CN110062577B - 发光植物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种新型发光植物。这种发光植物的特征在于在植物的表面涂布有荧光蛋白，或使荧光蛋白吸收到植物的内部。该植物优选是花。

Description

发光植物

技术领域

本发明涉及发光植物。

背景技术

迄今为止，通过将荧光蛋白引入花中来制作发光花的技术已经被开发并且实现了(专利文献1)。然而，因为发光花使用了基因重组技术，由于担心对自然界的影响，一些国家对于栽培等进行了监管。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：特开2008-22817号公报

发明内容

技术问题

因此，作为使花发光的方法，例如，考虑了向植物涂布发荧光的有机合成荧光化合物来赋予花朵荧光的方法。然而，由于给花涂布的化合物是有机化合物，因此担心对自然界的影响。此外，当向生长中的花涂布有机合成化合物时，可能妨碍花的生长。

因此，本发明旨在提供一种环境和植物安全性高的新型发光植物。

技术手段

为了实现上述目的，本发明提供了一种发光植物，其包含：涂布于植物表面的荧光蛋白；或吸收到植物内部的荧光蛋白。

本发明还提供了一种发光植物的制造方法，所述方法包括以下步骤：将荧光蛋白涂布于植物表面；或使荧光蛋白吸收到植物内部。

发明的有益效果

根据本发明，例如，可以在不对植物使用基因重组技术的情况下得到发荧光的植物。另外，由于将荧光蛋白涂布于植物，例如，与涂布上述有机合成荧光化合物的情况相比，对植物的亲和性高，并且在可生物降解的荧光蛋白的情况下，消除了对残留性的担忧，因此对植物和环境的安全性高。

附图说明

[图1]图1显示了在本发明的实施例1-1中涂布荧光蛋白后的玫瑰的照片。

[图2]图2显示了在本发明的实施例1-1中涂布荧光蛋白后的蝴蝶兰的照片。

[图3]图3显示了在本发明的实施例1-2中涂布荧光蛋白后的玫瑰的照片。

[图4]图4显示了在本发明的实施例1-3中涂布荧光蛋白后的玫瑰的照片。

[图5]图5显示了在本发明的实施例1-3中涂布荧光蛋白后的蝴蝶兰的照片。

[图6]图6显示了在本发明的实施例2-1中吸收荧光蛋白后的玫瑰的照片。

具体实施方式

在本发明的发光植物中，例如，所述植物是花。

本发明的发光植物包含，例如，从根或茎吸收的荧光蛋白。

在本发明的发光植物中，例如，涂布于所述植物的表面的荧光蛋白是含有荧光蛋白的物质，或被所述植物吸收的荧光蛋白是含有荧光蛋白的物质，并且所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的匀浆物。

在本发明的发光植物中，例如，所述含有荧光蛋白的物质是通过从匀浆物中除去所述宿主的个体而获得的个体去除物。

在本发明的发光植物中，例如，涂布于所述植物的表面的荧光蛋白是含有荧光蛋白的物质，或被所述植物吸收的荧光蛋白是含有荧光蛋白的物质，并且所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的培养物。

在本发明的发光植物中，例如，所述含有荧光蛋白的物质是所述培养物的上清液。

在本发明的发光植物中，例如，所述宿主是微生物或病毒。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，所述植物是花。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，在所述吸收步骤中，使植物的根或茎与含有荧光蛋白的水接触，以使所述荧光蛋白从根或茎吸收。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，在所述涂布步骤中，将含有所述荧光蛋白的含有荧光蛋白的物质涂布于所述植物的表面，或者在所述吸收步骤中，使含有所述荧光蛋白的含有荧光蛋白的物质被所述植物吸收，并且所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的匀浆物。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，所述含有荧光蛋白的物质是通过从匀浆物中除去所述宿主的个体而获得的个体去除物。

本发明的发光植物的制造方法还包括，例如，用所述宿主不能通过的过滤器过滤所述匀浆物以获得所述个体去除物的步骤。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，在所述涂布步骤中，将含有所述荧光蛋白的含有荧光蛋白的物质涂布于所述植物的表面，或者在所述吸收步骤中，使含有所述荧光蛋白的含有荧光蛋白的物质被所述植物吸收，并且所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的培养物。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，所述含有荧光蛋白的物质是所述培养物的上清液。

本发明的发光植物的制造方法还包括，例如，从所述含有荧光蛋白的物质纯化所述荧光蛋白的步骤，其中在所述涂布步骤中，涂布纯化的荧光蛋白。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，在所述纯化步骤中，使用柱来纯化所述荧光蛋白。

在本发明的发光植物的制造方法中，例如，所述宿主是微生物或病毒。

本发明的发光植物的特征在于，如上所述，它包括涂布于植物表面的荧光蛋白或吸收到植物内部的荧光蛋白。在本发明中，其它构造和条件没有特别限制。关于本发明的发光植物的描述，可以参考后面描述的关于本发明发光植物的制造方法的描述。

在本发明的发光植物中，所述植物没有特别限制，其实例包括玫瑰、康乃馨、菊花、一年生满天星、非洲菊、百合和兰花。

在本发明的发光植物中，例如，荧光蛋白可以涂布于整株植物或植物的一部分。此外，在本发明的发光植物中，例如，荧光蛋白可被整株植物或植物的一部分吸收。在植物的一部分涂布荧光蛋白或植物的一部分吸收荧光蛋白的情况下，所述植物的一部分的实例包括花、叶、枝、果实、萼片、雌蕊和雄蕊。荧光蛋白的涂布或吸收可以在例如，培养期间或收获后进行。

在本发明的发光植物中，所述植物不具有，例如，编码荧光蛋白的基因。

在本发明的发光植物中，吸收的荧光蛋白存在于，例如，植物的脉管中。

在本发明中，所述荧光蛋白没有特别限制，其实例包括GFP(绿色荧光蛋白)、YFP(黄色荧光蛋白)、RFP(红色荧光蛋白)以及特开2008-22817号公报和下述参考文献1中描述的荧光蛋白。另外，所述荧光蛋白的实例包括蓝光型荧光蛋白和黑光型荧光蛋白。蓝光型荧光蛋白的实例包括eYGFP(增强的黄绿色荧光蛋白，登记号#LC21752)和EGFP(增强的绿色荧光蛋白)。黑光型荧光蛋白的实例包括eYGFPuv(增强的黄绿色荧光蛋白uv，登记号#LC217533)和GFPuv(绿色荧光蛋白uv)。例如，可以单独使用仅一种类型的荧光蛋白，或者可以组合使用它们中的两种以上类型。

参考文献1：Shimizu A等.Molecular evolution of versatile derivativesfrom a GFP-like protein in the marine copepod Chiridius poppei,PLoSOne.2017Jul 11；12(7)

所述荧光蛋白可以，例如，从表达所述荧光蛋白的宿主中获得。所述宿主是，例如，微生物或病毒。所述微生物是，例如，大肠杆菌。

在本发明中，所述荧光蛋白是例如纯化的荧光蛋白。所述荧光蛋白可以单独使用，或者可以使用含有所述荧光蛋白的组合物(含有荧光蛋白的物质)。

所述含有荧光蛋白的物质可以是，例如，表达所述荧光蛋白的宿主的培养物。当所述宿主中表达的所述荧光蛋白是细胞外蛋白时，所述含有荧光蛋白的物质可以是，例如，原样的培养物或通过从所述培养物中除去所述宿主个体而获得的上清液。另一方面，当在所述宿主中表达的所述荧光蛋白是细胞内蛋白质时，所述含有荧光蛋白的物质优选是，例如，所述宿主的匀浆物。所述荧光蛋白可以是，例如，原样的匀浆物，或者可以是通过从匀浆物中除去残存的宿主个体而获得的个体去除物。例如，不管所述含有荧光蛋白的物质是细胞内蛋白还是细胞外蛋白，优选除去所述宿主个体。可以通过，例如，用所述宿主个体不能通过的过滤器过滤所述培养物或匀浆物来除去所述宿主个体。通过以这种方式除去所述宿主个体，例如，可以防止使用基因重组技术表达荧光蛋白的宿主包含在所述含有荧光蛋白的物质中。因此，例如，即使当从重组宿主制备所述荧光蛋白时，也可以防止作为遗传修饰产物的宿主在所述发光植物的分发期间扩散或污染。

所述纯化的荧光蛋白可以通过，例如，对所述培养物、所述培养物的上清液、所述匀浆物等进行纯化处理而获得。所述纯化处理没有特别限制，并可以通过例如公知的蛋白质提取方法进行，并且其具体实例包括上述的去除所述宿主个体、盐析和柱纯化。所述纯化处理的组合、条件等没有特别限制，并可以根据所述荧光蛋白的种类、所述宿主的种类等适当确定。

所述荧光蛋白可以是液体状态，或者可以是固体状态，例如粉末。在前一种情况下，所述荧光蛋白的实例包括所述培养物、所述上清液和所述匀浆物。在后一种情况下，所述荧光蛋白的实例包括纯化的荧光蛋白和部分纯化的荧光蛋白。在将所述荧光蛋白涂布于所述植物或使所述荧光蛋白被所述植物吸收的情况下，所述荧光蛋白可以作为通过将所述荧光蛋白与溶剂等混合而获得的所述荧光蛋白的混合液(涂布液或吸收液)使用。所述荧光蛋白可以，例如，溶解或分散在所述溶剂中。所述溶剂没有特别限制，并且其实例包括磷酸缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液。

所述含有荧光蛋白的物质还可以包含例如添加剂，所述添加剂的实例包括表面活性剂和淀粉糊。所述表面活性剂可以是，例如，诸如吐温20的非离子表面活性剂。由于所述表面活性剂，例如，当涂布于植物时，可以防止所述植物表面上的所述含有荧光蛋白的物质被排斥，从而可以改善所述含有荧光蛋白的物质的附着性。据推测，这是因为所述含有荧光蛋白的物质和所述植物表面上的油成分由于所述表面活性剂而变亲密，以及所述表面活性剂破坏了植物表面上的细胞，使得所述含有荧光蛋白的物质容易被所述植物吸收。然而，本发明不限于这种推测。此外，由于所述淀粉糊，例如，所述含有荧光蛋白的物质可以充分防止所述荧光蛋白干燥，并且当涂布于所述植物时可以充分防止由于干燥引起的荧光褪色。

如上所述，本发明发光植物的制造方法的特征在于，它包括将荧光蛋白涂布于所述植物的表面或使荧光蛋白被吸收到所述植物的内部的步骤。在本发明中，其它构造和条件没有特别限制。关于本发明发光植物的制造方法的描述，例如，可以参考关于本发明的发光植物的描述。

在所述涂布步骤中，涂布于所述植物的荧光蛋白的量没有特别限制，并且可以根据例如植物的种类、要涂布所述荧光蛋白的所述植物的目标区域、所述荧光蛋白的种类等适当地确定。所述荧光蛋白的涂布量为例如每平方厘米0.01mg至1mg。

在所述涂布步骤中涂布所述荧光蛋白的方法没有特别限制，并且其实例包括用喷雾器等喷雾所述荧光蛋白、用刷子等涂布所述荧光蛋白、喷洒含有所述荧光蛋白的粉末和在含有所述荧光蛋白的液体中浸渍。

涂布液中所述荧光蛋白的含量没有特别限制。当所述涂布液含有所述添加剂时，所述添加剂与所述荧光蛋白的比率没有特别限制。作为具体实例，所述表面活性剂可以添加到1mg/ml的蛋白质的磷酸盐缓冲液溶液中，使其为例如1％w/v。所述淀粉糊可以添加到1mg/ml的蛋白质的磷酸缓冲液溶液中，使其为例如50％v/v。所述涂布液的条件没有特别限制，并且pH为，例如，7.4至8.0。

在所述吸收步骤中使所述荧光蛋白被吸收的方法没有特别限制，例如，所述吸收液可以从所述植物的根或茎吸收。使所述荧光蛋白吸收的期限没有特别限制，例如为1至2天或2天。

所述吸收液中所述荧光蛋白的含量没有特别限制。所述吸收液的条件没有特别限制，并且pH为，例如，7.4至8.0。

当在所述涂布步骤或所述吸收步骤中所述荧光蛋白以液体状态涂布于植物或被植物吸收时，例如，使用含有所述荧光蛋白的涂布液或吸收液。所述涂布液或所述吸收液可以是任何液体，只要它含有所述荧光蛋白并且是液态即可。所述涂布液或所述吸收液可以是，例如，上述的含有荧光蛋白的物质。当所述含有荧光蛋白的物质为液态时，例如，可以将其用作所述涂布液或所述吸收液，或者所述涂布液或所述吸收液可以通过将所述荧光蛋白或所述含有蛋白质的物质和任选的添加剂与溶剂混合来制备。

所述涂布液或所述吸收液中含有的所述荧光蛋白的种类没有特别限制，例如，所述涂布液或所述吸收液可以含有一种类型或两种以上类型的所述荧光蛋白。

实施例

以下描述本发明的实施例。然而，本发明不限于以下实施例。除非另有说明，否则基于这些方案使用市售试剂。

实施例1

考查了通过将荧光蛋白涂布于植物的表面而获得发光植物。

(实施例1-1)

(1)荧光蛋白液

通过常规方法在大肠杆菌(DH5a)中表达在C末端添加了His标签的重组蛋白(蓝光型，SEQ ID NO：1)，并从大肠杆菌的匀浆物中回收含有所述重组蛋白的上清液。将所述上清液经过亲和柱(Ni柱)以将所述上清液中的所述重组蛋白与所述柱子结合，所述重组蛋白用0.2mol/L咪唑洗脱，并回收含有所述重组蛋白的级分。接下来，将回收的级分经过凝胶过滤柱(PD10柱，GE healthcare)，用不含NaCl的磷酸缓冲液洗脱，并回收含有所述重组蛋白的级分作为纯化级分。该纯化的级分在以下步骤中用作蛋白液。

SEQ ID NO：1：

MTTFKIESRIHGNLNGEKFELVGGGVGEEGRLEIEMKTKDKPLAFSPFLLSHCMGYGFYHFASFPKGTKNIYLHAATNGGYTNTRKEIYEDGGILEVNFRYTYEFNKIIGDVECIGHGFPSQSPIFKDTIVKTCPTVDLMLPMSGNIIASSYAKAFQLKDGSFYTAEVKNNIDFKNPIHESFSKSGPMFTHRRVEETHTKENLAMVEYQQVFNSAPRDM

(2)植物

使用市售的白玫瑰和蝴蝶兰V3。

(3)涂布

将吐温20添加到所述蛋白液(1.3mg/ml)中以达到5％的终浓度，从而制备涂布液。通过刷子将所述涂布液涂布于植物的花瓣。花瓣的涂布量为每朵花约0.2mL。

(4)拍摄

将所述涂布液涂布的植物放入内部涂成黑色的箱子中，使得外部的自然光不能进入。然后，在明视野条件下和在激发光照射条件下拍摄植物，并检查植物花瓣的颜色和荧光。光照射的条件如下。在明视野条件下，在白色荧光灯下用光照射所述植物。在激发光照射条件下，使用配备有长波长截止滤光器(SV0490，Asahi Spectra Co.，Ltd.)的泛光灯(VBL-S150，Valolr Corporation)，用最大值为470nm的激发光照射所述植物。数字照相机(Eos Kiss x7i，Canon Inc.)用作相机。在明视野条件下，在照相机的镜头装有用于消减来自所述光源的蓝光的观赏用滤光器(SC-52，FUJIFILM Corporation)的状态和照相机的镜头未装有所述观赏用滤光器的状态这二者下进行拍摄。

结果显示在图1和2中。图1显示了所述涂布液涂布后的玫瑰的照片。在图1的(A)中，左上是在明视野(没有观赏用滤光器)和1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右上是在明视野(有观赏用滤光器)和1/3秒曝光时间的条件下拍摄的照片，左下是在激发光照射和1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右下是在激发光照射和1/3秒曝光时间的条件下拍摄的照片。在图1的(B)中，左上是在明视野(没有观赏用滤光器)和1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右上是在明视野且激发光照射(有观赏用滤光器)和1/4秒曝光时间的条件下拍摄的照片，左下是在激发光照射和1/8秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右下是在激发光照射和1/15秒曝光时间的条件下拍摄的照片。在每张照片中，右侧的玫瑰是花瓣用所述涂布液涂布的玫瑰(有涂布)，左侧的玫瑰是没有涂布所述涂布液的玫瑰(没有涂布)。

在图1的(A)中，在没有所述观赏用滤光器的明视野条件下拍摄的左上照片中，在有和没有涂布所述涂布液下，花瓣都呈现出非荧光的白色。在带有观赏用滤光器的明视野条件下拍摄的右上照片中，由于所述观赏用滤光器消减了来自所述光源的蓝光，在有和没有涂布所述涂布液的情况下，花瓣都呈现出非荧光的黄色。在激发光照射条件下拍摄的左下和右下照片中，没有被涂布的玫瑰在箱内的照片中不能被视觉识别，而有涂布的玫瑰的花瓣呈现绿色的荧光颜色。从这些结果，证实植物通过涂布所述荧光蛋白而发荧光。

在图1的(B)中，在没有观赏用滤光器的明视野条件下拍摄的左上照片，以及在激发光照射条件下拍摄的左下和右下照片显示与在图1的(A)中相同的结果。在有观赏用滤光器和激发光照射的明视野条件下拍摄的右上照片中，没有涂布的玫瑰的花瓣显示出如图1的(A)的右上照片中所示的非荧光黄色，而有涂布的玫瑰的花瓣呈现荧光黄色。从这些结果，证实了通过涂布所述荧光蛋白，所述植物即使在明视野中也发荧光。

图2显示了涂布所述涂布液后的蝴蝶兰的照片。在图2中，左上是在明视野(没有观赏用滤光器)和1/6秒曝光时间的条件下拍摄的照片。上中是在明视野(有观赏用滤光器)和1/4秒曝光时间的条件下拍摄的照片。右上是在激发光照射和2秒曝光时间的条件下拍摄的照片。左下是在激发光照射和1秒曝光时间的条件下拍摄的照片。下中是在激发光照射和1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片。在每张照片中，右列的花是已用所述涂布液涂布的花(有涂布)，左列的花是未涂布所述涂布液的花(没有涂布)。

在图2中，在没有所述滤光器的明视野条件下拍摄的左上照片中，在有和没有涂布所述涂布液下，花瓣都呈现出非荧光的白色。在有所述滤光器的明视野条件下拍摄的上中照片中，由于所述观赏用滤光器消减了来自所述光源的蓝光，在有和没有涂布所述涂布液的情况下，花瓣都呈现出非荧光的黄色。在激发光照射条件下拍摄的右上、左下和下中照片中，没有涂布的花在箱内的照片中不能被视觉识别，而有涂布的花的花瓣呈现绿色的荧光颜色。从这些结果，证实了通过涂布所述荧光蛋白，所述植物发荧光。

(实施例1-2)

在C-末端添加了His-标签的重组蛋白(黑光型，SEQ ID NO：2)以与实施例1-1中相同的方式在大肠杆菌(DH5a)中表达。然后，以与实施例1-1相同的方式获得蛋白液。将吐温20添加到所述蛋白液(0.12mg/ml)中使其达到5％的终浓度，从而制备涂布液。所述涂布液以与实施例1-1相同的方式涂布到所述植物上。

SEQ ID NO：2：

MTTFKIESRIHGNLNGEKFELVGGGVGEEGRLEIEMKTKDKPLAFSPFLLTTCMGYGFYHFASFPKGIKNIYLHAATNGGYTNTRKEIYEDGGILEVNFRYTYEFNKIIGDVECIGHGFPSQSPIFKDTIVKSCPTVDLMLPMSGNIIASSYAYAFQLKDGSFYTAEVKNNIDFKNPIHESFSKSGPMFTHRRVEETLTKENLAIVEYQQVFNSAPRDM

使用配备有可见光吸收滤光器(UL-360，OMG)的UV LED泛光灯(NS365-FLB-30WR，NITRIDE)作为光照射的光源。为了拍摄，使用与示例1-1中相同的相机，但镜头上没有装观赏用滤光器。除了这些点之外，以与实施例1-1中相同的方式拍摄所述植物。

结果在图3中显示。图3显示了涂布所述涂布液后的玫瑰的照片。在图3中，左上是在明视野和1/4秒曝光时间的条件下拍摄的照片，左下是在1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片，并且右下是在1/3秒曝光时间的条件下拍摄的照片。在每张照片中，右侧的玫瑰是花瓣用所述涂布液涂布的玫瑰(有涂布)，左侧的玫瑰花是没有涂布所述涂布液的玫瑰(没有涂布)。

在图3中，在明视野条件下拍摄的左上照片中，在有和没有涂布所述涂布液的情况下，花瓣都呈现出非荧光的白色。在激发光照射条件下拍摄的图3的左下和右下照片中，可以在视觉上识别出没有涂布的玫瑰，其中一部分花瓣呈现浅蓝色，但这被认为是底色，包含所述植物的极弱的内在荧光而不是荧光。相反，有涂布的玫瑰的花瓣呈现绿色荧光色。从这些结果，证实了通过涂布所述荧光蛋白，所述植物发荧光。

(实施例1-3)

将吐温20添加到在实施例1-2中制备的蛋白液(0.12mg/ml)使其达到5％的终浓度，并将等体积的淀粉糊(市售)添加到所述蛋白液中，从而制备涂布液。除了这一点之外，以与实施例1-2中相同的方式将所述荧光蛋白液涂布于所述植物上并进行拍摄。

结果在图4和5中显示。图4显示了所述涂布液涂布后的玫瑰的照片。在图4中，左上是在明视野和1/3秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右上是在1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片，左下是在1秒曝光时间的条件下拍摄的照片，以及右下是在2秒曝光时间的条件下拍摄的照片。在每张照片中，右侧的玫瑰是其花瓣用所述涂布液涂布的玫瑰(有涂布)，左侧的玫瑰花是没有涂布所述涂布液的玫瑰(没有涂布)。

在图4中，在明视野条件下拍摄的左上照片中，在有和没有涂布所述涂布液的情况下，花瓣都呈现出非荧光的白色。在激发光照射条件下拍摄的右上、左下和右下照片中，没有涂布的玫瑰可以被视觉识别出一部分花瓣呈现浅蓝色，这不是发荧光，并且在所述箱内的照片中无法视觉识别出荧光。相反，有涂布的玫瑰的花瓣呈现绿色荧光色。与使用只添加了表面活性剂的蛋白液的实施例1-2相比，使用除了所述表面活性剂之外还添加了淀粉糊剂的蛋白液的实施例1-3显示出更稳定和强烈的荧光。从这些结果，证实了通过使用有所述荧光蛋白的淀粉糊，可以更稳定地保持涂布于所述植物的荧光蛋白的荧光。

图5显示了所述涂布液涂布后的蝴蝶兰的照片。在图5中，左上是在明视野和1/6秒曝光时间的条件下拍摄的照片，上中是在4秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右上是在2秒曝光时间的条件下拍摄的照片，左下是在明视野和1/6秒曝光时间的条件下拍摄的照片，下中是在1秒曝光时间的条件下拍摄的照片，以及右下是在1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片。在每张照片中，右列的花是所述涂布液涂布的花(有涂布)，左列的花是未涂布所述涂布液的花(没有涂布)。

在图5中，在明视野条件下拍摄的左上和左下照片中，在有和没有涂布所述涂布液的情况下，花瓣都呈现出非荧光的白色。在激发光照射条件下拍摄的上中、右上、下中和右下照片中，没有涂布的花在箱内的照片中不能被视觉识别，而有涂布的花的花瓣呈现绿色的荧光颜色。从这些结果，证实了通过涂布所述荧光蛋白，植物发荧光。

实施例2

考查了通过使荧光蛋白吸收到植物的内部而获得发光植物。

(实施例2-1)

向实施例1-1中制备的蛋白液(1.3mg/ml)添加

水以稀释5倍，从而制备吸收液。将所述吸收液置于15ml

管中，使植物从根部吸收所述吸收液2天。除了这些点之外，以与实施例1-1中相同的方式拍摄所述植物。

结果在图6中显示。图6显示了吸收所述吸收液后的玫瑰的照片。在图6的(A)中，左上是在明视野(没有观赏用滤光器)和1/5秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右上是在明视野(有观赏用滤光器)和1/4秒曝光时间的条件下拍摄的照片，左下是在激发光照射和4秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右下是在激发光照射和2秒曝光时间的条件下拍摄的照片。在图6的(B)中，左上是在明视野(没有观赏用滤光器)和1/5秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右上是在明视野和激发光照射(有观赏用滤光器)和1/4秒曝光时间的条件下拍摄的照片，左下是在激发光照射和1秒曝光时间的条件下拍摄的照片，右下是在激发光照射和1/2秒曝光时间的条件下拍摄的照片。

在图6的(A)和(B)各自中，在没有所述滤光器的明视野条件下拍摄的左上照片中，花瓣呈现出非荧光的白色。在带有所述滤光器的明视野条件下拍摄的右上照片中，由于所述观赏用滤光器消减了来自所述光源的蓝光，花瓣呈现出非荧光的黄色。在激发光照射条件下拍摄左下和右下照片中，花瓣呈现绿色荧光色。从这些结果，证实了通过吸收所述荧光蛋白，植物发荧光。

虽然以上参考了说明性示例实施方式和实施例描述了本发明，但是本发明绝不限于此。在不脱离本发明的范围的情况下，可以在本发明的构造和细节中做出对本领域技术人员显而易见的各种改变和变更。

本申请要求2016年9月6日提交的日本专利申请号2016-173930的优先权。所述日本专利申请的全部主题通过引用并入本文。

产业实用性

根据本发明的发光植物，例如，可以在不对植物使用基因重组技术的情况下获得发荧光的植物。另外，由于将荧光蛋白涂布于植物，例如，与前述涂布有机合成荧光化合物的情况相比，对植物的亲和性更高并且对植物和环境的安全性也更高。因此，本发明在园艺等领域中极为有用。

序列表

<110> 日本电气方案创新株式会社（NEC Solution Innovators, Ltd.）

<120> 发光植物

<130> 1010051266

<150> JP 2016-173930

<151> 2016-09-06

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 荧光蛋白

<400> 1

Met Thr Thr Phe Lys Ile Glu Ser Arg Ile His Gly Asn Leu Asn Gly

1 5 10 15

Glu Lys Phe Glu Leu Val Gly Gly Gly Val Gly Glu Glu Gly Arg Leu

20 25 30

Glu Ile Glu Met Lys Thr Lys Asp Lys Pro Leu Ala Phe Ser Pro Phe

35 40 45

Leu Leu Ser His Cys Met Gly Tyr Gly Phe Tyr His Phe Ala Ser Phe

50 55 60

Pro Lys Gly Thr Lys Asn Ile Tyr Leu His Ala Ala Thr Asn Gly Gly

65 70 75 80

Tyr Thr Asn Thr Arg Lys Glu Ile Tyr Glu Asp Gly Gly Ile Leu Glu

85 90 95

Val Asn Phe Arg Tyr Thr Tyr Glu Phe Asn Lys Ile Ile Gly Asp Val

100 105 110

Glu Cys Ile Gly His Gly Phe Pro Ser Gln Ser Pro Ile Phe Lys Asp

115 120 125

Thr Ile Val Lys Thr Cys Pro Thr Val Asp Leu Met Leu Pro Met Ser

130 135 140

Gly Asn Ile Ile Ala Ser Ser Tyr Ala Lys Ala Phe Gln Leu Lys Asp

145 150 155 160

Gly Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Val Lys Asn Asn Ile Asp Phe Lys Asn

165 170 175

Pro Ile His Glu Ser Phe Ser Lys Ser Gly Pro Met Phe Thr His Arg

180 185 190

Arg Val Glu Glu Thr His Thr Lys Glu Asn Leu Ala Met Val Glu Tyr

195 200 205

Gln Gln Val Phe Asn Ser Ala Pro Arg Asp Met

210 215

<210> 2

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 荧光蛋白

<400> 2

Met Thr Thr Phe Lys Ile Glu Ser Arg Ile His Gly Asn Leu Asn Gly

1 5 10 15

Glu Lys Phe Glu Leu Val Gly Gly Gly Val Gly Glu Glu Gly Arg Leu

20 25 30

Glu Ile Glu Met Lys Thr Lys Asp Lys Pro Leu Ala Phe Ser Pro Phe

35 40 45

Leu Leu Thr Thr Cys Met Gly Tyr Gly Phe Tyr His Phe Ala Ser Phe

50 55 60

Pro Lys Gly Ile Lys Asn Ile Tyr Leu His Ala Ala Thr Asn Gly Gly

65 70 75 80

Tyr Thr Asn Thr Arg Lys Glu Ile Tyr Glu Asp Gly Gly Ile Leu Glu

85 90 95

Val Asn Phe Arg Tyr Thr Tyr Glu Phe Asn Lys Ile Ile Gly Asp Val

100 105 110

Glu Cys Ile Gly His Gly Phe Pro Ser Gln Ser Pro Ile Phe Lys Asp

115 120 125

Thr Ile Val Lys Ser Cys Pro Thr Val Asp Leu Met Leu Pro Met Ser

130 135 140

Gly Asn Ile Ile Ala Ser Ser Tyr Ala Tyr Ala Phe Gln Leu Lys Asp

145 150 155 160

Gly Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Val Lys Asn Asn Ile Asp Phe Lys Asn

165 170 175

Pro Ile His Glu Ser Phe Ser Lys Ser Gly Pro Met Phe Thr His Arg

180 185 190

Arg Val Glu Glu Thr Leu Thr Lys Glu Asn Leu Ala Ile Val Glu Tyr

195 200 205

Gln Gln Val Phe Asn Ser Ala Pro Arg Asp Met

210 215

Claims (8)

1.一种发光植物，其包含：

涂布于植物的表面的含有荧光蛋白的物质，

其中所述含有荧光蛋白的物质包括荧光蛋白和淀粉糊。

2.根据权利要求1所述的发光植物，其中

所述植物是花。

3.根据权利要求1或2所述的发光植物，其中

所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的匀浆物。

4.根据权利要求1或2所述的发光植物，其中

所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的培养物。

5.一种发光植物的制造方法，所述方法包括以下步骤：

将含有荧光蛋白的物质涂布于植物的表面，

其中所述含有荧光蛋白的物质包括荧光蛋白和淀粉糊。

6.根据权利要求5所述的一种发光植物的制造方法，其中

所述植物是花。

7.根据权利要求5或6所述的一种发光植物的制造方法，其中

所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的匀浆物。

8.根据权利要求5或6所述的一种发光植物的制造方法，其中

所述含有荧光蛋白的物质是表达所述荧光蛋白的宿主的培养物。

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