JP6594917B2 - 所定の粒子径を有する純粋な非多形結晶性胆汁酸の最適合成 - Google Patents

Description

本発明は、胆汁に関連する疾患や肝疾患の治療に特に適用可能な薬剤の製造に適した合成に関し、該薬剤はノルウルソデオキシコール酸（Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）、ビスノルウルソデオキシコール酸（Ｂｉｓ−Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）、薬学的に許容されるその塩、またはその誘導体を含む。

Ｎｏｒ−ＵＤＣＡおよびＢｉｓ−Ｎｏｒ−ＵＤＣＡはウルソデオキシコール酸の類似体であり、溶解度、臨界ミセル濃度、親水性などの生理化学的性質を変化させたものである（Ｒｏｄａら、Ｄｉｇ Ｄｉｓ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９８９年）。２４−ノル−５β−コラン−２３−オイック酸の合成方法はＳｃｈｔｅｉｎｇａｒｔとＨｏｆｍａｎｎによりすでに報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９８８年）。インビトロ実験により、胆汁うっ滞性肝疾患の動物モデルにおけるこれらの効果が明らかになっている（ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０５２１７８）。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの調製方法はＥＰ ０６２４５９５ Ｂ１に記載されている。しかしこの文献には、合成されたＮｏｒ−ＵＤＣＡの化学的・物理的特性、純度、結晶化の程度および粒子径は記載されていない。

胆汁酸、特にウルソデオキシコール酸を、原発性胆汁性肝硬変などの胆汁うっ滞性肝疾患の治療に適用することはよく知られており、１９８０年代にすでに報告されている（Ｐｏｕｐｏｎら、Ｌａｎｃｅｔ，１９８７年）。しかし現在利用できる医薬製剤を用いた治療は一部の患者において成功しているだけであり、ウルソデオキシコール酸治療に反応しない患者やウルソデオキシコール酸で治療できない胆汁うっ滞性肝疾患や代謝性疾患の患者の治療が必要とされている

溶媒のｐＨ値によっては胆汁酸の溶解度は低くなる。腸管中で胆汁酸が十分に溶解することは、医薬品治療を成功させるためには不可欠である。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡを塩とすることにより、溶解度を改善が期待できる。第２の目的は十分な経口バイオアベラビリティを有する製剤である。インビトロの溶解速度が高いことは十分な経口バイオアベラビリティを得るには不可欠である。微粉化、例えば極めて小さな所定の粒子径（＞６０％が直径１０μｍ未満）を有する医薬製剤を製造することは、溶解速度を上昇させるための確立された方法である。粒子を微粉化する公知の方法として高度の粉砕（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｍｉｌｌｉｎｇ）が挙げられるが、これは手間のかかる方法である。

本発明のまた別の目的は、物理的に純粋な、例えば結晶性の、熱力学的に安定な製剤を提供することであった。

本発明の目的は、好ましい純度、粒子径特性を有し、胆汁うっ滞性または代謝性肝疾患の治療に適用できる高品質かつ新しい形態のＮｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−Ｎｏｒ−ＵＤＣＡを合成することであった。この合成は、大規模に実現可能な工業的製造方法により、所望の結晶形を一貫して再現性高く得られるものでなくてはならない。

物質の結晶変態は、異なる特性を有する可能性のある別の結晶構造への変化を意味する。したがって、本発明の主な目的は、他の多形形態に変化することのない熱力学的に安定なＮｏｒ−ＵＤＣＡの多形体／単結晶形を確認し選択することであった。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡに対してこの特定の変態を行わせることにより、準安定型よりも化学的・物理的に相当有利な性質が得られ、さらなる化学的・薬学的発展のために選択される物質が得られることとなる。

さらに、晶癖は流動性、かさ密度、圧縮性などの重要な製造パラメータに影響するため、一定の粒子径および形態を有するＮｏｒ−ＵＤＣＡを製造することが望ましい。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡを微粉化することによりその溶解速度を高め、それによって経口バイオアベラビリティを高めることが望ましい。

精製および結晶化工程の条件は、信頼性および再現性のある多形純度、化学的純度、晶癖および収率をもって適切な固体形態のＮｏｒ−ＵＤＣＡを製造できるものとすべきである。これによって、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの結晶径の調節を目的とした粉砕による微粉化を回避でき、ひいては微粉化における一般的な現象、すなわち非晶質化を防ぐことができる。

Ｎｏｒ−ＵＤＣＡを合成する前記公知の方法は、薬学的要件を満たすには不適である。特にその精製経路は、多形純度、化学的純度、晶癖および収率に関して所望の生成物品質を得るには有効とは言えない。従来の精製方法では、化学的純度の極めて高い、例えば不純物の全量が０．０５％未満であるようなＮｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡの多形体を得ることはできない。また、既知の方法では、微粉化なしではＤ５０値が１０μｍ未満となるような粒子径は得られず、微粉化を行うと生成物の多形純度が損なわれる。

本発明は、所望の品質および医薬品としての適用性を有するＮｏｒ−ＵＤＣＡ製剤またはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡ製剤を製造することのできる、大規模に実現可能な工業的製造法を提供する。驚くべきことに、本発明者らは、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩の精製および任意の再結晶を行い、次いで遊離酸を析出させることによって、物理的に純粋かつ熱力学的に安定な新規結晶形のＮｏｒ−ＵＤＣＡ（「Ａ型」）が得られることを見いだした。

したがって、第１の態様において、本発明はＮｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩の純粋な多形体に関する。本多形体は熱力学的に安定である。

好ましくは、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩は無水形である。すなわち本多形体結晶は実質的に水を含まない。結晶中の水分量は、結晶の全重量を基準にして、通常１％未満、好ましくは０．５％未満、より好ましくは０．１％未満である。

本多形体は、２θが１１．９、１４．４、１５．３、１５．８および１６．６±０．２度のＸＲＰＤピークによって特徴付けられる。本多形体は、図４の「Ａ型」に示すようなＸＲＰＤパターンによって特徴付けられることが好ましい。

本発明の第２の態様は、前記多形体を含む医薬組成物である。本医薬組成物は、少なくとも６０％の粒子の大きさが１０μｍ未満であるような特定の粒径分布を示すことが好ましい。

本発明の第３の態様は、本発明の多形体または本発明の医薬組成物の、胆汁うっ滞性肝疾患の治療のための使用である。本胆汁うっ滞性肝疾患は、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）およびＡＩＨオーバーラップ症候群を含むオーバーラップ症候群からなる群から選択されることが好ましい。

前記多形体または医薬組成物は代謝性肝疾患の治療に用いてもよい。本代謝性肝疾患は非アルコール性脂肪性肝炎であってもアルコール性脂肪性肝炎であってもよい。

本発明の医薬組成物を、経口投与、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、経鼻投与、吸入投与、局所投与または直腸投与用に製剤化してもよい。これには通常１以上の薬学的に許容される賦形剤が含まれる。

本発明の第４の態様は、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩の純粋な多形体の調製方法であって、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩を結晶化させるステップと、任意でカリウム塩を溶媒中に溶解させ、溶液を酸性化することにより純粋なＮｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡを得るステップとを含む方法である。

カリウム塩を溶解させる溶媒は水とアセトンとの混合物が好ましく、前記析出は、溶液を酸性化してｐＨを１〜２の範囲にすることにより行われる。

前記方法により単一の固体形態のＮｏｒ−ＵＤＣＡ（またはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）が形成され、その結晶構造は溶媒が入り込む空隙のない単斜晶系Ｃ２最密充填であることが確認できた。前記方法では、多形性のＮｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡの形成は認められない。他の多形形態への変換もまた観測されなかった。本合成経路から得られたＮｏｒ−ＵＤＣＡの結晶構造は熱力学的に安定な型であることが判明した。

さらに、カリウム塩からＮｏｒ−ＵＤＣＡを析出させる条件は、所望の粒子径の結晶が製造方法における１ステップで直接得ることができる条件となっている。したがって、別の粉砕ステップを設けて結晶の粒子径を調節する必要はない。粉砕や製粉（微粉化）などの高エネルギー操作が概してＮｏｒ−ＵＤＣＡを非晶質化し、そのために多形純度や化学的純度が低下することを考慮すれば、これは大きな利点である。

さらに、この方法による、薬学的に純粋な品質を有するＮｏｒ−ＵＤＣＡの収率は、少なくとも原料の４５％であり、したがって公知の方法に比べて極めて高い。

要約すると、驚くべきことに、前記Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの製造方法によれば、単一多形の純粋な結晶性物質が得られ、例えば胆汁うっ滞性肝疾患の治療に現在使用されている製剤であるＵＤＣＡの製造においては常法となっている微粉化を必要としないことが見いだされた。前記方法はＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡの調製にも適用できる。

本発明は請求項において規定される。本発明はさらに以下の（１）〜（１７）の態様に関する。

（１）Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩の純粋な多形体。

（２）熱力学的に安定である、（１）に記載の多形体。

（３）前記Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩が無水形である、（１）または（２）に記載の多形体。

（４）２θが１１．９、１４．４、１５．３、１５．８および１６．６±０．２度のＸＲＰＤピークによって特徴付けられる、（１）〜（３）のいずれか一項に記載の多形体。

（５）図５に示すＸＲＰＤパターンによって特徴付けられる、（４）に記載の多形体。

（６）（１）〜（５）のいずれか一項に記載の多形体を含む医薬組成物。

（７）医薬組成物中の粒径分布において、少なくとも６０％の粒子の大きさが１０μｍ未満である、（６）に記載の医薬組成物。

（８）胆汁うっ滞性肝疾患の治療のための、（１）〜（５）のいずれか一項に記載の多形体または（６）もしくは（７）に記載の医薬組成物。

（９）胆汁うっ滞性肝疾患が、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）およびＡＩＨオーバーラップ症候群を含むオーバーラップ症候群からなる群から選択される、（８）に記載の多形体または医薬組成物。

（１０）代謝性肝疾患および／または動脈硬化の治療のための、（１）〜（５）のいずれか一項に記載の多形体または（６）もしくは（７）に記載の医薬組成物。

（１１）代謝性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝炎である、（１０）に記載の多形体または医薬組成物。

（１２）代謝性肝疾患がアルコール性脂肪性肝炎である、（１０）に記載の多形体または医薬組成物。

（１３）経口投与、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、経鼻投与、局所投与または直腸投与用に製剤化される、（６）〜（１２）のいずれか一項に記載の医薬組成物。

（１４）薬学的に許容される１以上の賦形剤を含む、（６）〜（１３）のいずれか一項に記載の医薬組成物。

（１５）Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩の純粋な多形体の調製方法であって、
Ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩またはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩を結晶化させるステップと、
任意で前記カリウム塩を溶媒中に溶解させ、溶液を酸性化することにより純粋なＮｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡを得るステップとを含む方法。

（１６）前記溶媒が水とアセトンの混合物であり、前記析出が、溶液を酸性化してｐＨを１〜２の範囲にすることにより行われる、（１５）に記載の方法。

（１７）（１５）または（１６）に記載の方法であってさらに
式（Ａ）の化合物：
を
式（Ｂ）の化合物：
に変換するステップと、
（ｂ）式（Ｂ）の化合物を式（Ｃ）の化合物：
に変換するステップと、
（ｃ）式（Ｃ）の化合物を粗製状態の式（Ｄ）の化合物：
に変換するステップと、
（ｄ）粗製状態の式（Ｄ）の化合物をＫＯＨで処理し、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩を結晶化させるステップとを含み、
式中ｎが０または１であることを特徴とする方法。

出発物質および種々の結晶化実験により得られたＡ型それぞれのＸＲＰＤパターンを示す。 Ａ型Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの結晶充填および水素結合を示す図である。 Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ結晶の対称的な独立した２分子の分子構造および原子ナンバリングを示す図である。 Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの新しく得られた型のＸＲＰＤパターンとＡ型のＸＲＰＤパターンとの比較を示す図である。 Ａ型のＸＲＰＤパターンを示す図である。

多形体
本発明は、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩の純粋な多形体を提供する。本多形体は熱力学的に安定である。

結晶多形とは、物質が２種以上の結晶格子配列に結晶化する現象であると定義される。結晶多形は、薬物の固体状態における特性に様々な面で影響を与えうる。物質の結晶形が異なると、溶解度や溶解速度そして最終的にはバイオアベラビリティなどの多くの点において大きく異なる可能性がある。薬剤および分子結晶における結晶多形については、例えば、Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．，Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．，Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．，「Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ」，ＳＳＣＩ Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，Ｉｎｄ．，１９９９年）、Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．，（「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｌｉｄｓ」，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｂａｓｅｌ，１９９９年）またはＢｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、Ｊ．，「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｒｙｓｔａｌｓ」，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２００２年）などで網羅的に取り扱われている。

用語「結晶質」は、医薬品有効成分（ＡＰＩ）の非晶形以外の任意の形態を言う。用語「非晶形」は、結晶構造のような長距離秩序を有さないＡＰＩの形態を言う。非晶形にある物質の原子や分子は不均一に配列している。例えば、化合物が非晶形であるか結晶形であるかは、粉末Ｘ線回折により識別できる。

本明細書において、用語「結晶多形体」または「多形体」は、医薬品有効成分の特定の結晶形態を言い、粉末Ｘ線回折やＩＲ分光法などの分析方法によって特徴付けることができる。

好ましくは、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたは薬学的に許容されるその塩は無水形である。すなわち、本多形結晶は実質的に水を含まない。結晶中の水分量は、結晶の全重量を基準にして、通常１％未満、好ましくは０．５％未満、より好ましくは０．１％未満である。

薬学的用途に適し、かつ不純物の含量が２％未満であれば、多形体は本発明において「純粋」であると言える。本発明の多形体中における不純物量は、製剤の全重量を基準にして、通常２％未満、好ましくは１％未満、より好ましくは０．５％未満、さらに好ましくは０．１％未満である。本発明の多形体中における各不純物の量はいずれも、製剤の全重量を基準にして、好ましくは０．１％未満、より好ましくは０．０５％未満、最も好ましくは０．０３％未満である。第１の実施形態において、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの多形体中における不純物の全量は、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの全重量を基準にして、２％未満、好ましくは１％未満、より好ましくは０．５％未満、さらに好ましくは０．１％未満である。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの多形体中における各不純物の量はいずれも、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの全重量を基準にして、好ましくは０．１％未満、より好ましくは０．０５％未満、最も好ましくは０．０３％未満である。第２の実施形態において、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡの多形体中における不純物の全量は、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡの全重量を基準にして、２％未満、好ましくは１％未満、より好ましくは０．５％未満、さらに好ましくは０．１％未満である。Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡの多形体中における各不純物の量はいずれも、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡの全重量を基準にして、好ましくは０．１％未満、より好ましくは０．０５％未満、最も好ましくは０．０３％未満である。

不純物は、実施例２の記載のように測定できる。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの不純物プロファイルは既知の不純物および未知の不純物によって特定される。既知の不純物はウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）および３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−アミド（アミド）である。ＵＤＣＡを不純物Ａとも呼ぶが、これはＮｏｒ−ＵＤＣＡの合成における出発物質である。一方アミドは、不純物Ｂとも呼ぶが、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの合成のステップ３で生成する中間体である。未知の不純物は合成経路で生じるだけでなく、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの分解によっても生じる可能性がある。

本発明の多形体は単一多形体であることが好ましく、これは実質的に単一多形体から構成される、かつ／または多形的に純粋であることを意味する。本発明の多形体中の非晶性Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ（または非晶性Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）の量は、通常はごくわずかである。本発明の多形体中の非晶性Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ（または非晶性Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）は、例えばＸＲＰＤなどによって検出されないことが好ましい。本発明の多形体は、非晶性Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ（または非晶性Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）を実質的に含まないことがより好ましい。本発明の多形体は、非晶性Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ（または非晶性Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）を全く含まないことが最も好ましい。本発明の多形体中のＡ型多形体の量は、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ（またはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）の全重量を基準にして、好ましくは少なくとも９９％、より好ましくは少なくとも９９．５％、さらに好ましくは少なくとも９９．９％、最も好ましくは実質的に１００％である。

本発明の多形体は熱力学的に安定である。本発明の多形体は、どのような種類の結晶化方法を用いても高い割合で見いだされ、種々の純粋溶媒、混合溶媒から形成された。粉砕（固形物への蒸気拡散のため）または凍結乾燥した溶液の気化（冷却／気化実験）によりＡ型の記憶効果を消去した非晶形のＮｏｒ−ＵＤＣＡを出発物質とした結晶化実験においても、単離された固形物をＸＲＰＤ分析すると、優位にＡ型が得られることが明らかとなった。驚くべきことに、本発明によれば、Ａ型の単結晶を成長させることができる。

本発明の多形体の粒径分布としては、少なくとも６０％の結晶の粒子径が１０μｍ未満であることが好ましい。

本発明の多形体のＤ５０は１０μｍ未満であることが好ましい。例えばＤ５０は０．５〜１０μｍ、より好ましくは１〜９μｍ、さらに好ましくは２〜８μｍ、最も好ましくは３〜７μｍであってよい。本発明の多形体のＤ９０は３０μｍ未満であることが好ましい。例えばＤ９０は２〜３０μｍ、より好ましくは５〜２５μｍ、さらに好ましくは８〜２０μｍ、最も好ましくは１０〜１８μｍであってよい。本発明の多形体のＤ９５は３０μｍ未満であることが好ましい。例えばＤ９５は３〜３０μｍ、より好ましくは６〜２８μｍ、さらに好ましくは９〜２５μｍ、最も好ましくは１０〜２０μｍであってよい。

Ｄ５０、Ｄ９０およびＤ９５は、体積基準で、それぞれ粒径分布の中央値すなわち５０パーセンタイル、９０パーセンタイルおよび９５パーセンタイルの値を示す。すなわちＤ５０（Ｄ９０；Ｄ９５）は、粒径分布において５０％（９０％；９５％）の粒子がこの値以下となるような値である。

粒径分布は、実施例３に記載の方法および／またはヨーロッパ薬局方（Ｐｈ．Ｅｕｒ．）、６．６版、２．９．３１節に従って、好ましくはＭａｌｖｅｒｎ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製マスターサイザー２０００を用いて測定することができる。評価は一般にフラウンホーファーモデルによって行われる。

多形体の調製方法
本発明の多形体を調製する方法は好ましくは、
（ａ）式（Ａ）の化合物：
を
式（Ｂ）の化合物：
に変換するステップと、
（ｂ）式（Ｂ）の化合物を式（Ｃ）の化合物：
に変換するステップと、
（ｃ）式（Ｃ）の化合物を粗製状態の式（Ｄ）の化合物：
に変換するステップと、
（ｄ）粗製状態の式（Ｄ）の化合物をＫＯＨで処理し、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩を結晶化させるステップとを含み、
式中、ｎは０または１である。

ステップ（ｄ）で得られたカリウム塩を溶媒に溶解し、純粋な化合物（Ｄ）の結晶を得るためにその溶液を酸性化することによって、このカリウム塩を化合物（Ｄ）の純粋な形態に変換することができる。

ｎ＝１の場合、式（Ａ）の出発化合物はＵＤＣＡであり、式（Ｄ）の生成物はＮｏｒ−ＵＤＣＡである。

ｎ＝０の場合、式（Ａ）の出発化合物はＮｏｒ−ＵＤＣＡであり、式（Ｄ）の生成物はＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡである。

溶媒は２−プロパノールと水との混合物であることが好ましく、まず２−プロパノールを加え、次いでカリウム塩が完全に溶解するまで水を加えることができる。

以下に、本発明の方法の好ましい実施形態について、その利点を明らかにしつつ説明する。下記のステップおよびそのサブステップはそれぞれ、本発明の別の実施形態と組み合わせることができる。具体的には、下記の実施形態の任意の特徴を、上記の実施形態と組み合わせることができる。

ステップ１：３α，７β−ジホルミルオキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（Ｉ）の調製

ａ）調製方法（保護）
ＵＤＣＡをギ酸およびトルエンに加える（６５〜７５℃で＞３時間；温度を１８〜２２℃に下げる）。トルエン相を分離しギ酸／水相を廃棄する。トルエン相を濃縮し（≦６５℃）、５５〜６５℃でｎ−ヘプタンを素早く加え、生成物を結晶化させる。反応混合物を１０〜１５℃まで冷却し撹拌する。懸濁液をろ過し、ｎ−ヘプタンで洗浄後、５０℃を超えない温度で乾燥する（ＬＯＤ：≦１．０％）。生成物Ｉが白色固形として得られる。

ｂ）公知の合成との相違
過塩素酸を使用しないことで工程を簡略化し、無水酢酸を添加しないことで気体の激しい発生を避けた。より純粋な生成物を得てより良好に結晶化するために、反応混合物をそのままトルエンで抽出し、生成物をトルエン／ｎ−ヘプタンから結晶化させた。また、市販のギ酸水溶液を用いることができ、無水の反応条件にする必要はなかった。トルエン／ヘプタンからの析出は、生成物をさらに精製する方法でもある。このステップにより、収率が約８５％に上がった。

ステップ２：３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−ニトリル（ＩＩ）の調製

ａ）調製方法（再配列）
トリフルオロ酢酸、生成物Ｉおよび無水トリフルオロ酢酸を混合する（１５〜２５℃で＞４０分）。亜硝酸ナトリウムを加えながら、反応混合物を撹拌、冷却する（１５〜２５℃で１．５〜３時間）。反応混合物を極めて穏やかに３５〜４０℃まで加熱し、その温度を＞４５分間一定に保つ。その後、温度を４４〜４８℃まで上昇させ、３０分間一定に保つ。＜２２℃に冷却後、トルエンおよび水を加える。相を分離し、水／酸相を廃棄する。トルエン相に水を加え、分離後水相を廃棄する。トルエンを＜５０℃で留去し、高粘性油を得る。油にＥｔＯＨ、ｎ−ヘプタンおよび２８％ＮａＯＨを加え、１．５時間かけて５５〜６５℃まで加熱すると、生成物ＩＩは結晶化し始める。水を加え、懸濁液を１６〜２２℃まで冷却する。懸濁液をろ過し、ケークをＥｔＯＨ／水、続いてｎ−ヘプタンで洗浄し、＜５０℃で乾燥する（ＬＯＤ：≦１．０％）。生成物ＩＩが白色〜淡黄色の固形物として得られる。

ｂ）公知の合成との相違
有害かつ高価な薬品の使用を最小限にするため、トリフルオロ酢酸の量を減じた。安全性と純度を最適化する目的で、亜硝酸ナトリウム添加中および加熱中の温度範囲および時間を変更した。また、ワークアップ操作を変更し、生産規模において実用的なものとするとともに純度の向上を期した。反応混合物をトルエンで抽出し、その後ＥｔＯＨ／水／ｎ−ヘプタン中、水酸化ナトリウムで完全に脱保護した。生成物はこのアルカリ性ＥｔＯＨ／水／ｎ−ヘプタンから結晶化された。これは、Ｓｃｈｔｅｉｎｇａｒｔ（１９８８年）による公知の方法とは対照的に、生成物の結晶化を行わない方法であるため、精製を必要としない。この変法により得られる収率は約８０％である。

ステップ３：３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイック酸（ＩＩＩ）の調製

ａ）調製方法（加水分解）
生成物ＩＩ、ｎ−プロパノールおよび水酸化ナトリウム（ペレット）をスチール製の反応容器中で混合する。加水分解が完了するまで反応混合物を撹拌、還流する（＞２０時間）。水を加え、４５℃よりも高い温度を保ちながらｎ−プロパノール／水を留去する。反応混合物を効率よく撹拌し温度を５５〜６５℃に保ちながら、トルエン−水を加える。３０％ＨＣｌでｐＨを１．０〜２．０に調整する。このｐＨ調整の過程において、生成物ＩＩＩ（２９０ｎｍでのＵＶ検出による収率が約９５％の、不純物を含む粗製ｎｏｒ−ＵＤＣＡ）が、この２相系から結晶化する。懸濁液を１８〜２２℃まで冷却する。懸濁液をろ過し、ろ過ケークを水とｎ−ヘプタンとで洗浄し、５０℃を超えない温度で乾燥する（ＬＯＤ：≦１．０％）。

ｂ）公知の合成との相違
溶媒をＥｔＯＨ／水（１：１）から純粋なｎ−プロパノールに変更し、水酸化カリウムを水酸化ナトリウムに変更することにより、反応時間が著しく短縮された。溶媒量も減少した。ワークアップ操作から洗浄および抽出を省き、生成物は水とトルエンの２相系から直接結晶化された。この方法は格段に簡易化されており、時間の短縮、有毒溶媒の減少、非毒性物質の使用により、結晶化の制御が容易になる。この２相系からの結晶化により、優れた品質の生成物が少なくとも９０％の収率で得られた。

ステップ４：３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイック酸カリウム塩（Ｎｏｒ−ＵＤＣＡカリウム塩、ＩＶ）の調製

ａ）調製方法（精製）
生成物ＩＩＩ、２−プロパノールおよび１当量の水酸化カリウムを混合し、７０〜８０℃に加熱する。溶液が得られるまで水をゆっくり加える。溶液は淡黄色〜黄色でわずかに濁っている。活性炭およびパーライトを加え、熱いうちに溶液をろ過する。減圧下、２−プロパノール／水を４０〜８０℃で留去する。２−プロパノールを加えながら、水分含量が≦２％になるまで蒸留を続ける。その後、懸濁液を５〜１５℃に冷却する（≧４時間）。温度を０〜５℃まで下げ、生成物ＩＶをろ取し、２−プロパノールで洗浄、減圧下≦５０℃で乾燥する。生成物ＩＶが白色固形物として得られる。得られたカリウム塩の純度が十分でない場合、以下のように再結晶することができる。生成物ＩＶと２−プロパノールとを混合し、７５〜８０℃に加熱する。溶液が得られるまで水を加える。２−プロパノール／水を減圧下４０〜８０℃で留去する。蒸留中に生成物ＩＶが結晶化し始める。再度、水分含量が≦２％になるまで蒸留を続ける。２−プロパノールを加え、懸濁液を５〜１５℃に冷却する（≧４時間）。温度を０〜５℃まで下げ、生成物Ｖをろ取し、２−プロパノールで洗浄、減圧下≦５０℃で乾燥する。純度試験に合格するまで再結晶を繰り返す（薬学的に純粋な生成物Ｖが≧９８％という極めて高い収率で得られ、極めて効率的な精製であることがわかる）。

ｂ）公知の合成との相違
合成における新規な精製ステップの記載であり、相当する公知技術は存在しない。

ステップ５：純粋なＮｏｒ−ＵＤＣＡ（ＶＩ）の調製

ａ）調製方法（最終の析出）
生成物Ｖ、水およびアセトンを２２〜２８℃で撹拌して溶液を得た後、ろ過する。３０％ＨＣｌを徐々に加え、反応混合物のｐＨを１．０〜２．０に調整すると、直ちに生成物ＶＩの結晶化が始まる。懸濁液を１８〜２４℃に冷却し、ろ取し、注射用水、注射用水／アセトンおよびｎ−ヘプタンで洗浄し、減圧下≦５０℃で乾燥する（ＬＯＤ：≦０．８％）。収率は少なくとも９０％となる。

ｂ）公知の合成との相違
公知の方法においては、イオン交換カラムクロマトグラフィーおよびメタノール／アセトンからの再結晶化によりＮｏｒ−ＵＤＣＡを精製している。最も有効な精製方法は、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡカリウム塩を形成かつ／または２−プロパノール／水から再結晶させた後、遊離酸を水／アセトンから析出させる方法であることが確認された。この精製方法は、公知の不純物Ａ（アミド）およびＢ（ＵＤＣＡ）ならびに未知の不純物を除去するのに極めて有効であることが明らかとなった。最終的に、篩過後、薬学的用途に必要とされる所定の粒径分布（６０％が＜１０μｍ）を有する高品質なＮｏｒ−ＵＤＣＡが合成される。

医薬組成物
本発明はまた、本発明の多形体を含む医薬組成物に関する。

本医薬組成物は、薬学的に許容される１以上の適切な賦形剤を含むことができる。

本発明の特別な実施形態によれば、本多形体を経口投与または静脈内投与用に製剤化することができ、これらの製剤は薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤および／またはビヒクルをさらに含む。

経口投与用の固形剤型には錠剤、好ましくは発泡錠またはチュアブル錠、カプセル剤、丸剤、散剤および顆粒剤が含まれうる。このような固形剤型において、本多形体を、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、デンプンおよびデンプン誘導体、セルロースおよびセルロース誘導体（例えば微結晶性セルロース）、リン酸二カルシウム、乳糖、無水コロイダルシリカ、タルク、滑潤剤（例えばステアリン酸マグネシウム、マクロゴール）、崩壊剤ならびに緩衝剤などの通常使用される物質と混合することができる。錠剤および丸剤を腸溶コーティングして、ＡＰＩが胃酸や酵素に影響を受けないように調製することもできる。

経口投与用の液体剤型には、水やエタノール／水の混合物などの当技術分野において一般的に使用される不活性な希釈剤を含む、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤およびシロップ剤が含まれうる。これらの剤型は、微結晶性セルロース、アルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、レオロジー特性を調節するメチルセルロースなど、甘味料／香料、および／またはソルビン酸などの適切な抗菌保存料を含んでもよい。鼻エアロゾルまたは吸入剤により投与する場合、本発明による組成物を生理食塩水溶液として、ベンジルアルコールなどの適切な保存料、バイオアベラビリティを向上させる吸収促進剤、フルオロカーボンおよび／もしくは他の可溶化剤または分散剤を用いて調製してもよい。

ＡＰＩの直腸投与用の坐剤は、本多形体と室温では固形であるが直腸温度で液体となる硬質油脂、カカオ脂およびポリエチレングリコールなどの適切な非刺激性賦形剤とを混合し、坐剤が直腸内で溶けて坐剤中に存在するＡＰＩおよび任意の他の活性化合物が放出されるよう調製することができる。

注射剤、例えば無菌注射用水性懸濁液または油性懸濁液を、公知の技術にしたがって適切な分散剤、湿潤剤および／または懸濁化剤を用いて製剤化することができる。無菌注射剤はまた、毒性のない非経口的に許容される希釈剤または溶媒を用いた無菌注射用溶液または懸濁液であることもできる。使用可能な許容されるビヒクルおよび溶媒として、水および等張塩化ナトリウム溶液が挙げられる。無菌不揮発性油も溶媒または懸濁媒体として一般に使用される。

本発明の多形体を含む剤型は、通常の賦形剤、好ましくは薬学的に許容される、本活性化合物と反応しない有機または無機の担体物質をさらに含むことができる。薬学的に許容される適切な担体には例えば、水、塩溶液、アルコール、油、好ましくは植物性油、ポリエチレングリコール、ゼラチン、乳糖、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、界面活性剤、香油、脂肪酸モノグリセリドおよび脂肪酸ジグリセリド、ペトロエスラル脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが含まれる。本医薬製剤は滅菌可能であり、所望により、本活性化合物と有害反応を起こさない潤滑剤、保存料、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、緩衝液、着色剤、着香物質および／または芳香物質などの助剤と混合してもよい。非経口投与に特に適したビヒクルは、溶液、好ましくは油性溶液または水性溶液、懸濁液、エマルジョンまたは植込錠である。

種々のデリバリーシステムが公知であり、本ＡＰＩの投与に用いることができる。デリバリーシステムの例としてはリポソームを用いたカプセル化、エマルジョン、微粒子、マイクロカプセルおよび微粒剤が挙げられる（例えばＥＰ１３１７９２５参照）。必要な用量を単一ユニットとしてまたは徐放性の剤型で投与することができる。必要な用量をまた、複数ユニットの剤型として、コーティングにより即効性、持続性、徐放性または遅延性の剤型に調製し、マトリックス製剤などとして投与してもよい。

リン脂質や界面活性剤などの適切な賦形剤や助剤の存在下、粉砕、製粉および噴霧乾燥などの従来技術を用いて製剤を微粉化することにより、本ＡＰＩのバイオアベラビリティを改善してもよい。しかし本発明の多形体はすでに適切な粒子径を有しているので、特別な実施形態では粉砕や製粉は不要である。

本ＡＰＩを薬学的に許容される塩の形で製剤化してもよい。本ＡＰＩの薬学的に許容される好ましい塩には金属塩、特にアルカリ金属塩、または他の薬学的に許容される塩が含まれる。薬学的に許容される塩基付加塩には、リチウム、アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛から形成される金属塩または第一級アミン、第二級アミン、第三級アミンおよび環状アミンから形成される有機塩が含まれる。

本医薬組成物は、有効量のＮｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡと薬学的に許容される担体および／または賦形剤とを含むことが好ましい。

本発明の好ましい実施形態によれば、本医薬組成物は１０〜８０００ｍｇ、好ましくは２５〜５０００ｍｇ、より好ましくは５０〜１５００ｍｇ、特に２５０〜５００ｍｇのＮｏｒ−ＵＤＣＡまたはＢｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡを含む。

平均的に、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡおよび／または薬学的に許容されるその塩を、患者に１日あたり２５ｍｇ〜５ｇ、好ましくは１００ｍｇ〜２．５ｇ、特に８０．０ｍｇ〜１．５ｇ投与することが好ましい。１ｇのＮｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡおよび／または薬学的に許容されるその塩およびそのエステルを患者に投与することが最も好ましい。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡおよび／または薬学的に許容されるその塩を１人に１〜３０００ｍｇ／日、好ましくは１０〜２０００ｍｇ／日、より好ましくは１００〜１５００ｍｇ／日、例えば１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、７５０、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００または１５００ｍｇ／日、特に５００、７５０、１０００または１５００ｍｇ／日投与してもよいことにも留意されたい。前記の量を、１日１回投与するのが好ましいが、２回以上（少なくとも２、３、４、５または１０回）に分けて投与してもよい。本発明による薬物または医薬組成物は、１週間を超えて、好ましくは４週間を超えて、より好ましくは６ヶ月を超えて、最も好ましくは１年を超えて、特には一生の間投与してもよい。

Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ、Ｂｉｓ−ｎｏｒ−ＵＤＣＡまたはその塩は、薬学的に許容される担体と組み合わせて前記のような剤型で投与するだけでなく、治療対象（例えばウルソデオキシコール酸による）の疾患と同じもしくは類似の疾患に対して有効であることが知られている、または他の疾患であって好ましくは肝疾患が原因となっている可能性のある疾患に対して有効であることが知られている１以上の別の活性成分（例えばウルソデオキシコール酸、スリンダクやイブプロフェンなどのＮＳＡＩＤ）と組み合わせて投与することもできることは言うまでもない。

多形体の薬剤としての使用
本発明による治療対象の肝疾患は胆汁うっ滞性肝疾患、好ましくは原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）または進行性家族性肝内胆汁うっ滞、特に進行性家族性肝内胆汁うっ滞１型、２型および３型、嚢胞性線維症、薬物誘発性の胆汁うっ滞、または慢性ウイルス性肝炎（Ｂ、Ｃ、Ｄ）、アルコール性および非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病およびα１−アンチトリプシン欠乏症などの非胆汁うっ滞性肝疾患でありうる。

本発明のＡＰＩを単独で、またはＮＳＡＩＤｓ（例えばイブプロフェン、スリンダク）などの他の抗炎症薬と組み合わせておよび／またはウルソデオキシコール酸もしくは５−アミノサリチル酸と組み合わせて用いてもよい。

本発明の別の好ましい実施形態によれば、本肝疾患は原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）および／または原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）である。

本発明の別の好ましい実施形態によれば、本治療対象の疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎、糖尿病および／または高脂血症などの代謝性疾患である。本発明のさらにまた別の好ましい実施形態によれば、本治療対象の疾患は動脈硬化である。

参考例
ＳｃｈｔｅｉｎｇａｒｔとＨｏｆｍａｎｎのＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ．２９（１０），１３８７−１３９５（１９８８年）にしたがって合成されたＮｏｒ−ＵＤＣＡの種々の特性について調べた。

化学的純度
合成されたＮｏｒ−ＵＤＣＡの化学的不純物プロファイルをＨＰＬＣ／ＲＩにより評価した。得られた結果は以下の通りである。

本化合物を医薬品目的に使用する場合、不純物の全量は０．０５％未満でなければならない。ＳｃｈｔｅｉｎｇａｒｔとＨｏｆｍａｎｎの方法より合成されたＮｏｒ−ＵＤＣＡは、この要件を満たさなかった。再結晶を繰り返して化合物の更なる精製を試みた。しかし不純物の全量を０．０５％未満に減少させることはできなかった。

粒径分布
得られた結晶の粒子径を顕微鏡法により分析した。粒子径の中央値は１３．３７μｍ、すなわち５０％の結晶の大きさが１３．３７μｍ以下であった。６０％の結晶の粒子径は１５．６４μｍ以下であった。９５％の粒子の粒子径は４６．６４μｍ以下であった。粒子径が１０μｍ以下である粒子は３０％未満であった。この粒径分布は、目的とする医薬製剤には適切でない。粉砕／微粉化はＮｏｒ−ＵＤＣＡの多形純度および／または熱力学的安定性を低下させるため望ましくない。

実施例１：合成したＮｏｒ−ＵＤＣＡの多形純度
多形体スクリーニング試験を２相で行った。相１では、Ａ型と指定した合成Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの特性をＸＲＰＤ、デジタルイメージング、熱分析（ＤＳＣおよびＴＧＭＳ）によって明らかにした。該物質の純度はＨＰＬＣ／ＲＩによって確認した。分析方法の概要を表１に示す。多形体スクリーニングに用いる結晶化溶媒を選択するため、２０種の溶媒の溶解度を定性的に調べた。さらに溶解度実験に用いた溶液の蒸留により回収した固形物をＸＲＰＤおよびデジタルイメージングにより分析し、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの可能性のある新しい型形成に関する情報を得た（表２参照）。この結晶化方法のための実験空間を明確にする上での裏付けとするため、粉砕試験を行った。「冷却／気化実験および固形物への蒸気拡散実験」のために、出発物質として用いられる非晶質物質を、１，４−ジオキサン／水（９５／５％）溶液からの凍結乾燥および粉砕（ボールミル粉砕）により計画的に調製した。相２では、種々の結晶化方法を用いて２１７の実験を行った。適用した結晶化方法は以下の通りである。

− 非晶質物質を出発物質とし、冷却／気化を組み合わせた結晶化実験
− あらかじめ貧溶媒を添加した結晶化
− ２つの温度におけるスラリー実験
− 溶液への蒸気拡散
− 非晶質固形物への蒸気拡散
− ２４種の溶媒と１種の乾燥を用いた粉砕による結晶化

結晶化した固形物すべてについて、実験の終了後直ちにＸＲＰＤおよびデジタル画像分析を行った。安定な型を確認した後、それらの性質と出発物質の型に対する相対的な安定性を評価するため、保存後に熱分析およびＸＲＰＤによる再分析を行った。

Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの多形体スクリーニングの結果によれば、いずれの結晶化方法を用いても、様々な純粋溶媒および混合溶媒からＡ型が高い割合で生成することが確認された（図１参照）。粉砕または凍結乾燥溶液からの気化によりＡ型の記憶効果を消去して調製した非晶形のＮｏｒ−ＵＤＣＡを出発物質とした結晶化実験においても、単離された固形物に対するＸＲＰＤ分析により主としてＡ型が得られることが明らかになった。溶液への蒸気拡散実験において単結晶の成長が観察されたことから、Ａ型の単結晶を成長させることは容易であると思われる。これは、貧溶媒の緩やかな拡散により過飽和が徐々に増し、Ａ型結晶の成長に寄与することを示している。全体的に観察された晶癖はバルク様であった。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの結晶構造を２９４Ｋで収集した単結晶Ｘ線回折データから決定したところ、Ｃ２空間群（Ｚ’＝２）で単斜晶系に結晶化していた（表３参照）。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの結晶構造はＧＯＦ１．００２で首尾よく解析できた（表３参照）。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの結晶充填と水素結合を図２に示す。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡは、分子内水素結合により形成され、周期的に繰り返されるモノマーをのみを示した。水素結合は異なる水酸基間に形成される。Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ分子はジグザグ形に最密充填されており、溶媒の入り込む空隙はない（図３参照）。

冷却／気化実験において、また別の３種の不安定型（Ｂ型、Ｃ１型およびＣ２型）が確認された。Ｃ１型は貧溶媒を加えた後の冷却／気化組み合わせ実験からも得られた。この３つの型のＸＲＰＤは類似しており、特にＣ１型とＣ２型とはさらに類似性が高く、同形の構造である可能性が示唆される。Ｃ１型は安定であり、溶媒和した性質が確認できた。Ｂ型およびＣ２型は不安定であり、その性質は確認できなかった。ＸＲＰＤパターンの類似性および結晶形を形成する結晶化溶媒の分子構造の類似性から、Ｂ型およびＣ２型も溶媒和した構造であると考えられる。

さらにまた別の３種の不安定な混合型（Ａプラス１型、Ａプラス２型およびＡプラス３型）が確認された。Ａプラス１混合型は、冷却／気化実験から得られる別の潜在型とＡ型との混合物である。Ａプラス２混合型は、低温におけるスラリー実験から得られる別の潜在型とＡ型との混合物である。Ａプラス３混合型は、Ｃ１型（冷却／気化実験から得られたもの）を周囲条件で保存する間に起こる脱溶媒または変換から得られる別の潜在型とＡ型との混合物である。混合物中の存在量が少なく、また不安定であるため、混合物中の３種の潜在型についてその性質を確認することはできなかった。

多形体スクリーニングの研究中に見いだされたＮｏｒ−ＵＤＣＡの型を表４および図４にまとめて示す。しかしながら、純粋なＮｏｒ−ＵＤＣＡの合成（Ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩の精製および再結晶の後、遊離酸を析出させる）のための確立された条件下では、物理的に純粋かつ熱力学的に安定な結晶性物質、すなわちＡ型だけが生じる。

図１に、出発物質および種々の結晶化実験により得られたＡ型それぞれのＸＲＰＤパターンを示す。注：図１中のＡ型出発物質は、記載した多形体スクリーニングの研究に用いた、所定の粒子径を有する純粋な多形結晶性ノルウルソデオキシコール酸を意味している。

図２は、Ａ型Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの結晶充填および水素結合を示す。注：Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ（Ａ型）の単結晶充填を枠内に示す。

図３は、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡ結晶の対称的な独立した２分子の分子構造および原子ナンバリングを示す。

図４は、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの新しく得られた型のＸＲＰＤパターンとＡ型のＸＲＰＤパターンとの比較を示す。注：図４中のＡ型出発物質は、記載した多形体スクリーニングの研究に用いた、所定の粒子径を有する純粋な多形結晶性ノルウルソデオキシコール酸を意味している。
図４に示すＸＲＰＤパターンの説明：

Ａ型以外に、３種の潜在的な、Ａ型と他の型との混合物が単離された。これらの新しい型の存在は、固形物のＸＲＰＤパターン中にＡ型のＸＲＰＤに特有なものとは異なる別のピークが存在することにより示唆される。ＸＲＰＤ分析により、混合物中の優位型がＡ型であることが判明したため、潜在的混合型をＡプラス１型、Ａプラス２型およびＡプラス３型とした。

Ａプラス１型とされた混合型は、アニソールおよびメタノールを用いた冷却／気化実験の完了時に発見された。そのＸＲＰＤパターンでは、約８．７７°、１４．７０°および２０．５１°（２θ）（Ａ型のピークに隣接）に３つのさらなるピークが認められた。周囲条件下のウェルおよび実験バイアル中で保存した固形物をＸＲＰＤで再分析したところ、この混合物は７日以内に完全にＡ型に変換されることが示された。

Ａプラス２型とされた混合型は、クロロホルムを用いた５℃でのスラリー実験の完了時に発見された。固形物のＸＲＰＤパターンには、Ａ型とは別の５つのピークが約６．４１°、１２．７５°、１２．８９°、１４．７２°および１７．０６°（２θ）に認められる。周囲条件下のウェル中で保存した固形物をＸＲＰＤで再分析したところ、１１日以内に完全にＡ型に変換されていたが、実験バイアル中では（同じ期間）安定であった。

Ａプラス３型とされた混合型は、周囲条件での７日間保存（２，２，２−トリフルオロエタノールとトルエンを用いた貧溶媒実験）によりＣ１型が変換した後に確認された。潜在的混合型であるＡプラス３型のＸＲＰＤパターンには、Ａ型とは別の３つのピークが６．７４°、７．１５°および１０．２５°（２θ）に認められる。

Ｂ型は、１，４−ジオキサンおよびテトラヒドロフランを用いた冷却／気化実験の完了時に確認された。Ｂ型のＸＲＰＤパターンは、Ｃ１型とＣ２型とに共通する主ピークがＢ型のＸＲＰＤにも同様に存在するという点においてＣ１型およびＣ２型のパターンと類似している。しかし優先的な配向効果があるため、（Ｃ１型およびＣ２型と）同一の結晶型に単純にＢ型を当てはめることはできない。Ｂ型をＸＲＰＤで再分析したところ、周囲条件下のウェルおよび実験バイアル中で保存した場合、１０日以内にＡ型に変換されることが示された。

Ｃ１型は、ｐ−キシレンおよびメタノールを用いた冷却／気化実験において見いだされた。周囲条件下の測定ウェル中で保存した固形物をＸＲＰＤ分析したところ、７日以内にＡ型に変換されることが示された。Ｃ１型は、２，２，２−トリフルオロエタノールおよびトルエンを用いた貧溶媒実験においても見いだされた。この場合もまた、ウェル中で保存した場合、７日以内にＡ型に変換された。

図５にＡ型のＸＲＰＤパターンを単独で示す。本多形体は２θが１１．９、１４．４、１５．３、１５．８、１６．６±０．２°のＸＲＰＤピークによって特徴付けられ、図５に示すような全体スペクトルを有する。

実施例２：合成されたＮｏｒ−ＵＤＣＡの化学的純度
合成されたＮｏｒ−ＵＤＣＡの化学的不純物プロファイルをＨＰＬＣ／ＲＩにより評価した。その方法を、機器の条件を含めて表５にまとめて示す。この合成により生じる可能性のある副生成物は不純物Ａ、不純物Ｂ、不純物Ｃ、不純物Ｄ、不純物Ｅおよび不純物Ｆである。不純物Ａは出発物質のウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）である。不純物Ｂは３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−アミドであり、不完全なニトリル加水分解により生成する中間体である。不純物Ｃは、出発物質ＵＤＣＡ中に存在する主な不純物であるノルケノデオキシコール酸（Ｎｏｒ−ＣＤＣＡ）である。不純物Ｄはコール酸（ＣＡ）であり、出発物質ＵＤＣＡ中の別の主な不純物である。不純物Ｅは、望ましい反応が進まなかったホルミル保護ＵＤＣＡである。ホルミル保護基はアルカリ処理により開裂して結局再び不純物Ａとなるので、不純物Ｅは単なる理論上の不純物に過ぎない。不純物Ｆは３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−ニトリルであり、合成における別の中間体である。確立された各精製方法の有効性を、３バッチのＮｏｒ−ＵＤＣＡをＨＰＬＣで純度分析した結果により示す（表６参照）。可能性のある公知の不純物および未知の不純物を、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩の再結晶およびその後の遊離酸の析出により効果的に除去すると、化学的に純粋なＮｏｒ−ＵＤＣＡが得られる。

実施例３：合成したＮｏｒ−ＵＤＣＡの粒子径
遊離酸の析出により、一定した所定の粒度分布を有するＮｏｒ−ＵＤＣＡ粒子が得られ、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの結晶径を調節するための粉砕による微粉化が不要となる。３バッチのＮｏｒ−ＵＤＣＡの粒子径測定結果から、確立された析出条件によって１０μｍ未満の所望の粒子径が直接得られることがわかる（表７参照）。

まとめ：
２−プロパノールと水との混合物からＮｏｒ−ＵＤＣＡカリウム塩の形成および再結晶化を行い、次いで水とアセトンとの混合物から遊離酸を析出させる方法を示した。カリウム塩を経由するこの精製方法は、公知の不純物および未知の不純物をいずれも除去する上で極めて効果的であることがわかる。すなわち、上記の方法によれば、所定の粒子径を有するＮｏｒ−ＵＤＣＡの化学的に純粋な単一多形体の結晶性製剤が極めて効率よく提供される。

Claims (21)

1. Ｎｏｒ−ＵＤＣＡの化学的に純粋な、単一多形体の結晶性製剤であって、化学的不純物の全量が、製剤の全重量を基準にして、０．５％未満であり、少なくとも６０％の結晶の大きさが１０μｍ未満であり、該結晶が２θが１１．９、１４．４、１５．３、１５．８および１６．６±０．２度のＸＲＰＤピークによって特徴付けられる、熱力学的に安定である製剤。
2. 化学的不純物の全量が０．１％未満である、請求項１に記載の製剤。
3. 化学的不純物の全量が０．０５％未満である、請求項２に記載の製剤。
4. 前記Ｎｏｒ−ＵＤＣＡが無水形である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
5. 図５に示すＸＲＰＤパターンによって特徴付けられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製剤。
6. 検出可能量の非晶性Ｎｏｒ−ＵＤＣＡを含まない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の製剤。
7. 体積加重平均粒径Ｄ５０が１０μｍ未満である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の製剤。
8. 体積加重平均粒径Ｄ９５が３０μｍ未満である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製剤。
9. 請求項１〜８のいずれか一項に記載の製剤を含む医薬組成物。
10. 医薬組成物中の請求項１に記載のＮｏｒ−ＵＤＣＡの結晶の粒径分布において、少なくとも６０％の請求項１に記載のＮｏｒ−ＵＤＣＡの結晶の粒子の大きさが１０μｍ未満である、請求項９に記載の医薬組成物。
11. 胆汁うっ滞性肝疾患の治療に用いる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の製剤または請求項９もしくは１０に記載の医薬組成物。
12. 前記胆汁うっ滞性肝疾患が、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）およびＡＩＨオーバーラップ症候群を含むオーバーラップ症候群からなる群から選択される、請求項１１に記載の製剤または医薬組成物。
13. 代謝性肝疾患および／または動脈硬化の治療に用いる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の製剤または請求項９もしくは１０に記載の医薬組成物。
14. 前記代謝性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝炎である、請求項１３に記載の製剤または医薬組成物。
15. 前記代謝性肝疾患がアルコール性脂肪性肝炎である、請求項１３に記載の製剤または医薬組成物。
16. 経口投与、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、経鼻投与、局所投与または直腸投与用に製剤化される、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
17. 薬学的に許容される１以上の賦形剤を含む、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
18. 請求項１に記載のＮｏｒ−ＵＤＣＡの化学的に純粋な、単一多形体の結晶性製剤の調製方法であって、
    Ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩を結晶化させるステップと、
    前記カリウム塩を溶媒中に溶解させ、溶液を酸性化することによりＮｏｒ−ＵＤＣＡを析出させて純粋なＮｏｒ−ＵＤＣＡを得るステップとを含む方法。
19. 前記溶媒が水とアセトンとの混合物であり、前記析出が、溶液を酸性化してｐＨを１〜２の範囲にすることにより行われる、請求項１８に記載の方法。
20. 請求項１８または１９に記載の方法であってさらに
    （ａ）式（Ａ）の化合物：
    を式（Ｂ）の化合物：
    に変換するステップと、
    （ｂ）式（Ｂ）の化合物を式（Ｃ）の化合物：
    に変換するステップと、
    （ｃ）式（Ｃ）の化合物を粗製状態の式（Ｄ）の化合物：
    に変換するステップと、
    （ｄ）粗製状態の式（Ｄ）の化合物をＫＯＨで処理し、Ｎｏｒ−ＵＤＣＡのカリウム塩を結晶化させるステップとを含み、
    式中ｎが１であることを特徴とする方法。
21. 粉砕ステップおよび／または微粉化ステップを含まない、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。