｒ^２は、２０個以下の原子を有し、かつＨ、非置換アルキル基または唯一の置換基が非置換芳香族炭化水素基であるアルキル基であり、ｎは０〜５であり、Ｘ^１はＯ、Ｓ、またはＮＨであり、Ｘ^２は、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、Ｒ^３は、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）
   

   

   の重合単位を含むポリマー基である、組成物。
2. 前記タンパク質の前記ポリアルコキシ脂肪族化合物に対する重量比は、０．９：１〜６：１である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物の重量に基づいて６０重量％以上の水をさらに含み、前記タンパク質及び前記ポリアルコキシ脂肪族化合物は、前記水に溶解される、請求項１に記載の組成物。
4. 前記粒子の体積平均直径は、２０ｎｍ以下である、請求項３に記載の組成物。
5. 前記組成物は、１つ以上の追加の成分をさらに含み、すべての追加の成分の総量は、３００ｍｇ／ｍＬ以下である、請求項３に記載の組成物。
6. 前記タンパク質は、モノクローナル抗体、成長因子、インスリン、免疫グロブリン、ポリクローナル抗体、ホルモン、酵素、ポリペプチド、ペプチドの融合物、グリコシル化タンパク質、抗原、抗原サブユニット、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の組成物。
7. −Ｒ^１は１０〜１６個の炭素原子を有する直鎖非置換アルキル基であり、
   −Ｒ^２は、水素、メチル、及び−ＣＨ_２−（Ｃ_６Ｈ_５）からなる群から選択され、−（Ｃ_６Ｈ_５）は、ベンゼン環であり、
   −Ｒ^３は、８００〜３０００の数平均分子量を有する、請求項１に記載の組成物。