JP6772138B2 - 細胞内のBoNT/Eの生物学的活性を決定するための手段及び方法 - Google Patents
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Description
a)BoNT/E中毒の影響を受けやすい細胞を、BoNT/Eと一緒に、当該BoNT/Eが、その生物学的活性を示すことを許容する時間及び条件下で、インキュベートすることと、
b)当該細胞を固定し、かつ任意に、界面活性剤で当該細胞を透過化することと、
c)当該細胞を、切断されていない、及びBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対して特異的に結合する少なくとも第1の捕捉抗体、ならびにBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対して特異的に結合する少なくとも第2の捕捉抗体と、切断されていない、及びBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対する前記第1の捕捉抗体の結合、ならびにBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対する当該第2の捕捉抗体の結合を許容する条件下で、接触させることであって、当該第2の捕捉抗体が、本願発明のポリクローナルまたはモノクローナル抗体である、接触させることと、
d)当該細胞を、当該第1の捕捉抗体に対して特異的に結合する少なくとも第1の検出抗体と、当該第1の捕捉抗体に対する当該第1の検出抗体の結合を許容する条件下で接触させ、その結果、第1の検出複合体を形成し、かつ当該第2の捕捉抗体に対して特異的に結合する少なくとも第2の検出抗体と、当該第2の捕捉抗体に対する当該第2の検出抗体の結合を許容する条件下で接触させ、その結果、第2の検出複合体を形成することであって、当該第1の検出抗体が、当該第2の検出抗体とは異なる、形成することと、
e)ステップd)の当該第1の及び第2の検出複合体の量を決定することと、及び
f)第2の検出複合体の手段によって、当該細胞内でのBoNT/Eで切断されたSNAP−25の量を算出し、それによって、当該細胞内での当該BoNT/Eの生物学的活性を決定することと、を含む方法を提供する。
a)配列番号10、配列番号12、または、配列番号14に示されるアミノ酸配列、及び
b)配列番号10、配列番号12、または、配列番号14に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、または、100%の配列同一性を有するアミノ酸配列、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
a)第1の捕捉抗体、好ましくは、本願発明のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体である第2の捕捉抗体、第1の検出抗体、及び第2の検出抗体の配合であって、本願発明の方法を実施することを許容する、配合と、
b)a)に記載の当該配合によって決定された第2の検出複合体の量に基づいて、BoNT/Eで切断されたSNAP−25の量を算出するための手段と、
c)本願発明の方法を実施するための指示書と、を含むキット、にも関する。
以下、本発明の実施形態を示す。
(1)BoNT/Eで切断されたSNAP−25に対して特異的に結合するポリクローナルまたはモノクローナル抗体。
(2)前記抗体が、配列番号1(「C−NEIDTQNRQIDR」)または配列番号2(「NEIDTQNRQIDR」)に示されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるエピトープに対して特異的に結合する、(1)に記載のポリクローナルまたはモノクローナル抗体。
(3)前記抗体が、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH、Inhoffenstraβe 7B,38124 Braunschweig,Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32−7−1、3614−000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたCDR−L1(配列番号15)、CDR−L2(配列番号16)、CDR−L3(配列番号17)、CDR−H1(配列番号18)、CDR−H2(配列番号19)、及びCDR−H3(配列番号20)からなる群から選択される相補性決定領域(CDR)のうちの少なくとも1つを含む、(1)または(2)に記載のポリクローナルまたはモノクローナル抗体。
(4)前記抗体が、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH、Inhoffenstraβe 7B,38124 Braunschweig,Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32−7−1、3614−000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたVH領域(配列番号22)及び/またはVL領域(配列番号21)を含む、(1)〜(3)のいずれか一に記載のポリクローナルまたはモノクローナル抗体。
(5)細胞内でのBoNT/Eの生物学的活性を直接的に決定する方法であって、
a)BoNT/E中毒の影響を受けやすい細胞を、BoNT/Eと一緒に、前記BoNT/Eが、その生物学的活性を示すことを許容する時間及び条件下で、インキュベートすることと、
b)前記細胞を固定し、かつ任意に、界面活性剤で前記細胞を透過化することと、
c)前記細胞を、切断されていない、及びBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対して特異的に結合する少なくとも第1の捕捉抗体、ならびにBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対して特異的に結合する少なくとも第2の捕捉抗体と、切断されていない、及びBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対する前記第1の捕捉抗体の結合、ならびにBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対する前記第2の捕捉抗体の結合を許容する条件下で、接触させることであって、前記第2の捕捉抗体が、(1)〜(4)のいずれか一に記載のポリクローナルまたはモノクローナル抗体である、接触させることと、
d)前記細胞を、前記第1の捕捉抗体に対して特異的に結合する少なくとも第1の検出抗体と、前記第1の捕捉抗体に対する前記第1の検出抗体の結合を許容する条件下で接触させ、その結果、第1の検出複合体を形成し、かつ前記第2の捕捉抗体に対して特異的に結合する少なくとも第2の検出抗体と、前記第2の捕捉抗体に対する前記第2の検出抗体の結合を許容する条件下で接触させ、その結果、第2の検出複合体を形成することであって、前記第1の検出抗体が、前記第2の検出抗体とは異なる、形成することと、
e)ステップd)の前記第1及び第2の検出複合体の量を決定することと、
f)前記第2の検出複合体によって、前記細胞内でのBoNT/Eで切断されたSNAP−25の量を算出し、
それによって、前記細胞内での前記BoNT/Eの生物学的活性を決定することと、
を含む、方法。
(6)前記BoNT/Eが、
a)配列番号10、配列番号12、または配列番号14に示されるアミノ酸配列、及び
b)配列番号10、配列番号12、または配列番号14に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、(5)に記載の方法。
(7)前記細胞が、初代神経細胞、神経細胞に分化することができる神経芽腫細胞、P19細胞などの腫瘍細胞、または人工多能性幹細胞(IPS)由来ニューロンからなる群から選択される神経細胞または神経分化細胞である、(5)または(6)に記載の方法。
(8)前記細胞の固定が、メタノール、エタノール、アセトン、ホルムアルデヒド、またはこれらの混合物からなる群から選択される固化剤の添加によって行われる、(5)〜(7)のいずれか一に記載の方法。
(9)前記切断されていない、及びBoNT/Eで切断されたSNAP−25に対して特異的に結合する前記第1の捕捉抗体が、ウサギポリクローナル抗SNAP−25抗体S9684、ウサギポリクローナル抗SNAP25抗体PA5−19708(Pierce Antibodies)、ウサギモノクローナル抗SNAP−25抗体ab108990(Abcam)、またはウサギポリクローナル抗SNAP−25抗体PA5−19701(Pierce Antibodies)である、(5)〜(8)のいずれか一に記載の方法。
(10)前記第1の検出抗体が、アルカリホスファターゼ(AP)結合抗体、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合抗体、または蛍光色素に結合した抗体である、(5)〜(9)のいずれか一に記載の方法。
(11)前記第2の検出抗体が、アルカリホスファターゼ(AP)結合抗体、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合抗体、グルコースオキシダーゼ結合抗体、チロシナーゼ結合抗体、または、β−ガラクトシダーゼ抗体である、(5)〜(10)のいずれか一に記載の方法。
(12)前記HRP基質が、Amplex UltraRed、10−アセチル−3,7−ジヒドロキシフェノキサジン(ADHP)、または3−(4−ヒドロキシフェニル)プロピオン酸(HPPA)である、(5)〜(11)のいずれか一に記載の方法。
(13)前記AP基質が、6,8−ジフルオロ−4−メチルウンベリフェリルホスフェート(DiFMUP)などの4−メチルウンベリフェリルホスフェート誘導体、または、フルオレセインジホスフェート(FDP)である、(5)〜(12)のいずれか一に記載の方法。
(14)(5)〜(13)のいずれか一に記載の方法を実施するためのキットであって、
a)第1の捕捉抗体、(1)〜(4)のいずれか一に記載の抗体である第2の捕捉抗体、第1の検出抗体、及び第2の検出抗体の配合であって、(5)〜(13)のいずれか一に記載の方法を実施することを許容する、配合と、
b)a)に記載の前記配合によって決定された前記第1及び第2の検出複合体の量に基づいて、BoNT/Eで切断されたSNAP−25の量を算出するための手段と、
c)前記方法を実施するための指示書と、
を含む、キット。
BoNT/Eで切断した基質SNAP−25の開裂部位に対して特異的に結合するマウスモノクローナル抗体を、標準的なハイブリドーマ技術を使用して生成した。この目的のために、Balb/cマウス(雌、8週齢)を、ペプチド「C−NEIDTQNRQIDR−OH」(配列番号1)で免疫処置した。当該N末端システイン残基は、SNAP−25 アミノ酸配列に由来するものではないが、当該ペプチドをキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)に連結するために導入された。ハイブリドーマ細胞を、マウス脾臓細胞とドイツ微生物及び細胞培養物保存機関(DSMZ GmbH、Braunschweig、ACC146)から購入した骨髄腫細胞系SP2/0−Ag14(SP2/0)との融合によって得た、Hemmerlein et al.,Molecular Cancer 2006,5,41も参照されたい。BoNT/Eで切断した基質SNAP−25の開裂部位に対して特異的に結合する抗体を、ELISAでスクリーニングした。得られたクローンは、BoNT/Eで切断されたSNAP−25に対する特異性及び親和性に関して選択された。陰性対照として、切断されていないSNAP−25206にクローンが結合しないことを試験した。その結果、ハイブリドーマpCNEI 32−7−1、3614−000によって産生された当該マウスモノクローナル抗体は、BoNT/Eで切断されたSNAP−25に対して非常に特異的であり、ELISA及びウェスターンブロットにおいてSNAP−25206に対して検出可能な交差反応性を示さなかった。当該モノクローナル抗体を産生する当該ハイブリドーマ細胞株pCNEI 32−7−1、3614−000は、本出願人によって、ブダペスト条約に基づいて、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,Inhoffenstraβe 7B,38124 Braunschweig,Germany)に寄託された。このモノクローナル抗体のCDR−H1、CDR−H2、及びCDR−H3のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号18、19及び20に示している。このモノクローナル抗体のCDR−L1、CDR−L2、及びCDR−L3のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号15、16及び17に示している。このモノクローナル抗体のVH領域のアミノ酸配列は、配列番号22に示しており、また、このモノクローナル抗体のVL領域のアミノ酸配列は、配列番号21に示している。
細胞の固定
1.培地/毒素溶液を除去する。氷冷メタノール(−20℃)100μl/ウェルを添加し、−20℃で、20分間、インキュベートする。
注記:その後のすべてのステップを室温で行う。
1.メタノール溶液を除去し、PBS緩衝液100μl/ウェルを添加する。長期保存(>1日)のためには、PBS緩衝液300μl/ウェルを添加し、パラフィルムでプレートを封入するべきである。プレートは、冷蔵庫に保管すべきである。
2.PBS緩衝液を除去し、PBS緩衝液300μl/ウェルで細胞を3回洗浄する。各ステップは、穏やかに振盪しながら1分間実施されるべきである。
3.PBS緩衝液を除去し、失活緩衝液100μl/ウェルを添加し、穏やかに振盪しながら20分間インキュベートする。
4.失活緩衝液を除去し、PBS緩衝液300μl/ウェルで穏やかに振盪しながら細胞を3分間、1回、洗浄する。
5.PBS緩衝液を除去し、ブロッキング緩衝液200μl/ウェルを添加し、穏やかに振盪しながら1時間インキュベートする。
6.ブロッキング緩衝液を除去し、各ウェルに対して100μlの一次抗体混合物(抗体希釈物を含むブロッキング緩衝液)を加える。穏やかに振盪しながら、終夜(16〜18時間)、インキュベートする。当該細胞は、2つの一次抗体、BoNT/Eで切断されたSNAP−25及びSNAP−25を認識するポリクローナルウサギ抗体(標準化のためにSNAP−25の総量を決定するための抗体)を、同時にインキュベートする。
7.一次抗体混合物を除去し、PBS緩衝液300μlで細胞を4回洗浄する。各ステップは、穏やかに振盪しながら3分間実施されるべきである。
9.PBS緩衝液を除去し、各ウェルに対して100μlの二次抗体混合物:HRPが結合した抗マウス二次抗体及びAPが結合した抗ウサギ二次抗体(抗体希釈物を含むブロッキング緩衝液)を添加し、穏やかに振盪しながら2.5〜3時間インキュベートする。
10.二次抗体混合物を除去し、HEPES緩衝液300μl/ウェルで細胞を6回洗浄する。各洗浄ステップは、穏やかに振盪しながら3分間実施されるべきである。
11.プレートからHEPES緩衝液を除去し、各ウェルに75μlの西洋ワサビペルオキシダーゼ用発蛍光性基質(HRP基質)を添加する。穏やかに振盪しながら50分間インキュベートする。直射光からプレートを保護する。
12.各ウェルに75μlのアルカリホスファターゼ用発蛍光性基質(AP基質)を添加し、穏やかに振盪しながらさらに50分間インキュベートする。直射光からプレートを保護する
13.蛍光プレートリーダーで、プレートを読み込む。
540nmで励起、600nmで放射。
360nmで励起、450nmで放射。
標準化のために、BoNT/Eで切断されたSNAP−25のRFU値(600nmでの蛍光)を、各ウェルのすべてのSNAP−25のRFU(450nm)に対して標準化を行う。線図において、RFUをさらに明確に図示するために、以下の式を使用して、すべての値に1000の係数を掛ける:
PBS緩衝液(10mM):
リン酸緩衝生理食塩水(Sigma、#P5368)(pH7.4)
失活緩衝液:
0.6%H2O2を含む10mM PBS緩衝液(pH7.4)
ブロッキング緩衝液:
2%BSAを含む10mM PBS緩衝液(pH7.4)
HEPES緩衝液:
50mM HEPES(pH7.4)
HRP基質:
50mM HEPES(pH7.4)
0.007%H2O2
150μM Amplex UltraRed
AP基質:
25mM ジエタノールアミン(pH9.8)
2mM MgCl2
100μM DiFMUP
Claims (17)
- BoNT/Eの生物学的活性を測定するアッセイのための、BoNT/Eで切断されたSNAP-25に対して特異的に結合するモノクローナル抗体の使用であって、前記抗体が、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstraβe 7 B, 38124 Braunschweig, Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32-7-1, 3614-000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたCDR-L1(配列番号15)、CDR-L2(配列番号16)、CDR-L3(配列番号17)、CDR-H1(配列番号18)、CDR-H2(配列番号19)及びCDR-H3(配列番号20)の相補性決定領域(CDR)を含む、前記使用。
- 前記抗体が、配列番号1(「C-NEIDTQNRQIDR」)又は配列番号2(「NEIDTQNRQIDR」)に示されるアミノ酸配列を有するペプチドから成るエピトープに対して特異的に結合する、請求項1記載の使用。
- 前記抗体が、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstraβe 7 B, 38124 Braunschweig, Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32-7-1, 3614-000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたVH領域(配列番号22)及びVL領域(配列番号21)を含む、請求項1又は2記載の使用。
- 細胞内でのBoNT/Eの生物学的活性を直接的に決定する方法であって、
a)BoNT/E中毒の影響を受けやすい細胞を、BoNT/Eと一緒に、前記BoNT/Eが、その生物学的活性を示すことを許容する時間及び条件下で、インキュベートすることと、
b)前記細胞を固定し、且つ任意に、界面活性剤で前記細胞を透過化することと、
c)前記細胞を、切断されていない及びBoNT/Eで切断されたSNAP-25に対して特異的に結合する少なくとも第1の捕捉抗体、並びにBoNT/Eで切断されたSNAP-25に対して特異的に結合する少なくとも第2の捕捉抗体と、切断されていない及びBoNT/Eで切断されたSNAP-25に対する第1の捕捉抗体の結合、並びにBoNT/Eで切断されたSNAP-25に対する第2の捕捉抗体の結合を許容する条件下で、接触させることであって、第2の捕捉抗体が、BoNT/Eで切断されたSNAP-25に対して特異的に結合するモノクローナル抗体であって、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstraβe 7 B, 38124 Braunschweig, Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32-7-1, 3614-000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたCDR-L1(配列番号15)、CDR-L2(配列番号16)、CDR-L3(配列番号17)、CDR-H1(配列番号18)、CDR-H2(配列番号19)及びCDR-H3(配列番号20)の相補性決定領域(CDR)を含む、前記モノクローナル抗体である、接触させることと、
d)前記細胞を、第1の捕捉抗体に対して特異的に結合する少なくとも第1の検出抗体と、第1の捕捉抗体に対する第1の検出抗体の結合を許容する条件下で接触させ、その結果、第1の検出複合体を形成し、且つ第2の捕捉抗体に対して特異的に結合する少なくとも第2の検出抗体と、第2の捕捉抗体に対する第2の検出抗体の結合を許容する条件下で接触させ、その結果、第2の検出複合体を形成することであって、第1の検出抗体が、第2の検出抗体とは異なる、形成することと、
e)ステップd)の第1及び第2の検出複合体の量を決定することと、
f)第2の検出複合体によって、前記細胞内でのBoNT/Eで切断されたSNAP-25の量を算出し、
それによって、前記細胞内での前記BoNT/Eの生物学的活性を決定することと、
を含む、前記方法。 - 前記BoNT/Eが、
a)配列番号10、配列番号12又は配列番号14に示されるアミノ酸配列、及び、
b)配列番号10、配列番号12又は配列番号14に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%の配列同一性を有するアミノ酸配列、
から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項4記載の方法。 - 前記細胞が、初代神経細胞、神経細胞に分化することができる神経芽腫細胞、P19細胞などの腫瘍細胞、又は人工多能性幹細胞(IPS)由来ニューロンから成る群より選択される神経細胞又は神経分化細胞である、請求項4又は5記載の方法。
- 前記細胞の固定が、メタノール、エタノール、アセトン、ホルムアルデヒド又はこれらの混合物から成る群より選択される固化剤の添加によって行われる、請求項4〜6のいずれか1項記載の方法。
- 切断されていない及びBoNT/Eで切断されたSNAP-25に対して特異的に結合する第1の捕捉抗体が、ウサギポリクローナル抗SNAP-25抗体S9684、ウサギポリクローナル抗SNAP25抗体PA5-19708(Pierce Antibodies)、ウサギモノクローナル抗SNAP-25抗体ab108990(Abcam)又はウサギポリクローナル抗SNAP-25抗体PA5-19701(Pierce Antibodies)である、請求項4〜7のいずれか1項記載の方法。
- 前記第2の捕捉抗体が、配列番号1(「C-NEIDTQNRQIDR」)又は配列番号2(「NEIDTQNRQIDR」)に示されるアミノ酸配列を有するペプチドから成るエピトープに対して特異的に結合する、請求項4〜8のいずれか1項記載の方法。
- 前記第2の捕捉抗体が、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstraβe 7 B, 38124 Braunschweig, Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32-7-1, 3614-000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたVH領域(配列番号22)及びVL領域(配列番号21)を含む、請求項4〜9のいずれか1項記載の方法。
- 第1の検出抗体が、アルカリホスファターゼ(AP)結合抗体、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合抗体又は蛍光色素に結合した抗体である、請求項4〜10のいずれか1項記載の方法。
- 第2の検出抗体が、アルカリホスファターゼ(AP)結合抗体、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合抗体、グルコースオキシダーゼ結合抗体、チロシナーゼ結合抗体又はβ-ガラクトシダーゼ抗体である、請求項4〜11のいずれか1項記載の方法。
- 前記HRP基質が、Amplex UltraRed、10-アセチル-3,7-ジヒドロキシフェノキサジン(ADHP)又は3-(4-ヒドロキシフェニル)プロピオン酸(HPPA)である、請求項11又は12記載の方法。
- 前記AP基質が、6,8-ジフルオロ-4-メチルウンベリフェリルホスフェート(DiFMUP)などの4-メチルウンベリフェリルホスフェート誘導体又はフルオレセインジホスフェート(FDP)である、請求項11又は12記載の方法。
- 請求項4〜14のいずれか1項記載の方法を実施するためのキットであって、
a)第1の捕捉抗体、第2の捕捉抗体、第1の検出抗体及び第2の検出抗体の配合であって、前記第2の捕捉抗体が、BoNT/Eで切断されたSNAP-25に対して特異的に結合するモノクローナル抗体であって、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstraβe 7 B, 38124 Braunschweig, Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32-7-1, 3614-000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたCDR-L1(配列番号15)、CDR-L2(配列番号16)、CDR-L3(配列番号17)、CDR-H1(配列番号18)、CDR-H2(配列番号19)及びCDR-H3(配列番号20)の相補性決定領域(CDR)を含む、前記モノクローナル抗体であり、且つ、前記配合が請求項4〜14のいずれか1項記載の方法を実施することを許容する、前記配合と、
b)a)に記載の配合によって決定された第1及び第2の検出複合体の量に基づいて、BoNT/Eで切断されたSNAP-25の量を算出するための手段と、
c)前記方法を実施するための指示書と、
を含む、前記キット。 - 前記第2の捕捉抗体が、配列番号1(「C-NEIDTQNRQIDR」)又は配列番号2(「NEIDTQNRQIDR」)に示されるアミノ酸配列を有するペプチドから成るエピトープに対して特異的に結合する、請求項15記載のキット。
- 前記第2の捕捉抗体が、2014年12月17日に、受託番号DSM ACC3261で、DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstraβe 7 B, 38124 Braunschweig, Germany)に寄託されたハイブリドーマ細胞株pCNEI 32-7-1, 3614-000によって産生されたモノクローナル抗体に含まれていたVH領域(配列番号22)及びVL領域(配列番号21)を含む、請求項15又は16記載のキット。
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