JP6787596B2 - 光る植物 - Google Patents
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Description
植物の表面に塗布された蛍光タンパク質を有する、または植物の内部に吸収させた蛍光タンパク質を有することを特徴とする。
参考文献1: Shimizu A et al. PLoS One. 2017 Jul 11;12(7)
植物の表面に蛍光タンパク質を塗布し、光る植物が得られることを確認した。
(1)蛍光タンパク質液
常法により、C末端にHisタグを付加したリコンビナントタンパク質(ブルーライト型、配列番号1)を、大腸菌(DH5a)に発現させ、前記大腸菌の破砕物から、前記リコンビナントタンパク質を含む上清を回収した。前記上清をアフィニティカラム(Niカラム)に供して、前記上清中の前記リコンビナントタンパク質を前記カラムに結合させ、前記リコンビナントタンパク質を0.2mol/Lイミダゾールで溶出して、前記リコンビナントタンパク質を含む画分を回収した。つぎに、回収した前記画分を、ゲルろ過カラム(PD10カラム、GEヘルスケア)に供し、NaClを含まないリン酸バッファーで溶出し、前記リコンビナントタンパク質を含む画分を、精製画分として回収した。この精製画分をタンパク質液として、以下の工程に使用した。
配列番号1:
MTTFKIESRIHGNLNGEKFELVGGGVGEEGRLEIEMKTKDKPLAFSPFLLSHCMGYGFYHFASFPKGTKNIYLHAATNGGYTNTRKEIYEDGGILEVNFRYTYEFNKIIGDVECIGHGFPSQSPIFKDTIVKTCPTVDLMLPMSGNIIASSYAKAFQLKDGSFYTAEVKNNIDFKNPIHESFSKSGPMFTHRRVEETHTKENLAMVEYQQVFNSAPRDM
市販の白バラ、および胡蝶蘭V3を用いた。
前記タンパク質液(1.3mg/ml)に、終濃度5%となるようにTween20を加え、塗布液を調製した。前記植物の花弁に、筆により前記塗布液を塗付した。花弁への塗布量は、一花あたり、0.2mL程度とした。
前記塗布液を塗布した植物を、内部を黒色に塗装した箱の中に入れ、外部からの自然光が入らない状態とした。そして、明視野条件下と、励起光照射条件下とにおいて、前記植物の撮影を行い、前記植物の花弁の色と蛍光とを確認した。光照射の条件は、明視野条件においては、白色蛍光灯下とした。励起光照射条件においては、長波長カットフィルター(SV0490、朝日分光社製)を装着した投光器(VBL-S 150、ヴァロール社製)を使用し、470nmに極大値を持つ励起光を照射した。カメラは、デジタルカメラ(Eos Kiss x7i、Canon社製)を使用した。また、明視野条件において、前記撮影は、前記光源からの青色光をカットする観賞用フィルター(SC-52、FUJIFILM社製)を、前記カメラのレンズに装着した状態と、装着していない状態の両方で、行った。
C末端にHisタグを付加したリコンビナントタンパク質(ブラックライト型、配列番号2)を、実施例1−1と同様にして、大腸菌(DH5a)に発現させた。そして、実施例1−1と同様にして、タンパク質液を得た。前記タンパク質液(0.12mg/ml)に、終濃度5%となるようにTween20を加え、塗布液を調製した。そして、実施例1−1と同様にして、前記植物に、前記塗布液を塗付した。
配列番号2:
MTTFKIESRIHGNLNGEKFELVGGGVGEEGRLEIEMKTKDKPLAFSPFLLTTCMGYGFYHFASFPKGIKNIYLHAATNGGYTNTRKEIYEDGGILEVNFRYTYEFNKIIGDVECIGHGFPSQSPIFKDTIVKSCPTVDLMLPMSGNIIASSYAYAFQLKDGSFYTAEVKNNIDFKNPIHESFSKSGPMFTHRRVEETLTKENLAIVEYQQVFNSAPRDM
前記実施例1−2で調製した前記タンパク質液(0.12mg/ml)に、終濃度5%となるようにTween20を加え、さらに、前記タンパク質液と等体積のデンプン糊(市販のもの)を加え、塗布液を調製した。この点以外は、実施例1−2と同様にして、前記植物への蛍光タンパク質液の塗布および撮影を行った。
植物の内部に蛍光タンパク質を吸収させ、光る植物が得られることを確認した。
実施例1−1において作製した前記タンパク質液(1.3mg/ml)に、5倍希釈となるようにmilliQ(登録商標)水を加え、吸収液を調製した。前記吸収液を、15mlのFalcon(登録商標)チューブに入れ、2日間、前記植物に、根から前記吸収液を吸収させた。これらの点以外は、実施例1−1と同様にして、前記植物の撮影を行った。
Claims (8)
- 植物の表面に塗布された蛍光タンパク質含有物を有し、
前記蛍光タンパク質含有物が、蛍光タンパク質およびデンプン糊を含むことを特徴とする光る植物。 - 前記植物が、花である、請求項1記載の光る植物。
- 前記蛍光タンパク質含有物が、前記蛍光タンパク質を発現した宿主の破砕物を含む、請求項1または2記載の光る植物。
- 前記蛍光タンパク質含有物が、前記蛍光タンパク質を発現した宿主の培養物を含む、請求項1または2記載の光る植物。
- 植物の表面に蛍光タンパク質含有物を塗布する工程を含み、
前記蛍光タンパク質含有物が、蛍光タンパク質およびデンプン糊を含むことを特徴とする光る植物の製造方法。 - 前記植物が、花である、請求項5記載の光る植物の製造方法。
- 前記蛍光タンパク質含有物が、前記蛍光タンパク質を発現した宿主の破砕物を含む、請求項5または6記載の光る植物の製造方法。
- 前記蛍光タンパク質含有物が、前記蛍光タンパク質を発現した宿主の培養物を含む、請求項5から7のいずれか一項に記載の光る植物の製造方法。
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