JP6648160B2 - 血管擬態の阻害剤としての、アリール−キノリン誘導体の新規の使用 - Google Patents

Description

＜本発明の分野＞
本発明は、アリール−キノリン誘導体の新規の使用に関し、より具体的には、血管擬態の阻害に使用するための、及び異常な血管の形態及び機能に関連する及び／又は血管擬態の存在によって特徴付けられる疾患又は状態の処置に使用するための、アリール−キノリン誘導体に関する。

＜本発明の背景＞
血管擬態という用語は、高度に浸潤性で遺伝的に調節不全の腫瘍細胞による流体伝導チャネルの形成を説明する。血管擬態の２つの独特のタイプが説明されている。管状タイプの血管擬態は、形態学的に、内皮細胞系統の血管と混同され得る。パターン化マトリクスタイプの血管擬態は、形態学的に又はトポロジー的には、血管に決して似ていない。ラミニン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、及びコラーゲンＩＶ及びＶＩなどのマトリクスタンパク質が、これらのパターンにおいて同定されている。パターン化マトリクスは、血管と吻合する。

パターン化マトリクスタイプの血管擬態は、ぶどう膜、皮膚及び粘膜黒色腫、炎症性乳がん腫及び乳管がん腫、卵巣及び前立腺がん腫、肺がん腫、腎がん腫、肝細胞がん腫、中皮肉腫、膀胱がん腫、骨肉腫、星状細胞腫、クロム親和性細胞腫、結腸直腸がん、髄芽細胞腫、腺癌、食道間質腫瘍、妊娠性絨毛がん腫、胆嚢がん腫、消化管がん、喉頭がん、滑膜肉腫、グリオブラストーマ、白血病及び軟部組織肉腫、例えば滑膜肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、ユーイング肉腫、及びクロム親和性細胞腫など、において、同定されている。

血管擬態が、喉頭扁平上皮がん腫、肝細胞がん腫、腎細胞がん腫、乳がん、卵巣がん腫、原発性胆嚢がん腫、悪性食道間質がん腫、肝細胞がん腫、中皮肉腫及び胞巣状横紋筋肉腫の侵攻性転移に関与していることが、エビデンスによって示されている。ＶＭを示す黒色腫を有する個体は、予後が不良であり、がん再発のリスクがより高い。ＶＭの阻害剤が、転移をブロックするため又は腫瘍成長を遅らせるために使用され得る。それ故に、ＶＭ形成の拮抗剤が、腫瘍成長及び高度に侵攻性の転移を阻害するのに有益な効果を有し得ると仮定されている。

ＷＯ２０１２／００９５１９は、アリール及びヘテロアリール−キノリン誘導体の合成及び抗がん活性を開示している。

＜本発明の概要＞
一つの態様において、本発明は、以下のような式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶの化合物、又はそれらの医薬的に許容される塩に関するものであり、これは、それを必要とする被験体において、血管擬態の阻害に使用するためのものである。
式中、
Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、Ｘ、又は（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、又はＲ_３'＝ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ベンジル）_２であり、式中、ｎは０−４の整数であり、ＹはＯ又はＳであり、ＸはＦ、Ｃｌ、又はＢｒであり、Ｒ_８及びＲ_９は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１）（Ｃ_ｍＨ_２ｍ＋１）又は（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３であり、式中、ｎ及びＹは上記に定義されたとおりであり、ｍは０−４の整数であり；
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、Ｘ、（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＮであり、又はＲ_４及びＲ_５はともに−Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹ−であり、又はＲ_３及びＲ_４はともに−Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹ−であり、式中、ｎ、Ｙ、Ｘ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりであり、又はＲ_３はＯ−ベンジルであり；及び
Ｒ_１及びＲ_１'は独立して、Ｈ、Ｌｉ^＋、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、Ｃａ^＋＋、Ｍｇ^＋＋、Ｎ^＋Ｒ_８Ｒ_９Ｒ_１０Ｒ_１１又はベンジルであり、式中、Ｒ_１０及びＲ_１１は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１）（Ｃ_ｍＨ_２ｍ＋１）又は（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３であり、ｎ、ｍ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりである。

本発明の一つの実施形態において、Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'は全てＨであり；又はＲ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'のうち１つは、Ｆ、ＯＣＨ_３又は（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、その他のものはＨであり、式中、ｎ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりである。

本発明の別の実施形態において、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、及びＲ_５は全てＨであり；又はＲ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、及びＲ_５のうち１つは、Ｆ、ＯＣＨ_３、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３又は（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、その他のものはＨであり；又はＲ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯ−であり、式中、ｎ、Ｙ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりである。

本発明の別の実施形態において、Ｒ_１及びＲ_１'は、Ｈ、Ｎａ^＋、及び／又はＫ^＋である。

本発明の別の実施形態において、Ｒ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−であり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_５'は全てＨであり、Ｒ_６'はＦである。

本発明の別の実施形態において、Ｒ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−であり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_６'は全てＨであり、Ｒ_５'はＦである。

本発明の別の実施形態において、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５は全てＨであり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'は全てＨである。

本発明の別の実施形態において、Ｒ_４はＯＣＨ_３であり、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_５はＨであり；Ｒ_５'はＦであり、Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_６'はＨである。

本発明の別の実施形態において、Ｒ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−であり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_６'は全てＨであり、Ｒ_５'はＯＣＨ_３である。

本発明の別の実施形態において、化合物が、化合物番号３８、４３、５２、１４７、Ａ６、Ｂ１、Ｂ３、Ｃ４、及びＣ６からなる群より選択される少なくとも１つである。

本発明の別の実施形態において、被験体は、異常血管形態又は機能によって及び／又は血管擬態の存在によって特徴付けられる疾患を患っている。

さらに本発明の別の実施形態において、疾患が、転移性腫瘍、過剰増殖性障害、炎症性疾患、及び眼科疾患からなる群より選択される少なくとも１つである。

転移性腫瘍は、黒色腫、卵巣がん、前立腺がん、腎細胞がん腫、ユーイング肉腫、乳がん、神経内分泌がん腫、甲状腺がん腫、喉頭扁平上皮がん腫、肝細胞がん腫、ぶどう膜黒色腫、皮膚黒色腫、口腔悪性黒色腫、絨毛がん腫、原発性胆嚢がん、悪性食道間質がん腫、中皮肉腫、胞巣状横紋筋肉腫、膀胱がん、骨肉腫、星状細胞腫、クロム親和性細胞腫、結腸直腸がん、髄芽細胞腫、腺癌、食道間質腫瘍、喉頭がん、白血病、滑膜肉腫、グリオブラストーマ、及び消化管がんからなる群より選択される少なくとも１つであってよい。

過剰増殖性障害は、乾癬性関節炎の障害、リウマチ性関節炎、ループス、反応性関節炎、シェーグレン症候群、炎症性腸疾患、皮膚筋炎、強直性脊椎炎、若年性リウマチ性関節炎、痛風、炎症性骨関節炎、偽痛風、アミロイドーシス、角化及び角化症、糖尿病性網膜症、子宮内膜症、黄斑変性症、ケロイド、いぼ、硬変症、慢性炎症関連障害、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症、肉芽腫症、器官又は組織移植に関連する免疫過剰増殖、良性前立腺肥大、及び免疫増殖性疾患又は障害からなる群より選択される少なくとも１つであってよい。

炎症性疾患は、尋常性ざ瘡、アルツハイマー病、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、大腸炎、クローン病、皮膚炎、憩室炎、糸球体腎炎、肝炎、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、腎炎、パーキンソン病、骨盤内炎症性疾患、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、移植拒絶反応、潰瘍性大腸炎、及び脈管炎からなる群より選択される少なくとも１つであってよい。

眼科疾患は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、血管新生緑内障、角膜血管新生（トラコーマ）、及び翼状片からなる群より選択される少なくとも１つであってよい。

別の態様において、本発明は、以下のような式Ｉａ又はＩｂの化合物、又はそれらの医薬的に許容される塩に関するものであり、これは、それを必要とする被験体において、血管擬態を阻害する、減少させる、及び／又は緩和する際に使用するためのものである。
式中、
Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'、Ｒ_６'は独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２ｎ）ＯＨ、Ｏ−（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、（ＣＨ_２ｎ）ＳＨ、Ｓ−（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、又はＳ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、又はＲ_３'＝ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ベンジル）_２であり、式中、Ｒ_８及びＲ_９は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２ｎ）ＯＨ、（ＣＨ_２ｎ）ＳＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１）（Ｃ_ｍＨ_２ｍ＋１）であり、ｎ及びｍはそれぞれ０〜４の整数であり；
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＮであり、又はＲ_４及びＲ_５はともに、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯ−、又は−Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳ−であり、又はＲ_３及びＲ_４はともに、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯ−、又は−Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳ−であり、式中、ｎ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりであり、又はＲ_３はＯ−ベンジルであり；
又はＲ_５はＯＰ＝ＯＯＲ_１ＯＲ_１'であり、Ｒ_１及びＲ_１'は独立して、Ｈ、Ｌｉ^＋、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、Ｃａ^＋＋、Ｍｇ^＋＋、Ｎ^＋Ｒ_８Ｒ_９Ｒ_１０Ｒ_１１又はベンジルであり、式中、Ｒ_１０及びＲ_１１は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１）（Ｃ_ｍＨ_２ｍ＋１）又は（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３であり、ｎ、ｍ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりである。

さらに別の態様において、本発明は、以下のような式（Ｘ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩に関するものであり、これは、それを必要とする被験体において、血管擬態を阻害する、減少させる、及び／又は緩和する際に、使用するためのものである。
式中、Ｗは、ナフチル、キノリン、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、アントラセン、及び式（Ｙ）の置換されたベンゼンからなる群より選択される芳香族基であり、
式中、：
Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'、Ｒ_６'は独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２ｎ）ＯＨ、Ｏ−（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、（ＣＨ_２ｎ）ＳＨ、Ｓ−（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、又はＳ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、又はＲ_３'＝ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ベンジル）_２であり、式中、Ｒ_８及びＲ_９は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２ｎ）ＯＨ、（ＣＨ_２ｎ）ＳＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１）（Ｃ_ｍＨ_２ｍ＋１）であり、ｎ及びｍはそれぞれ０〜４の整数であり；
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＨ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＮ、（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、Ｒ_４及びＲ_５はともに、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯ−、又は−Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳ−であり、又はＲ_３及びＲ_４はともに、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯ−、−Ｓ（ＣＨ_２）_ｎＳ−であり、式中、ｎ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりであり、又はＲ_３はＯ−ベンジルであり；
又はＲ_５はＯＰ＝ＯＯＲ_１ＯＲ_１'であり、Ｒ_１及びＲ_１'は独立して、Ｈ、Ｌｉ^＋、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、Ｃａ^＋＋、Ｍｇ^＋＋、Ｎ^＋Ｒ_８Ｒ_９Ｒ_１０Ｒ_１１又はベンジルであり、式中、Ｒ_１０及びＲ_１１は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１）（Ｃ_ｍＨ_２ｍ＋１）又は（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３であり、ｎ、ｍ、Ｒ_８及びＲ_９は上記に定義されたとおりである。

本発明の一つの実施形態において、使用のための化合物が、表４に列挙される化合物番号１６−２４、３７−４５、４８−５３、１２４−１４３、１４３ａ、１４３ｂ、１４４、１４４ａ、１４４ｂ、１４６−１４７、１５２−１５３、１５７−１５８、１６６−１６９、及びＣＨＭ−２１３３からなる群より選択される少なくとも１つである。

代替的に、本発明は、上記に定義された、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶ；又は式Ｉａ又はＩｂ；又は式（Ｘ）の化合物、又はそれらの医薬的に許容される塩の使用であって、それを必要とする被験体において血管擬態を阻害するための医薬品の製造における、使用に関する。

本発明はまた、血管擬態を阻害するための方法であって、治療的に有効量の、上記に定義された、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶ；又は式Ｉａ又はＩｂ；又は式（Ｘ）の化合物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法に関する。

上記に定義された、使用のための、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶ；又は式Ｉａ又はＩｂ；又は式（Ｘ）の化合物は、使用のための追加の治療剤を組み合わせてよく、ここで、追加の治療剤は、抗がん剤、抗炎症剤、抗増殖剤、抗ホルモン剤、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つである。

これらの態様及び他の態様は、以下の図面と併せて、好ましい実施形態の以下の説明から明らかになるだろう。しかし、開示の新規の概念の精神及び範囲から逸脱することなく、変更及び改変することができる。添付の図面は、本発明の１又は複数の実施形態を示しており、記載される説明とともに、本発明の原理を説明するのに役立つ。可能な限り、一実施形態の同じ又は類似の要素を指すために、同じ参照番号が図面全体を通じて使用される。

図１は、Ｃ８１６１侵攻性黒色腫細胞における、ＴＲＸ−８１８によるＶＭネットワーク形成の阻害を示す顕微鏡写真を示す。

図２は、ＳＫ−ＭＥＬ２８がん細胞における、濃度≧５〜１０ｎＭのＴＲＸ−８１８によるＶＭネットワーク形成の阻害を示す顕微鏡写真を示す。

図３は、ビヒクル群における細胞間結合の形成及び細管長さに対する、異なる濃度のＴＲＸ−８１８の効果を示す代表的な２値画像である。

図４は、Ｃ８１６１侵攻性黒色腫細胞における、ＴＲＸ−８１８Ｍ１によるＶＭネットワーク形成の阻害を示す顕微鏡写真を示す。

図５は、Ｃ８１６１侵攻性黒色腫細胞における、ＣＨＭ２１３３によるＶＭネットワーク形成の阻害を示す顕微鏡写真を示す。

図６Ａ−Ｄは、Ｎｏｔｃｈ４ ＩＣＤ、Ｎｏｄａｌ、ＣＤＨ５及びＥｐｈＡ２の発現に対するＴＲＸ−８１８の効果を示す。

図７は、Ｐｒｏ−Ｎｏｄａｌのタンパク質発現に対するＴＲＸ−８１８の効果を示す写真である。

図８は、Ｓｍａｄのタンパク質発現及びリン酸化レベルに対するＴＲＸ−８１８の効果を示す写真である。

図９は、腫瘍植え付け後４３日目の、ＨＣＴ−１１６結腸がん同所性異種移植モデルにおける腫瘍体積に対するＴＲＸ−８１８の効果を示す。ａ：５０ｍｇ／ｋｇ ＱＤグループにおいて、研究終了前に１匹の動物が死んでおり、１つのデータポイントが、β−分布外れ値分析によって検出された外れ値であった。ｂ：２０ｍｇ／ｋｇ ＱＯＤグループにおいて、研究終了前に２匹の動物が死んでいた。ｃ：イリノテカン５０ Ｑ４Ｄグループにおいて、１つのデータポイントが、β−分布外れ値分析によって検出された外れ値であった。＊ｐ＜０．０５対ビヒクル、＊＊ｐ＜０．０１対ビヒクル。

図１０は、ＨＣＴ−１１６結腸がん同所性異種移植モデルにおけるＶＭチャネルの数に対するＴＲＸ−８１８の効果を示す。＊Ｐ＜０．０５対ビヒクル群。

図１１は、侵攻性黒色腫細胞におけるＶＭネットワーク形成に対する、ＴＲＸ−８１８に構造的に類似した化合物の効果を示す顕微鏡写真を示す。

＜発明の詳細な説明＞
本発明は、以下の実施例においてより具体的に説明されている。これらの実施例は、単なる例示であることが意図される。なぜなら、実施例における多数の改変及び変更が当業者には明らかであるためである。本発明の様々な実施形態をここで詳細に説明する。図面を参照すると、図面全体において、類似の番号は類似の構成要素を示す。この詳細な説明において、及び以下に続く特許請求の範囲全体において使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」の意味は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の参照を含む。また、この詳細な説明において、及び以下に続く特許請求の範囲全体において使用されるように、「ｉｎ」の意味は、文脈上他に明確に指示されない限り、「ｉｎ」及び「ｏｎ」を含む。さらに、読者の便宜のために、タイトル又はサブタイトルが明細書中で使用され得る。このことは、本発明の範囲に影響を与えるものではない。加えて、この明細書において使用されるいくつかの用語が、以下により具体的に定義される。

＜定義＞

この明細書で使用される用語は、一般に、本発明の文脈内で、及び各用語が使用される特定の文脈において、本技術分野におけるそれらの通常の意味を有する。本発明を説明するために使用されるある特定の用語が、以下で、又は本明細書の他の場所で論じられて、本発明の詳細な説明に関して実務者に追加のガイダンスを提供する。同じものを複数の方法で言うことができることが理解されるだろう。従って、本明細書で論じられる用語のうち任意の１又は複数について、別の言葉及び同義語を使用してよく、また、用語が本明細書において詳細に述べられている又は論じられているかどうかに特別な意味はない。ある特定の用語についての同義語が提供される。本明細書で論じられる任意の用語の例を含む、この明細書のどこかでの例の使用は、例示的なものに過ぎず、本発明の範囲及び意味又は任意の例示される用語の範囲及び意味を決して限定するものではない。同様に、本発明は、この明細書で与えられる様々な実施形態に限定されない。

血管擬態という用語は、高度に浸潤性で遺伝的に調節不全の腫瘍細胞による流体伝導チャネルの形成を説明する。用語「転移性腫瘍」は、発症部位から体の別の部分へ広がったがんを指し、血管及び脈管の異常形成を伴う。これらに限定されるものではないが、本発明における転移性腫瘍としては、血管過多転移を伴う腫瘍、例えば、黒色腫、卵巣がん、前立腺がん、腎細胞がん腫、ユーイング肉腫、乳がん、神経内分泌がん腫、甲状腺がん腫、喉頭扁平上皮がん腫、肝細胞がん腫、ぶどう膜黒色腫、皮膚黒色腫、口腔悪性黒色腫、絨毛がん腫、原発性胆嚢がん、悪性食道間質がん腫、中皮肉腫、胞巣状横紋筋肉腫、膀胱がん、骨肉腫、星状細胞腫、クロム親和性細胞腫、結腸直腸がん、髄芽細胞腫、腺癌、食道間質腫瘍、喉頭がん、白血病、滑膜肉腫、グリオブラストーマ、及び消化管がんが含まれる。

用語「過剰増殖性障害」は、細胞が正常な組織成長よりも迅速に増殖する任意の疾患又は障害を指す。過剰増殖細胞は、正常細胞よりも迅速に増殖する細胞である。

用語「炎症性疾患」は、炎症性異常によって特徴付けられる状態を指し、尋常性ざ瘡、アルツハイマー病、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、大腸炎、クローン病、皮膚炎、憩室炎、糸球体腎炎、肝炎、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、過敏性腸症候群、エリテマトーデス、腎炎、パーキンソン病、骨盤内炎症性疾患、リウマチ性関節炎、サルコイドーシス、移植拒絶反応、潰瘍性大腸炎、及び脈管炎を含むが、これらに限定されるものではない。

本明細書で使用される用語「眼科疾患」は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、血管新生緑内障、角膜血管新生（トラコーマ）、及び翼状片を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「抗血管新生剤」は、インビトロ又はインビボのいずれかで、血管新生を阻害し、血管成長をブロックし、又は血管新生の血管を破壊／除去する化合物又は組成物を指す。抗血管新生剤の例としては、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦ／ＰＤＥＧＦＲ阻害剤、ステロイド、キナーゼ阻害剤、サリドマイド、イトラコナゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０ ＣＭ１０１、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１２、血小板因子−４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンジン、軟骨由来の血管新生阻害因子、マトリクスメタロプロテイナーゼ阻害剤?、アンギオスタチン、エンドスタチン、２−メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデート、トロンボスポンジン、プロラクチン、α_Ｖβ_３阻害剤、リノミド、タスキニモドが含まれる。

用語「化学療法剤」及び「抗がん剤」は交換可能である。「抗がん剤」は、がん性細胞の成長を阻害するか、又はがん性細胞の死を引き起こす薬剤を指す。化学療法剤の例としては、以下のものが含まれる：アルキル化剤、例えばチオテパ及びシクロホスファミド；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ；エチレンイミン及びメチルメラミン、例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロロメラミン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えばアクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カルビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝剤、例えばメトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリンアナログ、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルミチン；エリプチニウムアセテート；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリニン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ．ＲＴＭ．；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２'，２''−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキサン、例えば、パクリタキセル、及びドセタキセル；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金アナログ、例えばシスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；及び上記のうち任意のものの医薬的に許容される塩、酸又は誘導体。この定義には抗ホルモン剤も含まれる。抗ホルモン剤は、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用し、例えば、抗エストロゲン剤、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ １１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（フェアストン）；及び抗アンドロゲン剤、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴゼレリン；及び上記のうち任意のものの医薬的に許容される塩、酸又は誘導体などがある。

用語「アリール」は、単一の環（例えば、フェニル）又は多縮合（融合）環を有する、６〜２０の炭素原子の不飽和芳香族炭素環基を指し、少なくとも１つの環が芳香族（例えば、ナフチル、ジヒドロフェナントレニル、フルオレニル、又はアントリル）である。好ましいアリールとしては、フェニル、ナフチルなどが含まれる。アリールは、任意選択的に、二価のラジカルであり、これによりアリーレンを提供することができる。

アリールは、１又は複数のアルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキル、アルカノイル、アルコキシカルボニル、アミノ、イミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、カルボキシ、カルボキシアルキル、ケト、チオキソ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、シアノ、アセタミド、アセトキシ、アセチル、ベンズアミド、ベンゼンスルフィニル、ベンゼンスルホンアミド、ベンゼンスルホニル、ベンゼンスルホニルアミノ、ベンゾイル、ベンゾイルアミノ、ベンゾイルオキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ベンジルオキシカルボニル、ベンジルチオ、カルバモイル、カルバメート、イソシアナート、スルファモイル、スルフィンアモイル、スルフィノ、スルホ、スルホアミノ、チオスルホ、ＮＲ＜ｘ＞Ｒ＜ｙ＞及び／又はＣＯＯＲ＜ｘ＞（式中、Ｒ＜ｘ＞及びＲ＜ｙ＞はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキル、又はヒドロキシである）で、任意選択的に置換されることができる。

化合物の「誘導体又はアナログ」という用語は、化学的に修飾された化合物を指し、この化学的修飾は、化合物の１又は複数の官能基で、芳香族、脂環式、又は複素環式構造（存在する場合）について起こる。しかしながら、誘導体又はアナログは、それが由来する化合物の薬理的活性を保持することが期待される。

様々な構成要素の濃度、量、などは、本開示を通して、しばしば範囲形式で提示される。範囲形式での記載は、単に便宜及び簡潔さのためのものであり、請求項に係る発明の範囲を確固として限定するものとして解釈されるべきではない。したがって、範囲の記載は、すべての可能な部分範囲、及びその範囲内の個々の数値を具体的に開示したものとみなされるべきである。例えば、１％〜８％という範囲の記載は、１％〜７％、２％〜８％、２％〜６％、３％〜６％、４％〜８％、３％〜８％などの部分範囲、及び２％、５％、７％などの、その範囲内の個々の数を具体的に開示したものとみなされるべきである。この構成は、範囲の広さに関わらず、本開示を通して全ての文脈において適用される。

本明細書に記載される化合物は、ＷＯ２０１２／００９５１９に開示され、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、有効量の治療剤を、それを必要とする被験体に、疾患、その症状、又はその素因を治癒、緩和、軽減、矯正、改善、又は予防する目的で、投与することを指す。このような被験体は、任意の適切な診断方法の結果に基づいて、医療従事者によって同定されることができる。

「有効量」は、処置される被験体に治療的効果を与えるために必要とされる活性薬剤の量を指す。当業者によって認識されるように、投与の経路、添加剤の使用、及び他の治療との併用の可能性に応じて、有効な投与量は変化するだろう。

ＱＤ×２８は、動物が１日１回２８日間投薬されたことを意味する。ＱＯＤ×７は、動物が隔日で７回投薬されたことを意味する。Ｑ４Ｄｘ３は、動物が４日に１回で合計３回投薬されたことを意味する。

用語「ＭＥＤ」は、「最小有効量（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｄｏｓｅ）」を指す。

米国保健福祉省食品医薬品局によって出版されている「成人の健康なボランティアの治療学についての臨床試験における安全開始用量を推定する、産業界、及び審査官のためのガイダンス（Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ａｎｄ Ｒｅｖｉｅｗｅｒｓ Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｆｅ Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｄｏｓｅ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ａｄｕｌｔ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ）」は、「ヒト等価用量（ａ ｈｕｍａｎ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｄｏｓｅ）」が以下の式からの計算によって得ることができることを開示している。
ＨＥＤ＝動物用量（ｍｇ／ｋｇ）×（動物体重（ｋｇ）／ヒト体重（ｋｇ））^０．３３

本発明は、アリール−キノリン誘導体の新規の使用に関し、より具体的には、それを必要とする被験体において、血管擬態の阻害に使用するための、及び異常な血管の形態及び機能に関連する及び／又は血管擬態の存在によって特徴付けられる疾患又は状態の処置に使用するための、アリール−キノリン誘導体に関する。具体的には、本発明は、血管模倣ネットワークの存在によって特徴付けられる、高度に転移性の腫瘍、過剰増殖性障害、炎症性疾患、及び眼科疾患の処置に使用するための、アリール−キノリン誘導体に関する。

本発明は、腫瘍細胞の高度に侵攻性転移性の広がり又は他の増殖性障害の処置において、他の抗転移腫瘍学療法と組み合わせて、又は抗血管新生剤、化学療法剤、又は免疫療法剤の治療的効果を強化するための療法と組み合わせて、適用してよい。

本発明の範囲を限定しようとするものではないが、本発明の実施形態に係る例示的な器具、装置、方法及びそれらに関連する結果を以下に示す。実施例において、タイトル又はサブタイトルが、読者の便宜のために使用される可能性があり、これは、決して本発明の範囲を限定するものではないことに留意されたい。さらに、ある特定の理論が、本明細書において提案及び開示される。しかしながら、それらの理論が正しくても間違っていても、いかなる特定の理論又は行動のスキームにも関係なく、本発明が本発明にしたがって実施される限り、それらの理論は決して、本発明の範囲を限定するものではない。

例１
ＴＲＸ−８１８は、侵攻性黒色腫細胞における血管擬態ネットワーク形成を阻害する

ＴＲＸ−８１８（２−（３−フルオロフェニル）−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イルホスファート）の溶液を以下のように調製した。ナトリウム塩形態のＴＲＸ−８１８を秤量し、滅菌組織培養水に溶解して、１０ｍＭストック溶液を予め調製した。次いでストック溶液を等分し、使用まで凍結保存した。ストック溶液の新鮮なアリコートを解凍し、細胞培養培地を使用して順次希釈して、アッセイの日に最終ワーキング溶液を調製した。

ＶＭネットワーク分析のために、侵攻性ヒト黒色腫（Ｃ８１６１又はＳＫ−ＭＥＬ２８；１ｘ１０^５）細胞を、３次元重合ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）（７５μｌ）に播種した。Ｃ８１６１又はＳＫ−ＭＥＬ２８細胞を、細胞接着の５又は２４時間後に、０．５、１、５、１０、２５又は５０又は１００ｎＭのＴＲＸ−８１８で２４時間処置した。黒色腫細胞の別のセットをプラスチックディッシュ上に播種し、同じ時間量処置した後に、Ｇｕａｖａ Ｎｅｘｉｎアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）を使用して、Ｃ８１６１又はＳＫ−ＭＥＬ２８細胞の細胞生存能力を決定した。

試験化合物に対するがん細胞の応答を追跡するために、環境チャンバーを備えた共焦点レーザー走査顕微鏡を使用してＶＭネットワーク画像を撮影した。次いでこの画像をデジタル化し、続いてＡｎｇｉｏｓｙｓソフトウェアを使用して分析した。１サンプルごとに４つの画像を分析して、ＶＭ形成の結合の数及び合計細管長さを定量化した。変化は、ビヒクル対照に対してパーセンテージで示した。滅菌脱イオン水（組織培養グレード）をビヒクル対照として使用した。

ＶＭネットワーク形成は、Ｃ８１６１又はＳＫ−ＭＥＬ２８がん細胞において、ＴＲＸ−８１８の濃度≧５〜１０ｎＭで、阻害された（図１及び２）。全ての試験されたＴＲＸ−８１８の濃度は、細胞間結合の数及び合計細管長さ形成（これらはＶＭ形成に必要とされる）を顕著に減少させた（図３）。細胞間結合の最大減少が、５ｎＭのＴＲＸ−８１８によって達成された（４３％減少）のに対して、合計細管長さの最大減少は、５０ｎＭのＴＲＸ−８１８によって達成された（４８％減少）。これらの結果は表１に要約されており、濃度≧１０ｎＭのＴＲＸ−８１８が、細胞−細胞及び／又は細胞−マトリクス相互作用を破壊することによって、ＶＭネットワーク形成を阻害することを示唆している。これは、がん細胞におけるＴＲＸ−８１８の抗増殖活性に先行していた可能性がある。表１は、対照と比較した細胞間結合の数及び合計細管長さに対するＴＲＸ−８１８の効果を示す。データは、ビヒクル群に対するパーセンテージ減少として示される。

化合物例ＴＲＸ−８１８Ｍ１及びＣＨＭ−２１３３について同様の研究を実施した。画像の結果を図４及び５にそれぞれ示す。

例２
ＶＭタンパク質のｍＲＮＡレベルに対するＴＲＸ−８１８の効果

ＶＭに必須のタンパク質のレベルを変化させることによって、ＴＲＸ−８１８が、ＶＭネットワーク形成を減少させたかどうかを決定するために、Ｎｏｄａｌ、Ｎｏｔｃｈ４、ＶＥ−カドヘリン（ＣＤＨＥ５）又はエフリンレセプターＡ２（Ｅｐｈ Ａ２）発現に対するその効果を、ｑＲＴ−ＰＣＲを使用して決定した。２ｘ１０^６の侵攻性ヒト黒色腫（Ｃ８１６１）細胞を、１０ｎＭのＴＲＸ−８１８で、８、２４、４８、又は７２時間処置した。滅菌脱イオン水（組織培養グレード）をビヒクルとして使用した。

Ｎｏｔｃｈ４細胞内ドメイン（Ｎｏｔｃｈ４ ＩＣＤ）及びＮｏｄａｌのｍＲＮＡレベルは、対照群と比較して、処置８時間後に、それぞれ７５％及び８０％減少した。Ｎｏｔｃｈ４ ＩＣＤ及びＮｏｄａｌのｍＲＮＡレベルは、７２時間の処置後に、対照細胞のそれぞれ５０％及び７０％にとどまった（図６Ａ−Ｄ）。ＣＤＨ５のｍＲＮＡレベルは、対照群と比較して、８時間の処置（１０ｎＭ）後に、７０％減少した。ＣＤＨ５のｍＲＮＡレベルは、１０ｎＭのＴＲＸ−８１８への連続暴露の７２時間後に、対照細胞の５０％にとどまった（図６Ａ−Ｄ）。これらの結果は、Ｎｏｔｃｈ、Ｎｏｄａｌ、及びＣＤＨＥ５のｍＲＮＡ発現を阻害するが、ＥｐｈＡ２のｍＲＮＡ発現を阻害しないことによって、ＴＲＸ−８１８がＶＭネットワーク形成を減少させたことを示唆している。

例３
Ｎｏｄａｌ及びＳｍａｄタンパク質レベルに対するＴＲＸ−８１８の効果

ＴＲＸ−８１８が、ＶＭネットワーク形成に必要とされるシグナル伝達経路をどのように変化させるかをさらに理解するために、イムノブロッティング分析を使用して、Ｐｒｏ−Ｎｏｄａｌ、Ｓｍａｄ２、及びリン酸化Ｓｍａｄ２（Ｐ−Ｓｍａｄ２）のタンパク質レベルを決定した。研究の日に、例１において説明したように、ＴＲＸ−８１８を調製した。Ｃ８１６１細胞を、処置しなかった（対照）又は１０ｎＭ ＴＲＸ−８１８で１、４、８、及び２４時間処置した。イムノブロッティング分析によって、Ｎｏｄａｌ及び総Ｓｍａｄ２、及びＰ−Ｓｍａｄ２のタンパク質発現を分析した。５ｘ１０^６侵攻性ヒト黒色腫（Ｃ８１６１）細胞を、１０ｎＭ ＴＲＸ−８１８の存在下でプラスチックディッシュ上に播種し、総タンパク質を分析のために回収した。Ｎｏｄａｌ及びＰ−Ｓｍａｄ２のタンパク質レベルを定量化するために、４０μｇ及び２５μｇの総タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びイムノブロッティングにそれぞれ使用した。β−アクチンのタンパク質レベルを正規化のために使用して、等しいタンパク質ローディングを保証した。

１０ｎＭ ＴＲＸ−８１８でのＣ８１６１細胞の１時間の処置は、Ｎｏｄａｌタンパク質発現の４％の減少をもたらした（Ｐｒｏ−Ｎｏｄａｌとして検出、対照細胞と比較）。４〜８時間の処置は、タンパク質レベルの２８％の減少をもたらした一方で、２４時間の処置は、Ｐｒｏ−Ｎｏｄａｌのタンパク質レベルの６３％の減少をもたらした（図７）。２４時間の処置はまた、Ｓｍａｄ−２のリン酸化レベルも減少させた（図８）。これらの結果は、表２（これはＳｍａｄのタンパク質レベル及びそのリン酸化に対するＴＲＸ−８１８の効果の概要を示す）に要約されるように、Ｃ８１６１細胞におけるＮｏｄａｌ及びリン酸化Ｓｍａｄ２のタンパク質レベルを減少させることによって、ＴＲＸ−８１８がＶＭネットワーク形成を減少させたことを示唆している。

まとめると、ＴＲＸ−８１８は、必須タンパク質の転写、翻訳発現、及び後翻訳修飾を減少させることによって、侵攻性黒色腫細胞におけるＶＭネットワーク形成を阻害した。第１に、ＴＲＸ−８１８は、Ｎｏｄａｌ、Ｎｏｔｃｈ４ ＩＣＤ、及びＶＥ−カドヘリン（ＣＤＨ５）のｍＲＮＡレベルを顕著に減少させた。第２に、ＴＲＸ−８１８は、Ｐｒｏ−Ｎｏｄａｌ（これは、Ｎｏｄａｌの前駆体である）のタンパク質発現、及びＳｍａｄ２のリン酸化を減少させた。これらの結果は、ＴＲＸ−８１８が、ＶＭネットワーク形成のための上流から下流へのシグナル伝達経路を有効に妨げ得ることを示唆している。

例４
ＨＣＴ−１１６同所性ヒト結腸がん異種移植モデルにおけるＴＲＸ−８１８の効果

高度に転移性の結腸腫瘍であるＨＣＴ−１１６の腫瘍成長及びＶＭ形成に対するＴＲＸ−８１８の阻害効果を、ＨＣＴ−１１６同所性異種移植モデルにおいて調べた。ＨＣＴ１１６結腸がん細胞系統を植え付けた同所性異種移植ヒト結腸がんモデルにおける免疫組織化学染色（ＩＨＣ）によって、血管又は血管様（血管擬態、ＶＭ）ネットワークの形成に対するＴＲＸ−８１８の効果を評価した。

この研究において、６群を設定した（１０匹のマウス／群）。以下の６つのグループがあった：グループ１、経口投与でＴＲＸ−８１８が２０ｍｇ／ｋｇで与えられる；グループ２、経口投与でＴＲＸ−８１８が５０ｍｇ／ｋｇで与えられる；グループ３、経口投与でＴＲＸ−８１８が１００ｍｇ／ｋｇで与えられる；グループ４、静脈内注射でＴＲＸ−８１８が２０ｍｇ／ｋｇで与えられる；グループ５、腹腔内注射でイリノテカンが５０ｍｇ／ｋｇで与えられる；グループ６、ビヒクル群。Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３及びＧ６についての投薬スケジュールはＱＤ×２８であり、Ｇ４についての投薬スケジュールはＱＯＤ×７であった。安全性評価のために体重をモニターした。生きている状態での研究の最後に、腫瘍のサイズ及び腫瘍の重量を測定した。抗腫瘍効果評価のための研究の終了時に、腫瘍成長阻害のパーセンテージ（ＴＧＩ％）を計算した。１日目の研究マウスの平均体重は〜２０グラムであり、研究の最後（４２日目）には〜１７−１９グラムに減少した。

２８日間の投薬の最後に、本研究において、腫瘍及び肺の切除の前に、ＣＯ_２麻酔（１分間）の後、頚椎脱臼を使用して、マウスを安楽死させた。第１に、腹側正中線切開を行い、原発腫瘍を有する結腸を切除し回収した。腫瘍の回収は、安楽死後３分以内に完了した。組織をＰＢＳですすぎ、固定前に血液を除去した。

ＣＤ３１^＋／赤血球（ＲＢＣ）^＋又はＣＤ３１⁻／ＲＢＣ^＋のチャネルの数を、各グループの各サンプルの切片全体で計数し、ＣＤ３１ポジティブ又はネガティブ染色された血管の数を、顕微鏡下で、５つの明視野（２００ｘ）に基いて計数した。血管ネットワークがＣＤ３１^＋／ＲＢＣ^＋染色によって表された一方で、ＶＭネットワークがＣＤ３１⁻／ＲＢＣ^＋染色によって表された。なぜなら、ＶＭ形成は血管内皮細胞から独立しているためである。スコア付けは、盲検の、客観的な観察者によって実施された。

ＨＣＴ−１１６同所性ヒト結腸がん異種移植モデル（Ｏｒｔｈｏ）において、５０ｍｇ／ｋｇのＴＲＸ−８１８は、ビヒクル群と比較して、腫瘍体積を４９％、顕著に減少させた（図９）。経口投与されたＴＲＸ−８１８のＭＥＤは５０ｍｇ／ｋｇであった。

グループ３（ＴＲＸ−８１８ １００ｍｇ／ｋｇ ＱＤ×２８、経口投与）及びグループ５（イリノテカン ５０ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｄ×３、腹腔内投与）の両方における、ＣＤ３１⁻／ＲＢＣ^＋のチャネルの平均数は、ビヒクル群のものと比較して顕著に減少した（図１０）。ＣＤ３１⁻は、血管擬態（ＶＭ）形成を表している。これらの結果は、単一の薬剤としての化合物ＴＲＸ−８１８が、血管擬態構造を形成するＨＣＴ１１６腫瘍細胞の阻害に対する有益な効果をはっきり示したことを示唆した。表３は、同所性ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん異種移植モデルにおけるＶＭチャネル（ＣＤ３１⁻／ＲＢＣ^＋）の数を示す。

例５
ＴＲＸ−８１８Ｍ１は、侵攻性黒色腫細胞における血管擬態ネットワーク形成を阻害する

ＴＲＸ−８１８Ｍ１（２−（３−フルオロフェニル）−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−５−イル）の溶液を、例１と同様の方法（ただしＴＲＸ−８１８Ｍ１を使用して、ナトリウム塩形態のＴＲＸ−８１８を置き換えた）で調製した。

侵攻性ヒト黒色腫（Ｃ８１６１、７．５ｘ１０^４）細胞を、例１に開示されるように播種した。Ｃ８１６１細胞を、０．３、１又は５ｎＭのＴＲＸ−８１８Ｍ１で、４時間又は２４時間処置した。黒色腫細胞の別のセットをプラスチックディッシュ上に播種し、同じ時間量処置した後に、Ｃ８１６１細胞の細胞生存能力を決定した。

全ての試験されたＴＲＸ−８１８Ｍ１の濃度で、Ｃ８１６１がん細胞においてＶＭネットワーク形成が阻害された（図４）。ＴＲＸ−８１８Ｍ１は、ピコモル濃度（〜０．３ｎＭ）で有効な、強力な血管破壊剤であるようである。ｎＭの範囲のより高い濃度は、細胞死を誘導した。

例６
ＣＨＭ−２１３３は、侵攻性黒色腫細胞における血管擬態ネットワーク形成を阻害する

ＣＨＭ−２１３３（２−（２−フルオロフェニル）−６，７−メチレンジオキシキノリン−４−オン）の溶液を、例１及び５と同様の方法で調製した。全ての試験されたＣＨＭ−２１３３の濃度で、Ｃ８１６１がん細胞においてＶＭネットワーク形成が阻害された（図５）。ＣＨＭ−２１３３は、ピコモル濃度（〜０．３ｎＭ）で有効な、強力な血管破壊剤であるようである。

例７
侵攻性黒色腫細胞における血管擬態ネットワーク形成の阻害

表４に示される化合物１６−２４、３７−４５、４８−５３、１２４−１４３、１４３ａ、１４３ｂ、１４４、１４４ａ、１４４ｂ、１４６−１４７、１５２−１５３、１５７−１５８、１６６−１６９を、米国特許第８５２４７４０号に開示される方法にしたがい合成した。侵攻性黒色腫細胞における血管擬態ネットワーク形成の阻害に対するそれらの効果を、例１において説明した方法を使用して試験する。

例８
ＶＭタンパク質のｍＲＮＡレベルに対する効果

表４に示される化合物を、ＶＭタンパク質のｍＲＮＡレベルに対するそれらの効果について、例２において説明した方法を使用して調べる。

例９
Ｎｏｄａｌ及びＳｍａｄタンパク質レベルに対する効果

表４に示される化合物を、Ｎｏｄａｌ及びＳｍａｄタンパク質レベルに対するそれらの効果について、例３において説明した方法を使用して調べる。

例１０
ＨＣＴ−１１６同所性ヒト結腸がん異種移植モデルにおけるキノリン誘導体の効果

表４に示される化合物を、それらの効果について、例４において説明したＨＣＴ−１１６同所性ヒト結腸がん異種移植モデルを使用して調べる。

例１１
ＴＲＸ−８１８に構造的に類似した化合物の、血管擬態の阻害に対する効果

ＴＲＸ−８１８ＭＩ（すなわち、化合物番号３８）に構造的に類似した化合物を、血管擬態の阻害に対するそれらの効果について試験した。侵攻性ヒト黒色腫（ＡＴＣＣ（登録商標）のＳＫ−ＭＥＬ−２８；７．５ｘ１０^４／ｍＬ培地）細胞を、３次元重合ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）でコーティングされた２４ウェルプレート上に播種した。細胞播種の１８時間後、ＶＭネットワークが形成された。次いで培地を、陰性対照（処置していない対照及びＤＭＳＯで処置された対照）、陽性対照（１００ｎＭのＴＲＸ−８１８Ｍ１）又は１００ｎＭの各試験化合物で置き換えた。ＶＭネットワーク形成を、処置の０時間後、５時間後、及び２４時間後に観察した。

ＴＲＸ−８１８に構造的に類似した化合物が、ＶＭネットワーク形成に対する阻害効果を示したことが見出された。１００ｎＭの化合物ＴＲＸ−８１８Ｍ１（陽性対照、化合物３８）、４３、５２、１４７、Ａ６、Ｂ１、Ｂ３、Ｃ４及びＣ６で処置されたＳＫ−ＭＥＬ２８細胞（ヒト黒色腫細胞系統）は、陰性対照（処置していない対照及びＤＭＳＯで処置された対照）と比較して、処置の５時間後にＶＭネットワークの軽度の喪失を示し、処置の２４時間後にＶＭネットワークの著しい喪失を示す（図１１）。１００ｎＭの濃度の試験化合物は、ＶＭネットワーク形成に対して阻害的であるが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞に対しては軽度に細胞傷害性であることに注意されたい。

本発明は、示される特定の形態に限定されず、本発明の精神及び範囲から逸脱しない全ての改変が、添付の特許請求の範囲に規定される範囲内にある。企図される特定の用途に適するように様々な改変をして、本発明及び様々な実施形態を当業者が利用することができるように、本発明の原理及びその実際の適用を説明する目的で、実施形態及び実施例は選択及び記載された。本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、別の実施形態が、本発明に関する分野の当業者には明らかになるであろう。特許、特許出願及び様々な刊行物を含み得る、いくつかの参考文献が、本発明の記載において引用され、論じられている。そのような参考文献の引用及び／又は議論は、単に本発明の記載を明確にするために提供されるものであり、そのような参照が本明細書に記載された発明の「先行技術」であることを認めるものではない。本明細書で引用され論じられたすべての参考文献は、各参考文献が参照により個別に組み込まれた場合と同じ程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (18)

1. 式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩の使用であって、それを必要とする被験体において転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するための医薬品の製造における、使用。
   式中、
   Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、又はＸであり、又はＲ_５'は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２又は−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ベンジル）_２であり、式中、ｎは０−４の整数であり、ＹはＯであり、ＸはＦ、Ｃｌ、又はＢｒであり；
   Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｘ、（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＮであり、又はＲ_４及びＲ_５はともに−Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹ−であり、又はＲ_３及びＲ_４はともに−Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹ−であり、又はＲ_５は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２又は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_２Ｐｈ）_２であり、式中、ｎ、Ｙ、Ｘは上記に定義されたとおりであり、Ｒ_８及びＲ_９は独立して（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３である
2. Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'のうち１つは、Ｆ、又はＯＣＨ_３である、請求項１に記載の使用。
3. Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、及びＲ_５のうち１つは、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３又は（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、その他のものはＨであり；又はＲ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−である、請求項１に記載の使用。
4. Ｒ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−であり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_５'は全てＨであり、Ｒ_６'はＦである、請求項３に記載の使用。
5. Ｒ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−であり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_６'は全てＨであり、Ｒ_５'はＦである、請求項３に記載の使用。
6. 前記化合物が、以下の化合物からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の使用。
   
7. 前記化合物が、以下の化合物からなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
   
8. 追加の抗がん剤の使用であって、それを必要とする前記被験体において前記転移性腫瘍に関連する前記血管擬態を阻害するための医薬品の製造における、使用をさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
9. 前記転移性腫瘍が、黒色腫、卵巣がん、前立腺がん、腎細胞がん腫、ユーイング肉腫、乳がん、神経内分泌がん腫、甲状腺がん腫、喉頭扁平上皮がん腫、肝細胞がん腫、ぶどう膜黒色腫、皮膚黒色腫、口腔悪性黒色腫、絨毛がん腫、原発性胆嚢がん、悪性食道間質がん腫、中皮肉腫、胞巣状横紋筋肉腫、膀胱がん、骨肉腫、星状細胞腫、クロム親和性細胞腫、結腸直腸がん、髄芽細胞腫、腺癌、食道間質腫瘍、喉頭がん、滑膜肉腫、グリオブラストーマ、及び消化管がんからなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
10. 式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩を含み、それを必要とする被験体において転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
    式中、
    Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、又はＸであり、又はＲ_５'は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２又は−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ベンジル）_２であり、式中、ｎは０−４の整数であり、ＹはＯであり、ＸはＦ、Ｃｌ、又はＢｒであり；
    Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４及びＲ_５は独立して、Ｈ、（ＣＨ_２）_ｎＹＨ、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｘ、（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９、（ＣＨ_２）_ｎＮであり、又はＲ_４及びＲ_５はともに−Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹ−であり、又はＲ_３及びＲ_４はともに−Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＹ−であり、又はＲ_５は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２又は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ_２Ｐｈ）_２であり、式中、ｎ、Ｙ、Ｘは上記に定義されたとおりであり、Ｒ_８及びＲ_９は独立して（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３である
11. Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'、Ｒ_５'及びＲ_６'のうち１つは、Ｆ、又はＯＣＨ_３である、請求項１０に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
12. Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、及びＲ_５のうち１つは、Ｙ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３又は（ＣＨ_２）_ｎＮＲ_８Ｒ_９であり、その他のものはＨであり；又はＲ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−である、請求項１０に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
13. Ｒ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−であり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_５'は全てＨであり、Ｒ_６'はＦである、請求項１２に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
14. Ｒ_２及びＲ_５はＨであり、Ｒ_３及びＲ_４はともに−Ｏ（ＣＨ_２）Ｏ−であり；Ｒ_２'、Ｒ_３'、Ｒ_４'及びＲ_６'は全てＨであり、Ｒ_５'はＦである、請求項１２に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
15. 前記化合物が、以下の化合物からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１０に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
    
16. 前記化合物が、以下の化合物からなる群より選択される、請求項１０に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
    
17. 追加の抗がん剤であって、それを必要とする前記被験体において前記転移性腫瘍に関連する前記血管擬態を阻害するために使用される、追加の抗がん剤をさらに含む、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。
18. 前記転移性腫瘍が、黒色腫、卵巣がん、前立腺がん、腎細胞がん腫、ユーイング肉腫、乳がん、神経内分泌がん腫、甲状腺がん腫、喉頭扁平上皮がん腫、肝細胞がん腫、ぶどう膜黒色腫、皮膚黒色腫、口腔悪性黒色腫、絨毛がん腫、原発性胆嚢がん、悪性食道間質がん腫、中皮肉腫、胞巣状横紋筋肉腫、膀胱がん、骨肉腫、星状細胞腫、クロム親和性細胞腫、結腸直腸がん、髄芽細胞腫、腺癌、食道間質腫瘍、喉頭がん、滑膜肉腫、グリオブラストーマ、及び消化管がんからなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の転移性腫瘍に関連する血管擬態を阻害するために使用されるための医薬品。