JP6766253B2 - 新規ビフィドバクテリウム属細菌 - Google Patents
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Description
また、本発明は、前記ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を含有する飲食品組成物である。
さらに、本発明により、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分とするオピオイドペプチド分解剤又はオピオイドペプチド分解用組成物、オピオイドペプチド分解用医薬組成物、及びオピオイドペプチド分解用飲食品組成物が提供される。本発明にかかるオピオイドペプチド分解剤又はオピオイドペプチド分解用組成物、オピオイドペプチド分解用医薬組成物、及びオピオイドペプチド分解用飲食品組成物は、オピオイドペプチドを効率的に分解することができるため、オピオイドペプチドを体内に摂取した際に、当該オピオイドペプチドが分解されずに消化管から吸収されることを抑制することができる。
また、本発明により前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分とする非コラーゲン性糖タンパク質分解剤又は非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物、非コラーゲン性糖タンパク質分解用医薬組成物、及び非コラーゲン性糖タンパク質分解用飲食品組成物が提供される。本発明にかかる非コラーゲン性糖タンパク質分解剤又は非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物、非コラーゲン性糖タンパク質分解用医薬組成物、及び非コラーゲン性糖タンパク質分解用飲食品組成物は、非コラーゲン性糖タンパク質を効率的に分解することができる。
本発明の第一の態様は、ビフィドバクテリウム・ビフィダム又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属する新規ビフィドバクテリウム属細菌に係る発明であり、具体的には、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870(NITE BP−02433)又はビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110(NITE BP−02430)である。以下、かかる5種類の新規ビフィドバクテリウム属細菌を包括して「本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌」と記載することがある。なお、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムは、単にビフィドバクテリウム・ロンガムと表記される場合もある。
その結果、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092は、ビフィドバクテリウム・ビフィダムの基準株であるKCTC3202と前記塩基配列において99.1%の相同性があり、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属するビフィドバクテリウム属細菌であることが確認された。
また、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319は、ビフィドバクテリウム・ビフィダムの基準株であるKCTC3202と前記塩基配列において99.0%の相同性があり、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属するビフィドバクテリウム属細菌であることが確認された。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868は、ビフィドバクテリウム・ビフィダムの基準株であるKCTC3202と前記塩基配列において99.1%の相同性があり、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属するビフィドバクテリウム属細菌であることが確認された。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870は、ビフィドバクテリウム・ビフィダムの基準株であるKCTC3202と前記塩基配列において99.1%の相同性があり、ビフィドバクテリウム・ビフィダムに属するビフィドバクテリウム属細菌であることが確認された。
さらに、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムの基準株であるKCTC3128と前記塩基配列において98.8%の相同性があり、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに属するビフィドバクテリウム属細菌であることが確認された。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319は、平成29年2月21日に独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター(郵便番号:292-0818、住所:千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室)に、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされ、受託番号NITE BP−02431が付与されている。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868は、平成29年2月21日に独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター(郵便番号:292-0818、住所:千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室)に、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされ、受託番号NITE BP−02432が付与されている。
ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870は、平成29年2月21日に独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター(郵便番号:292-0818、住所:千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室)に、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされ、受託番号NITE BP−02433が付与されている。
ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110は、平成29年2月21日に独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター(郵便番号:292-0818、住所:千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室)に、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされ、受託番号NITE BP−02430が付与されている。
また、本発明の別の側面は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌を添加する工程を含む前記組成物の製造方法である。すなわち、当該製造方法は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌を食品原料に添加する工程を含む、飲食品組成物の製造方法である。また、当該製造方法は、新規ビフィドバクテリウム属細菌を基剤と混合する工程を含む、医薬組成物の製造方法でもある。また、当該製造方法においては、新規ビフィドバクテリウム属細菌を培養し濃縮又は凍結乾燥した後に添加しても良く、新規ビフィドバクテリウム属細菌を添加した後に培養する工程を含んでいても良い。
本発明において、オピオイドペプチド分解剤は、主に食品に由来するオピオイドペプチドを分解するために用いられるものであって、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含むものである。
なお、本発明のオピオイドペプチド分解剤は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含むものであれば、他の成分をも含むことを妨げるものではない。すなわち、本発明のオピオイドペプチド分解剤には、オピオイドペプチド分解用組成物の態様も含まれる。よって、本発明の一態様は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含む、オピオイドペプチド分解用組成物である。
かかるオピオイドペプチドは特定の酵素により分解されることが知られており、具体的にはジペプチジルペプチダーゼ−4(Dipeptidyl Peptidase−4:DPP−4)等が知られている。ジペプチジルアミノペプチダーゼは、タンパク質又はペプチドのアミノ基側末端からジペプチドを切り出す作用を有するエキソペプチダーゼであり、カソモルフィン類を分解する活性を有する酵素として知られている(G. Puschel et al., Eur. J. Biochem., 126(2), pp.359-365, 1982)。
なお、本明細書において、「DPP−4活性」とは、DPP−4に特異的な基質のタンパク質又はペプチドのアミノ基側末端のジペプチドを切断して前記基質を分解するエキソペプチダーゼ活性を示すことを意味する。DPP−4に特異的な基質としては、アミノ基側末端から2番目にプロリン又はアラニン残基を有するタンパク質やペプチドが挙げられる。本発明において、ビフィドバクテリウム属細菌のDPP−4活性は、例えば以下の方法により確認することができる。
具体的には、ビフィドバクテリウム属細菌の培養物から菌体を分離してPBS溶液に懸濁して懸濁液を調製し、当該懸濁液を希釈して濁度(OD600)を0.1になるように調整した後、DPP−4に特異的な蛍光基質であるH−Gly−Pro−AMC・HBr(BACHEM社製)を添加して60分間、37℃で嫌気的に培養し、培養終了後、microplate reader SH−9000(Corona Electric社製)等の蛍光測定装置により、励起波長380nm、測定波長460nmで測定した培養物の蛍光強度から、DPP−4活性を決定することができる。
本発明において、ビフィドバクテリウム属細菌のDPP−4活性が、0.5mU以上、好ましくは1.0mU以上であれば、本発明のオピオイドペプチド分解効果を好適に発揮することができる。
また、別の側面は、オピオイドペプチドの分解における前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物の使用である。
また、別の側面は、オピオイドペプチド分解のために用いられる、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物である。
また、別の側面は、オピオイドペプチドの分解によって緩和、予防又は治療され得る疾患の緩和、予防又は治療のために用いられる、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物である。
また、別の側面は、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を哺乳動物に投与することを含む、オピオイドペプチドを分解する方法、又はオピオイドペプチドの分解によって緩和、予防又は治療され得る疾患の緩和、予防又は治療する方法である。
また、別の側面は、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含有するオピオイドペプチド分解剤又はオピオイドペプチド分解用組成物を哺乳動物に投与することを含む、オピオイドペプチドを分解する方法又はオピオイドペプチドの分解によって緩和、予防又は治療され得る疾患の緩和、予防又は治療する方法である。
本発明において、非コラーゲン性糖タンパク質分解剤は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含み、当該ビフィドバクテリウム属細菌及び/又はビフィドバクテリウム属細菌の培養物が有するプラスミンと同様の酵素活性(プラスミン活性)に基づいて、非コラーゲン性糖タンパク質の分解効果を示すものである。
なお、本発明の非コラーゲン性糖タンパク質分解剤は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含むものであれば、他の成分をも含むことを妨げるものではない。すなわち、本発明の非コラーゲン性糖タンパク質分解剤には、非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物の態様も含まれる。よって、本発明の一態様は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含む、非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物である。
プラスミンは、通常は血中においては、不活性型の前駆体であるプラスミノーゲンとして存在し、プラスミノーゲンアクチベーター(PA)によってプラスミノーゲンの特定のペプチド結合が分解されることで活性化されて、プラスミンに変換されてその酵素活性を示すが、本発明におけるビフィドバクテリウム属細菌は、プラスミノーゲン及びプラスミノーゲンアクチベーター(PA)を別途存在させなくても、プラスミン活性を発揮することができる。
本発明において、ビフィドバクテリウム属細菌のプラスミン活性は、例えば以下の方法により確認することができる。
具体的には、ビフィドバクテリウム属細菌の培養物から菌体を分離してPBS溶液に懸濁して懸濁液を調製し、当該懸濁液を希釈して濁度(OD600)を0.1になるように調整した後、プラスミンに特異的な蛍光基質であるBoc−Val−Leu−Lys−AMC(BACHEM社製)を添加して60分間、37℃で嫌気的に培養し、培養終了後、microplate reader SH−9000(Corona Electric社製)等の蛍光測定装置により、励起波長380nm、測定波長460nmで測定した培養物の蛍光強度から、ビフィドバクテリウム属細菌のプラスミン活性を決定することができる。
本発明において、当該プラスミン活性は、好ましくは50μU以上、より好ましくは80μU以上であれば、本発明の非コラーゲン性糖タンパク質分解効果を好適に発揮することができる。
また、別の側面は、非コラーゲン性糖タンパク質の分解における前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物の使用である。
また、別の側面は、非コラーゲン性糖タンパク質分解のために用いられる、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物である。
また、別の側面は、非コラーゲン性糖タンパク質の分解によって緩和、予防又は治療され得る疾患の緩和、予防又は治療のために用いられる、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物である。
また、別の側面は、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を哺乳動物に投与することを含む、非コラーゲン性糖タンパク質を分解する方法又は非コラーゲン性糖タンパク質の分解によって緩和、予防又は治療され得る疾患の緩和、予防又は治療方法である。
また、別の側面は、前記新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含有する非コラーゲン性糖タンパク質分解剤又は非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物を哺乳動物に投与することを含む、非コラーゲン性糖タンパク質を分解する方法又は非コラーゲン性糖タンパク質の分解によって緩和、予防又は治療され得る疾患の緩和、予防又は治療方法である。
本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物は、医薬組成物として用いることができる。
したがって、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物は、DPP−4活性に基づくオピオイドペプチドの分解作用を有するので、本発明の医薬組成物はオピオイドペプチドの分解によって予防又は治療され得る疾患の予防又は治療のために使用することができる。かかる疾患としては、例えば、自閉症、アスペルガー症候群、レット障害、小児期崩壊性障害又は睡眠時無呼吸症等が挙げられ、本発明の医薬組成物はこれらの予防及び/又は治療のための医薬組成物として使用することができる。
また、プラスミンは、フィブロネクチン等の眼の硝子体を構成する非コラーゲン性糖タンパク質分解効果に基づいて、網膜剥離、網膜裂傷、硝子体出血、糖尿病性硝子体出血、増殖性糖尿、加齢黄斑変性、黄斑円孔、硝子体黄斑牽引、フィブリン沈着、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、緑内障及び網膜色素変性症等の眼の障害において、硝子体剥離が必要な化学的硝子体切除術にも利用されている(特表2006−518708号公報)。
したがって、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物は、プラスミン活性に基づく非コラーゲン性糖タンパク質分解効果を有するので、本発明の医薬組成物は非コラーゲン性糖タンパク質の分解によって予防又は治療され得る疾患の予防又は治療のために使用することができる。かかる疾患としては、例えば、脳梗塞、四肢動静脈血栓症、肺梗塞若しくは脳静脈洞血栓等の虚血性障害、又は網膜剥離、網膜裂傷、硝子体出血、糖尿病性硝子体出血、増殖性糖尿、加齢黄斑変性、黄斑円孔、硝子体黄斑牽引、フィブリン沈着、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、緑内障若しくは網膜色素変性症等の硝子体剥離が必要な眼病等が挙げられ、本発明の医薬組成物はこれらの予防及び/又は治療のための医薬組成物として使用することができる。
また、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の培養物や前記細菌の菌体処理物を用いる場合のその摂取量又は投与量は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の摂取量又は投与量に換算された場合に上記摂取量又は投与量となることが好ましい。
また、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の培養物や前記細菌の菌体処理物を用いる場合のその含有量は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の含有量に換算された場合に上記含有量となることが好ましい。
なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。
さらに、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物は、飲食品組成物として用いることができる。本発明の飲食品組成物は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を公知の飲食品に添加することによって製造してもよいし、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を飲食品の原料中に混合して新たな飲食品組成物として製造することもできる。また、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌を飲食品の原料に添加した後に、培養する工程を含むこともできる。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本発明の「表示」行為に該当する。
また、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の培養物や前記細菌の菌体処理物を用いる場合のその摂取量は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の摂取量に換算された場合に上記摂取量となることが好ましい。
また、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の培養物や前記細菌の菌体処理物を用いる場合のその含有量は、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌の含有量に換算された場合に上記含有量となることが好ましい。
本発明の飲食品組成物は、DPP−4活性に基づくオピオイドペプチド分解作用を有するので、オピオイドペプチドの分解によって予防又は治療され得る疾患の予防又は治療のために使用することができる。かかる疾患としては、例えば、自閉症、アスペルガー症候群、レット障害、小児期崩壊性障害、及び睡眠時無呼吸症等のオピオイドペプチドが関連する疾患が挙げられる。
さらに、本発明の飲食品組成物は、プラスミン活性に基づく非コラーゲン性糖タンパク質分解作用を有するので、非コラーゲン性糖タンパク質の分解によって予防又は治療され得る疾患の予防又は治療のために使用することができる。かかる疾患としては、例えば、脳梗塞、四肢動静脈血栓症、肺梗塞若しくは脳静脈洞血栓等の虚血性障害、又は網膜剥離、網膜裂傷、硝子体出血、糖尿病性硝子体出血、増殖性糖尿、加齢黄斑変性、黄斑円孔、硝子体黄斑牽引、フィブリン沈着、網膜静脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、緑内障若しくは網膜色素変性症等の硝子体剥離が必要な眼病が挙げられる。
したがって、本発明の非コラーゲン性糖タンパク質分解用飲食品組成物は、プラスミノーゲンを含有することが好ましく、乳製品やチーズの熟成促進のための添加用食品素材や、早産児向けの育児用調製粉乳、母乳又は食品への添加用食品素材として好適に用いることができる。本発明の飲食品組成物は、ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分とするため、乳幼児にも安全に投与することができる。
ビフィドバクテリウム属細菌が、DPP−4活性を有することを確認する試験を行った。
グルタミン酸ナトリウム1%及び脱脂粉乳10%を含む水溶液にて凍結保存された以下の7種類のビフィドバクテリウム属細菌(新規ビフィドバクテリウム属細菌5種及び公知のビフィドバクテリウム属細菌2種)の菌液90μLを、それぞれMRS液体培地3mLに添加し、ビフィドバクテリウム属細菌の菌数が1×109CFU/mLとなるように、37℃で16時間嫌気培養した。MRS液体培地は、Difco Lactobacilli MRS Broth(BD社製)5.5g、及びL-Cysteine Monohydrochloride, Monohydrate(和光純薬工業社製)50mgを、100mLとなるように純水に溶解させ、HCl水溶液でpH6.5に調整し、121℃で15分間滅菌することによって調製した。
<新規ビフィドバクテリウム細菌5種>
・Bifidobacterium bifidum MCC1092(NITE BP-02429)
・Bifidobacterium bifidum MCC1319(NITE BP-02431)
・Bifidobacterium bifidum MCC1868(NITE BP-02432)
・Bifidobacterium bifidum MCC1870(NITE BP-02433)
・Bifidobacterium longum subsp. longum MCC1110(NITE BP-02430)
<公知のビフィドバクテリウム属細菌2種>
・Bifidobacterium angulatum ATCC27535
・Bifidobacterium animalis subsp. animalis ATCC25527
(1)にて調製した各培養液を4℃、5000×gの条件下にて30分間遠心処理した後、上清を捨て、分離した菌体をPBS溶液に懸濁した。各懸濁液は、濁度(OD600)を0.1に揃えて調製し、DPP−4に特異的な蛍光基質であるH−Gly−Pro−AMC・HBr(BACHEM社製)を添加して60分間、37℃で嫌気的に培養した。培養終了後、microplate reader SH−9000(Corona Electric社製)を用いて励起波長360nm、測定波長460nmにて培養物の蛍光強度を測定した。なお、蛍光強度の単位は、任意単位(arbitrary unit:a.u.)とした。測定した蛍光強度から、あらかじめ作成した前記蛍光基質由来の蛍光物質(AMC:アミノメチルクマリン)濃度と測定波長460nmにおける蛍光強度との関係を示す検量線を用いて、培養物中のAMC濃度(nM)を算出した。さらに、当該AMC濃度から、1分間に産生されるAMCの1nmolを酵素1単位(U)として、各ビフィドバクテリウム属細菌のDPP−4活性を算出した。
蛍光強度及びDPP−4活性を表1に示した。本試験に用いた全てのビフィドバクテリウム属細菌についてDPP−4活性を示すことが確認された。さらに、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌である、Bifidobacterium bifidum MCC1092(NITE BP-02429)、Bifidobacterium bifidum MCC1319(NITE BP-02431)、Bifidobacterium bifidum MCC1868(NITE BP-02432)、Bifidobacterium bifidum MCC1870(NITE BP-02433)及びBifidobacterium longum subsp. longum MCC1110(NITE BP-02430)は、公知のビフィドバクテリウム属細菌であるBifidobacterium angulatum ATCC27535に対しては、いずれも2倍以上のDPP−4活性を示し、Bifidobacterium animalis subsp. animalis ATCC25527に対しては、いずれも5倍以上の高いDPP−4活性を示した。新規ビフィドバクテリウム属細菌のうち、最も活性の高かったBifidobacterium bifidum MCC1319(NITE BP-02431)のDPP−4活性は2.88mUとなり、Bifidobacterium angulatum ATCC27535の約7倍、Bifidobacterium animalis subsp. animalis ATCC25527の約15倍のDPP−4活性を示した。
ビフィドバクテリウム属細菌が、プラスミン活性を有することを確認する試験を行った。
試験例1の「(1)培養液の調製」と同様の手順で、以下7種のビフィドバクテリウム属細菌(新規ビフィドバクテリウム属細菌5種及び公知のビフィドバクテリウム属細菌2種)の培養液を調製した。
<新規ビフィドバクテリウム属細菌5種>
・Bifidobacterium bifidum MCC1092(NITE BP-02429)
・Bifidobacterium bifidum MCC1319(NITE BP-02431)
・Bifidobacterium bifidum MCC1868(NITE BP-02432)
・Bifidobacterium bifidum MCC1870(NITE BP-02433)
・Bifidobacterium longum subsp. longum MCC1110(NITE BP-02430)
<公知のビフィドバクテリウム属細菌2種>
・Bifidobacterium angulatum ATCC27535
・Bifidobacterium animalis subsp. animalis ATCC25527
(1)にて調製した各培養液を4℃、5000×gの条件下にて30分間遠心処理した後、上清を捨て、分離した菌体をPBS溶液に懸濁した。各懸濁液は、濁度(OD600)を0.1に揃えて調製し、プラスミンに特異的な蛍光基質であるBoc−Val−Leu−Lys−AMC酢酸塩(BACHEM社製)を添加して60分間、37℃で嫌気的に培養した。培養終了後、microplate reader SH−9000(Corona Electric社製)を用いて励起波長360nm、測定波長460nmにて培養物の蛍光強度を測定した。測定した蛍光強度から、あらかじめ作成した前記蛍光基質由来の蛍光物質(AMC:アミノメチルクマリン)濃度と測定波長460nmにおける蛍光強度との関係を示す検量線を用いて、培養物中のAMC濃度を算出し、当該濃度から、1分間に産生されるAMCの1nmolを酵素1単位(U)として、各ビフィドバクテリウム属細菌のプラスミン活性を算出した。
蛍光強度及びプラスミン活性を表2に示した。本試験に用いた全てのビフィドバクテリウム属細菌についてプラスミン活性を示すことが確認された。そして、本発明の新規ビフィドバクテリウム属細菌である、Bifidobacterium bifidum MCC1092(NITE BP-02429)、Bifidobacterium bifidum MCC1319(NITE BP-02431)、Bifidobacterium bifidum MCC1868(NITE BP-02432)、Bifidobacterium bifidum MCC1870(NITE BP-02433)及びBifidobacterium longum subsp. longum MCC1110(NITE BP-02430)は、公知のビフィドバクテリウム属細菌であるBifidobacterium angulatum ATCC27535に対しては、いずれも2.5倍以上の高いプラスミン活性を示し、Bifidobacterium animalis subsp. animalis ATCC25527に対しては、いずれも4倍以上の高いプラスミン活性を示した。新規ビフィドバクテリウム属細菌のうち、最も活性の高かったBifidobacterium bifidum MCC1319(NITE BP-02431)のプラスミン活性は1072μUとなり、Bifidobacterium angulatum ATCC27535の約40倍、Bifidobacterium animalis subsp. animalis ATCC25527の約63倍もの著しく高いプラスミン活性を示した。
試験例1及び2で用いた5種の新規ビフィドバクテリウム属細菌から選択される一又は複数をそれぞれ又は同一のMRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、当該一又は複数の細菌の菌末を得る。当該一又は複数の菌末と賦形剤等とを適宜混合して錠剤化する。当該錠剤を、菌の摂取量が総量で1×106〜1×1012cfu/kg体重/日になるように、3ヶ月間毎日摂取する。
当該錠剤の摂取により、オピオイドペプチド分解効果及び/又は非コラーゲン性糖タンパク質分解効果が期待できる。
試験例1及び2で用いた5種の新規ビフィドバクテリウム属細菌から選択される一又は複数をそれぞれ又は同一のMRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、当該一又は複数の細菌の菌末を得る。当該一又は複数の菌末を発酵乳原料に添加し、発酵乳を得る。当該発酵乳を、菌の摂取量が総量で1×106〜1×1012cfu/kg体重/日になるように、少なくとも3ヶ月毎日摂取する。
当該発酵乳の摂取により、オピオイドペプチド分解効果及び/又は非コラーゲン性糖タンパク質分解効果が期待できる。
試験例1及び2で用いた5種の新規ビフィドバクテリウム属細菌から選択される一又は複数の細菌を添加した調製粉乳の製造法を下記に示す。
脱塩牛乳乳清蛋白質粉末(ミライ社製)10kg、牛乳カゼイン粉末(フォンテラ社製)6kg、乳糖(ミライ社製)48kg、ミネラル混合物(富田製薬社製)920g、ビタミン混合物(田辺製薬社製)32g、ラクチュロース(森永乳業社製)500g、ラフィノース(日本甜菜製糖社製)500g、及びガラクトオリゴ糖液糖(ヤクルト薬品工業社製)900gを温水300kgに溶解し、さらに90℃で10分間加熱溶解し、調製脂肪(太陽油脂社製)28kgを添加して均質化する。その後、殺菌、濃縮の工程を行って噴霧乾燥し、調製粉乳約95kgを調製する。これに、試験例1及び2で用いた5種の新規ビフィドバクテリウム属細菌から選択される一又は複数をそれぞれ又は同一のMRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行った後にでん粉で倍散して得た菌末(1.8×1011cfu/g)100gを加えてビフィズス菌・オリゴ糖配合調製粉乳約95kgを調製する。得られた調製粉乳を水に溶解して、標準調乳濃度である総固形分濃度14%(w/V)の調乳液としたとき、調乳液中のビフィズス菌数は2.7×109cfu/100mlとなる。上述のようにして得られた調整粉乳を摂取することにより、オピオイドペプチド分解効果及び/又は非コラーゲン性糖タンパク質分解効果が期待できる。
Claims (7)
- ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870(NITE BP−02433)及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110(NITE BP−02430)からなる群から選択される一又は複数のビフィドバクテリウム属細菌。
- ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含有するオピオイドペプチド分解用組成物であって、前記細菌がビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870(NITE BP−02433)及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110(NITE BP−02430)からなる群から選択される一又は複数である、前記オピオイドペプチド分解用組成物。
- 前記オピオイドペプチドがβ−カソモルフィンである、請求項2に記載のオピオイドペプチド分解用組成物。
- ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を有効成分として含有する非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物であって、前記細菌がビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870(NITE BP−02433)及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110(NITE BP−02430)からなる群から選択される一又は複数である、前記非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物。
- 前記非コラーゲン性糖タンパク質が、フィブリン、フィブリノゲン、フィブロネクチン、ラミニン又はプラスミノーゲンである、請求項4に記載の非コラーゲン性糖タンパク質分解用組成物。
- ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を含有する医薬組成物であって、前記細菌がビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870(NITE BP−02433)及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110(NITE BP−02430)からなる群から選択される一又は複数である、前記医薬組成物。
- ビフィドバクテリウム属細菌、前記細菌の培養物、及び/又は前記細菌の菌体処理物を含有する飲食品組成物であって、前記細菌がビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1092(NITE BP−02429)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1319(NITE BP−02431)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1868(NITE BP−02432)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1870(NITE BP−02433)及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムMCC1110(NITE BP−02430)からなる群から選択される一又は複数である、前記飲食品組成物。
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