JP6870053B2 - 殺腫瘍性および抗菌性の組成物ならびに方法 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明は、全体として、殺腫瘍特性および／または抗菌特性を有する薬学的組成物、ならびにがんおよび／または微生物を死滅させるためにこれらの組成物を用いる方法に関する。

技術水準
皮膚がんは、ヒトならびに多くの飼育動物において主要なタイプのがんである。皮膚がんおよび黒色腫の発生頻度は、日光下または日焼けマシーン（tanning bed）の場合に見られるような、防御されていない皮膚の紫外線への曝露を含む種々の因子が原因で、著しく増加しつつある。初期段階で診断された場合、これらのがんは、がんおよび周囲組織の切除によって容易に治療しうる。しかし、あらゆる手術手技の場合と同じく、異常がん細胞が切開部位に残り、そのためにがんの再発を引き起こす可能性が残っている。これは特に黒色腫の場合にそうであり、腫瘍をすべて除去することができなければ、高度の病的状態を伴う転移が引き起こされる恐れがある。

従来の治療プロトコール、さらには担当医師による数々の検診を含め、再発のリスクを最小限に抑えるために採用しうる積極的なプロトコールは数多くある。そのようなプロトコールはあるものの、黒色腫は非常に悪性度が高い傾向があり、黒色腫が5年以内に再発する可能性は、治療時点でのがんの病期に応じて2％〜65％であると報告されている。例えば、www.aimatmelanoma.org/en/aim-for-answers/moving-on-after-treatment/follow-up-by-stage.htmlを参照のこと。

動物でも、皮膚がん、特に黒色腫、扁平上皮がんおよびマスト細胞腫瘍は起こりやすい。皮膚がんは特に、日の当たる場所で多くの時間を過ごす動物で有病率が高い。

感染症は世界中でよく見られる問題である。多くの感染症は、細菌、真菌、および他の微生物によって引き起こされる。そのような感染症に対する現行の治療は抗生物質および抗菌薬に大きく依存しているものの、少なくとも一部の抗生物質に対して耐性であることが見いだされる細菌感染症の数は増加している。CDCは、毎年200万人を上回る米国人が抗生物質耐性微生物に感染し、23,000人超が死亡に至っていると報告している。例えば、www.medicalnewstoday.com/articles/266182.phpを参照のこと。皮膚および軟部組織の感染症は、救急医療の場で3番目に多い診断名であり、全入院患者の7％〜10％が皮膚または軟部組織の感染症を有すると推定されている。Ki and Rotstein, Can. J. Infect. Dis. Med. Microbiol. 2008 March; 19(2): 173-184（非特許文献1）。よく見られるその他の感染症には、全身性感染症、呼吸器感染症、耳感染症、胃腸感染症、および尿路感染症が含まれる。感染症は飼育動物でも同様によく見られ、治療が困難なこともある。ウイルス感染症もよく見られ、そのような感染症を治療するために利用可能な治療法はほとんどない。

したがって、がん細胞を溶解させるのに有用な殺腫瘍性組成物、特に真皮がんおよび真皮下がんに関連したものに対しては依然として需要が存在する。また、感染症の治療に有用な新規抗菌性組成物に対しても依然として需要が存在する。

Ki and Rotstein, Can. J. Infect. Dis. Med. Microbiol. 2008 March; 19(2): 173-184

免疫系のある種の細胞は、特定の標的細胞に対する細胞傷害活性を有する。流血中リンパ球の一般に約10〜15％を占めるナチュラルキラー（NK）細胞は、ウイルス感染細胞および多くの悪性細胞を含む標的細胞と、抗原に関して非特異的に、かつ事前の免疫感作を伴わずに結合して、それらを死滅させる。Herberman et al., Science 214:24 (1981)。標的細胞の死滅は、細胞溶解を誘導することによって起こる。NK細胞は、進行がんの患者におけるエクスビボ治療法およびインビボ治療の両方に有効であることが示されている。しかし、内因性NK細胞（すなわち、ドナーから、または患者から採取されたもの）は、依然として扱いにくく、および免疫療法に適用することが困難である。NK細胞をエクスビボで増大させることは困難であり、その結果、それらはその腫瘍標的化能力、殺腫瘍能力および殺ウイルス能力をインビボで維持するため、そのことがそれらを養子細胞免疫療法に臨床利用する上での大きな障害となっている。Melder, et al., Cancer Research 48:3461-3469 (1988)；Stephen, et al., Leuk. Lymphoma 377-399 (1992)；Rosenberg, et al., New Engl. J. Med. 316:889-897 (1987)。さらに、内因性NK細胞の調製物には、NK細胞がドナーと血縁関係にない患者を治療するために用いられる場合には除去されなければならない、T細胞および／または他の免疫エフェクター細胞も含まれる。

NK-92細胞株は、インターロイキン2（IL-2）の存在下で増殖することが発見されている独特の細胞株である。Gong et al., Leukemia 8:652-658 (1994)。NK細胞とは異なり、NK-92は、非ホジキンリンパ腫に罹患した対象の血液中で発見され、続いてエクスビボで不死化された細胞溶解性がん細胞株である。この細胞株は、種々のがんに対する高度の細胞溶解活性を有する。NK-92細胞株は、その溶解活性に関する点では均質なNK細胞集団である。第I相臨床試験によってその安全性プロフィールは確かめられており、進行がんを有するある特定の患者における抗腫瘍反応が観察されている。

内因性NK細胞はNK-92細胞とは著しく異なり、その主な理由はそれらの起源が明確に異なることにある：NK-92はがん由来細胞株であり、一方、内因性NK細胞はドナー（または患者）から採取されて、患者への注入用に加工処理される。内因性NK細胞の調製物は異種混交的な細胞集団であるが、一方、NK-92細胞は、それらがすべて溶解活性を呈するという点で均質なクローン細胞株である。NK-92細胞は細胞傷害作用を維持しながら培養下で容易に増殖するが、一方、内因性NK細胞はそうではない。

NK細胞を含む細胞は、種々の構成成分を、それが増殖している培地中に放出する。そのような構成成分の例には、タンパク質、エキソソーム、および微小胞が含まれる。エキソソームは、種々の正常細胞および腫瘍細胞によって放出されるナノ小胞（最大100nm）である。微小胞はエキソソームに類似しているが、サイズがさらに大きい（100nm超）。エキソソームおよび微小胞は、細胞培養上清から、および体液（例えば、血液）から、検出すること、および単離することができる。

内因性NK細胞の細胞培養上清から単離されたエキソソームは、CD56、パーフォリン、FasLおよびRab5Bを含むタンパク質を含有する。Lugini, et al. J Immunol. (2012) 189, 2833-2842。しかし、内因性NK細胞に由来するエキソソームおよび他の因子は、回収されるエキソソームの量の点でも、その中に含有されるタンパク質の量の点でも非常にばらつきが大きい。同上、2839。理論には拘束されないが、このばらつきは、内因性NK細胞が個々のドナーから採取されること、また内因性NK細胞が細胞の異種混交的集団を含むことが理由で生じると考えられている。細胞培養条件、精製方法、初期細胞集団、および培養下にある細胞種の比などの条件の違いはすべて、内因性NK細胞から精製されうるエキソソームの組成および量のばらつきにつながる恐れがある。例えば、NK細胞調製物の中のある種の細胞集団を、用いる精製方法および／または培養条件に関して、またはそれに選択することができる。

内因性NK細胞に付随するばらつきの問題は、NK-92細胞株には当てはまらない。これは細胞株であるため、多数の細胞を長期間にわたって培養して増殖させることができる。これらの培養物は、再現性のある一定のエキソソームおよび／または微小胞の調製物を与える均質な細胞集団である。NK-92細胞によって分泌されるエキソソームおよび／または微小胞は、殺腫瘍特性、例えば細胞傷害性および／または細胞溶解性を有すると想定されるタンパク質を含有する。NK-92細胞を含有する培地から、抗菌特性、免疫調節特性などを有する構成成分を含む、他の構成成分を単離することもできる。

その一方で、NK-92細胞はがん細胞株である。いくつかのがん細胞は、状況によっては腫瘍成長の一因となる因子、例えばマイクロRNAなどを含有するエキソソームを放出することが示されている。多くのがん細胞が、それらの非悪性対応物によって放出されるものとは異なるエキソソームおよび他の因子を放出する。例えば、NK-92細胞は抗微生物特性を有する因子を放出するが、これは内因性NK細胞では観察されない特徴である。1つの態様においては、NK-92細胞から得られるエキソソームおよび／または微小胞を、それらの使用前にそのような因子を分離するために、PBSまたは等張食塩水などの適した溶液中でインキュベートする。このインキュベーション期間により、腫瘍成長の一因となる因子が著しく減少するかまたは消失すると想定される。

本発明の1つの局面は、NK-92細胞培地の上清から得られる1つまたは複数の構成成分を含む薬学的組成物を提供する。構成成分は殺腫瘍性および／または抗菌性であってよい。構成成分がまた、免疫調節特性を有してもよい。これらの構成成分は、好ましくは、上清から単離されたエキソソームおよび／または微小胞である。1つの態様において、エキソソームおよび／または微小胞は細胞傷害性である。1つの態様において、エキソソームおよび／または微小胞は、がん細胞を溶解させる能力を有する。1つの態様において、エキソソームおよび／または微小胞は抗菌性である。1つの態様において、エキソソームおよび／または微小胞は抗ウイルス性である。1つの態様において、エキソソームおよび／または微小胞は抗菌性である。1つの態様において、エキソソームおよび／または微小胞は免疫調節性である。

1つの好ましい態様において、薬学的組成物は生細胞を含まない。いくつかの態様において、薬学的組成物は注射用組成物である。いくつかの態様において、注射は全身性免疫調節活性を与えることが想定される。

NK-92細胞の部分集団は培養下で観察されており、それを分離することができる。部分集団は細胞表面マーカーの発現、タンパク質発現などの点で異なる可能性がある。本発明の1つの局面においては、NK-92細胞培地の上清から1つまたは複数の構成成分を得る前に、NK-92細胞の1つまたは複数の部分集団を単離する。所定の1つまたは複数の部分集団の単離は、明確に定められた一定のエキソソームおよび／または微小胞、特に殺腫瘍特性をほとんどまたは全く呈しないエキソソームおよび／または微小胞を可能にする。

いくつかの態様において、本明細書において提供される薬学的組成物は、残存するがん細胞を死滅させる目的、および／またはがんの再発の可能性を低下させる目的で、手術後の身体の一部に適用される。いくつかの態様において、薬学的組成物は、局所使用用に製剤化される。いくつかの態様において、薬学的組成物は、真皮下に適用するために製剤化される。いくつかの態様において、薬学的組成物は相転移ポロキサマーを含む。

いくつかの態様において、薬学的組成物は相転移ポリマーを含む注射用剤形であり、その結果、組成物は液体として注射されて体内で（例えば体温で）相転移してゲルになり、それにより、薬物デポーがもたらされる。

本発明のもう1つの局面は、NK-92細胞培地の上清から得られた抗微生物性（抗細菌性、抗真菌性および／または抗ウイルス性を含む）構成成分を含む薬学的組成物を提供する。いくつかの態様において、抗微生物性構成成分は殺腫瘍性構成成分を含む。いくつかの態様において、抗微生物性構成成分は、上清から単離されたエキソソームおよび／または微小胞である。1つの好ましい態様において、抗微生物性構成成分は、上清から単離された微小胞を含む。

本発明のもう1つの局面は、がん細胞を溶解させる方法であって、それを必要とするヒトまたは動物の患者に対して、NK-92細胞の増殖培地の上清から単離された抗腫瘍性または細胞傷害性構成成分を投与する段階を含む方法を提供する。1つの態様において、構成成分は腫瘍（例えば、固形腫瘍）内に注射される。1つの態様において、構成成分は、腫瘍の周りまたは付近の区域に注射される。1つの態様において、構成成分は、腫瘍（例えば、皮膚がん）に対して局所的に適用される。1つの態様において、構成成分は全身性に投与される。

いくつかの態様において、がんは、癌、リンパ腫、肉腫、黒色腫、星細胞腫、中皮腫細胞、卵巣癌、結腸癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、肺癌、泌尿器癌、膀胱癌、乳がん、胃がん、白血病、肺がん、結腸がん、中枢神経系がん、卵巣がん、子宮頸がん、腎がん、または前立腺がんである。1つの好ましい態様において、がんは皮膚がんである。

[本発明1001]
NK-92細胞から単離されたエキソソームおよび／または微小胞を含む組成物。
[本発明1002]
無菌水性溶液を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
無菌水性溶液が1つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む、本発明1002の組成物。
[本発明1004]
無菌水性溶液が無菌PBSまたは無菌食塩液を含む、本発明1002の組成物。
[本発明1005]
無菌水性組成物がNK-92細胞の培地の上清を含む、本発明1002の組成物。
[本発明1006]
エキソソームおよび／または微小胞がNK-92細胞の所定の部分集団から単離される、本発明1001の組成物。
[本発明1007]
エキソソームおよび／または微小胞の単離の前にNK-92細胞を少なくとも1つの刺激物質によって処理する、本発明1001の組成物。
[本発明1008]
少なくとも1つの刺激物質がIL-15および／またはインターフェロンγである、本発明1007の組成物。
[本発明1009]
薬学的に許容される担体と、NK-92細胞から単離された1つまたは複数の構成成分とを含み、前記1つまたは複数の構成成分が殺腫瘍性および／または抗菌性である、薬学的組成物。
[本発明1010]
無菌水性溶液を含む、本発明1009の薬学的組成物。
[本発明1011]
無菌水性溶液がNK-92細胞の培地の上清を含む、本発明1010の薬学的組成物。
[本発明1012]
前記1つまたは複数の構成成分がエキソソームおよび／または微小胞を含む、本発明1009の薬学的組成物。
[本発明1013]
本発明1001の組成物と無菌水性担体とを含む、薬学的組成物。
[本発明1014]
NK-92細胞が野生型NK-92細胞を含む、本発明1009〜1013のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1015]
NK-92細胞が改変NK-92細胞を含む、本発明1009〜1013のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1016]
NK-92細胞が、Fc受容体、サイトカイン、サイトカイン受容体および／またはキメラ抗原受容体を発現するように改変されたNK-92細胞を含む、本発明1009〜1013のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1017]
注射用製剤である、本発明1009〜1016のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1018]
真皮下注射または皮下注射用に製剤化されている、本発明1017の薬学的組成物。
[本発明1019]
注射用徐放性製剤である、本発明1017の薬学的組成物。
[本発明1020]
薬学的に許容される担体が増粘剤を含む、本発明1009〜1019のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1021]
局所製剤である、本発明1009〜1016のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1022]
局所製剤が室温では液体であり、身体に適用されるとゲルになる、本発明1021の薬学的組成物。
[本発明1023]
局所製剤がポロキサマーを含む、本発明1022の薬学的組成物。
[本発明1024]
クリームまたはローションである、本発明1021の薬学的組成物。
[本発明1025]
1つまたは複数のサイトカインをさらに含む、本発明1009〜1024のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1026]
1つまたは複数のサイトカインが少なくともIL-2を含む、本発明1025の薬学的組成物。
[本発明1027]
前記1つまたは複数の構成成分の単離の前にNK-92細胞を少なくとも1つの刺激物質によって処理する、本発明1009〜1026のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1028]
少なくとも1つの刺激物質がIL-15および／またはインターフェロンγである、本発明1027の薬学的組成物。
[本発明1029]
患者における腫瘍を治療するための方法であって、腫瘍が治療されるように、本発明1009〜1028のいずれかの薬学的組成物の有効量を患者に投与する段階を含む、方法。
[本発明1030]
患者における感染症を治療するための方法であって、感染症が治療されるように、本発明1009〜1028のいずれかの薬学的組成物の有効量を患者に投与する段階を含む、方法。
[本発明1031]
感染症が細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症、または酵母感染症である、本発明1030の方法。
[本発明1032]
患者における免疫応答を誘導するための方法であって、免疫応答が誘導されるように、本発明1009〜1028のいずれかの薬学的組成物の有効量を患者に投与する段階を含む、方法。
[本発明1033]
患者における免疫調節反応を誘導するための方法であって、免疫調節反応が誘導されるように、本発明1009〜1020のいずれかの薬学的組成物の有効量を患者に注射する段階を含む、方法。
[本発明1034]
薬学的に許容される担体とNK-92細胞から単離されたエキソソームおよび／または微小胞とを含む第1の薬学的組成物、ならびにゲルを含む第2の薬学的組成物を含むキットであって、第1の薬学的組成物および第2の薬学的組成物が局所製剤である、キット。
[本発明1035]
第2の薬学的組成物がポロキサマーを含む、本発明1034のキット。
[本発明1036]
第2の薬学的組成物が、NK-92細胞の増殖培地の上清から単離されたエキソソームおよび／または微小胞を含む、本発明1034のキット。
本発明の上記および他の局面について、以下に詳細に述べる。

クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）の増殖に対するNK-92細胞の効果を示している。 C.ネオフォルマンス増殖のパーセントとして表した、図1と同じデータを示している。 図3Aは、種々の培養条件下でNK-92細胞から単離されたエキソソーム／微小胞（EV／MV）のタンパク質含量を分析したウエスタンブロットの像である（レーン4〜7）。NK-92細胞（レーン3）を陽性対照として用いている。MCF-7細胞（レーン1）およびエキソソーム（EV、レーン2）は、チューブリンおよび／またはRab5Bに対する陽性対照であり、かつ細胞溶解性タンパク質に対する陰性対照である。図3Bは、NK-92細胞およびエキソソーム／微小胞調製物における、核膜（ヌクレオポリン）、ミトコンドリア（プロヒビン）およびエキソソーム（Rab5B）に対するマーカーの存在について分析したウエスタンブロットの像である ヨウ化プロピジウムアッセイにおける、Jurkat細胞に対するNK-92エキソソーム／微小胞調製物の細胞溶解活性を示している。

発明の詳細な説明
定義
本物品および方法を開示および説明する前に、以下に記載される諸局面は特定の組成物、調製方法または使用に限定されず、したがって当然ながら変更可能であることが理解されるべきである。また、本明細書において用いられる用語は特定の局面を記載することのみを目的としており、限定的であることを意図しないことも理解されるべきである。

本明細書およびそれに続く特許請求の範囲において、いくつかの用語について言及するが、それらは以下の意味を有すると定義されるものとする。

明細書および添付の特許請求の範囲において用いる場合、単数形の「1つの（a）」、「1つの（an）」および「その（the）」は、文脈によって明らかに別のことが規定される場合を除き、複数の指示物も含むことに留意すべきである。したがって、例えば、「1つの（a）サイトカイン」への言及は、2つまたはそれを上回るサイトカインの混合物を含み、その他も同様である。

「任意の」または「任意に」とは、その後に記載される事象または状況が生じても生じなくてもよいことを意味し、その記載は、事象が生じる場合、またはそれが生じない場合を含む。

「含む（comprising）」という用語は、組成物および方法が、列記された要素を含むが、他のものを排除するわけではないことを意味する。組成物および方法を定義するために用いられる「〜から本質的になる」は、その組み合わせに対して何らかの本質的な意義のある他の要素を排除することを意味するものとする。例えば、本明細書において定義された要素から本質的になる組成物は、特許請求される発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を与えない他の要素を排除しないと考えられる。「〜からなる」は、微量の他の成分および列記された実質的な方法の諸段階以外を排除することを意味する。これらの連結語句（transition term）のそれぞれによって定義される態様は、本発明の範囲内にある。

本明細書で用いる「患者」という用語は、ヒト、家畜、飼育愛玩動物などの哺乳動物患者を非限定的に含む、任意の脊椎動物のことである。1つの好ましい態様において、患者はヒトである。

数値の前に用いられる「約」という用語は、その値が、±5％、±1％、および±0.2％といった合理的な範囲内で変化してもよいことを指し示している。

「内因性NK細胞」という用語は、ドナー（または患者）に由来するNK細胞を、NK-92細胞株と区別して指すために用いられる。NK細胞は、特異的抗原刺激の非存在下で、MHCクラスによる制約がなくても標的細胞を死滅させる、免疫系の細胞である。内因性NK細胞は一般に、そこでNK細胞が濃縮されている、細胞の異種混交的な集団である。内因性NK細胞は、患者の自己治療または同種異系治療向けとすることができる。

「NK-92細胞」という用語は、野生型NK-92細胞および改変NK-92細胞の両方を含む。NK-92細胞はNK細胞よりも、腫瘍細胞種および感染細胞種に対する細胞傷害性が高いことが見いだされている。

「野生型NK-92細胞」という用語は、NK細胞株であるNK-92のことを指し、これは当初、非ホジキンリンパ腫を有する患者から得られて、エクスビボで不死化されたものである。NK-92細胞は、American Type Culture Collectionから寄託物番号CRL-2407として入手可能であり、例えば、その全体が参照により組み入れられる米国特許第7,618,817号に記載されている。

「改変NK-92細胞」という用語は、その由来となった野生型NK-92細胞には見いだされない特性を与えるようにさらに処理されたNK-92細胞のことを指す。そのような処理には、例えば、物理的処理、化学的処理および／または生物学的処理などが含まれる。処理は、改変NK-92細胞に対して、所望の目的にとってそれをより有利にするような特性を付与する。改変NK-92細胞の例は、例えば、米国特許第7,618,817号；第8,034,332号；および第8,313,943号に記載されており、これらはすべて、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

「細胞外小胞」という用語は、細胞（例えば、NK-92細胞）から培地中に分泌される、エキソソームおよび微小胞の両方、ならびに任意の他の小胞を範囲に含む。一般に、エキソソームは、直径が約100ナノメートル（nm）未満であるナノソームのことである。微小胞は、約100nmまたはそれよりも大きい直径を有する。

本発明を説明するために用いられる場合、「がん」、「腫瘍」および「悪性腫瘍」は、組織または器官の過形成と同等に関係している。組織がリンパ系または免疫系の一部である場合には、悪性細胞には、流血中細胞の非固形腫瘍が含まれる。他の組織または器官の悪性腫瘍は固形腫瘍を生じることがある。一般に、本発明の方法は、リンパ性細胞、流血中免疫細胞、および固形腫瘍の治療に用いることができる。

「殺腫瘍性構成成分」という用語は、がん性腫瘍および／またはがん細胞を治療する構成成分のことを指す。腫瘍の治療は、腫瘍を減少もしくは消失させること、がん細胞を死滅させること、ならびに／またはがん細胞の成長、増殖および／または転移を阻害することを範囲に含む。好ましくは、腫瘍細胞は、例えば細胞溶解によって死滅させられる。

「抗微生物性構成成分」とは、微生物による感染症を治療または予防する構成成分のことを指す。微生物には、細菌、真菌、糸状菌、ウイルスなどが含まれる。したがって、抗微生物とは、抗ウイルス性構成成分、抗細菌性構成成分、抗真菌性構成成分などのことも指す。

本発明を説明するために用いられる「細胞傷害性」および「細胞溶解性」という用語は、NK細胞などのエフェクター細胞の活性を記述するために用いられる場合、同義であることを意図している。一般に、細胞傷害活性は、種々の生物学的、生物化学的または生物物理学的機序のいずれかによる標的細胞の死滅と関係している。細胞溶解とは、より具体的には、エフェクターが標的細胞の原形質膜を溶解させて、それにより、その物理的完全性を破壊することを指す。これは標的細胞の死滅をもたらす。理論に拘束されることは望まないが、NK細胞の細胞傷害作用は細胞溶解に起因すると考えられている。

本明細書で用いる「増殖培地」または「培地」という用語は、同義であることを意図している。一般に、これらの用語は、NK-92細胞をその中で増殖させるかまたはその中に配置することができ、かつNK-92細胞がその中にエキソソーム、微小胞、および／または他の活性構成成分を放出する、任意の培地または水性溶液のことを指す。培地には、X-VIVO 10またはRPMIなどの増殖培地（例えば、市販の培地）が含まれうる。または、培地にはPBSまたは他の水性溶液が含まれうる。

本明細書で用いる場合、「治療」、「治療すること」、および「治療する」は、疾患、障害または病状に対して、疾患、障害もしくは病状および／またはその症状の有害な影響または他の任意の望まれない影響を軽減または改善するために作用物質によって働きかけることと定義される。「治療」とは、本明細書で用いる場合、患者の治療を範囲に含み、それには以下が含まれる：（a）その病状に対する素因があると判定されているがまだその病状を有すると診断されていない患者における病状の発生リスクを低下させること、（b）病状の発症を妨げること、ならびに／または（c）病状を緩和すること、すなわち、病状の退縮を引き起こすこと、および／もしくは病状の1つもしくは複数の症状を緩和すること。病状もしくは患者を「治療すること」または病状もしくは患者の「治療」とは、症状の軽減などの臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るために、対策を講じることを指す。本発明において、有益なまたは所望の臨床結果には、以下が非限定的に含まれる：腫瘍のサイズもしくは転移能を低下させること；腫瘍細胞を死滅させること；または、例えば、1つもしくは複数の症状を軽減すること、感染症の時間の長さを短縮することなどによって、感染性因子（微生物）による感染症の重症度を低下させること。

NK-92細胞の培地の上清から単離される構成成分
NK-92細胞は、培養培地中で増大させること、改変すること、および／または維持することができる。許容されるあらゆる培養条件を用いてよい。1つの態様においては、ウシ胎仔血清（例えば、12.5％；Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.）および／またはウマ血清（例えば、12.5％；Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.）を加えた強化アルファ最小必須培地（MEM；Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.）中で、NK-92細胞を培養する。もう1つの態様においては、ヒト血清、ヒト血漿またはヒト血清アルブミン（例えば、5％）を加えたXVivo 10培地中で、NK-92細胞を培養する。1つの好ましい態様において、血清、血漿または血清アルブミンは、NK-92細胞の培養の前にエキソソームが除去されている。

培地には任意で、他の栄養物、サイトカイン、および／または増殖因子、例えばインターロイキン2（IL-2）、L-アスパラギン、L-グルタミン、および／またはL-セリンが加えられる。NK-92細胞は、この培地中にある時に、タンパク質（例えば、サイトカイン）、微小胞、および／またはエキソソームなどの構成成分を培地に放出することができる。細胞を、例えば遠心分離によって単離した後に、細胞から放出された構成成分は上清中に残る。

使用されるもう1つの適した培地には、X-VIVO 10培地、5％ヒト血清AB、36μM L-アスパラギン、450μM L-グルタミン、324μM L-セリン、および500IUのIL-2が含まれる。

いくつかの態様において、培地は、無血清培地、PBSまたは他の水性溶液、例えばリンゲル液、デキストロース溶液、ハンクス溶液、および他の水性生理的平衡塩類溶液である。理論には拘束されないが、増殖培地のいくつかの構成成分（例えば、血清）は、NK-92細胞とは無関係なエキソソーム、微小胞、および／または他の構成成分を含有する可能性がある。このため、エキソソーム、微小胞または他の構成成分を培地から単離する前に、NK-92細胞を無血清培地または他の水性溶液中に、ある期間にわたって維持することが有益なことがある。または、NK-92細胞を、エキソソームが除去されたかまたはエキソソームを含有しない血清中または血清代替物中で培養してもよい。

いくつかの態様においては、1つまたは複数の刺激物質を培地に添加する。理論には拘束されないが、そのような作用物質によるNK-92細胞の刺激は、エキソソームおよび／または微小胞を含む構成成分の、より一定で、頑健で、かつ／または再現性のある放出をもたらしうる。刺激物質には、例えば、サイトカインまたは薬学的刺激物が含まれる。1つの態様において、刺激物質はIL-15である。1つの態様において、刺激物質はインターフェロンγである。

いくつかの態様において、1つまたは複数の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分は、上清から単離されたエキソソームを含む。いくつかの態様において、1つまたは複数の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分は、上清から単離された微小胞を含む。いくつかの態様において、1つまたは複数の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分は、上清から単離されたエキソソームおよび微小胞を含む。

エキソソームとは、細胞から排出される、最大約100nmの直径を有するナノ小胞のことである。いくつかの態様において、それらは約30〜約100nmの直径を有する。微小胞は非細胞性であり、約100nmよりも大きく、かつ好ましくは約1.5ミクロン未満である直径を有する。

エキソソームおよび／または微小胞は、いくつかの方法によって培地から単離することができる。1つの方法は超遠心分離による。他の方法には、市販のエキソソーム単離キット（例えば、Total Exosomes Isolationキット［Life Technologies］、Exo-spin（商標）Exosome Purification Kit［Cell Guidance Systems］またはPureExo（登録商標）Exosome Isolation Kit［101 Bio］）；市販の機器、例えば、Dynabeads（登録商標）ヒトCD63特異的精製システムまたはDynabeads（登録商標）Streptavidin精製システム（Life Technologies Corporationから入手可能）；濾過；または分別遠心分離法（例えば、S. Rani et al, Methods Mol Biol, 784: 181-95 (2011)に記載されているもの）が含まれる。エキソソームおよび／または微小胞の存在、サイズおよび純度などは、ウエスタンブロット法、透過型電子顕微鏡法、フローサイトメトリー、原子間力顕微鏡法、ナノ粒子追跡分析、ラマン顕微分光法、抵抗パルスセンシング、および透過型電子顕微鏡法などの方法によって特徴づけることができる。

いくつかの態様において、NK-92細胞は野生型NK-92細胞を含む。

いくつかの態様において、NK-92細胞は改変NK-92細胞を含む。NK-92細胞は、当技術分野において公知の方法、例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第7,618,817号に記載された方法などによって改変することができる。例えば、NK-92細胞を、細胞の表面にFc受容体を発現するように改変することができる。Fc受容体は、活性化Fcγ受容体、CD16（FcγRIII-A）、FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）、FcγRIII、FcRn、FcαおよびFcεなどであってよい。Fc受容体は、低結合親和性型および高結合親和性型を含め、そのリガンド、またはそのリガンドの断片に対して任意の結合親和性を有するものでよい。1つまたは複数の関連した補助シグナル伝達ポリペプチド、例えばFcεRI-γもしくはTCR-ζ、サイトカイン、またはそれらの断片を発現するように、NK-92細胞をさらに改変することもできる。

いくつかの態様において、NK-92細胞は、Fc受容体を発現するように改変されたNK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、FcγRIII-A、FcγRI、FcγRII、FcγRIII、FcRn、FcαもしくはFcε、またはそれらの組み合わせを発現するように改変されたNK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、1つまたは複数のキメラ抗原受容体を発現するように改変されたNK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、American Type Culture Collectionから寄託物番号PTA-8836、PTA-6967、PTA-8837もしくはPTA-6672、またはそれらの組み合わせとして入手可能な改変NK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、NK-92-CD16、NK-92-CD16-γもしくはNK-92-CD16-ζ、またはそれらの組み合わせを含む。

いくつかの態様において、NK-92細胞は、サイトカインを発現するように改変されたNK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、細胞の増殖を促進するサイトカインおよび／またはサイトカイン受容体を発現するように改変されたNK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、IL-2および／またはIL-2受容体を発現するように改変されたNK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、IL-15、IL-18もしくはIL-21、またはそれらの受容体を発現するように改変されたNK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、American Type Culture Collectionから寄託物番号CRL-2408もしくはCRL-2409、またはそれらの組み合わせとして入手可能な改変NK-92細胞を含む。いくつかの態様において、NK-92細胞は、NK-92MI、NK-92CI、またはそれらの組み合わせを含む。

理論には拘束されないが、改変NK-92細胞由来のエキソソームおよび／または微小胞は、野生型NK-92細胞由来のものとは明確に異なると考えられる。例えば、改変NK-92細胞由来のエキソソームおよび／または微小胞は、細胞の改変に基づき、異なる受容体および／または他のタンパク質（例えば、細胞溶解酵素）を含有する可能性がある。改変NK-92細胞由来のエキソソームおよび／または微小胞は、いくつかの受容体および／または他のタンパク質を異なる量または相対量で含有する可能性もある。

薬学的組成物
1つの局面においては、温血動物におけるがん細胞を死滅させるために有用な薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体とNK-92細胞の増殖培地の上清から単離された1つまたは複数の構成成分とを含む組成物が提供される。

いくつかの態様において、薬学的組成物は室温では液体であり、患者に適用されるとゲルになる。いくつかの態様において、薬学的に許容される担体はポロキサマーを含む。

もう1つの局面においては、NK-92細胞の増殖培地の上清から単離されたエキソソームおよび／または微小胞と無菌水性担体とを含む薬学的組成物が提供される。

もう1つの局面においては、薬学的に許容される担体とNK-92細胞の増殖培地の上清から単離されたエキソソームおよび／または微小胞とを含む第1の薬学的組成物、ならびにゲルを含む第2の薬学的組成物を含むキットであって、第1の薬学的組成物および第2の薬学的組成物が局所製剤であるキットが提供される。いくつかの態様において、第2の薬学的組成物はポロキサマーである。いくつかの態様において、第2の薬学的組成物は、NK-92細胞の増殖培地の上清から単離されたエキソソームおよび／または微小胞を含む。1つの好ましい態様において、第1および／または第2の薬学的構成成分は微小胞を含む。

いくつかの態様において、第1の薬学的組成物は液体を含み、第2の薬学的組成物は、ゲル、ポロキサマー、または室温では液体であって体温ではゲルになる組成物を含む。液体が治療区域にまず適用され、ゲルが液体の上に適用される。理論には拘束されないが、液体製剤は区域の迅速な治療をもたらし、一方、ゲルは液体を適用部位に維持すると考えられている。いくつかの態様において、ゲルはNK-92細胞の増殖培地の上清から単離されたエキソソームおよび／または微小胞と無菌水性担体とを含む。理論には拘束されないが、ゲルは、治療区域に対するエキソソームおよび／または微小胞のより緩徐な放出をもたらし、それ故に持続放出および罹患区域の治療をもたらすと考えられている。

いくつかの態様において、薬学的組成物は、1つまたは複数のサイトカインをさらに含む。

殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分を含む組成物の機能的有効性を維持する目的で、殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分を、IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-10、IL-13、IL-2などのサイトカインとともに投与してもよい。「とともに」という用語は、サイトカインを、構成成分を含む組成物の投与の少し前に投与してもよく、またはそれを構成成分を含む組成物と同時に投与しても、または殺腫瘍性構成成分を含む組成物が投与されて少し後に投与してもよいことを指し示している。また、サイトカインを、殺腫瘍性構成成分を含む組成物を投与する時点に関して、そのような時点のうち2回で、または3回の時点すべてで投与してもよい。いくつかの態様において、サイトカインおよび構成成分は単一の組成物中にある状態で投与される。

いくつかの態様において、1つまたは複数のサイトカインは、少なくともIL-2を含む。

薬学的組成物は、経口投与、局所投与、経真皮的投与、直腸投与、吸入投与、または非経口的（静脈内、筋肉内または腹腔内）投与などのために適した、種々の製剤であってよい。薬学的組成物は、腫瘍内、または腫瘍部位もしくはその周りへの注射のために適した製剤中にあってよい。1つの態様において、薬学的組成物は、腫瘍のすべてまたは大部分を除去するための手術の後に、腫瘍部位に注射されるかまたは適用される。

本明細書で用いる場合、「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」には、薬学的使用に適し、かつ殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分との適合性がある、任意およびすべての溶媒、分散剤または媒体、コーティング剤、抗菌薬、等張剤／低張剤／高張剤、吸収改変剤などが含まれる。さらに、他のまたは補足的な活性成分を最終組成物に組み入れることもできる。

本明細書に記載の薬学的組成物は、局部治療または全身治療のいずれが所望であるか、および治療しようとする区域に応じて、いくつかの様式で投与することができる。1つの局面において、投与は注射によって可能であり、この場合には組成物は液体またはゲルとしてとして製剤化される。他の局面において、患者の内部に適用されるように組成物を製剤化することができる。他の局面において、組成物は、局所的に（眼に（ophthalmically）、膣に、直腸に、鼻腔内に、経口的に、または皮膚に対して直接的に、を含む）適用することができる。例えば、エキソソームおよび／または微小胞を含む局所用組成物を、到達可能な任意の腫瘍または感染症、例えば、皮膚腫瘍もしくは他の腫瘍（例えば、カポジ肉腫）；ウイルス感染症（例えば、疣贅、陰部疣贅、ヘルペス）；または細菌感染症に対して適用することができる。

いくつかの態様において、薬学的組成物は注射用製剤である。

薬学的組成物は、非経口的に、例えば、静脈内、筋肉内、静脈内、皮下または腹腔内に投与することができる。組成物は、全身性に、またはがんの部位もしくはその付近に対して局部的に注射することができる。単回の静脈内用量または腹腔内用量を投与することができる。または、典型的には1〜8日間続けられる、緩徐な長期間注入または多回の短期間の毎日注入を利用してもよい。また、隔日または数日毎に1回の投薬を利用してもよい。

無菌の注射用組成物は、殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分を適した量で、適切な担体中に組み入れることによって調製される。適した担体には、水性担体、例えば水および水性緩衝液（例えば、リン酸緩衝食塩水（PBS）、クエン酸緩衝液など）、水溶性有機溶媒（例えば、ポリエチレングリコール300、ポリエチレングリコール400、エタノール、ポリエチレングリコール、グリセリン、N-メチル-2-ピロリドン、ジメチルアセトアミド、およびジメチルスルホキシド）、有機液体／半固体（蜜蝋、d-トコフェロール、オレイン酸、中鎖モノグリセリドおよびジグリセリド）、非イオン性界面活性剤（ポリエトキシ化ヒマシ油（例えば、Cremophor EL、Cremophor RH 40、Cremophor RH 60）、ポリソルベート20、ポリソルベート80、ポロキサマー188、ポロキサマー407、d-トコフェロールポリエチレングリコール1000スクシネート、ポリエチレングリコール(15)-ヒドロキシステアリン酸、ソルビタンオレイン酸モノエステル、オレオイルポリオキシル-6グリセリド、リノレオイルポリオキシル-6グリセリド、カプリロカプロイルポリオキシル-8グリセリド、Gellucire（登録商標）44／14、Softigen（登録商標）767、ならびにPEG 300、400または1750の一脂肪酸エステルおよび二脂肪酸エステルなど）、脂質（例えば、ヒマシ油、トウモロコシ油、綿実油、オリーブ油、ラッカセイ油、ペパーミント油、ベニバナ油、ゴマ油、ダイズ油、硬化植物油、硬化ダイズ油、ならびにヤシ油およびパーム核油の中鎖トリグリセリド）、シクロデキストリン（α-シクロデキストリン、β-シクロデキストリンおよびγ-シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、ならびにスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン）、ならびにリン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、1-ジミリストイルホスファチジルコリン、1-ジミリストイルホスファチジルグリセロールなど）、またはそれらの混合物が含まれる。いくつかの態様において、水性担体は、ヒアルロン酸、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、ハンクス溶液、および他の水性生理的平衡塩類溶液を含む。いくつかの態様において、非水性担体は、固定油、植物油、例えばオリーブ油およびゴマ油など、トリグリセリド、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール、または注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルを含む。いくつかの態様において、薬学的に許容される担体は、粘度増強剤、例えばカルボキシメチルセルロースもしくはその塩、ソルビトール、またはデキストランなど；等張性および化学的安定性を強化する物質、例えばリン酸緩衝液、炭酸水素緩衝液、およびTris緩衝液など；保存料、例えばチメロサール、クレゾール、ホルマリン、およびベンジルアルコールなどをさらに含む。

注射用組成物は溶液または懸濁液の状態にあってよいが、中空針などの注射用デバイスを容易に通過することができるべきである。溶媒または賦形剤の適正な選択によって、適正な粘度を達成し、維持することができる。いくつかの態様において、薬学的に許容される担体は粘度増強剤を含む。いくつかの態様において、組成物は、25℃で、約5センチポワズ（cP）〜約1×10⁶cP、または約5cP〜約1×10⁵cP、または約5cP〜約1×10⁴cP、または約5cP〜約1×10³cP、または約6cP〜約100cPの粘度を有する。

いくつかの態様において、薬学的組成物は、注射用徐放性製剤である。徐放性製剤中の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分は、長い期間、例えば、少なくとも数分間、少なくとも1時間、少なくとも数時間、少なくとも1日、少なくとも数日、または数週間などにわたって、組成物から身体へと放出されて、長期的および／または連続的な治療効果をもたらす。

いくつかの態様において、組成物は、腫瘍部位またはその近傍に送達された時に組成物の局在的保持を可能にし、任意で組成物中の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の徐放および／または連続放出も可能にする、局在化物質を含む。そのような作用物質には、チキソトロープ剤、相変化剤（phase changing agent）、例えばヒドロゲル、生体内分解性、生体適合性ポリマー、およびコラーゲンゲルなどが含まれる。これらの組成物は周囲条件では注射可能な形態または液体形態にあり、適用後には粘性またはゲル様の生体内分解性または生体内分解性の塊を形成し、そのことにより、送達部位から外への輸送を制限するとともに、組成物からの殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の拡散を可能にする。

組成物中で有用なヒドロゲルは、化学的および／または物理的に架橋したヒドロゲルである。インサイチュー化学架橋は、例えば、好ましくは共有結合形成を伴う、光開始性、レドックス開始性またはマイケル付加型の重合を介して得られる。物理架橋性ヒドロゲルは外的刺激によって自己集合し、共有結合形成には依拠しない。温度、pH、イオン濃度および疎水性相互作用は、そのような自己集合のため、およびそのようなヒドロゲルの固定化のために有用な、外的刺激のいくつかである。

組成物中に用いるのに適した例示的なポリマーには、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ(カプロラクトン)、ポリ酸無水物、ポリアミン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリジオキサノン、ポリアセタール、ポリケタール、ポリカーボネート、ポリホスホエステル、ポリオルトカーボネート、ポリホスファゼン、スクシネート、ポリ(リンゴ酸)、ポリ(アミノ酸)、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシセルロース、ポリホスホエステル、多糖、キチン、キトサン、ヒアルロン酸、およびコポリマー、例えばポロキサマー、ターポリマー、ならびにそれらの混合物が含まれる。

いくつかの態様において、局在化物質はポロキサマであるー。ポロキサマーとは、中心にあるポリオキシプロピレン（例えば、（ポリ(プロピレンオキシド)）の疎水性鎖が、ポリオキシエチレン（例えば、ポリ(エチレンオキシド)）の2つの親水性鎖によって挟まれたもので構成される、非イオン性トリブロックコポリマーのことである。1つの局面において、ポロキサマーは、式
HO(C₂H₄O)_b(C₃H₆O)_a(C₂H₄O)_bOH
を有し、式中、aは10〜100、20〜80、25〜70、または25〜70、または50〜70である；bは5〜250、10〜225、20〜200、50〜200、100〜200、または150〜200である。もう1つの局面において、ポロキサマーは、2,000〜15,000、3,000〜14,000、または4,000〜12,000の分子量を有する。本明細書において有用なポロキサマーは、BASFによって製造され、商標名Pluronic（登録商標）として販売されている。本明細書において有用なポロキサマーの非限定的な例には、Pluronic（登録商標）F68、P103、P105、P123、F127およびL121が非限定的に含まれる。10％〜30％ w／wのポロキサマーといた適した濃度では、ポロキサマー溶液は室温では液体であり、体内では軟質ゲルを形成する。

適したコラーゲンには、例えば、さまざまな動物から抽出された不溶性コラーゲンのアルカリ処理物、またはペプシン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン（papin）もしくはプロナーゼなどの酵素で処理することによるものが含まれる。コラーゲンは、鳥類または哺乳動物の皮膚、骨、軟骨、腱または器官などから得ることができる。コラーゲンは硬化後に柔軟であることができ、架橋のために短時間しか必要とせず、換言すれば、ゲル化のために短時間しか必要としない。コラーゲンを非毒性溶媒中に溶解させることによってコラーゲン溶液を作製することもでき、これらの溶媒の例には、水、生理的食塩水、緩衝液、例えばホウ酸緩衝液など、または塩化ナトリウム、臭化ナトリウムおよび臭化カリウムなどの塩、またはタンパク質、糖もしくは脂質などを含有する水性溶液が含まれる。

コラーゲンが血液中または腫瘍内などの湿気の存在下でさえゲルを形成することもでき、かつ生きた身体組織に対して高度の接着性を示すこともできる。本発明に用いられるコラーゲン溶液は、さまざまな濃度で作製して、中和させて、注射用に調製することができる。さまざまな態様において、組成物中のコラーゲンの濃度は、0.2mg／mL、0.5mg／mL、0.75mg／mL、1mg／mL、2mg／mL、3mg／mL、4mg／mL、5mg／mL、6mg／mL、7mg／mL、8mg／mL、10mg／mL、20mg／mL、30mg／mL、40mg／mLおよび50mg／mL、またはこれらの数のうち2つの間の任意の範囲であってよい。器官内に注射されると、冷却されたコラーゲンゲルは、それらが体温または約37℃に達するにつれて感熱ゲル化（thermogel）する。

いくつかの態様において、薬学的組成物は、組成物の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の徐放、持続放出および／または連続放出をもたらす。

組成物の滅菌は、公知の手段、例えば濾過などによって行うことができる。

最終的な形態は、製造および貯蔵の条件下で安定であるべきである。その上、最終的な医薬形態は汚染に対して防御されているべきであり、それ故に細菌または真菌などの微生物の増殖を阻害しうるべきである。

微生物の増殖の防止または阻害は、1つまたは複数の抗菌薬、例えばクロロブタノール、アスコルビン酸、パラベン、チメロサールなどの添加によって達成することができる。また、張性を変化させる作用物質、例えば糖または塩を含めることが好ましい場合もある。

薬学的組成物を無菌粉末として作製することもできる。殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分を含む無菌粉末は、液体組成物、例えば水性担体を含む組成物などの、真空乾燥または凍結乾燥を含む方法によって調製することができる。無菌粉末を適量の水性担体、例えばPBSなどで再構築することで、患者への投与のための注射用組成物を得ることができる。

いくつかの態様において、組成物は、皮膚がんを治療するために皮膚に直接適用される局所用組成物として製剤化される。いくつかの態様において、組成物は、他の到達可能ながん、例えば子宮頸がんまたは口腔がんに対して直接適用される局所用組成物として製剤化される。いくつかの態様において、局所用組成物は、ウイルス感染細胞、例えば疣贅に対して適用される。いくつかの態様において、疣贅は陰部（性器）疣贅である。いくつかの態様において、疣贅は、尋常性疣贅、扁平疣贅、糸状／指状疣贅、モザイク状疣贅、爪周囲疣贅、または足底疣贅である。

局所投与用の製剤には、エマルジョン、クリーム、水性溶液、油、軟膏、ペースト、ゲル、ローション、乳状液（milk）、発泡体（foam）、懸濁液および粉末が含まれる。いくつかの態様において、薬学的組成物はクリームまたはローションである。1つの局面において、局所用組成物は、1つまたは複数の界面活性剤および／または乳化剤を含む。1つの態様において、乳化剤はエキソソームおよび／または微小胞の構造を変化させない。1つの態様において、乳化剤はエキソソームおよび／または微小胞の構造を変化させる。例えば、乳化剤がエキソソームおよび／または微小胞の構造を破壊し、それにより、エキソソームおよび／または微小胞の内部の活性因子を放出させてもよい。

存在してもよい界面活性剤（または表面活性物質）には、陰イオン性、非イオン性、陽イオン性および／または両性界面活性剤がある。陰イオン性界面活性剤の典型的な例には、石鹸、アルキルベンゼンスルホネート、アルカンスルホネート、オレフィンスルホネート、アルキルエーテルスルホネート、グリセロールエーテルスルホネート、α-メチルエステルスルホネート、スルホ脂肪酸、アルキルスルフェート、脂肪アルコールエーテルスルフェート、グリセロールエーテルスルフェート、脂肪酸エーテルスルフェート、ヒドロキシ混合エーテルスルフェート、モノグリセリド（エーテル）スルフェート、脂肪酸アミド（エーテル）スルフェート、モノ-およびジアルキルスルホスクシネート、モノ-およびジアルキルスルホスクシナメート、スルホトリグリセリド、アミド石鹸、エーテルカルボン酸およびその塩、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、N-アシルアミノ酸、例えば、アシルラクチレート、アシルタルタレート、アシルグルタメートおよびアシルアスパルテート、アルキルオリゴグルコシドスルフェート、タンパク質脂肪酸凝縮物（特にコムギベースの植物性産物）ならびにアルキル(エーテル)リン酸が非限定的に含まれる。非イオン性界面活性剤の例には、脂肪アルコールポリグリコールエーテル、アルキルフェノールポリグリコールエーテル、脂肪酸ポリグリコールエステル、脂肪酸アミドポリグリコールエーテル、脂肪アミンポリグリコールエーテル、アルコキシル化トリグリセリド、混合エーテルまたは混合ホルマール、部分的に酸化されていてもよいアルキル（アルケニル）オリゴグリコシドまたはグルクロン酸誘導体、脂肪酸N-アルキルグルカミド、タンパク質加水分解物（特にコムギベースの植物性産物）、ポリオール脂肪酸エステル、糖エステル、ソルビタンエステル、ポリソルベートおよびアミンオキシドが非限定的に含まれる。両性または両性イオン性界面活性剤の例には、アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、アミノプロピオネート、アミノグリシネート、イミダゾリニウム-ベタインおよびスルホベタインが非限定的に含まれる。

いくつかの態様において、界面活性剤は、脂肪アルコールポリグリコールエーテルスルフェート、モノグリセリドスルフェート、モノ-および／もしくはジアルキルスルホスクシネート、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、脂肪酸グルタメート、α-オレフィンスルホネート、エーテルカルボン酸、アルキルオリゴグルコシド、脂肪酸グルカミド、アルキルアミドベタイン、アンホアセタールならびに／またはタンパク質脂肪酸凝縮物であってよい。

両性イオン性界面活性剤の例には、ベタイン、例えば、それぞれの場合にアルキル基またはアシル基に8〜18個の炭素原子を有する、N-アルキル-N,N-ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばココアルキルジメチルアンモニウムグリシネートなど、N-アシルアミノプロピル-N,N-ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばココアシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネートおよび2-アルキル-3-カルボキシメチル-3-ヒドロキシエチルイミダゾリンなど、ならびにココアミノエチルヒドロキシエチル-カルボキシメチルグリシネートが含まれる。

いくつかの態様において、乳化剤は、以下のものから選択される非イオノゲン性界面活性剤であってよい：8〜22個の炭素原子を有する直鎖状脂肪アルコールに対して、12〜22個の炭素原子を有する脂肪酸に対して、アルキル基に8〜15個の炭素原子を有するアルキルフェノールに対して、およびアルキルラジカルに8〜22個の炭素原子を有するアルキルアミンに対して、2〜30モルのエチレンオキシドおよび／または0〜5モルのプロピレンオキシドが付加された産物；アルキル（アルケニル）ラジカルに8〜22個の炭素原子を有するアルキルおよび／またはアルケニルオリゴグリコシド、ならびにそれらのエトキシ化類似体；ヒマシ油および／または硬化ヒマシ油に対して1〜15モルのエチレンオキシドが付加された産物；ヒマシ油および／または硬化ヒマシ油に対して15〜60モルのエチレンオキシドが付加された産物；12〜22個の炭素原子を有する不飽和直鎖状または飽和分枝状脂肪酸および／または3〜18個の炭素原子を有するヒドロキシカルボン酸と、グリセロールおよび／またはソルビタンとの部分的エステル、ならびに1〜30モルのエチレンオキシドを有するそれらの付加物；12〜22個の炭素原子を有する飽和性および／もしくは不飽和性の直鎖状もしくは分枝状脂肪酸、ならびに／または3〜18個の炭素原子を有するヒドロキシカルボン酸と、ポリグリセロール（平均自己縮合度2〜8）、トリメチロールプロパン、ペンタエリトリトール、糖アルコール（例えばソルビトール）、アルキルグルコシド（例えば、メチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド）およびポリグルコシド（例えばセルロース）との部分的エステル、ならびに1〜30モルのエチレンオキシドを有するそれらの付加物；ペンタエリトリトール、脂肪酸、クエン酸および脂肪アルコールの混合エステル、ならびに／または、6〜22個の炭素原子を有する脂肪酸、メチルグルコースおよびポリオール、好ましくはグリセロールまたはポリグリセロール、モノ−、ジ−およびトリアルキルホスフェート、ならびにモノ−、ジ−および／またはトリ−PEGアルキルホスフェートの混合エステル、ならびにそれらの塩；ウールワックスアルコール；ポリシロキサン-ポリアルキル-ポリエーテルコポリマーおよび対応する誘導体；ならびにブロックコポリマー、例えば、ポリエチレングリコール-30ジポリヒドロキシステアレートなど。

いくつかの態様において、乳化剤は、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールなどである。いくつかの態様において、乳化剤は、100Da〜5,000Da、200Da〜2,500Da、300Da〜1,000Da、400Da〜750Da、550Da〜650Da、または約600Daの分子量を有するポリエチレングリコールである。

いくつかの態様において、乳化剤は本明細書に記載のポロキシマーである。

いくつかの態様において、乳化剤は1つまたは複数の脂肪アルコールで構成される。いくつかの態様において、脂肪アルコールは直鎖状または分枝状のC₆〜C₃₅脂肪アルコールである。脂肪アルコールの例には、カプリルアルコール（1-オクタノール）、2−エチルヘキサノール、ペラルゴンアルコール（1-ノナノール）、カプリンアルコール（1-デカノール、デシルアルコール）、ウンデシルアルコール（1-ウンデカノール、ウンデカノール、ヘンデカノール）、ラウリルアルコール（ドデカノール、1-ドデカノール）、トリデシルアルコール（1-トリデカノール、トリデカノール、イソトリデカノール）、ミリスチルアルコール（1-テトラデカノール）、ペンタデシルアルコール（1-ペンタデカノール、ペンタデカノール）、セチルアルコール（1-ヘキサデカノール）、パルミトレイルアルコール（cis-9-ヘキサデセン-1-オール）、ヘプタデシルアルコール（1-n-ヘプタデカノール、ヘプタデカノール）、ステアリルアルコール（1-オクタデカノール）、イソステアリルアルコール（16-メチルヘプタデカン-1-オール）、エライジルアルコール（9E-オクタデセン-1-オール）、オレイルアルコール（cis-9-オクタデセン-1-オール）、リノレイルアルコール（9Z,12Z-オクタデカジエン-1-オール）、エライドリノレイルアルコール（9E,12E-オクタデカジエン-1-オール）、リノレニルアルコール（9Z,12Z,15Z-オクタデカトリエン-1-オール） エライドリノレニルアルコール（9E,12E,15-E-オクタデカトリエン-1-オール）、リシノレイルアルコール（12-ヒドロキシ-9-オクタデセン-1-オール）、ノナデシルアルコール（1-ノナデカノール）、アラキジルアルコール（1-エイコサノール）、ヘンエイコシルアルコール（1-ヘンエイコサノール）、ベヘニルアルコール（1-ドコサノール）、エルシルアルコール（cis-13-ドコセン-1-オール）、リグノセリルアルコール（1-テトラコサノール）、セリルアルコール（1-ヘキサコサノール）、モンタニルアルコール、クロチルアルコール（1-オクタコサノール）、ミリシルアルコール、メリシルアルコール（1-トリアコンタノール）、ゲジルアルコール（1-テトラトリアコンタノール）、またはセテアリルアルコールが非限定的に含まれる。

いくつかの態様において、局所用組成物を生産するために用いられる担体は、ポリエチレンと1つまたは複数の脂肪アルコールとの混合物である。例えば、担体は、重量比約50％〜約99％、重量比約75％〜約99％、重量比約90％〜約99％、または重量比約95％のポリエチレングリコールと、重量比約1％〜約50％、重量比約1％〜約25％、重量比約1％〜約10％、または重量比約5％の脂肪アルコールを含む。いくつかの態様において、担体はポリエチレングリコールとセチルアルコールとの混合物である。

また、局所用組成物が、そのような組成物に適したさらなる構成成分を含んでもよい。いくつかの態様において、局所用組成物は、以下の構成成分のうち1つまたは複数を含みうる：脂肪、ワックス、真珠光沢ワックス、増稠剤、増粘剤、過脂肪剤、安定剤、ポリマー、シリコーン化合物、レシチン、リン脂質、生体活性成分、脱臭剤、抗菌薬、制汗剤、膨張剤、防虫剤、ヒドロトロープ、可溶化剤、保存料、香油および染料。これらの構成成分のそれぞれの例は、これらの構成成分に関して参照により組み入れられる、米国特許第8,067,044号に開示されている。

本明細書に記載の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分を含む局所用組成物は、構成成分を担体と、粒子が担体中に均一に分散するように十分な時間にわたって混合することによって調製することができる。担体が2種またはそれを上回る構成成分を含む場合には、殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の添加前に、構成成分を互いに混合することができる。局所用組成物中に存在する殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の量は、用途に応じてさまざまであってよい。いくつかの態様において、殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分は、局所用組成物の重量比で0.5％〜20％、重量比で1％〜10％、重量比で2％〜5％、または重量比で約3％である。

特定の場合における組成物中の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の量が、利用される具体的な殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分、製剤化される特定の組成物、適用様式、ならびに治療される特定の部位および患者に応じて異なりうることは理解されるであろう。所与の宿主に対する投与量は、従来の考慮事項を用いて、例えば、適切な従来の薬理学的プロトコールなどによる、本化合物および公知の治療法の活性の違いに関する慣習的な比較によって決定することができる。医薬の用量を決定する技能を有する医師および処方者は、標準的な推奨に従って問題なく用量を決定しうると考えられる（Physician's Desk Reference, Barnhart Publishing (1999)）。

単位用量または多回用量の形態が想定され、これらはそれぞれ特定の臨床的状況において利点がある。単位用量は、がんを治療する状況下で所望の効果を生じるように計算された所定の量の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分を含有する。多回用量形態は、所望の目的を達成するために複数の単回用量または分割用量が必要な場合に特に有用と考えられる。これらの投薬形態はいずれも、特定の殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の独特の特徴、達成しようとする特定の治療効果、治療しようとする疾患、ならびに患者の病状によって規定されるか、またはそれらに直接依存する仕様を有すると考えられる。

単位用量は、患者における疾患を治療するのに十分な治療的有効量を含有すると考えられ、殺腫瘍性、細胞傷害性および／または抗菌性構成成分を約0.001mg〜100mg含有しうる。殺腫瘍性、細胞傷害性および／または抗菌性構成成分の量は、組成物の0.001％〜90％ w／w、例えば、0.001％、0.01％、0.1％、1％、10％、50％もしくは90％、またはいずれか2つの数の間の任意の範囲などとさまざまであってよい。治療される疾患は、本発明のエキソソームによって治療しうる任意の疾患、例えば、がん、細菌感染症、ウイルス感染症、または真菌感染症であってよい。

薬学的組成物はさらに、摂取可能な錠剤、バッカル錠、カプセル、カプレット、エリキシル、懸濁液、シロップ、トローチ、ウェーハー、ロゼンジなどの経口用製剤であってもよい。

組成物は持続放出調製物であってもよい。この組成物を、硬質もしくは軟質カプセル中に封入すること、圧縮して錠剤にすること、または飲料、食品もしくは他の様式で飲食物中に組み入れることができる。最終的な組成物および調製物におけるパーセンテージは、当然ながらさまざまであってよく、都合に合わせて、最終的な形態、例えば錠剤の重量比にして1〜90％の範囲にわたりうる。そのような治療的に有用な組成物における量は、適した投与量が得られると考えられるものである。

経口用組成物の適した製剤は、以下も含みうる：結合剤、例えばトラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチンなど；甘味剤、例えばラクトースまたはスクロースなど；崩壊剤、例えばコーンスターチ、アルギン酸など；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムなど；または香味剤、例えばペパーミント、ウィンターグリーン油など。さまざまな他の材料が、コーティング剤として、または経口投薬単位の物理的形態を別の様式で改変するために存在してもよい。経口投薬単位は、シェラック、糖またはその両方でコーティングすることができる。シロップまたはエリキシルは、殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分、甘味剤としてのスクロース、保存料としてのメチルおよびプロピルパラベン、染料ならびに香味剤を含有する。利用されるいずれの物質も、薬学的に許容され、かつ実質的に非毒性であるべきである。

薬学的組成物の調製に関するそのほかの記述は、Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18040によって刊行されたRemington's Pharmaceutical Sciencesの第19版に見いだされる。該当部分は参照により本明細書に組み入れられる。

本発明の治療の方法
本明細書に記載の組成物は、がんなどの種々の疾患を治療する上で有用である。本組成物によって治療しうる疾患の例には、免疫系、リンパ系および造血系の悪性腫瘍、形成された腫瘍、ならびに固形腫瘍が含まれる。本組成物によって治療しうるがんの非限定的な例には、マスト細胞白血病、急性骨髄性白血病（AML）、赤白血病、骨髄性障害（例えば、骨髄性白血病、多発性骨髄腫、および赤白血病）、生殖細胞腫瘍、肺がん、小細胞肺がん、胃腸間質腫瘍、神経芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、脳腫瘍、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、腎臓癌、甲状腺癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌および前立腺癌、皮膚癌、例えば黒色腫など、腺腫（例えば、絨毛結腸腺腫）ならびに肉腫（例えば、骨肉腫）などが含まれる。

いくつかの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、皮膚がん、例えば黒色腫、扁平上皮がん、基底細胞がん、またはマスト細胞腫瘍を治療するために用いられる。

いくつかの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、他の上皮細胞がん、例えば子宮頸がんまたは口腔がんなどを治療するために用いられる。いくつかの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、ウイルス感染細胞、例えば疣贅を治療するために用いられる。

いくつかの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、免疫系をモジュレートするために用いられる。例えば、エキソソームおよび／または微小胞は、（例えば、腫瘍に対する）細胞傷害性T細胞応答を誘導すること、および／または（例えば、活性化免疫細胞の）アポトーシスを誘導することができる。エキソソームおよび／または微小胞が、免疫監視機構において役割を果たしている可能性もある。

いくつかの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、感染症を治療する上で有用である。1つの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、病原性ウイルスによる感染症を治療する上で有用である。病原性ウイルスには、ヒト乳頭腫ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、エプスタイン-バーウイルス、サイトメガロウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、インフルエンザ、呼吸合胞体ウイルス、ポックスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、およびヘルペスが非限定的に含まれる。1つの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、細菌感染症を治療する上で有用である。感染性細菌には、連鎖球菌、ブドウ球菌、クリプトコッカス属（Cryptococcus）、クラミジア（Chlamydia）、大腸菌属（Escherichia）、シュードモナス属（Pseudomonas）、クロストリジウム属（Clostridium）、およびカンジダ属（Candida）が、上記のいずれかの抗生物質耐性株を含めて、非限定的に含まれる。1つの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物は、真菌および酵母を含む他の微生物によって引き起こされる感染症を治療する上で有用である。

ヒトおよび飼育動物を含む哺乳動物では、覆われることになる体表面積（例えば、罹患区域）に基づいて、例えば局所用組成物として有効量を投与することができる。適した用量範囲は、殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の体表面積ｍ²当たり約0.001mg〜約100mgに相当するもの、例えば約0.005mg／m²〜約50mg／m²である。投与量は、毎日、例えば1日当たり1回、2回、3回もしくはそれを上回る回数で投与することもでき、または2日もしくは数日毎に、または毎週投与することもできる。徐放性製剤を投与する場合には、投与の頻度を減らすことができる。

1つの態様においては、腫瘍体積に基づいて有効量を投与することができる。適した用量範囲は、エキソソーム／微小胞調製物と腫瘍体積との比にして約1：100〜約1：10,000である。1つの態様において、適した用量範囲は、エキソソーム／微小胞調製物と腫瘍体積との比にして約1：100〜約1：1,000である。1つの態様において、適した用量範囲は、エキソソーム／微小胞調製物と腫瘍体積との比にして約1：1,000〜約1：10,000である。

1つの態様においては、患者体重に基づいて有効量を投与することができる。適した用量範囲は、kg体重当たり約1μg〜約100mgのエキソソーム／微小胞調製物である。1つの態様において、適した用量範囲は、kg体重当たり約1μg〜約10mgのエキソソーム／微小胞調製物である。1つの態様において、適した用量範囲は、kg体重当たり約1μg〜約100μgのエキソソーム／微小胞調製物である。1つの態様において、適した用量範囲は、kg体重当たり約10μg〜約10mgのエキソソーム／微小胞調製物である。1つの態様において、適した用量範囲は、kg体重当たり約100μg〜約10mgのエキソソーム／微小胞調製物である。

投与量および投与の頻度は、製剤の種類、治療される疾患、殺腫瘍性および／または抗菌性構成成分の量、患者の年齢、性別、種、他の条件などに依存すると考えられる。

併用療法
もう1つの局面において、本明細書に記載の組成物は、他のがん治療法、例えば手術、放射線照射、化学療法（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチンおよびピコプラチン、特にシスプラチンおよびカルボプラチン；タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル；ならびにアントラサイクリン、例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシンまたはバルルビシンなど）、細胞ベースの治療法（例えば、NK-92細胞療法）、抗体療法などとともに投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、上記のような1つまたは複数のサイトカインとともに投与することができる。

以下の実施例は、本発明を例証するために含められるものであり、本発明を限定するためのものではない。本明細書中に引用される刊行物または参考文献はすべて、参照により本明細書に組み入れられる。

実施例1：NK-92細胞の抗菌効果
NK-92細胞を、丸底プレート内で、ミエロカルト（Myelocult）培地中にてクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）とともに24時間インキュベートした。エフェクター：標的（NK-92：C.ネオフォルマンス）比としては、100：1（細胞1×10⁶個：1×10⁴個／ウェル）を用いた。対照として、C.ネオフォルマンス（1×10⁴個／ウェル）を、NK-92細胞を含まないミエロカルト培地中でインキュベートした。24時間のインキュベーション後に、培養物を系列希釈して、サブローカニ寒天プレート上にプレーティングした。プレートを室温で48時間インキュベートした。各希釈度でのコロニー数を測定した。

各希釈度でのプレート当たりのコロニー数を図1に示す。白のバー：NK-92細胞＋C.ネオフォルマンス。黒のバー：C.ネオフォルマンスのみ。図2は、NK-92細胞がC.ネオフォルマンスの増殖をほぼ60％阻害したことを指し示している。

同様の結果が、NK-92細胞を別の真菌種（アスペルギルス属（Aspergillus）の一種）とともにインキュベートした場合にも得られた。NK-92細胞は、用量依存的かつ時間依存的な様式で真菌に菌糸損傷を引き起こした。

実施例2：NK-92細胞からのエキソソームおよび／または微小胞の単離
上清
細胞外小胞（エキソソームおよび／または微小胞）を超遠心分離によって単離した。培養したNK-92細胞を300×gで10分間遠心し、細胞ペレットを廃棄した。上清を2000×gで20分間遠心し、ペレット（細胞片）を廃棄した。その結果得られた上清を、100,000×gでの80分間の超遠心分離に供した。その結果得られたペレットをリン酸緩衝食塩水で洗浄して、100,000×gでの80分間の超遠心分離に供した。エキソソームおよび微小胞を含有する洗浄したペレット（EV／MV調製物）を、さらなる試験のために保管した。

実施例3：細胞外小胞の特性決定
NK-92細胞を種々の条件下で培養し、実施例2に記載した通りに、培地から細胞外小胞を単離した。培養条件は表1に提示している。エキソソームの採取前に少なくとも24〜46時間にわたって、細胞をエキソフリー（exofree）FBS中で馴化させた。エキソフリーFBSは、NK-92の細胞外小胞調製物の汚染を割けるためにエキソソームが除去されている。

（表１）NK-92の増殖条件

¹ Lonza Group Ltd.

図3Aおよび図3Bに示されているように、標準的なウエスタンブロット手法を用いて、EV／MV調製物をいくつかのタンパク質の存在に関して分析した。MCF-7細胞株をエキソソーム産生に関する陽性対照として、および細胞溶解性タンパク質に関する陰性対照として用いた。NK-92細胞ペレット（NK-92細胞）を陽性対照として用いた。MCF-7細胞を、10％ウシ胎仔血清（FBS）および2mM L-グルタミンを含むDMEM中で培養した。

NK-92細胞およびMCF-7細胞のいずれによる細胞外小胞も、エキソソームマーカーであるRab5Bに関して陽性であった。NK-92 EV／MV調製物は、パーフォリン、Fasリガンド（FasL）、グランザイムB、およびグラニュライシンを含む、NK細胞活性に関与することが知られているいくつかのアポトーシス誘導性および／または細胞溶解性タンパク質に関しても陽性であった（しかし、MCF-7 EV／MV調製物はそうではなかった）。しかし、これらのタンパク質のそれぞれの量は、基本となる培地（例えば、αMEM（NK）、RPMI、X-Vivo）および血清濃度を含む、NK-92細胞の増殖条件に依存するように思われる。

NK-92細胞由来のEV／MV調製物を、他のオルガネラの混入に関して分析した。図3Bに示されているように、NK-92から単離されたEV／MVは核材料（小さなアポトーシス小体）のある程度の混入を示すものの、他の混入性オルガネラは含まなかった。

実施例4：EV／MV調製物の細胞傷害作用
Jurkat細胞に対するEV／MV調製物の細胞傷害作用を、表1に指し示した培養条件を用いて検査した。Jurkat細胞（2×10⁴個）を170μLの培地（エキソフリーFBSを含む）中、および5、15または30μLのEV／MV調製物（PBSを用いて総インキュベーション容積を200μLにした）中で、2時間または20時間インキュベートした。細胞傷害作用をヨウ化プロピジウム（PI）アッセイによって判定し、データを、PI陽性（死細胞の指標）である細胞のパーセントとして表している。

図4に示されている通り、NK-92細胞由来のEV／MV調製物はインビトロでJurkat細胞に対する細胞傷害活性を有したが、MCF-7細胞由来のものはそうではなかった。EV／MVの溶解能は培地組成によって変化し、増殖培地中の血清の存在により、NK-92細胞による溶解性EV／MVの産生が刺激される。

Claims (7)

1. NK-92細胞から単離されたエキソソームまたは微小胞を含むがんを治療するための組成物を生産する方法であって、該方法が少なくとも1つの栄養物、サイトカインまたは増殖因子が加えられた培地中でNK-92細胞を培養する工程、および、該組成物を生産するためにNK-92細胞からエキソソームまたは微小胞を単離する工程を含む、方法。
2. 前記培地がサイトカインを含み、かつ、該サイトカインが、IL-2、IL-15、インターフェロンγおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
3. 前記培地が栄養物を含む、請求項1記載の方法。
4. 前記培地が増殖因子を含む、請求項1記載の方法。
5. 前記組成物が、手術、放射線照射、化学療法、細胞ベースの治療法または抗体療法とともに投与される、請求項1記載の方法。
6. 前記培地がL-アスパラギン、L-グルタミン、L-セリンまたはそれらの組み合わせを含む、請求項1記載の方法。
7. 前記NK-92細胞が、Fc受容体、サイトカイン、サイトカイン受容体および／またはキメラ抗原受容体を発現するように改変されたNK-92細胞である、請求項1記載の方法。

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