JP6738066B2 - 抽出フィルタおよびそれを備えたイムノクロマトグラフィー分析用キット - Google Patents

Description

本発明は、測定対象物質と特異的に結合した微粒子を含む液体から、その微粒子を抽出する抽出フィルタと、その抽出フィルタを用いたイムノクロマトグラフィー分析用キットに関する。

分析対象試料中の測定対象物を高い選択性で検出・測定する方法の１つにイムノクロマトグラフィー法がある。イムノクロマトグラフィー法とは、セルロース膜上を試料が試薬を溶解しながらゆっくりと流れる性質（毛細管現象）を応用した測定方法であり、妊娠検査薬やインフルエンザ検査薬等に広く使われている。

このイムノクロマトグラフィー法を用いた分析用キットのうち、金コロイドを用いたイムノクロマトグラフィー分析用キットの構成を図９に示す。図９に示すように、イムノクロマトグラフィー分析用キット１０１には、基板１０２上の左側（上流側）に試料導入部１１０が設けられ、基板１０２上の右側（下流側）には分析対象試料等を吸収するための吸収パッド１３０が設けられている。そして、試料導入部１１０は、血液等の分析対象試料を含む展開液等を導入するための血球分離膜１１１と抗原と抗原抗体反応をする抗体が固定化された金コロイド等が保持されているコンジュゲートパッド１１２とで構成されている。

試料導入部１１０と吸収パッド１３０との間には、上流側から下流側に向かってテストライン部１５０とコントロールライン部１６０とがそれぞれ設けられている。テストライン部１５０には、血液に含まれる抗原と抗原抗体反応を起こす抗体が固定されている。また、コントロールライン部１６０には、金コロイドに固定化されている抗体と抗原抗体反応を起こす抗体が固定されている。

次に、このイムノクロマトグラフィー分析用キット１０１の動作について説明する。まず、試料導入部１１０上に測定対象物質（抗原）が含まれる血液を滴下する。すると、血球分離膜１１１で血球が取り除かれた展開液がコンジュゲートパッド１１２に流れ込む。展開液はコンジュゲートパッド１１２に保持されている抗体固定化金コロイドを押し流しながら毛細管現象によって、上流側の試料導入部１１０から下流側の吸収パッド１３０の方向に向かって多孔質膜１２０表面および内部を流れる。その際に測定対象物質と抗体固定化金コロイドとが結合して複合体となる。

そして、血液と金コロイドが混ざった混合液体がテストライン部１５０を通過する際に、その複合体とテストライン部１５０に固定されている抗体とが抗原抗体反応を起こし、複合体がテストライン部１５０に固定されることになる。そして、テストライン部１５０に固定された金コロイドが集積することにより、テストライン部１５０が赤く着色することになる。

その後、混合液がコントロールライン部１６０を通過する際に、測定対象物質（抗原）と結合しなかった金コロイドに固定化されている抗体とコントロールライン部１６０に固定化されている抗体とが抗原抗体反応を起こし、測定対象物質（抗原）と結合しなかった金コロイドがコントロールライン部１６０に固定されることになる。そして、コントロールライン部１６０に固定された金コロイドが集積することにより、コントロールライン部１６０が赤く着色することになる。なお、コントロールライン部１６０を通過した混合液は、最終的には吸収パッド１３０に吸収される。

そして、テストライン部１５０に着色した赤色の吸光度を、イムノクロマトリーダ等を用いて測定することにより、測定対象物の濃度を測定することができる。

このようなイムノクロマトグラフィー分析用キットに関し、測定対象物質の検出に優れ、かつ体液や生化学緩衝液の使用が可能であるものが開示されている（たとえば、特許文献１参照）。

特開２０１５−１９４４９５号公報

しかしながら、このようなイムノクロマトグラフィー分析用キットを用いて測定対象物質の濃度測定等のような定量的な分析を行う場合には、同一の多孔質膜の表面および内部に、異なる種類の液体（例えば分析対象試料や定量化するための分析用液体等）を流す必要がある。

そこで、ある分析用液体等を流した後に、多孔質膜表面および内部から余分なその分析用液体等を洗い流す洗浄工程が必要となるため、測定に時間がかかるという問題点があった。

また、上述したようなイムノクロマトグラフィー分析用キットでは、異なる種類の分析用液体等が同一の多孔質膜表面および内部を流れるため、洗浄工程を行っても完全には分析用液体等を洗浄することができない。その結果、残った分析用液体等がノイズとなり、測定結果の信号対雑音比（ＳＮ比）が悪くなるという問題点があった。

本発明は、上述した事情に鑑み、測定対象物質（抗原）に関連する物質と特異的に結合した微粒子を抽出することができる抽出フィルタと、そのフィルタを用いたイムノクロマトグラフィー分析用キットを提供することを目的とする。

本発明の発明者は、上述した問題点に関して鋭意研究を続けた結果、以下のような画期的な構造を有する抽出フィルタと、それを用いたイムノクロマトグラフィー分析用キットを見出した。

本発明の第１の態様は、磁性を有すると共に測定対象物質に関連する物質と特異的に結合する結合微粒子を含む液体が流れる第１の多孔質膜と、第１の多孔質膜に接する第２の多孔質膜と、第１の多孔質膜に磁場を印加することによって、結合微粒子を第１の多孔質膜から第２の多孔質膜に移動させる抽出手段とを具備する抽出用フィルタであって、第２の多孔質膜の孔の平均径が第１の多孔質膜の孔の平均径以上であることを特徴とする抽出フィルタにある。

ここで「接する」（第６の態様でも同じ）とは、直接的に接することだけでなく、他の多孔質膜等を介して接続されるような間接的に接することを含むことを意味する。

かかる第１の態様では、磁場を印加することで、測定対象物質に関連する物質と結合した結合微粒子のみを容易に抽出することができる。その結果、測定対象物質に関連する物質を容易に抽出することができる。

ここで、測定対象物質に関連する物質とは、測定対象物自体であってもよいし、測定対象物と他の物質とが結合して生成した物質（生成物）でもよいし、生成物と反応して生成される反応物質であってもよい。

本発明の第２の態様は、第１の多孔質膜の孔の平均径と第２の多孔質膜の孔の平均径との比率が１：１〜１：１００との範囲にあることを特徴とする第１の態様に記載の抽出フィルタにある。

かかる第２の態様では、測定対象物質に関連する物質と結合した結合微粒子を第１の多孔質膜から第２の多孔質膜により容易に抽出することができる。

本発明の第３の態様は、結合微粒子の磁性は常磁性であり、抽出手段は、第１の多孔質膜に対し、第２の多孔質膜を挟むように配置されることを特徴とする第１または第２の態様に記載の抽出フィルタにある。

かかる第３の態様では、抽出フィルタを容易に作製することができる。

本発明の第４の態様は、結合微粒子の磁性は反磁性であり、抽出手段は、第２の多孔質膜に対し、第１の多孔質膜を挟むように配置されることを特徴とする第１または第２の態様に記載の抽出フィルタにある。

かかる第４の態様では、抽出フィルタを容易に作製することができる。

本発明の第５の態様は、第１〜４の何れかの態様に記載の抽出フィルタを備えたイムノクロマトグラフィー分析用キットにある。

かかる第５の態様では、上述した抽出フィルタの効果に加え、従来のものとは異なり、多孔質膜を洗浄することなく測定することができるので、短時間で、かつ正確に測定対象物を測定することができる。

本発明の第６の態様は、第２の多孔質膜に接し、測定対象物質の計測に必要となる物質を含む液体が流れる第３の多孔質膜を有し、抽出手段は、第２の多孔質膜に移動した結合微粒子を第３の多孔質膜にさらに移動させることを特徴とする第５の態様に記載のイムノクロマトグラフィー分析用キットにある。

ここで、「測定対象物質の計測に必要となる物質」とは、たとえばニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）とブロモクロロインドリルりん酸（ＢＣＩＰ）の混合液（ＢＣＩＰ／ＮＢＴ）やｐ−アミノフェニルフォスフェイト、３，３’-ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）等が挙げられる。

かかる第６の態様では、イムノクロマトグラフィー分析用キットをより容易に作製することができる。

図１は実施形態１に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図である。 図２は図１に示すＡＡ’における概略断面図である。 図３は実施形態２に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図である。 図４は図３に示すＢＢ’における概略断面図である。 図５は実施形態３に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図である。 図６は図５に示すＣＣ’における概略断面図である。 図７は実施形態４に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図である。 図８は実施形態４における電極部の概略側面図である。 図９は従来のイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図である。

以下に添付図面を参照して、本発明に係る抽出フィルタおよびそれを用いたイムノクロマトグラフィー分析用キットの実施形態を説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではない。
（実施形態１）

図１に本実施形態に係る抽出フィルタを用いたイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図を示し、図２に図１に示すＡＡ’における概略断面図を示す。図１に示すように、本実施形態に係るイムノクロマトグラフィー分析用キット１は、長方形の基板２、３をそれぞれの中央部で直角に交差するように重ね合わせ、その重なった部分の下方に抽出手段である磁石９０を配置したように構成されている。なお、磁石９０は、図示しない治具等で固定されている。

まず、基板２について説明する。基板２上には、右側（上流側）から左側（下流側）に向かって長方形状の第１の多孔質膜２０が設けられている。第１の多孔質膜２０の中央部の下側の基板２には矩形状の穴が形成され、その中に第２の多孔質膜４０が嵌め込まれている。なお、基板２は特に限定されない。

第１の多孔質膜２０の左側端部（上流側端部）は、試料導入部１０に接続されている。試料導入部１０は、第１の多孔質膜２０に接続されたコンジュゲートパッド１２と、コンジュゲートパッド１２に接続された血球分離膜１１とで構成されており、血球分離膜１１に滴下された血液から血球を取り除くと共に、測定対象物が含まれる血液等およびコンジュゲートパッド１２に含有されている結合微粒子および酵素で標識された抗体（酵素標識抗体）を均一な流速・量で第１の多孔質膜２０に移動させることができるようになっている。

ここで、結合微粒子とは、常磁性を有し、かつ測定対象物質と特異的に結合するものであれば特に限定されず、たとえば抗体固定化磁気ビーズやアプタマー固定化磁気ビーズ等が挙げられる。

一方、第１の多孔質膜２０の下流側は吸収パッド３０に接続されており、第１の多孔質膜２０の表面および内部を流れてきた血液等を吸収することができるようになっている。

ここで、第１の多孔質膜２０と第２の多孔質膜４０は、第２の多孔質膜４０の孔の平均径が第１の多孔質膜４０の孔の平均径以上のものであれば特に限定されないが、第１の多孔質膜２０の孔の平均径と第２の多孔質膜４０の孔の平均径との比率が１：１〜１：１００の範囲がより効率的に後述する複合体を抽出できる（移動させることができる）ので好ましく、１：２〜１：１０の範囲がさらに効率的に測定対象物を抽出できるのでより好ましい。なお、多孔質膜の孔の平均径とは、バブルポイント法により計測した値である。このような多孔質膜としては、たとえばニトロセルロース、紙、スポンジ、布、ゼラチン等のゲル状物質、その他の網目状構造の物質で構成された膜が挙げられる。

血球分離膜１１、コンジュゲートパッド１２および吸収パッド３０は、上述した機能を有するものであれば特に限定されない。

なお、この第１の多孔質膜２０とその下方に配置された磁石９０とで、本実施形態に係る抽出フィルタが構成されることになる。

次に、基板３について説明する。基板３上には、右上側（上流側）から左下側（下流側）に向かって長方形状の第３の多孔質膜７０が設けられている。なお、基板３は特に限定されない。

第３の多孔質膜７０の右上側端部（上流側端部）は、基質導入部６０に接続されている。基質導入部６０は、コンジュゲートパッドで構成されており、滴下された基質が含まれた液体を均一な流速・量で第３の多孔質膜７０に移動させることができるようになっている。なお、基質導入部６０はコンジュゲートパッド１２と異なり、結合微粒子である抗体固定化磁気ビーズおよび酵素で標識された抗体（酵素標識抗体）は含有されていない。

一方、第３の多孔質膜７０の下流側は吸収パッド８０に接続されており、第３の多孔質膜７０の表面および内部を流れてきた液体を吸収することができるようになっている。

ここで、第３の多孔質膜７０は特に限定されないが、第３の多孔質膜７０の孔の平均径が第２の多孔質膜４０の孔の平均径よりも小さいものが好ましい。このように構成することにより、毛細管現象により、抗体固定化磁気ビーズをそれを取り巻く液体と共に第２の多孔質膜４０から第３の多孔質膜７０により容易に移動させることができる。第３の多孔質膜７０としては、第１の多孔質膜２０および第２の多孔質膜４０と同様に、たとえばニトロセルロース、紙、スポンジ、布、ゼラチン等のゲル状物質、その他の網目状構造の物質で構成された膜が挙げられる。

基質導入部６０および吸収パッド８０は、上述した機能を有するものであれば特に限定されない。

さらに、磁石９０は、常磁性を有し、抗体固定化磁気ビーズを第１の多孔質膜２０から第２の多孔質膜４０に、第２の多孔質膜４０から第３の多孔質膜７０に移動させることができるものであれば特に限定されず、永久磁石であってもよいし、電磁石等であってもよい。

次に、本実施形態に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの動作について説明する。まず試料導入部１０に測定対象物が含まれる血液を滴下する。すると、血球分離膜１１により血球が取り除かれた血液は、コンジュゲートパッド１２を通って、コンジュゲートパッド１２に含有されている酵素標識抗体および抗体固定化磁気ビーズと共に均一な流速・量で第１の多孔質膜２０に流れ込む。

第１の多孔質膜２０に流れ込んだ血液は、毛細管現象によって、上流側の試料導入部１０から下流側の吸収パッド３０の方向に向かって多孔質膜２０表面および内部を流れる。その際に血液に含まれる測定対象物質と、酵素標識抗体と、抗体固定化磁気ビーズとが結合して複合体となる。

そして、血液が第２の多孔質膜４０上の第１の多孔質膜２０を通過する際に、磁石９０の磁力により、抗体固定化磁気ビーズはそれを取り巻く液体と共に下方に引き寄せられる。その結果、抗体固定化磁気ビーズによって構成されている複合体が第２の多孔質膜４０を通って、第３の多孔質膜７０へと移動することになる。

一方、抗体固定化磁気ビーズとそれを取り巻く液体以外のものは、第１の多孔質膜２０の孔の平均径が第２の多孔質膜４０の孔の平均径よりも小さいことから、流れる液体の表面張力等（毛細管現象）の影響で、第２の多孔質膜４０に流れ込まず、そのまま第１の多孔質膜２０の表面および内部を流れる。そして、第１の多孔質膜２０を流れるこの液体は、最終的に吸収パッド３０に吸収されることになる。

次に、基質導入部６０に基質が含まれている液体を滴下する。すると、滴下された液体は、基質導入部６０を通って、均一な流速・量で第３の多孔質膜７０に流れ込む。

第３の多孔質膜７０に流れ込んだ液体は、第２の多孔質膜４０と接している部分にある複合体と反応することになる。多孔質膜７０に流れ込んだ基質（例えば上述したＢＣＩＰ／ＮＢＴ）は、複合体に含まれている酵素（この場合はアルカリフォスファターゼ）と反応し、着色（この反応系では紫色）する。そして、この色の濃さを、イムノクロマトリーダ等を用いて吸光度測定することにより測定対象物の濃度を測定することができる。

以上、説明したように、本実施形態に係るイムノクロマトグラフィー分析用キット１を用いることにより、従来のものとは異なり、第１の多孔質膜２０を洗浄することなく測定することができるので、短時間で、かつ正確に測定対象物の濃度等を測定することができる。
（実施形態２）

実施形態１に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットでは、常磁性を有する抗体固定化磁気ビーズを用い、磁石を第１の多孔質膜に対し、第２の多孔質膜を挟むように第３の多孔質膜を配置したが、本発明はこれに限定されない。

たとえば、図３および図４に示すように、反磁性を有する抗体固定化磁気ビーズ等を用い、磁石９０を第２の多孔質膜４０に対し、第１の多孔質膜２０を挟むように第３の多孔質膜を配置してイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成してもよい。すなわち、磁石９０を第１の多孔質膜２０の上方に配置してもよい。

ここで、図３は本実施形態に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図であり、図４は図３に示すＢＢ’における概略断面図である。

なお、本実施形態では、第１の多孔質膜２０とその上方に配置された磁石９０とで、本実施形態に係る抽出フィルタが構成されることになる。

このようにイムノクロマトグラフィー分析用キット１Ａを構成しても、実施形態１に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットと同様の効果が得られる。
（実施形態３）

上述した実施形態では、第１の多孔質膜２０、第２の多孔質膜４０および第３の多孔質膜７０の３つの多孔質膜を用いて、イムノクロマトグラフィー分析用キットを構成したが、本発明はこれに限定されない。

たとえば、第１の多孔質膜２０と第３の多孔質膜７０Ｂの２つの多孔質膜でイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成してもよい。

具体的には、図５および図６に示すように、基板２Ｂの下面と基板３の上面とが嵌合し、基板２Ｂ上の第１の多孔質膜２０と基板３上の第３の多孔質膜７０が直接接するようにイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成してもよい。この時、多孔質膜７０の孔の平均径は多孔質膜２０の孔の平均径以上となるように構成されている。

ここで、図５は本実施形態に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図であり、図６は図５に示すＣＣ’における概略断面図である。

このようにイムノクロマトグラフィー分析用キット１Ｂを構成しても、実施形態１に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットと同様の効果が得られる。
（実施形態４）

上述した実施形態では、多孔質膜７０に流れ込んだ基質と、複合体に含まれている酵素とが反応して着色した色の濃さを、イムノクロマトリーダ等を用いて吸光度測定することにより測定対象物の濃度を測定するようにイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成したが、本発明はこれに限定されない。

たとえば、図７に示すように、第３の多孔質膜７０Ｃの下流側に電極部７７を設けて電気化学的に測定対象物の濃度を測定するようにしてもよい。図７は、本実施形態に係るイムノクロマトグラフィー分析用キットの概略斜視図である。

さらに、図７に示すＤ方向から見た際の電極部７７の概略側面図を図８に示す。図８に示すように、電極部７７は、参照電極７７Ａ、作用電極７７Ｂ、対向電極７７Ｃの３つの電極で構成されている。そして、これらの電極は、ポテンシオスタット等の電流測定手段（図示しない）と、作用電極７７Ｂと対向電極７７Ｃの間を流れた電流に基づいて測定対象物の濃度を算出するコンピュータ等の濃度算出手段（図示しない）とに接続されており、作用電極７７Ｂから対向電極７７Ｃに流れる電流を正確に測定できるようになっている。

各電極７７Ａ、７７Ｂ、７７Ｃには、鉛直上方に向かって延伸する突起部７９Ｂが複数形成されている。そして、各突起部７９Ｂの先端部７９Ａはテーパ状になっており、各電極７７Ａ、７７Ｂ、７７Ｃと多孔質膜７０Ｃとを接続する際に、各突起部７９Ｂが多孔質膜７０を容易に貫通することができるようになっている。ここで、突起部７９Ｂの数は、多孔質膜７０内を流れる血液等の液体の流れを阻害しないのであれば特に限定されない。

このような突起部７９Ｂを有する電極７７Ａ、７７Ｂ、７７Ｃを用いることにより、作用電極７７Ｂと、後述する電気化学的に活性な物質Ｅとの接触面積を大きくすることができると共に、多孔質膜７０Ｃ内における電気化学的に活性な物質Ｅの位置にかかわらず電気化学的に活性な物質Ｅと作用電極７７Ｂとを接触させることができるので、高い測定感度が得られる。

また、各電極７７Ａ、７７Ｂ、７７Ｃと多孔質膜７０Ｃとを接続させた際に、突起部７９Ｂは多孔質膜７０Ｃを貫通した状態で多孔質膜７０Ｃに固定されることになるので、各電極７７Ａ、７７Ｂ、７７Ｃと多孔質膜７０Ｃとがズレるのを防止することができる。

ここで、各電極７７Ａ、７７Ｂ、７７Ｃは、電流を流すことができる材質のものであれば特に限定されないが、金（Ａｕ）、白金（Ｐｔ）またはカーボン（Ｃ）製のものが好ましい。なお、各電極７７Ａ、７７Ｂ、７７Ｃは、たとえば従来のフォトリソグラフィ技術等を利用した微細加工技術によって基板３上に形成することができる。

このように構成されたイムノクロマトグラフィー分析用キット１Ｃにおいて、たとえば基質にp−アミノフェニルフォスフェイト（ｐＡＰＰ）、酵素にアルカリフォスファターゼを用いると、第２の多孔質膜４０から第３の多孔質膜７０Ｃに流れ込んだアルカリフォスファターゼは、ｐＡＰＰと反応して電気化学的に活性な物質Ｅであるp−アミノフェノール（ｐＡＰ）を生成する。このｐＡＰは、吸収パッド８０に向かって多孔質膜７０Ｃの表面または内部を流れ、電極部７７に流れ込むことになる。

そして、ｐＡＰが作用電極７７Ｂ近傍を流れる際に作用電極７７Ｂと対向電極７７Ｃとの間に電圧を印加すると、ｐＡＰと作用電極７７Ｂとの間で酸化還元反応が起こる。その結果、作用電極７７Ｂと対向電極７７Ｃとの間に電流が流れることになる。

すると、図示しない電流測定手段により、作用電極７７Ｂと対向電極７７Ｃとの間流れる電流が測定される。ここで、この電流はｐＡＰの量に比例するので、最終的にこの電流と測定対象物の量は相関することになる。その結果、電流と測定対象物との関係式が格納された濃度算出手段により、この電流に基づいて測定対象物の濃度を算出することができる。
（その他の実施形態）

上述した実施形態では、第１の多孔質膜と第３の多孔質膜とを直角に交差するように配置してイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成したが本発明はこれに限定されない。たとえば、第１の多孔質膜と第３の多孔質膜とが直角以外の角度で交差するようにイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成してもよい。このように構成しても、上述した実施形態のイムノクロマトグラフィー分析用キットと同様の効果が得られる。

また、上述した実施形態では、第１の多孔質膜、第２の多孔質膜および第３の多孔質膜がそれぞれ他の多孔質膜と接するようにイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成したが本発明はこれに限定されない。たとえば、それらの多孔質膜の間に、新たな別の多孔質膜等を挿入し、それらを介して間接的に接触するようにイムノクロマトグラフィー分析用キットを構成してもよい。ここで、新たに挿入されるものは、多孔質膜に限定されず、結合微粒子を通過させることができるものであればよい。このように構成しても、上述した実施形態のイムノクロマトグラフィー分析用キットと同様の効果が得られる。

さらに、上述した実施形態では、結合微粒子として常磁性または反磁性を有するものを用いたが、本発明はこれに限定されない。結合微粒子として、たとえば強磁性や反強磁性を有するものを用いてもよい。なお、その場合には、結合微粒子の磁性に合わせて、磁石の磁界の向きと、磁石の配置を調整しなければならないことは言うまでもない。

１、１Ａ、１Ｂ、１Ｃ イムノクロマトグラフィー分析用キット
２、３ 基板
１０ 試料導入部
１１ 血球分離膜
１２ コンジュゲートパッド
２０ 第１の多孔質膜
３０、８０ 吸収パッド
４０ 第２の多孔質膜
６０ 基質導入部
７０、７０Ｂ 第３の多孔質膜
９０ 磁石

Claims (5)

1. 磁性を有すると共に測定対象物質に関連する物質と特異的に結合する結合微粒子を含む第１の液体が流れる第１の多孔質膜と、
   前記第１の多孔質膜の下方に配置され、前記第１の多孔質膜と接触する接触部を有すると共に、前記第１の液体とは異なる第２の液体が流れる第２の多孔質膜と、
   前記接触部に磁場を印加することによって、前記接触部において前記結合微粒子を前記第１の液体から前記第２の液体に移動させる抽出手段とを具備するイムノクロマトグラフィー分析用キットであって、
   前記第２の多孔質膜の孔の平均径が前記第１の多孔質膜の孔の平均径以上であることを特徴とするイムノクロマトグラフィー分析用キット。
2. 前記第１の多孔質膜の孔の平均径と前記第２の多孔質膜の孔の平均径との比率が１：１〜１：１００との範囲にあることを特徴とする請求項１に記載のイムノクロマトグラフィー分析用キット。
3. 前記第１の多孔質膜の孔の平均径と前記第２の多孔質膜の孔の平均径との比率が１：２〜１：１０との範囲にあることを特徴とする請求項１に記載のイムノクロマトグラフィー分析用キット。
   
4. 前記結合微粒子の磁性は強磁性であり、
   前記抽出手段は、前記第１の多孔質膜に対し、前記第２の多孔質膜を挟むように配置されることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載のイムノクロマトグラフィー分析用キット。
5. 前記結合微粒子の磁性は反強磁性であり、
   前記抽出手段は、前記第２の多孔質膜に対し、前記第１の多孔質膜を挟むように配置されることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載のイムノクロマトグラフィー分析用キット。