JP6727184B2 - １７β−ＨＳＤ１、１７β−ＨＳＤ３、および１７β−ＨＳＤ１０の阻害剤 - Google Patents

１７β−ＨＳＤ１、１７β−ＨＳＤ３、および１７β−ＨＳＤ１０の阻害剤 Download PDF

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Description

本明細書は、概して、１７β−ＨＳＤ１、１７β−ＨＳＤ３、および１７β−ＨＳＤ１０の少なくとも１つの阻害剤に関する。
１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型（１７β−ＨＳＤ１）は、エストロゲン受容体（ＥＲ）に対する最も強力な天然リガンドであるエストラジオール（Ｅ２）にエストロン（Ｅ１）を変換する。この酵素はまた、弱いエストロゲンであるが、閉経後に特に重要となる５−アンドロステン−３β，１７β−ジオール（Δ５−ジオール）へのデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）の還元を触媒する（非特許文献１、２）。したがって、１７β−ＨＳＤ１の阻害剤は、乳癌および子宮内膜症などのエストロゲン依存性疾患を制御するための興味深い治療剤になる（非特許文献３、４）。過去３０年間、この鍵となるステロイド産生酵素の強力な阻害剤を設計する目標に向かって懸命な努力が展開されたが（非特許文献５〜８）、極めて良好な阻害活性を有するリード候補が報告されたのは、ほんの最近である（非特許文献９〜１０）。エストランスキャフォールド周辺で構築されることが多い（非特許文献１１）ステロイド阻害剤に関連した残存エストロゲン様活性の存在が、それらの開発における主要な障害になった。
１６β−（ｍ−カルバモイルベンジル）エストラジオール（Ｉ）が、１７β−ＨＳＤ１の強力な阻害剤として報告されている（非特許文献１２）。その良好な阻害効力にもかかわらず、Ｉは、ＭＣＦ−７およびＴ−４７Ｄエストロゲン感受性乳癌細胞株の両方をｉｎ ｖｉｔｒｏで刺激したため、その治療可能性は大幅に低下した。
その望ましくない残存エストロゲン様活性を除去するために、Ｃ３位のフェノール基の置換によって異なった官能性を有する短鎖を位置させることによる、１７β−ＨＳＤ１の阻害およびエストロゲン性の両方への影響がこれまでに探索されている。Ｉのフェノール基を３−アルキル鎖に置換する選択は、阻害活性の鍵となる相互作用を示す（スキーム１）、阻害剤Ｉと１７β−ＨＳＤ１との複合体結晶のＸ線解析から導かれた（非特許文献１３）。実際、３つの主要な相互作用が１７β−ＨＳＤ１と阻害剤Ｉとの二元複合体で同定された。すなわち、１７β−ＯＨが、Ｓｅｒ１４２と水素結合を形成し；ＣＯＮＨ２基が、Ｐｈｅ１９２と水素結合を形成し；Ｃ１６のフェニル環が、Ｔｙｒ１５５とπ−π相互作用を形成する。しかしながら、酵素の天然基質であるＥ１とは対照的に、Ｉの３−ＯＨは、Ｇｌｕ２８２ともＨｉｓ２２１とも水素結合を形成しない。
スキーム１：１７β−ＨＳＤ１に対する阻害活性の鍵となる相互作用
前立腺癌は、米国男性の間で最も一般的な癌であり、２０１０年には新たに診断された症例が推定２１７７３０例あり、関連死が３２０５０例ある（非特許文献１４）。内分泌療法が、前立腺癌の最も効果的な治療法の１つとして認識されており、最初の治療後に症例のほぼ８０％において、癌退縮の陽性反応がある（非特許文献１５）。精巣のアンドロゲン供給源を遮断するか（内科的または外科的去勢）、またはアンドロゲン受容体に対するアンドロゲンテストステロン（Ｔ）およびジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の作用を遮断するか（抗アンドロゲン）のいずれかの異なる内分泌治療法が、現在利用可能である（非特許文献１６、１７）。生存期間の改善はあるが、これらのアンドロゲン遮断治療法は、重大な副作用が付随しており、進行した前立腺癌の症例では治癒的でない（非特許文献１８〜２０）。したがって、生存期間および治療患者の生活の質を改善するために、新しい治療選択肢の開発が強く求められている（非特許文献２１）。
精巣１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼとも名付けられた１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ３型（１７β−ＨＳＤ３）は、補因子としてＮＡＤＰＨを使用する、非アンドロゲン性４−アンドロステン−３，１７−オン（Δ４−ジオン）（非特許文献２２）の強力なアンドロゲンＴへの還元を触媒するステロイド産生酵素である（非特許文献９、２３〜２５）。この酵素は、精巣微小管部分のライディッヒ細胞に主として見出され、男性の全活性アンドロゲンの約６０％の産生に寄与する（非特許文献２６）。活性アンドロゲンの他の４０％は、３β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、５α−レダクターゼ、および５型または１５型などの他の１７β−ＨＳＤの作用により、不活性な副腎由来前駆体デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）およびΔ４−ジオンから前立腺で直接合成されるであろう（非特許文献２７、２８）。しかしながら、１７β−ＨＳＤ３の発現レベルは正常な前立腺組織では極めて低いが、前立腺癌組織中では、１７β−ＨＳＤ３が、副腎ステロイドの潜在的なアンドロゲンへの変換に重要な役割を果たすと考えられるとの報告がある（非特許文献２９、３０）。実際、悪性腫瘍を有する前立腺組織中の１７β−ＨＳＤ３ ｍＲＮＡの発現レベルは、悪性腫瘍のない前立腺組織中のものよりも顕著に高い（３１倍）。さらに、去勢療法に抵抗性の患者から入手された転移組織から単離されたＬｕＣａＰ２３およびＬｕＣＡＰ３５細胞株で１７β−ＨＳＤ３が過剰発現（８倍）されていることが最近示された（非特許文献３１〜３４）。重要なことには、血流中のＴが去勢レベルにもかかわらず、転移性腫瘍内のＴのレベルが、癌細胞の増殖を刺激するのに十分な高さであることが見出された。
１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１０型（１７β−ＨＳＤ１０）は、エストロゲン不活化、アンドロゲン活性化、脂肪酸のβ−酸化、および胆汁酸の異性化に関与するミトコンドリア酵素である。この酵素は基質としてエストラジオール（Ｅ２）を使用するので、この酵素が神経保護のエストロゲンレベルを低下させることによりアルツハイマー病の病変形成に寄与する証拠がある。さらに、この酵素は非古典的アンドロゲン合成経路に重要な役割を果たしており、その発現は特定の前立腺癌細胞ではアップレギュレートされているため、これらの細胞にはアンドロゲン除去療法から残存するための有利性が付与されている（非特許文献６、３５〜３７）。その結果、１７β−ＨＳＤ１０の阻害は、これらの疾患の治療に新しい手法を提供する。
本明細書では、いくつかの文献が参照されるが、その内容全体は本明細書に組み込まれる。
Ｌｕｕ−Ｔｈｅ，Ｖ．；Ｚｈａｎｇ，Ｙ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ．Ｄ．；Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅｓ １，２ ａｎｄ ３ １７ ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：ｏｘｉｄａｔｉｏｎ／ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９５，５５，５８１−５８７． Ｓｉｍａｒｄ，Ｊ．；Ｖｉｎｃｅｎｔ，Ａ．；Ｄｕｃｈｅｓｎｅ，Ｒ．；Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．Ｆｕｌｌ ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃ１９−ｄｅｌｔａ ５ ａｄｒｅｎａｌ ｓｔｅｒｏｉｄｓ ｉｎ ｒａｔ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ｌａｃｔｏｔｒｏｐｈｓ ａｎｄ ｓｏｍａｔｏｔｒｏｐｈｓ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９８８，５５，２３３−２４２． Ｔｈｅｏｂａｌｄ，Ａ．Ｊ．Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｄｖａｎｃｅｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ：ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ｔｅａｍ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．２０００，５４，６６５−６６９． Ｄｉｚｅｒｅｇａ，Ｇ．Ｓ．；Ｂａｒｂｅｒ，Ｄ．Ｌ．；Ｈｏｄｇｅｎ，Ｇ．Ｄ．Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ：ｒｏｌｅ ｏｆ ｏｖａｒｉａｎ ｓｔｅｒｏｉｄｓ ｉｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ，ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ，ａｎｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．１９８０，３３，６４９−６５３． Ｐｅｎｎｉｎｇ，Ｔ．Ｍ．１７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｄｅｓｉｇｎ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ，１９９６，３，４１−５６． Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７β−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００９，９，６４２−６６０． Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ｇ．；Ａｄａｍｓｋｉ，Ｊ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｖｉｅｗ ｏｎ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００９，３０１，７−１９． Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ １ ａｎｄ ７：Ｋｅｙ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２０１１，１２５，８３−９４． Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．１７β−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａ ｐａｔｅｎｔ ｒｅｖｉｅｗ．Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，２０１０，２０，１１２３−１１４５． Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００３，１０，４５３−４７７． Ｔｒｅｍｂｌａｙ，Ｍ．Ｒ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ａ ｒａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｄｅｓｉｇｎ ｔｙｐｅ Ｉ １７ ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ：ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９９８，６６，１７９−１９１． Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｙ．；Ｃａｄｏｔ，Ｃ．；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ｍ．Ｃ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｎｄ Ｅｓｔｒｏｎｅ Ｃ−１６ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｆ ＥＲ＋ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｓｔｒｏｎｅ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，１６，１８４９−１８６０． Ｍａｚｕｍｄａｒ，Ｍ．；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ｄ．；Ｚｈｕ，Ｄ．Ｗ．；Ｃａｄｏｔ，Ｃ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．；Ｌｉｎ，Ｓ．Ｘ．Ｂｉｎａｒｙ ａｎｄ ｔｅｒｎａｒｙ ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｉｔｈ １７β−ＨＳＤ ｔｙｐｅ １：ａ ｌｅａｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２００９，１０，３５７−３６６． ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／Ｃａｎｃｅｒ−ＰｒｏｓｔａｔｅＣａｎｃｅｒ／ＤｅｔａｉｌｅｄＧｕｉｄｅ／ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｃａｎｃｅｒ−ｋｅｙ−ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ． Ｇｒｏｕｐ．ＶＡＣＵＲ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｅｔ．１９６７，１２４，１０１１−１０１７． Ｓｅｉｄｅｎｆｅｌｄ，Ｊ．；Ｓａｍｓｏｎ，Ｄ．Ｊ．；Ｈａｓｓｅｌｂｌａｄ，Ｖ．；Ａｒｏｎｓｏｎ，Ｎ．；Ａｌｂｅｒｔｓｅｎ，Ｐ．Ｃ．；Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｃ．Ｌ．；Ｗｉｌｔ，Ｔ．Ｊ．Ｓｉｎｇｌｅ−ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｅｎ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２０００，１３２，５６６−５７７． Ｓａｎｔｅｎ，Ｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ３７：Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏ．Ｍｅｔａｂ．１９９２，７５，６８５−６８９． Ｈｅｄｌｕｎｄ，Ｐ．Ｏ．Ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ：ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ，ａｎｔｉａｎｄｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｓｕｐｐｌ ２０００，１０，３２−３７． Ｗｙｓｏｗｓｋｉ，Ｄ．Ｋ；Ｆｒｅｉｍａｎ，Ｊ．Ｐ；Ｔｏｕｒｔｅｌｏｔ，Ｊ．Ｂ；Ｈｏｒｔｏｎ，Ｍ．Ｌ．Ｆａｔａｌ ａｎｄ ｎｏｎｆａｔａｌ ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｌｕｔａｍｉｄｅ．Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１９９３，１１８，８６０−８６４． Ｓｈａｈｉｎｉａｎ，Ｖ．Ｂ；Ｋｕｏ，Ｙ．Ｆ；Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｊ．Ｌ．；Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｊ．Ｓ．Ｒｉｓｋ ｏｆ ｆｒａｃｔｕｒｅ ａｆｔｅｒ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００５，３５２，１５４−１６４． ａ）Ｔａｍｍｅｌａ，Ｔ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４，９２，２８７−２９５；ｂ）Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ，２００６，６６，１００５−１０１２． Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｙ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｄｒｏｓｔ−４−ｅｎｅ−３，１７−ｄｉｏｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ＬＮＣａＰ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ ２００８，７３，２６６−２７１． Ｉｎａｎｏ，Ｈ．；Ｔａｍａｏｋｉ，Ｂ．Ｉ．Ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９８６，４８，１−２６． Ｍｏｈｌｅｒ，Ｍ．Ｌ．；Ｎａｒａｙａｎａｎ，Ｒ．；Ｈｅ，Ｙ．；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｄ．Ｄ．；Ｄａｌｔｏｎ，Ｊ．Ｔ．Ｒｅｃｅｎｔ Ｐａｔｅｎｔｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２００７，１，１０３−１１８． Ｄａｙ，Ｊ．Ｍ．；Ｔｕｔｉｌｌ，Ｈ．Ｊ．；Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．；Ｒｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒ．−Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ ２００８，１５，６６５−６９２． Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．Ｉｎｔｒａｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９９１，７８，Ｃ１１３−Ｃ１１８． Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｎｅｗ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．２００８，６９，３０４−３１８． Ｌｕｕ−Ｔｈｅ，Ｖ．；Ｂｅｌａｎｇｅｒ，Ａ．；Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．Ａｎｄｒｏｇｅｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ２００８，２２，２０７−２２１． Ｋｏｈ，Ｅ．；Ｎｏｄａ，Ｔ．；Ｋａｎｙａ，Ｊ．；Ｎａｍｉｋｉ，Ｍ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｎｏｎ−ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ２００２，５３，１５４−１５９． Ｄｅｑｔｙａｒ，Ｖ．Ｇ．；Ｂａｂｋｉｎａ，Ｔ．Ｖ．；Ｋａｚａｎｔｓｅｖａ，Ｉ．Ａ．；Ｍｏｒｏｚｏｖ，Ａ．Ｐ．；Ｔｒａｐｅｚｎｉｋｏｖａ，Ｍ．Ｆ．；Ｋｕｓｈｌｉｎｓｋｉ，Ｎ．Ｅ．Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｔｕｍｏｒｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｂｕｌｌ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２００５，１３９，７１５−７１７． Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｒ．Ｂ．；Ｍｏｓｔａｇｈｅｌ，Ｅ．Ａ．；Ｖｅｓｓｅｌｌａ，Ｒ．；Ｈｅｓｓ，Ｄ．；Ｋａｌｈｏｒｎ，Ｔ．Ｆ．；Ｈｉｇａｎｏ，Ｃ．Ｓ．；Ｔｒｕｅ，Ｌ．Ｄ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｐ．Ｓ．Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００８，６８，４４４７−４４５４． Ｌｏｃｋｅ，Ｊ．Ａ．；Ｇｕｎｓ，Ｅ．；Ｌｕｂｉｋ，Ａ．Ａ．；Ａｄｏｍａｔ，Ｈ．Ｈ．；Ｈｅｎｄｙ，Ｓ．Ｃ．；Ｗｏｏｄ，Ｃ．Ａ．；Ｅｔｔｉｎｇｅｒ，Ｓ．Ｌ．；Ｇｌｅａｖｅ，Ｍ．Ｅ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ｃ．Ａｎｄｒｏｇｅｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｂｙ ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｄｅ ｎｏｖｏ ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｅｓｉｓ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００８，６８，６４０７−６４１５． Ｍｏｓｔａｇｈｅｌ，Ｅ．Ａ．；Ｐａｇｅ，Ｓ．Ｔ．；Ｌｉｎ，Ｄ．Ｗ．；Ｆａｚｌｉ，Ｌ．；Ｃｏｌｅｍａｎ，Ｉ．Ｍ．；Ｔｒｕｅ，Ｌ．Ｄ．；Ｋｎｕｄｓｅｎ，Ｂ．；Ｈｅｓｓ，Ｄ．Ｌ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ｃ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ａ．Ｍ．；Ｂｒｅｍｎｅｒ，Ｗ．Ｊ．；Ｇｌｅａｖｅ，Ｍ．Ｅ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｐ．Ｉｎｔｒａｐｒｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｅｒｓｉｓｔ ａｆｔｅｒ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７，６７，５０３３−５０４１． Ｐａｇｅ，Ｓ．Ｔ．；Ｌｉｎ，Ｄ．Ｗ．；Ｍｏｓｔａｇｈｅｌ，Ｅ．Ａ．；Ｈｅｓｓ，Ｄ．Ｌ．；Ｔｒｕｅ，Ｌ．Ｄ．；Ａｍｏｒｙ，Ｊ．Ｋ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｐ．Ｓ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ａ．Ｍ．；Ｂｒｅｍｎｅｒ，Ｗ．Ｊ．Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎｔｒａｐｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｍｅｄｉｃａｌ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｍｅｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００６，９１，３８５０−３８５６． Ｎｏｒｄｌｉｎｇ，Ｅ．；Ｏｐｐｅｒｍａｎｎ，Ｕ．Ｃ．；Ｊｏｒｎｖａｌｌ，Ｈ．；Ｐｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．；Ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ １０ １７ ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｄｏｃｋｉｎｇ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｇｒａｐｈ．Ｍｏｄｅｌ ２００１，１９，５１４−５２０． Ｈｅ，Ｈ．Ｙ．；Ｍｅｒｚ，Ｇ．；Ｙａｎｇ，Ｙ．Ｚ．；Ｍｅｈｔａ，Ｐ．；Ｓｃｈｕｌｚ，Ｈ．；Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ１０ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００１，２６８，４８９９−４９０７． Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．；Ｈｅ，Ｘ．Ｙ．；Ｓｃｈｕｌｚ，Ｈ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １０ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００５，１６，１６７−１７５．
本開示は、１７β−ＨＳＤ１、１７β−ＨＳＤ３、および１７β−ＨＳＤ１０の阻害剤に関する。一実施形態では、本開示は、１７β−ＨＳＤ１、１７β−ＨＳＤ３、および１７β−ＨＳＤ１０の少なくとも１つの阻害剤に関する。一実施形態では、本開示は、１７β−ＨＳＤ１、１７β−ＨＳＤ３、または１７β−ＨＳＤ１０の選択的阻害剤に関する。本開示の一実施形態では、阻害剤は、非エストロゲン性（１７β−ＨＳＤ１）または非アンドロゲン性（１７β−ＨＳＤ３）プロファイルを示す。
以下に添付図を説明する。
種々の濃度での７日間処理後における、エストロゲン枯渇状態のエストロゲン感受性ＭＣＦ−７細胞の増殖に対する阻害剤Ｉ〜Ｖの効果を示す図である。対照細胞の増殖を１００％とする。結果は、三つ組の平均値±ＳＥＭとして表す。＊対照に対して、Ｐ≦０．０５。＊＊対照に対して、Ｐ≦０．０１。 ヒトエストロゲン受容体アッセイにおける、化合物Ｖおよびエストラジオールの競合的結合アッセイを示す図である。 Ｔ−４７Ｄ無傷細胞における、化合物ＶおよびＩの阻害効力を示す図である。結果は、三つ組の平均値（±ＳＥＭ）である。 図４Ａは、種々の濃度の阻害剤化合物ＩおよびＶの存在下または非存在下で、生理学的濃度のＥ１（０．１ｎＭ）により誘導されるＴ−４７Ｄ細胞の細胞増殖を示す図である。結果は、三つ組の平均値（±ＳＥＭ）として表す。図４Ｂは、エストロゲン感受性（ＥＲ＋）ヒト乳癌Ｔ−４７Ｄ細胞のＥ２（０．１ｎＭ）誘導増殖の阻害（抗エストロゲン活性）に対する阻害剤化合物Ｖおよび純粋な抗エストロゲンＥＭ−１３９の効果を示す図である。結果は、三つ組の平均値（±ＳＥＭ）として表す。 図５Ａは、７日間処理後における、エストロゲン枯渇状態のＴ−４７Ｄ（ＥＲ＋）ヒト乳癌細胞の増殖に対する阻害剤化合物ＩおよびＶの効果を示す図である。結果は、三つ組の平均値（±ＳＥＭ）として表す（＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１）。図５Ｂは、ヒトＥＲαへの［３Ｈ］−Ｅ２結合の置換における、化合物ＩおよびＶの濃度増加の効果を示す図である。 図６Ａは、７日間処理された卵巣摘出マウスの子宮重量に対する阻害剤化合物ＩおよびＶの効果を示す図である（＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１、実験動物対ＯＶＸ対照動物（ＣＴＲ））。図６Ｂは、７日間処理された卵巣摘出マウスの膣重量に対する阻害剤化合物ＩおよびＶの効果を示す図である（＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１、実験動物対ＯＶＸ対照動物（ＣＴＲ））。 Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットへの２．３ｍｇ／ｋｇの皮下（ｓ．ｃ．）注射後の化合物ＩおよびＶの血漿濃度の時間経過を示す図である。 卵巣摘出（ＯＶＸ）ヌードマウスにおける、Ｅ１（ｓ．ｃ．）刺激のＴ−４７Ｄ腫瘍（異種移植片）の増殖に対する化合物Ｖの効果を示す図である。（＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１、Ｅ１−化合物ＶおよびＯＶＸ対照動物（ＣＴＲ）対Ｅ１）。 図９Ａは、３２日間処理後の卵巣摘出ヌードマウスの体重に対する化合物Ｖ阻害剤およびエストロン（Ｅ１）の効果を示す図である。ＣＴＲ：対照。図９Ｂは、３２日間処理後の卵巣摘出ヌードマウスの子宮重量に対する化合物Ｖ阻害剤およびエストロン（Ｅ１）の効果を示す図である。ＣＴＲ：対照。図９Ｃは、３２日間処理後の卵巣摘出ヌードマウスの膣重量に対する化合物Ｖ阻害剤およびエストロン（Ｅ１）の効果を示す図である。ＣＴＲ：対照。 精巣（内分泌）、副腎（内分泌）、および腫瘍内組織（細胞内分泌）を含む種々の供給源における、非アンドロゲン性４−アンドロステン−３，１７−ジオン（Δ４−ジオン）からのアンドロゲンテストストステロン（Ｔ）生合成における１７β−ＨＳＤ３の寄与について示す概略図である。ＬＨ：黄体形成ホルモン、５α−Ｒ：５α−レダクターゼ、ＡＲ：アンドロゲン受容体、ＤＨＴ：ジヒドロテストステロン、１７β−ＨＳＤ５および１７β−ＨＳＤ１５：１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの５型および１５型。 図１１Ａは、ＳＡＲ研究により確立された、アンドロステロンステロイドスキャフォールドの３β位に結合した種々の化学基（すなわち、アルキル、アルキルアミド、およびカルバメート誘導体）の相対的重要度および１７β−ＨＳＤ３阻害に対するそれらの効果を示す図である。図１１Ｂは、１７β−ＨＳＤ３の代表的阻害剤を示す図である。 無傷ＨＥＫ−２９３細胞で過剰発現された１７β−ＨＳＤ３による［１４Ｃ］−４−アンドロステン−３，１７−ジオン（［１４Ｃ］−Δ４−ジオン）（５０ｎＭ）の［１４Ｃ］テストステロン（［１４Ｃ］−Ｔ）への変換の阻害を示す図である。 強力なアンドロゲンジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）および１７β−ＨＳＤ３阻害剤ＣＳ−２１３、５、７ａ、１５ｂ、および１７ａにより誘導される、アンドロゲン感受性シオノギ（Ｓｈｉｏｎｏｇｉ）細胞に対する増殖効果（アンドロゲン活性）を示す図である。データは、三つ組での一実験の平均値±ＳＥＭとして表す。対照（ＣＴＬ）と有意に異なる：＊（ｐ＜０．０１）。 図１４Ａは、種々の濃度（＜１μＭ）における、ＭＣＦ−７（ＥＲ＋）細胞増殖に対する化合物（１〜４）の増殖（エストロゲン様）効果を示す図である。図１４Ｂは、高濃度（＞１μＭ）における、ＭＣＦ−７（ＥＲ＋）細胞に対する化合物（１〜４）の細胞毒性効果を示す図である。化合物なしの細胞増殖を１００％とした。相対的な増殖効力（ＲＰＰ）または相対的な細胞傷害性効力（ＲＣＰ）を、ＩＣ５０（１７β−Ｅ２）／ＩＣ５０（化合物１、２、３、または４）×１００として算出した。 図１５Ａは、種々の濃度（＜１μＭ）における、Ｔ−４７Ｄ（ＥＲ＋）細胞に対する化合物１〜４の増殖（エストロゲン様）効果を示す図である。図１５Ｂは、高濃度（＞１μＭ）における、Ｔ−４７Ｄ（ＥＲ＋）細胞に対する化合物（１〜４）の細胞毒性効果を示す図である。化合物なしの細胞増殖を１００％とした。相対的な増殖効力（ＲＰＰ）または相対的な細胞傷害性効力（ＲＣＰ）を、ＩＣ５０（１７β−Ｅ２）／ＩＣ５０（化合物１、２、３、または４）×１００として算出した。 種々の濃度における、ＢＴ−２０（ＥＲ−）細胞増殖に対する化合物１〜４の効果を示す図である。 ラット子宮エストロゲン受容体アルファ（ＥＲα）への［３Ｈ］−１７β−Ｅ２結合の置換における、１７β−Ｅ２（１）、１７α−Ｅ２（２）、１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）、および１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）の濃度増加の効果を示す図である。ＲＢＡ：相対的結合親和性。 図１８Ａは、１、１０、および１００μｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．ＢＩＤ）の化合物１、２、３、または４で７日間処置されたマウスの子宮重量を示す図である。図１８Ｂは、１、１０、および１００μｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．ＢＩＤ）の化合物１、２、３、または４で７日間処置されたマウスの膣重量を示す図である。＊対照に対して、Ｐ≦０．０５、＊＊対照に対して、Ｐ≦０．０１。 鍵となる１７−ＯＨ基の位置を示す、４種のＥ２異性体（化合物１〜４）の重なり図である。１７β−Ｅ２（１）を赤で、１７α−Ｅ２（２）を青で、１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）を緑で、１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）をピンクで示す。構造エネルギー最小化および重ね合わせをＣｈｅｍ３Ｄ（Ｐｒｏバージョン５．０）ソフトウェアを使用して実施した。エネルギー最小化は、ＭＭ２最小化法（ＲＭＳ勾配＝０．１００）を用いて達成した。 １７β−ＨＳＤ１０および補因子ＮＡＤ＋（酸化型）またはＮＡＤＨ（還元型）により触媒される反応を示す図である。 無傷ＨＥＫ−２９３細胞における、化合物２１およびＥ２による、トランスフェクトされた１７β−ＨＳＤ１０の阻害を示す図である。ＩＣ５０値を決定するために、種々の濃度で化合物を試験した。エラーバーが示されない場合は、エラーバーが記号よりも小さいためである。
本明細書で使用される用語について、明確で一貫した理解を提供するために、いくつかの定義を以下に提供する。また、他に定義されていない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、本開示が属する分野の当業者が通常理解するものと同じ意味を有する。
特許請求の範囲および／または本明細書において用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と併せて使用される場合、単語「ａ」または「ａｎ」の使用は、「１つの」を意味することもあるが、「１つまたは複数の」、「少なくとも１つの」、「１つまたは１より多くの」という意味と一致することもある。同様に、単語「別の（ａｎｏｔｈｅｒ）」は少なくとも二番目またはそれより多くを意味することがある。
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」など、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）の任意の形態）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」など、有する（ｈａｖｉｎｇ）の任意の変化形）、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」など、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）の任意の変化形）、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」など、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）の任意の変化形）は、包含的すなわちオープンエンド形式であり、追加の列挙していない要素または工程ステップを除外しない。
用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、値がその値を決定するために使用される装置または方法に対して固有の変動を含むことを示すために使用される。
本明細書で互換的に使用される用語「アシル」または「アルカノイル」は、本明細書で定義されるカルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義されるアルキル基または水素を表し、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブタノイル等により例示される。代表的な非置換アシル基は２〜１０個の炭素を含む。
本明細書で使用される用語「アルキル」または「アルク（ａｌｋ）」は、特に明記されない限り、１〜１５個の炭素原子を含む直線または分岐鎖の飽和炭化水素に由来する一価の基を表わし、メチル、エチル、ｎ−およびイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−、イソ−、およびｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル等により例示され、場合によっては、以下のものからなる群から独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または２個以上の炭素を含むアルキル基の場合には４つの置換基で置換されていてもよい：（１）１〜６個の炭素原子のアルコキシ；（２）１〜６個の炭素原子のアルキルスルフィニル；（３）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル；（４）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（５）アミノ；（６）アリール；（７）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルコキシ；（８）アジド；（９）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル；（１０）ハロ；（１１）ヘテロシクリル；（１２）（複素環）オキシ；（１３）（複素環）オイル；（１４）ヒドロキシル；（１５）１〜６個の炭素原子のヒドロキシアルキル；（１６）Ｎ−保護アミノ；（１７）ニトロ；（１８）オキソまたはチオオキソ；（１９）１〜４個の炭素原子のペルフルオロアルキル；（２０）１〜４個の炭素原子のペルフルオロアルコキシル；（２１）３〜８個の炭素原子のスピロアルキル；（２２）１〜６個の炭素原子のチオアルコキシ；（２３）チオール；（２４）ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、式中、ＲＡは、（ａ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｄ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｅ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２５）Ｃ（Ｏ）ＲＢ、式中、ＲＢは、（ａ）水素、（ｂ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｅ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｆ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２６）ＣＯ２ＲＢ、式中、ＲＢは、（ａ）水素、（ｂ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｅ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｆ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２７）Ｃ（Ｏ）ＮＲＣＲＤ、式中、ＲＣおよびＲＤはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（２８）Ｓ（Ｏ）ＲＥ、式中、ＲＥは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル、および（ｄ）ヒドロキシルからなる群から選択される；（２９）Ｓ（Ｏ）２ＲＥ、式中、ＲＥは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル、および（ｄ）ヒドロキシルからなる群から選択される；（３０）Ｓ（Ｏ）２ＮＲＦＲＧ、式中、ＲＦおよびＲＧはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；および（３１）−ＮＲＨＲＩ、式中、ＲＨおよびＲＩはそれぞれ独立して、（ａ）水素；（ｂ）Ｎ−保護基；（ｃ）１〜６個の炭素原子のアルキル；（ｄ）２〜６個の炭素原子のアルケニル；（ｅ）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（ｆ）アリール；（ｇ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（ｈ）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル、（ｉ）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル（ａｌｋｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）、（ｊ）１〜６個の炭素原子のアルカノイル、（ｋ）６〜１０個の炭素原子のアリーロイル（ａｒｙｌｏｙｌ）、（ｌ）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル、および（ｍ）６〜１０個の炭素原子のアリールスルホニルからなる群から選択されるが、２つの基がカルボニル基またはスルホニル基を介して窒素原子に結合していることはない。
本明細書で互換的に使用される用語「アルコキシル」または「アルキルオキシ」は、酸素原子を介して親分子基に結合したアルキル基を表す。
本明細書で使用される用語「アルキルスルフィニル」は、Ｓ（Ｏ）基を介して親分子基に結合したアルキル基を表す。
本明細書で使用される用語「アルキルスルホニル」は、Ｓ（Ｏ）２基を介して親分子基に結合したアルキル基を表す。
本明細書で使用される用語「アルキルチオ」は、イオウ原子を介して親分子基に結合したアルキル基を表す。
本明細書で使用される用語「アルキレン」は、２個の水素原子の除去により、直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素から誘導される飽和二価炭化水素基を表わし、メチレン、エチレン、イソプロピレン等により例示される。
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、特に明記されない限り、例えば、１個または複数の炭素−炭素二重結合を含有する２〜６個の炭素原子または２〜４個の炭素原子など、２〜１５個の炭素の一価直鎖基または分岐鎖基を表し、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル等により例示され、場合によっては、以下のものからなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で置換されていてもよい：（１）１〜６個の炭素原子のアルコキシ；（２）１〜６個の炭素原子のアルキルスルフィニル；（３）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル；（４）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（５）アミノ；（６）アリール；（７）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルコキシ；（８）アジド；（９）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル；（１０）ハロ；（１１）ヘテロシクリル；（１２）（複素環）オキシ；（１３）（複素環）オイル；（１４）ヒドロキシル；（１５）１〜６個の炭素原子のヒドロキシアルキル；（１６）Ｎ−保護アミノ；（１７）ニトロ；（１８）オキソまたはチオオキソ；（１９）１〜４個の炭素原子のペルフルオロアルキル；（２０）１〜４個の炭素原子のペルフルオロアルコキシル；（２１）３〜８個の炭素原子のスピロアルキル；（２２）１〜６個の炭素原子のチオアルコキシ；（２３）チオール；（２４）ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、式中、ＲＡは、（ａ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｄ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｅ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２５）Ｃ（Ｏ）ＲＢ、式中、ＲＢは、（ａ）水素、（ｂ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｅ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｆ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２６）ＣＯ２ＲＢ、式中、ＲＢは、（ａ）水素、（ｂ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｅ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｆ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２７）Ｃ（Ｏ）ＮＲＣＲＤ、式中、ＲＣおよびＲＤはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（２８）Ｓ（Ｏ）ＲＥ、式中、ＲＥは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル、および（ｄ）ヒドロキシルからなる群から選択される；（２９）Ｓ（Ｏ）２ＲＥ、式中、ＲＥは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル、および（ｄ）ヒドロキシルからなる群から選択される；（３０）Ｓ（Ｏ）２ＮＲＦＲＧ、式中、ＲＦおよびＲＧはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；および（３１）−ＮＲＨＲＩ、式中、ＲＨおよびＲＩはそれぞれ独立して、（ａ）水素；（ｂ）Ｎ−保護基；（ｃ）１〜６個の炭素原子のアルキル；（ｄ）２〜６個の炭素原子のアルケニル；（ｅ）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（ｆ）アリール；（ｇ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（ｈ）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル、（ｉ）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル、（ｊ）１〜６個の炭素原子のアルカノイル、（ｋ）６〜１０個の炭素原子のアリーロイル、（ｌ）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル、および（ｍ）６〜１０個の炭素原子のアリールスルホニルからなる群から選択されるが、２つの基がカルボニル基またはスルホニル基を介して窒素原子に結合していることはない。
本明細書で使用される用語「アルキニル」は、炭素−炭素三重結合を含む２〜６個の炭素原子の一価直鎖基または分岐鎖基を表わし、エチニル、１−プロピニル等より例示され、場合によっては、以下のものからなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で置換されていてもよい：（１）１〜６個の炭素原子のアルコキシ；（２）１〜６個の炭素原子のアルキルスルフィニル；（３）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル；（４）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（５）アミノ；（６）アリール；（７）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルコキシ；（８）アジド；（９）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル；（１０）ハロ；（１１）ヘテロシクリル；（１２）（複素環）オキシ；（１３）（複素環）オイル；（１４）ヒドロキシル；（１５）１〜６個の炭素原子のヒドロキシアルキル；（１６）Ｎ−保護アミノ；（１７）ニトロ；（１８）オキソまたはチオオキソ；（１９）１〜４個の炭素原子のペルフルオロアルキル；（２０）１〜４個の炭素原子のペルフルオロアルコキシル；（２１）３〜８個の炭素原子のスピロアルキル；（２２）１〜６個の炭素原子のチオアルコキシ；（２３）チオール；（２４）ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、式中、ＲＡは、（ａ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｄ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｅ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２５）Ｃ（Ｏ）ＲＢ、式中、ＲＢは、（ａ）水素、（ｂ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｅ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｆ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２６）ＣＯ２ＲＢ、式中、ＲＢは、（ａ）水素、（ｂ）置換または非置換Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）置換または非置換Ｃ６またはＣ１０アリール、（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ７〜１６アリールアルキル、（ｅ）置換または非置換Ｃ１〜９ヘテロシクリル、および（ｆ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む置換または非置換Ｃ２〜１５ヘテロシクリルアルキルからなる群から選択される；（２７）Ｃ（Ｏ）ＮＲＣＲＤ、式中、ＲＣおよびＲＤはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（２８）Ｓ（Ｏ）ＲＥ、式中、ＲＥは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル、および（ｄ）ヒドロキシルからなる群から選択される；（２９）Ｓ（Ｏ）２ＲＥ、式中、ＲＥは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル、および（ｄ）ヒドロキシルからなる群から選択される；（３０）Ｓ（Ｏ）２ＮＲＦＲＧ、式中、ＲＦおよびＲＧはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；および（３１）−ＮＲＨＲＩ、式中、ＲＨおよびＲＩはそれぞれ独立して、（ａ）水素；（ｂ）Ｎ−保護基；（ｃ）１〜６個の炭素原子のアルキル；（ｄ）２〜６個の炭素原子のアルケニル；（ｅ）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（ｆ）アリール；（ｇ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（ｈ）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル、（ｉ）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル、（ｊ）１〜６個の炭素原子のアルカノイル、（ｋ）６〜１０個の炭素原子のアリーロイル、（ｌ）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル、および（ｍ）６〜１０個の炭素原子のアリールスルホニルからなる群から選択されるが、２つの基がカルボニル基またはスルホニル基を介して窒素原子に結合していることはない。
本明細書で使用される用語「アリール」は、単環式および／もしくは二環式炭素環系ならびに／または縮合多環を表わし、フェニル、ナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、フルオレニル、インダニル、インデニル等により例示され、場合によっては、以下のものからなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換基で置換されていてもよい：（１）１〜６個の炭素原子のアルカノイル；（２）１〜６個の炭素原子のアルキル；（３）１〜６個の炭素原子のアルコキシ；（４）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルコキシアルキル；（５）１〜６個の炭素原子のアルキルスルフィニル；（６）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルキルスルフィニルアルキル；（７）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル；（８）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子で構成されるアルキルスルホニルアルキル；（９）アリール；（１０）アルキル基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（１１）アミノ；（１２）１〜６個の炭素原子のアミノアルキル；（１３）アリール；（１４）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（１５）アリーロイル；（１６）アジド；（１７）１〜６個の炭素原子のアジドアルキル；（１８）カルボキサルデヒド；（１９）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む（カルボキサルデヒド）アルキル；（２０）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル；（２１）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル；（２２）ハロ；（２３）１〜６個の炭素原子のハロアルキル；（２４）ヘテロシクリル；（２５）（ヘテロシクリル）オキシ；（２６）（ヘテロシクリル）オイル；（２７）ヒドロキシ；（２８）１〜６個の炭素原子のヒドロキシアルキル；（２９）ニトロ；（３０）１〜６個の炭素原子のニトロアルキル；（３１）Ｎ−保護アミノ；（３２）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むＮ−保護アミノアルキル；（３３）オキソ；（３４）１〜６個の炭素原子のチオアルコキシ；（３５）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むチオアルコキシアルキル；（３６）（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ、式中、ｑは０〜４の範囲の整数であり、ＲＡは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、および（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３７）（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）ＮＲＢＲＣ、式中、ＲＢおよびＲＣは独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３８）（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）２ＲＤ、式中、ＲＤは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、および（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３９）（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）２ＮＲＥＲＦ、式中、ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（４０）（ＣＨ２）ｑＮＲＧＲＨ、式中、ＲＧおよびＲＨはそれぞれ独立して、（ａ）水素；（ｂ）Ｎ−保護基；（ｃ）１〜６個の炭素原子のアルキル；（ｄ）２〜６個の炭素原子のアルケニル；（ｅ）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（ｆ）アリール；（ｇ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（ｈ）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル、および（ｉ）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル、からなる群から選択されるが、２つの基がカルボニル基またはスルホニル基を介して窒素原子に結合していることはない；（４１）オキソ；（４２）チオール；（４３）ペルフルオロアルキル；（４４）ペルフルオロアルコキシ；（４５）アリールオキシ；（４６）シクロアルコキシ；（４７）シクロアルキルアルコキシ；（４８）アリールアルコキシ、ならびに（４９）チオハロアルキル。
用語「アラルキル」は、アルキル基を介して親分子基に結合したアリール基を表す。
用語「アルクヘテロシクリル」は、アルキル基を介して親分子基に結合した複素環基を表す。
本明細書で使用される用語「アリールオキシ」は、酸素原子を介して親分子基に結合したアリール基を表す。
本明細書で使用される用語「アルコキシアルキル」は、アルキルが上記に定義されているアルキル−Ｏ−アルキル−を意味する。
本明細書で使用される用語「アルコキシアリール」は、アルキルが上記に定義されているアルキル−Ｏ−アリール−を意味する。
本明細書で使用される用語「チオアルキル」は、アルキルが上記に定義されているアルキル−Ｓ−を意味する。
本明細書で使用される用語「アルクチオアルキル」は、アルキルが上記に定義されているアルキル−Ｓ−アルキル−を意味する。
本明細書で使用される用語「アルクチオアリール」は、アルキルが上記に定義されているアルキル−Ｓ−アリール−を意味する。
本明細書で互換的に使用される用語「アリーロイル」または「アロイル」は、カルボニル基を介して親分子基に結合したアリール基を表す。
本明細書で使用される用語「カルボニル」は、Ｃ＝Ｏとしても表すことができるＣ（Ｏ）を表す。
本明細書で互換的に使用される用語「カルボキシ」または「カルボキシル」は、ＣＯ２Ｈ基を表す。
本明細書で使用される用語「シクロアルキル」は、特に明記されない限り、３〜８個の炭素原子の一価飽和または不飽和非芳香族環式炭化水素基を表し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ビシクロ［２．２．１．］ヘプチル等により例示される。本開示のシクロアルキル基は、場合によっては以下のもので置換されていてもよい：（１）１〜６個の炭素原子のアルカノイル；（２）１〜６個の炭素原子のアルキル；（３）１〜６個の炭素原子のアルコキシ；（４）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルコキシアルキル；（５）１〜６個の炭素原子のアルキルスルフィニル；（６）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルキルスルフィニルアルキル；（７）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル；（８）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルキルスルホニルアルキル；（９）アリール；（１０）アルキル基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（１１）アミノ；（１２）１〜６個の炭素原子のアミノアルキル；（１３）アリール；（１４）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（１５）アリーロイル；（１６）アジド；（１７）１〜６個の炭素原子のアジドアルキル；（１８）カルボキサルデヒド；（１９）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む（カルボキサルデヒド）アルキル；（２０）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル；（２１）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル；（２２）ハロ；（２３）１〜６個の炭素原子のハロアルキル；（２４）ヘテロシクリル；（２５）（ヘテロシクリル）オキシ；（２６）（ヘテロシクリル）オイル；（２７）ヒドロキシ；（２８）１〜６個の炭素原子のヒドロキシアルキル；（２９）ニトロ；（３０）１〜６個の炭素原子のニトロアルキル；（３１）Ｎ−保護アミノ；（３２）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むＮ−保護アミノアルキル；（３３）オキソ；（３４）１〜６個の炭素原子のチオアルコキシ；（３５）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むチオアルコキシアルキル；（３６）（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ、式中、ｑは０〜４の範囲の整数であり、ＲＡは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、および（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３７）（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）ＮＲＢＲＣ、式中、ＲＢおよびＲＣはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３８）（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）２ＲＤ、式中、ＲＤは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、および（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３９）（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）２ＮＲＥＲＦ、式中、ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（４０）（ＣＨ２）ｑＮＲＧＲＨ、式中、ＲＧおよびＲＨはそれぞれ独立して、（ａ）水素；（ｂ）Ｎ−保護基；（ｃ）１〜６個の炭素原子のアルキル；（ｄ）２〜６個の炭素原子のアルケニル；（ｅ）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（ｆ）アリール；（ｇ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（ｈ）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル、および（ｉ）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル、からなる群から選択されるが、２つの基がカルボニル基またはスルホニル基を介して窒素原子に結合していることはない；（４１）オキソ；（４２）チオール；（４３）ペルフルオロアルキル；（４４）ペルフルオロアルコキシ；（４５）アリールオキシ；（４６）シクロアルコキシ；（４７）シクロアルキルアルコキシ；および（４８）アリールアルコキシ。
本明細書で互換的に使用される用語「ハロゲン」または「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩを表す。
本明細書で使用される用語「ヘテロアリール」は、芳香族（すなわち、単環式または多環式環系内に４ｎ＋２π電子を含有する）である、本明細書で定義されるヘテロシクリルのサブセットを表す。
本明細書で互換的に使用される用語「複素環」または「ヘテロシクリル」は、特に明記されない限り、窒素、酸素、およびイオウからなる群から独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を含む５員環、６員環、または７員環を表す。５員環には０〜２個の二重結合があり、６員環および７員環には０〜３個の二重結合がある。用語「複素環」はまた、任意の上記複素環式環が、アリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、およびインドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル等の別の単環式複素環からなる群から独立して選択される１つまたは２つの環に縮合している、二環式基、三環式基、および四環式基を含む。複素環としては、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジン、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピラジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホルニル、チオモルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、フリル、チエニル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソインダゾイル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル、ウリシル、チアジアゾリル、ピリミジル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロインドリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル等が挙げられる。複素環基はまた、式
［式中、Ｆ’はＣＨ２、ＣＨ２Ｏ、およびＯからなる群から選択され、Ｇ’は、Ｃ（Ｏ）および（Ｃ（Ｒ’）（Ｒ”））ｖ（式中、Ｒ’およびＲ”はそれぞれ独立して、水素、および１〜４個の炭素原子のアルキルからなる群から選択され、ｖは１〜３の範囲の整数である）からなる群から選択される］の化合物を含み、１，３−ベンゾジオキソリル、１、４−ベンゾジオキサニル等の基を含む。本明細書に記載の任意の複素環基は、場合によっては、以下のものからなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの置換基で置換されていてもよい：（１）１〜６個の炭素原子のアルカノイル；（２）１〜６個の炭素原子のアルキル；（３）１〜６個の炭素原子のアルコキシ；（４）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルコキシアルキル；（５）１〜６個の炭素原子のアルキルスルフィニル；（６）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルキルスルフィニルアルキル；（７）１〜６個の炭素原子のアルキルスルホニル；（８）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むアルキルスルホニルアルキル；（９）アリール；（１０）アルキル基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（１１）アミノ；（１２）１〜６個の炭素原子のアミノアルキル；（１３）アリール；（１４）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（１５）アリーロイル；（１６）アジド；（１７）１〜６個の炭素原子のアジドアルキル；（１８）カルボキサルデヒド；（１９）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含む（カルボキサルデヒド）アルキル；（２０）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル；（２１）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル；（２２）ハロ；（２３）１〜６個の炭素原子のハロアルキル；（２４）複素環；（２５）（複素環）オキシ；（２６）（複素環）オイル；（２７）ヒドロキシ；（２８）１〜６個の炭素原子のヒドロキシアルキル；（２９）ニトロ；（３０）１〜６個の炭素原子のニトロアルキル；（３１）Ｎ−保護アミノ；（３２）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むＮ−保護アミノアルキル；（３３）オキソ；（３４）１〜６個の炭素原子のチオアルコキシ；（３５）アルキル基およびアルキレン基が独立して１〜６個の炭素原子を含むチオアルコキシアルキル；（３６）（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ、式中、ｑは０〜４の範囲の整数であり、ＲＡは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、および（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３７）（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）ＮＲＢＲＣ、式中、ＲＢおよびＲＣはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３８）（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）２ＲＤ、式中、ＲＤは、（ａ）アルキル、（ｂ）アリール、および（ｃ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（３９）（ＣＨ２）ｑＳ（Ｏ）２ＮＲＥＲＦ、式中、ＲＥおよびＲＦはそれぞれ独立して、（ａ）水素、（ｂ）アルキル、（ｃ）アリール、および（ｄ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキルからなる群から選択される；（４０）（ＣＨ２）ｑＮＲＧＲＨ、式中、ＲＧおよびＲＨはそれぞれ独立して、（ａ）水素；（ｂ）Ｎ−保護基；（ｃ）１〜６個の炭素原子のアルキル；（ｄ）２〜６個の炭素原子のアルケニル；（ｅ）２〜６個の炭素原子のアルキニル；（ｆ）アリール；（ｇ）アルキレン基が１〜６個の炭素原子を含むアリールアルキル；（ｈ）３〜８個の炭素原子のシクロアルキル、および（ｉ）シクロアルキル基が３〜８個の炭素原子を含み、アルキレン基が１〜１０個の炭素原子を含むアルクシクロアルキル、からなる群から選択されるが、２つの基がカルボニル基またはスルホニル基を介して窒素原子に結合していることはない；（４１）オキソ；（４２）チオール；（４３）ペルフルオロアルキル；（４４）ペルフルオロアルコキシ；（４５）アリールオキシ；（４６）シクロアルコキシ；（４７）シクロアルキルアルコキシ；および（４８）アリールアルコキシ。
本明細書で互換的に使用される用語「ヘテロシクリルオキシ」または「（複素環）オキシ」は、酸素原子を介して親分子基に結合した、本明細書に定義される複素環基を表す。
本明細書で互換的に使用される用語「ヘテロシクリルオイル」または「（複素環）オイル」は、カルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書に定義される複素環基を表す。
本明細書で使用される用語「アミノ酸」は、天然アミノ酸のＬおよびＤ異性体の両方ならびにペプチドの合成類似体を調製するためにペプチド化学で使用される他の非タンパク質性アミノ酸を含むものと理解される。天然アミノ酸の例としては、これらに限定されないが、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、およびスレオニンが挙げられる。非タンパク質性アミノ酸の例としては、これらに限定されないが、ノルロイシン、ノルバリン、シクロヘキシルアラニン、ビフェニルアラニン、ホモフェニルアラニン、ナフチルアラニン、ピリジンアラニン、および置換フェニルアラニン（これらに限定されないが、アルコキシ基、ハロゲン基、およびニトロ基を含む、１つまたは複数の置換基で置換された）が挙げられる。ベータおよびガンマアミノ酸もまた、用語「アミノ酸」の範囲内である。ペプチド合成で一般に使用される標準的な保護基で保護されたアミノ酸もまた、用語「アミノ酸」の範囲内である。これらの化合物はペプチド化学の当業者には公知である。
本明細書で使用される用語「オキソ」は、＝Ｏを表す。
本明細書で使用される用語「ペルフルオロアルキル」は、アルキル基に結合した各水素ラジカルがフッ化物ラジカルで置換されている、本明細書に定義されるアルキル基を表す。ペルフルオロアルキル基は、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル等により例示される。
本明細書で使用される用語「ヘテロ原子」は、酸素、イオウ、または窒素であると理解される。
本明細書で使用される用語「スルホニル」は、Ｓ（Ｏ）２基を表わす。
本明細書で使用される用語「チオアルコキシ」は、イオウ原子を介して親分子基に結合したアルキル基を表す。代表的な非置換チオアルコキシ基は、１〜６個の炭素原子を含む。
本明細書で使用される用語「チオカルボニル」は、Ｃ＝Ｓとしても表すことができるＣ（Ｓ）を表す。
本明細書で使用される用語「薬学的に許容可能な塩」は、健全な医学判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応等がなしにヒトの組織に接触させて使用するのに適し、かつ妥当な有益性／リスク比に相応するような塩を指す。薬学的に許容可能な塩は当技術分野で周知である。塩は、化合物の最終単離の間にその場で調製しても、または遊離の塩基または酸官能基をそれぞれ適切な有機の酸または塩基と反応させることによって別個に調製してもよい。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコビル酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられる。塩基付加塩は、カルボキシ基（または他の酸成分）を、金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩、もしくは炭酸水素塩などの適切な塩基と、またはアンモニアもしくは有機一級、二級、もしくは三級アミンと反応させることにより、化合物の最終的な単離および精製の間に調製することができる。薬学的に許容可能な塩の陽イオンとしては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、１−エフェナミン、およびＮ，Ｎ’ジベンジルエチレンジアミンなどの無毒な四級アミン陽イオンが挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンとしては、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、およびピペラジンが挙げられる。
１７β−ＨＳＤ１
Ｉの３位に近接する結合ポケット中でさらなる相互作用（水素結合または疎水的相互作用）を得るために、したがって、Ｉと１７β−ＨＳＤ１との結合を向上させるために、種々の官能基および種々の長さの側鎖が探索された（スキーム１）。さらに、Ｃ３位のＯＨを置換すると、ＥＲへの結合が妨害されて、望ましくないエストロゲン様活性が除去され得るであろうと広く推測されている。実際、フェノール性ＯＨは、ＥＲ結合のための決定的な必要条件であるように見える３８。ＳＡＲ（構造活性相関）研究に基づいて、Ｉの数多くのＣ３誘導体が調製および試験されており、それらの例として、化合物ＩＩ−Ｖ（スキーム１）が挙げられる。Ｃ３のこの改変により、１７β−ＨＳＤ１の結合ポケット中にさらなる相互作用を有する化合物が得られ、したがって、それらの結合が向上すると同時に、Ｉに観察された望ましくないエストロゲン様活性が除去されるであろうと推測された。
化合物ＩＩおよびＩＩＩは、３−カルボキシ−エストロンから合成された。３９ ベンジルカルバミド側鎖が、３−ホルミルベンズアミドとのアルドール縮合反応によってＣ１６位に導入された４０，４１。次いで、Ｃ１７ケトンが水素化ホウ素ナトリウムを使用して還元され、続いて、１６−エキソ二重結合が木炭（１０％）上のＰｄ（１０％）による水素添加を使用して還元された。次いで、３−カルボン酸がＢＯＰを用いて活性化され、水素化ホウ素ナトリウムを使用する還元が促進されて、対応するアルコールＩＩが得られた。続いて、アルコールＩＩはトリフェニルホスフィンおよび四臭化炭素を使用して臭素化され、ブロモメチル臭化物誘導体ＩＩＩが得られた（スキーム２）。
化合物ＩＶおよびＶは、エストロントリフレートのカルボニル的ビニル化（ｃａｒｂｏｎｙｌａｔｉｖｅ ｖｉｎｙｌａｔｉｏｎ）およびその後のＣ１７ジオキソラン保護から容易に得られる３−ビニル−１７−ジオキソラン−エストロン（１）から合成された４２。ビニル基は、最初に、ＢＨ３−ＤＭＳを使用する酸化的ヒドロホウ素化により一級アルコール２に変換された４３。続いて、アルコール２は、ベンジルエーテルとして保護され、その後酸性条件下でジオキソランが脱保護され、３が得られた。ベンジルカルバミド側鎖が、３−ホルミルベンズアミドとのアルドール縮合反応によりＣ１６位に導入された。次いで、Ｃ１７ケトンが水素化ホウ素ナトリウムを使用して還元され、続いて１６−エキソ二重結合が木炭（１０％）上のＰｄ（１０％）による水素添加を使用して還元された。水素添加反応により、３−Ｏ−ベンジルエーテルが同時に切断され、ｍ−１６β−カルバモイルベンジル誘導体ＩＶが得られた。続いて、アルコールＩＶはトリフェニルホスフィンおよび四臭化炭素を使用して臭素化され、ブロモエチル誘導体Ｖが得られた（スキーム２）。
スキーム２：試薬および条件：（ａ）３−カルボキサミド−ベンズアルデヒド、ＫＯＨ、ＥｔＯＨ、ｒｔ；（ｂ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ；（ｃ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨ；（ｄ）１）ＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、ｒｔ；２）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ；（ｅ）ＰＰｈ３、ＣＢｒ４、ＤＣＭ、ｒｔ；（ｆ）１）ＢＨ３−ＤＭＳ、ＴＨＦ、−７８℃；２）Ｈ２Ｏ２、ＮａＨＣＯ３；（ｇ）ＮａＨ、臭化ベンジル、ＤＭＦ；（ｈ）１０％ ＨＣｌ：アセトン（１：１）
ＩのさらなるＣ３誘導体が、本明細書の以下のスキーム３〜１４に図示するように調製された。
本開示の一実施形態では、下記の構造
［式中、Ｒは、−ＯＨ、ハロ、−ＮＨ２、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アラルキル、カルボキシ、−ＣＨ２−ヘテロシクリル、ヘテロシクリロイル、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、または−Ｂ（ＯＨ）２（式中、Ｒ’およびＲ”は、独立してまたは同時にＨもしくはアルキルであるか、またはＲ’およびＲ”は、それらが結合する窒素原子と共に互いに結合して複素環を形成する）である］を有する１７β−ＨＳＤ１阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体が含まれる。
一実施形態では、１７β−ＨＳＤ１阻害剤は化合物Ｖ、またはその薬学的に許容可能な塩である。一実施形態では、阻害剤は、化合物Ｖの対応する塩酸（ＨＣｌ）塩、または化合物Ｖのカルボキサミド成分上の他の酸付加塩である。
別の実施形態では、１７β−ＨＳＤ１阻害剤は、下記の構造
［式中、Ｘは、Ｉ１２３、Ｉ１２５、Ｉ１３１、またはＢｒ７６である］を有する化合物Ｖの放射標識誘導体である。
別の実施形態では、１７β−ＨＳＤ１阻害剤は、下記の構造
［式中、ＸはＩ１２３、Ｉ１２５、Ｉ１３１、またはＢｒ７６である］を有する化合物Ｖの放射標識誘導体である。
別の実施形態では、放射標識が、化合物Ｖのステロイド核上の適切な位置に配置されて（例えば、Ｉ１２３、Ｉ１２５、Ｉ１３１またはＢｒ７６）、さらなる放射標識誘導体が提供される。
子宮内膜癌など、１７β−ＨＳＤを発現する任意の他の癌に加えて、乳癌および前立腺癌は、１７β−ＨＳＤを発現することが知られているので、上記に示されるような化合物Ｖの放射標識誘導体は、乳癌および前立腺癌の放射性イメージングおよび放射線治療に有用である。
別の実施形態では、１７β−ＨＳＤ１阻害剤は、下記の構造
を有する化合物Ｖのアルファ−アセチレン誘導体である。
生物活性
化合物Ｉ〜Ｖについて、内在性の１７β−ＨＳＤ１を発現することが周知の細胞株であるＴ−４７Ｄ細胞における、１７β−ＨＳＤ１によるＥ１のＥ２への変換を阻害する、それらの能力が試験された（表１）。エストロゲン枯渇状態のエストロゲン感受性ＭＣＦ−７細胞の増殖に対する阻害剤の効果も評価された（表１）。アルコール系列では、ステロイド構造のＡ環から遠方にヒドロキシルが延びると、阻害効力に対して負の効果がもたらされ、０．１μＭで試験された場合、フェノールＩの６６％からメチルアルコールＩＩの３７％およびエチルアルコールＩＶの１７％まで値が減少することが観察された。これらの結果およびより低濃度（０．０１μＭ）で得られた結果から、１７β−ＨＳＤ１の結合ポケット中に、さらなる相互作用が得られなかったという事実が浮き彫りになる。ブロモアルキル誘導体のＩＩＩおよびＶは、より有望であることが判明した。実際、Ｖの阻害活性（ＩＣ５０＝６８ｎＭ）は基準阻害剤Ｉ（ＩＣ５０＝２７ｎＭ）よりもわずか２倍の低下であった。より重要なことは、エストロゲン様活性が、Ｃ３側鎖の存在により大幅に調節されることである（図１）。Ｃ３位にヒドロキシルを有する化合物Ｉは、０．１μＭ〜５μＭの範囲の濃度でエストロゲン感受性ＭＣＦ−７細胞を強力に刺激した。ステロイド構造のＡ環から遠方にヒドロキシルが延びると（化合物ＩＩ）、化合物のエストロゲン性は大幅に低下するが、０．５ｍＭ〜５μＭの範囲の用量では、顕著なエストロゲン様活性が維持される。ヒドロキシルがさらにメチレン単位延びると（化合物ＩＶ）、いかなるエストロゲン様活性も完全に除去された。対応する臭化物（化合物Ｖ）についても同じ観察がなされ、０．５μＭ〜５μＭの範囲のいかなる濃度でもエストロゲン性が示されなかった。
化合物Ｖが最も活性な阻害剤であることが判明し、Ｃ３位に導入された疎水性鎖が１７β−ＨＳＤ１に許容されることが実証された。最も重要なことには、Ｉのヒドロキシル基のＶの疎水性鎖による置換が、阻害活性のほんの軽微な低下をもたらすものの、いかなる残存エストロゲン様活性の除去にも極めて効果的であることが判明した。Ｖの極めて良好な阻害活性（ＩＣ５０＝６８ｎＭ）を考慮し、かつより重要なことにはエストロゲン感受性乳癌細胞上で観察されるいかなるエストロゲン様効果もないことを考慮すると、Ｖは、１７β−ＨＳＤ１を標的とするｉｎ ｖｉｖｏ研究に対する優れた候補である。
化合物Ｖはまた、ヒトエストロゲン受容体アルファ上の競合的結合アッセイにおいて、エストラジオールと共に試験された。図２は、化合物Ｖがすべての濃度で受容体に結合する競合的結合を示す。
化合物Ｖはまた、５ｎＭ〜２０μＭにわたる試験濃度で、Ｅ２をＥ１に変換する１７β−ＨＳＤ２酵素について試験され、この酵素に対する阻害がないことが実証された。
化合物Ｖはまた、ＣＹＰ３Ａ４について試験され、化合物Ｉに対する１．５２±０．２９μＭと比較して、４、０６±０．５７μＭのＩＣ５０を示した。
化合物７〜１０、１５、１９、２４、２５、２９、３１、３２、３６〜４１、４６、５０、５７、および６１について、内在性の１７β−ＨＳＤ１を発現することが周知の細胞株であるＴ−４７Ｄ細胞における、１７β−ＨＳＤ１によるＥ１のＥ２への変換を阻害するそれらの能力が試験された（表２）。エストロゲン枯渇状態のエストロゲン感受性ＭＣＦ−７細胞の増殖に対する阻害剤の効果も評価された（表２）。
実験
材料、方法、合成、および特性評価
化学試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａｎａｄａ Ｌｔｄ．（Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）から購入した。通常の溶媒は、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）から入手し、そのまま使用した。無水ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）およびフラッシュカラムクロマトグラフィーはそれぞれ、０．２０ｍｍのシリカゲル６０ Ｆ２５４プレート上、および２３０〜４００メッシュのＡＳＴＭシリカゲル６０（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ；Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で実施した。赤外スペクトル（ＩＲ）は、Ｈｏｒｉｚｏｎ ＭＢ ３０００ ＡＢＢ ＦＴ−ＩＲスペクトロメータを使用して記録し、重要なバンドをｃｍ−１で報告した。核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００デジタルスペクトロメータ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して、１Ｈについては４００ＭＨｚ、１３Ｃについては１００．６ＭＨｚで記録した。化学シフト（δ）は、ｐｐｍで表現し、１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲについてそれぞれ、クロロホルム（７．２６および７７．０ｐｐｍ）、アセトン（２．０６および２９．２４ｐｐｍ）またはメタノール（３．３１ｐｐｍおよび４９．０）を基準とした。低解像度質量スペクトル（ＬＲＭＳ）は、ターボイオンスプレー源を装備したＰＥ Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ−１５０ｅｘ装置（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して記録し、ｍ／ｚで表現した。高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、Ｄｅｐａｒｔｅｍｅｎｔ ｄｅ Ｃｈｉｍｉｅ ｄｅ ｌ’Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｌａｖａｌ（Ｑｕｅｂｅｃ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）でＰｉｅｒｒｅ Ａｕｄｅｔにより提供された。化合物の純度は、Ｌｕｎａフェニルヘキシルカラム（７５×４．６ｍｍ ｉｄ、３μｍ、シリアルＮ°：３３８０４８−２、６０Å）またはＮｏｖａ Ｐａｋ Ｃ１８逆相カラム（１５０ｍｍ×３．０ｍｍ ｉｄ、４μｍ、６０Å）を使用する高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Ｗａｔｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）により決定した。
細胞培養
ＥＲ陽性乳癌細胞株のＴ−４７ＤおよびＭＣＦ−７細胞は、米国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）から入手し、５％ＣＯ２、加湿雰囲気下、３７℃にて１７５ｃｍ２培養フラスコ中で維持した。Ｔ−４７Ｄ細胞は、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ−グルタミン（２ｎＭ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、およびエストラジオール（１ｎＭ）添加のＲＰＭＩ培地中で増殖させた。ＭＣＦ−７細胞は、５％ＦＢＳ、グルタミン（２ｎＭ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、およびエストラジオール（１ｎＭ）添加のＤｕｂｅｌｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ−１２ ＨＡＭ（ＤＭＥＭ−Ｆ１２）培地中で増殖させた。
Ｔ−４７Ｄ細胞における１７β−ＨＳＤ１の阻害
Ｔ−４７Ｄ細胞を、インスリン（５０ｎｇ／ｍＬ）と、１０％ＦＢＳではなく、残存ホルモンを除去するためにデキストラン被覆炭で処理された５％ＦＢＳとを添加した培地中、２４ウェルプレート（３０００細胞／ウェル）に播種した。２４時間後、細胞を６０ｎＭの［１４Ｃ］−エストロン（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，Ｕ．Ｓ．Ａ）と共にインキュベートした。すべての阻害剤について０．０１μＭおよび０．１μＭ濃度の阻害剤のエタノール溶液（０．５％ｖ／ｖ）を新たに交換した培地に加え、２４時間にわたり細胞をインキュベートした。最も活性な阻害剤については、０．０１μＭ〜１０μＭの濃度範囲で試験して、それらのＩＣ５０値を決定した。阻害剤はそれぞれ三つ組で評価した。インキュベーション後、培地を取り出し、標識ステロイド（Ｅ１およびＥ２）を１ｍＬのジエチルエーテルで抽出した。有機相を分離し、窒素を使用して蒸発乾固した。残査をジクロロメタンに溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフィープレート（ＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）上に滴下し、トルエン／アセトン（４：１）溶媒系で溶出した。基質［１４Ｃ］−Ｅ１および代謝産物［１４Ｃ］−Ｅ２を、基準ステロイドと比較して同定し、Ｓｔｏｒｍ ８６０システム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して定量した。変換および阻害のパーセントは以下のように算出した：％変換＝１００×［１４Ｃ］−Ｅ２／（［１４Ｃ］Ｅ１＋［１４Ｃ］Ｅ２）および阻害の％＝１００×（阻害剤なしの％変換−阻害剤ありの％変換）／阻害剤なしの％変換。
ＭＣＦ−７細胞におけるエストロゲン様活性
ＭＣＦ−７細胞を、インスリン（５０ｎｇ／ｍＬ）と、１０％ＦＢＳではなく、残存ホルモンを除去するためにデキストラン被覆炭で処理された５％ＦＢＳとを添加した培地と共に播種した。細胞懸濁液のアリコート（１００μＬ）を９６ウェルプレート（３０００細胞／ウェル）に播種した。４８時間後、培地を、試験される生成物を適切な濃度で含有する新たな培地と交換し、さらに２日ごとに交換した。化合物の非存在下または存在下のいずれかで、７日間にわたり細胞を増殖させた。細胞増殖の定量は、製造業者の説明書に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｎｅｐｅａｎ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）を使用して行った。増殖（エストロゲン様）活性を決定するために、表示濃度の試験化合物の非存在下（１００％とする対照）または存在下で、細胞を増殖させた。
化合物Ｖに関するＥＲアルファ結合アッセイ
精製された完全長組換えヒトＥＲａ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を使用する競合的結合アッセイを、以前に記載されたように（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００８，１０８，２３−３１；Ａｒｃａｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９９，７２，９４−１０２）実施した。手短に言えば、各反応は、１００μＬの全反応容量で、アッセイ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１．５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭジチオスレイトール、１０％グリセロール、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、ｐＨ７．５）中の１．２ｎＭ ｒｈＥＲａおよび２．５ｎＭ ［３Ｈ］エストラジオールと、種々の濃度の化合物または非放射性エストラジオールとからなっていた。非特異的結合は、過剰量の非放射性エストラジオール（１μＭ）とインキュベートすることにより決定した。４℃で一晩インキュベートした後、１００μｌの冷５０％ヒドロキシアパタイトスラリーを加えて、受容体／リガンド複合体を結合させた。１５分後、１ｍＬの洗浄緩衝液（４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１００ｍＭ ＫＣｌ、ｐＨ７．４）を加え、チューブを４℃で５分間、４５００ｒｐｍで遠心分離した。洗浄工程を２回繰り返した。ペレットの放射活性を、室温で１時間、１ｍＬのエタノールとインキュベートすることにより抽出した。次いで、懸濁液を１０ｍＬのＢｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔに入れ、Ｗａｌｌａｃ １４１１ Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒで放射活性をカウントした。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５を使用して求め、ＲＢＡ値を以下の式を使用して得た：（１７β−エストラジオールのＩＣ５０／化合物のＩＣ５０）×１００。
化合物Ｖによる１７β−ＨＳＤ２の阻害
阻害アッセイは、２４ウェルプレートを使用し、ウェル当たり５０００細胞を用い、安定な１７β−ＨＳＤ２ ＨＥＫ−２９３トランスフェクト無傷細胞を使用して実施した（Ｐｏｉｒｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，２００１，１７１，１１９−１２８）。１ｍＬのＭＥＭ培地（ステロイドを含まない）中で、３７℃にて１時間、６０ｎＭ Ｃ１４エストラジオールと細胞をインキュベートした。次いで、１７β−ＨＳＤ１酵素活性について以前に記載のように、ステロイドを抽出、定量、および分離し、％阻害を算出した（Ｔｒｅｍｂｌａｙ ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｎｈｉｂ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００５，２０，１５３−１６３）。化合物Ｖは、５ｎＭ〜２０μＭにわたる試験濃度において、Ｅ２のＥ１への変換について１７β−ＨＳＤ２酵素をまったく阻害しなかった。
化合物ＶによるＣＹＰ３Ａ４の阻害
ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入したＰ４５０ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＣＹＰ３Ａ４／ＤＢＦを、５％ＤＭＳＯ／９５％アセトニトリルの混合物に化合物Ｖを溶解したことを除いて、会社の推奨どおりに使用した。
化合物ＶによるＣＹＰ３Ａ４の阻害は、化合物Ｉの場合の１．５２±０．２９μＭと比較して、４．０６±０．５７μＭのＩＣ５０を示し、弱いことが実証された。
化合物Ｖによる、乳癌細胞株における１７β−ＨＳＤ１の阻害
ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究−細胞培養
乳癌細胞株Ｔ−４７Ｄを米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手し、５％ＣＯ２、加湿雰囲気下、３７℃にて１７５ｃｍ２培養フラスコ中で維持した。１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ−グルタミン（２ｎＭ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、およびエストラジオール（１ｎＭ）添加のＲＰＭＩ培地中で細胞を増殖させた。
１７β−ＨＳＤ１の阻害アッセイ
Ｔ−４７Ｄ細胞を、インスリン（５０ｎｇ／ｍＬ）と、未処理１０％ＦＢＳではなく、残存するステロイドホルモンを除去するためにデキストラン被覆炭で処理された５％ＦＢＳとを添加した培地９９０μＬ中で、２４ウェルプレート（３０００細胞／ウェル）に播種した。阻害剤化合物ＩおよびＶの原液を、予めエタノールで調製し、使用前に適切な濃度になるように培地で希釈した。２４時間インキュベーション後に、５μＬの希釈溶液を、１ｎＭ〜１０μＭの範囲の最終濃度が得られるように細胞に加え、ＩＣ５０値を決定した。ウェル中のエタノールの最終濃度を０．１％に調整した。さらに、［１４Ｃ］−エストロン（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）の溶液５μＬを、６０ｎＭの最終濃度が得られるように加えた。細胞を２４時間インキュベートし、各阻害剤を三つ組で評価した。インキュベーション後、培地を取り出し、標識ステロイド（Ｅ１およびＥ２）を、１ｍＬのジエチルエーテルで抽出した。有機相を窒素で蒸発乾固した。残査をジクロロメタンに溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフィープレート（ＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）上に滴下し、溶媒系としてトルエン／アセトン（４：１）を用いて溶出した。基質［１４Ｃ］−Ｅ１および代謝産物［１４Ｃ］−Ｅ２を、基準ステロイド（Ｅ１およびＥ２）と比較して同定し、Ｓｔｏｒｍ ８６０システム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して定量した。変換のパーセントおよび阻害のパーセントを以下のように算出した：％変換＝１００×［１４Ｃ］−Ｅ２／（［１４Ｃ］Ｅ１＋［１４Ｃ］Ｅ２）および阻害の％＝１００×（阻害剤なしの％変換−阻害剤ありの％変換）／阻害剤なしの％変換（Ｔｒｅｍｂｌａｙ ＭＲ，Ｂｏｉｖｉｎ ＲＰ，Ｌｕｕ−Ｔｈｅ Ｖ，Ｐｏｉｒｉｅｒ Ｄ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ：ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ３ ａｎｄ ６ ｏｆ ｅｓｔｒａｄｉｏｌ．Ｊ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｎｈｉｂ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００５；２０：１５３−６３；Ｃａｄｏｔ Ｃ，Ｌａｐｌａｎｔｅ Ｙ，Ｋａｍａｌ Ｆ，Ｌｕｕ−Ｔｈｅ Ｖ，Ｐｏｉｒｉｅｒ Ｄ．Ｃ６−（Ｎ，Ｎ−ｂｕｔｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ−ｈｅｐｔａｎａｍｉｄｅ）ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ ｅｓｔｒｏｎｅ ａｎｄ ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００７；１５：７１４−２）。
細胞増殖アッセイ（１７β−ＨＳＤ１阻害活性、エストロゲン様活性、および抗エストロゲン活性）
細胞増殖の定量は、製造業者の説明書に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｎｅｐｅａｎ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）を使用して行った。Ｔ−４７Ｄ細胞を、インスリン（５０ｎｇ／ｍＬ）と、１０％ＦＢＳではなく、残存ホルモンを除去するためにデキストラン被覆炭で処理された５％ＦＢＳとを添加した培地に再懸濁した。細胞懸濁液のアリコート（１００μＬ）を９６ウェルプレート（３０００細胞／ウェル）に播種した。４８時間後、培地を、試験される生成物を適切な濃度で含有する新たな培地と交換し、さらに２日ごとに交換した。化合物の非存在下または存在下のいずれかで、細胞を７日間増殖させた。増殖（エストロゲン様）活性を決定するために、エストロゲン感受性Ｔ−４７Ｄ細胞を、０．５〜１０μＭで試験される化合物の非存在下（基礎細胞増殖を１００％とした）または存在下で増殖させた。効力のあるエストロゲンＥ２を基準対照として使用した。Ｅ１誘導細胞増殖の阻害を決定するために、Ｔ−４７Ｄ細胞を、阻害剤なしで（対照）、または０．５、１、２．５、および５μＭの濃度の阻害剤と共に、Ｅ１（０．１ｎＭ）の存在下で増殖させた。Ｅ１なし±阻害剤（対照）での細胞増殖を１００％とした。阻害剤化合物Ｖの潜在的な抗エストロゲン活性を決定するために、Ｔ−４７Ｄ（ＥＲ＋）細胞を、エストロゲンＥ２（０．１ｎＭ）および純粋な抗エストロゲンＥＭ−１３９（０．５μＭ）［３４］または阻害剤化合物Ｖ（０．５μＭ）の存在下で増殖させた。Ｅ２および試験化合物の非存在下の細胞増殖（対照）を１００％とした。
ＥＲα結合アッセイ
精製された完全長組換えヒトＥＲα（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を使用する競合的結合アッセイ。手短に言えば、各反応は、１００μＬの全反応容量で、アッセイ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１．５ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭジチオスレイトール、１０％グリセロール、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、ｐＨ７．５）中の１．２ｎＭ ｒｈＥＲαおよび２．５ｎＭ ［３Ｈ］エストラジオールと、種々の濃度の化合物または非トリチウム標識エストラジオール（Ｅ２）とからなっていた。非特異的結合は、過剰量のＥ２（１μＭ）とインキュベートすることにより決定した。４℃で一晩インキュベートした後、１００μｌの冷５０％ヒドロキシアパタイトスラリーを加えて、受容体／リガンド複合体を結合させた。１５分後、１ｍＬの洗浄緩衝液（４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１００ｍＭ ＫＣｌ、ｐＨ７．４）を加え、チューブを４℃で５分間、４５００ｒｐｍで遠心分離した。洗浄工程を２回繰り返した。ペレットの放射活性を、室温で１時間、１ｍＬのエタノールとインキュベートすることにより抽出した。次いで、懸濁液を１０ｍＬのＢｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔに入れ、Ｗａｌｌａｃ １４１１ Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒで放射活性をカウントした。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５を使用して求め、ＲＢＡ値を以下の式を使用して得た：（１７β−Ｅ２のＩＣ５０／試験化合物のＩＣ５０）×１００。
ｉｎ ｖｉｖｏ研究−動物
すべての動物を、環境条件（温度：２２±３℃；湿度：５０±２０％；１２時間明／１２時間暗のサイクル、０７：１５時に点灯）に、実験開始前の少なくとも３日間馴化させた。動物には、水および認定済み商業用げっ歯類食物（Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ＃Ｔ．２０１８．１５，Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）を自由に摂取させ、それらの体重に従って無作為化した。動物実験は、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＣＣＡＣ）およびＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅにより承認された動物施設で実施した。試験は、ＣＣＡＣ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌｓに準拠して実施した。施設内の承認を得た。
単回皮下注射後の阻害剤の血漿濃度
体重約２２０ｇの６週齢雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｒｌ：ＣＤ（登録商標）（ＳＤ）Ｂｒ ＶＡＦ／Ｐｌｕｓ（商標））を、Ｃｈａｒｌｅｓ−Ｒｉｖｅｒ，Ｉｎｃ．（Ｓｔ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ，Ｑｃ．，Ｃａｎａｄａ）から入手した。動物は１ケージ当たり３匹収容した。薬物動態試験は、１濃度（０．５ｍＬビヒクル液体中の２．３ｍｇ／ｋｇ体重）の阻害剤を１回皮下（ｓ．ｃ．）注射して実施した。阻害剤は、エタノール（ＥｔＯＨ）に最初溶解した後、ＥｔＯＨの最終濃度が８％になるようにプロピレングリコール（ＰＧ）を加えた。この実験期間中は、ラットは個々に収容し、阻害剤注射前に８時間絶食させたが、水は自由に摂取させた。阻害剤の血漿濃度測定のための血液試料（動物ごとに０．４ｍＬ）は、化合物Ｖについては投与後３、７、１２、および２４時間、ＣＣ−１５６については３および１２時間の目標間隔で、各時点３匹のラットから頚静脈で採取した。７時間目の採取後、補充液体（０．９％の生理食塩液注射ＵＳＰ）をラットに注射した。血液試料は、Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅカリウム−ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）コーティングチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ａｋｔｉｅｇｅｓｅｌｌｃｈａｆｔ ＆ Ｃｏ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に採取し、４℃で１０分間、３２００ｒｐｍで遠心分離した。血漿を回収して、液体クロマトグラフィー／質量分析／質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）分析により分析するまで、−８０℃に保存した。
血漿濃度の測定
阻害剤（化合物ＩおよびＶ）濃度は、ＣＨＵＱ（ＣＨＵＬ）−Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｑｕｅｂｅｃ，Ｑｃ，Ｃａｎａｄａ）で開発された手法を使用して、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析により決定した。手短に言えば、血清からの抽出のために、１００μＬの血清試料を個々のチューブに移し、６００μＬの酢酸アンモニウム（１ｍＭ）を加える。次いで、ステロイドの内部標準を含有するメタノール溶液（５０μＬ）を、各チューブに加える。２ｍＬのメタノールおよび２ｍＬの水で調整したＳｔｒａｔａ−Ｘ ＳＰＥカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）上に試料を移す。各カラムを２ｍＬのメタノール：水（１０：９０、ｖ／ｖ）で洗浄する。次いで、５ｍＭ酢酸アンモニウムを含有するメタノール５ｍＬで阻害剤を溶出する。不活性雰囲気下、４５℃でメタノールを蒸発させ、残査を１００μＬのメタノール：水（８５：１５、ｖ／ｖ）に溶解する。ステロイド分析のために、ＨＰＬＣシステムでは、７５×４．６ｍｍ、３−μｍ逆相Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を、０．８ｍＬ／分の流速で使用する。ＴｕｒｂｏＩｏｎＳｐｒａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃａｎａｄａ）を装備したＡＰＩ ３０００質量分析計を使用して、阻害剤を検出する。ＥＳＩはプラスイオンモードで使用した。線形台形公式を使用して、曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。
ｉｎ ｖｉｖｏエストロゲン性アッセイ
体重約２０ｇの雌性卵巣摘出（ＯＶＸ）ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ−Ｒｉｖｅｒ，Ｉｎｃ．（Ｓｔ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ，Ｑｃ．，Ｃａｎａｄａ）から入手した。動物は１ケージ当たり５匹収容した。５匹のマウス群を、Ｅ１（８％ＥｔＯＨ／９２％ＰＧ中に０．０２μｇ）または１０、５０、および２５０μｇの１７β−ＨＳＤ１阻害剤（０．１ｍＬ、ｓ．ｃ．）で７日間毎日処置した。化合物の最終用量の投与２４時間後に動物を屠殺し、子宮および膣を摘出し、脂肪を切除して秤量した。マウスの全体重も記録した。
ヌードＯＶＸマウス（異種移植片モデル）におけるＥ１刺激Ｔ−４７Ｄ腫瘍増殖の阻害
体重約２０ｇの雌性ＯＶＸ ＢＡＬＢ／ｃ無胸腺ヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ−Ｒｉｖｅｒ，Ｉｎｃ．（Ｓｔ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ，Ｑｃ．，Ｃａｎａｄａ）から入手した。動物は１ケージ当たり５匹収容した。Ｔ−４７Ｄ腫瘍増殖の阻害については、マウス当たりＥ１（０．１μｇ）をｓ．ｃ．前投与した２４時間後に、各マウスの両側腹部に５０μＬのＭａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）中の１ｘ１０７個のＴ−４７Ｄ細胞をｓ．ｃ．接種した。Ｔ−４７Ｄ腫瘍増殖を、１５日間、毎日マウス当たり０．１μｇのＥ１（ｓ．ｃ．）を使用して刺激した。１６日目から、腫瘍を有する動物を、腫瘍容積に基づいて無作為化し、３群に分けた。群１（対照マウス）は、毎日マウス当たり１００μＬのビヒクル単独（８％ＥｔＯＨ／９２％ＰＧ）で、ｓ．ｃ．処置した。群２（Ｅ１ ０．１μｇ）は、Ｅ１（マウス当たり０．１μｇ／日、ｓ．ｃ．）で３２日間処置した。群３（Ｅ１ ０．１μｇ＋化合物Ｖ ２５０μｇ）は、マウス当たりＥ１（０．１μｇ／日）および化合物Ｖ（２５０μｇ／日）で３２日間、混合ｓ．ｃ．注射で処置した。開始時にマウスの体重を測定し、１週間に２回、外部カリパスにより腫瘍容積を測定し、最大縦径（長さ）および最大横径（幅）を決定した。カリパス測定に基づく腫瘍容積は、以下の修正楕円体公式により算出した：腫瘍容積＝１／２（長さ×幅２）（Ｊｅｎｓｅｎ ＭＭ，Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ＪＴ，Ｂｉｎｄｅｒｕｐ Ｔ，Ｋｊａｅｒ Ａ．Ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ ｉｎ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍｏｕｓｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏＣＴ ｉｓ ｍｏｒｅ ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｔｈａｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ １８Ｆ−ＦＤＧ−ｍｉｃｒｏＰＥＴ ｏｒ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｃａｌｉｐｅｒ．ＢＭＣ Ｍｅｄ Ｉｍａｇｉｎｇ ２００８；８：１６）。試験の終了時に、マウスに終末麻酔を施し、最終体重および腫瘍サイズを測定した。子宮および膣を摘出し、脂肪を切除して秤量した（Ｄａｙ ＪＭ，Ｆｏｓｔｅｒ ＰＡ，Ｔｕｔｉｌｌ ＨＪ，Ｐａｒｓｏｎｓ ＭＦ，Ｎｅｗｍａｎ ＳＰ，Ｃｈａｎｄｅｒ ＳＫ，ｅｔ ａｌ．１７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ １，ａｎｄ ｎｏｔ ｔｙｐｅ １２，ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００８；１２２：１９３１−４０；Ｈｕｓｅｎ Ｂ，Ｈｕｈｔｉｎｅｎ Ｋ，Ｐｏｕｔａｎｅｎ Ｍ，Ｋａｎｇａｓ Ｌ，Ｍｅｓｓｉｎｇｅｒ Ｊ，Ｔｈｏｌｅ Ｈ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ １ ｉｎ ｖｉｖｏ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＣＦ−７ ｃｅｌｌｓ ｓｔａｂｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｅｎｚｙｍｅ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ２００６；２４８：１０９−１３；Ｈｕｓｅｎ Ｂ，Ｈｕｈｔｉｎｅｎ Ｋ，Ｓａｌｏｎｉｅｍｉ Ｔ，Ｍｅｓｓｉｎｇｅｒ Ｊ，Ｔｈｏｌｅ ＨＨ，Ｐｏｕｔａｎｅｎ Ｍ：Ｈｕｍａｎ ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ（１７−ｂｅｔａ）ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ １ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＭＣＦ−７ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ２００６；１４７：５３３３−９；Ｍｅｓｓｉｎｇｅｒ Ｊ，Ｈｉｒｖｅｌａ Ｌ，Ｈｕｓｅｎ Ｂ，Ｋａｎｇａｓ Ｌ，Ｋｏｓｋｉｍｉｅｓ Ｐ，Ｐｅｎｔｉｋａｉｎｅｎ Ｏ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ １．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ２００６；２４８：１９２−８）。
統計分析
統計的有意性はＤｕｎｃａｎ−Ｋｒａｍｅｒの多重範囲検定に従って判定した（Ｋｒａｍｅｒ Ｃ．Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔｓ ｔｏ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ １９５６；１２：３０７−１０）。０．０５未満のＰ値を、統計的に有意であると見なした。
１７β−ＨＳＤ１阻害活性
化合物Ｖおよび化合物ＩのＩＣ５０値は、１７β−ＨＳＤ１を内因性に強く発現する乳癌Ｔ−４７Ｄ細胞株を使用して決定した（図３）（Ｄａｙ ＪＭ，Ｆｏｓｔｅｒ ＰＡ，Ｔｕｔｉｌｌ ＨＪ，Ｐａｒｓｏｎｓ ＭＦ，Ｎｅｗｍａｎ ＳＰ，Ｃｈａｎｄｅｒ ＳＫ，ｅｔ ａｌ．１７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ １，ａｎｄ ｎｏｔ ｔｙｐｅ １２，ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００８；１２２：１９３１−４０）。化合物Ｖは、１７β−ＨＳＤ１に対して、ＩＣ５０値が６８ｎＭの良好な阻害効果を示す。基準として、阻害剤化合物Ｉは、２７ｎＭのＩＣ５０で酵素を阻害した。このＩＣ５０値は、同じ細胞株であるが、異なるロットで、また異なる継代数でもある細胞を使用して得られた４４μＭの以前の値と一致している（Ｌａｐｌａｎｔｅ Ｙ，Ｃａｄｏｔ Ｃ，Ｆｏｕｒｎｉｅｒ ＭＡ，Ｐｏｉｒｉｅｒ Ｄ．Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｎｄ ｅｓｔｒｏｎｅ Ｃ−１６ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｆ ＥＲ＋ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｓｔｒｏｎｅ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００８；１６：１８４９−６０）。
Ｅ１刺激細胞増殖の阻害
エストロゲン感受性乳癌細胞株Ｔ−４７ＤにおいてＥ１により誘導される増殖効果を遮断する化合物ＶおよびＩの有効性を検討した。効力のあるエストロゲンＥ２へのＥ１（０．１ｎＭ）の変換により誘導される細胞増殖を阻害するこれらの１７β−ＨＳＤ１阻害剤の能力を検討した。Ｅ１のこの濃度は、乳癌細胞における細胞内濃度に近い（Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ ＪＲ，Ｃｏｒｔｅｓ−Ｐｒｉｅｔｏ Ｊ，Ｃｈｅｔｒｉｔｅ Ｇ，Ｔａｌｂｉ Ｍ，Ｒｕｉｚ Ａ．Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｓｔｒｏｎｅ，ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｕｌｆａｔｅｓ，ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｌｆａｔａｓｅ ａｎｄ ａｒｏｍａｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｆｉｂｒｏａｄｅｎｏｍａ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９７；７０：６３９−４３）。化合物Ｖは、Ｅ１により誘導される増殖効果を濃度依存的に阻害することができた（図４Ａ）。化合物Ｖは、２．５および５μＭでそれぞれ、２５０％から１５６および１２５％に細胞増殖を低下させた。
阻害剤化合物Ｖを使用したときに得られたＥ１誘導細胞増殖の低下はまた、このＥ２誘導体の抗エストロゲン活性の結果である可能性もある。実際、抗エストロゲン化合物は、エストロゲン受容体（ＥＲ）に対するＥ２の作用により媒介されるＥ２の増殖（エストロゲン様）効果を遮断するであろう。図４Ｂに示すように、酵素阻害剤化合物Ｖは、純粋な抗エストロゲンＥＭ−１３９（Ｌｅｖｅｓｑｕｅ Ｃ，Ｍｅｒａｎｄ Ｙ，Ｄｕｆｏｕｒ ＪＭ，Ｌａｂｒｉｅ Ｃ，Ｌａｂｒｉｅ Ｆ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｎｅｗ ｈａｌｏ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉｅｓｔｒｏｇｅｎｓ．Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９９１；３４：１６２４−３０）がするように、Ｅ２（０．１ｎＭ）のＥＲ＋細胞に対する増殖効果を逆戻りさせることはない。この結果により、化合物Ｖは抗エストロゲン化合物としては働かないが、その代わり１７β−ＨＳＤ１により触媒されるＥ１のＥ２への変換の阻害剤として作用することが示される。
Ｔ−４７Ｄ（ＥＲ＋）細胞株に対するエストロゲン様活性およびＥＲα結合親和性
１７β−ＨＳＤ１阻害剤のいかなる望ましくないエストロゲン様活性も検出するために、エストロゲン受容体（ＥＲ＋）を発現することが知られているＴ−４７Ｄ細胞株について、細胞増殖アッセイを実施した（Ｋｅｙｄａｒ Ｉ，Ｃｈｅｎ Ｌ，Ｋａｒｂｙ Ｓ，Ｗｅｉｓｓ ＦＲ，Ｄｅｌａｒｅａ Ｊ，Ｒａｄｕ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｒｉｇｉｎ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９７９；１５：６５９−７０）。化合物ＶおよびＩの増殖活性を、０．５、１、２．５、および５μＭで評価した（図５Ａ）。化合物Ｖは試験されたいかなる濃度でもエストロゲン様ではなかったことが明らかであり、望ましくないエストロゲン性を除去するために３−ブロモエチル鎖が重要であることが明白である。
ＥＲ＋細胞増殖に対する化合物ＶおよびＩのｉｎ ｖｉｔｒｏエストロゲン様活性、それらのＥＲαに対する親和性（図５Ｂ）を評価したので、エストロゲン様作用に関与する主な受容体アイソフォームを検討した。非標識天然リガンド（Ｅ２）がＥＲαに対する［３Ｈ］１７β−Ｅ２の特異的結合の半分を置換する濃度（ＩＣ５０）を、非線形回帰分析を使用するデータのコンピュータフィッティングにより決定し、次いで、相対的結合親和性（ＲＢＡ）を算出した。Ｅ２のＲＢＡが１００％として設定されるのに対して、阻害剤化合物ＩのＲＢＡは１．５％であった。低いけれども、ＥＲαに対するこの結合親和性は、Ｔ−４７Ｄエストロゲン感受性細胞株で測定された、増殖（エストロゲン様）活性を説明することができる。化合物Ｖについては、結合親和性は検出されなかった。
マウスにおける阻害剤のエストロゲン様活性
Ｔ−４７Ｄ細胞増殖アッセイでｉｎ ｖｉｔｒｏで観察された、化合物Ｖのエストロゲン性の欠如が、ｉｎ ｖｉｖｏ環境に移行されることを確認するために、化合物Ｖのエストロゲン性を、ＯＶＸマウスモデルを使用して、２つのエストロゲン感受性（ＥＲ＋）組織である子宮（図６Ａ）および膣（図６Ｂ）の重量測定により検討した。ＯＶＸマウス対照群（ＯＶＸ−ＣＴＲ）については、２２ｍｇの低重量が子宮に対して観察された。しかしながら、ＯＶＸマウスにｓ．ｃ．投与されると、、Ｅ１（０．０２μｇ／マウス／日）は１７β−ＨＳＤ１によりＥ２に変換され、ＯＶＸ−ＣＴＲに比較して、２．５倍の子宮重量の増加（２２ｍｇ対５５ｍｇ；Ｐ＜０．０１）が観察された。すべての化合物Ｖ用量群（１０、５０、および２５０μｇ／マウス／日）からの子宮重量については、７日間の処置後、ＯＶＸ−ＣＴＲ群との差は有意ではなかった（それぞれ２５、２４、および２３ｍｇ）。したがって、これらの結果により、化合物Ｖがｉｎ ｖｉｖｏで非エストロゲン性であることが確認された。膣重量の測定により、化合物Ｖについて、上記での子宮の観察と同じ傾向があることが明確に実証された。
阻害剤の血漿濃度
阻害剤のバイオアベイラビリティを決定するために、阻害剤化合物ＶおよびＩの単回皮下注射（２．３ｍｇ／ｋｇ）を、ラットの異なる２群に行った。種々の時点での阻害剤化合物ＶおよびＩの平均血漿濃度および対応する曲線下面積（ＡＵＣ）を図７に提示する。各試料採取時点の血漿濃度を比較して、有意差が生じる時点を決定した。最初に、両方の阻害剤について、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）が注射３時間後に達成されることがわかった。化合物Ｖについては、７３．８および５０．７ｎｇ／ｍＬの値がそれぞれ、注射の７および１２時間後に見出された。２４時間後に、１１．７ｎｇ／ｍＬの血漿濃度が化合物Ｖについて測定され、したがって、１１４６ｎｇ＊ｈ／ｍＬのＡＵＣ０−２４時間が化合物Ｖに対して得られた。
ＯＶＸヌードマウスおけるＥ１刺激Ｔ−４７Ｄ腫瘍増殖の阻害
化合物Ｖが１日単回ｓ．ｃ．注射後に血漿中に見出されることが証明された後、ｉｎ ｖｉｖｏでの化合物Ｖの有効性を検討した。接種がマウスの両側腹部になされたことを除いて、Ｄａｙらにより記載された手順（Ｄａｙ ＪＭ，Ｆｏｓｔｅｒ ＰＡ，Ｔｕｔｉｌｌ ＨＪ，Ｐａｒｓｏｎｓ ＭＦ，Ｎｅｗｍａｎ ＳＰ，Ｃｈａｎｄｅｒ ＳＫ，ｅｔ ａｌ．１７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ １，ａｎｄ ｎｏｔ ｔｙｐｅ １２，ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００８；１２２：１９３１−４０）どおりに、雌性ＯＶＸ Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにマトリゲル中の１×１０７ Ｔ４７−Ｄ（ＥＲ＋）細胞を接種した。１７β−ＨＳＤ１によりＥ２に変換された後に腫瘍増殖を刺激するＥ１（０．１μｇ／日）をマウスに投与した。０．１μｇ Ｅ１／マウスｓ．ｃ．による１５日間処置の後に良好に定着した腫瘍を有するマウスのみを選択して、試験を継続した。２５０μｇ／マウスの用量が、非エストロゲン性であることが判明した、ｉｎ ｖｉｖｏのエストロゲン性アッセイで試験された最高用量であるので、化合物Ｖをこの用量で使用した。図８に、０．１μｇ Ｅ１／マウス／日で刺激された腫瘍増殖に対する化合物Ｖの効果を示す。処置の最初の１８日間では、腫瘍は活発に増殖せず、処置開始時のそれらの初期サイズを維持した。１９日目から、対照（ＣＴＲ）群の腫瘍容積は減少し始めて、２８日後に初期容積の約７４％に到達し、３２日目（７７％）まで同じレベルが継続した。しかしながら、Ｅ１処置群では、腫瘍は増殖してそれらの初期サイズの１３６％に到達した。一方、Ｅ１−化合物Ｖ処置マウスでは、腫瘍の増殖は阻害され（７４％）、処置の終了時にはＣＴＲ群のレベルにまで低下した（２８および３２日目にＰ＜０．０１、Ｅ１−化合物Ｖ対Ｅ１）。明らかに、化合物Ｖは、１７β−ＨＳＤ１の阻害により腫瘍内でのＥ２の形成を遮断し、したがって腫瘍増殖を遮断する。
試験の終了時に、マウスの体重を記録し、エストロゲン感受性組織（子宮および膣）を分析のために摘出した。３２日間の処置期間にわたるマウス体重に対する効果はＥ１にも化合物Ｖにもなく（図９）、２５０μｇ／日／マウス（ｓ．ｃ．）において化合物Ｖには明白な毒性はないことが示された。子宮および膣の重量は両方のＥ１処置群で有意に増加したが（Ｐ＜０．０１、Ｅ１およびＥ１−化合物Ｖ対ＣＴＲ）、化合物Ｖによる処置は、Ｅ１刺激子宮および膣重量の増加に対して何ら効果がなかった（図９Ｂおよび９Ｃ）。
３−（２−ヒドロキシエチル）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１７−ジオキソラン（２）の合成
−７８℃のＢＨ３−ジメチルスルフィド（ＴＨＦ中２．０Ｍ、１０．４ｍＬ）の無水ＴＨＦ（７０ｍＬ）溶液に、３−ビニル−エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１７−ジオキソラン（１）（２．２５ｇ、６．９３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、アルゴン雰囲気下で滴下して加えた。得られた溶液を室温で１６時間にわたり攪拌した。次いで、溶液を０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｍ、２７．７ｍＬ）を加え、その直後に３０％Ｈ２Ｏ２（１１．７ｍＬ）を加えた。この溶液を、室温で３時間にわたり激しく撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈した。得られた溶液を水（２００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して減圧下で蒸発させた。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：４：６）により精製して、１．１８ｇ（５０％収率）の化合物２を得た。１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，アセトン−ｄ６）０．８８（ｓ，１８−ＣＨ３），１．２７−２．３８（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．７３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），２．８２（ｍ，６−ＣＨ２），３．６２（ｂｒ ｔ，ＯＨ），３．７１（ｍ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），３．８７（ｍ，２×ジオキソランのＣＨ２），６．９２（ｓ，４−ＣＨ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２−ＣＨ），７．１９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１−ＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００．６Ｈｚおよびアセトン−ｄ６）：１３．９，２２．１，２５．９，２７．０，２８．４，２８．６，３０．７，３３．９，３９．０，３９．１，４４．１，４５．９，４９．３，６３．１，６４．３，６４．９，１１８．８，１２５．１，１２６．２，１２９．４，１３６．１，１３６．５，１３７．７。Ｃ２２Ｈ３１Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３４３．４ｍ／ｚ。
３−［２−（ベンジルオキシ）エチル］エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１７−オン（３）の合成
化合物２（１．１ｇ、３．５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（油中６０％）（１６８ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、０℃で加えた。この溶液を０℃で１時間にわたり撹拌し、臭化ベンジル（８９８ｍｇ、６２７μＬ、５．３ｍｍｏｌ）を１回で加えた。続いて、溶液を室温に戻した後、一晩攪拌して、水（３００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して減圧下で蒸発させた。次いで、粗化合物をＨＣｌ（１０％）のアセトン水溶液（１：１）（５０ｍＬ）で処理し、室温で５時間にわたり撹拌した。得られた溶液を、ＮａＨＣＯ３（１０％）水溶液を使用して中和し、ＥｔＯＡｃ（２×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して減圧下で蒸発させた。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１：９）により精製して、１．０４ｇ（７３％収率、２工程）の化合物３を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：０．９１（ｓ，１８−ＣＨ３），１．２０−２．４０（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．５１（ｄｄ，Ｊ１＝８．５Ｈｚ，Ｊ２＝１８．９Ｈｚ，１６β−ＣＨ），２．８８（ｍ，６−ＣＨ２およびＣＨ２ＣＨ２Ｏ），３．６８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），４．５４（ｓ，ＯＣＨ２Ｐｈ），６．９７（ｓ，４−ＣＨ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２−ＣＨ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１−ＣＨ），７．２３−７．３８（ｍ，５Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００．６Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）：１３．８，２１．６，２５．７，２６．５，２９．４，３１．６，３５．８，３５．９，３８．２，４４．３，４８．０，５０．５，７１．３，７２．９，１２５．３，１２６．３，１２７．５，１２７．６，１２８．３，１２９．６，１３６．３（２×），１３６．４（２×），１３７．６，１３８．４，２３２．５。Ｃ２７Ｈ３３Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８９．４ｍ／ｚ。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ）−３−［２−（ベンジルオキシ）エチル］−１７−オキソエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（４）の合成
化合物３（４００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（２５ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（３４４ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（１０％）水溶液（４．５ｍＬ）を加えた。得られた反応混合物を３０分間にわたり還流加熱した。得られた溶液を水（２００ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して減圧下で蒸発させ、４００ｍｇ（７６％収率）の化合物４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１．００（ｓ，１８−ＣＨ３），１．２５−２．６５（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．８９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．９３（ｍ，６−ＣＨ２），３．００（ｍ，１５−Ｈ）３．６９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），４．５４（ｓ，ＯＣＨ２Ｐｈ），５．８２および６．１７（２ ｂｒｏａｄ ｓ，ＮＨ２），６．９９（ｓ，４−ＣＨ），７．０３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２−ＣＨ），７．２２−７．３８（ｍ，５Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈの４Ｈおよび１−ＣＨの１Ｈ），７．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１’−ＣＨ），７．５２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，ＯＣＨ２Ｐｈの１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６”−ＣＨ），７．７７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，４”−ＣＨ），８．０４（ｓ，２”−ＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００．６Ｈｚ，ＣＤＣｌ３）：１４．５，２５．７，２６．９，２９．１，２９．３，３１．７，３５．８，３７．８，４４．３，４７．９，４８．６，７１．２，７２．９，１２５．３，１２６．４，１２６．９，１２７．５，１２７．６，１２７．７，１２８．４（２×），１２９．０，１２９．２，１２９．６，１３１．９，１３３．５，１３３．８，１３６．２，１３６．３，１３６．４，１３７．４，１３７．５，１３８．４，１６８．９，２０９．４。Ｃ３５Ｈ３７ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５４２．４ ｍ／ｚ。
３−｛［（１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシエチル）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（ＩＶ）の合成
化合物４を含むＭｅＯＨとＤＣＭ（４：１）の混合溶液に、ＮａＢＨ４（８５ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１時間にわたり攪拌した。得られた溶液を真空下で濃縮してＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄してＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて、３７５ｍｇの粗１７β−アルコールを得た。続いて、粗１７β−アルコールを、アルゴン雰囲気下でＥｔＯＨ（１００ｍＬ）に溶解した後、木炭上のＰｄ（１０％）（８０ｍｇ）を加えた。反応容器をＨ２で３回フラッシュし、３６時間にわたり攪拌した後、セライト上で濾過し、減圧下で蒸発させた。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：４：６）により精製して、２５５ｍｇ（８４％収率、２工程）の化合物ＩＶを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：０．９０（ｓ，１８−ＣＨ３），１．１０−２．５５（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．７４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），２．７９（ｍ，６−ＣＨ２），３．１７（ｄｄ，Ｊ１＝２．７Ｈｚ，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），３．８３（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１７α−Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ，４−ＣＨ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２−ＣＨ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１−ＣＨ），７．３５−７．４５（ｍ，５”−ＣＨおよび６”−ＣＨ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４”−ＣＨ），７．７５（ｓ，２”−ＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００．６Ｈｚ，ＣＤ３ＯＤ）：１３．３，２７．４，２８．６，３０．５，３３．０，３８．９，３９．０，３９．７，３９．８，４３．３，４５．４，５０．０，６４．４，８３．０，１２６．０，１２６．２，１２７．２，１２９．１，１２９．２，１２９．４，１３０．４，１３３．５，１３４．８，１３７．２，１３７．５，１３９．３，１４４．３，１７２．０。Ｃ２８Ｈ３６ＮＯ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３４．４。
３−｛［（１６β，１７β）−３−（２−ブロモエチル）−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（Ｖ）の合成
化合物ＩＶ（１７５ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１５ｍＬ）に、トリフェニルホスフィン（２００ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（２５２ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。この溶液を０℃で４０分間にわたり撹拌した後、トリフェニルホスフィン（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（１２６ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をさらに加えた。溶液を０℃でさらに１時間攪拌した。得られた混合物を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出して、ＭｇＳＯ４で乾燥し減圧下で蒸発させた。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９７：３）により精製して、１６８ｍｇ（８４％収率）の化合物Ｖを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：０．９１（ｓ，１８−ＣＨ３），１．１０−２．５５（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，６−ＣＨ２），３．０６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ），３．１７（ｄｄ，Ｊ１＝２．７Ｈｚ，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ），３．８４（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１７α−Ｈ），６．９１（ｓ，４−ＣＨ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２−ＣＨ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１−ＣＨ），７．３６−７．４４（ｍ，５”−ＣＨおよび６”−ＣＨ），７．６９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ ４”−ＣＨ），７．７５（ｓ，２”−ＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００．６Ｈｚ，ＣＤ３ＯＤ）：１３．３，２７．３，２８．５，３０．５，３３．０，３４．０，３８．８，３８．９，３９．６，４０．１，４３．３，４５．４，４５．７，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．４，１２７．０，１２９．１，１２９．４，１３０．１，１３３．５，１３４．８，１３７．４，１３７．８，１４０．０，１４４．３，１７５．１。Ｃ２８Ｈ３４ＮＯ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ−Ｂｒ］＋ ４９６．０および４９８．１；ＨＰＬＣ（ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ：７０：３０）：純度９８．５％。
３−｛［（１６β，１７β）−３−（２−クロロエチル）−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（９）の合成
化合物７（２０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１．０ｍＬ）に、クロロジメチル（フェニルチオ）−クロリドメタナミニウム（４５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、０℃で加えた。次いで、この溶液を室温に戻し、さらに３時間撹拌した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９７：３）により直接精製して、１２ｍｇ（５７％）の化合物９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），２．９６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３−ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ），３．１９（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，３−ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ），３．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１７α−Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ，４−ＣＨａｒ），６．９８（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３６−７．４４（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．７５（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．３，２８．６，３０．５，３３．０，３８．８，３９．０，３９．６，３９．８，４３．４，４５．４，４５．７，４６．０，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．４，１２７．１，１２９．１，１２９．４，１３０．３，１３３．６，１３４．８，１３６．７，１３７．８，１４０．０，１４４．４，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（２−ヨードエチル）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（１０）の合成
化合物８（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５ｍＬ）に、ヨウ化ナトリウム（１５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温でアルゴン雰囲気下、２４時間にわたり撹拌した後、もう１回ヨウ化ナトリウム（５２ｍｇ、ｍｍｏｌ）を加えた。溶液をさらに２４時間撹拌した。続いて、反応混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５：５）により精製して、１８ｍｇ（４７％）の化合物１０を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．０３（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８１（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．０７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，３−ＣＨ２ＣＨ２Ｉ），３．１９（ｍ，１Ｈ），ＭｅＯＤピーク下で３．３５（ｔ，２Ｈ，３−ＣＨ２ＣＨ２Ｉ），３．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１７α−Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ，４−ＣＨａｒ），６．９５（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３７−７．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：４．８，１１．９，２５．９，２７．２，２９．１，３１．６，３７．４，３７．６，３８．２，３９．７，４２．０，４４．０，４４．３，４８．６，８１．６，１２４．６，１２５．１，１２５．２，１２７．７，１２８．０，１２８．４，１３２．１，１３３．４，１３６．５，１３７．８，１３８．６，１４３．０，１７１．３。
３−｛［（１６β，１７β）−３−エテニル−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（１１）の合成
化合物１０（２０ｍｇ）の無水ジオキサン溶液（１．５ｍＬ）に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、３７ｍｇ）をアルゴン雰囲気下、室温で加えた。次いで、この溶液を室温で３時間にわたり撹拌した。次いで、得られた溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５：５）により精製して、８ｍｇ（５３％）の化合物１１を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８８（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１１−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８３（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１８（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１７α−Ｈ），５．１８（ｄ，１Ｈ，ＣＨ２＝ＣＨ−，Ｊ＝１０．９Ｈｚ），５．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨ２＝ＣＨ−，Ｊ＝１７．５Ｈｚ），（５．７および６．２，２ ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＣＯＮＨ２），６．６６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ２＝ＣＨ，Ｊ１＝Ｈｚ，Ｊ２Ｈｚ），７．１１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．２０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．２６（ｄ，溶媒ピーク下，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．３８（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨａｒ），７．７１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．３，２８．６，３０．５，３３．０，３８．９，３９．０，３９．６，４３．４，４５．４，４５．９，５０．０，８３．０，１１２．８，１２４．４，１２６．０，１２６．４，１２７．８，１２９．１，１２９．４，１３３．５，１３４．８，１３６．２，１３７．８，１３８．２，１４１．４，１４４．４，１７０．０。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（プロプ−２−エン−１−イルオキシ）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（１３）の合成
化合物１２（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３ｍＬ）に、ＮａＯＨ（５０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）および臭化アリル（４０μＬ、０．４６ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、得られた溶液を６０℃で５時間にわたりで撹拌した。次いで、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、塩化アンモニウムの飽和溶液で洗浄した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、１６５ｍｇ（９９％）の化合物１３を得た。粗化合物１３はさらに精製することなく次の工程で使用するのに十分な純度があることがわかった。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８７（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．０７−２．４７（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７９（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１５（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１７α−Ｈ），４．４９（ｄ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２，Ｊ＝５．３Ｈｚ），５．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，ＣＨ２＝ＣＨ），５．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ，ＣＨ２＝ＣＨ），６．０４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２＝ＣＨ），６．１２および６．３３（２ ｂｒ ｓ，ＣＯＮＨ２），６．６２（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝２．４Ｈｚ，Ｊ２＝８．６Ｈｚ），７．１８（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．７１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。

３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシエトキシ）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（１４）の合成
過ヨウ素酸ナトリウム（１０８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を水（０．５ｍＬ）に加え、０℃で５分間にわたり撹拌した後、続けてＲｕＣｌ３−Ｈ２Ｏ（４ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）、およびアセトニトリル（１ｍＬ）を加えた。次いで、化合物１３（１５０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、反応混合物を約２分間撹拌した。次いで、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（２ｍＬ）の飽和水溶液の添加により、反応混合物をクエンチした。相を分離して、水相をＥｔＯＡｃ（３×３ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。次いで、残査を、ＴＨＦ（１ｍＬ）と水（１ｍＬ）の混合物に溶解した後、ＮａＢＨ４（１３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０分間にわたり撹拌した後、続けて水（１０ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出して、合わせた有機層を飽和炭酸水素塩溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。残査をＴＨＦ（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）に０℃で溶解した後、過ヨウ素酸ナトリウム（１４４ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を小分けにして加えた。続いて、溶液を室温で２０分間にわたり撹拌した。次いで、エチレングリコール（５０μＬ）を加え、反応混合物を水（３ｍＬ）で希釈した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。残査をＴＨＦ（１ｍＬ）と水（１ｍＬ）の混合物に再溶解した後、ＮａＢＨ４（１３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を室温で１時間にわたり撹拌した後、水（１ｍＬ）を加えた。反応混合物をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出して、合わせた有機層を飽和炭酸水素塩溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：９：１）により精製して、２５ｍｇ（１５％）の化合物１４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），０．９６−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７９（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１８（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよび１７α−Ｈ），３．９９（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），６．６９（ｄ，１Ｈ，４−ＣＨａｒ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），６．７２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），７．１７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３８−７．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）。
３−｛［（１６β，１７β）−３−（２−ブロモエトキシ）−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（１５）の合成
化合物１４（２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を含む無水ＤＣＭ（２ｍＬ）と無水ＴＨＦ（１ｍＬ）の混合溶液に、トリフェニルホスフィン（２３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（２９ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で４０分間にわたり撹拌した後、トリフェニルホスフィン（２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（２３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）をさらに加えた。反応混合物を０℃でさらに４０分間撹拌した後、トリフェニルホスフィン（２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（２３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）をさらに加えた。次いで、反応混合物を０℃でさらに１時間撹拌した。続いて、反応混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／エーテル／ＭｅＯＨ：７５：２０：５）により精製して、１２ｍｇ（５２％）の化合物１５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１３−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７８（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ，Ｊ＝Ｈｚ），３．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１７α−Ｈ），４．２５（ｔ，２Ｈ，３−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），６．６２（ｓ，１Ｈ，４−ＣＨａｒ），６．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．１９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．３８−７．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１３．３，２７．５，２８．６，３０．７（２×），３３．０，３８．８，３９．０，３９．８，４３．３，４５．４（２×），４９．９，６９．２，８３．０，１１３．３，１１５．６，１２６．０，１２７．４，１２９．１，１２９．４，１３３．６，１３４．５，１３４．８，１３９．１，１４４．４，１５７．５，１７２．４。
（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−３−［（Ｅ）−２−フェニルエテニル］−６，７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロスピロ［シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７，２’−［１，３］ジオキソラン］（１６）の合成
アルゴン雰囲気下の化合物１（３５０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７５ｍＬ）溶液に、スチレン（２５７μＬ、２３３ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を５分間にわたりアルゴン通気によりパージした後、Ｇｒｕｂｂ（ＩＩ）触媒（４８ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、反応混合物を、アルゴン雰囲気下で２４時間にわたり還流した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で２回抽出し、相分離装置（Ｂｉｏｔａｇｅ）を使用して濾過し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：９５：５）により精製して、５０ｍｇ（１１％）の化合物１６を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８９（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．３４−２．３９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９０（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．８９（ｍ，４Ｈ，２×ジオキソランのＣＨ２），７．１９（ｓ，２Ｈ，），７．２３−７．３８（ｍ，６Ｈ，ＣＨａｒおよびＣＨ＝ＣＨ），７．５８（ｄ，２Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ）−１７−オキソ−３−［（Ｅ）−２−フェニルエテニル］エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（１７）の合成
化合物１６（４２ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（３ｍＬ）に、ＨＣｌ １０％（１ｍＬ）水溶液を加えた。次いで、反応混合物を室温で２時間にわたり撹拌した。次いで、反応混合物を炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮して、４０ｍｇの脱保護ケトン生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２５−２．５３（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９５（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），７．０８（ｓ，２Ｈ），７．２３−７．３８（ｍ，６Ｈ，ＣＨａｒ＋ＣＨ＝ＣＨ），７．５１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）。次いで、粗ケトン化合物（３８ｍｇ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解した後、３−ホルミル−ベンズアミド（３４ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、０．６ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物を６０分間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮して、４０ｍｇ（７２％）の化合物１７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１．０３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），１．２５−２．６７（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９９（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），５．７および６．１（ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＣＯＮＨ２），７．０８（ｓ，１Ｈ），７．２３−７．５２（ｍ，８Ｈ，ＣＨａｒおよびＰｈＣＨ＝ＣＨＰｈ），７．７１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝Ｈｚ），７．７７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝Ｈｚ），８．０４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−［（Ｅ）−２−フェニルエテニル］エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（１８）の合成
化合物１７（４０ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（３ｍＬ）に、ＮａＢＨ４（１０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で１時間にわたり撹拌し、続いて水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：９５：５）により精製して、２４ｍｇ（６０％）の化合物１８を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），０．７９−２．４６（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８０（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），４．１８（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），５．７および６．１（ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＣＯＮＨ２），６．６０（ｓ，１Ｈ，Ｃ＝ＣＨ−ベンズアミド），７．０８（ｓ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．２３−７．６２（ｍ，８Ｈ，ＣＨａｒおよびＰｈＣＨ＝ＣＨＰｈ），７．７１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），８．０４（ｓ，１Ｈ）。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（２−フェニルエチル）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（１９）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物１８（２０ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）を含むＥｔＯＨ／ＤＣＭ（１：１）混合溶液（３ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（５ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、２４時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：７：３）により精製して、６ｍｇ（３２％）の化合物１９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８８（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），０．９１−２．５０（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７７−２．９３（ｍ，６Ｈ，６−ＣＨ２および２×ＣＨ２Ｐｈ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｍ，１Ｈ），５．７および６．１（ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＣＯＮＨ２），６．９４（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．９Ｈｚ，Ｊ２＝１．３Ｈｚ），７．２２−７．５３（ｍ，７Ｈ，ＣＨａｒ），７．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），７．７２（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．４，２８．７，３０．５，３３．０，３８．７，３８．８，３９．０，３９．２，３９．７，４３．４，４５．４，４５．７，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．１，１２６．８（２×），１２９．１，１２９．２（２×），１２９．４，１２９．５（２×），１２９．９，１３３．５，１３４．８，１３７．４，１３９．０，１４０．１，１４３．３，１４４．４，１６７．６。
（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−［（１Ｅ）−３−（ベンジルオキシ）プロプ−１−エン−１−イル］−１３−メチル−６，７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロスピロ［シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７，２’−［１，３］ジオキソラン］（２０）の合成
アルゴン雰囲気下の化合物１（１．５ｇ、４．８２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（４００ｍＬ）に、［（プロプ−２−エン−１−イルオキシ）メチル］ベンゼンベンジルプロプ−２−エン−１−イルエーテル（１．３ｇ、９．５５ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、反応混合物を５分間にわたり撹拌した後、Ｇｒｕｂｂ（ＩＩ）触媒（２０４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、得られた溶液を、アルゴン雰囲気下、６０℃で４８時間にわたり攪拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（５：９５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１３０ｍｇ（６％）の化合物２０を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２５−２．４２（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７８（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．７４−４．０６（ｍ，４Ｈ，２×ジオキソランのＣＨ２），４．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ２ＯＣＨ２Ｐｈ），４．５６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＣＨ２Ｐｈ），６．２４−６．３１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ），６．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ），７．１１（ｓ，１Ｈ，ＣＨ ａｒ），７．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ＣＨａｒ），７．２５−７．３９（ｍ，６Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−［（１Ｅ）−３−（ベンジルオキシ）プロプ−１−エン−１−イル］エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１７−オン（２１）の合成
化合物２０（１２０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３ｍＬ）に、ＨＣｌ水溶液（１０％、３ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で６時間にわたり撹拌した。次いで、反応混合物を水（６０ｍＬ）で希釈し、炭酸水素塩溶液で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：５：９５）により精製して、８０ｍｇ（６９％）の化合物２１を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２２−２．３２（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．５２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１９．１Ｈｚ，Ｊ２＝８．９Ｈｚ，１６β−ＣＨ），２．９２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−６），４．１９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ），４．５７（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈ），６．２６−６．３３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ），６．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ），７．１４（ｓ，１Ｈ，ＣＨ ａｒ），７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ＣＨａｒ），７．２５−７．３９（ｍ，６Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ）−３−［（１Ｅ）−３−（ベンジルオキシ）プロプ−１−エン−１−イル］−１７−オキソエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（２２）の合成
化合物２１（８０ｍｇ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（６２ｍｇ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、１．７ｍＬ）を加えた。次いで、得られた反応混合物を３０分間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：１：１）により精製して、６５ｍｇ（６１％）の化合物２２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１．０５（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），０．８９−３．２４（残りのＣＨおよびＣＨ２），４．２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ），４．５８（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈ），６．２６−６．３３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ），６．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ），７．１６（ｓ，１Ｈ，ＣＨ ａｒ），７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＣＨａｒ），７．２５−７．３９（ｍ，６Ｈ，ＣＨａｒ）７．４９（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．５９（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．８１（ｄ，１Ｈ，ベンズアミドのＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．９１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝８．２Ｈｚ），８．１４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ，１７β）−３−［（１Ｅ）−３−（ベンジルオキシ）プロプ−１−エン−１−イル］−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（２３）の合成
化合物２２（５５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨとＤＣＭ（４：１）の混合溶液に、ＮａＢＨ４（１２ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間にわたり撹拌し、濃縮した。残査をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。次いで、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮して、５０ｍｇ（９１％）の化合物２３を（さらに精製することなく）得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．７７（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），０．８０−２．８４（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−６），４．１４（ｂｒ ｓ，１Ｈ，１７α−Ｈ），４．１９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ），４．５７（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ２Ｐｈ），６．２７−６．３４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ），６．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＯおよびＣ＝ＣＨＰｈＣＯＮＨ２），７．１３（ｓ，１Ｈ，ＣＨ ａｒ），７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＣＨａｒ），７．２７−７．４２（ｍ，６Ｈ，ＣＨａｒ）７．４６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．６０（ｄ，１Ｈ，ベンズアミドのＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．７０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．９４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（３−ヒドロキシプロピル）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（２４）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物２３（４５ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）を含むＥｔＯＨ／ＤＣＭ（４：１）混合溶液（５ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（２０ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、３６時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）により精製して、３８ｍｇ（９９％）の化合物２４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２２−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．５９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），２．７８（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１６（ｍ，１Ｈ），３．５６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），３．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１７α−Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ，４−ＣＨａｒ），６．９３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．１８（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３８−７．４４（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．４１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．４，２８．７，３０．５，３２．６，３３．０，３５．５，３８．９，３９．０，３９．８，４３．４，４５．４，４５．７，５０．０，６２．３，８３．０，１２６．０，１２６．２，１２６．７，１２９．１，１２９．４，１２９．９，１３３．５，１３４．８，１３７．５，１３８．９，１４０．３，１４４．４，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−３−（３−ブロモプロピル）−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（２５）の合成
０℃の化合物２４（２８ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（３３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（４２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を０℃で４０分間にわたり撹拌した後、トリフェニルホスフィン（１３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（１７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の第２回分を加えた。次いで、反応混合物を０℃でさらに１時間撹拌した。続いて、反応混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×２５ｍＬ）で抽出した。次いで、合わせた有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９７：３）により精製して、８ｍｇ（２５％）の化合物２５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８８（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１１−２．５５（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ），２．７８（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１６（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ），３．８８（ｍ，１Ｈ，１７α−Ｈ），５．６および６．２（２ ｂｒ ｓ，ＣＯＮＨ２），６．９１（ｓ，１Ｈ，４−ＣＨａｒ），６．９７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３５−７．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．４０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．７２（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．４，２８．６，３０．５，３３．０，３３．７，３４．４，３５．７，３８．８，３９．０，３９．７，４３．４，４５．４，４５．７，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．４，１２６．８，１２９．１，１２９．４，１３０．０，１３３．８，１３４．８，１３７．７，１３９．０，１３９．３，１４４．４，１７２．７。
３−エテニルエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１７−オン（２６）の合成
化合物１（１８０ｍｇ、０．ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（１８ｍＬ）に、ＨＣｌ水溶液（１０％、２ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で２時間にわたり撹拌した。次いで、この溶液を炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮して、１４０ｍｇの脱保護ケトン生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．９０（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．３８−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８６（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），５．１６（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２，Ｊ＝１０．９Ｈｚ），５．７４（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２，Ｊ＝Ｈｚ），６．６９（ｍ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２），７．１６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ，１７β）−３−エテニル−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（２７）の合成
化合物２６（１１５ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（１２５ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、１．７ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物を４０分間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：７：３）により精製して、８０ｍｇ（４７％）の化合物２７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９０（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２８−２．６５（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９８（ｍ，３Ｈ，６−ＣＨ２および１５−ＣＨ），５．２０（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２，Ｊ＝１０．９Ｈｚ），５．７２（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２，Ｊ＝１７．５Ｈｚ），５．９および６．２（２ ｂｒ ｓ，ＣＯＮＨ２），６．６７（ｍ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２），７．１６（ｓ，ＣＨａｒ），７．２４（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．４９（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．５１（ｔａｐｐ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．７１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７９（ｓ，１Ｈ）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ，１７β）−３−エテニル−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（２８）の合成
化合物２７（８０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨとＤＣＭ（９：１）の混合溶液に、ＮａＢＨ４（２２ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間にわたり撹拌し、濃縮した。残査をＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。次いで、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５：５）により精製して、７４ｍｇ（９２％）の化合物２７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．７４（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２６−２．７８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８８（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），４．１７（ｂｒ ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），５．１７（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），５．７１（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２，Ｊ＝１７．５Ｈｚ），５．７および６．２（２ ｂｒ ｓ，ＣＯＮＨ２），６．６０（ｓ，１Ｈ，１６−ＣＨ＝Ｐｈ），６．６７（ｍ，１Ｈ，ＰｈＣＨ＝ＣＨ２），７．１５（ｓ，ＣＨａｒ），７．２１（ｄ，２Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２８（ｄ（溶媒ピーク下），１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），７．４３（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．５６（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．６１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．８７（ｓ，１Ｈ）。
３−｛［（１６β，１７β）−３−エチル−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（２９）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物２８（７４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（１５ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、４８時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）により精製して、４０ｍｇ（５４％）の化合物２９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８７（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１０−２．６０（残りのＣＨおよびＣＨ２），１．２２（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＨ２Ｐｈ），２．５９（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ３ＣＨ２Ｐｈ），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１６（ｍ，１Ｈ），３．５６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ），３．８８（ｍ，１Ｈ，１７α−Ｈ），５．７および６．２（２ ｂｒ ｓ，ＣＯＮＨ２），６．９２（ｓ，１Ｈ，４−ＣＨａｒ），６．９９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３７（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド），７．６０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．７２（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ−ベンズアミド）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，１６．３，２７．４，２８．７，２９．４，３０．５，３３．０，３８．９，３９．０，３９．７，４３．３，４５．４，４５．６，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．１，１２６．２，１２９．１，１２９．２，１２９．４，１３３．５，１３４．８，１３７．４，１３８．６，１４２．４，１４４．３，１７２．７。
［（１６β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−１７−オキソエストラ−１（１０），２，４−トリエン−３−イル］酢酸（３０）の合成
デス−マーチンペルヨージナン（Ｄｅｓｓ Ｍａｒｔｉｎ ｐｅｒｉｏｄａｎｅ）（６７ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、アルコール１１（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（４ｍＬ）に室温で一度に加えた。この反応混合物を室温で１時間にわたり撹拌し、続いて、ＮａＨＳＯ３の飽和水溶液（０．２５ｍＬ）で処理した後、ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で処理した。次いで、水層をＥｔＯＡｃ（２×５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥して濾過し、濃縮した。続いて、粗生成物（４９ｍｇ）を、ｔ−ＢｕＯＨ（２．２ｍＬ）および水（０．２ｍＬ）に溶解した後、２−メチル−２−ブテン（６４μＬ、０．７６ｍｍｏｌ）、ＮａＣｌＯ２（１３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、およびＫＨ２ＰＯ４（１９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、懸濁液を室温で１２分間にわたり撹拌した。次いで、有機相を濃縮し、水相をＨＣｌ水溶液（１Ｎ、１ｍＬ）で酸性にした。次いで、水相をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。次いで、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し濃縮した。粗生成物をＭｅＯＨから粉砕することにより精製して、３０ｍｇ（５９％）の化合物３０を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．６８（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．３３−２．７３（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７８（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．０９（ｍ，１Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＯＯＨ），６．９２（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．９８（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．２０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３６（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．７１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），１２．１（ｂｒ，ｓ，ＣＯＯＨ）。
［（１６β，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−３−イル］酢酸（３１）の合成
化合物３０（３０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（５ｍＬ）に、ＮａＢＨ４（７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、この反応混合物を室温で２時間にわたり攪拌した後、ＮａＢＨ４をさらに２回に分けて（７ｍｇ、０．１８ｍｇ）、２時間にわたり連続して加えた。次いで、反応混合物を濃縮し、ＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９：１）により精製して、１５ｍｇ（５０％）の化合物３１を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１３−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８１（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＯＯＨ），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），６．９６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．０１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，２Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．７５（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．３，２８．６，３０．５，３３．０，３８．８，３９．０，３９．６，４３．４，４５．４，４５．７，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．４，１２７．６，１２９．１，１２９．４，１３０．８，１３３．３，１３３．６，１３４．８，１３７．８，１４０．１，１４４．４，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（３２）の合成
アルゴン雰囲気下の化合物３０（３７ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に、ＢＯＰ（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、メチルアミン（１１５μＬ、０．０３ｍｍｏｌ；ＴＨＦ中２．０Ｍ）、およびＤＩＰＥＡ（１８μＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で３時間にわたり撹拌し、続いて水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮して、４１ｍｇの粗生成物を得た。粗生成物をメタノール／ＤＣＭ（９：１）の混合物に溶解した後、ＮａＢＨ４（１５ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で３０分間にわたり撹拌し、水に注いだ。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で２回抽出し、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５：５）により精製して、６ｍｇ（１５％）の化合物３２を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ３），２．８０（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１６（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ３），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），６．９６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．０１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，２Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２６．５，２７．３，２８．６，３０．５，３３．０，３８．９，３９．０，３９．７，４３．４（２×），４５．４，４５．７，５０．０，８３．０，１２５．４，１２６．０，１２６．５，１２７．３，１２９．１，１２９．４，１３０．５，１３３．５，１３４．８，１３８．０，１４０．２，１４４．４，１７５．１。
（１６Ｅ）−１６−（３−カルバモイルベンジリデン）−１７−オキソエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボン酸（３４）の合成
化合物３３（２５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（２５０ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、１．７ｍＬ）を加えた。次いで、得られた反応混合物を３０分間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（２００ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５：５）により精製して、１４３ｍｇ（４０％）の化合物３４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１．０６（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．３１−２．７７（残りのＣＨおよびＣＨ２），３．４０（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），７．４２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝Ｈｚ），７．５０（ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．５９（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），７．８３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．９１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），８．１４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
（１６Ｅ，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジリデン）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボン酸（３５）の合成
化合物３４（１４０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨとＤＣＭ（１：１）の混合溶液に、ＮａＢＨ４（２１ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で２時間にわたり撹拌し、濃縮した。残査をＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。次いで、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５：５）により精製して、６８ｍｇ（４８％）の化合物３５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．７９（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．３１−２．４１（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９７（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），４．１６（ｂｒ ｓ，１Ｈ，１７α−Ｈ），６．５９（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），７．３８（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．４６（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．９４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
（１６β，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボン酸（３６）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物３５（６８ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（１０ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、４８時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１０ｍｇ（１５％）の化合物３６を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１６−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８８（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｂｒ ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），７．４１（ｍ，３Ｈ，ＣＨａｒ），７．７１（ｍ，３Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．２，２８．３，３０．４，３３．０，３８．８，３８．９，３９．３，４３．３，４５．４，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．４，１２８．０，１２９．１，１２９．２，１２９．４，１３１．３，１３３．５，１３４．８，１３８．０，１４４．３，１４３．６，１４６．８，１７１．０，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（３７）の合成
アルゴン雰囲気下の化合物３６（３００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（２０ｍＬ）に、ＢＯＰ（３３８ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１４５μＬ、０．８４ｍｍｏｌ）を室温で連続して加えた。この反応混合物を１０分間にわたり撹拌した後、ＮａＢＨ４（３０ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物をさらに１時間攪拌し、水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で２回抽出した。次いで、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物を、第１回の精製では溶出液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）を使用し、第２回の精製では溶出液としてアセトン／ヘキサン（１：１）を使用するフラッシュクロマトグラフィーによる連続精製に供して、８８ｍｇ（３０％）の化合物３７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１５−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８３（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｂｒ ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），４．８９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＨ），７．０３（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．０８（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．４，２８．６，３０．５，３３．０，３８．８，３９．０，３９．７，４３．４，４５．４，４５．８，５０．０，６５．１，８３．０，１２５．５，１２６．０，１２６．３，１２８．６，１２９．１，１２９．４，１３３．５，１３４．８，１３７．６，１３９．６，１４０．６，１４４．４，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−３−（ブロモメチル）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（３８）の合成
０℃の化合物３７（６５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（６１ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（７７ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を０℃で５時間にわたり撹拌した。続いて、反応混合物を水に注ぎ、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。次いで、合わせた有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９７：３）により精製して、４５ｍｇ（６０％）の化合物３８を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．２２（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｍ，２Ｈ，１７α−ＨおよびＯＨ），４．５８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｂｒ），６．６（ｂｒ ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ２），７．１２（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．１９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝Ｈｚ），７．２９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝Ｈｚ），７．３５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝Ｈｚ），７．４１（ｄおよびｂｒ ｓ ピーク下，ＣＨａｒの１ＨおよびＣＯＮＨ２の１Ｈ，Ｊ＝Ｈｚ），７．７４（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝Ｈｚ），７．８４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−｛［（１６β，１７β）−３−（アミノメチル）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（３９）の合成
化合物３８（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に、アジ化ナトリウム（１２ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、この溶液を、アルゴン雰囲気下、６０℃で３時間にわたり攪拌した。続いて、反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。次いで、粗化合物（２５ｍｇ）をエタノール（３ｍＬ）に溶解した。次いで、アルゴン雰囲気下で、木炭上のパラジウム（１０％）（１０ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、２４時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１５ｍｇ（５８％）の化合物３９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１３−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），４．４１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨ２），７．０１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．２５（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．４，２８．５，３０．５，３３．０，３８．８，３９．０，３９．７，４３．４，４５．４，４５．７，４５．９，５０．０，８３．０，１２６．０，１２６．２，１２６．７，１２９．１，１２９．２，１２９．４，１３３．５，１３４．８，１３８．０，１３８．８，１４０．７，１４４．４，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−３−（ブロモメチル）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（化合物４０ａ〜ｄ）のＮ−アルキル化のための基本手順
化合物３８（２５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（３ｍＬ）に、トリエチルアミン（４３μＬ、３．０ｍｍｏｌ）および適切なアミン（３．０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を室温で３時間にわたり撹拌した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ＤＣＭで２回抽出し、相分離装置（Ｂｉｏｔａｇｅ）を使用して濾過し濃縮した。所望のＮ−アルキルアミン誘導体を単離した後、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５〜９：１）により精製した。
３−｛［（１６β，１７β）−３−［（ジメチルアミノ）メチル］−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（４０ａ）：収率（１０ｍｇ、４３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．２４（ｓ，６Ｈ，ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），４．４１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），７．００（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．０５（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２６（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．３，２８．６，３０．５，３３．０，３８．８，３９．０，３９．６，４３．４，４５．１（２×），４５．４，４５．８，５０．０，６４．６，８３．０，１２６．０，１２６．３，１２８．０，１２９．１，１２９．４，１３１．３，１３３．５，１３４．８，１３５．４，１３７．７，１４０．９，１４４．４，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−３−［（ジプロピルアミノ）メチル］−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（４０ｂ）：収率（５ｍｇ、２１％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．８８（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２Ｎ），Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２７（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＨ２Ｎ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．１５−２．６５（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．５８（ｓ，２Ｈ，ＰｈＣＨ２Ｎ），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），４．４１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２ＮＨ２），７．０１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．０７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２６（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．７０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１１．３，１２．１，１３．３，２０．１，２７．３，２８．６，３０．５，３３．０，３８．８，３９．０，３９．６，４３．４，４５．４，４５．８，４８．１，５０．０，５５．８，５８．８，５８．４，８３．０，１２６．０，１２６．３，１２８．１，１２９．１，１２９．４，１３１．３，１３３．５，１３４．８，１３７．７，１４０．８，１４４．４，１７２．７。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（ピロリジン−１−イルメチル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（４０ｃ）：収率（７ｍｇ、２８％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１５−２．６５（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），７．０２（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．０７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２５（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．７１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１１．９，２２．６，２５．９，２７．２，２９．１，３１．６，３７．４，３７．６，３８．２，４２．０，４４．０，４４．４，４７．０，４８．２，４８．６，５３．４，５９．７，８１．６，１２４．６，１２４．９，１２６．４，１２７．７，１２８．０，１２９．６，１３２．１，１３３．４，１３４．６，１３６．３，１３９．４，１４３．０，１７１．３。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−［（メチルアミノ）メチル］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（４０ｄ）：収率（２ｍｇ、８％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．５１（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＨ３），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｍ，２Ｈ，１７α−ＨおよびＣＨ２ＮＨ），７．０７（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．１３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．３３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
（１６Ｅ，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジリデン）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボン酸（３５）（化合物４１ａ〜ｄ）のＮ−アシル化のための基本手順
化合物３６（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に、ＢＯＰ（４３μＬ、０．１４ｍｍｏｌ）、適切なアミン（０．３６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（２８μＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を室温で２時間にわたり撹拌した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。所望のＮ−アシル化誘導体を単離した後、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５〜９：１）により精製した。
（１６β，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−１７−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボキサミド（４１ａ）：収率（７ｍｇ、１３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１６−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．５１（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＨ３），２．８６（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１０および３．３２（２ ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２ＮＣＯ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｍ，２Ｈ，１７α−Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．１７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．３３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．７０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，３０．４，３３．０，３５．６，３８．０，３８．８，３８．９，３９．４，４１．９，４３．４，４５．０，４５．４，４５．８（ｄ），５０．０，８３．０，８８．２，１２５．３，（１２６．０および１２６．２（ｄ）），１２６．５，１２８．５，１２９．１および１２９．２（ｄ），（１２９．４および１２９．５（ｄ）），（１３３．５および１３３．６（ｄ）），（１３４．３，１３４．８、および１３４．９（ｔ）），１３８．３，（１４３．６，１４３．７、および１４３．８（ｔ）），１４４．３，１７２．６，１７４．２。
（１６β，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−Ｎ−エチル−１７−ヒドロキシ−Ｎ−プロピルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボキサミド（４１ｂ）：収率（１７ｍｇ、３０％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１６−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．５１（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＨ３），２．８６（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１０および３．３２（２ ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２ＮＣＯ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｍ，２Ｈ，１７α−Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．１７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．３３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．７０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２１．８，２３．０，２７．２，２８．３，３０．４，３３．０，３８．８，３８．９，４５．４，４５．８，５０．０，８２．９，８８．２，１２４．４および１２４．６（ｄ），１２６．５，１２７．７および１２７．９（ｄ），１２９．１，１２９．４，１３３．５，１３４．８，１３５．２，１３８．３，１４３．３，１４４．３，１７２．６，１７４．２。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（ピロリジン−１−イルカルボニル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（４１ｃ）：収率（１７ｍｇ、３０％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１５−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．６６（ｄ，２Ｈ，ＣＨ２ＰｈＣＯＮＨ２，Ｊ＝９．４Ｈｚ），２．８５（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．４７（ｔ，２Ｈ，ピロリジンのＣＨ２Ｎ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．５８（ｔ，２Ｈ，ピロリジンのＣＨ２Ｎ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．８４（ｄ，２Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），７．２１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．２６（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２５．３，２７．２（２×），２８．３，３０．４，３３．０，３８．９，３９．４，４３．３，４５．４，４５．８，５０．０，５０．９，８２．０，８８．２，１２５．３，１２６．０，１２６．４，１２８．６，１２９．４，１３３．５，１３４．８，１３５．１，１３８．２，１４４．１，１４４．３，１７２．１，１７２．６。
（１６β，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−１７−ヒドロキシ−Ｎ−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボキサミド（４１ｄ）：収率（２２ｍｇ、４２％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９２（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１５−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．５１（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＨ３），２．９（ｍ，５Ｈ，６−ＣＨ２およびＣＨ３ＮＨ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｍ，２Ｈ，１７α−Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．５５（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．２，２８．３，３０．５，３３．０，３８．８，３８．９，３９．３，４３．３，４５．３，４５．９，５０．０，８２．９，８８．２，１２５．４，１２６．０，１２６．５，１２８．７，１２９．１，１２９．４，１３２．６，１３３．５，１３４．８，１３８．２，１４４．３，１４５．６，１７０．９，１７２．７。
３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）エストラ−１（１０），２，４−トリエン−１７−オン（４３）の合成
室温のエストロントリフレート（４２）（４５５ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の無水ジオキサン溶液（５ｍＬ）に、ピナコールボラン、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、およびトリエチルアミン（９２３μＬ、６．６２ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で加えた。反応混合物を５分間にわたりアルゴン通気し、次いで、１００℃で２４時間にわたり加熱した。ジオキサンを減圧除去した後、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加えた。有機層を水および食塩水で連続して洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン：９５：５〜８：２）により精製して、２７５ｍｇ（６４％）の化合物４３を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．３４（１２Ｈ，４×ボロランのＣＨ３），１．３９−２．５４（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９３（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），７．３２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．５７（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．６０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．９Ｈｚ）。
［（１６Ｅ）−１６−（３−カルバモイルベンジリデン）−１７−オキソエストラ−１（１０），２，４−トリエン−３−イル］ボロン酸（４４）の合成
化合物４３（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（１１８ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、１．５ｍＬ）を加えた。次いで、得られた反応混合物を３０分間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（２００ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮して、８０ｍｇの化合物４４を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：０．９４（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２４−２．９７（残りのＣＨおよびＣＨ２），４．０５（ｓ，２Ｈ，Ｂ（ＯＨ）２，７．２７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．３７（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．４９−７．５８（ｍ，３Ｈ，ＣＨａｒ），７．８１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．９０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），８．１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
［（１６Ｅ，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジリデン）−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−３−イル］ボロン酸（４５）の合成
化合物４４（７０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（６ｍＬ）に、ＮａＢＨ４（１０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１時間にわたり撹拌し、濃縮した。残査をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。次いで、有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９：１）により精製して、５４ｍｇ（７７％）の化合物４５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．７７（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２４−２．９７（残りのＣＨおよびＣＨ２），４．０５（ｓ，２Ｈ，Ｂ（ＯＨ）２，７．２７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．３７（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．４９−７．５８（ｍ，３Ｈ，ＣＨａｒ），７．８１（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．９０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），８．１（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
［（１６β，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−３−イル］ボロン酸（４６）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物４５（４７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（４ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（８ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、２４時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１３ｍｇ（２８％）の化合物４６を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），７．２９１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．３５−７．４３（ｍ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．７０（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．２，２８．６，３０．５，３３．０，３８．８，３９．０，３９．６，４３．４，４６．０，５０．０，８３．０，１２５．４および１２５．５（ｄ），１２６．０，１２９．１，１２９．４，１３１．９および１３２．２（ｄ），１３３．５，１３４．８，１３５．４および１３５．７（ｄ），１４３．０および１４３．７，１４４．４，１７２．７。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ）−３−アミノ−１７−オキソエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（４８）の合成
３−アミノ−エストロン（４７）（６８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（３．５ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（７５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、０．５ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物を１時間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、４０ｍｇ（４０％）の化合物４８を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：１．００（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２９−３．０６（残りのＣＨおよびＣＨ２），４．３３（ｂｒ ｓ，２Ｈ，ＰｈＮＨ２），６．４０（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．４７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．００（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．４０（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．５７（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．８３（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），８．２０（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ，１７β）−３−アミノ−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（４９）の合成
化合物４８（４０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（６ｍＬ）に、ＮａＢＨ４（１９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１時間にわたり撹拌し、濃縮した。残査をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。次いで、有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５：５）により精製して、２６ｍｇ（６５％）の化合物４９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．７７（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２９−２．８２（残りのＣＨおよびＣＨ２），４．１３（ｓ．１Ｈ，１７α−Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．０７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４６（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６０（ｄ １Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．９４（ｓ，１Ｈ）。
３−｛［（１６β，１７β）−３−アミノ−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（５０）および３−｛［（１６β，１７β）−３−（エチルアミノ）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（５１）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物４９（１５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（２ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（５ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、２４時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物を、溶出系としてアセトン／ヘキサン（１：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、４ｍｇ（２７％）の化合物５０および５ｍｇ（３３％）の化合物５１を得た。
化合物５０：１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．８５（残りのＣＨおよびＣＨ２），３．８３（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），６．４６（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．５５（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．０４（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．７５（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．５，２８．７，３０．７，３３．０，３８．９，３９．０，４０．０，４３．４，４５．５，５０．０，８３．１，８８．４，１１４．９，１１７．２，１２６．０，１２６．８，１２９．１，１２９．４，１３２．０，１３３．５，１３４．８，１３８．２，１４４．４，１４５．５，１７２．７。
化合物５１：１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２２（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＨ２ＮＨ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．１２−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７４（２Ｈ，６−ＣＨ２），３．０８（ｑ，２Ｈ，ＣＨ３ＣＨ２ＮＨ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），６．３９（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．４９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．０６（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．４，１４．９，２７．６，２８．８，３０．９，３３．０，３８．９，３９．０，４０．０，４０．１，４３．４，４５．５，５０．０，５１．７，８３．１，１１３．０，１１５．０，１２６．０，１２６．２，１２９．１，１２９．４，１３１．１，１３３．５，１３４．８，１３８．２，１４４．４，１４７．８，１６７．７。
３−｛［（１６β，１７β）−１７−ヒドロキシ−３−（メチルアミノ）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（５３）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物４９（２２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（３ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（５ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、２４時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使用して分取クロマトグラフィーにより精製し、３ｍｇ（１４％）の化合物５０および６ｍｇ（２７％）の化合物５３を得た。
化合物５３：１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１３−２．４８（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７４（５Ｈ，６−ＣＨ２およびＣＨ３ＮＨ），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），６．３９（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．４７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．０７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．４，２７．６，２８．８，３０．９，３１．３，３３．０，３５．２，３８．９，３９．０，４０．１，４３．４，４５．５，５０．０，８３．１，１１２．４，１１４．２，１２６．０，１２６．８，１２９．１，１２９．４，１３０．９，１３３．５，１３４．８，１３８．１，１４４．４，１４８．９，１５１．１，１６７．７。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ）−３−フルオロ−１７−オキソエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（５５）の合成
３−フルオロ−エストロン（５４）（１６９ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（１７５ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、１．７ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物を１時間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１４６ｍｇ（６２％）の化合物５５を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１．０５（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．２３−２．７６（残りのＣＨおよびＣＨ２），６．８４（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．３２（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．４９（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．５９（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．８２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），８．１４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−｛（Ｅ）−［（１６Ｅ，１７β）−３−フルオロ−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（５６）の合成
化合物５５（１４０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２：１）混合溶液（１５ｍＬ）に、ＮａＢＨ４（２６ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間にわたり撹拌し、濃縮した。残査をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。次いで、有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をジエチルエーテルで粉砕し、濾過して、１４０ｍｇ（９９％）の化合物５６を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．７７（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．３０−２．８２（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），４．１３（ｓ，１Ｈ，１７α−Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），６．８２（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．３０（ｍ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．４５（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．５８（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．９４（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
３−｛［（１６β，１７β）−３−フルオロ−１７−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（５７）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物５６（１４０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（２８ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、４８時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物を、溶出系としてアセトン／ヘキサン（６：４）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、５９ｍｇ（４２％）の化合物５７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９１（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１４−２．６２（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８２（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１７（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），６．７８（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．０７（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．３０（ｍ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１３．３，２７．４，２８．３，３０．５，３３．０，３８．８，３９．４，４３．３，４５．３，４９．８，８２．９，８８．２，１１３．０および１１３．２（ｄ），１１５．６および１１５．８（ｄ），１２５．９，１２７．９（ｄ），１２９．１，１２９．４，１３３．５，１３４．７，１３７．３，１４０．１（ｄ），１４４．３，１６１．０および１６３．４（ｄ），１７２．６。
（１６Ｅ）−１６−（３−カルバモイルベンジリデン）−１７−オキソエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボキサミド（５９）の合成
３−カルボキサミド−エストロン（５８）（２５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（２５０ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％、１．７ｍＬ）を加えた。次いで、反応混合物を４０分間にわたり還流加熱した。次いで、得られた反応混合物を水（１５０ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃ（３×３５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、７０ｍｇ（１９％）の化合物５９を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：０．９５（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．４３−２．７４（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．９５（ｍ，３Ｈ），７．２４および７．５０（２ ｓ，２Ｈ，ＣＯＮＨ２），７．３７（ｄ，２Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．５７（ｔ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６３（ｄ，２Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝９．７Ｈｚ），７．８２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．８７および８．０７（２ｓ，２Ｈ，ＣＯＮＨ２），７．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），８．１０（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
（１６Ｅ，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジリデン）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボキサミド（６０）の合成
化合物５９（６８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１：１）の混合溶液（３０ｍＬ）に、ＮａＢＨ４（１０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１時間にわたり撹拌し、濃縮した。残査をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。次いで、有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物をジエチルエーテルで粉砕し、濾過して、６８ｍｇ（９９％）の化合物６０を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．７８（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．４３−２．８６（残りのＣＨおよびＣＨ２），３．０１（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），４．１５（ｓ，１Ｈ，１７α−Ｈ），６．５９（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．４７（ｍ，２Ｈ，ＣＨａｒ），７．６２（ｍ，３Ｈ，ＣＨａｒ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．９５（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ）。
（１６β，１７β）−１６−（３−カルバモイルベンジル）−１７−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−カルボキサミド（６１）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物６０（６４ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ）に、木炭上のパラジウム（１０％）（１１ｍｇ）を加えた。次いで、反応容器を水素で３回フラッシュし、１６時間にわたり攪拌した。得られた反応混合物をセライト上で濾過し、次いで濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＤＣＭ／ＭｅＯＤ（９５：５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、２１ｍｇ（３２％）の化合物６１を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：０．９３（ｓ，３Ｈ，１８−ＣＨ３），１．１７−２．４９（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．８９（ｍ，２Ｈ，６−ＣＨ２），３．１８（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，１Ｈ，１７α−Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），７．４０（ｍ，３Ｈ，ＣＨａｒ），７．５８（ｓ，１Ｈ，ＣＨａｒ），７．６２（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＨａｒ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），７．７６（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ）：１１．９，２５．８，２６．９，２９．０，３１．６，３７．４，３７．５，３７．９，４１．９，４３．９，４４．５，４８．６，８１．５，１２４．５，１２４．６，１２５．１，１２７．７，１２７．８，１２８．０，１３０．５，１３２．１，１３３．４，１３６．７，１４２．９，１４４．６，１７１．２。
１７β−ＨＳＤ３
１７β−ＨＳＤ３酵素は、精巣（内分泌）、副腎（細胞内分泌）、および腫瘍内組織（細胞内分泌）に由来する、種々の供給源の活性なアンドロゲンＴを遮断することにより、進行した前立腺癌を治療するための有望な標的である（図１０）。さらに、実際の内分泌療法に相補的な１７β−ＨＳＤ３阻害剤を使用すると、相乗効果が得られることにより、抗アンドロゲン、ＬＨＲＨアゴニスト、およびアンドロゲン生合成酵素（５α−レダクターゼおよび１７α−リアーゼ）阻害剤の効果を増大させることができると信じられている４４、４５。アンドロゲン受容体（ＡＲ）のこのより完全な不活性化はまた、変異するその能力を限定し、かつ／またはアンドロゲン非依存性クローンがアンドロゲン非依存性に進展する能力を低下させるであろう。
１７β−ＨＳＤ３の阻害に関する以前の構造活性相関（ＳＡＲ）研究により、阻害活性にとって重要な基準が同定された（図１１Ａ）４６〜５２。しかしながら、１７β−ＨＳＤ３を過剰表現するＨＥＫ−２９３細胞のホモジネートにおけるそれらの良好な効果にもかかわらず、これらの阻害剤は最適ではなかった。３β−アルキル−アンドロステロン系列の第一世代の阻害剤は、シオノギ（ＡＲ＋）細胞に関して、アンドロゲン感受性疾患の治療場面では望ましくないアンドロゲン性プロファイルを示した。これらの阻害剤の阻害効力はまた、１７β−ＨＳＤ３を過剰表現するＨＥＫ−２９３細胞のホモジネートよりも無傷細胞で低く、したがって、細胞透過性が低いことが示唆された。
１７β−ＨＳＤ３阻害剤に非アンドロゲン性プロファイルを付与するために、アンドロステロン（ＡＤＴ）核の３位に導入される新しい多様な置換基に対する酵素の許容性を探索した。より具体的には、２系列のＡＤＴ誘導体（三級アミンおよびカルバメート）を、１７β−ＨＳＤ３の新しい阻害剤として設計、合成、および試験した（図１１Ｂ）。
ＡＤＴ誘導体７ａ〜ｊは、一連の市販二級アミン（スキーム１５）を使用して、エタノール還流でのオキシラン６の開環から許容収率（３５％〜７０％）で容易に得られた。同様にまた、オキシラン６を、ピペラジンまたはトランス−２，５−ジメチルピペラジンで開環して、中間体８および９を得た。続いて、８および９の遊離ＮＨを、種々のビルディングブロック（例えば、臭化ベンジル、塩化アシル、および塩化スルホニル）を使用する、一連の付加反応に供して、対応するピペラジン誘導体の１０ａ〜ｊおよび１１ａ〜ｊ（アミン）；１２ａ〜ｅおよび１３ａ〜ｄ（アミド）；ならびに１４ａ〜ｃおよび１５ａ〜ｃ（スルホンアミド）を得た。
スキーム１５：試薬および条件：（ａ）Ｒ１Ｒ２ＮＨ、エタノール、６０℃；（ｂ）ピペラジンまたは２，５−ジメチルピペラジン、エタノール、６０℃；（ｃ）Ｒ１ＣＨ２Ｂｒ；ＴＥＡ、ＤＣＭ、ｒｔ；（ｄ）Ｒ１ＣＯＣｌ、ＴＥＡ、ＤＣＭ、ｒｔ；（ｅ）Ｒ１ＳＯ２Ｃｌ、ＴＥＡ、ＤＣＭ
本明細書の以下のスキーム１６および１７に図示するように、カルバメート誘導体１７ａ〜ｉ、１８、２１、２２、および２３ａ〜ｇを調製した。カルバメート１７ａ〜ｉおよび１８は、一連の市販一級アミンを使用して、エタノール還流でオキシラン６を開環した後、アミノアルコールをカルバメートに変換する環化反応を行って調製した。最終的に、１７ｂのＣ１６ジメチル化により１８が得られた（スキーム１６）。
スキーム１６：試薬および条件：（ａ）Ｒ−ＮＨ２、エタノール、６０℃；（ｂ）トリホスゲン、ＤＩＰＥＡ、ＤＣＭ；（ｃ）ＮａＨ、ＭｅＩ、ＤＭＦ
カルバメート２１、２２、および２３ａ〜ｇは、アミノエタノール−Ｏ−ＴＢＤＭＳを使用して、エタノール還流でオキシラン６を開環した後、アミノアルコール１９をカルバメート２０に変換する環化反応を行って調製した。ＴＢＤＭＳ保護基を除去すると、対応する臭化物２２に容易に変換されるアルコール２１が得られた。最終的に、カルバメート２３ａ〜ｇは、鍵となる臭化アルキル中間体２２（スキーム１７）の種々のＮ、Ｏ、およびＳ−アルキル化反応により得られた。
スキーム１７：試薬および条件：（ａ）ＮＨ２（ＣＨ２）２ＯＴＢＤＭＳ、エタノール、６０℃；（ｂ）トリホスゲン、ＤＩＰＥＡ、ＤＣＭ；（ｃ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、ｒｔ；（ｄ）ＰＰｈ３、ＣＢｒ４、ＤＣＭ、０℃〜ｒｔ；（ｅ）３−メチルフェノール（２３ａについて）；（ｆ）ｉ）３−メチルチオフェノール、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＦ、８０℃；ｉｉ）ＫＨＳＯ５、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（２３ｂについて）；（ｇ）適切なＲ１Ｒ２ＮＨ、エタノール、６０℃（２３ｃ、２３ｄ、２３ｅ、および２３ｆについて）；（ｈ）ｉ）プロピルアミン、Ｎａ２ＣＯ３、ＤＭＦ、８０℃；ｉｉ）プロピオン酸クロライド、トリエチルアミン、ＤＣＭ、ｒｔ（２３ｇについて）
細胞ホモジネートにおける１７β−ＨＳＤ３の阻害
三級アミン誘導体
以前のＳＡＲ研究により、ＡＤＴの３β位の疎水性鎖が１７β−ＨＳＤ３により良好に許容されることが示された４８。残念ながら、これらの化合物はまた、アンドロゲン感受性細胞の増殖を刺激し、フェニルプロピル−ＡＤＴ（１）について図１１Ｂに図示されているように、比較的高い疎水性を有することが見出された。低い疎水特性および構造多様性のための潜在力を考慮して、種々の三級アミン誘導体を検討した５３。ＡＤＴスキャフォールドを、種々の非環式（７ａ〜ｄ）および環式（７ｅ〜７ｊ）アミンを使用して３β位で修飾し、得られた化合物について、１７β−ＨＳＤ３の阻害剤としてのそれらの可能性を評価した（表２）。
ヒト胎生腎（ＨＥＫ）−２９３細胞（ホモジネート）にトランスフェクトされた１７β−ＨＳＤ３を阻害する化合物７ａ〜７ｊの能力を、補因子としてのＮＡＤＰＨの存在下で、天然標識基質Δ４−ジオンから形成される標識Ｔの量を測定することにより決定した。結果は、所与の化合物について阻害活性のパーセントとして表現した。非環式誘導体の系列では、化合物７ａが最も活性な阻害剤であった（０．０１μＭで４２％および０．１μＭで８５％）。環式誘導体の場合は、化合物７ｆおよび７ｊが最良の阻害剤であり、０．０１μＭでそれぞれ４０％および３５％の阻害を示した。しかしながら、ピペラジン誘導体７ｊが、その低い疎水性（７ｆと比較して）を考慮するとより興味深いものと考えられた。
ピペラジン誘導体
種々のピペラジン誘導体を調製し分析した（表３）。阻害値は、置換アリール基（Ｚ）がピペラジン部分に結合した種々の３β−ピペラジン−ＡＤＴ誘導体（化合物１０ａ〜ｊ）について実質的に変わることはなかった。さらに、電子吸引基（例えば、ＣＦ３；Ｃｌ）または電子供与基（例えば、ＯＣＨ３）のいずれかの存在は、阻害値に対してほとんどまたはまったく効果を及ぼさなかった。化合物１０ａは、基準化合物７ｊよりも良好な阻害を示した。ピリジン環（化合物１０ｇ）は、１７β−ＨＳＤ３の阻害に対して負の影響を及ぼすように見え、極性置換基に対する許容性が見かけ上悪いことが示される。さらにまた、リンカー（Ｙ）（例えば、ＣＨ２、ＣＯ、またはＳＯ２）の改変は、阻害活性に対してほとんどまたはまったく効果を及ぼさなかった（化合物の残りの部分は不変のままである）。ｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン部分の使用は、ピペラジン部分を含む対応する化合物と比較したとき、化合物のアミン（Ｙ＝ＣＨ２）またはアミド（Ｙ＝ＣＯ）系列においては阻害を増大させなかったが、スルホンアミド系列において阻害を増大させた。０．０１μＭにおいて５５％および７９％の阻害値が、それぞれ化合物１５ｂおよび１５ｃについて記録された。スルホンアミド１５ｃは、その対応するアミド１３ｄ（１７％）およびその対応するアミン１１ｃ（１４％）よりも高い阻害パーセント（０．０１μＭで７９％）を示した。阻害に対する強力な負の影響はまた、Ｃ１９−ステロイド核でＣ２１−ステロイド核が置換されたときに観察することができ、これにより、１７β−ＨＳＤ３がアンドロスタンスキャフォールドに対して、プレグナンスキャフォールドと比較して明らかな選択性を有することが示される（Ｚ＝Ｃ６Ｈ５；Ｙ＝ＣＨ２、およびＸ＝ピペラジンの場合、０．１μＭでそれぞれ８４％阻害対１２％阻害）。最後に、アンドロスタン誘導体７ｊのＣ４−Ｃ５位の不飽和の存在は、酵素阻害に重要な影響を及ぼさなかった。
カルバメート誘導体
１７β−ＨＳＤ３に対して有望な阻害活性を示す、３β−カルバメート−ＡＤＴ誘導体の小規模ライブラリーが以前合成された４６。良好な活性にもかかわらず、これらの化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏで加水分解を受けやすいエステル基（図１１Ｂの４および５を参照のこと）を有する。カルバメート部分上により安定な置換基をを有する改良された阻害剤を提供するために、さらなる一連の新しいカルバメートアナログを調製した（表４）。
化合物１７ａ、１７ｂ、１７ｄ、１７ｆ、１７ｇ、１７ｈ、１７ｉ、２２、および２３ａにより示されるように、酵素は、疎水性鎖を有するすべてのカルバメートに対して良好な許容性を示した。化合物１７ｅ、２１、２３ｂ、２３ｃ、２３ｅ、２３ｆ、および２３ｇにより示されるように、親水性鎖を有するカルバメートについては、弱い阻害結果が得られた。これは、アルコール２１の阻害活性を対応する臭化物２２と比較する場合、およびｐ−ＣＦ３−フェニル誘導体１７ｄの阻害活性をｐＣＦ３−ピリジン誘導体１７ｅと比較する場合に特に明らかである。さらに、スルホン誘導体２３ｂはその対応するエーテル２３ａよりも効力が低かった。化合物１７ｂのＣ１６位への２つのメチル基の付加は、明らかに酵素による許容性が十分でなく、その結果、化合物１８は、１７β−ＨＳＤ３に対し極めて弱い阻害を示すのみであった。基準化合物４に対する、阻害活性のわずかな改善が、化合物１７ａ、１７ｂ、１７ｄ、１７ｆ、１７ｇ、および２３ａで観察された。
本開示の一実施形態では、下記の構造
［式中、Ｒはヘテロシクリルまたは−ＮＲａＲｂ（式中、ＲａおよびＲｂはそれぞれ独立して、アルキルまたはアラルキルである）である］を有する１７β−ＨＳＤ３の阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩もしく互変異性体が含まれる。
別の実施形態では、下記の構造：
［式中：
Ｘは、
であり；
Ｙは、−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−、または−Ｓ（Ｏ）２であり；かつＺは、シクロアルキル、アリール、またはヘテロシクリルである］を有する１７β−ＨＳＤ３のさらなる阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体が含まれる。
一実施形態では、１７β−ＨＳＤ３阻害剤は、下記の構造、
またはその薬学的に許容可能な塩を有する。一実施形態では、阻害剤は、上記化合物の対応する塩酸（ＨＣｌ）塩、または上記化合物のピペラジン部分上の他の酸付加塩である。
別の実施形態では、１７β−ＨＳＤ３阻害剤は、以下のプロドラッグ構造
またはその薬学的に許容可能な塩を有する。一実施形態では、阻害剤は、上記化合物の対応する塩酸（ＨＣｌ）塩、または上記化合物のピペラジン部分上の他の酸付加塩である。ＲはＣ１〜Ｃ４アルキル基を含む。
別の実施形態では、１７β−ＨＳＤ３阻害剤は、以下のプロドラッグ構造、
またはその薬学的に許容可能な塩を有する。一実施形態では、阻害剤は、上記化合物の対応する塩酸（ＨＣｌ）塩、または上記化合物のピペラジン部分上の他の酸付加塩である。
別の実施形態では、下記の構造
［式中、Ｒ１は、アルキル、アラルキル、ヘテロシクリル、シクロアルキル、−ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２−アリール、ヘテロシクリル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（Ｏ−アシル）ＣＨ２−ヘテロシクリル、または−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲａＲｂ（式中、ＲａおよびＲｂはそれぞれ独立して、アルキル、シクロアルキル、アシル、またはアラルキルである）であり；Ｒ２はそれぞれ独立して、水素またはアルキルである］を有するまたさらなる１７β−ＨＳＤ３阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体が含まれる。別の実施形態では、上記化合物は、下記の構造：
［式中、
Ｘ１はアルキルであり、
Ｒ２は独立して水素またはアルキルであり、
Ｒ３はアルキル、水素、またはアラルキルである］、
またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体を有する。
別の実施形態では、下記の構造
［式中、
Ｒ２は独立して水素またはアルキルであり、
Ｒ４は水素またはアラルキルであり、
Ｒ５はアルキル、水素、またはアラルキルである］
を有するまたさらなる１７β−ＨＳＤ３阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体が含まれる。
無傷細胞における１７β−ＨＳＤ３の阻害
ＨＥＫ−２９３細胞のホモジネートにおける化合物の阻害活性を確定した後、これらの化合物が、１７β−ＨＳＤ３を過剰発現する無傷細胞においてそれらの阻害作用を発揮する能力を判定した。表２の結果（無傷細胞について得られた）は、三級アミン７ａが最良の阻害剤であることを示している。表３の結果は、化合物１０ａ、１４ｂ、１５ｂ、および１５ｃのみが、細胞ホモジネートにおいて活性の４０％超を阻害したことを示す（０．０１μＭでそれぞれ５１、４５、５５、７９％の阻害）。さらに、無傷細胞の結果は、１５ｂが最良の阻害特性を有することも示した。４−ジオンのＴへの変換において、０．１μＭで８４％の阻害を示したので、化合物１５ｂは、５２、４５、および４７％の値をそれぞれ示した１０ａ、１４ｂ、および１５ｃよりも、無傷細胞において効力のある阻害剤である。表４に示すカルバメートベースの阻害剤は、表２および３に示す化合物系列のいずれよりも効力の少ない阻害剤であるように見える。表４に示す化合物はいずれも、細胞ホモジネートにおいて、０．０１μＭで４０％を超える阻害値を示さなかった。さらに、化合物１７ａ〜ｉ、２２、２３ａ、および２３ｄのみが、０．１μＭのより高い報告濃度で、このレベルの酵素阻害を上回った。化合物１７ａは、無傷細胞において１７β−ＨＳＤ３活性を４４％阻害することを考慮して、カルバメート−ＡＤＴ誘導体のこの系列の代表的な阻害剤として選択した。
ピペラジン誘導体１５ｂ、第一世代阻害剤５、および天然基質Δ４−ジオンのＩＣ５０値を測定した。細胞ホモジネートおよび無傷細胞の両方におけるアッセイで効力が低かったため、カルバメート誘導体１７ａは、ＩＣ５０測定用に選択しなかった。さらに、アンドロゲン性化合物であることが示されたため、三級アミン誘導体７ａも選択しなかった。１７β−ＨＳＤ３を過剰発現する無傷ＨＥＫ−２９３細胞について得られた阻害曲線から（図１２）、１５ｂは、基準化合物５よりも８倍良好な阻害剤であることが見出された（それぞれＩＣ５０＝６および５１ｎＭ）。化合物１５ｂはまた、それ自体が阻害剤として使用された非標識Δ４−ジオンよりも（ＩＣ５０＝３３７ｎＭ）、標識Δ４−ジオンのＴへの変換の阻害において、５６倍良好であることが見出された。
シオノギ細胞に対する増殖（アンドロゲン様）活性
アンドロゲン依存性疾患の治療場面では、有望な１７β−ＨＳＤ３候補の開発にとって重要な基準は、それらの非アンドロゲン特性またはアンドロゲン受容体（ＡＲ）を活性化しないそれらの能力である。したがって、アンドロゲン感受性（ＡＲ＋）シオノギ細胞に対する、アゴニスト（増殖）活性阻害剤７ａ、１５ｂ、１７ａ、５、および３β−ベンジル−３α−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン−１７−オンを評価した（図１３）。このアッセイでは（基礎細胞増殖（対照）を１００％とした）、効力のあるアンドロゲンジヒドロテストステロン（０．１μＭ）は、３２０％まで細胞増殖を刺激し、抗アンドロゲン（ＡＲアンタゴニスト）は、細胞増殖を刺激しなかった。細胞増殖を顕著に刺激しなかった阻害剤５とは対照的に、第一世代阻害剤ＣＳ−２１３は、完全にアンドロゲン様であり、０．１および１μＭでそれぞれ、基礎細胞増殖の２２５％および３９６％を誘導する。化合物７ａは、強力な増殖効果を示した（０．１および１μＭでそれぞれ２９２％および３１４％）。しかしながら、これらの２つの濃度では、化合物１７ａおよび１５ｂは、ＡＲ＋細胞の増殖を刺激せず、したがって、アンドロゲン様活性のないことが示唆された。こうして、スルホンアミド１５ｂは、１７β−ＨＳＤ３を過剰表現する、トランスフェクトされたＨＥＫ−２９３無傷細胞における４−ジオンのＴへの変換に対する強力な阻害活性（ＩＣ５０＝５ｎＭ）を有する非アンドロゲン性阻害剤である。
スキーム１８〜２１で以下に図示するように、さらなる１７β−ＨＳＤ３阻害剤を調製した。
実験
材料、方法、合成、および特性評価
化学試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａｎａｄａ Ｌｔｄ．（Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）から購入した。通常の溶媒は、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）から入手し、そのまま使用した。無水ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）およびフラッシュカラムクロマトグラフィーはそれぞれ、０．２０ｍｍのシリカゲル６０ Ｆ２５４プレート上、およびＳｉｌｉｃｙｃｌｅ Ｒ１００３０Ｂ ２３０〜４００メッシュのシリカゲル（Ｑｕｅｂｅｃ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）で実施した。赤外スペクトル（ＩＲ）は、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒシリーズ１６００ ＦＴ−ＩＲスペクトロメータ（Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ）を使用して記録し、重要なバンドをｃｍ−１で報告した。核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００デジタルスペクトロメータ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して、１Ｈについては４００ＭＨｚ、１３Ｃについては１００．６ＭＨｚで記録した。化学シフト（δ）は、ｐｐｍで表現し、１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲについてそれぞれ、クロロホルム（７．２６および７７．０ｐｐｍ）、アセトン（２．０６および２９．２４ｐｐｍ）またはメタノール（３．３１ｐｐｍおよび４９．０）を基準とした。低解像度質量スペクトル（ＬＲＭＳ）は、ターボイオンスプレー源を装備したＰＥ Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ−１５０ｅｘ装置（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して記録し、ｍ／ｚで表現した。高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、Ｄｅｐａｒｔｅｍｅｎｔ ｄｅ Ｃｈｉｍｉｅ ｄｅ ｌ’Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｌａｖａｌ（Ｑｕｅｂｅｃ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）でＰｉｅｒｒｅ Ａｕｄｅｔにより提供された。化合物の純度は、Ｌｕｎａフェニルヘキシルカラム（７５×４．６ｍｍ ｉｄ、３μｍ、シリアルＮ°：２２８０４８−２、６０Å）またはＮｏｖａ Ｐａｃｋ Ｃ１８逆相カラム（１５０ｍｍ×３．０ｍｍ ｉｄ、４ｍＭ、６０Å）および逆相カラムを装備した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Ｗａｔｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）により決定した。
３β−置換−３α−ヒドロキシ−アンドロスタン−１７−オン誘導体（７ａからｊ）の合成のための基本手順
オキシラン６５０（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の無水エタノール溶液（３ｍＬ）に、適切なアミン（０．５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を６０℃で５時間にわたり撹拌した。続いて溶媒を蒸発させ、得られた混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した後、メチルイソシアネート樹脂（３００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ／ｇ）を加えた。この懸濁液を２時間にわたり撹拌し、濾過して対応する粗アミン生成物を得た。粗アミンを、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、所望のアミン７ａ〜ｊを得た。化合物はすべて、１Ｈ ＮＭＲおよびＭＳ分析により特徴づけた。化合物７ａについては、１３Ｃ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣのデータも収集した。
（３α，５α）−３｛［ベンジル（エチル）アミノ］メチル｝３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（７ａ）：（１５ｍｇ、２０％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８２（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．４５（ｓ，２Ｈ），２．５２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，２Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３，１２．１，１３．８，２０．２，２１．８，２８．４，３０．８，３１．６，３２．９，３４．０，３５．１，３５．９（２×），３９．８，４０．８，４７．８，４９．４，５１．４，５４．３，６０．８，６５．３，７０．０，１２７．１，１２８．４（２×），１２８．６（２×），１３９．５，２２１．６；Ｃ２９Ｈ４４ＮＯ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３８．２；Ｃ２９Ｈ４４ＮＯ２のＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３８．３３６７、実測値 ４３８．３３７４；ＨＰＬＣ純度＝９９．２％（ＲＴ＝７．２分；９６：４ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ；定組成）。
（３α，５α）−３−｛［ベンジル（メチル）アミノ］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（７ｂ）：（２９ｍｇ、４１％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８２（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝９．０Ｈｚ，Ｊ２＝１８．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４１（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２８Ｈ４２ＮＯ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４２４．２。
（３α，５α）−３−［（ジエチルアミノ）メチル］−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（７ｃ）：（４０ｍｇ、６５％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ），０．７５−２．０８（ｍ，２２Ｈ），２．３７（ｓ，２Ｈ），２．３０（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ）；Ｃ２４Ｈ４２ＮＯ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３７６．２。
（３α，５α）−３−［（ジブチルアミノ）メチル］−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（７ｄ）：（１６ｍｇ、２４％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，３０Ｈ），２．３２（ｓ，２Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ）；Ｃ２８Ｈ５０ＮＯ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３２．２。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−（ピペリジン−１−イルメチル）アンドロスタン−１７−オン（７ｅ）：（２５ｍｇ、３９％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．０９（ｍ，２８Ｈ），２．１８（ｓ，２Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５２（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ）；Ｃ２５Ｈ４２ＮＯ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８８．２。
（３α，５α）−３−［（４−ベンジルピペリジン−１−イル）メチル］−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（７ｆ）：（３４ｍｇ、４３％）：１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２７Ｈ），２．２０（ｓおよびｍ，４Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．８８（ｂｒｏａｄ ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），７．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４８ＮＯ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４７８．１。
（３α，５α）−３−（１，４’−ビピペリジン−１’−イルメチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（７ｇ）：（２８ｍｇ、４４％）：１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１５（ｍ，３３Ｈ），２．２１（ｓ，２Ｈ），２．２５（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．４７（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，４Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３０Ｈ５１Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４７１．３。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（７ｈ）：（２９ｍｇ、４３％）：１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．２３（ｓ，２Ｈ），２．３４（ｂｒｏａｄ ｍ，４Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５８（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ）；Ｃ２５Ｈ４３Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４０３．２。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−フェニルピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（７ｉ）：（５４ｍｇ、７０％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８３（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．３２（ｓ，２Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｍ，４Ｈ），３．１８（ｍ，４Ｈ），６．７７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３０Ｈ４５Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４６５．０。
（３α，５α）−３−［（４−ベンジルピペラジン−１−イル）メチル］−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（７ｊ）：（６０ｍｇ、７６％）：１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２４（ｓ，２Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｂｒｏａｄ ｍ，４Ｈ），２．６１（ｓ，４Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ），７．２３（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｍ，４Ｈ）；Ｃ３１Ｈ４７Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４７８．９。
中間体８および９の合成
オキシラン６５０（１．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の無水エタノール溶液（１５ｍＬ）に、ピペラジン（５７３ｍｇ、６．７ｍｍｏｌ）またはｔｒａｎｓ−２，５−ジメチルピペラジン（７５５ｍｇ、６．７ｍｍｏｌ）のいずれかを加えた。この溶液を６０℃で５分間にわたり撹拌した。続いて、得られた溶液を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機層を、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で蒸発させて、粗化合物８または９を得た。溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使用するフラッシュクロマトグラフィー後に純粋な化合物を得た。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−（ピペラジン−１−イルメチル）アンドロスタン−１７−オン（８）：（７５０ｍｇ、６１％）；１Ｈ ＮＭＲ：（ＭｅＯＨ−ｄ４）０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｓ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．８０−２．１５（ｍ，２０Ｈ），２．２５（ｓ，２Ｈ），２．４５（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５８（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），２．８４（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，４Ｈ）。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（９）：（６５０ｍｇ、５３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），０．９９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−１．８５（ｍ，２２Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ），２．０４（ｍ，３Ｈ），２．２５（ｍ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１８．９Ｈｚ，１Ｈ），２．５４（ｔ，１Ｈ），２．６１（ｄ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，１Ｈ），２．９０（ｍ，３Ｈ）；Ｃ２６Ｈ４５Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４１７．３。
アミン１０ａ〜ｊおよび１１ａ〜ｊの合成のための基本手順
化合物８（２５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）または化合物９（３０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液（５ｍＬ）に、トリエチルアミン（２４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、３３μＬ）および適切な臭化ベンジル（０．１２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を一晩攪拌し、得られた溶液を蒸発させ、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：７）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ベンジルアミン１０ａ〜ｊおよび１１ａ〜ｊを得た。化合物はすべて、１Ｈ ＮＭＲおよびＭＳ分析により特徴づけた。化合物１０ａおよび１１ａについては、１３Ｃ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣのデータも収集した。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−（｛４−［３−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）アンドロスタン−１７−オン（１０ａ）：（３１ｍｇ、９７％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２７（ｓ，２Ｈ），２．４４（ｂｒｏａｄ ｍ，５Ｈ），２．６６（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），７．４２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｂｒｏａｄ ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．２，１３．８，２０．２，２１．８，２８．３，３０．８，３１．５，３２．７，３３．８，３５．１，３５．８，３５．９，３９．６，４０．７，４７．８，５１．４，５４．２，５５．７（４×），６２．３，６９．０，７０．１，１２４．０（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝３．６Ｈｚ），１２４．２（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７２Ｈｚ），１２５．６（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝３．８Ｈｚ），１２８．７，１３０．６（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｆ＝３２Ｈｚ），１３２．４，１３９．２，２２１．５；Ｃ３２Ｈ４６Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５４７．３；Ｃ３２Ｈ４６Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５４７．３５０６、実測値 ５４７．３５１０；ＨＰＬＣ純度：９７．２％（ＲＴ＝５．５分；９６：４ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ；定組成）。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−（｛４−［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）アンドロスタン−１７−オン（１０ｂ）：（３３ｍｇ、４５％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２７（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），２．６６（ｂｒｏａｄ，ｓ，４Ｈ），３．６５（ｓ，２Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４６Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５４７．１。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−（｛４−［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）アンドロスタン−１７−オン（１０ｃ）：（３２ｍｇ、９７％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２７（ｓ，２Ｈ），２．４５（ｂｒｏａｄ ｍ，５Ｈ），２．６５（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ）；７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４６Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５４７．２。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルファニル］ベンジル｝ピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（１０ｄ）：（２５ｍｇ、７１％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．７８−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２７（ｓ，２Ｈ），２．４５（ｂｒｏａｄ ｍ，５Ｈ），２．６５（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４６Ｆ３Ｎ２Ｏ２ＳのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５７９．３。
（３α，５α）−３−｛［４−（３−クロロベンジル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１０ｅ）：（３１ｍｇ、９４％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２７（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｂｒｏａｄ ｍ，５Ｈ），２．６５（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ）；７．１９（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｓ，２Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ３１Ｈ４６ＣｌＮ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５１３．３。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−｛［４−（３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル］メチル｝アンドロスタン−１７−オン（１０ｆ）：（２１ｍｇ、６４％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），０．７８−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２６（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｂｒｏａｄ ｍ，５Ｈ），２．６５（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４９Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５０９．３。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−｛［４−（ピリジン−３−イルメチル）ピペラジン−１−イル］メチル｝アンドロスタン−１７−オン（１０ｇ）：（２０ｍｇ、６５％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），０．７８−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２７（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｂｒｏａｄ ｍ，５Ｈ），２．６５（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ１＝１．３Ｈｚ，Ｊ２＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３０Ｈ４６Ｎ３Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４８０．２。
（３α，５α）−３−（｛４−［２，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１０ｈ）：（２７ｍｇ、７３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．７８−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２９（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），２．６８（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．６９（ｓ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ）；Ｃ３３Ｈ４５Ｆ６Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６１５．５。
（３α，５α）−３−（｛４−［２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１０ｉ）：（２７ｍｇ、７３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８３−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２８（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．５Ｈｚ，Ｊ２＝１９．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），２．６７（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．７０（ｓ，２Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３３Ｈ４５Ｆ６Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６１５．２。
（３α，５α）−３−（｛４−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１０ｊ）：（２９ｍｇ、７８％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．２８（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｂｒｏａｄ ｍ，５Ｈ），２．６７（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），７．７９（ｓ，２Ｈ）；Ｃ３３Ｈ４５Ｆ６Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６１５．５。

（３α，５α）−３−（｛（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−［３−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ａ）：（２５ｍｇ、７１％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．１０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２３Ｈ），２．３２（ｍ，６Ｈ），２．９１（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３，１３．８（３×），２０．２，２１．８，２８．３，３０．８，３１．６，３２．７，３３．９，３５．１，３５．９（２×），３９．４，４０．８，４７．８，５１．４，５４．３，５５．８，５６．３，５７．５，６３．８，６９．４，１２３．７（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝３．６Ｈｚ），１２５．０（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７３Ｈｚ），１２５．４（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝３．６Ｈｚ），１２８．６，１３０．５（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｆ＝３２Ｈｚ），１３２．１，１４０．３，２２１．６；Ｃ３４Ｈ５０Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５７５．２；Ｃ３４Ｈ５０Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＨＲＭＳ計算値［Ｍ＋Ｈ］＋ ５７５．３８１９、実測値 ５７５．３８２６；ＨＰＬＣ純度：９９．０％。（ＲＴ＝６．６分；７５：２５〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成勾配）
（３α，５α）−３−（｛（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｂ）：（１７ｍｇ、４９％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７８（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２３Ｈ），２．３３−２．６０（ｍ，６Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），３．３１（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３４Ｈ５０Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５７５．３。
（３α，５α）−３−（｛（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｃ）：（２２ｍｇ、６３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．１０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１５（ｍ，２４Ｈ），２．３０−２．６０（ｍ，６Ｈ），２．９１（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２０（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３４Ｈ５０Ｆ３Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５７５．２。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−｛３−［（トリフルオロメチル）スルファニル］ベンジル｝ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｄ）：（１５ｍｇ、４１％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．１０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２３Ｈ），２．３０−２．６０（ｍ，６Ｈ），２．９１（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２１（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ）；Ｃ３４Ｈ５０Ｆ３Ｎ２Ｏ２ＳのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６０７．２。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−４−（３−クロロベンジル）−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｅ）：（１２ｍｇ、３７％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２３Ｈ），２．３０−２．６２（ｍ，６Ｈ），２．８９（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０３（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｓ，２Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ３３Ｈ５０ ３５ＣｌＮ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５４１．３。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−｛［（２ξ，５ξ）−４−（３−メトキシベンジル）−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル］メチル｝アンドロスタン−１７−オン（１１ｆ）：（１４ｍｇ、４４％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１１（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２４Ｈ），２．３０−２．８０（ｍ，６Ｈ），２．８９（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｄ Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），４．０１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｍ，１Ｈ），６．８９（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｍ，１Ｈ）；Ｃ３４Ｈ５３Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５３７．４。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−（ピリジン−３−イルメチル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｇ）：（１０ｍｇ、３３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１２（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．３０−２．６８（ｍ，７Ｈ），２．９０（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｍ，１Ｈ），８．５２（ｍ，２Ｈ）；Ｃ３２Ｈ５０Ｎ３Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５０８．３。
（３α，５α）−３−（｛（２ξ，５ξ）−４−［２，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｈ）：（４６ｍｇ、９８％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７８（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９５（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２３Ｈ），２．３５−２．６０（ｍ，６Ｈ），２．９５（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｓ，１Ｈ）；Ｃ３５Ｈ４９Ｆ６Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６４３．３。
（３α，５α）−３−（｛（２ξ，５ξ）−４−［２，４−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｉ）：（４６ｍｇ、９８％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７８（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２３Ｈ），２．３２−２．６０（ｍ，６Ｈ），２．９４（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），３．３９（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３５Ｈ４９Ｆ６Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６４３．３。
（３α，５α）−３−（｛（２ξ，５ξ）−４−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル｝メチル）−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１１ｊ）：（２０ｍｇ、４３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７８（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），１．０９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１２（ｍ，２４Ｈ），２．３５−２．５７（ｍ，６Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｓ，２Ｈ）；Ｃ３５Ｈ４９Ｆ６Ｎ２Ｏ２のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６４３．４。
アミド１２ａ〜ｅおよび１３ａ〜ｄの合成のための基本手順
化合物８（４０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）または化合物９（２５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ溶液（３ｍＬ）に、トリエチルアミン（４．０ｅｑ）および適切な塩化アシル（２．０ｅｑ）を加えた。次いで、この溶液を室温で３時間にわたり撹拌した。得られた溶液を濃縮し、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（７：３〜９：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、対応するアミドに１２ａ〜ｅおよび１３ａ〜ｄを得た。化合物はすべて、１Ｈ ＮＭＲおよびＭＳ分析により特徴づけた。化合物１２ａ、１２ｃ、および１３ａについては、１３Ｃ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣのデータも収集した。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−｛［４−（フェニルカルボニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝アンドロスタン−１７−オン（１２ａ）：（３３ｍｇ、６４％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１２（ｍ，２２Ｈ），２．３１（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５７および２．７０（ｂｒｏａｄ ２ｓ，４Ｈ），３．４３（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．７９（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），７．４０（ｍ，５Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ １１．２，１３．８，２０．２，２１．７，２８．３，３０．８，３１．５，３２．４，３３．６，３５．０，３５．８，３５．９，３９．３，４０．６，４７．８，５１．４，５４．１，５５．４（２×），５５．７（２×），６９．１，７０．５，１２７．０（２×），１２８．５（２×），１２９．８，１３５．５，１７０．３，２２１．５；Ｃ３１Ｈ４５Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４９３．０；Ｃ３１Ｈ４５Ｎ２Ｏ３のＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４９３．３４２５、実測値４９３．３４３３；ＨＰＬＣ純度：９４．８％（ＲＴ＝１０．２分；７５：２５〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成）。
（３α，５α）−３−｛［４−（シクロヘキシルカルボニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１２ｂ）：（３０ｍｇ、５６％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１２（ｍ，２１Ｈ），２．２９（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｍ，４Ｈ），２．９２（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），３．４９（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．６１（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ）；Ｃ３１Ｈ５１Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４９９．３。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−｛［２−（トリフルオロメチル）フェニル］カルボニル｝−ピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（１２ｃ）：（３０ｍｇ、５４％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１２（ｍ，２２Ｈ），２．３０（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１９．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５３（ｍ，２Ｈ），２．７０（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．１８（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｂｒｏａｄ ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．２，１３．８，２０．２，２１．７，２８．３，３０．８，３１．５，３２．３，３３．６，３５．１，３５．８，３５．９，３９．３，４０．６，４１．９，４７．３，４７．８，５１．４，５４．１，５５．１，５５．２，６９．０，７０．６，１２３．６（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７４Ｈｚ），１２６．６（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝４．４Ｈｚ），１２６．７（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｆ＝３２Ｈｚ），１２７．２，１２９．２，１３２．２，１３４．７，１６７．３，２２１．４；Ｃ３２Ｈ４４Ｆ３Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５６１．１；Ｃ３２Ｈ４４Ｆ３Ｎ２Ｏ３のＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５６１．３２９９、実測値 ５６１．３３０４；ＨＰＬＣ純度：９６．７％（ＲＴ＝１０．７分；７５：２５〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成）。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（１２ｄ）：（４２ｍｇ、６９％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１２（ｍ，２２Ｈ），２．３２（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５９（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），２．７２（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．４１（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．８０（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），７．５５（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｓ，２Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４４Ｆ３Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５６１．４。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）フェニル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（１２ｅ）：（４４ｍｇ、７２％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．３２（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５７（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），２．７３（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．３９（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．８０（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４４Ｆ３Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５６１．２。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−（フェニルカルボニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１３ａ）：（２５ｍｇ、３１％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｍ，３Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．００（ｍ，２３Ｈ），２．０５−２．１７（ｍ，２Ｈ），２．３４−２．４７（ｍ，３Ｈ），２．９０（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），３．０６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），７．３０−７．４２（ｍ，５Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．６，１１．２，１３．８（２×），２０．２，２１．７，２８．３，３０．８，３１．５，３２．５，３３．８，３５．０，３５．８，３５．９，３９．４，４０．７，４７．８，５１．４，５１．７，５４．０，５４．２，５５．１（２×），６５．８，７０．９，１２６．５，１２８．５（２×），１２９．３（２×），１３６．４，１７１．２，２２１．５；Ｃ３３Ｈ４９Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５２１．４；Ｃ３３Ｈ４９Ｎ２Ｏ３のＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５２１．３７３８、実測値 ５２１．３７４５；ＨＰＬＣ純度：９６．４％（ＲＴ＝１２．１分；７５：２５〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成）。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−４−（シクロヘキシルカルボニル）−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１３ｂ）：（１４ｍｇ、４４％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｍ，６Ｈ），０．８０−２．００（ｍ，２２Ｈ），２．０２−２．１８（ｍ，２Ｈ），２．３４−２．４７（ｍ，３Ｈ），２．９０−３．１５（ｂｒｏａｄ ｍ，３Ｈ），３．４６および３．６０（２ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０２，４．２８および４．７０（３ｍ，１Ｈ）；Ｃ３３Ｈ５５Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５２７．３。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１３ｃ）：（２７ｍｇ、７７％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），１．２６（ｍ，３Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．７８−２．００（ｍ，２２Ｈ），２．０２−２．２０（ｍ，２Ｈ），２．３５−２．４７（ｍ，３Ｈ），２．９５（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．０７（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ）；Ｃ３４Ｈ４８Ｆ３Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５８９．３。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−｛［４−（トリフルオロメチル）フェニル］カルボニル｝ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１３ｄ）：（３１ｍｇ、８９％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｍ，３Ｈ），１．４２（ｍ，３Ｈ），０．８０−１．９８（ｍ，２２Ｈ），２．０３−２．０９（ｍ，２Ｈ），２．３５−２．４７（ｍ，３Ｈ），２．９５（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），３．０５（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），３．５８（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３４Ｈ４８Ｆ３Ｎ２Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５８９．２。
スルホンアミド１４ａ〜ｃおよび１５ａ〜ｃの合成のための基本手順
化合物８（３０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）または化合物９（３０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液（３ｍＬ）に、トリエチルアミン（３３ｍＬ、２４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）および適切な塩化スルホニル（０．１２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、この溶液を室温で３分間にわたり撹拌した。得られた溶液を濃縮し、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：７〜１：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、対応するスルホンアミド１４ａ〜ｃおよび１５ａ〜ｃを得た。化合物はすべて、１Ｈ ＮＭＲおよびＭＳ分析により特徴づけた。化合物１４ａ、１５ｂ、および１５ｃについては、１３Ｃ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣのデータも収集した。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝ピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（１４ａ）：（２９ｍｇ、６３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７４（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．２８（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｓ，１Ｈ），２．７２（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，４Ｈ），３．０５（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），７．７３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．２，１３．８，２０．２，２１．７，２８．２，３０．７，３１．５，３２．２，３３．６，３５．０，３５．８，３５．９，３９．１，４０．５，４６．３（２×），４７．８，５１．４，５４．１，５４．７（２×），６８．８，７０．６，１２３．２（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７３Ｈｚ），１２４．７（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝３．７Ｈｚ），１２９．６，１３０．０，１３０．９，１３１．９（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｆ＝３３Ｈｚ），１３７．０，２２１．４；Ｃ３１Ｈ４３Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ６１９．５；Ｃ３１Ｈ４４Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳのＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５９７．２９６８、実測値 ５９７．２９７４；ＨＰＬＣ純度：９８．４％（ＲＴ＝１５．４分；７０：３０〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成）。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−｛［２−（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝ピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（１４ｂ）：（３３ｍｇ、７２％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７５（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１２（ｍ，２１Ｈ），２．２９（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．６９（ｍ，５Ｈ），３．２６（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），７．７２（ｍ，２Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３１Ｈ４３Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ６１９．２。
（３α，５α）−３−ヒドロキシ−３−［（４−｛［４−（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝−ピペラジン−１−イル）メチル］アンドロスタン−１７−オン（１４ｃ）：（２６ｍｇ、５６％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７４（ｓ，３Ｈ），０．８４（ｓ，３Ｈ），０．７５−２．１０（ｍ，２３Ｈ），２．２７（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｓ，１Ｈ），２．７２（ｂｒｏａｄ ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，４Ｈ），３．０６（ｂｒｏａｄ ｓ，４Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３１Ｈ４３Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ６１９．３。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１５ａ）：（３０ｍｇ、７２％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７５（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−２．１８（ｍ，２２Ｈ），２．３０−２．４６（ｍ，３Ｈ），２．６９（ｓ，１Ｈ），２．９５（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｄｄ，Ｊ１＝３．５Ｈｚ，Ｊ２＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３９（ｓ，２Ｈ），４．１０（ｍ，１Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ）；Ｃ３３Ｈ４７Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ６４７．４。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−｛［２−（トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１５ｂ）：（２９ｍｇ、６３％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７５（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｍ，３Ｈ），１．１９（ｍ，３Ｈ），０．７５−１．９８（ｍ，１９Ｈ），２．００−２．１７（ｍ，２Ｈ），２．３３（ｔａｐｐ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝１９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８２（ｓ，１Ｈ），２．９０（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３５（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，２Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．６，１１．２，１３．８，１５．６，２０．２，２１．７，２８．３，３０．７，３１．５，３２．４，３３．８，３５．０，３５．８，３５．９，３９．３，４０．７，４６．０，４７．８，４９．５，５１．４，５２．４，５４．２，５４．７，６５．７，７０．９，１２２．６（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７４Ｈｚ），１２７．５（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｆ＝３３Ｈｚ），１２８．５（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝６．４Ｈｚ），１３１．９，１３２．１，１３２．５，１３９．３，２２１．５；Ｃ３３Ｈ４７Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ６４７．２；Ｃ３３Ｈ４８Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳのＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６２５．３２８１、実測値 ６２５．３２９１；ＨＰＬＣ純度：９８．９％（ＲＴ＝１６．１分；７０：３０〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成勾配）。
（３α，５α）−３−｛［（２ξ，５ξ）−２，５−ジメチル−４−｛［２−トリフルオロメチル）フェニル］スルホニル｝ピペラジン−１−イル］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１５ｃ）：（３５ｍｇ、７０％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７５（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，３Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−１．９８（ｍ，２０Ｈ），２．００−２．１８（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．４５（ｍ，３Ｈ），２．６８（ｓ，１Ｈ），２．９５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｄｄ，Ｊ１＝３．６Ｈｚ，Ｊ２＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｓ，２Ｈ），４．０５（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：９．１，１１．２，１３．８，１４．９，２０．２，２１．７，２８．３，３０．７，３１．５，３２．４，３３．７，３５．０，３５．８，３５．９，３９．３，４０．７，４６．１，４７．８，４９．９，５１．４，５３．０，５４．２，５４．６，６５．６，７１．０，１２３．２（ｑ，ＪＣ−Ｆ＝２７３Ｈｚ），１２６．１，１２６．２（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｃ−Ｆ＝３．６Ｈｚ），１２７．４（２×），１３４．１（ｑ，ＪＣ−Ｃ−Ｆ＝３３Ｈｚ），１４４．２，２２１．５；Ｃ３３Ｈ４７Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ６４７．４；Ｃ３３Ｈ４８Ｆ３Ｎ２Ｏ４ＳのＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６２５．３２８１、実測値 ６２５．３２８７；ＨＰＬＣ純度：９８．７％（ＲＴ＝１７．０分；７０：３０〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成）。
３−カルバメート−アンドロステロン誘導体１７ａ〜１７ｉの合成のための基本手順
オキシラン６５０（７５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の無水エタノール溶液（５ｍＬ）に、適切な一級アミン（０．７５ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、この溶液を７０℃で一晩攪拌した。続いて、得られた溶液を濃縮し、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（７：３〜９：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、対応する二級アミン生成物１６を好収率（７０〜９０％）で得た。
０℃およびアルゴン雰囲気下の化合物１６（０．２２ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ溶液（７ｍＬ）に、ジイソプロピルアミン（０．６６ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、この溶液を室温で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ＤＣＭで抽出し、相分離器（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して濾過し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：９〜３：７）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、対応するカルバメート１７ａ〜ｉを得た。化合物はすべて、１Ｈ ＮＭＲおよびＭＳ分析により特徴づけた。化合物１７ａについては、１３Ｃ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣのデータも収集した。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−ベンジル−１０，１３−ジメチルテトラデカヒドロ−２’Ｈスピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ａ）：（２０ｍｇ、１８％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．２Ｈｚ，Ｊ２＝１７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１６（ｓ，２Ｈ），４．３９（ｓ，２Ｈ），７．３１（ｍ，３Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．４，１３．８，２０．２，２１．７，２７．８，３０．６，３１．５，３２．８，３３．８，３５．０，３５．４，３５．８，３９．４，４０．８，４７．７，４８．１，５１．３，５３．８，５５．６，７８．９，１２７．９，１２８．０，１２８．８（２×），１２９．７，１３５．９，１５７．６，２２１．３；Ｃ２８Ｈ３７ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４５８．３；Ｃ２８Ｈ３８ＮＯ３のＨＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３６．２８４６、実測値 ４３６．２８５４；ＨＰＬＣ純度：９８．７％（ＲＴ＝１３．９分；７０：３０〜５：９５ ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ 定組成勾配）。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−（４−メチルベンジル）テトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｂ）：（１３４ｍｇ、３８％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｓ，２Ｈ），４．３４（ｓ，２Ｈ），７．１９（ｓ，４Ｈ）；Ｃ２９Ｈ３９ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４７２．２。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−（４−メトキシベンジル）−１０，１３−ジメチルテトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｃ）：（１８ｍｇ、１６％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２２Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），４．３１（ｓ，２Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２９Ｈ４０ＮＯ４ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４８８．３。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−［４−（トリフルオロメチル）ベンジル］テトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｄ）：（５５ｍｇ、３３％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｓ，２Ｈ），４．５１（ｓ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２９Ｈ３６Ｆ３ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５２６．１。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−｛［（６−トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］メチル｝テトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｅ）：（１８ｍｇ、２４％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｓ，２Ｈ），４．５８（ｓ，２Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２８Ｈ３５Ｆ３Ｎ２Ｏ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５２７．４。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］テトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｆ）：（６２ｍｇ、３７％）：１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８８（ｓ，３Ｈ），０．８２−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｓ，２Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），７．５７（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｍ，２Ｈ）；Ｃ２９Ｈ３６Ｆ３ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５２６．４。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−［３−（トリフルオロメチル）ベンジル］テトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｇ）：（３０ｍｇ、１８％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ），０．８２−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｓ，２Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），７．６５（ｍ，４Ｈ）；Ｃ２９Ｈ３６Ｆ３ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５２６．０。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−１０，１３−ジメチルテトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｈ）：（２８ｍｇ、１５％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ），０．８１−２．１０（ｍ，２１Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），４．６４（ｓ，２Ｈ），８．００（ｓ，３Ｈ）；Ｃ３０Ｈ３５Ｆ６ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５９４．２。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−シクロヘキシル−１０，１３−ジメチルテトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１７ｉ）：（１９ｍｇ、１８％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８８（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．０８（ｍ，３１Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｓ，２Ｈ），３．５３（ｍ，１Ｈ）；Ｃ２７Ｈ４１ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４５０．４。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３，１６，１６−テトラメチル−３’−（４−メチルベンジル）テトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（１８）の合成
アルゴン雰囲気下の化合物１７ｂ（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（油中６０％、８９ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間にわたり攪拌した。次いで、ヨウ化メチル（１１０μＬ、２５０ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を一晩還流した。続いて、反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。粗化合物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１８（３２ｍｇ、３０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ），１．０３（ｓ，３Ｈ），１．１６（ｓ，３Ｈ），０．８０−１．８５（ｍ，２０Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），３．０３（ｓ，２Ｈ），４．３７（ｓ，２Ｈ），７．１５（ｓ，４Ｈ）；Ｃ３１Ｈ４３ＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５００．２。
（３α，５α）−３−｛［（２｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）アミノ］メチル｝−３−ヒドロキシアンドロスタン−１７−オン（１９）の合成
オキシラン６５０の無水エタノール溶液（５０ｍＬ）に、２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エタノールアミン（１．７５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を５時間にわたり還流した。続いて、得られた溶液を濃縮し、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物１９（１．０ｇ、６６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．０８（ｓ，６Ｈ），０．８１（ｓ，６Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．８０−２．１０（ｍ，２０Ｈ），２．２２および２．３８（２ｍ，２Ｈ），２．４８（ｓ，２Ｈ），２．７２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｍ，１Ｈ），３．７２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ２８Ｈ５２ＮＯ３ＳｉのＬＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４７８．２。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’（２−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝エチル）−１０，１３−ジメチルテトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２０）の合成
０℃およびアルゴン雰囲気下の化合物１９（１．０ｇ、２．２ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）に、ジイソプロピルアミン（７６０μＬ、５６４ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（３２５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、この溶液を室温で８時間にわたり撹拌した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ＤＣＭで２回抽出し、相分離器（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して濾過し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２０（３７０ｍｇ、３６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．０９（ｓ，６Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．８０−２．０７（ｍ，２２Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２９Ｈ４９ＮＯ４ＳｉＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５２６．５。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−（２−ヒドロキシエチル）−１０，１３−ジメチルテトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２１）の合成
室温およびアルゴン雰囲気下の化合物２０（３６０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（７０ｍＬ）溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）のＴＨＦ溶液（１．０Ｍ；１．０５ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１時間にわたり攪拌した。次いで、得られた反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で蒸発させて、粗２１を得た。粗化合物を、ＥｔＯＡｃを使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、純粋な２１（２２５ｍｇ、７６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８５（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．０８（ｍ，２３Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｓ，１Ｈ），３．６７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２３Ｈ３５ＮＯ４ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４１２．２。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−（２−ブロモエチル）−１０，１３−ジメチルテトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２２）の合成
０℃およびアルゴン雰囲気下の化合物２１（２２５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ溶液（５０ｍＬ）に、トリフェニルホスフィン（３０３ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（３８３ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１時間にわたり攪拌した。次いで、得られた反応混合物を、水で洗浄し、相分離シリンジ（Ｂｉｏｔａｇｅ）を使用して有機相を乾燥した。粗化合物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４：６）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２２（２３５ｍｇ、９０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８５（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｓ，３Ｈ），０．８２−２．０８（ｍ，Ｈ，残りのＣＨおよびＣＨ２），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｓ，４Ｈ）；Ｃ２３Ｈ３４ ７９ＢｒＮＯ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ４７４．１。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−［２−（３−メチルフェノキシ）エチル］テトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２３ａ）の合成
３−メチルフェノール（２２μＬ、２２ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（２ｍＬ）を、７０℃で１０分間にわたり攪拌した後、化合物２２（３０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、アルゴン雰囲気下、７０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＮａＯＨ水溶液（１．０Ｎ）に注ぎ、ジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で連続して洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、濃縮した。粗生成物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：８）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２３ａ（１１ｍｇ、３４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８８（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．０７（ｍ，Ｈ，残りのＣＨおよびＣＨ２），２．２９（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．５９（ｍ，２Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｍ，３Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）；Ｃ３０Ｈ４１ＮＯ４ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５０２．４。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−｛２−（３−メチルフェニル）スルホニル］エチル｝テトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２３ｂ）の合成
３−メチルベンゼンチオール（４１ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（４６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）を、７０℃で１０分間にわたり撹拌した後、化合物２２（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、アルゴン雰囲気下、７０℃で３時間にわたり攪拌した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で連続して洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、濃縮して対応する粗チオエテール誘導体を得た。続いて、粗チオエテール生成物（４５ｍｇ）をメタノール／水混合液（１：１）で希釈した後、オキソン（１１２ｍｇ）を加えた。次いで、得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。続いて、粗反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。次いで、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、濃縮した。粗生成物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、化合物２３ｂ（連結２工程反応の場合、９ｍｇ、１６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．０７（ｍ，２１Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），３．３０（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｍ，２Ｈ），７．７７（ｍ，２Ｈ）；Ｃ３０Ｈ４１ＮＯ５ＳＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５５０．２。
３−カルバメートアンドロステロン誘導体２３ｃ〜２３ｆの合成のための基本手順
化合物２２（３０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（２ｍＬ）に、適切な二級アミン（０．２０ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を７０℃で３時間にわたり撹拌した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で連続して洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、濃縮した。粗生成物を、溶出系としてジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン（９０：９：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、純粋な２３ｃ、２３ｅおよび２３ｆを得るか、または溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、２３ｄを得た。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−３’−［２−（ピペリジン−１−イル）エチル］テトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２３ｃ）：（７ｍｇ、２２％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｓ，３Ｈ），０．８０−２．０８（ｍ，２４Ｈ），２．２６（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０５−３．３０（ｍ，４Ｈ），３．４２（ｓ，２Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２８Ｈ４７Ｎ３Ｏ３のＬＲＭＳ ［Ｍ＋ＮＨ３］＋ ４７３．３。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−｛２−［エチル（フェニル）アミノ］エチル｝−１０，１３−ジメチルテトラヒドロデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２３ｄ）：（１６ｍｇ、４２％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８５（ｓ，３Ｈ），０．８８（ｓ，３Ｈ），０．８２−２．０７（ｍ，２４Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５３（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，２Ｈ），３．３２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ３２Ｈ４６Ｎ２Ｏ３ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５２９．４。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−｛２−［シクロヘキシル（エチル）アミノ］エチル｝−１０，１３−ジメチルテトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２３ｅ）：（１３ｍｇ、３９％）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８１（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），２．００（ｓ，２Ｈ），０．８０−２．４０（ｍ，３０Ｈ），２．４３（ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ，Ｊ２＝１９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｍ，４Ｈ），３．６３（ｍ，１Ｈ），３．７２（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｍ，２Ｈ）；Ｃ３１Ｈ５３Ｎ３Ｏ３のＬＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋ＮＨ３］＋ ５１５．２。
（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３’−［２−（ジプロピルアミノ）エチル］−１０，１３−ジメチルテトラデカヒドロ−２’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン］−２’，１７（２Ｈ）−ジオン（２３ｆ）：（１３ｍｇ、４０％）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｓ，３Ｈ），０．７８−２．１０（ｍ，２８Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），２．３８（ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ，Ｊ２＝１８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｍ，４Ｈ），３．４２（ｓ，２Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）；Ｃ２９Ｈ５１Ｎ３Ｏ３のＬＲＭＳ計算値 ［Ｍ＋ＮＨ３］＋ ４８９．３。
Ｎ−｛（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１０，１３−ジメチル−２’，１７−ジオキソヘキサデカヒドロ−３’Ｈ−スピロ［シクロペンタ［α］フェナントレン−３，５’−［１，３］オキサゾリジン−３’−イル］エチル｝−Ｎ−プロピルプロパンアミド（２３ｇ）の合成
化合物２２（３０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に、Ｋ２ＣＯ３（２１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびｎ‐プロピルアミン（１６μＬ、１２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を８０℃で５時間にわたり撹拌した。次いで、反応混合物を水に注ぎ、ジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機層を食塩水で連続して洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、濃縮した。粗二級アミン生成物は、さらに精製することなく次の工程で使用した。
粗二級アミン生成物（３０ｍｇ）の無水ジクロロメタン溶液（５０ｍＬ）に、トリエチルアミン（２７μＬ、２１ｍｇ）およびプロピオン酸クロライド（１３μＬ、１３ｍｇ）を連続して加えた。この溶液を、アルゴン雰囲気下、室温で４時間にわたり攪拌した。次いで、反応混合物をジクロロメタン（１５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄し、相分離シリンジ（Ｂｉｏｔａｇｅ）を使用して乾燥し濃縮した。得られた粗生成物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、純粋な２３ｇ（１１ｍｇ、３４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ），０．８８（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），０．８２−２．０７（ｍ，２３Ｈ），２．３４（ｍ，３Ｈ），３．２５−３．４０（ｍ，６Ｈ），３．５３（ｍ，２Ｈ）；Ｃ２９Ｈ４６Ｎ２Ｏ４ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ ５０９．１。

生物アッセイ
細胞ホモジネートにおける１７β−ＨＳＤ３の阻害
化合物の阻害活性を、公知文献に従って決定した。４８、５３ 手短に言えば、１７β−ＨＳＤ３を過剰表現するＨＥＫ−２９３細胞をホモジネートして、酵素アッセイに使用した。５０ｎＭの［４−１４Ｃ］−４−アンドロステン−３，１７−ジオン（［１４Ｃ］−Δ４−ジオン）の［１４Ｃ］テストステロン（［１４Ｃ］−Ｔ）への変換を、過剰量のＮＡＤＰＨ（５ｍＭ）およびエタノール（対照）またはエタノールに溶解した阻害剤の存在下で測定し、それを使用して所与濃度での阻害パーセントを決定した。
無傷細胞における１７β−ＨＳＤ−３の阻害
非必須アミノ酸（０．１ｍＭ）、グルタミン（２ｍＭ）、ピルピン酸ナトリウム（１ｍＭ）、１０％胎児ウシ血清、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含有する最小必須培地（ＭＥＭ）中のＨＥＫ−２９３細胞を、９５％空気、５％ＣＯ２、加湿雰囲気下で、１２ウェルプレート（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）中に２０００００細胞／ウェルで播種した。１７β−ＨＳＤ３をコードする発現ベクターを、Ｅｘｇｅｎ ５００手法（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）に従い、１ウェル当たり２μｇの組換えプラスミドを用いてトランスフェクトした。阻害活性アッセイのために、最終濃度５０ｎＭの［４−１４Ｃ］−４−アンドロステン−３，１７−ジオンのエタノール溶液（５３．６ｍＣｉ／ｍｍｏｌ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）および阻害剤（０．５％ｖ／ｖ）のエタノール溶液を新たな培地に加え、１時間にわたりインキュベートした。各阻害剤は、試験濃度にて三つ組で評価した。インキュベーション後、培地を取り出し、細胞ホモジネートにおける酵素アッセイについての記載のように、放射標識ステロイドを抽出し、定量した４８。以前の報告のように、パーセント変換およびＩＣ５０値を算出した４８。
アンドロゲン感受性（ＡＲ＋）シオノギ細胞に対する増殖活性
増殖（アンドロゲン様）活性は、公知文献の手順に従ってアンドロゲン感受性シオノギ細胞を使用して決定した。５４ 阻害剤および基準化合物を、２つの濃度（０．１および１．０μＭ）で試験した。アンドロゲン性は、％細胞増殖（対照に対して）として報告した。基礎細胞増殖（対照）を１００％とした。

３Ａ〜３Ｄ（スキーム１９）の合成のための基本手順
シュレンク（Ｓｃｈｌｅｎｋ）チューブにおいて、オキシラン２（１．７ｍｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）に溶解した後、適切なアミノ酸メチルエステル（１７．２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、シュレンクチューブを密閉して、２１時間にわたり攪拌しながら９０℃で加熱した。次いで、ＭｅＯＨを蒸発させて、粗反応混合物をＤＣＭに溶解した。次いで、この溶液をシリカゲル上に予め吸着させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＴＥＡ（８９：１０：１））により精製した。
３β−メチル−Ｎ−［（１７，１７−ジエチレンジオキシ−３α−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン）］−メチル−Ｌ−ロイシナート（３Ａ）
収率：９９％；Ｒｆ＝０．６（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）；ＩＲ（フィルム）：３４７９および３３３３（ＯＨおよびＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７４（ｍ，１Ｈ），０．７８（ｓ，ＣＨ３−１９），０．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９１および０．９２（２ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），１．１０−１．９５（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２１および２．５７（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），３．１４（ｓ，ＯＨ），３．２３（ｄｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ＣＨＣ＝Ｏ）３．６７（ｓ，ＯＣＨ３），３．８３（ｍ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．２０，１４．３８，２０．３３，２１．９２，２２．６４，２２．８７，２４．８２，２８．５１，３０．７２，３１．２３，３１．６７，３３．７７，３４．１８，３５．７９，３５．９６，３８．５８，４０．５８，４２．７５，４５．９６，５０．２９，５１．６７，５３．８７，５９．３２，６０．８７，６４．５２，６５．１２，６９．９０，１１９．４８，１７６．３２。
３β−メチル−Ｎ−［（１７，１７−ジエチレンジオキシ−３α−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン）］−メチル−Ｄ−ロイシナート（３Ｂ）
収率：９９％；Ｒｆ＝０．３（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）；ＩＲ（フィルム）：３４７９および３３３３（ＯＨおよびＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７３（ｓ，ＣＨ３−１９），０．８３（ｓ，ＣＨ３−１８），０．９０および０．９３（２ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），０．９６−１．９７（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．１７および２．６２（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），３．０４（ｓ，ＯＨ），３．２１−３．２５（ｔａｐｐ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．７２（ｓ，ＯＣＨ３），３．８７（ｍ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．１６，１４．３５，２０．３３，２１．９１，２２．６１，２２．８４，２４．７８，２８．４４，３０．６８，３１．１６，３１．５４，３３．６３，３４．１３，３５．７６，３５．９３，３８．５６，４０．５６，４２．７０，４５．９０，５０．２５，５１．６１，５３．８２，５９．３１，６０．８３，６４．４７，６５．０７，６９．９１，１１９．４１，１７６．２８。
３β−メチル−Ｎ−［（１７，１７−ジエチレンジオキシ−３α−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン）］−メチル−Ｌ−フェニルアラニナート（３Ｃ）
収率：７７％；Ｒｆ＝０．５（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）；ＩＲ（フィルム）：３４７２−３３４０（ＮＨおよびＯＨ），３０２４（ＣＨ，Ｐｈ），１７３６（Ｃ＝Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７５（ｓ，ＣＨ３−１９），０．８２（ｓ，ＣＨ３−１８），０．９５（ｍ，１Ｈ），１．０１−１．９７（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２４−２．５６（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），２．９２（ｍ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．０４（ｓ，ＯＨ），３．４３−３．４５（ｔａｐｐ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．６２（ｓ，ＯＣＨ３），３．８４（ｍ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）；７．２５（ｍ、Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．１９，１４．３９，２０．３３，２２．６５，２８．４９，３０．７１，３１．２２，３１．５３，３３．６７，３４．１８，３５．７８，３５．９３，３８．５０，３９．８１，４０．４９，４５．９５，５０．２７，５１．７２，５３．８１，５９．３４，６３．９２，６４．５１，６５．１１，６９．９７，７０．０３，１１９．４５，１２６．７４，１２８．４２，１２９．１０，１３７．２８，１７５．０２。
３β−メチル−Ｎ−［（１７，１７−ジエチレンジオキシ−３α−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン）］−メチル−Ｄ−フェニルアラニナート（３Ｄ）
収率：８７％；Ｒｆ＝０．４３（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）；ＩＲ（フィルム）：３４７２−３３４０（ＮＨおよびＯＨ），３０２４（ＣＨ，Ｐｈ）および１７３６（Ｃ＝Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７５（ｓ，ＣＨ３−１９），０．８２（ｓ，ＣＨ３−１８），０．９５（ｍ，１Ｈ），１．５０−１．９７（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２４−２．５６（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），２．９２（ｍ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．０４（ｓ，ＯＨ），３．４３−３．４５（ｔａｐｐ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．６２（ｓ，ＯＣＨ３），３．８４（ｍ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）；７．２５（ｍ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．１７，１４．３９，２０．３５，２２．６５，２８．４３，３０．７１，３１．１８，３１．４９，３３．６１，３４．１７，３５．７７，３５．９３，３８．４１，３９．７９，４０．４７，４５．９３，５０．２６，５１．７０，５３．８０，５９．３３，６３．９６，６４．５０，６５．１０，６９．９７，７０．０２，１１９．４３，１２６．７２，１２８．４０，１２９．１０，１３７．３１，１７５．０３。
３β−メチル−Ｎ−［（１７，１７−ジエチレンジオキシ−３α−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン）］−メチルグリシナート（３Ｅ）の合成
無水メタノール（２０ｍＬ）を、シュレンクチューブに入ったグリシンメチルエステル塩酸塩（１．１ｇ、８．８ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（２．２ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。続いて、得られた溶液を室温で３０分間にわたり攪拌した。次いで、オキシラン２（０．３ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を２２時間にわたり９５℃で加熱した。次いで、溶液を室温に冷却し濾過した。次いで、得られた濾液を濃縮し、残査（１．８ｇ）をＤＣＭに溶解した。次いで、溶液をシリカゲル上に予め吸着させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（７：３）；１％ＴＥＡ）により精製した。表題化合物を帯黄色の生成物（３Ｅ）として単離した。収率：５３％；Ｒｆ＝０．１７（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）；ＩＲ（フィルム）：３４６４−３３４８（ＮＨおよびＯＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７４（ｓ，ＣＨ３−１９），０．８３（ｓ，ＣＨ３−１８），０．８５−１．９７（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．５０（ｓ，ＣＨ２Ｎ），３．４５（ｓ，ＮＣＨ２Ｃ＝Ｏ），３．７３（ｓ，ＯＣＨ３），３．８３−３．９５（ｍ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ：（アセトン−ｄ６）１０．７５，１３．９１，２０．２６，２２．４４，３０．６５，３１．３８，３１．４６，３３．３４，３３．７１，３３．９１，３５．７９，３５．９０，３８．４８，４０．４５，４５．７７，５０．３２，５０．７３，５１．１８，５４．４３，６１．０９，６４．２３，６４．８３，６９．９５，１１８．８７，１７２．７４。
アザスピロラクトン４Ａ〜４Ｅ（スキーム１９）の合成のための基本手順
０℃のＭｅＯＮａ（０．３７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（２４ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下、適切なアミノアルコール（３Ａ〜３Ｅ）（０．６１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（２８ｍＬ）を加えた。得られた溶液を室温で２時間にわたり撹拌した。続いて、反応を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。粗生成物をＥｔＯＡｃ（４×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。残査をＤＣＭに溶解し、その溶液をシリカゲル上に予め吸着させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（８：２）；１％ＴＥＡ）により精製した。
アザスピロラクトン４Ａ：収率：８９％；Ｒｆ＝０．４９（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７９（ｍ，１Ｈ），０．８３（ｓ，ＣＨ３−１９およびＣＨ３−１８），０．８９および０．９２（２ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），０．９５−１．９８（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．８３および２．９３（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），３．４３（ｍ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．８５（ｍ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）。

アザスピロラクトン４Ｂ：収率：８４％；Ｒｆ＝０．４９（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９１−０．９７（２ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），２．７８−２．８９（ｄｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．４１−３．５０（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．８３−３．９４（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３３，１４．３８，２０．３４，２０．９４，２２．６６，２３．４０，２４．４６，２８．２４，３０．６４，３１．４９，３２．６３，３４．１８，３５．７４，３６．０３，３８．３１，３９．２５，３９．６５，４１．４６，４５．９３，５０．１３，５２．５５，５３．３８，５５．５４，６４．５４，６５．１４，８２．２９，１１９．３９，１７１．９１。
アザスピロラクトン４Ｃ：収率：６２％；Ｒｆ＝０．３（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．８６−２．９９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．０１−３．２０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．７０−３．７４（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．７９−３．８９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ），７．２２−７．３０（２ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。
アザスピロラクトン４Ｄ：収率：６５％；Ｒｆ＝０．２５（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．７６−２．９０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．０２−３．１６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．７２−３．７５（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．７８−３．８９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ），７．２２−７．３２（２ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。
アザスピロラクトン４Ｅ：収率：５２％；Ｒｆ＝０．２７（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．８２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．６３（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２Ｃ＝Ｏ），３．８５−３．９５（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３４，１４．３９，２０．３６，２２．６５，２８．１４，３０．６３，３０．９７，３１．２５，３２．６９，３４．１８，３５．７４，３６．００，３７．９６，３９．３９，４５．９３，４７．５５，５０．１３，５３．０５，５３．３８，６４．５５，６５．１５，８２．５２，１１９．３９，１６８．７８。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン６Ａ〜６Ｅ（スキーム２０）の合成のための基本手順
シュレンクチューブにおいて、適切なアザスピロラクトン（４Ａ〜４Ｅ）（０．１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した後、ジイソプロピルエチルアミン（０．１７ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。次いで、シュレンクチューブを密閉して、１０分間にわたり攪拌しながら７５℃で加熱した。次いで、シュレンクチューブを室温に冷却した後、臭化ベンジル（１．７ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、反応混合物を攪拌して、さらに４８時間、７５℃で加熱した。シュレンクチューブを冷却した後、シリカゲルを加えて混合物を濃縮した。残査をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（８：２）；１％ＴＥＡ）により精製した。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン６Ａ：収率：６３％；Ｒｆ＝０．８３（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９２−０．９９（２ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），２．２２−２．７６（ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１９−４．１０（ｄｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．１５−３．１８（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．７８−３．８８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ），７．２８−７．４０（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン６Ｂ：収率：４９％；Ｒｆ＝０．８３（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９４−０．９９（２ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），２．１６−２．６５（ｄｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１１−４．０４（ｄｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．１５−３．２０（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．８３−３．９４（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ），７．２９−７．３８（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３７，１４．３７，２０．３１，２２．０９，２２．１０，２２．６７，２３．９３，２５．０２，２６．１７，２８．３４，３０．６５，３１．０６，３１．９５，３２．６９，３４．１９，３５．７２，３６．０２，３８．３３，３８．５９，３９．２４，３９．７８，４５．９５，５０．１４，５３．３９，５７．８４，５８．１５，６３．０４，６４．５６，６５．１４，８１．３３，１１９．４１，１２７．３７，１２８．５０，１２８．５３，１３７．７８，１７１．３７。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン６Ｃ：収率：７０％；Ｒｆ＝０．７５（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．６２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．７９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．２０−２．５９（ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．８１−４．４１（ｄｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ２−Ｐｈ），３．２５−３．４７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ）；３．５０−３．５２（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．８０−３．８９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ），７．２９−７．３８（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：１０．７３，１３．８８，２０．１６，２２．３８，２７．８６，２８．３６，２９．５２，３０．５６，３０．６４，３１．１６，３３．１０，３３．８８，３５．２４，３５．６５，３５．７２，３７．９１，３９．５３，４５．７４，５０．１７，５４．０４，５７．４５，５７．７２，６０．９５，６４．２４，６４．８３，６５．８９，８０．５４，１１８．８２，１２６．４２，１２７．１１，１２７．７９，１２８．３４，１２８．５３，１３０．３９，１３７．９８，１３８．０９，１６９．５３。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン６Ｄ：収率：６１％；Ｒｆ＝０．７５（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．６２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．１９−２．６０（ｄｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．８１−４．４３（ｄｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ２−Ｐｈ），３．２７−３．４９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ）；３．４９−３．５１（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．７７−３．８８（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ），７．２５−７．３４（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：１０．７６，１３．８７，２０．１８，２２．４２，２７．５８，２８．３６，２９．５２，３０．５７，３１．１４，３１．１９，３２．６９，３３．９１，３５．０４，３５．６５，３７．２６，３９．９４，４５．７３，５０．１９，５４．１０，５７．４８，５７．８３，６４．２４，６４．８１，６５．８３，８０．４６，１１８．８２，１２６．５４，１２７．１２，１２７．７７，１２８．３５，１２８．５９，１３０．５０，１３７．８８，１３８．０７，１６９．４３。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン６Ｅ：収率：７０％；Ｒｆ＝０．８３（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．４１（ｓ−ｂｒｏａｄ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）；３．２６（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２Ｃ＝Ｏ），３．８３−３．９４（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ２−ＣＨ２Ｏ），７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．４，１４．３９，２０．３３，２２．６６，２８．１２，３０．６５，３１．０１，３１．８４，３２．９０，３４．１９，３５．７４，３６．０３，３８．４３，３９．５７，４５．９４，５０．１４，５３．４０，５５．４２，５９．７９，６０．９９，６１．３６，６４．５５，６５．１５，８２．４９，１１９．４０，１２７．６０，１２８．５３，１２８．７１，１３６．６９，１６８．２８。
アザスピロラクトン５Ａ〜５ＥおよびＮ−ベンジル化アザスピロラクトン７Ａ〜７Ｅ（スキーム２０）の合成のための基本手順
適切なアザスピロラクトン（４Ａ〜４Ｅ）またはＮ−ベンジル化アザスピロラクトン（６Ａ〜６Ｅ）（３０ｍｇ〜６０ｍｇ）のジオキサン溶液（２ｍＬ）に、硫酸水溶液（５％；２ｍＬ）を加え、得られた反応混合物を室温で２〜５時間にわたり攪拌した。反応の進行はＴＬＣによりモニターした。次いで、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（１２ｍＬ）を反応混合物に加えた後、酢酸エチル（４×１２ｍＬ）で４回抽出した。合わせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９：１）＋１％ＴＥＡ（化合物５Ａ〜５Ｅ）またはヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９５：５）＋１％ＴＥＡ（化合物７Ａ〜７Ｅ）のいずれかを使用して、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
アザスピロラクトン５Ａ：収率：７１％；ＩＲ（フィルム）ν ３４４８−３３３３（ＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４５８（Ｃ−Ｏ）ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．８９−０．９３（２ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），２．８０−２．９６（ｄｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．４１−３．４４（２ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）１０．７３，１３．１６，２０．１３，２０．６２，２１．４４，２２．８６，２４．１５，２７．８８，３０．６６，３１．１６，３１．７０，３３．１６，３４．９７，３５．１０，３６．０５，３７．９１，３９．８１，４１．２９，４７．２８，５１．２５，５１．９４，５４．２８，５５．４５，６０．９５，８０．８１，１７０．７７。
アザスピロラクトン５Ｂ：収率：９２％；ＩＲ（フィルム）：３４４８−３３４０（ＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４５８（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９２−０．９９７（２ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），２．８０−２．９０（ｄｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．４１−３．４４（２ｄ，Ｊ＝３．７０ＨｚおよびＪ＝３．４３，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３５，１３．８２，２０．２２，２０．９５，２１．７５，２３．４０，２４．４７，２８．０２，３０．５３，３１．４４，３１．５１，３２．６０，３５．００，３５．８３，３６．１２，３８．２４，３９．６６，４１．３９，４７．７６，５１．３７，５２．４８，５３．７８，５５．５８，８２．２３，１７１．８１，２２１．２３。
アザスピロラクトン５Ｃ：収率：９７％；ＩＲ（フィルム）：３３３３（ＮＨ），３０３２（ＣＨ，Ｐｈ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．７７−２．９１（ｄｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．９９−３．１９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．７２−３．７５（２ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），７．２２−７．３０（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３０，１３．８２，２０．２２，２１．７４，２７．８２，３０．５１，３０．９９，３１．５０，３２．８３，３５．０１，３５．８３，３６．０２，３７．９８，３９．２０，４７．７６，５１．３８，５２．６２，５３．７３，５３．７６，５８．５９，５８．７３，８２．７２，１２７．０８，１２８．７７，１２９．５２，１３７．１７，１７０．７７，２２１．２７。
アザスピロラクトン５Ｄ：収率：５６％；ＩＲ（フィルム）：３４４８−３３２５（ＮＨ），３０２４（ＣＨ，Ｐｈ），１７２８（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．７７−２．８９（ｄｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．０３−３．１６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．７３−３．７６（２ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），７．２３−７．３０（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３１，１３．８１，２０．２１，２１．７５，２７．７８，３０．５４，３１．２７，３１．５１，３２．５１，３４．９９，３５．８４，３６．０３，３７．９５，３９．５９，４７．７５，５１．３８，５２．６６，５３．７６，５８．７５，６０．８２，８２．６６，１２７．０９，１２８．７７，１２９．５９，１３０．４８，１３７．２３，１７０．７０，２２１．２２。
アザスピロラクトン５Ｅ：収率：５４％；Ｒｆ＝０．２９（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４４８−３３３３（ＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．８３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．６３（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２Ｃ＝Ｏ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３６，１３．８３，２０．２３，２１．７５，２７．９０，３０．５３，３１．１９，３１．４９，３２．６６，３５．００，３５．８３，３６．０８，３７．８８，３９．４０，４７．５５，４７．６，５１．３５，５２．９３，５３．７８，８２．４５，１６８．６９，２２１．２７。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン７Ａ：収率：８１％；Ｒｆ＝０．７７（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４４８（ＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９２−０．９９（２ｄ，Ｊ＝６．３ＨｚおよびＪ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），２．２６−２．７７（ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１５−３．１８（２ｄ，Ｊ＝２．６およびＪ＝２．７，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），３．１９−４．１０（ｄｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），７．２８−７．４０（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：１０．８１，１３．１９，２０．１３，２１．４４，２１．６４，２３．４４，２４．８５，２７．７７，３０．６４，３１．５２，３１．６９，３３．２５，３４．９４，３５．１１，３６．０３，３８．１５，３８．３３，３９．７４，４７．２９，５１．２５，５４．２６，５７．６３，５７．７２，６３．０７，８０．４８，１２７．１８，１２８．３８，１２８．５７，１２８．６２，１３８．２０，２０５．１８，２０５．２４，２１８．６７。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン７Ｂ：収率：９２％；Ｒｆ＝０．８５（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４４８（ＮＨ），３０３２（ＣＨ，Ｐｈ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９２−０．９９（２ｄ，Ｊ＝６．５ＨｚおよびＪ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），２．１７−２．６６（ｄｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１１−４．０４（ｄｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．１５−３．１８（２ｄ，Ｊ＝２．８ＨｚおよびＪ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），７．２９−７．３６（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３９，１３．８２，２０．１９，２１．７６，２２．０８，２３．９５，２５．０１，２８．１１，３０．６３，３１．５１，３１．８９，３２．６５，３４．９８，３５．８４，３６．１０，３８．２２，３８．４７，３９．８０，４７．７６，５０．１４，５１．４０，５３．８１，５７．７３，５８．１３，６３．０５，６４．５６，６５．１４，１２７．４０，１２８．５２，１２８．５５，１３７．７４，１７１．３０，２２１．２５。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン７Ｃ：収率：７０％；Ｒｆ＝０．２３（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４４１（ＮＨ），３０３２（ＣＨ，Ｐｈ），１７２８（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．２０−２．６０（ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．２６−４．４２（ｄｄ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ２−Ｐｈ），３．３１−３．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ）；３．４７−３．５３（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），７．２６−７．３６（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：１０．６８，１３．１４，２０．０３，２１．４１，２７．７１，３０．６０，３０．６２，３１．６４，３３．０２，３４．９１，３５．０９，３５．１９，３５．８２，３７．８５，３９．５５，４７．２７，５１．２１，５４．１３，５７．４２，５７．７２，６５．８８，８０．５０，１２６．４５，１２７．１１，１２７．７９，１２８．３５，１２８．５３，１３０．３９，１３７．９６，１３８．０６，１６９．５０，２０５．１７，２０５．２５，２１８．６９。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン７Ｄ：収率：８１％；ＩＲ（フィルム）：３４４８（ＮＨ），３０３２（ＣＨ，Ｐｈ），１７２８（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：０．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．２０−２．６１（ｄｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．２７−４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ２−Ｐｈ），３．３８−３．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ）；３．４９−３．５１（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣ＝Ｏ），７．２６−７．３４（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）：１０．７４，１３．１５，２０．０６，２１．４４，２７．４２，３０．５７，３１．１５，３１．６７，３２．６２，３４．９０，３５．０４，３５．１２，３５．７５，３７．１８，３９．９６，４７．２７，５１．２３，５４．２２，５７．４１，５７．８４，６０．９５，６５．８４，８０．４５，１２６．５５，１２７．１４，１２７．７７，１２８．３７，１２８．６０，１３０．５４，１３７．８８，１３８．０８，１６９．４２，２０５．２８，２１８．７２。
Ｎ−ベンジル化アザスピロラクトン７Ｅ：収率：７１％；Ｒｆ＝０．７（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ３９：１）；ＩＲ（フィルム）：３４４８（ＮＨ），１７２０（Ｃ＝Ｏ），１４５０（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．４２（ｓ−ｂｒｏａｄ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）；３．２７（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２Ｃ＝Ｏ），３．５２−３．５３（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），７．２９−７．３７（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．４１，１３．８２，２０．２１，２１．７５，２７．９０，３０．５７，３１．５１，３１．７７，３２．８６，３５．０１，３５．８４，３６．１２，３８．３４，３９．５９，４７．７６，５１．３８，５３．８１，５５．４２，５９．６９，６１．３６，８２．３８，１２７．６２，１２８．５４，１２８．７２，１３６．６５，１６８．１９，２２１．２６。
カルバメート９Ａ〜９Ｅ（スキーム２１）の合成のための基本手順
０℃およびアルゴン雰囲気下の適切なアミノアルコール３（０．１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（３ｍＬ）に、ジイソプロピルエチルアミン（０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を１０分間にわたり攪拌した後、トリホスゲン（０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、得られた反応混合物を室温で５時間にわたり撹拌した。次いで、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（１０：９０）（２ｍＬ）から構成される酸性溶液を加え、得られた反応混合物を一晩撹拌した。続いて、ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）の飽和水溶液の添加により、反応をクエンチした。続いて、所望の生成物をジクロロメタン（４×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９５：５）＋１％ＴＥＡを使用して、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
カルバメート９Ａ：収率：７３％；Ｒｆ＝０．７１（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４６４（ＮＨ），１７４４（Ｃ＝Ｏ），１４３５（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９６−０．９８（２ｄ，Ｊ＝１．８ＨｚおよびＪ＝２．０Ｈｚ，６Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），３．１２−３．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．７２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．５６−４．６０（２ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣＯ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３９，１３．８２，２０．２３，２１．０８，２１．７５，２３．１５，２４．９４，２７．８８，３０．５９，３１．４７，３２．７３，３３．８１，３５．０１，３５．４１，３５．８３，３７．７１，３９．４７，４０．７７，４０．８４，４７．７４，５１．３１，５２．２２，５２．８８，５３．５８，５３．８８，７９．６４，１５７．５８，１７１．９９，２２１．１７。
カルバメート９Ｂ：収率：６７％；Ｒｆ＝０．５７（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４６４（ＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４４３（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９６−０．９８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ，（ＣＨ３）２−ｉＰｒ由来），３．１３−３．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．７２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．５８−４．６２（２ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣＯ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．４０，１３．８０，２０．２２，２１．０７，２１．７２，２３．１１，２４．９３，２７．８１，３０．５６，３１．４７，３２．８８，３３．８６，３５．００，３５．３７，３５．８１，３７．６９，３９．２８，４０．７７，４０．８３，４７．７１，５１．３０，５２．１８，５２．８３，５３．５６，５３．８６，７９．６４，１５７．５３，１７１．９７，２２１．１３。
カルバメート９Ｃ：収率：６１％；Ｒｆ＝０．４０（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４６４（ＮＨ），３０３２（ＣＨ，Ｐｈ）１７４４（Ｃ＝Ｏ），１４３５（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．９２−３．３８（２ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．０８−３．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．８６−４．９０（２ ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣＯ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３３，１３．８０，２０．１９，２１．７２，２７．７１，２７．７９，３０．５０，３１．４５，３２．４４，３３．８０，３４．９６，３５．０７，３５．２９，３５．８１，３８．８０，４０．５６，４７．７１，５１．２８，５２．４２，５３．２０，５３．８３，５５．８１，７９．７１，１２７．０７，１２８．５２，１２８．５８，１２８．７１，１３６．０２，１５７．３１，１７１．００，２２１．１６。
カルバメート９Ｄ：収率：７５％；Ｒｆ＝０．５０（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４５６（ＮＨ），１７３６（Ｃ＝Ｏ），１４３５（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），２．９２−３．４１（２ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．０９−３．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．８４−４．８９（２ ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣＯ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．３５，１３．８０，２０．１９，２１．７２，２７．７１，２７．７９，３０．５４，３１．４６，３２．３５，３３．７２，３４．９８，３５．０７，３５．３０，３５．８２，３９．１４，４０．７８，４７．７１，５１．２９，５２．４１，５３．３２，５３．８３，５５．９１，７９．６７，１２７．０９，１２８．５２，１２８．５９，１２８．７１，１３６．０２，１５７．２９，１７１．０２，２２１．１６。
カルバメート９Ｅ：収率：３２％；Ｒｆ＝０．４８（ヘキサン／酢酸エチル １：１）；ＩＲ（フィルム）：３４６４（ＮＨ），１７４４（Ｃ＝Ｏ），１４４３（Ｃ−Ｏ）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．８５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），３．３３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．７５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．０１−４．０２（ｄ，Ｊ＝４．３３Ｈｚ，１Ｈ，ＮＣＨＣＯ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１１．４２，１３．８２，２０．２３，２１．７４，２７．８３，３０．５８，３１．４８，３２．６９，３３．８４，３５．０１，３５．３７，３５．８３，３９．２７，４０．８２，４５．０１，４７．７３，５１．３１，５２．２６，５３．８９，５６．５２，７９．６１，１５７．５７，１６９．０２，２２１．１７。
１７β−エストラジオール（１７β−Ｅ２）；１７α−エストラジオール（１７α−Ｅ２）；１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２；および１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２；
反転した１８−メチル基を有する２種のＥ２異性体（１８−ｅｐｉ）である化合物３および４（スキーム２２Ａ）を調製し、それらのエストロゲン様活性を、代表的なｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏのアッセイで試験した。５５
［２，４，６，７３Ｈ］−１７β−エストラジオールは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から入手した。天然エストラジオール（１７β−Ｅ２；１）および対応する１７α−異性体（１７α−Ｅ２；２）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａｎａｄａ Ｌｔｄ（Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）から購入した。１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）および１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）は、（１３α）−３−ヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１７−オン（１８−ｅｐｉ−エストロン）から調製した。化合物１〜４の純度は、Ｗａｔｅｒｓ ９９６ Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅアレー検出器（２０７ｎｍ）を装着したＷａｔｅｒｓ装置（Ｗａｔｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）製のフェニル／ヘキシル−ＲＰカラム（７５×４．６ｍｍ ｉｄ、３μｍ）、およびメタノール／水の６０：４０〜９５：５の直線溶媒勾配を使用して、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により決定した。
１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２および１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２の合成
１８−ｅｐｉ−エストロン（１２５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（５ｍＬ）に、ＬｉＡｌＨ４（２．３ｍＬの１．０Ｍ ＴＨＦ溶液）を室温で加えた。この溶液を、アルゴン雰囲気下で９０分間にわたり攪拌した。次いで、得られた溶液を飽和ロッシェル塩溶液（５０ｍＬ）に注いだ後、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、濃縮して１２０ｍｇのアルコール混合物を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの１：９〜３：７の溶媒勾配およびシリカゲルカラム（ＫＰ−Ｓｉｌ、６０Ａ）を使用して、Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）により精製すると、２つの分画が得られた。第１分画は、ＨＰＬＣ純度９９．７％の１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）（３５ｍｇ、２８％収率）を含有することが示された。他の分画（３３ｍｇ、２７％収率）は、２．８％の所望しない１７β−Ｅ２（１）に加えて、ＨＰＬＣ純度９６．５％の１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）を含有することが示された。１７β−Ｅ２が存在しないことを保証するために、この分画をアセトニトリル（１％ｗ／ｖ）から再結晶して、ＨＰＬＣ純度９９．７％の化合物４を１７ｍｇ得た。
（１３α，１７β）−エストラ−１（１０），２，４−トリエン−３，１７−ジオール（３）：ＨＰＬＣ純度：９９．７％；ＲＴ＝９．２分（メタノール／水の６０：４０〜９５：５の勾配、フェニル／ヘキシル−ＲＰカラム（７５×４．６ｍｍ ｉｄ、３μｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）；Ｃ１８Ｈ２６Ｏ２ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋：２９５．４ｍ／ｚ、またはＣ１８Ｈ２５Ｏ２のＬＲＭＳ（Ｍ−Ｈ）−：２７１．４ｍ／ｚ；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：０．９６（ｓ，１８−ＣＨ３），１．１０−２．１５（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．２８（ｍ，６−ＣＨ２），２．７２（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ１＝４．０ＨｚおよびＪ２ ＝６．０Ｈｚ，１７α−Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，４−ＣＨ），６．５５（ｄｄ，Ｊ１＝２．４ＨｚおよびＪ２＝８．４Ｈｚ，２−ＣＨ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１−ＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：２６．１（Ｃ１５），２８．７（Ｃ１１），２８．９（Ｃ７），２９．０（Ｃ１８），３０．１（Ｃ６），３０．９（Ｃ１２），３１．９（Ｃ１６），４０．０（Ｃ９），４２．０（Ｃ８），４４．０（Ｃ１３），５１．５（Ｃ１４），８２．６（Ｃ１７），１１２．６（Ｃ２），１１４．２（Ｃ４），１２７．０（Ｃ１），１３２．２（Ｃ１０），１３７．７（Ｃ５），１５４．２（Ｃ３）；ＮＯＥＳＹは、１４α−ＣＨと１８−ＣＨ３ならびに１８−ＣＨ３と１７−ＣＨの間の相関を示し、したがって、３（１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２）の１８−ｅｐｉ−ＣＨ３および１７α−ＣＨの立体配置が実証された。

（１３α，１７α）−エストラ−１（１０），２，４−トリエン−３，１７−ジオール（４）：ＨＰＬＣ純度：９９．７％；ＲＴ＝７．９分（メタノール／水の６０：４０〜９５：５の勾配、フェニル／ヘキシル−ＲＰカラム（７５×４．６ｍｍ ｉｄ、３μｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）；Ｃ１８Ｈ２６Ｏ２ＮａのＬＲＭＳ ［Ｍ＋Ｎａ］＋：２９５．４ｍ／ｚ、またはＣ１８Ｈ２５Ｏ２のＬＲＭＳ（Ｍ−Ｈ）−：２７１．３ｍ／ｚ；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：０．９２（ｓ，１８−ＣＨ３），０．９５−２．３０（残りのＣＨおよびＣＨ２），２．７２（ｍ，６−ＣＨ２），４．１９（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１７β−Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，４−ＣＨ），６．５７（ｄｄ，Ｊ１＝２．６Ｈｚ，Ｊ２＝８．４Ｈｚ，２−ＣＨ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１−ＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：２２．０（Ｃ１８），２３．５（Ｃ１５），２６．５（Ｃ１１），２８．５（Ｃ７），２８．７（Ｃ１６），３０．１（Ｃ６），３２．８（Ｃ１２），４２．３（Ｃ９），４２．７（Ｃ８），４３．２（Ｃ１３），５０．３（Ｃ１４），７３．１（Ｃ１７），１１２．５（Ｃ２），１１４．５（Ｃ４），１２６．４（Ｃ１），１３１．１（Ｃ１０），１３７．８（Ｃ５），１５４．５（Ｃ３）；ＮＯＥＳＹは、１４α−ＣＨと１８−ＣＨ３の間の相関は示すが、１８−ＣＨ３と１７−ＣＨの間の相関は示さず、したがって、４（１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２）の１８−ｅｐｉ−ＣＨ３および１７β−ＣＨの立体配置が実証された。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるエストロゲン様活性
細胞培養の維持
ヒト乳癌細胞株（Ｔ−４７Ｄ、ＭＣＦ−７、およびＢＴ−２０）を、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から入手し、５％ＣＯ２、加湿雰囲気下で、３７℃にて培養フラスコ（７５ｃｍ３の増殖面積）中で維持した。Ｔ−４７Ｄ細胞は、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ−グルタミン（２ｎＭ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、および１７β−Ｅ２（１ｎＭ）添加のＲＰＭＩ培地中で増殖させた。ＭＣＦ−７細胞は、５％ＦＢＳ、グルタミン（２ｎＭ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、および１７β−Ｅ２（１ｎＭ）添加のＤｕｂｅｌｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ−１２ ＨＡＭ（ＤＭＥＭ−Ｆ１２）培地中で増殖させた。ＢＴ−２０細胞は、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、グルタミン（２ｎＭ）、ペニシリン（１００ＵＩ／ｍＬ）、およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）添加の最小必須培地（ＭＥＭ）中で増殖させた。
細胞培養アッセイ
各乳癌細胞株由来の細胞を９６ウェルプレート（１ウェル当たり３０００細胞）に播種した。内因性ステロイドを除去するためにデキストラン被覆炭で処理された５％（ｖ／ｖ）ＦＢＳでＦＢＳを置き換えたこと以外は上記に報告の適切な培地中に、細胞を懸濁し、その培地にインスリン（５０ｎｇ／ｍＬ）を添加した。４８時間枯渇させた後、細胞を、新たに交換された培地中の種々の濃度の１７β−Ｅ２（１）、１７α−Ｅ２（２）、１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）、および１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）の存在下、３７℃で７日間インキュベートした。３種の異なる細胞株の増殖に対する薬物の効果を、２０μＬの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）試薬（Ｏｗｅｎ試薬、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ ９６（登録商標），Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｐｒｏｍｅｇａ ＵＳＡ）を使用することにより判定した。ＭＴＳを各ウェルに加え、４時間後に反応を停止した。試薬は、代謝的に活性な細胞中に存在するデヒドロゲナーゼ酵素により、水溶性の有色ホルマザンに変換される。細胞がＭＴＳを切断する能力は、それらの細胞内のミトコンドリア／細胞呼吸の程度を表す。続いて、９６ウェルプレートリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）で４９０ｎｍの吸光度を記録した。培養期間の終了時の未処理細胞によるＭＴＳの変換を１００％とした。示す結果は、三つ組で行われた２つの別々の実験を代表するものである。
エストロゲン受容体（ＥＲ）結合
ＥＲの組織標本
体重２００〜３００ｇの雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、Ｃｈａｒｌｅｓ−Ｒｉｖｅｒ（Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）から入手した。全身麻酔（イソフルラン）下で、ラットから生殖腺を摘出し、２４時間後に頸椎脱臼により屠殺した。子宮を迅速に摘出し、付着する組織を切除して取り除き、ドライアイス上で凍結して、使用前は−８０℃で保存した。ＥＲ調製に必要とされるその後の工程はすべて、−４℃で実施した。子宮は、１０容量（ｗ／ｖ）の緩衝液Ａ（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１．５ｍＭ ＥＤＴＡジナトリウム塩、１０ｍＭ α−モノチオグリセロール、１０％グリセロール、および１０ｍＭモリブデン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）中で、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ−１０ホモジナイザー（Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃａｎａｄａ）を使用し、５の設定で、冷却のために１０秒の間隔を置いて、１０秒間を３回でホモジナイズした。次いで、ホモジネートを、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｌ５−６５超遠心分離機（Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＵＳＡ）にて、１０５，０００×ｇで６０分間にわたり遠心分離した。
ＥＲ結合アッセイ
エストロゲン結合は、デキストラン被覆炭吸着手法を使用して測定した。エタノールに可溶化した放射性１７β−Ｅ２（［３Ｈ］−１７β−Ｅ２）を緩衝液Ａの中に希釈した。子宮のサイトゾル調製物のアリコート（０．１ｍＬ）を、表示濃度の化合物１〜４（０．１ｍＬ、１０％のエタノールを含有する緩衝液Ａで調製した）の存在下または非存在下で、５ｎＭの［３Ｈ］−１７β−Ｅ２（約２００，０００ｃｐｍ、０．１ｍＬ）と、室温で３時間インキュベートした。次いで、結合していないステロイドを、緩衝液Ｂ（１．５ｍＭ ＥＤＴＡジナトリウム塩、１０ｍＭ α−モノチオグリセロールおよび１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ７．４）中の０．５％のＮｏｒｉｔ−Ａおよび０．００５％のＤｅｘｔｒａｎ Ｔ−７０の０．３ｍＬと室温で１５分間インキュベートすることにより分離し、３０００×ｇで１５分間遠心分離した。上清（０．３ｍＬ）のアリコートを放射能測定のために取り出した。１０ｍＬのＦｏｒｍｕｌａ−９８９シンチレーション液（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ−ＤｕＰｏｎｔ）を加えた後、Ｂｅｃｋｍａｎ計数器において６２％の計数効率で放射活性を測定した。試験化合物の相対的結合親和性（ＲＢＡ）を、ＩＣ５０（［３Ｈ］−１７β−Ｅ２）／ＩＣ５０（試験化合物）×１００として算出した。
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるエストロゲン様活性（子宮向性アッセイ）
体重１８ｇの雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（４２〜５３日）を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）から入手し、温度（２２±３℃）および光（１２時間／日、７時１５分に点灯）の制御環境下で、１ケージ当たり４〜５匹を収容した。マウスにげっ歯類用固形飼料および水道水を適宜与えた。イソフルラン麻酔下で両側腹切開により動物から卵巣を摘出し（ＯＶＸ）、それらの動物を無作為に群に割り当てた（１群当たり５匹の動物）。ＯＶＸ対照群のマウスには、７日間の間、ビヒクル単独（８％エタノール−０．４％メチルセルロース）を投与した。試験化合物の可能なエストロゲン様活性を、８％エタノール−０．４％メチルセルロース中の懸濁液として、ＯＶＸの雌性マウスに７日間、皮下（ｓ．ｃ．）注射［１、１０、および１００μｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、１日２回（ＢＩＤ）］することによりそれらを投与した後に評価した。８日目に、マウスを頸椎脱臼により屠殺した。子宮および膣を迅速に摘出し、脂肪および結合組織を取り除いて秤量した。結果は、１群当たり５匹のマウスに対する平均±ＳＥＭである。
統計分析
データは平均±ＳＥＭとして表し、統計的有意性はＤｕｎｃａｎ−Ｋｒａｍｅｒの多重範囲検定に従って判定した。０．０５未満のＰ値を、統計的に有意であると見なした。
細胞増殖アッセイ
ＥＲ＋細胞株
４種の異性化合物１〜４の増殖活性を、ヒト乳癌（ＥＲ＋）細胞株のＭＣＦ−７およびＴ−４７Ｄについて評価した。これらの細胞株は、ＥＲ、主としてＥＲαを発現するので選択したものであり、エストロゲン様化合物の存在下で増殖する。したがって、これらは、ＥＲに対するＥ２核構造の改変の効果を評価するのに適したｉｎ ｖｉｔｒｏモデルである。アッセイは、各化合物について、０．０２ｎＭ〜５０μＭの範囲の濃度で実施し、結果を、細胞増殖のパーセントとして表現した（図１４Ａおよび１５Ａ）。化合物がない場合の細胞増殖を１００％とした。４種のＥ２異性体は、いずれもＥＲに感受性であるＭＣＦ−７およびＴ−４７Ｄ細胞の増殖を明らかに調節した。しかしながら、それらには、濃度範囲に応じて活性パターンに相違があり、エストロゲン様および細胞毒性の２種類の増殖効果がそれぞれ、低濃度および高濃度で観察された。低濃度（０．０１−５μＭ）では、すべての試験化合物が、プラトー（約２００％の細胞増殖）に達するまで、種々の程度に細胞増殖を誘導した。予想されるように、１７β−Ｅ２（１）は、ＭＣＦ−７細胞において、４種のＥ２異性体の中で最もエストロゲン性の高い化合物であった。１７α位にＯＨのある化合物２は、天然の１７β−Ｅ２（１）よりも４５倍効力が低下していた。１７β−Ｅ２の１３位に反転した１８−メチルがある化合物３は、１７β−Ｅ２（１）よりも１０００倍エストロゲン性が低下していた。最後に、１７−ＯＨおよび１８−メチル基の両方が反転した、１７β−Ｅ２核の構造に２つの変化がある化合物４は、驚くべきことに、１７β−Ｅ２（１）よりもエストロゲン性がわずか１１１倍弱いだけであった。同じ傾向がＴ−４７Ｄ細胞でも観察され、化合物２、３、および４はそれぞれ、化合物１よりも１６、１２５、および５５倍エストロゲン性が低下していた。要約すると、４種のＥ２異性体は、１（１７β−Ｅ２）＞２（１７α−Ｅ２）＞４（１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２）＞３（１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２）の順序で、ＥＲ＋細胞に細胞増殖を誘導した。高濃度（５μＭ超）の化合物１〜４をＥＲ＋細胞に暴露した後では、細胞増殖阻害の観点から見た、重大な細胞毒性効果が両方の細胞株で観察された。こうして、ＭＣＦ−７細胞では、化合物２および４が、１および３よりも細胞毒性が高いように見え（図１４Ｂ）、一方Ｔ−４７Ｄ細胞では、化合物４の細胞毒性が高い（図１５Ｂ）。これらの細胞増殖実験から得られた結果により、天然の効力あるエストロゲンである１７β−Ｅ２（１）および１７α−Ｅ２（２）のエストロゲン様活性および細胞毒性に対する１８−メチル基の配向（βまたはα）の役割が評価された。
ＥＲ−細胞株
ＢＴ−２０細胞はエストロゲン受容体が陰性であるが（ＥＲ−）、エキソン５が欠失しているエストロゲン受容体のｍＲＮＡを発現する。ＥＲ＋細胞株で観察された効果がエストロゲン受容体に対する作用によることを実証するために、この細胞株で化合物１〜４を試験することを決定した。化合物１〜４をＢＴ−２０（ＥＲ−）細胞で試験すると、すべての試験濃度で増殖効果は観察されなかった（図１６）。高濃度（＞１μＭ）では、ＢＴ−２０細胞において細胞毒性効果が観察された。ＥＲ−細胞に対するこの効果は、ＥＲ＋細胞株と同じ濃度範囲で観察された（図１６）。本データにより、高濃度の細胞毒性活性はＥＲ非依存性機序により作用していることが実証される。
ＥＲ結合親和性
４種のＥ２異性体についてｉｎ ｖｉｔｒｏエストロゲン様活性を評価したので、次にＥＲに対する化合物１〜４の親和性を評価した。生殖腺摘出ラットの子宮から得られたＥＲを使用して、結合アッセイを実施した。成熟子宮中の主なアイソフォームが、ＭＣＦ−７細胞におけるように、ＥＲαであるので、ＥＲαに対する親和性機能として結果を表した。非標識リガンドが［３Ｈ］−１７β−Ｅ２のＥＲへの特異的結合を半分置換する濃度（ＩＣ５０）を、非線形回帰分析を使用してデータのコンピュータフィッティングにより決定した。用量応答曲線により示されるように、化合物１〜４のＥＲ結合度は異なっていた（図１７）。４種のＥ２異性体の中でＥＲに対して最も高いＥＲ結合親和性を有するので、天然１７β−Ｅ２（１）のＥＲに対する相対的結合親和性（ＲＢＡ）を１００％と設定した。化合物２（１７α−Ｅ２）のＲＢＡは３．６％であり、１７β−ＯＨの１７α−ＯＨへの反転がＥＲ親和性を２８倍低下させることが示された。化合物３および４のＲＢＡはそれぞれ、１．２％および１．６％であり、したがって、弱いＥＲ結合親和性が示された。これら２種の化合物は、天然エストロゲン１７β−Ｅ２（１）の構造の重要な改変である、１３位の１８−メチルの反転を共有しており、この反転はＥＲに対する結合親和性の８１倍および６６倍低下の大半に対する明らかな原因である。こうして、順序は、１７β−Ｅ２（１）＞１７α−Ｅ２（２）＞１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）＞１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）である（表５）。これらの結果は、ＥＲ＋細胞を用いるｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖試験から得られた発見とよく一致している。
子宮向性活性（ｉｎ ｖｉｖｏ）
化合物１〜４のエストロゲン様活性を評価する別の手法は、２つのエストロゲン感受性（ＥＲ＋）組織である、子宮（図１８Ａ）および膣（図１８Ｂ）の重量測定による、卵巣摘出（ＯＶＸ）マウスモデルの使用であった。１７β−Ｅ２（１）をＯＶＸマウスに皮下（ｓ．ｃ．）投与すると、子宮重量が、用量（１、１０、および１００μｇ／ｋｇ）に応じて、２４ｍｇ（対照）からそれぞれ１２５、１５５、および１６０ｍｇに増加することが観察された。１７α−Ｅ２（２）および１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）の場合は、子宮重量の増加は、１００μｇ／ｋｇ用量で対照群と有意差がある（Ｐ≦０．０１）（それぞれ３．６および２．６倍）だけであるが、その用量ではエストロゲン様作用が示唆された。これは、１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）の場合には同様ではなく、この高用量で弱くかつ有意でない子宮向性活性（対照群に対して１．５倍）が示された。１および１０μｇ／ｋｇの用量でも同じ応答パターンが示される。膣重量の測定は子宮での観察と同じ傾向を示した。したがって、子宮の場合のように、膣におけるエストロゲン様効力の順序は、１７β−Ｅ２（１）＞１７α−Ｅ２（２）＞１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）であり、一方、１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）に関しては、有意な子宮向性活性は得られなかった。このような結果はＥＲ結合親和性データと一致している。
構造分析
Ｃｈｅｍ３Ｄソフトウェアを使用して、化合物１〜４の三次元構造の検討を行った（図１９）。４種のＥ２異性体のフェノール性Ａ環の重ね合せにより、Ｄ環の配向および形状の変動が受容体結合親和性およびある程度の活性と適合することが示唆される。実際、Ｅ２核の微細な改変が細胞内の応答パターンを調節し得ることが知られている。データから、１７−ＯＨおよび１８−メチル基の配向を改変することにより生じるもののような、官能基およびＤ環コンフォメーションの変化が、化合物１〜４のＥＲ結合親和性およびエストロゲン様活性の変動を説明することができるように見える。予想されるように、最良のＥＲ結合およびエストロゲン様効力をもたらす、ＥＲの鍵となるアミノ酸との最適な相互作用が得られる１７−ＯＨの理想的な位置は、ＥＲの天然リガンド（１７β−Ｅ２：化合物１）のそれである。こうして、１の１７β−ＯＨ配向を１７α−ＯＨ配向（化合物２）に変更することは、ＲＢＡおよびエストロゲン性の両方を明らかに低下させた。同じ結果はまた、ベータ面（天然のＲ立体配置）からアルファ面（非天然のＳ立体配置）に１８−メチルの配向を反転させた化合物３および４の場合にも得られた。このような改変は、１７β−Ｅ２および１７α−Ｅ２の核形状およびその結果としての１７−ＯＨの位置を大幅に変化させる。実際、１７β−ＯＨの最適な位置（化合物１のように）と１８−ｅｐｉ−１７β−Ｅ２（３）および１８−ｅｐｉ−１７α−Ｅ２（４）おけるＯＨの位置との間の距離が生物活性と相関することが観察された。したがって、３および４の１７−ＯＨが化合物１のその位置から移動しているほど（化合物３および４についてそれぞれ２．９および１．２Å）、それらのエストロゲン性は低下し、ＥＲへの結合は弱くなる（表５）。しかしながら、それらの１７−ＯＨと１の１７−ＯＨとの間の距離がほぼ同じである（それぞれ２．４および２．９Å）２と４の間の差を説明するためには、さらなるパラメーター（すなわち、立体障害）を考慮する必要がある。Ｃ１８エピマーの３および４の環Ｄは、１および２の環Ｄよりも平面形状が少なく、ＥＲへの接近を制限する。換言すれば、ＥＲと非天然の立体配置を有する化合物の環Ｄとの間の接触障害は、鍵となるアミノ酸と１７−ＯＨとの間の水素結合形成にとって有害である。要約すると、１７−ＯＨ基の位置および１８−ｅｐｉ−Ｅ２核の立体障害を使用して、エストロゲン様活性の大幅な低下を説明することができる。
Ｅ２のさらなる異性体
さらなるＥ２異性体の合成は、本明細書の以下のスキーム２２Ｂに図示する。
スキーム２２Ｂ：試薬および条件：（ａ）１，２−フェニレンジアミン、酢酸、還流、５時間；（ｂ）３−カルボキサミド−ベンズアルデヒド、ＫＯＨ、ＥｔＯＨ、ｒｘ；（ｃ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ（１０％）、ＭｅＯＨ、ｒｔ；（ｄ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５：２）、ｒｔ
３−｛（Ｅ）−［（１３α，１６Ｅ）−３−ヒドロキシ−１７−オキソエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イリデン］メチル｝ベンズアミド（３）
化合物２（７５０ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１００ｍＬ）に、３−ホルミル−ベンズアミド（８２５ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ水溶液（１０％；１０ｍＬ）を加えた。次いで、この溶液を３０分間にわたり還流加熱した。次いで、得られた溶液を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水溶液（１０％）で中和して、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し濃縮した。粗化合物を、溶出系としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（７：３）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、５９８ｍｇ（５４％収率）の化合物３を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．１５（ｓ，１８−ＣＨ３），０．６５−２．６９（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．９８および３．２９（ｍ，１５−ＣＨ２），６．４２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，４−ＣＨ），６．５４（ｄｄ，Ｊ２＝２．６Ｈｚ，Ｊ１＝８．５Ｈｚ，２−ＣＨ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１−ＣＨ），７．５１（ｓ，１’−ＣＨ），７．５９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，５”−ＣＨ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６”−ＣＨ），７．９１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，４”−ＣＨ），８．１４（ｓ，２”−ＣＨ）。
３−｛［（１３α）−３−ヒドロキシ−１７−オキソエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（４）
アルゴン雰囲気下の化合物３（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、木炭上のＰｄ（１０％）（２０ｍｇ）を加えた。反応容器をＨ２で３回フラッシュして、４８時間にわたり攪拌し、次いで、セライト上で濾過し、減圧下で蒸発させて、１００ｍｇを得た（２つのジアステレオ異性体１６αおよび１６β−メチル−ｍ−ベンズアミド−エストロンの混合物）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：０．７９（ｓ，１８−ＣＨ３），１．０７（ｓ，１８−ＣＨ３），０．６０−３．１６（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），６．３９（ｍ，１Ｈ），６．４８（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄ，１Ｈ），７．３４（ｍ，４Ｈ），７．６７（ｍ，２Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），９．１（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ，３−ＯＨ）。
３−｛［（１３α）−３，１７−ジヒドロキシエストラ−１（１０），２，４−トリエン−１６−イル］メチル｝ベンズアミド（５）
化合物４（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（５ｍＬ）に、ＮａＢＨ４（５０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を一晩攪拌した。得られた溶液を真空下濃縮してＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）および食塩水で洗浄してＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて、ＬＣＭＳ−ｐｒｅｐにより分離されることになる、１００ｍｇの粗１７β−アルコール（４種のジアステレオ異性体の混合物）を得た。
１７β−ＨＳＤ１および１７β−ＨＳＤ３のアザラクトン阻害剤
本開示はまた、１７β−ＨＳＤ１および１７β−ＨＳＤ３の両方の阻害剤を含み、これらの阻害剤は、式ＸａまたはＸｂ：
［式中、Ｒ６およびＲ７は、独立してまたは同時に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、またはヘテロシクリルである］を有するプレグネノロンのアザラクトン誘導体である。
式ＸａまたはＸｂのそのような化合物の合成を、スキーム２３に示す：
スキーム２３：（ａ）フェニルアラニンメチルエステル（ＬまたはＤ）；ＭｅＯＨ；９０℃；（ｂ）ＣＨ３ＯＮａ；ＴＨＦ；ｒｔ；（ｃ）臭化ベンジル；ＤＩＰＥＡ；ＤＣＭ；７５℃（シュレンクチューブ）；（ｄ）ＭｅＯＨ／ＨＣｌ（９５／５）；ＴＨＦ；ｒｔ
実験
一般事項：プレグネノロンは、Ｓｔｅｒａｌｏｉｄｓ（Ｗｉｌｔｏｎ，ＮＨ）から購入した。最高純度の（Ｌ）−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩および化学試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａｎａｄａ Ｌｔｄ．（Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）から入手し、溶媒はＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）から入手した。反応はオーブン乾燥ガラス容器中にて、不活性（アルゴン）雰囲気下で行った。分析的薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、０．２０ｍｍのシリカゲル６０ Ｆ２５４プレート（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で実施し、モリブデン酸アンモニウム／硫酸／水を（加熱と共に）使用して化合物を視覚化した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ Ｒ１００３０Ｂ ２３０〜４００メッシュシリカゲル（Ｑｕｅｂｅｃ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）で実施した。赤外スペクトル（ＩＲ）は、ＣＨ２Ｃｌ２中に通常可溶化し、ＮａＣｌペレット上に沈着した化合物の薄膜から得られた。それらをＨｏｒｉｚｏｎ ＭＢ ３０００ ＡＢＢ ＦＴＩＲスペクトロメータ（ＡＢＢ，Ｃａｎａｄａ）で記録し、特性吸収帯のみを報告する。核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００デジタルスペクトロメータ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）で記録し、ｐｐｍで報告した；ＣＤＣｌ３の１Ｈおよび１３ＣのＮＭＲ信号（それぞれ、７．２６および７７．００ｐｐｍ）ならびにアセトン−ｄ６の１Ｈおよび１３ＣのＮＭＲ信号（それぞれ、２．０５および２８．９４ｐｐｍ）を、内部基準として使用した。
アミノアルコール２Ａおよび２Ｂの合成のための基本手順
オキシラン５６ １（０．５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（１３ｍｌ）に溶解し、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（２．０ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）をシュレンクチューブ中で加えた。この溶液を攪拌し、９０℃で４日間加熱した。次いで、反応混合物をＤＣＭに溶解して濾過し、減圧下で蒸発させた。粗反応混合物をＤＣＭに溶解し、シリカゲル上に予め吸着させて、溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（８５：１５、１：１に）を使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、主要生成物として化合物２Ｂ（３３０ｍｇ；４７％）およびマイナー生成物として化合物２Ａ（１３０ｍｇ；１９％）を得た。出発のエポキシド１（４０ｍｇ）も回収した。
メチル（２Ｒ）−２−（｛（２Ｒ）−２−［（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１０，１３−ジメチル−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［α］フェナントレン−１７−イル］−２−ヒドロキシプロピル｝アミノ）−３−フェニルプロパノアート（２Ａ）
Ｒｆ＝０．４（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、７：３）；ＩＲ（フィルム）：３５６０および３３３３（ＯＨおよびＮＨ），１７３２（エステルのＣ＝Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．０６（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．８１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．８９（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），１．１５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．２５−２．１６（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２３および２．５７（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．９５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．４４−３．４６（ｔａｐｐ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．４７，（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），３．６８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），５．３１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．２３（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−４．５９（Ｓｉ（ＣＨ３）２），１３．４２，１８．２６（ＳｉＣ（ＣＨ３）３），１９．４１，２０．９２，２２．３１，２３．８４，２４．９８，２５．９３，３１．３７，３１．７９，３２．０７，３６．５６，３７．３６，３９．９６，４２．５９，４２．７９，５０．０９，５１．７５，５６．９５，５７．２２，５７．８４，６３．８４，７２．６１，７２．９８，１２１．０６，１２６．７９，１２８．４６，１２９．１２，１３７．１８，１４１．５５，１７５．０３。
メチル（２Ｓ）−２−（｛（２Ｒ）−２−［（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１０，１３−ジメチル−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［α］フェナントレン−１７−イル］−２−ヒドロキシプロピル｝アミノ）−３−フェニルプロパノアート（２Ｂ）
Ｒｆ＝０．３（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、７：３）；ＩＲ（フィルム）：３６０７および３３１３（ＯＨおよびＮＨ），１７３６（エステルのＣ＝Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．０６（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．８９（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），１．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．１４−２．１５（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．１８および２．６７（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．９４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．４４−３．４６（ｔａｐｐ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．４７，（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），３．６８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），５．３２（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．２３（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−４．５９（Ｓｉ（ＣＨ３）２），１３．４６，１８．２５（ＳｉＣ（ＣＨ３）３），１９．４１，２０．９２，２２．５２，２３．８６，２４．８３，２５．９３，３１．３８，３１．８１，３２．０６，３６．５７，３７．３７，３９．７６，３９．８３，４２．４５，４２．７９，５０．１３，５１．７５，５６．８２，５７．２７，５８．０８，６４．１２，７２．６０，７３．２３，１２１．０５，１２６．７６，１２８．４４，１２９．１５，１３７．３３，１４１．５７，１７４．９７。
アザラクトン３Ａおよび３Ｂの合成のための基本手順
ナトリウムメトキシド（９６９ｍｇ、１９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（１００ｍＬ）に、アミノアルコール２Ａ（５９０ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（３０ｍＬ）をアルゴン雰囲気下で加えた。この溶液を室温で１．５時間攪拌し、反応混合物を水でクエンチし、１３０ｍＬの酢酸エチルで４回抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で乾燥した。残査をシリカゲル上に吸着させ、溶出液としてヘキサン／酢酸エチル（８５：１５）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、主要生成物として化合物３Ｂ（３５０ｍｇ、６３％）およびマイナー生成物として３Ａ（１５７ｍｇ、２８％）得た。
（３Ｓ，６Ｒ）−３−ベンジル−６−［（３β）−３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝アンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（３Ａ）
Ｒｆ＝０．６（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３：１）；ＩＲ（フィルム）：３４４１−３３４０（ＮＨ），１７２８（エステルのＣ＝Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．０５（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．８６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．８９（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），１．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），１．３１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．３６−２．５０（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．６５および２．９６（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．４６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），３．６２（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），５．３１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．３０（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−４．６０（Ｓｉ（ＣＨ３）２），１３．６２，１８．２５（ＳｉＣ（ＣＨ３）３），１９．４２，２０．８３，２２．８３，２３．７０，２３．８１，２５．９２，３１．２８，３１．７０，３２．０３，３６．５４，３７．３５，３８．０６，３９．９０，４２．７６，４２．８２，５０．０７，５１．４４，５６．８２，５７．６７，５８．９３，７２．５６，８６．９０，１２０．８８，１２６．９８，１２８．７５，１２９．４９，１３７．３６，１４１．５８，１７０．７２。
（３Ｒ，６Ｒ）−３−ベンジル−６−［（３β）−３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝アンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（３Ｂ）
Ｒｆ＝０．４（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３：１）；ＩＲ（フィルム）：３３６７−３０２８（ＮＨ），１７１３（エステルのＣ＝Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．０７（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９０（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），１．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．３６−２．５０（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．７２および３．０７（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．２０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．５０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），３．８０（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），５．３２（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．３０（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−４．５８（Ｓｉ（ＣＨ３）２），１３．６６，１８．２５（ＳｉＣ（ＣＨ３）３），１９．３７，２０．７５，２２．６２，２３．２５，２３．３６，２５．９２，３１．３１，３１．７０，３２．０２，３６．５４，３７．３０，３７．３８，３９．２１，４２．０７，４２．７４，４９．８２，５０．０３，５５．９７，５６．０４，５７．４８，７２．５１，８７．１６，１２０．９０，１２７．２５，１２８．８０，１２９．８３，１３７．２７，１４１．５５，１７１．１１。
Ｎ−ベンジル化アザラクトン４Ａおよび４Ｂの合成
アザラクトン３Ａ（６０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）または３Ｂ（１５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（３Ａ：５ｍＬ；３Ｂ：１３ｍＬ）に、ジイソプロピルエチルアミン（１．７ｅｑ）をシュレンクチューブ中で滴下して加えた。この溶液を攪拌して７５℃で１０分間加熱した後、室温に戻した。次いで、臭化ベンジル（１．７ｅｑ）を溶液に加え、反応混合物を攪拌して７５℃で４８時間加熱した。シュレンクチューブを冷却した後、シリカゲルを粗混合物に加え、減圧下で溶媒を蒸発させた。粗化合物を、溶出液としてヘキサン／酢酸エチル（９８：２）を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、対応する化合物４Ａ（４８ｍｇ、７０％）または４Ｂ（１３４ｍｇ、７９％）を得た。
（３Ｓ，６Ｒ）−３，４−ジベンジル−６−［（３β）−３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝アンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（４Ａ）
収率：７０％；Ｒｆ＝０．８０（ヘキサン／酢酸エチル ３：１）；ＩＲ（フィルム）：１７２８（エステルのＣ＝Ｏ）．１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．０４（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．８８（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．９８−１．５３（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），１．５５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．５６−２．１６（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２４および２．４０（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１２．３４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１１および４．３５（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１３．５６Ｈｚ，２Ｈ，ＰｈＣＨ２Ｎ），３．２７および３．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．４２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），５．３０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．２７（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−４．６０（Ｓｉ（ＣＨ３）２），１３．４２，１８．２４（ＳｉＣ（ＣＨ３）３），１９．４０，２０．７８，２２．７６，２３．５１，２３．６６，２５．９１，２９．６９，３１．２０，３１．６６，３２．０１，３５．６９，３６．４９，３７．３１，３９．７９，４２．７４，４２．７９，５０．０２，５６．４０，５６．７６，５７．５０，５８．２３，６６．１５，７２．５７，８４．９６，１２０．８７，１２６．６２，１２７．３５，１２７．９６，１２８．０８，１２８．４７，１２８．５１，１３０．３６，１３７．４０，１３７．５１，１４１．５５，１７０．９４。
（３Ｒ，６Ｒ）−３，４−ジベンジル−６−［（３β）−３−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝アンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（４Ｂ）
収率：７９％；Ｒｆ＝０．７８（ヘキサン／酢酸エチル ３：１）；ＩＲ（フィルム）：１７２０（エステルのＣ＝Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．０８（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ３）２Ｓｉ），０．７７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．８９（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３ＣＳｉ），０．９０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．９１−１．５０（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），１．５４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．５６−２．１６（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２３および２．９０（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１２．６８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．２３および３．４６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．５９および３．９８（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１３．１２Ｈｚ，２Ｈ，ＰｈＣＨ２Ｎ），３．５８（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．５２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），５．３２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．２９（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：−４．５４（Ｓｉ（ＣＨ３）２），１３．９１，１８．２８（ＳｉＣ（ＣＨ３）３），１９．３７，２０．５５，２２．５１，２３．０３，２３．３５，２５．９７，３１．２６，３１．６６，３２．０７，３４．５０，３６．５０，３７．３７，３８．５２，４１．６９，４２．７９，５０．０９，５４．７６，５５．３２，５５．４０，５８．３８，６３．８３，７２．５６，８５．７１，１２１．０３，１２６．７５，１２７．７７，１２８．２６，１２８．２９，１３０．１５，１３０．４８，１３５．４７，１３７．９６，１４１．５２，１７０．５２。
アザラクトン５Ａ、５Ｂ、６Ａ、および６Ｂの合成：ＴＢＳ脱保護のための基本手順
化合物３Ａ、３Ｂ、４Ａ、または４ＢのＴＨＦ溶液（４ｍＬ）に、塩酸メタノール溶液（５％）（３ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で９０分間撹拌した。炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液を加え、水相を酢酸エチルで４回抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させた。化合物５Ａ、５Ｂの場合は、溶出液としてヘキサン／酢酸エチル／トリエチルアミン（７９：２０：１）を、化合物６Ａおよび６Ｂの場合は、ヘキサン／酢酸エチル（３：１）をそれぞれ使用して、粗化合物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
（３Ｓ，６Ｒ）−３−ベンジル−６−［（３β）−３−ヒドロキシアンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（５Ａ）
収率：１５ｍｇ、９８％；Ｒｆ＝０．２（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）；ＩＲ（フィルム）：３０８６−３６００（ＯＨおよびＮＨ），１７２０（エステルのＣ＝Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），１．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），１．３１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．３４−２．６０（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．６５および２．９６（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．５１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），３．６２（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），５．３４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．２６（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１３．６２，１９．３８，２０．８４，２２．８３，２３．６９，２３．８２，２９．６９，３１．２６，３１．６０，３１．６６，３６．４５，３７．２０，３８．０４，３９．８７，４２．２４，４２．８２，４９．９７，５１．４１，５６．７７，５７．６５，５８．９２，７１．７３，８６．８８，１２１．４２，１２６．９９，１２８．７５，１２９．５０，１３７．３４，１４０．７７，１７０．７２。
（３Ｒ，６Ｒ）−３−ベンジル−６−［（３β）−３−ヒドロキシアンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（５Ｂ）
収率：７９ｍｇ、６５％；Ｒｆ＝０．１５（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）；ＩＲ（フィルム）：３０８６−３６００（ＯＨおよびＮＨ），１７１３（エステルのＣ＝Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），１．３６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．３９−２．３３（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．７２および３．０６（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．２０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−Ｐｈ），３．５５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），３．７９および３．８０（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），５．３６（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．３０（ｍ，５Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１３．６５，１９．３４，２０．７６，２２．６１，２３．２７，２３．３５，３１．２８，３１．５６，３１．６７，３６．４５，３７．２６，３７．２９，３９．１８，４２．０６，４２．２２，４９．７５，４９．９５，５５．９４，５６．０５，５７．４２，７１．６０，８７．１４，１２１．３９，１２７．２４，１２８．８０，１２９．８２，１３７．２２，１４０．８０，１７１．１３。
（３Ｓ，６Ｒ）−３，４−ジベンジル−６−［（３β）−３−ヒドロキシアンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（６Ａ）
収率：２２ｍｇ、５３％；Ｒｆ＝０．２（ヘキサン／酢酸エチル ３：１）；ＩＲ（フィルム）：３３９８（ＯＨ），１７２０（Ｃ＝Ｏ），１４５４（Ｃ−Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），０．９７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），０．９９−２．１７（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２４および２．４０（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．１０および４．３５（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ ＝１３．６Ｈｚ，２Ｈ，ＰｈＣＨ２Ｎ），３．２８および３．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．４１（ｍ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．４９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），５．３１（ｍ，１Ｈ，ＨＣ−６），７．３６（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１３．４３，１９．３５，２０．７９，２２．７７，２３．５３，２３．６６，３１．１８，３１．５９，３１．６２，３５．６９，３６．４１，３７．１８，３９．７６，４２．２３，４２．７９，４９．９２，５６．３９，５６．７２，５７．４８，５８．２２，６６．１４，７１．６９，７１．７２，８４．９５，１２１．４１，１２６．６２，１２７．３５，１２７．９５，１２８．０８，１２８．２２，１２８．４６，１２８．５１，１３０．３６，１３７．４０，１３７．５１，１４０．７４，１７０．９５。
（３Ｒ，６Ｒ）−３，４−ジベンジル−６−［（３β）−３−ヒドロキシアンドロスト−５−エン−１７−イル］−６−メチルモルホリン−２−オン（６Ｂ）
収率：９０ｍｇ、８３％；Ｒｆ＝０．１５（ヘキサン／酢酸エチル ３：１）；ＩＲ（フィルム）：３４０２（ＯＨ），１７２０（Ｃ＝Ｏ），１４５４（Ｃ−Ｏ）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１８），０．９５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−１９），１．２４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−２１），１．２６−２．１９（未帰属ＣＨおよびＣＨ２），２．２４および２．９１（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ），３．５８および３．９７（ＡＢ系の２ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ，ＰｈＣＨ２Ｎ），３．２３および３．４６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），３．５５（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣ＝Ｏ），３．５９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−３），５．３６（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−６），７．２９（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１３．８９，１９．３２，２０．５６，２２．５１，２３．０３，２３．３８，３１．２４，３１．５９，３１．６２，３４．４６，３６．４２，３７．２３，３８．５３，４１．７１，４２．２６，５０．０１，５４．８１，５５．２３，５５．３９，５８．３５，６３．８０，７１．６９，８５．７４，１２１．５３，１２６．７４，１２７．７５，１２８．２６，１２８．２９，１３０．１１，１３０．４５，１３５．４９，１３７．９７，１４０．７８，１７０．５８。
１７β−ＨＳＤ１０
１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１０型（１７β−ＨＳＤ１０）は、エストロゲン不活性化、アンドロゲン活性化、脂肪酸のβ−酸化、および胆汁酸の異性化に関与するミトコンドリア酵素である。この酵素は基質としてエストラジオール（Ｅ２）を使用するので、この酵素が神経保護のエストロゲンレベルを低下させることによりアルツハイマー病の病変形成に寄与する証拠がある。さらに、この酵素は非古典的アンドロゲン合成経路に重要な役割を果たしており、その発現は特定の前立腺癌細胞ではアップレギュレートされているため、これらの細胞にはアンドロゲン除去療法から残存するための有利性が付与されている。その結果、１７β−ＨＳＤ１０の阻害は、これらの疾患の治療に新しい手法を提供することができる。我々の研究室で入手可能な分子についてのスクリーニング研究から、無傷細胞において１μＭで試験したとき、エストラジオール（Ｅ２）（１μＭ）のエストロン（Ｅ１）への変換に対して５０％超の阻害を示す一連のステロイド誘導体を同定した。０．５５μＭのＩＣ５０値が、最良の酵素阻害を示す３β−アンドロステロンステロイド核のＲＭ−５３２−４６について得られた。この阻害活性は、基質としてのＥ２に対する酵素のＫｍが４３μＭであることを考慮すると好適な出発点である。１７β−ＨＳＤ１０阻害剤を得ると、正常な細胞機能における、またステロイドホルモンレベルの調整における１７β−ＨＳＤ１０の役割をさらに解明するための有用なツールになり得るであろう。
ヒト１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１０型（１７β−ＨＳＤ１０）は、その多機能性が知られている。１７β−ＨＳＤ１０は、ホモ四量体のミトコンドリアタンパク質であり、肝臓ならびに脳および生殖腺を含む他のいくつかの組織で基本的に発現する６、３５、３６。１７β−ＨＳＤ１０は、その１７β−ＨＳＤおよび３α−ＨＳＤ活性によって、性ステロイドホルモンの代謝に重要な役割を果たす（図１９）３７。この酵素は、女性におけるエストロゲン様活性の原因である、最も効力のある性ステロイドであるＥ２を不活化することができる。アルツハイマー病（ＡＤ）の発症と脳におけるアミロイドβ−ペプチド（Ａβ）の蓄積との間の強い関係が確立されている５７、５８。１７β−ＨＳＤ１０が基質としてＥ２を使用するという発見に基づいて、この酵素が、脳における神経保護的Ｅ２レベルを低下させることにより、ＡＤの病変形成に寄与し得ることが示唆されている。６ ＡＤ脳におけるエストロゲン欠乏状態は、ニューロンおよびシナプスの喪失を促進し、海馬依存性の学習および記憶を損なう可能性がある。Ｈｅら５９は、ＡＤに罹りやすい海馬、視床下部、および杏仁孔などの脳領域に、高レベルの１７β−ＨＳＤ１０を観察している。さらに、Ｅ２は、β−アミロイドタンパク質前駆体の輸送および代謝を調節することによって神経保護効果を及ぼす。Ｅ２処置がｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏの実験でＡβの形成を低下させることが報告された。６０ さらに、この酵素は、星状細胞において、ＧＡＢＡＡ受容体の正のアロステリック調節因子であるアロブレグナノロンの５α−ジヒドロプロゲステロン（５α−ＤＨＰ）への細胞内酸化を触媒することができる。アロブレグナノロンはニューロンの興奮性を迅速に調節し、人において顕著な不安緩解および抗痙攣性効果を有する６１。Ｈｅら６２は、１７β−ＨＳＤ１０の発現が、ＡＤ患者の活性化された星状細胞において、大幅にアップレギュレートされていると報告した。まとめると、これらの観察は、１７β−ＨＳＤ１０がＡＤの進行を激化させ得るという証拠を提供する。
１７β−ＨＳＤ１０はまた、テストステロンがない状態で、前立腺癌細胞がジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を生成することを可能にするので、非古典的アンドロゲン合成経路において重要な役割を果たす６３。実際、このミトコンドリア酵素は、１７β−ヒドロキシル基ではなく３α−ヒドロキシル基の位置選択的な酸化により、ほぼ不活性なアンドロゲンである５α−アンドロスタン−３α，１７β−ジオール（３α−ジオール）を効力のあるアンドロゲンであるＤＨＴに変換することを触媒する（図１９）。ＤＨＴは前立腺増殖を刺激し、脱毛症、座瘡、および男性型多毛症に関係する。このデヒドロゲナーゼの高い発現が、特定の前立腺癌細胞で実証されており、これらの高レベルの１７β−ＨＳＤ１０が、アンドロゲン除去療法から残存するための有利性をこれらの細胞に付与し得るという証拠がある３７。したがって、１７β−ＨＳＤ１０酵素活性の阻害は、５α−レダクターゼの既知阻害剤と組み合わせてＡＤおよび前立腺癌の治療への新しい手法を提供する。有望な治療用途に加えて、１７β−ＨＳＤ１０阻害剤により、正常細胞機能における、また疾患病変形成における、このステロイド産生酵素の役割も描写される。
本開示の一実施形態では、下記の構造
［式中、
Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり；
Ｗは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＨ（ＯＨ）、または−ＣＨ（ＣＯＣＨ３）であり；
Ｘは、Ｈ、アルキル、チオアルキル、ハロ、またはアルコキシであり；
Ｙは、−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−、またはＳ（Ｏ）２であり；
Ｚは、Ｈまたはアルキルである］
を有する１７β−ＨＳＤ１０の阻害剤が含まれる。
本開示の１７β−ＨＳＤ１０阻害剤は、表６に示されるもの等の化合物を含む。
さらに、化合物２１に対するＩＣ５０を決定し（酵素活性の５０％を阻害する濃度）、また酵素Ｅ２の天然基質に対しても決定した。図２０に示すように、化合物２１については、０．５５μＭのＩＣ５０値が得られ、Ｅ２については、使用した濃度範囲（０．１〜１０μＭ）でＩＣ５０を決定することができず、ＩＣ５０＞１０μＭであることが示唆された。
図２１では、無傷ＨＥＫ−２９３細胞における、化合物２１およびＥ２による、トランスフェクトされた１７β−ＨＳＤ１０の阻害を示す。ＩＣ５０値を決定するために、種々の濃度で化合物を試験した。エラーバーが示されない場合は、エラーバーが記号よりも小さいためである。
１７β−ＨＳＤ１０の阻害剤として試験した、表６に示す化合物の化学合成は、１７β−ＨＳＤ３の阻害剤を報告する前のセクションで報告した。各試験化合物に対応するセクションを表６に報告した。
酵素アッセイ（１７β−ＨＳＤ１０の阻害）
１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１０型を発現する、安定にトランスフェクトされたヒト胎生腎（ＨＥＫ）−２９３細胞の生成
細胞は、１０％（容量／容量）のウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ＨｙＣｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ，ＵＳＡ）を添加したＤｕｂｅｌｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）中で、約３×１０５細胞／ウェルになるまで、９５％空気−５％ＣＯ２、加湿雰囲気下で、３７℃にて６ウェルファルコンフラスコで培養した。５μｇのｐＣＭＶｎｅｏ−ｈ１７ｂＨＳＤ１０プラスミドを、リポフェクチントランスフェクションキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）を使用してトランスフェクトした。３７℃での６時間インキュベーション後、トランスフェクション培地を除去し、２ｍＬのＤＭＥＭを加えた。細胞をさらに４８時間培養した後、１０ｃｍのペトリ皿に移し、トランスフェクトされていない細胞の増殖を阻害するために、７００μｇ／ｍＬのジェネテシン（Ｇ４１８；Ｗｉｓｅｎｔ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）を含有するＤＭＥＭ中で培養した。抵抗性コロニーが観察されるまで、Ｇ４１８を含有する培地を２日ごとに交換した。
細胞培養
安定にトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞は、非必須アミノ酸（０．１ｎＭ）、グルタミン（２ｍＭ）、ピルピン酸ナトリウム（１ｍＭ）、１０％ＦＢＳ、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、およびＧ４１８（０．７ｍｇ／ｍＬ）を含有する最小必須培地（ＭＥＭ）中で培養した。
１７β−ＨＳＤ１０の阻害：全細胞を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
１７β−ＨＳＤ１０を安定にトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞を、９９０μＬの培地中、９５％空気−５％ＣＯ２、加湿雰囲気下で、３７℃にて、２４ウェルプレートに２５０，０００細胞／ウェルで播種した。阻害剤の原液をエタノールで調製し、培地で希釈した。２４時間後、阻害剤の最終濃度が１μＭになるように、これらの溶液を５μＬ細胞に加えた。最も活性な阻害剤については、０．０１μＭ〜５μＭの濃度で試験して、それらのＩＣ５０値を決定した。各ウェル中のエタノールの最終濃度を０．５％に調整した。さらに、［１４Ｃ］−１７β−エストラジオール（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）および１７β−エストラジオール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）（１：９）を含有する溶液５μＬを、最終濃度が１μＭになるように加え、細胞を２４時間インキュベートした。阻害剤はそれぞれ三つ組で評価した。インキュベーション後、培地を取り出し、標識ステロイド（Ｅ１およびＥ２）を、１ｍＬのジエチルエーテルで抽出した。有機相を分離し、窒素で蒸発乾固した。残査をジクロロメタンに溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフィープレート（ＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）上に滴下し、トルエン／アセトン（４：１）溶媒系で溶出した。基質［１４Ｃ］−Ｅ２および代謝産物［１４Ｃ］−Ｅ１を、基準ステロイド（Ｅ２およびＥ１）との比較により同定し、Ｓｔｏｒｍ ８６０システム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して定量した。変換および阻害のパーセントを以下のように算出した：％変換＝１００×［１４Ｃ］−Ｅ１／（［１４Ｃ］−Ｅ２＋［１４Ｃ］−Ｅ１）、および阻害の％＝１００×（阻害剤なしの％変換−阻害剤ありの％変換）／阻害剤なしの％変換。
本明細書は、その適用において、本明細書の上記に記載の構築および部分の詳細に限定されないことを理解されたい。本明細書は、他の実施形態および種々の方法で実行することができる。本明細書で使用される用語または術語は、説明を目的とするものであり、限定するものではない。したがって、本発明を、その例示的な実施形態により本明細書の上記で説明してきたが、本発明は、添付の特許請求項の範囲で定義される開示対象の精神、範囲、および本質から逸脱することなく改変することができる。
参考文献
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（４）Ｄｉｚｅｒｅｇａ，Ｇ．Ｓ．；Ｂａｒｂｅｒ，Ｄ．Ｌ．；Ｈｏｄｇｅｎ，Ｇ．Ｄ．Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ：ｒｏｌｅ ｏｆ ｏｖａｒｉａｎ ｓｔｅｒｏｉｄｓ ｉｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ，ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ，ａｎｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．１９８０，３３，６４９−６５３．
（５）Ｐｅｎｎｉｎｇ，Ｔ．Ｍ．１７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｄｅｓｉｇｎ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ，１９９６，３，４１−５６．
（６）Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７β−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００９，９，６４２−６６０．
（７）Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ｇ．；Ａｄａｍｓｋｉ，Ｊ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｖｉｅｗ ｏｎ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００９，３０１，７−１９．
（８）Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ １ ａｎｄ ７：Ｋｅｙ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２０１１，１２５，８３−９４．
（９）Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．１７β−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａ ｐａｔｅｎｔ ｒｅｖｉｅｗ．Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，２０１０，２０，１１２３−１１４５．
（１０）Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００３，１０，４５３−４７７．
（１１）Ｔｒｅｍｂｌａｙ，Ｍ．Ｒ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ａ ｒａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｄｅｓｉｇｎ ｔｙｐｅ Ｉ １７ ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ：ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９９８，６６，１７９−１９１．
（１２）Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｙ．；Ｃａｄｏｔ，Ｃ．；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ｍ．Ｃ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｎｄ Ｅｓｔｒｏｎｅ Ｃ−１６ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｏｆ ＥＲ＋ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｓｔｒｏｎｅ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８，１６，１８４９−１８６０．
（１３）Ｍａｚｕｍｄａｒ，Ｍ．；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ｄ．；Ｚｈｕ，Ｄ．Ｗ．；Ｃａｄｏｔ，Ｃ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．；Ｌｉｎ，Ｓ．Ｘ．Ｂｉｎａｒｙ ａｎｄ ｔｅｒｎａｒｙ ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｉｔｈ １７β−ＨＳＤ ｔｙｐｅ １：ａ ｌｅａｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２００９，１０，３５７−３６６．
（１４）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／Ｃａｎｃｅｒ−ＰｒｏｓｔａｔｅＣａｎｃｅｒ／ＤｅｔａｉｌｅｄＧｕｉｄｅ／ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｃａｎｃｅｒ−ｋｅｙ−ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ．
（１５）Ｇｒｏｕｐ．ＶＡＣＵＲ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｅｔ．１９６７，１２４，１０１１−１０１７．
（１６）Ｓｅｉｄｅｎｆｅｌｄ，Ｊ．；Ｓａｍｓｏｎ，Ｄ．Ｊ．；Ｈａｓｓｅｌｂｌａｄ，Ｖ．；Ａｒｏｎｓｏｎ，Ｎ．；Ａｌｂｅｒｔｓｅｎ，Ｐ．Ｃ．；Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｃ．Ｌ．；Ｗｉｌｔ，Ｔ．Ｊ．Ｓｉｎｇｌｅ−ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｅｎ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２０００，１３２，５６６−５７７．
（１７）Ｓａｎｔｅｎ，Ｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ３７：Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏ．Ｍｅｔａｂ．１９９２，７５，６８５−６８９．
（１８）Ｈｅｄｌｕｎｄ，Ｐ．Ｏ．Ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ：ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ，ａｎｔｉａｎｄｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｓｕｐｐｌ ２０００，１０，３２−３７．
（１９）Ｗｙｓｏｗｓｋｉ，Ｄ．Ｋ；Ｆｒｅｉｍａｎ，Ｊ．Ｐ；Ｔｏｕｒｔｅｌｏｔ，Ｊ．Ｂ；Ｈｏｒｔｏｎ，Ｍ．Ｌ．Ｆａｔａｌ ａｎｄ ｎｏｎｆａｔａｌ ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｌｕｔａｍｉｄｅ．Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１９９３，１１８，８６０−８６４．
（２０）Ｓｈａｈｉｎｉａｎ，Ｖ．Ｂ；Ｋｕｏ，Ｙ．Ｆ；Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｊ．Ｌ．；Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｊ．Ｓ．Ｒｉｓｋ ｏｆ ｆｒａｃｔｕｒｅ ａｆｔｅｒ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００５，３５２，１５４−１６４．
（２１）ａ） Ｔａｍｍｅｌａ，Ｔ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４，９２，２８７−２９５；ｂ） Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ，２００６，６６，１００５−１０１２．
（２２）Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｙ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｄｒｏｓｔ−４−ｅｎｅ−３，１７−ｄｉｏｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ＬＮＣａＰ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ ２００８，７３，２６６−２７１．
（２３）Ｉｎａｎｏ，Ｈ．；Ｔａｍａｏｋｉ，Ｂ．Ｉ．Ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９８６，４８，１−２６．
（２４）Ｍｏｈｌｅｒ，Ｍ．Ｌ．；Ｎａｒａｙａｎａｎ，Ｒ．；Ｈｅ，Ｙ．；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｄ．Ｄ．；Ｄａｌｔｏｎ，Ｊ．Ｔ．Ｒｅｃｅｎｔ Ｐａｔｅｎｔｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２００７，１，１０３−１１８．
（２５）Ｄａｙ，Ｊ．Ｍ．；Ｔｕｔｉｌｌ，Ｈ．Ｊ．；Ｐｕｒｏｈｉｔ，Ａ．；Ｒｅｅｄ，Ｍ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒ．−Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ ２００８，１５，６６５−６９２．
（２６）Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．Ｉｎｔｒａｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９９１，７８，Ｃ１１３−Ｃ１１８．
（２７）Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｎｅｗ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．２００８，６９，３０４−３１８．
（２８）Ｌｕｕ−Ｔｈｅ，Ｖ．；Ｂｅｌａｎｇｅｒ，Ａ．；Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．Ａｎｄｒｏｇｅｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ２００８，２２，２０７−２２１．
（２９）Ｋｏｈ，Ｅ．；Ｎｏｄａ，Ｔ．；Ｋａｎｙａ，Ｊ．；Ｎａｍｉｋｉ，Ｍ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｎｏｎ−ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ２００２，５３，１５４−１５９．
（３０）Ｄｅｑｔｙａｒ，Ｖ．Ｇ．；Ｂａｂｋｉｎａ，Ｔ．Ｖ．；Ｋａｚａｎｔｓｅｖａ，Ｉ．Ａ．；Ｍｏｒｏｚｏｖ，Ａ．Ｐ．；Ｔｒａｐｅｚｎｉｋｏｖａ，Ｍ．Ｆ．；Ｋｕｓｈｌｉｎｓｋｉ，Ｎ．Ｅ．Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｔｕｍｏｒｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｂｕｌｌ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２００５，１３９，７１５−７１７．
（３１）Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｒ．Ｂ．；Ｍｏｓｔａｇｈｅｌ，Ｅ．Ａ．；Ｖｅｓｓｅｌｌａ，Ｒ．；Ｈｅｓｓ，Ｄ．；Ｋａｌｈｏｒｎ，Ｔ．Ｆ．；Ｈｉｇａｎｏ，Ｃ．Ｓ．；Ｔｒｕｅ，Ｌ．Ｄ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｐ．Ｓ．Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００８，６８，４４４７−４４５４．
（３２）Ｌｏｃｋｅ，Ｊ．Ａ．；Ｇｕｎｓ，Ｅ．；Ｌｕｂｉｋ，Ａ．Ａ．；Ａｄｏｍａｔ，Ｈ．Ｈ．；Ｈｅｎｄｙ，Ｓ．Ｃ．；Ｗｏｏｄ，Ｃ．Ａ．；Ｅｔｔｉｎｇｅｒ，Ｓ．Ｌ．；Ｇｌｅａｖｅ，Ｍ．Ｅ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ｃ．Ａｎｄｒｏｇｅｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｂｙ ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｄｅ ｎｏｖｏ ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｅｓｉｓ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００８，６８，６４０７−６４１５．
（３３）Ｍｏｓｔａｇｈｅｌ，Ｅ．Ａ．；Ｐａｇｅ，Ｓ．Ｔ．；Ｌｉｎ，Ｄ．Ｗ．；Ｆａｚｌｉ，Ｌ．；Ｃｏｌｅｍａｎ，Ｉ．Ｍ．；Ｔｒｕｅ，Ｌ．Ｄ．；Ｋｎｕｄｓｅｎ，Ｂ．；Ｈｅｓｓ，Ｄ．Ｌ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．Ｃ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ａ．Ｍ．；Ｂｒｅｍｎｅｒ，Ｗ．Ｊ．；Ｇｌｅａｖｅ，Ｍ．Ｅ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｐ．Ｉｎｔｒａｐｒｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｅｒｓｉｓｔ ａｆｔｅｒ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７，６７，５０３３−５０４１．
（３４）Ｐａｇｅ，Ｓ．Ｔ．；Ｌｉｎ，Ｄ．Ｗ．；Ｍｏｓｔａｇｈｅｌ，Ｅ．Ａ．；Ｈｅｓｓ，Ｄ．Ｌ．；Ｔｒｕｅ，Ｌ．Ｄ．；Ａｍｏｒｙ，Ｊ．Ｋ．；Ｎｅｌｓｏｎ，Ｐ．Ｓ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ａ．Ｍ．；Ｂｒｅｍｎｅｒ，Ｗ．Ｊ．Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎｔｒａｐｏｓｔａｔｉｃ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｍｅｄｉｃａｌ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｍｅｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００６，９１，３８５０−３８５６．
（３５）Ｎｏｒｄｌｉｎｇ，Ｅ．；Ｏｐｐｅｒｍａｎｎ，Ｕ．Ｃ．；Ｊｏｒｎｖａｌｌ，Ｈ．；Ｐｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．；Ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ １０ １７ ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｄｏｃｋｉｎｇ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｇｒａｐｈ．Ｍｏｄｅｌ ２００１，１９，５１４−５２０
（３６）Ｈｅ，Ｈ．Ｙ．；Ｍｅｒｚ，Ｇ．；Ｙａｎｇ，Ｙ．Ｚ．；Ｍｅｈｔａ，Ｐ．；Ｓｃｈｕｌｚ，Ｈ．；Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ１０ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００１，２６８，４８９９−４９０７．
（３７）Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．；Ｈｅ，Ｘ．Ｙ．；Ｓｃｈｕｌｚ，Ｈ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １０ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００５，１６，１６７−１７５．
（３８）Ｆａｎｇ，Ｈ．；Ｔｏｎｇ，Ｗ．；Ｂｒａｎｈａｍ，Ｗ．Ｓ．；Ｍｏｌａｎｄ，Ｃ．Ｌ．；Ｄｉａｌ，Ｓ．Ｌ．；Ｈｏｎｇ，Ｈ．；Ｘｉｅ，．；Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｒ．；Ｏｗｅｎｓ，Ｗ．；Ｓｈｅｅｈａｎ，Ｄ．Ｍ．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ２０２ Ｎａｔｕｒａｌ，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ，ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎｄｒｏｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００１，１４，２８０−２９４．
（３９）Ｍａｌｔａｉｓ，Ｒ．；Ｔｒｅｍｂｌａｙ，Ｍ．Ｒ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ ｌｉｎｋｅｒ．Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．２０００，２，６０４−６１４．
（４０）Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．；Ｃｈａｎｇ，Ｈ．Ｊ．；Ａｚｚｉ，Ａ．；Ｂｏｉｖｉｎ，Ｒ．Ｐ．；Ｌｉｎ，Ｓ．Ｘ．Ｅｓｔｒｏｎｅ ａｎｄ ｅｓｔｒａｄｉｏｌ Ｃ−１６ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００６，２７，２３６−２３８．
（４１）Ｓｈａｒｉｆｉ，Ａ．；Ｍｏｈｓｅｎｚａｄｅｈ，Ｆ．；Ｍｏｊｔａｈｅｄｉ，Ｍ．Ｍ．；Ｓａｉｄｉ，Ｍ．Ｒ．；Ｂａｌａｌａｉｅ，Ｓ．Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ−ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｒｉｌｅｓ ｔｏ ａｍｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｄｉｕｍ ｐｅｒｂｏｒａｔｅ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍ．２００１，３１，４３１−４３４．
（４２）Ｓｋｏｄａ−Ｆｏｌｄｅｓ，Ｒ．；Ｋｏｌｌａｒ，Ｌ．；Ｍａｒｉｎｅｌｌｉ，Ｆ．；Ａｒｃａｄｉ，Ａ．Ｄｉｒｅｃｔ ａｎｄ ｃａｒｂｏｎｙｌａｔｉｖｅ ｖｉｎｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｒｏｉｄ ｔｒｉｆｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ｐａｌｌａｄｉｕｍ ｃａｔａｌｙｓｔｓ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，１９９４，５９，６９１−６９５．
（４３）Ｔｉａｎ，Ｙ−Ｓ．；Ｊｏｏ，Ｊ−Ｅ．；Ｋｏｎｇ，Ｂ−Ｓ．；Ｐｈａｍ，Ｖ−Ｔ．；Ｌｅｅ，Ｋ−Ｙ．；Ｈａｍ，Ｗ−Ｈ．Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ （−） ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００９，７４，３９６２−３９６５．
（４４）Ｗａｎｇ，Ｌ．Ｇ．；Ｍｅｎｃｈｅｒ，Ｓ．Ｋ．；ＭｃＣａｒｒｏｎ，Ｊ．Ｐ．；Ｆｅｒｒａｒｉ，Ａ．Ｃ．Ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ−ａｎｄｒｏｇｅｎ ａｎｄ ａ ５−ａｌｐｈａ−ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ：ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ ａｎｄ ｒｅｖｉｅｗ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２００４，１１，１３２５−１３２９．
（４５）Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ，Ｒ．Ｌ．；Ｔｕｃｋｅｒ，Ｓ．Ｊ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ ｔｒｉｐｌｅ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｂｌｏｃｋａｄｅ：ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ １１０ ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，２００１，６，１７７−１８２．
（４６）Ｍａｌｔａｉｓ，Ｒ．；Ｌｕｕ−Ｔｈｅ，Ｖ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｔｙｐｅ ３ １７ ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｂｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｌｉｑｕｉｄ−ｐｈａｓｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，４５，６４０−６５３．
（４７）Ｔｃｈｅｄａｍ−Ｎａｇｔｃｈａ，Ｂ．；Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｙ．；Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．；Ｌｕｕ−Ｔｈｅ，Ｖ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．３−Ｂｅｔａ−ａｌｋｙｌ−ａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ３ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｏｔｅｎｃｙ ｉｎ ｉｎｔａｃｔ ｃｅｌｌｓ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｔｏｗａｒｄｓ ｉｓｏｆｏｒｍｓ １，２，５ ａｎｄ ７，ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｓｔｅｒｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ／ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｎ ＡＲ＋ ａｎｄ ＥＲ＋ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００６，２４８，２２５−２３２．
（４８）Ｔｃｈｅｄａｍ−Ｎａｇｔｃｈａ，Ｂ．；Ｌｕｕ−Ｔｈｅ，Ｖ．；Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ ３−ａｌｐｈａ−ｅｔｈｅｒ−３ｂｅｔａ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｎｄ ａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ ３ｂｅｔａ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ３ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００５ ４８，５２５７−５２６８．
（４９）Ｍａｌｔａｉｓ，Ｒ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ａ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｐｈａｓｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｐａｒａｌｌｅｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ３β−ａｍｉｄｏ−３α−ｈｙｄｒｏｘｙ−５α−ａｎｄｒｏｓｔａｎｅ−１７−ｏｎｅｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９８，３９，４１５１−４１５４．
（５０）Ｍａｌｔａｉｓ Ｒ．；Ｌｕｕ−Ｔｈｅ，Ｖ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｐａｒａｌｌｅｌ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ３ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｏ−３ａｌｐｈａ−ｈｙｄｒｏｘｙ−５ａｌｐｈａ−ａｎｄｒｏｓｔａｎ−１７−ｏｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｆｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅ ３ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，９，３１０１−３１１１．
（５１）Ｂｅｒｕｂｅ，Ｍ．；Ｌａｐｌａｎｔｅ，Ｙ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ４−ａｎｄｒｏｓｔｅｎｅ−３，１７−ｄｉｏｎｅ／ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｈｙｂｒｉｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｓ ｂｉｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ３ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００６，２，３２９−３４７．
（５２）Ｂｅｒｕｂｅ，Ｍ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ ｂｉｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｙｐｅ ３ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｊ．Ｅｎｚ．Ｉｎｈｉｂ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７，２２，２０１−２１１．
（５３）Ｍａｌｔａｉｓ，Ｒ．；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ，Ｍ．Ａ．，Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ３β−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ １７β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｙｐｅ ３．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，１９，４６５２−４６６８．
（５４）Ｒｏｙ，Ｊ．；Ｂｒｅｔｏｎ，Ｒ．；Ｍａｒｔｅｌ，Ｃ．；Ｌａｂｒｉｅ，Ｆ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ １６α−ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｏｆ ５α−ａｎｄｒｏｓｔａｎｅ−３α，１７β−ｄｉｏｌ ａｓ ａｎｔｉａｎｄｒｏｇｅｎｓ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７，１５，３００３−３０１８．
（５５）Ａｙａｎ，Ｄ．；Ｒｏｙ，Ｊ．；Ｍａｌｔａｉｓ，Ｒ．；Ｐｏｉｒｉｅｒ，Ｄ．Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ （１８−ｍｅｔｈｙｌ ａｎｄ／ｏｒ １７−ｈｙｄｒｏｘｙ ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ） ｏｎ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１１，１２７，３２４−３３０．
（５６）ＷＯ２００８／０８９０９３Ａ２ （２００８） ｔｏ Ｑｕａｔｒｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｍｐａｎｙ．
（５７）Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｒ．；Ｒｅｊｔｏ，Ｐ．Ａ．；Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ，Ｌ．Ａ．；Ｔｈｏｍｓｏｎ，Ｊ．Ａ．；Ｓｈｏｗａｌｔｅｒ，Ｒ．Ｅ．；Ａｂｒｅｏ，Ｍ．Ａ．；Ａｇｒｅｅ，Ｃ．Ｓ．；Ｍａｒｇｏｓｉａｋ，Ｓ．；Ｍｅｎｇ，Ｊ．Ｊ．；Ａｕｓｔ，Ｒ．Ｍ．；Ｖａｎｄｅｒｐｏｏｌ，Ｄ．；Ｌｉ，Ｂ．；Ｔｅｍｐｃｚｙｋ−Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ａ．；Ｖｉｌｌａｆｒａｎｃａ，Ｊ．Ｅ．Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＡＢＡＤ／ＨＳＤ１０ ｗｉｔｈ ａ ｂｏｕｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４，３４２，９４３−９５２．
（５８）Ｉｔｔｎｅｒ，Ｌ．Ｍ．；Ｇｏｔｚ，Ｊ．Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ ａｎｄ ｔａｕ−−ａ ｔｏｘｉｃ ｐａｓ ｄｅ ｄｅｕｘ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１１，１２，６５−７２．
（５９）Ｈｅ，Ｈ．Ｙ．；Ｗｅｎ，Ｇ．Ｙ．；Ｍｅｒｚ，Ｇ．；Ｌｉｎ，Ｄ．；Ｙａｎｇ，Ｙ．Ｚ．；Ｍｅｈｔａ，Ｐ．；Ｓｃｈｕｌｚ，Ｈ．；Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．Ａｂｕｎｄａｎｔ ｔｙｐｅ １０ １７ ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ｍｏｕｓｅ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｍｏｄｅｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２００２，９９，４６−５３．
（６０）Ｘｕ，Ｈ．；Ｇｏｕｒａｓ，Ｇ．Ｋ．；Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ｐ．；Ｖｉｎｃｅｎｔ，Ｂ．；Ｎａｓｌｕｎｄ，Ｊ．；Ｍａｚｚａｒｅｌｌｉ，Ｌ．；Ｆｒｉｅｄ，Ｇ．；Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ，Ｊ．Ｎ．；Ｓｅｅｇｅｒ，Ｍ．；Ｒｅｌｋｉｎ，Ｎ．Ｒ．；Ｌｉａｏ，Ｆ．；Ｃｈｅｃｌｅｒ，Ｆ．；Ｂｕｘｂａｕｍ，Ｊ．Ｄ．；Ｃｈａｉｔ，Ｂ．Ｔ．；Ｔｈｉｎａｋａｒａｎ，Ｇ．；Ｓｉｓｏｄｉａ，Ｓ．Ｓ．；Ｗａｎｇ，Ｒ．；Ｇｒｅｅｎｇａｒｄ，Ｐ．；Ｇａｎｄｙ，Ｓ．Ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｄｕｃｅｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９８，４，４４７−４５１．
（６１）Ｈｅ，Ｘ．Ｙ．；Ｗｅｇｉｅｌ，Ｊ．；Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｏｐｒｅｇｎａｎｏｌｏｎｅ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ ｔｙｐｅ １０ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２００５，１０４０，２９−３５．
（６２）Ｈｅ，Ｘ．Ｙ．；Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．Ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １０ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎ ｉｎｔｒａｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ ａｎｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｍｅｔａｂ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｏｒｄ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２００６，６，９５−１０２．
（６３）Ｈｅ，Ｘ．Ｙ．；Ｙａｎｇ，Ｙ．Ｚ．；Ｐｅｅｈｌ，Ｄ．Ｍ．；Ｌａｕｄｅｒｄａｌｅ，Ａ．；Ｓｃｈｕｌｚ，Ｈ．；Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｙ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ３ａｌｐｈａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ １０ １７ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００３，８７，１９１−１９８．

Claims (29)

  1. 下記の構造：
    ［式中、Ｒは、ハロ、−ＮＨ２ 、非置換のアルキル、並びに
    からなる群から選択される基である］
    を有する化合物、またはそれらの薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体からなる、１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  2. 下記の構造：
    を有する化合物、またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる、請求項１に記載の阻害剤。
  3. 前記化合物の薬学的に許容可能な塩が、下記の構造：
    を有する、請求項２に記載の阻害剤。
  4. 下記の構造：
    を有する化合物またはそれらの薬学的に許容可能な塩からなる、１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  5. 被験体の癌を治療するために用いるための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  6. 前記癌がエストロゲン感受性癌である、請求項５に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  7. 前記エストロゲン感受性癌が乳癌である、請求項６に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  8. 前記癌がアンドロゲン感受性癌である、請求項５に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  9. 前記アンドロゲン感受性癌が前立腺癌である、請求項８に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  10. 被験体の癌の治療が二次癌療法の使用をさらに含む、請求項５に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  11. 前記二次癌療法が、化学療法、毒素療法、放射線療法、ホルモンもしくは抗ホルモン療法、外科手術、凍結療法、または免疫療法からなる群から選択される、請求項１０に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  12. 被験体の非癌性疾患を治療するために用いるための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  13. 前記非癌性疾患が子宮内膜症である、請求項１２に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  14. 前記非癌性疾患が良性前立腺肥大症である、請求項１２に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  15. 前記非癌性疾患がアルツハイマー病である、請求項１２に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  16. 被験体の非癌性疾患の治療が二次療法の使用をさらに含む、請求項１２に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  17. １７β−ＨＳＤ１の阻害剤が少なくとも２回投与されるように用いるための、請求項５〜１６のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  18. 静脈内、動脈内、皮下、局所的、または筋肉内に投与するように用いるための、請求項５〜１６のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  19. 全身性に、腫瘍／疾患部位に局部的に、腫瘍／疾患部位に局所的に、腫瘍／組織血管中に、または腫瘍内に投与するように用いるための、請求項５〜１６のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  20. 前記癌が多剤耐性である、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  21. 前記癌が転移性である、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  22. 前記癌が再発性である、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  23. 癌の治療が、癌増殖の阻害、癌細胞の死滅、腫瘍量の減少、腫瘍サイズの減少、前記被験体の生活の質の改善、または前記被験体の生存期間の延長を含む、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  24. 前記癌が、肺癌、脳腫瘍、頭頸部癌、皮膚癌、肝癌、膵癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、精巣癌、皮膚癌、または食道癌である、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  25. 前記被験体がヒトである、請求項５〜１６のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  26. 前記被験体が非ヒト動物である、請求項５〜１６のいずれか一項に記載の１７β−ＨＳＤ１の阻害剤。
  27. 下記の構造：
    ［式中、ＸはＩ１２３、Ｉ１２５、Ｉ１３１、またはＢｒ７６である］を含む放射標識化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体。
  28. 請求項２７に記載の放射標識化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体からなる、放射性イメージング剤。
  29. 請求項２７に記載の放射標識化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは互変異性体からなる、乳癌または前立腺癌の治療剤。
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