JP6731916B2 - 細胞培養インサート - Google Patents
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Description
ADME−Tox−Absorption、 Distribution、 Metabolism、 Excretion、 and Toxicity(吸収、分布、代謝、排泄、及び毒性)
NBE− New Biological Entity(新規生物由来物質)
NCE− New Chemical Entity(新規化学物質)
TEER−Trans Epithelial Electrical Resistance(経上皮電気抵抗)
すべての見出しは、読者の便宜を図るためのものであり、別に明記しない限り、見出しに続くテキストの意味を限定するために使用されるべきものではない。
細胞培養インサートであって、
細胞培養デバイスの貯留容器に挿入できるように寸法決めされた本体であって、第1の開放端部、開口部を画成する第2の端部、及び前記第1の開放端部から前記第2の端部に延びる、傾斜を成す1つ以上の側壁を有する本体と、
前記第2の端部の前記開口部の上に配置された多孔質膜と、
を備えたインサート。
前記第2の端部の前記開口部が、100μm〜1000μmの範囲の直径寸法を有する、実施形態1記載の細胞培養インサート。
前記第2の端部の前記開口部が、200μm〜750μmの範囲の直径寸法を有する、実施形態2記載の細胞培養インサート。
前記多孔質膜が、微小井戸のアレイを備えた、実施形態1〜3いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記1つ以上の側壁の少なくとも一部が、細胞非接着性である、実施形態1記載の細胞培養インサート。
前記多孔質膜の少なくとも一部が、細胞非接着性である、実施形態1〜5いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記多孔質膜の少なくとも一部が、細胞接着性である、実施形態1〜6いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記第2の端部に近接する前記1つ以上の側壁の一部が、少なくとも部分的に細胞凝集塊閉じ込め容積を画成する、実施形態1〜7いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記閉じ込め容積の深さが、100μm〜500μmの範囲である、実施形態8記載の細胞培養インサート。
前記インサート内で培養された細胞による、細胞凝集塊の形成を促進するように構成された、実施形態1〜9いずれかに記載の細胞培養インサート。
細胞培養アセンブリであって、
内部を画成し、底部を有する貯留容器と、
実施形態1〜10いずれかに記載の第1の細胞培養インサートであって、前記本体の前記第2の端部を前記貯留容器の前記底部の上方に保持するように、前記貯留容器の内部に配置されるように構成され、前記本体が内部を画成する、インサートと、
を備えた、細胞培養アセンブリ。
前記第1のインサートが、前記貯留容器の前記内部に配置されたとき、前記第1のインサートの前記内部が、前記第1のインサートの前記本体の、前記第2の端部の前記開口部の上に配置された、前記多孔質膜を介してのみ、前記貯留容器の内部と流体連通する、実施形態11記載の細胞培養アセンブリ。
内部を画成する本体を有する第2のインサートであって、前記本体が、第1の開放端部、開口部を画成する第2の端部、及び前記第1の開放端部から前記第2の端部に延びる1つ以上の側壁を有し、前記第2のインサートの前記本体の前記第2の端部を前記第1のインサートの前記本体の前記第2の端部の上方に保持するように、前記第1のインサートの内部に配置されるように構成された、第2のインサートを更に備えた、実施形態11又は12記載の細胞培養アセンブリ。
前記第2のインサートが、前記第1のインサートの前記内部に配置されたとき、前記第2のインサートの前記内部が、前記第2のインサートの前記本体の、前記第2の端部の前記開口部の上に配置された、多孔質膜を介してのみ、前記第1のインサートの前記内部と流体連通する、実施形態13記載の細胞培養アセンブリ。
実施形態11〜14のいずれかに記載の細胞培養アセンブリの貯留容器の内部に、標的細胞及び細胞培養培地を導入して、前記貯留容器の前記底部において、前記標的細胞を増殖させるステップと、
第1の細胞培養インサートを前記貯留容器の前記内部に配置するステップと、
複数の第1の種類の細胞及び細胞培養培地を前記第1の細胞培養インサートの内部に配置して、前記第1のインサートの前記多孔質膜の近傍において、前記第1の種類の細胞を、細胞凝集塊として、増殖させるステップと、
第2の細胞培養インサートを前記第1のインサートの前記内部に配置するステップと、
複数の第2の種類の細胞及び細胞培養培地を前記第2の細胞培養インサートの内部に配置して、前記第2のインサートの前記多孔質膜の近傍において、前記第2の種類の細胞を、細胞凝集塊として、増殖させるステップと、
を備えた方法。
前記第2のインサートの前記内部から、前記第1のインサートの前記内部に移動する化合物又はその代謝誘導体が、第2の種類の細胞を通過するように、前記第2の種類の細胞が、前記第2のインサートの前記多孔質膜を覆う、実施形態15記載の方法。
前記第1のインサートの前記内部から、前記貯留容器の前記内部に移動する化合物又はその代謝誘導体が、前記第1の種類の細胞を通過するように、前記第1の種類の細胞が、前記第1のインサートの前記多孔質膜に付着する、実施形態15記載の方法。
試験化合物を前記第2のインサートの前記内部に導入するステップ、及び
前記試験化合物又はその代謝誘導体が、前記標的細胞に与える効果を特定するステップ
を更に備えた、実施形態15〜17いずれかに記載の方法。
前記第1の種類の細胞が肝細胞である、実施形態15〜18いずれかに記載の方法。
前記第2の種類の細胞が、Caco 2細胞である、実施形態15〜18いずれかに記載の方法。
細胞培養インサートであって、
第1の開放端部、開口部を画成する第2の端部、及び前記第1の開放端部から前記第2の端部に延びる、傾斜を成す1つ以上の側壁を有する本体と、
前記第2の端部の前記開口部の上に配置された多孔質膜であって、細胞非接着性であり、微小井戸のアレイを備えた膜と、
を備えたインサート。
前記微小井戸のアレイの微小井戸の少なくとも一部が、超低結合材料でコーティングされた、実施形態21記載の細胞培養インサート。
前記透過性支持体の少なくとも一部が、前記微小井戸のアレイ内で培養された細胞に付着するように構成された、実施形態21又は22記載の細胞培養インサート。
微小井戸の少なくとも一部が、弓形形状を含む、実施形態21〜23いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記微小井戸の少なくとも一部が、円錐形状を含む、実施形態21〜24いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記微小井戸の一部が、閉じ込め容積を画成する、実施形態21〜25いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記閉じ込め容積の直径寸法が、200μm〜500μmの範囲である、実施形態26記載の細胞培養インサート。
細胞培養インサートであって、
第1の開放端部、第2の端部、及び前記第1の開放端部から前記第2の端部に延びる1つ以上の側壁を有する本体を備え、
前記第2の端部が、微小井戸のアレイを有する基板を備えた、インサート。
前記側壁が傾斜を成す、実施形態28記載の細胞培養インサート。
前記側壁が、細胞非接着性である、実施形態28又は29記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板の少なくとも一部が、細胞非接着性である、実施形態28〜30いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記井戸が、上部開口部を画成する内面を有すると共に、前記上部開口部において、100μm〜1000μmの範囲の直径寸法を有する、実施形態28〜31いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記井戸が、100μm〜500μmの範囲の深さを有する、実施形態28〜32いずれかに記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板の少なくとも一部が、細胞非接着性である、実施形態28〜33いずれかに記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板の少なくとも一部が、細胞接着性である、実施形態28〜34いずれかに記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板の少なくとも一部が、多孔質である、実施形態28〜35いずれかに記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板の少なくとも一部が、開口部を備えた、実施形態28〜36いずれかに記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板が、多孔質膜に接着、固定、又は並置された、実施形態28〜37いずれかに記載の細胞培養インサート。
前記第2の端部が、多孔質膜で覆われた、実施形態28〜38いずれかに記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板が、傾斜面を備えた、実施形態28〜39いずれかに記載の細胞培養インサート。
微小井戸のアレイを有する前記基板が、六角形構造体のアレイを備えた、実施形態28〜40いずれかに記載の細胞培養インサート。
101 第1の開放端部
102 第2の端部
110、410 側壁
115 傾斜部分
120 多孔質膜
150、151 貯留容器
130 レッジ
200 細胞凝集塊
300 細胞培養インサート
400 細胞凝集塊促進井戸
500 細胞培養装置
600 入れ子式透過性支持デバイス
Claims (12)
- 細胞凝集塊促進細胞培養インサートであって、
細胞培養デバイスの貯留容器に挿入できるように寸法決めされた本体であって、第1の開放端部、開口部を画成する第2の端部、及び前記第1の開放端部から前記第2の端部に延びる、傾斜を成す1つ以上の側壁を有する本体と、
前記第2の端部の前記開口部の上に配置された多孔質膜と、
を備え、
前記多孔質膜が微小井戸のアレイを備えているとともに、微小井戸内に細胞凝集塊を形成するよう構成されており、
前記微小井戸が、上部開口、側壁、および弓型表面を有する多孔質膜底部を備え、
前記多孔質膜底部の少なくとも一部が、前記弓型表面の中または前記弓型表面の上において細胞に対し非接着性であることを特徴とするインサート。 - 前記第2の端部の前記開口部が、100μm〜1000μmの範囲の直径寸法を有することを特徴とする、請求項1記載の細胞培養インサート。
- 前記本体の前記1つ以上の側壁の少なくとも一部が、細胞非接着性であることを特徴とする、請求項1又は2記載の細胞培養インサート。
- 前記微小井戸のアレイの内の1つの微小井戸の一部が、少なくとも部分的に細胞凝集塊閉じ込め容積を画成することを特徴とする、請求項1〜3いずれか1項記載の細胞培養インサート。
- 前記細胞凝集塊閉じ込め容積の深さが、100μm〜500μmの範囲であることを特徴とする、請求項4記載の細胞培養インサート。
- 貯留容器を更に備え、第1の細胞培養インサートが、該インサートの前記第2の端部を前記貯留容器の底部の上方に保持して、前記貯留容器の内部に配置されるように構成されて成ることを特徴とする、請求項1〜5いずれか1項記載の細胞培養インサート。
- 前記第1のインサートが、前記貯留容器の前記内部に配置されたとき、前記第1のインサートの内部が、前記第1のインサートの前記第2の端部の前記開口部の上に配置された、前記多孔質膜を介してのみ、前記貯留容器の前記内部と流体連通することを特徴とする、請求項6記載の細胞培養インサート。
- 第1の開放端部、開口部を画成する第2の端部、及び前記第1の開放端部から前記第2の端部に延びる1つ以上の側壁を有する、第2のインサートを更に備え、
前記第2のインサートが、該インサートの前記第2の端部を前記第1のインサートの前記第2の端部の上方に保持して、前記第1のインサートの前記内部に配置されるように構成されて成ることを特徴とする、請求項6又は7記載の細胞培養インサート。 - 前記第2のインサートが、前記第1のインサートの前記内部に配置されたとき、前記第2のインサートの内部が、前記第2のインサートの前記第2の端部の前記開口部の上に配置された、前記多孔質膜を介してのみ、前記第1のインサートの前記内部と流体連通することを特徴とする、請求項8記載の細胞培養インサート。
- 前記貯留容器の少なくとも一部が、ガス透過性であることを特徴とする、請求項6〜9いずれか1項記載の細胞培養インサート。
- 細胞凝集塊を培養する方法であって、
請求項1〜5いずれか1項記載の細胞凝集塊促進細胞培養インサートを、貯留容器内に配置するステップであって、前記貯留容器が底部を有し、前記インサートが、該インサートの前記第2の端部が前記貯留容器の上方に位置するように、前記貯留容器の内部に配置される、ステップと、
前記インサートに細胞を導入するステップと、
細胞培養培地を導入するステップと、
前記インサート内の前記細胞培養培地内において細胞を培養して、前記細胞凝集塊を形成するステップと、
を備えたことを特徴とする方法。 - 細胞凝集塊を培養する方法であって、
請求項8又は9記載の第1のインサート又は第2のインサート、あるいはその両方に細胞を導入するステップと、
細胞培養培地を導入するステップと、
前記インサート内の前記細胞培養培地内において細胞を培養して、前記細胞凝集塊を形成するステップと、
を備えたことを特徴とする方法。
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