JP6561061B2 - ＮＯＴＣＨ １特異的なｓｉＲＮＡ分子 - Google Patents

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Description

本発明は、二本鎖構造を含む核酸分子、疾患の治療および／または予防のための方法での使用のための二本鎖構造を含む核酸分子、癌細胞の薬物感受性を回復させる方法での使用のための二本鎖構造を含む核酸分子、薬物の製造のための二本鎖構造を含む核酸分子の使用、癌細胞の薬物感受性を回復させるための薬剤の製造での二本鎖構造を含む核酸分子の使用、二本鎖構造を含む核酸分子を含むナノエマルション、疾患の治療および／または予防のための方法での使用のためのナノエマルション、癌細胞の薬物感受性を回復させる方法での使用のためのナノエマルション、薬物の製造のためのナノエマルション構造の使用、癌細胞の薬物感受性を回復させるための薬剤の製造でのナノエマルションの使用、二本鎖構造を含む核酸分子を含む医薬組成物、疾患の治療および／または予防のための方法での使用のための医薬組成物、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法での使用のための医薬組成物、二本鎖構造を含む核酸分子の投与を含む疾患の治療および／または予防のための方法、二本鎖構造を含む核酸分子の投与を含む癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法、二本鎖構造を含む核酸分子を含むキット、疾患の治療および／または予防の方法での使用のためのキット、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法での使用のためのキット、ナノエマルションを含むキット、疾患の治療および／または予防の方法での使用のためのキット、および、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法での使用のためのキットに関する。
Ｎｏｔｃｈ １は、１型膜貫通タンパク質としても分類される１回膜貫通受容体をコードする遺伝子である。ヒトＮｏｔｃｈ １は、Ｅｌｌｉｓｅｎ ＬＷ ｅｔ ａｌ．により最初に記載された（Ｅｌｌｉｓｅｎ ＬＷ ｅｔ ａｌ．，ｃｅｌｌ ６６（４），６４９−６６１（１９９１））。Ｎｏｔｃｈ １は、Ｎｏｔｃｈファミリーのメンバーである。このファミリーのメンバーは、多数の上皮増殖因子様（ＥＧＦ）リピートからなる細胞外ドメイン、および、多数の異なるドメイン型からなる細胞内ドメインを含む、構造特性を共有する。Ｎｏｔｃｈファミリーメンバーは、細胞運命決定を制御することにより、様々な発生プロセスにおける役割を果たす。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達網は、物理的に隣接する細胞間の相互作用を制御する、進化的に保存された細胞間シグナル伝達経路である。Ｎｏｔｃｈ １およびその翻訳産物は、多くの腫瘍体において、新薬の開発につながるような（ｄｒｕｇａｂｌｅ）標的を構成する。ヒトＮｏｔｃｈ １のｃＤＮＡのヌクレオチド配列を含む配列情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿０１７６１７．３から検索され得る。
当分野において、インビトロおよびインビボでＮｏｔｃｈ １の発現レベルをサイレンシングまたはノックダウンする手段に関する現在進行中の必要性が存在し、Ｎｏｔｃｈ １遺伝子の発現を低減させることにより、より具体的には、Ｎｏｔｃｈ １をコードするｍＲＮＡの翻訳を低減させることにより、治療または予防することのできる、疾患の治療のためのｓｉＲＮＡの使用を含む。そのように治療することのできる疾患の１つのグループは、様々な腫瘍疾患および癌である。
したがって、本発明に潜在する課題は、Ｎｏｔｃｈ １をサイレンシングまたはノックダウンするための方法、および、より好ましくは、インビトロおよびインビボでＮｏｔｃｈ １の発現レベルをサイレンシングまたはノックダウンするための方法の提供である。本発明に潜在するさらなる課題は、疾患（より好ましくは、Ｎｏｔｃｈ １遺伝子の発現を低減させることにより、より具体的には、Ｎｏｔｃｈ １をコードするｍＲＮＡの翻訳を低減させることにより、治療または予防することのできる疾患）の治療のための方法、および、そのような方法において有用な手段の提供である。また、本課題に潜在するさらなる課題は、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法、および、そのような方法において有用な手段の提供である。最後に、本発明に潜在する課題は、癌の治療での補助療法のための方法、および、そのような方法において有用な手段の提供である。
本発明に潜在するこれらおよび他の課題は、添付の独立請求項の要旨により解決される。好ましい実施態様は、添付の従属請求項から得ることができる。
特定の実施態様は、以下に示す実施態様を含む説明を考慮して当業者に明らかになるであろう。以下に示す実施態様は、本発明に潜在する上記および他の課題を同様に解決する。
実施態様１：二本鎖構造を含む核酸分子であって、
二本鎖構造は、第一の鎖および第二の鎖により形成され、
第一の鎖は、連続したヌクレオチドの第一のストレッチを含み、第二の鎖は、連続したヌクレオチドの第二のストレッチを含み、
連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、
ａ）以下と少なくとも６３％同一であるヌクレオチド配列
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣ ３’（配列番号１）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵ ３’（配列番号８）；または、
ｂ）以下の少なくともひと続きの８または９ヌクレオチドを含むヌクレオチド配列
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣ ３’（配列番号１）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵ ３’（配列番号８）
を含み、
核酸分子は、遺伝子の翻訳後サイレンシングを起こすことが可能である。
実施態様２：実施態様１の核酸分子であって、遺伝子の翻訳後サイレンシングは、ＲＮＡ干渉である。
実施態様３：実施態様１から２のいずれか１つの核酸分子であって、遺伝子は、Ｎｏｔｃｈ １、好ましくはヒトＮｏｔｃｈ １である。
実施態様４：実施態様１から３のいずれか１つの核酸分子であって、核酸分子は、好ましくは細胞内で、遺伝子をコードするｍＲＮＡまたは前記ｍＲＮＡの前駆体を分解することが可能である。
実施態様５：実施態様４の核酸分子であって、ｍＲＮＡのｃＤＮＡのヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿０１７６１７．３から利用可能である。
実施態様６：実施態様１から５のいずれか１つの核酸分子であって、ｃＤＮＡは、配列番号２のヌクレオチド配列からなる。
実施態様７：実施態様１から６のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、連続したヌクレオチドの第一のストレッチの一部と少なくとも部分的に相補である。
実施態様８：実施態様１から７のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、連続したヌクレオチドの第一のストレッチと少なくとも部分的に相補である。
実施態様９：実施態様１から８のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、１３〜２９個のヌクレオチド、好ましくは１７〜２５個、または１９〜２５個のヌクレオチド、より好ましくは１９〜２３個のヌクレオチドを含む。
実施態様１０：実施態様１〜９のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、１３〜２９個のヌクレオチド、好ましくは１７〜２５個、または１９〜２５個のヌクレオチド、より好ましくは１９〜２３個のヌクレオチドを含む。
実施態様１１：実施態様１から１０のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチおよび連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、１３〜２９個のヌクレオチド、好ましくは１７〜２５個、または１９〜２５個のヌクレオチド、より好ましくは１９〜２３個のヌクレオチドを含む。
実施態様１２：実施態様９から１１のいずれか１つの核酸分子であって、ヌクレオチドは、連続したヌクレオチドである。
実施態様１３：実施態様１から１２のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖は、連続したヌクレオチドの第一のストレッチからなる。
実施態様１４：実施態様１から１３のいずれか１つの核酸分子であって、第二の鎖は、連続したヌクレオチドの第二のストレッチからなる。
実施態様１５：実施態様１から１４のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖は、連続したヌクレオチドの第一のストレッチからなり、第二の鎖は、連続したヌクレオチドの第二のストレッチからなる。
実施態様１６：実施態様１から１４のいずれか１つの核酸分子であって、二本鎖構造は、１３〜２９個の塩基対、好ましくは１６〜２７個、または１９〜２５個の塩基対、より好ましくは１９〜２３個の塩基対を含む。
実施態様１７：実施態様１から１６のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣ ３’（配列番号１）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵ ３’（配列番号８）を含む。
実施態様１８：実施態様１から１７のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧＵ ３’（配列番号３）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧ ３’（配列番号９）を含む。
実施態様１９：実施態様１７から１８のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣ ３’（配列番号１）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵ ３’（配列番号８）を含み、
連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧＵ ３’（配列番号３）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧ ３’（配列番号９）を含む。
実施態様２０：実施態様１から１９のいずれか１つの核酸分子であって、核酸分子は、少なくとも一方の末端が平滑末端である。
実施態様２１：実施態様２０の核酸分子であって、核酸分子は、第一の鎖の５’末端および第二の鎖の３’末端により定義される末端が、平滑末端である。
実施態様２２：実施態様２０の核酸分子であって、核酸分子は、第一の鎖の３’末端および第二の鎖の５’末端により定義される末端が、平滑末端である。
実施態様２３：実施態様２０から２２のいずれか１つの核酸分子であって、核酸分子は、第一の鎖の５’末端および第二の鎖の３’末端により定義される末端、および、第一の鎖の３’末端および第二の鎖の５’末端により定義される末端が、平滑末端である。
実施態様２４：実施態様１から１９のいずれか１つの核酸分子であって、核酸分子は、少なくとも片方の末端が突出している。
実施態様２５：実施態様２４の核酸分子であって、核酸分子は、第一の鎖の５’末端および第二の鎖の３’末端により定義される末端が、突出している。
実施態様２６：実施態様２５の核酸分子であって、突出は、５’突出である。
実施態様２７：実施態様２５の核酸分子であって、突出は、３’突出である。
実施態様２８：実施態様２４の核酸分子であって、核酸分子は、第一の鎖の３’末端および第二の鎖の５’末端により定義される末端が突出している。
実施態様２９：実施態様２８の核酸分子であって、突出は、５’突出である。
実施態様３０：実施態様２８の核酸分子であって、突出は、３’突出である。
実施態様３１：実施態様２４の核酸分子であって、核酸分子は、第一の鎖の５’末端および第二の鎖の３’末端により定義される末端、および、第一の鎖の３’末端および第二の鎖の５’末端により定義される末端が突出している。
実施態様３２：実施態様３１の核酸分子であって、突出は、５’突出である。
実施態様３３：実施態様３２の核酸分子であって、突出は、３’突出である。
実施態様３４：実施態様２４から３３のいずれか１つの核酸分子であって、突出は、１、２、３、４または５個のヌクレオチドからなる。
実施態様３５：実施態様３４の核酸分子であって、突出は、２個のヌクレオチドからなる。
実施態様３６：実施態様３４から３５のいずれか１つの核酸分子であって、ヌクレオチドは、ｄＴである。
実施態様３７：実施態様１から１９および実施態様２４から３６のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣｄＴｄＴ ３’（配列番号４）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵｄＴｄＴ ３’（配列番号１０）を含む。
実施態様３８：実施態様１から１９および実施態様２４から３７のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧＵｄＴｄＴ ３’（配列番号５）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧｄＴｄＴ ３’（配列番号１１）を含む。
実施態様３９：実施態様３７から３８のいずれか１つの核酸分子であって、
連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣｄＴｄＴ ３’（配列番号４）または
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵｄＴｄＴ ３’（配列番号１０）を含み、
連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧＵｄＴｄＴ ３’（配列番号５）または
（Ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧｄＴｄＴ ３’（配列番号１１）を含む。
実施態様４０：実施態様１から３９のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖および第二の鎖は、互いに共有結合していて、好ましくは、第一の鎖の３’末端は、第二の鎖の５’末端に共有結合している。
実施態様４１：実施態様１から４０のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチを形成する１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾されている。
実施態様４２：実施態様１から４１のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第二のストレッチを形成する１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾されている。
実施態様４３：実施態様４１および４２のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチを形成する１つまたは複数のヌクレオチドは修飾されていて、および、連続したヌクレオチドの第二のストレッチを形成する１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾されている。
実施態様４４：実施態様１から４３のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖を形成する１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾されている。
実施態様４５：実施態様１から４４のいずれか１つの核酸分子であって、第二の鎖を形成する１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾されている。
実施態様４６：実施態様４４から４５のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖を形成する１つまたは複数のヌクレオチドは修飾されていて、および、第二の鎖を形成する１つまたは複数のヌクレオチドは修飾されている。
実施態様４７：実施態様４１から４６のいずれか１つの核酸分子であって、１つまたは複数のヌクレオチドの修飾は、１つまたは複数のヌクレオチドの糖部分の修飾および／または１つまたは複数のヌクレオチドのリン酸部分の修飾である。
実施態様４８：実施態様４７の核酸分子であって、糖部分の修飾は、２’Ｏ−メチルおよび２’−Ｆを含む群から選択される。
実施態様４９：実施態様４７から４８のいずれか１つの核酸分子であって、リン酸部分の修飾は、ホスホロチオエート結合が、２個のヌクレオチドの間で形成されるものである。
実施態様５０：実施態様４１から４３および実施態様４７から４９のいずれか１つの核酸分子であって、１つまたは複数のヌクレオチドは、ストレッチ内の位置に応じて修飾されている。
実施態様５１：実施態様５０の核酸分子であって、第一および／または第二のストレッチの長さ全体またはそれらの一部にわたり、ストレッチの偶数位におけるヌクレオチドが修飾されている。
実施態様５２：実施態様５０および５１のいずれか１つの核酸分子であって、第一および／または第二のストレッチの長さ全体またはそれらの一部にわたり、ストレッチの奇数位におけるヌクレオチドが修飾されている。
実施態様５３：実施態様５１から５２のいずれか１つの核酸分子であって、第一および／または第二のストレッチの長さ全体またはそれらの一部にわたり、ストレッチの偶数位におけるヌクレオチドが修飾され、第一および／または第二のストレッチの長さ全体またはそれらの一部にわたり、ストレッチの偶数位におけるヌクレオチドが修飾され、ここで、偶数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾は、奇数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾とは異なる。
実施態様５４：実施態様５１から５３のいずれか１つの核酸分子であって、（ａ）偶数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｏ−メチル修飾であって奇数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｆ修飾であるか、または、（ｂ）奇数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｏ−メチル修飾であって偶数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｆ修飾である。
実施態様５５：実施態様４４から５０のいずれか１つの核酸分子であって、１つまたは複数のヌクレオチドは、鎖内の位置に応じて修飾されている。
実施態様５６：実施態様５５の核酸分子であって、第一および／または第二の鎖の長さ全体またはそれらの一部にわたり、鎖の偶数位におけるヌクレオチドが修飾されている。
実施態様５７：実施態様５５および５６のいずれか１つの核酸分子であって、第一および／または第二の鎖の長さ全体またはそれらの一部にわたり、鎖の奇数位におけるヌクレオチドが修飾されている。
実施態様５８：実施態様５６から５７のいずれか１つの核酸分子であって、第一および／または第二の鎖の長さ全体またはそれらの一部にわたり、鎖の偶数位におけるヌクレオチドが修飾され、第一および／または第二の鎖の長さ全体またはそれらの一部にわたり、鎖の偶数位におけるヌクレオチドが修飾され、ここで、偶数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾は、鎖の奇数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾とは異なる。
実施態様５９：実施態様５６から５８のいずれか１つの核酸分子であって、（ａ）偶数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｏ−メチル修飾であって奇数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｆ修飾であるか、または、（ｂ）奇数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｏ−メチル修飾であって偶数位におけるヌクレオチド（単数または複数）の修飾が２’−Ｆ修飾である。
実施態様６０：実施態様４１から５４のいずれか１つの核酸分子であって、第一のストレッチは、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個ヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは、２’−Ｆ修飾されている。
実施態様６１：実施態様６０の核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に、すぐに続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチド（ｅｖｅｒｙ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｓｅｃｏｎｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）は、第一のストレッチの長さ全体またはその一部にわたり、２’Ｏ−メチル修飾されたヌクレオチドである。
実施態様６２：実施態様６０および６１のいずれか１つの核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一のストレッチの長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｆ修飾されたヌクレオチドである。
実施態様６３：実施態様４１から５５および実施態様６０から６２のいずれか１つの核酸分子であって、第二のストレッチは、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個のヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾されている。
実施態様６４：実施態様６３の核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に、すぐに続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第二のストレッチの長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｆ修飾されたヌクレオチドである。
実施態様６５：実施態様６３および６４のいずれか１つの核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一のストレッチの長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｏ−メチル修飾されたヌクレオチドである。
実施態様６６：実施態様６０から６５のいずれか１つの核酸分子であって、第一のストレッチは、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個のヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは２’−Ｆ修飾され、ここで、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一のストレッチの長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｆ修飾されたヌクレオチドであり、第二のストレッチは、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個のヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾され、ここで、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一のストレッチの長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｏ−メチル修飾されたヌクレオチドである。
実施態様６７：実施態様６０から６６のいずれか１つの核酸分子であって、第一のストレッチは、その３’末端に２個のｄＴヌクレオチドを含み、第二のストレッチは、その３’末端に２個のｄＴヌクレオチドを含み、ここで、２個のｄＴヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して共有結合している。
実施態様６８：実施態様４１から４９および実施態様５５から５９のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖は、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個のヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは、２’−Ｆ修飾されている。
実施態様６９：実施態様６８の核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に、すぐに続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一の鎖の長さ全体またはその一部にわたり、２’Ｏ−メチル修飾されたヌクレオチドである。
実施態様７０：実施態様６８および６９のいずれか１つの核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一の鎖の長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｆ修飾されたヌクレオチドである。
実施態様７１：実施態様４１から４９、実施態様５５から５９および実施態様６８から７０のいずれか１つの核酸分子であって、第二の鎖は、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個のヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾されている。
実施態様７２：実施態様７１の核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に、すぐに続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第二の鎖の長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｆ修飾されたヌクレオチドである。
実施態様７３：実施態様７１および７２のいずれか１つの核酸分子であって、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一の鎖の長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｏ−メチル修飾されたヌクレオチドである。
実施態様７４：実施態様６８から７３のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖は、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個のヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは２’−Ｆ修飾され、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の後に続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一の鎖の長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｆ修飾されたヌクレオチドであり、第二の鎖は、５’末端に、少なくとも１個、好ましくは２個のヌクレオチドを含み、前記の少なくとも１個のヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル修飾され、前記の少なくとも１個のヌクレオチドの後に始まる、第二の続く（５’−＞３’の方向）ヌクレオチドおよびそれに続く１つおきのヌクレオチドは、第一の鎖の長さ全体またはその一部にわたり、２’−Ｏ−メチル修飾されたヌクレオチドである。
実施態様７５：実施態様６８から７４のいずれか１つの核酸分子であって、第一の鎖は、その３’末端に２個のｄＴヌクレオチドを含み、第二の鎖は、その３’末端に２個のｄＴヌクレオチドを含み、ここで、２個のｄＴヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して共有結合している。
実施態様７６：実施態様１から７５のいずれか１つの核酸分子であって、
ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣ ３’（配列番号１）は、以下のように修飾され：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）、および
ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵ ３’（配列番号８）は、以下のように修飾され：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが、２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示す。
実施態様７７：実施態様１から７６のいずれか１つの核酸分子であって、
ヌクレオチド配列５’ ＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧＵ ３’（配列番号３）は、以下のように修飾され、
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）、
ヌクレオチド配列５’ ＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧ ３’（配列番号９）は、以下のように修飾され、
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）、
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示す。
実施態様７８：実施態様１から７７のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含み：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）または
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示す。
実施態様７９：実施態様１から７８のいずれか１つの核酸分子であって、連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含み：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）または
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）、
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示す。
実施態様８０：実施態様１から７９のいずれか１つの核酸分子であって、
ａ）連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含み：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）、および
連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含む：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）、または、
ｂ）連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含み：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、および
連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含む：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）、または、
ｃ）連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含み：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）、および
連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含む：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）、または、
ｄ）連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含み：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、および
連続したヌクレオチドの第二のストレッチは、以下のヌクレオチド配列を含む：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示す。
実施態様８１：実施態様１から８０のいずれか１つの核酸分子であって、核酸分子は、
ａ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）、または、
ｂ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）、または、
ｃ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）、または、
ｄ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）、
からなり、
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示す。
実施態様８２：実施態様１から８１のいずれか１つの核酸分子であって、核酸分子は、
ａ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）、または、
ｂ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕ ３’（配列番号７）、または、
ｃ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣ ３’（配列番号６）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）、または、
ｄ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵ ３’（配列番号１３）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇ ３’（配列番号１４）、
からなり、
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示す。
実施態様８３：実施態様１から８１のいずれか１つの核酸分子であって、核酸分子は、
ａ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣｄＴｓｄＴ ３’（配列番号６９）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７０）、または、
ｂ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７１）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７０）、または、
ｃ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣｄＴｓｄＴ ３’（配列番号６９）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７２）、または、
ｄ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７１）、および
以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７２）、
からなり、
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示し、および
ｄＴｓｄＴは、３’末端に、２個のｄＴからなるジヌクレオチドが付いていることを示し、ここで、前記の２個のｄＴは、ホスホロチオエート結合を介して共有結合している。
実施態様８４：実施態様１から８３のいずれか１つの核酸分子であって、疾患の治療および／または予防のための方法での使用のための、核酸分子。
実施態様８５：実施態様８４の核酸分子であって、疾患は、Ｎｏｔｃｈ １遺伝子の発現を低減させることにより、より具体的には、Ｎｏｔｃｈ １をコードするｍＲＮＡの翻訳を低減させることにより、治療することのできる疾患である。
実施態様８６：実施態様８４から８５のいずれか１つの核酸分子であって、疾患は、食道癌、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、舌癌、白血病、腎細胞癌、胃癌、結腸腺癌、子宮内膜癌／子宮体部、子宮頸癌／子宮頸部、肝内胆管癌、肝細胞癌腫、骨肉腫、膀胱癌、悪性メラノーマ、甲状腺癌、肺腺癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膵癌およびグリオーマを含む群から選択される。
実施態様８７：実施態様８４から８６のいずれか１つの核酸分子であって、前記方法は、薬学的に活性の薬剤の投与をさらに含む。
実施態様８８：実施態様８７の核酸分子であって、薬学的に活性の薬剤は、細胞増殖抑制剤である。
実施態様８９：実施態様８８の核酸分子であって、薬学的に活性の薬剤は、ゲムシタビン、ドセタキセル、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｉｎｔ）、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、デキサメタゾンおよびテモゾロミドを含む群から選択される。
実施態様９０：実施態様１から８３のいずれか１つの核酸分子であって、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法での使用のための、核酸分子。
実施態様９１：実施態様９０の核酸分子であって、薬物感受性は、ＮＦ−κＢカスケードが仲介および／または関与する薬物感受性である。
実施態様９２：実施態様１から８３のいずれか１つの核酸分子の使用であって、疾患の治療および／または予防のための薬物の製造のための、使用。
実施態様９３：実施態様９２の使用であって、疾患は、Ｎｏｔｃｈ １遺伝子の発現を低減させることにより、より具体的には、Ｎｏｔｃｈ １をコードするｍＲＮＡの翻訳を低減させることにより、治療することのできる疾患である。
実施態様９４：実施態様９２から９３のいずれか１つの使用であって、疾患は、食道癌、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、舌癌、白血病、腎細胞癌、胃癌、結腸腺癌、子宮内膜癌／子宮体部、子宮頸癌／子宮頸部、肝内胆管癌、肝細胞癌腫、骨肉腫、膀胱癌、悪性メラノーマ、甲状腺癌、肺腺癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膵癌およびグリオーマを含む群から選択される。
実施態様９５：実施態様９２から９４のいずれか１つの使用であって、薬物は、さらなる薬学的に活性の薬剤とともに投与するための薬剤である。
実施態様９６：実施態様９５の使用であって、薬学的に活性の薬剤は、細胞増殖抑制剤である。
実施態様９７：実施態様９６の使用であって、薬学的に活性の薬剤は、ゲムシタビン、ドセタキセル、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｉｎｔ）、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、デキサメタゾンおよびテモゾロミドを含む群から選択される。
実施態様９８：実施態様１から８３のいずれか１つの核酸分子の使用であって、癌細胞の薬物感受性を回復させるための薬剤の製造での、使用。
実施態様９９：実施態様９８の使用であって、薬物感受性は、ＮＦ−κＢカスケードが仲介および／または関与する薬物感受性である。
実施態様１００：不連続相および連続的な水相および実施態様１から８３のいずれか１つに係る核酸分子を含む、ナノエマルション。
実施態様１０１：実施態様１００のナノエマルションであって、不連続相は、パーフルオロカーボン相を含む。
実施態様１０２：実施態様１から１０１のいずれか１つのナノエマルションであって、ナノエマルションは、エンドサイトーシス増強面（好ましくはエンドサイトーシス増強成分を含むエンドサイトーシス増強面）を含み、エンドサイトーシス増強成分は、エンドサイトーシスを介したナノエマルションまたはナノエマルションの粒子の細胞取り込みを誘導する、少なくとも１つの化合物を含む群から選択される。
実施態様１０３：実施態様１００から１０２のいずれか１つのナノエマルションであって、疾患の治療および／または予防での使用のための、ナノエマルション。
実施態様１０４：実施態様１００から１０２のいずれか１つのナノエマルションであって、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法での使用のための、ナノエマルション。
実施態様１０５：実施態様１００から１０２のいずれか１つのナノエマルションの使用であって、疾患の治療および／または予防のための薬物の製造のための、使用。
実施態様１０６：実施態様１００から１０２のいずれか１つのナノエマルションの使用であって、癌細胞の薬物感受性を回復させるための薬剤の製造での、使用。
実施態様１０７：実施態様１から８３のいずれか１つの核酸分子および／または実施態様１００から１０２のいずれか１つのナノエマルション、および薬学的に許容できる賦形剤を含む、医薬組成物。
実施態様１０８：実施態様１０７の医薬組成物であって、疾患の治療および／または予防での使用のための、医薬組成物。
実施態様１０９：実施態様１０７の医薬組成物であって、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法での使用のための、医薬組成物。
実施態様１１０：疾患の治療および／または予防のための方法であって、当該方法は、実施態様１から８３のいずれか１つの核酸、実施態様１００から１０２のいずれか１つのナノエマルション、および／または実施態様１０７の医薬組成物の、対象への投与を含む。
実施態様１１１：癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法であって、当該方法は、実施態様１から８３のいずれか１つの核酸、実施態様１００から１０２のいずれか１つのエマルション、および／または実施態様１０７の医薬組成物の、対象への投与を含み、対象は癌を患っていて、癌の細胞は薬剤抵抗性である。
様々なｓｉＲＮＡを用いたＣ４−２細胞のトランスフェクション時のＮｏｔｃｈ １の相対的発現を示すダイアグラムである。 各ｓｉＲＮＡに関するＩＣ５０値の決定を可能にする、個々のｓｉＲＮＡの濃度の関数として残っている相対的なＮｏｔｃｈ １のｍＲＮＡ発現を示す、様々なｓｉＲＮＡに関するダイアグラムである。 図３Ａおよび図３Ｂは、１０ｎＭ、１ｎｍおよび０．１ｎＭの濃度における、その未修飾、中間または完全修飾の形態でのｓｉＲＮＡ ＸＤ−００４０４（図３Ａ）またはＸＤ−００４０９（図３Ｂ）に対する、Ｃ４−２細胞の曝露時の、相対的なＮｏｔｃｈ １のｍＲＮＡ発現を示すダイアグラムである。 ＰＡＮＣ−１細胞を用いた異種移植片マウスモデルでの、腫瘍体積の相対的増加（％±ＳＥＭとして示される）を示すダイアグラムである。 コントロール、ゲムシタビン、または、本発明のｓｉＲＮＡを含むナノ担体とゲムシタビンの組み合わせを用いた、動物モデルの治療時の、転移がない、数個の転移を有する、および単一の転移を有する、ＰＡＮＣ−１同所性腫瘍モデルにおける動物の数を示すダイアグラムである。
本発明者らは、驚くべきことに、二本鎖構造を含む核酸分子
（ここで、二本鎖構造は、第一の鎖および第二の鎖により形成され、
第一の鎖は連続したヌクレオチドの第一のストレッチを含み、第二の鎖は連続したヌクレオチドの第二のストレッチを含み、
連続したヌクレオチドの第一のストレッチは、
ａ）以下と少なくとも６３％同一であるヌクレオチド配列
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣ ３’（配列番号１）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵ ３’（配列番号８）；または、
ｂ）以下の少なくともひと続きの８または９ヌクレオチドを含むヌクレオチド配列
（ｉ）ヌクレオチド配列５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣ ３’（配列番号１）または
（ｉｉ）ヌクレオチド配列５’ ＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵ ３’（配列番号８）を含む）
は、遺伝子の翻訳後サイレンシングおよび特にＲＮＡ干渉を起こすことが可能であることを見いだした。この核酸は（その実施態様の全てを含む）、本明細書において、本発明の核酸分子と呼ぶ。
本発明の核酸分子は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）であることは、本発明の範囲内である。そのようなｓｉＲＮＡは、本発明の核酸分子の特に好ましい実施態様である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現されたＲＮＡ転写産物（本明細書において「標的核酸」と呼ばれることがある）に向けられる。本明細書において好ましく用いられる用語「サイレンス」および「ノックダウン」は、遺伝子発現を言及する場合、遺伝子発現の低減を意味する。本発明は、さらに、本発明の核酸分子を作成するためのプロセスに関する。
本発明の一実施態様では、標的核酸は、哺乳類Ｎｏｔｃｈ １遺伝子から発現されるＲＮＡである。一実施態様では、標的核酸は、マウスＮｏｔｃｈ １から発現されるＲＮＡである。別の実施態様では、標的核酸は、ヒトＮｏｔｃｈ １から発現されるＲＮＡである。別の実施態様では、標的核酸は、ヒトＮｏｔｃｈ １のｍＲＮＡである。別の実施態様では、標的核酸は、ヒトＮｏｔｃｈ １のｈｎＲＮＡである。別の実施態様では、標的核酸は、配列番号１２の配列を含むｍＲＮＡである。
本発明の一実施態様では、核酸分子は、二本鎖構造を形成していない。そのような実施態様では、核酸分子は、個々に存在し得る２つの別個の一本鎖により（すなわち、二本鎖構造が形成されないように非ハイブリッド状態で）、または、ハイブリッド形状（ＲＮＡ干渉を仲介または誘発するために必要な二本鎖構造とは異なる二本鎖構造が形成される）のいずれかで、形成されている。あるいは、二本鎖構造を形成する核酸分子は、一本鎖核酸分子であり、ここで、核酸分子は、二本鎖構造が形成されるように、または、ＲＮＡ干渉を仲介または誘発するために必要な二本鎖構造とは異なる二本鎖構造が形成されるように、それ自体では折り返されていない。より好ましい実施態様では、二本鎖構造は、インビボの条件下で、より具体的には、対象、好ましくは哺乳類または哺乳類の細胞への、核酸分子の投与の際に、形成される。
本発明のｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を阻害するために適切である。本発明に係るｓｉＲＮＡは、したがって、ＲＮＡ干渉応答を誘発するために適切であり、哺乳類の細胞におけるＮｏｔｃｈ １のｍＲＮＡの低減をもたらす。本発明に係るｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡレベルで遺伝子発現を低減させることによりＮｏｔｃｈ １タンパク質の発現を低減させるのにさらに適切である。
ｓｉＲＮＡ設計：本発明のｓｉＲＮＡは、核酸の２本の鎖を含み、第一の鎖は、アンチセンス鎖とも呼ばれ、連続したヌクレオチドの第一のストレッチ（アンチセンスストレッチとも呼ばれる）を含み、第二の鎖は、センス鎖とも呼ばれ、連続したヌクレオチドの第二のストレッチ（センスストレッチとも呼ばれる）を含む。核酸は通常、リボヌクレオチドまたは修飾リボヌクレオチドからなるが；核酸は、本明細書に記載のデオキシヌクレオチド（ＤＮＡ）を含んでよい。ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの全てまたは一部、および、センス鎖またはセンスストレッチの全部または一部により形成される、二本鎖核酸部分または二重領域をさらに含む。そのような二本鎖核酸部分または二重領域は、本明細書において二本鎖構造とも呼ぶ。センス鎖またはアンチセンスストレッチと二重領域を形成する、アンチセンス鎖の部分またはアンチセンスストレッチの部分は、アンチセンス鎖二重領域またはアンチセンスストレッチ領域、または単純に、アンチセンス二重領域であり、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと二重領域を形成するセンス鎖の部分またはセンスストレッチの部分は、センス鎖二重領域であり、センスストレッチ二重領域、または単純に、センス二重領域である。二重領域は、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチとセンス鎖またはセンスストレッチとの間に形成される最初の塩基対で始まり、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチとセンス鎖またはセンスストレッチとの間に形成される最後の塩基対で終わるように含めて定義される。二重領域のいずれか側のｓｉＲＮＡの部分は、隣接領域である。アンチセンス二重領域のいずれか側のアンチセンス鎖の部分またはアンチセンスストレッチの部分は、アンチセンス隣接領域である。アンチセンス二重領域に対するアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの５’の部分は、アンチセンス５’隣接領域である。アンチセンス二重領域に対するアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの５’の部分は、アンチセンス３’隣接領域である。センス二重領域のいずれか側のセンス鎖の部分またはセンスストレッチの部分は、センス隣接領域である。センス二重領域に対するセンス鎖またはセンスストレッチの５’の部分は、センス５’隣接領域である。センス二重領域に対するセンスストレッチの部分またはセンス鎖の５’の部分は、センス３’隣接領域である。
同一性：一実施態様では、一のヌクレオチド配列の、別のヌクレオチド配列に対する同一性は、当該一のヌクレオチド配列と当該他のヌクレオチド配列の両方の間に、どれくらい多くのヌクレオチドが共有されているかについての示度である。同一性は、当該他のヌクレオチド配列のヌクレオチドの合計数に対する、当該他のヌクレオチド配列と共有する当該一の配列のヌクレオチドの数の比率として表される。同一性の最大値は１００％である。一方では、当該一のヌクレオチド配列および当該他のヌクレオチド配列の長さ、および、当該一のヌクレオチド配列と当該他のヌクレオチド配列との間で共有されるヌクレオチドの数に依存して、同一性は常に整数ではないことが、当業者により理解されよう。そのように計算される比率が整数でない場合、同一性は、それにもかかわらず、好ましくは、計算された比率にできるだけ近くなり技術的意義をなす整数として示される。本発明によれば、同一性は、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％であってよい。
相補性：本発明によれば、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域は、完全に相補であってよく、および、互いに対して少なくとも部分的に相補である。そのような相補性は、ワトソンクリック塩基対合（すなわち、Ａ：ＵおよびＧ：Ｃ塩基対合）に基づく。特に、本発明の核酸分子およびｓｉＲＮＡの長さに応じて、アンチセンスおよびセンス二重領域の間の塩基相補性の観点から完全な一致は必ずしも必要ではないが、アンチセンスおよびセンス鎖は、生理学的条件下でハイブリダイズすることが可能でなければならない。
一実施態様では、アンチセンス鎖とセンス鎖との間の相補性は完全であり、すなわち、いずれの鎖にも、ヌクレオチドの不一致または付加／削除されたヌクレオチドはない。
一実施態様では、アンチセンスストレッチとセンスストレッチとの間の相補性は完全であり、すなわち、いずれのストレッチにも、ヌクレオチドの不一致または付加／削除されたヌクレオチドはない。
一実施態様では、アンチセンス二重領域とセンス二重領域との間の相補性は完全であり、すなわち、いずれの鎖の二重領域にも、ヌクレオチドの不一致または付加／削除されたヌクレオチドはない。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域とセンス二重領域との間の相補性は完全でない。一実施態様では、アンチセンス二重領域とセンス二重領域の相補配列との間の同一性は、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％および９５％からなる群より選択され；ここで、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス二重領域を含み、センス二重領域は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ（アンチセンス二重領域とセンス二重領域の相補配列との間の同一性は、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％および９５％からなる群より選択される）は、アンチセンス二重領域とセンス二重領域との間に完全な同一性がある二重領域を有する比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％または７５％、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減することが可能である。本明細書において用いられる用語「比較ｓｉＲＮＡ」は、特定の違いを除き、比較されるｓｉＲＮＡと同一であり、同一の条件下で試験されるｓｉＲＮＡである。
ｓｉＲＮＡを用いるＲＮＡｉは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの全てまたは一部と、標的核酸の一部との間の、二重領域の形成に関わる。アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと標的配列との間に形成される最初の塩基対で始まり、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと標的配列との間に形成される最後の塩基対で終わるように含めて定義される、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと二重領域を形成する標的核酸の一部は、標的核酸配列、または単純に標的配列である。アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチとセンス鎖またはセンスストレッチとの間に形成される二重領域は、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと標的配列との間に形成される二重領域と、必要ではないが同一であってよい。すなわち、センス鎖またはセンスストレッチは、標的配列とは異なる配列を有してよいが；アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチは、センス鎖またはセンスストレッチおよび標的配列の両方と、二重構造を形成することが可能でなければならない。
一実施態様では、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと標的配列との間の相補性は完全であり、すなわち、いずれの核酸にも、ヌクレオチドの不一致または付加／削除されたヌクレオチドはない。
一実施態様では、アンチセンス二重領域（すなわち、センス鎖またはセンスストレッチと二重領域を形成するアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの一部）と標的配列との間の相補性は完全であり、すなわち、いずれの核酸にも、ヌクレオチドの不一致または付加／削除されたヌクレオチドはない。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域と標的配列との間の相補性は完全でない。一実施態様では、アンチセンス二重領域と標的配列の相補配列との間の同一性は、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％または９５％からなる群より選択され、ここで、アンチセンス二重領域を含むｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ（アンチセンス二重領域と標的配列の相補配列との間の同一性は、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％および９５％からなる群より選択される）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチおよび標的配列に対して完全な同一性を有する比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％または７５％、低減させることが可能である。
別の実施態様では、本発明のｓｉＲＮＡは二重領域を含み、ここで、アンチセンス二重領域は、ヌクレオチドに対して塩基対合しない１、２、３、４および５からなる群より選択されるいくつかのヌクレオチドをセンス二重領域内に有し、ここで、前記ｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。塩基対合の不在は、塩基間の相補性の不在（すなわち、ワトソンクリック塩基対合の不在）に起因するか、または、アンチセンス二重領域またはセンス二重領域のいずれかに、出っ張りが作られるように対応するヌクレオチドが存在しないためかのいずれかである。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（センス二重領域に対して塩基対合しない１、２、３、４および５からなる群より選択されるいくつかのヌクレオチドを有するアンチセンス二重領域を含む）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、低減させることが可能であり、ここで、前記アンチセンス二重領域の全ヌクレオチドは、前記センス二重領域の全ヌクレオチドと塩基対合する。
別の実施態様では、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチは、センス鎖またはセンスストレッチに対して塩基対合しない１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかのヌクレオチドを有し、ここで、前記アンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。相補性の不在は、塩基間の相補性の不在に起因するか、または、アンチセンス鎖、またはアンチセンスストレッチ、またはセンス鎖、またはセンスストレッチのいずれかに、対応するヌクレオチドが存在しないためかのいずれかである。対応するヌクレオチドの不在は、アンチセンス鎖、またはアンチセンスストレッチ、またはセンス鎖、またはセンスストレッチのいずれかにおいて、一本鎖突出または出っ張り（二重領域内の場合）のいずれかを生じる。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（センス鎖またはセンスストレッチに対して塩基対合しない１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかのヌクレオチドを有するアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチを含む）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、低減させることが可能であり、ここで、前記アンチセンス鎖または前記アンチセンスストレッチの全ヌクレオチドは、センス鎖またはセンスストレッチの全ヌクレオチドに対して相補である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（標的配列に対して不一致である、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかのヌクレオチドを有するアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチを含む）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、低減させることが可能であり、ここで、前記アンチセンス鎖または前記アンチセンス鎖の全ヌクレオチドは、前記センス鎖または前記センスストレッチの全ヌクレオチドに対して相補である。別の実施態様では、不一致であるヌクレオチドの全ては二重領域の外側である。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域は、センス二重領域に対して塩基対合しない１、２、３、４または５から選択されるいくつかのヌクレオチドを有し、ここで、前記アンチセンス二重領域を含むｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。相補性の不在は、塩基間の相補性の不在に起因するか、または、アンチセンス二重領域またはセンス二重領域のいずれかにおいて出っ張りが作られるように、アンチセンス二重領域またはセンス二重領域のいずれかにおいて対応するヌクレオチドが存在しないためかのいずれかである。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（センス二重領域に対して塩基対合しない１、２、３、４および５からなる群より選択されるいくつかのヌクレオチドを有するアンチセンス二重領域を含む）は、比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させることが可能であり、ここで、前記アンチセンス二重領域の全ヌクレオチドは、前記センス二重領域の全ヌクレオチドに対して相補である。
別の実施態様では、アンチセンス鎖は、標的配列に対して塩基対合しない１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかのヌクレオチドを有し、ここで、前記アンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。相補性の不在は、塩基間の相補性の不在に起因するか、または、アンチセンス鎖、またはアンチセンスストレッチ、または標的配列のいずれかにおいて、対応するヌクレオチドが存在しないためかのいずれかである。対応するヌクレオチドの不在は、アンチセンス鎖、またはアンチセンスストレッチ、または標的配列のいずれかにおいて、出っ張りをもたらす。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（標的配列に対して塩基対合しない１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかのヌクレオチドを有するアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチを含む）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、低減させることが可能であり、ここで、前記アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの全ヌクレオチドは、前記標的配列の全ヌクレオチドに対して相補である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（標的配列に対して不一致である１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかのヌクレオチドを有するアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチを含む）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％または７５％、低減させることが可能であり、ここで、前記アンチセンス鎖または前記アンチセンスストレッチの全ヌクレオチドは、前記標的配列の全ヌクレオチドに対して相補である。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域と、センス二重領域およびｓｉＲＮＡの標的配列の両方との間の相補性は、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域または標的配列が、生理学的条件（生理学的バッファー中３７℃）下で、互いにハイブリダイズするようなものであり、ｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。一実施態様では、生理学的条件下でセンス二重領域および標的配列にハイブリダイズするアンチセンス二重領域を含むｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと標的配列との間に完全な相補性を有する比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、低減させることが可能である。
別の態様では、ｓｉＲＮＡのセンス二重領域とアンチセンス二重領域との間の相補性は、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域が、以下の条件下：４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ、７０℃でハイブリダイズするようなものであり、および、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ、７０℃の条件下で互いにハイブリダイズするアンチセンス二重領域およびセンス二重領域を含む）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、アンチセンス二重領域とセンス二重領域との間に完全な相補性を有する比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、低減させることが可能である。
別の実施態様では、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと標的配列との間の相補性は、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチおよび標的配列が、以下の条件下：４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ、７０℃でハイブリダイズするようなものであり、ここで、ｓｉＲＮＡは、Ｎｏｔｃｈ １の発現を低減させるために適切である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ（以下の条件下：４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ、７０°Ｃで標的配列にハイブリダイズするアンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチを含む）は、Ｎｏｔｃｈ １の発現を、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチと標的配列との間に完全な相補性を有する比較ｓｉＲＮＡの少なくとも２５％、５０％、７５％、低減させることが可能である。
長さ：ＲＮＡ干渉は、数ダースまたは数百の塩基対を含む長い核酸分子を用いて見られるが、より短いＲＮＡｉ分子が一般に好ましい。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域の長さは、約１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４の塩基対からなる群より選択される。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域の長さは、約１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４の連続した塩基対からなる群より選択される。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域の長さは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５の塩基対からなる群より選択される。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域の長さは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５の連続した塩基対からなる群より選択される。
一実施態様では、アンチセンス鎖の長さは、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、アンチセンス鎖の長さは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。
一実施態様では、アンチセンスストレッチの長さは、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、アンチセンスストレッチの長さは、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。
一実施態様では、センス鎖の長さは、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、センス鎖の長さは、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。
一実施態様では、センスストレッチの長さは、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、センスストレッチの長さは、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。
一実施態様では、アンチセンス鎖の長さおよびセンス鎖の長さは、独立に、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、アンチセンス鎖の長さおよびセンス鎖の長さは、独立に、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は長さが等しい。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は長さが等しく、ここで長さは、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。
一実施態様では、アンチセンスストレッチの長さおよびセンスストレッチの長さは、独立に、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、アンチセンスストレッチの長さおよびセンスストレッチの長さは、独立に、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。一実施態様では、アンチセンスストレッチおよびセンスストレッチは長さが等しい。別の実施態様では、アンチセンスストレッチおよびセンスストレッチは長さが等しく、ここで長さは、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択される。
一実施態様では、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの長さは、約１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチは、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの長さは、約１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチは、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、センス鎖またはセンスストレッチの長さは、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、センス鎖またはセンスストレッチは、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、センス鎖またはセンスストレッチの長さは、約１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、センス鎖は、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの長さ、および、センス鎖またはセンスストレッチの長さは、独立に、約１３〜３５、１６〜３５、１６〜３０、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチは、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センス鎖またはセンスストレッチは、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、アンチセンス鎖の長さおよびセンス鎖の長さは、独立に、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンス鎖は、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号９または３のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、アンチセンスストレッチの長さおよびセンスストレッチの長さは、独立に、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンスストレッチは、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センスストレッチは、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は長さが等しく、ここで、アンチセンス鎖は、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号９または３のヌクレオチド配列を含む。
一実施態様では、アンチセンスストレッチおよびセンスストレッチは長さが等しく、ここで、アンチセンスストレッチは、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センスストレッチは、配列番号９または３のヌクレオチド配列を含む。
別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は長さが等しく、ここで長さは、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンス鎖は、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
別の実施態様では、アンチセンスストレッチおよびセンスストレッチは長さが等しく、ここで長さは、１７〜３５、１７〜３０、１７〜２５、１７〜２４、１８〜２９、１８〜２５、１８〜２４、１８〜２３、１９〜２５、１９〜２４、１９〜２３、２０〜２５、２０〜２４、２１〜２５および２１〜２４のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンスストレッチは、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センスストレッチは、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は長さが等しく、ここで長さは、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンス鎖は、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
別の実施態様では、アンチセンスストレッチおよびセンスストレッチは長さが等しく、ここで長さは、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のヌクレオチドからなる群より選択され、ここで、アンチセンスストレッチは、配列番号８または配列番号１のヌクレオチド配列を含み、センスストレッチは、配列番号９または配列番号３のヌクレオチド配列を含む。
特定の実施態様は、配列番号８および配列番号９；配列番号１および配列番号３；配列番号４および配列番号５；配列番号６および配列番号７；および配列番号１０および配列番号１１により特定される、アンチセンスおよびセンスの鎖の組み合わせを提供する。
特定の実施態様は、配列番号８および配列番号９；配列番号１および配列番号３；配列番号４および配列番号５；配列番号６および配列番号７；および配列番号１０および配列番号１１により特定される、アンチセンスおよびセンスのストレッチの組み合わせを提供する。
末端（突出および平滑末端）：本発明のｓｉＲＮＡは、突出を含んでよく、または平滑末端であってよい。本明細書において用いられる「突出」は、当分野における、その正常および慣習の意味を有し、すなわち、二本鎖核酸において、相補の鎖またはストレッチの末端ヌクレオチドを超えて伸びる、核酸の一本鎖部分である。用語「平滑末端」は、末端ヌクレオチド（単数または複数）が塩基対合するかにかかわらず、両方の鎖またはストレッチが同じ位置で終わる二本鎖核酸を含む。一実施態様では、平滑末端における、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチおよびセンス鎖またはセンスストレッチの末端ヌクレオチドは、塩基対合する。別の実施態様では、平滑末端における、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチおよびセンス鎖またはセンスストレッチの末端ヌクレオチドは、対合しない。別の実施態様では、平滑末端における、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチおよびセンス鎖またはセンスストレッチの末端の２つのヌクレオチドは、塩基対合する。別の実施態様では、平滑末端における、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチおよびセンス鎖またはセンスストレッチの末端の２つのヌクレオチドは、対合しない。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、一方の末端に突出を有し、逆側に平滑末端を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、両末端に突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、両末端において平滑末端である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、片方の末端において平滑末端である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの５’−末端、および、センス鎖またはセンスストレッチの３’−末端が、末端において、平滑末端である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの３’−末端、および、センス鎖またはセンスストレッチの５’−末端が、末端において、平滑末端である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、両方の末端において、平滑末端である。
別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、３’−または５’−末端に突出を含む。一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチに３’−突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、センス鎖またはセンスストレッチに３’−突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチに５’−突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、センス鎖またはセンスストレッチに５’−突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの５’−末端および３’−末端の両方に突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、センス鎖またはセンスストレッチの５’−末端および３’−末端の両方に突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチに５’突出を有し、および、センス鎖またはセンスストレッチに３’突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチに３’突出を有し、および、センス鎖またはセンスストレッチに５’突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチに３’突出を有し、および、センス鎖またはセンスストレッチに３’突出を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチに５’突出を有し、および、センス鎖またはセンス鎖に５’突出を有する。
一実施態様では、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの３’−末端における突出は、１、２、３、４および５個のヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する。一実施態様では、センス鎖またはセンスストレッチの３’−末端における突出は、１、２、３、４および５個のヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する。一実施態様では、アンチセンス鎖またはアンチセンスストレッチの５’−末端における突出は、１、２、３、４および５個のヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する。一実施態様では、センス鎖またはセンスストレッチの５’−末端における突出は、１、２、３、４および５個のヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する。
修飾：別の態様は、ｓｉＲＮＡの修飾に関し、および、それに従い、本発明の核酸分子は、以下に概説されるように修飾され得る。本明細書に開示される各々および任意の修飾およびパターン、および、そのような修飾およびパターンに関する本明細書の任意の開示（特にｓｉＲＮＡに関する）もまた、適用され得て、したがって、本発明の核酸分子に関連しておよび対して、理解され得ることは、本発明の範囲内である。また、アンチセンス鎖および／またはセンス鎖に対して言及される限りにおいて、特に、アンチセンス鎖および／またはセンス鎖の修飾およびそのようなアンチセンス鎖および／またはセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する場合、そのような開示は、特に、アンチセンスストレッチおよび／またはセンスストレッチの修飾およびそのようなアンチセンスストレッチおよび／またはセンスストレッチを形成するヌクレオチドに関する場合、アンチセンスストレッチおよび／またはセンスストレッチに同様に当てはまることも、本発明の範囲内である。
本発明に係るｓｉＲＮＡは、リボ核酸または修飾リボ核酸である。本発明のｓｉＲＮＡの化学修飾は、限定されないが、インビトロおよびインビボの安定性および天然のＲＮＡ分子に本来備わっている生物学的利用能を含む、潜在的制限を克服する有力なツールを提供する。化学修飾されたｓｉＲＮＡは、ヒトでのインターフェロン活性を活性化する可能性を最小限化することもできる。化学修飾は、標的細胞への、ｓｉＲＮＡの機能的送達をさらに高めることができる。本発明の修飾ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖またはセンス鎖のいずれかまたは両方の、１つまたは複数の化学修飾リボヌクレオチドを含んでよい。リボヌクレオチドは、塩基、糖またはリン酸部分の化学修飾を含んでよい。
塩基部分に対する修飾：第二の態様は、塩基部分に対する修飾に関する。本発明のｓｉＲＮＡの１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾塩基を含んでよい。「修飾塩基」は、１’位における、アデニン、グアニン、シトシンまたはウラシル以外のヌクレオチド塩基を意味する。
一態様では、ｓｉＲＮＡは、修飾塩基を含む少なくとも１つのヌクレオチドを含む。一実施態様では、修飾塩基はアンチセンス鎖上にある。別の実施態様では、修飾塩基はセンス鎖上にある。別の実施態様では、修飾塩基は、二重領域内にある。別の実施態様では、修飾塩基は、二重領域の外側、すなわち一本鎖領域内にある。別の実施態様では、修飾塩基はアンチセンス鎖上にあり、および、二重領域の外側にある。別の実施態様では、修飾塩基はセンス鎖上にあり、および、二重領域の外側にある。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、修飾塩基を有するヌクレオチドである。別の実施態様では、センス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、修飾塩基を有するヌクレオチドである。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、修飾塩基を有するヌクレオチドである。別の実施態様では、センス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、修飾塩基を有するヌクレオチドである。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約２〜４個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約４〜６個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約６〜８個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約８〜１０個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約１０〜１２個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約１２〜１４個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約１４〜１６個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約１６〜１８個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約１８〜２０個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約２０〜２２個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約２２〜２４個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約２４〜２６個の修飾塩基を有する。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、約２６〜２８個の修飾塩基を有する。各場合において、前記修飾塩基を含むｓｉＲＮＡは、同一のｓｉＲＮＡであるが前記修飾塩基を有さないものと比較して、その活性の少なくとも５０％維持する。
一実施態様では、修飾塩基はプリンである。別の実施態様では、修飾塩基はピリミジンである。別の実施態様では、プリンの少なくとも半分が修飾されている。別の実施態様では、ピリミジンの少なくとも半分が修飾されている。別の実施態様では、全てのプリンが修飾されている。別の実施態様では、全てのピリミジンが修飾されている。
別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、修飾塩基を含むヌクレオチドを含み、塩基は、２−アミノアデノシン、２，６−ジアミノプリン、イノシン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−アルキルシチジン（例えば、５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（例えば、リボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば、５−ブロモウリジン）、６−アザピリミジン、６−アルキルピリミジン（例えば６−メチルウリジン）、プロピン、キューオシン（ｑｕｅｓｏｓｉｎｅ）、２−チオウリジン、４−チオウリジン、ワイブトシン（ｗｙｂｕｔｏｓｉｎｅ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５’−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、１−メチルアデノシン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアノシン、３−メチルシチジン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、７−メチルグアノシン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メチルカルボニルメチルウリジン、５−メチルオキシウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、ウリジン−５−オキシ酢酸および２−チオシチジンからなる群より選択される。
別の態様では、本発明のｓｉＲＮＡは、脱塩基ヌクレオチドを含む。本明細書において用いられる用語「脱塩基」は、塩基を欠く部分、または、１’位の塩基の代わりに他の化学基（例えば３’，３’−結合または５’，５’−結合デオキシ脱塩基リボース誘導体）を有する部分を指す。本明細書において用いられる、修飾塩基を有するヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオチドを含まない。一態様では、ｓｉＲＮＡは、少なくとも１つの脱塩基ヌクレオチドを含む。一実施態様では、脱塩基ヌクレオチドは、アンチセンス鎖上にある。別の実施態様では、脱塩基ヌクレオチドは、センス鎖上にある。別の実施態様では、脱塩基ヌクレオチドは、二重領域内にある、別の実施態様では、脱塩基ヌクレオチドは、二重領域の外側にある。別の実施態様では、脱塩基ヌクレオチドは、アンチセンス鎖上にあり、および、二重領域の外側にある。別の実施態様では、脱塩基ヌクレオチドは、センス鎖上にあり、および、二重領域の外側にある。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオチドである。別の実施態様では、センス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオチドである。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオチドである。別の実施態様では、センス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、脱塩基ヌクレオチドである。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１、２、３、４、５および６からなる群より選択されるいくつかの脱塩基ヌクレオチドを有する。
糖部分に対する修飾：別の第二の態様は、糖部分に対する修飾に関する。本発明のｓｉＲＮＡの１つまたは複数のヌクレオチドは、修飾リボース部分を含んでよい。
２’−ＯＨが置換されている２’位における修飾は、アルキル、置換アルキル、アルカリル−、アラルキル−、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＣＮ、−Ｏ−アルキル、−Ｓ−アルキル、ＨＳ−アルキル−Ｏ、−Ｏ−アルケニル、−Ｓ−アルケニル、−Ｎ−アルケニル、−ＳＯ−アルキル、−アルキル−ＯＳＨ、−アルキル−ＯＨ、−Ｏ−アルキル−ＯＨ、−Ｏ−アルキル−ＳＨ、−Ｓ−アルキル−ＯＨ、−Ｓ−アルキル−ＳＨ、−アルキル−Ｓ−アルキル、−アルキル−Ｏ−アルキル、−ＯＮＯ２、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ−、アミノアルキル−、アミノアルコキシ、アミノ酸、アミノアシル−、−ＯＮＨ２、−Ｏ−アミノアルキル、−Ｏ−アミノ酸、−Ｏ−アミノアシル、ヘテロ環アルキル−、ヘテロ環アルカリル−、アミノアルキルアミノ−、ポリアルキルアミノ−、置換シリル−、メトキシエチル−（ＭＯＥ）、アルケニルおよびアルキニルからなる群より選択される限定しない例を含む。２’ヒドロキシルがメチレン架橋などにより同一のリボース糖の４’炭素に連結されている「ロックド」核酸（ＬＮＡ）は、本発明の２’修飾としてさらに含まれる。好ましい置換基は、２’−メトキシエチル、２’−ＯＣＨ３、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｃ−アリル、および２’−フルオロである。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１〜５個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、５〜１０個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１５〜２０個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２０〜２５個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２５〜３０個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、アンチセンス鎖は、１〜２個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約２〜４個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約４〜６個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約６〜８個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約８〜１０個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１０〜１２個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１２〜１４個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１４〜１６個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１６〜１８個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１８〜２０個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約２２〜２４個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約２４〜２６個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、センス鎖は、１〜２個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約２〜４個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約４〜６個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約６〜８個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約８〜１０個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１０〜１２個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１２〜１４個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１４〜１６個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１６〜１８個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１８〜２０個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約２２〜２４個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約２４〜２６個の２’−修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１〜５個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、５〜１０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１５〜２０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２０〜２５個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２５〜３０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、アンチセンス鎖は、１〜２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約２〜４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約４〜６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約６〜８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約８〜１０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１０〜１２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１２〜１４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１４〜１６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１６〜１８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約１８〜２０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約２２〜２４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス鎖は、約２４〜２６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、センス鎖は、１〜２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約２〜４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約４〜６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約６〜８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約８〜１０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１０〜１２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１２〜１４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１４〜１６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１６〜１８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約１８〜２０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約２２〜２４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、センス鎖は、約２４〜２６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域は、１〜５個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域は、５〜１０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域は、１５〜２０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域は、２０〜２５個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡ二重領域は、２５〜３０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、アンチセンス二重領域は、１〜２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約２〜４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約４〜６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約６〜８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約８〜１０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約１０〜１２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約１２〜１４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約１４〜１６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約１６〜１８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約１８〜２０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約２２〜２４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。一実施態様では、アンチセンス二重領域は、約２４〜２６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、センス二重領域は、１〜２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約２〜４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約４〜６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約６〜８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約８〜１０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約１０〜１２個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約１２〜１４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約１４〜１６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約１６〜１８個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約１８〜２０個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約２２〜２４個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、センス二重領域は、約２４〜２６個の２’−ＯＣＨ３修飾ヌクレオチドを含む。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１９ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および１９ヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７および１９において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド２、４、６、８、１０、１２、１４、１６および１８において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２０ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および２０ヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７および１９において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８および２０において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２１ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および２１ヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９および２１において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８および２０において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２２ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および２２ヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９および２１において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０および２２において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、２３ヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および２３ヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１および２３において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０および２２において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。
別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１８〜２３個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および１８〜２３個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド３、５、７、９、１１、１３、１５および１７において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド４、６、８、１０、１２、１４および１６において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１８〜２３個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および１８〜２３個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド５、７、９、１１、１３および１５において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド６、８、１０、１２および１４において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１８〜２３個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および１８〜２３個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド７、９、１１、１３において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド８、１０および１２において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１８〜２３個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および１８〜２３個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド７、９および１１において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド８、１０および１２において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられていて、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１８〜２３個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および１８〜２３個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド７および９において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド８および１０において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡは、１８〜２３個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖および１８〜２３個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド９および１１において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、前記センス鎖は、ヌクレオチド８および１０において２’−ＯＣＨ３修飾を含み、ここで、前記アンチセンス鎖は、５’から−３’に番号が付けられ、前記センス鎖は、３’から−５’に番号が付けられている。
さらなる実施態様では、ｓｉＲＮＡは以下のヌクレオチド配列を含み、ここで、配列は、大文字で示されるヌクレオチド上に、２’−ＯＣＨ３修飾を含む：
別の実施態様では、アンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個の２’−デオキシヌクレオチドを含む。
別の実施態様では、センス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個の２’−デオキシヌクレオチドを含む。
別の実施態様では、アンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個の２’−フルオロヌクレオチドを含む。
別の実施態様では、センス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個の２’−フルオロヌクレオチドを含む。
別の実施態様では、アンチセンス鎖内のピリミジンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス鎖内のプリンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス鎖内のピリミジンヌクレオチドは、２’−デオキシピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス鎖内のプリンヌクレオチドは、２’−デオキシプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス鎖内のピリミジンヌクレオチドは、２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス鎖内のプリンヌクレオチドは、２’−フルオロプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス鎖内のピリミジンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス鎖内のプリンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス鎖内のピリミジンヌクレオチドは、２’−デオキシピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス鎖内のプリンヌクレオチドは、２’−デオキシプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス鎖内のピリミジンヌクレオチドは、２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス鎖内のプリンヌクレオチドは、２’−フルオロプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域内のプリンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−デオキシピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域内のプリンヌクレオチドは、２’−デオキシプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域内のプリンヌクレオチドは、２’−フルオロプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重領域内のプリンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−デオキシピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重領域内のプリンヌクレオチドは、２’−デオキシプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重領域内のプリンヌクレオチドは、２’−フルオロプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重隣接領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重隣接領域内のプリンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重隣接領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−デオキシピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重隣接領域内のプリンヌクレオチドは、２’−デオキシプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重隣接領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、アンチセンス二重隣接領域内のプリンヌクレオチドは、２’−フルオロプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重隣接領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重隣接領域内のプリンヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重隣接領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−デオキシピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重隣接領域内のプリンヌクレオチドは、２’−デオキシプリンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重隣接領域内のピリミジンヌクレオチドは、２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。
別の実施態様では、センス二重隣接領域内のプリンヌクレオチドは、２’−フルオロプリンヌクレオチドである。
パターン：本明細書において提供されるパターンに関する任意の開示（特にアンチセンス鎖に関する）は、アンチセンスストレッチに同様に当てはまり、本明細書において提供されるパターンに関する任意の開示（特にセンス鎖に関する）は、センスストレッチに同様に当てはまることは、本発明の範囲内である。
一実施態様では、アンチセンス二重領域は、複数の修飾ヌクレオチドの基（本明細書において「修飾基」と呼ぶ）を含み、各修飾基は、１つまたは複数の同様に修飾されたヌクレオチドからなり、各修飾基は、ヌクレオチドの第二の基（本明細書において「隣接基」と呼ぶ）が片側または両側に隣接していて、それぞれの前記隣接基は、修飾されていないか、または、前記修飾基のヌクレオチドとは異なる方法で修飾されているかのいずれかである１つまたは複数のヌクレオチドからなる。一実施態様では、アンチセンス二重領域内の各修飾基は同一であり、すなわち、各修飾基は、等しい数の同様に修飾されたヌクレオチドからなる。別の実施態様では、各隣接基は、等しい数のヌクレオチドを有する。別の実施態様では、各隣接基は同一である。別の実施態様では、アンチセンス二重領域内の前記修飾基のヌクレオチドは、修飾塩基を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾されたリン酸骨格を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾された２’位を含む。
別の態様では、センス二重領域は、複数の修飾基の基を含み、各修飾基は、１つまたは複数の同様に修飾されたヌクレオチドからなり、各修飾基は、隣接基が片側または両側に隣接していて、それぞれの前記隣接基は、修飾されていないか、または、前記修飾基のヌクレオチドとは異なる方法で修飾されているかのいずれかである１つまたは複数のヌクレオチドからなる。一実施態様では、センス二重領域内の各修飾基は同一である。別の実施態様では、各隣接基は、等しい数のヌクレオチドを有する。別の実施態様では、各隣接基は同一である。別の実施態様では、センス二重領域内の前記修飾基のヌクレオチドは、修飾塩基を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾されたリン酸骨格を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾された２’位を含む。
別の態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域は、それぞれ、複数の修飾基を含み、各修飾基は、１つまたは複数の同様に修飾されたヌクレオチドからなり、各修飾基は、隣接基が片側または両側に隣接していて、それぞれの前記隣接基は、修飾されていないか、または、前記修飾基のヌクレオチドとは異なる方法で修飾されているかのいずれかである１つまたは複数のヌクレオチドからなる。一実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域内の各修飾基は、同一である。別の実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域内の各隣接基は、等しい数のヌクレオチドを有する。別の実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域内の各隣接基は、同一である。別の実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、同一の修飾基および同一の隣接基を含む。別の実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、修飾塩基を含む。別の実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、修飾されたリン酸骨格を含む。別の実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、修飾された２’位を含む。
一態様では、アンチセンス鎖は、複数の修飾ヌクレオチドの基（本明細書において「修飾基」と呼ぶ）を含み、各修飾基は、１つまたは複数の同様に修飾されたヌクレオチドからなり、各修飾基は、ヌクレオチドの第二の基（本明細書において「隣接基」と呼ぶ）が片側または両側に隣接していて、それぞれの前記隣接基は、修飾されていないか、または、前記修飾基のヌクレオチドとは異なる方法で修飾されているかのいずれかである、１つまたは複数のヌクレオチドからなる。一実施態様では、アンチセンス鎖内の各修飾基は同一であり、すなわち、各修飾基は、等しい数の同様に修飾されたヌクレオチドからなる。別の実施態様では、各隣接基は、等しい数のヌクレオチドを有する。別の実施態様では、各隣接基は同一である。別の実施態様では、アンチセンス鎖内の前記修飾基のヌクレオチドは、修飾塩基を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾されたリン酸骨格を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾された２’位を含む。
別の態様では、センス鎖は、複数の修飾基の基を含み、各修飾基は、１つまたは複数の同様に修飾されたヌクレオチドからなり、各修飾基は、隣接基が片側または両側に隣接していて、それぞれの前記隣接基は、修飾されていないか、または、前記修飾基のヌクレオチドとは異なる方法で修飾されているかのいずれかである１つまたは複数のヌクレオチドからなる。一実施態様では、センス鎖内の各修飾基は同一である。別の実施態様では、各隣接基は、等しい数のヌクレオチドを有する。別の実施態様では、各隣接基は同一である。別の実施態様では、センス鎖内の前記修飾基のヌクレオチドは、修飾塩基を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾されたリン酸骨格を含む。別の実施態様では、前記修飾基のヌクレオチドは、修飾された２’位を含む。
別の態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、それぞれ、複数の修飾基を含み、各修飾基は、１つまたは複数の同様に修飾されたヌクレオチドからなり、各修飾基は、隣接基が片側または両側に隣接していて、それぞれの前記隣接基は、修飾されていないか、または、前記修飾基のヌクレオチドとは異なる方法で修飾されているかのいずれかである１つまたは複数のヌクレオチドからなる。一実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖内の各修飾基は、同一である。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖内の各隣接基は、それぞれ、等しい数のヌクレオチドを有する。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖内の各隣接基は、同一である。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、同一の修飾基および同一の隣接基を含む。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、修飾塩基を含む。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、修飾されたリン酸骨格を含む。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖内の前記修飾基のヌクレオチドは、それぞれ、修飾された２’位を含む。
別の態様では、修飾基および隣接基は、アンチセンス鎖上に規則的なパターンを形成する。別の態様では、修飾基および隣接基は、センス鎖上に規則的なパターンを形成する。一実施態様では、修飾基および隣接基は、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方に、規則的なパターンを形成する。別の実施態様では、修飾基および隣接基は、アンチセンス二重領域上に、規則的なパターンを形成する。別の態様では、修飾基および隣接基は、センス二重領域上に、規則的なパターンを形成する。一実施態様では、修飾基および隣接基は、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域の両方に、規則的なパターンを形成する。
別の態様では、パターンは、空間的または位置的パターンである。空間的または位置的パターンは、（ａ）ヌクレオチド（単数または複数）が、二本鎖部分のヌクレオチド配列内のそれらの位置に応じて修飾されることを意味する。したがって、修飾されるヌクレオチドがピリミジンであるか、またはプリンであるかどうかは、問題とならない。むしろ、修飾ヌクレオチドの位置は、以下に依存する：（ａ）核酸の鎖上の、その番号が付けられた位置、ここでヌクレオチドは５’−末端から３’−末端に番号が付けられていて、鎖の５’−末端ヌクレオチドが１位である（アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方とも、それらのそれぞれの５’−末端ヌクレオチドから番号が付けられている）、または、（ｂ）隣接基に対する修飾基の位置。したがって、本実施態様によれば、修飾される配列にかかわらず、修飾パターンは常に同一である。
別の実施態様では、アンチセンス鎖上の修飾基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。別の実施態様では、センス鎖上の修飾基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。別の実施態様では、核酸のアンチセンス鎖上の隣接基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。別の実施態様では、核酸のセンス鎖上の隣接基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。一実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖のいずれかまたは両方における、修飾基の数および隣接基の数は同一である。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域上の修飾基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。別の実施態様では、センス二重領域上の修飾基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。別の実施態様では、核酸のアンチセンス二重領域上の隣接基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４である。別の実施態様では、核酸のセンス二重領域上の隣接基の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。一実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域のいずれかまたは両方における、修飾基の数および隣接基の数は同一である。
一実施態様では、鎖上または二重領域上の、修飾基の数および隣接基の数は同一である。別の実施態様では、鎖上または二重領域上の、修飾基の数および隣接基の数は同一であり、ここで数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。
別の実施態様では、修飾基内のヌクレオチドの数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。別の実施態様では、隣接基内のヌクレオチドの数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４から選択される。
一実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方における各修飾基は同一である。一実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域の両方における各修飾基は同一である。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方における各修飾基および各隣接基は同一である。一実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域の両方における各修飾基および各隣接基は同一である。
一実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方における、各修飾基、各修飾基の位置、各隣接基および各隣接基の位置は、同一である。一実施態様では、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域の両方における、各修飾基、各修飾基の位置、各隣接基および各隣接基の位置は、同一である。別の実施態様では、アンチセンス鎖上の修飾基は、センス鎖上の修飾基と相補である（アンチセンス鎖およびセンス鎖における修飾基は、互いに向かって完全に並べられる）。別の実施態様では、アンチセンス鎖上の各修飾基がセンス鎖上の各修飾基と塩基対合するように、修飾基内に不一致が存在しない。別の実施態様では、センス鎖上の各修飾基は、アンチセンス鎖上の修飾基に対して、１、２、３、４または５個のヌクレオチド分、シフトされている。例えば、センス鎖上の各修飾基が１個のヌクレオチド分、シフトされ、修飾基がアンチセンス鎖上の１位で始まる場合、センス鎖上の修飾基は２位で始まる。別の実施態様では、アンチセンス鎖の修飾基は、センス鎖の修飾基とオーバーラップせず、すなわち、アンチセンス鎖上の修飾基のいずれのヌクレオチドも、センス鎖上の修飾基のヌクレオチドと塩基対合しない。
一実施態様では、核酸の鎖の末端におけるデオキシリボヌクレオチドは、修飾基の位置を決定する際に考慮されず、すなわち、位置的番号付けは、最初のリボヌクレオチドまたは修飾リボヌクレオチドで始まる。別の実施態様では、核酸の鎖の末端における脱塩基ヌクレオチドは、修飾基の位置を決定する際に考慮されない。
一態様では、修飾基は、アンチセンス鎖およびセンス鎖のいずれかまたは両方の５’−末端ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、隣接基は、アンチセンス鎖およびセンス鎖のいずれかまたは両方の５’−末端ヌクレオチドを含む。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖のいずれかまたは両方の５’−末端ヌクレオチドは、修飾されていない。別の実施態様では、修飾基は、アンチセンス二重領域およびセンス二重領域のいずれかまたは両方の５’−ｍｏｓｔヌクレオチドを含む。別の実施態様では、隣接基は、アンチセンス二重領域またはセンス二重領域のいずれかまたは両方の５’−ｍｏｓｔヌクレオチドを含む。別の実施態様では、アンチセンス二重領域またはセンス二重領域のいずれかまたは両方の５’−ｍｏｓｔヌクレオチドは、修飾されていない。別の実施態様では、アンチセンス鎖の１０位のヌクレオチドは修飾されていない。別の実施態様では、センス鎖の１０位のヌクレオチドは修飾されている。別の実施態様では、修飾基は、センス鎖の１０位のヌクレオチドを含む。
一実施態様では、２’位における修飾は、アミノ、フルオロ、メトキシ、アルコキシおよびＣ１−Ｃ３−アルキルを含む群から選択される。別の実施態様では、修飾は２’−Ｏ−メチルである。
別の態様では、各修飾基は１つのヌクレオチドからなり、各隣接基は１つのヌクレオチドからなる。一実施態様では、アンチセンス鎖上の各修飾基は、センス鎖上の隣接基と並べられる。
別の態様では、各修飾基は、１つの２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドからなり、各隣接基は、１つのヌクレオチドからなる。一実施態様では、各隣接基は、１つの未修飾ヌクレオチドからなる。一実施態様では、各隣接基は、１つの２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドからなる。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方における各修飾基は、１つの２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドからなり、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方における各隣接基は、１つのヌクレオチドからなり、ここで、一方の鎖上の修飾基は、もう一方の鎖上の別の修飾基と、並べられないか、または、並べられず塩基対合もしないかの、いずれかであり、および、一方の鎖上の隣接基は、もう一方の鎖上の隣接基と、並べられないか、または、並べられず塩基対合もしないかの、いずれかである。別の実施態様では、任意の随意的突出を除いて、各鎖上の各修飾基は、もう一方の鎖上の隣接基と、並べられるか、または、並べられて塩基対合もするかの、いずれかである。一実施態様では、隣接基は修飾されない。別の実施態様では、アンチセンス鎖上の１位のヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾される。別の実施態様では、アンチセンス二重領域の５’−ｍｏｓｔヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾される。
位置的修飾スキームは、国際特許出願ＷＯ２００４／０１５１０７に記載され、その全体で参照により援用される。
リン酸骨格に対する修飾：
本明細書において提供されるリン酸骨格に対する修飾に関する任意の開示（特にアンチセンス鎖またはそのようなアンチセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、アンチセンスストレッチまたはそのようなアンチセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまり、本明細書において提供されるリン酸骨格に対する修飾に関する任意の開示（特にセンス鎖またはそのようなセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、センスストレッチまたはそのようなセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまることは、本発明の範囲内である。
一実施態様では、本発明の核酸分子および本発明のｓｉＲＮＡは、特に、リン酸骨格に対する１個または数個の修飾を、持ち、有し、または示し、ここで、そのような修飾は、好ましくは本明細書に記載されるものである。
本発明のｓｉＲＮＡのヌクレオチドの全てまたは一部は、未修飾核酸に見られるように、ホスホジエステル結合を介して連結され得る。しかしながら、本発明のｓｉＲＮＡは、修飾されたホスホジエステル結合を含んでよい。アンチセンス鎖またはセンス鎖のいずれかのホスホジエステル結合は、修飾されて、窒素および硫黄からなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を独立に含み得る。一実施態様では、リボヌクレオチドを隣接リボヌクレオチドに連結するリン酸エステル基は、修飾基により置換される。一実施態様では、リン酸エステル基を置換する修飾基は、ホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｔｈｉｏａｔｅ）、メチルホスホネートまたはホスホロアミデート基からなる群より選択される。
一実施態様では、アンチセンス鎖の全てのヌクレオチドは、ホスホジエステル結合を介して連結されている。別の実施態様では、アンチセンス二重領域の全てのヌクレオチドは、ホスホジエステル結合を介して連結されている。別の実施態様では、センス鎖の全てのヌクレオチドは、ホスホジエステル結合を介して連結されている。別の実施態様では、センス二重領域の全てのヌクレオチドは、ホスホジエステル結合を介して連結されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかの修飾ホスホジエステル基を含む。別の実施態様では、アンチセンス二重領域は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかの修飾ホスホジエステル基を含む。別の実施態様では、センス鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかの修飾ホスホジエステル基を含む。別の実施態様では、センス二重領域は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０から選択されるいくつかの修飾ホスホジエステル基を含む。
別の実施態様では、アンチセンス二重領域、センス二重領域または突出（単数または複数）を形成する１つまたは複数のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して連結されている。好ましい実施態様では、突出を形成するヌクレオチドは、１つまたは複数のホスホロチオエート結合により、互いに連結している。
５’および３’末端修飾：
本明細書において提供される５’および３’末端修飾に関する任意の開示（特にアンチセンス鎖またはそのようなアンチセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、アンチセンスストレッチまたはそのようなアンチセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまり、本明細書において提供される５’および３’末端修飾の修飾に関する任意の開示（特にセンス鎖またはそのようなセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、センスストレッチまたはそのようなセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまることは、本発明の範囲内である。
一実施態様では、本発明の核酸分子および本発明のｓｉＲＮＡは、特に、５’および／または３’修飾を、持ち、有し、または示し、ここで、そのような修飾は、好ましくは本明細書に記載されるものである。
本発明のｓｉＲＮＡは、センスまたはアンチセンス鎖のいずれかまたは両方における末端５’−または３’−末端に、１つまたは複数の修飾ヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、非環状またはデオキシリボヌクレオチドを含む、核酸分子を含んでよい。一実施態様では、センスおよびアンチセンス鎖の両方の５’−および３’−末端ヌクレオチドは、修飾されていない。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、センス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、センス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドおよびセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドおよびセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドおよびセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドおよびセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端ヌクレオチドおよびセンス鎖の５’−および３’−末端ヌクレオチドの両方ともが、修飾されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−および３’−末端ヌクレオチドの両方とも、修飾されている。別の実施態様では、センス鎖の５’−および３’−末端ヌクレオチドの両方とも、修飾されている。
別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、リン酸化されている。別の実施態様では、センス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、リン酸化されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方とも、５’−末端ヌクレオチドがリン酸化されている。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドはリン酸化されていて、センス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、フリーのヒドロキシル基（５’−ＯＨ）を有する。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端ヌクレオチドはリン酸化されていて、センス鎖の５’−末端ヌクレオチドは、修飾されている。
５’−および３’−末端ヌクレオチドに対する修飾は、これらの末端ヌクレオチド上の５’位および３’位に制限されない。末端ヌクレオチドに対する修飾の例は、限定されないが、ビオチン、逆位（デオキシ）脱塩基、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ＣＮ、ＣＦ、メトキシ、イミダゾール、カルボキシレート（ｃａｂｏｘｙｌａｔｅ）、チオエート、Ｃ１−Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリルまたはアラルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ３；ＳＯ２ＣＨ３；ＯＮＯ２；ＮＯ２、Ｎ３；ヘテロ環アルキル；ヘテロ環アルカリル；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノまたは置換シリルを含み、とりわけ、例えば、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９９／５４４５９、欧州特許ＥＰ ０ ５８６ ５２０ Ｂ１またはＥＰ ０ ６１８ ９２５ Ｂ１に記載され、それら全体で参照により援用される。本明細書において用いられる「アルキル」は、Ｃ１−Ｃ１２−アルキルを意味し、「低級アルキル」は、Ｃ１−Ｃ６−アルキルを意味し、Ｃ１−、Ｃ２−、Ｃ３−、Ｃ４−、Ｃ５−およびＣ６−アルキルを含む。
別の態様では、アンチセンス鎖の５’−末端、センス鎖の５’−末端、アンチセンス鎖の３’−末端またはセンス鎖の３’−末端は、プロドラッグ部分に対して共有結合している。一実施態様では、当該部分はエンドソーム内で開裂される。別では、当該部分は細胞質内で開裂される。
異なる種類の末端修飾（単数または複数）を有する、本発明のｓｉＲＮＡの様々な、可能性のある非限定的な実施態様を、以下の表に示す。
本発明に係る干渉リボ核酸の様々な実施態様
別の実施態様では、アンチセンス鎖またはセンス鎖のいずれかまたは両方における、末端３’ヌクレオチドまたは２つの末端３’−ヌクレオチドは、２’−デオキシヌクレオチドである。別の実施態様では、２’−デオキシヌクレオチドは、２’−デオキシ−ピリミジンである。別の実施態様では、２’−デオキシヌクレオチドは、２’デオキシ−チミジンである。
ｓｈＲＮＡおよび連結ｓｉＲＮＡ：
本明細書において提供されるｓｈＲＮＡおよび連結ｓｉＲＮＡに関する任意の開示（特にアンチセンス鎖またはそのようなアンチセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、アンチセンスストレッチまたはそのようなアンチセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまり、本明細書において提供される５’および３’末端修飾の修飾に関する任意の開示（特にセンス鎖またはそのようなセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、センスストレッチまたはそのようなセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまることは、本発明の範囲内である。
一実施態様では、本発明の核酸分子および本発明のｓｉＲＮＡは、特に、ｓｈＲＮＡおよび／または連結ｓｉＲＮＡであり、ここで、そのようなｓｈＲＮＡおよび／または連結ｓｉＲＮＡは、好ましくは、本明細書に記載されるものである。
二本鎖構造は、２つの別個の鎖、すなわちアンチセンス鎖およびセンス鎖により形成されることは、本発明の範囲内である。しかしながら、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、互いに共有結合していることもまた、本発明の範囲内である。そのような結合は、アンチセンス鎖およびセンス鎖をそれぞれ形成する任意のヌクレオチド間で生じ得る。そのような結合は、共有結合または非共有結合により形成することができる。共有結合は、両方の鎖を、１回または数回、それぞれ１箇所または数箇所で、化合物（好ましくは、メチレンブルーおよび二官能性基を含む群より選択される）により、連結することにより形成され得る。そのような二官能性基は、好ましくは、ビス（２−クロロエチル）アミン、Ｎ−アセチル−Ｎ’−（ｐ−グリオキシルベンゾイル）シスタミン、４−チオウラシルおよびソラーレンを含む群より選択される。
一実施態様では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、ループ構造により連結される。別の実施態様では、ループ構造は、非核酸ポリマーからなる。別の実施態様では、非核酸ポリマーは、ポリエチレングリコールである。別の実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端は、センス鎖の３’−末端に連結される。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端は、センス鎖の５’−末端に連結される。
別の実施態様では、ループは核酸からなる。本明細書において用いられる、ロックド核酸（ＬＮＡ）（Ｅｌａｙａｄｉ ａｎｄ Ｃｏｒｅｙ（２００１）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ．２（４）：５５８−６１）およびペプチド核酸（ＰＮＡ）（Ｆａｓｅｂ Ｊ．（２０００）１４：１０４１−１０６０に概説される）は、核酸とみなされ、ループ形成ポリマーとしても用いられ得る。一実施態様では、核酸はリボ核酸である。一実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端は、センス鎖の３’−末端に連結される。別の実施態様では、アンチセンス鎖の３’−末端は、センス鎖の５’−末端に連結される。ループは、長さが最小で４個のヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログからなる。一実施態様では、ループは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個から選択されるヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログの長さからなる。一実施態様では、ループの長さは、ループ構造または同様の構造を介して折り返しが生じ得る方法で、２つの鎖が共有結合するのに十分である。リボ核酸構築物は、適切なベクター系の中に取り込まれてよい。好ましくは、ベクターは、ＲＮＡｉの発現のためのプロモーターを含む。好ましくは、それぞれのプロモーターはｐｏｌ ＩＩＩであり、より好ましくは、プロモーターは、Ｕ６、Ｈ１、７ＳＫプロモーターである（Ｇｏｏｄ ｅｔ ａｌ．（１９９７） Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４，４５−５４に記載される）。
別の実施態様では、本発明に係る核酸は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。一実施態様では、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、アンチセンス鎖およびセンス鎖のいずれかまたは両方の３’−末端または５’−末端から、５ヌクレオチド以内である。アンチセンス鎖は、約１個〜約５個のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み得る。
実施態様の組み合わせ：
本明細書において提供される実施態様の組み合わせに関する任意の開示（特にアンチセンス鎖またはそのようなアンチセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、アンチセンスストレッチまたはそのようなアンチセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまり、本明細書において提供される５’および３’末端修飾の修飾に関する任意の開示（特にセンス鎖またはそのようなセンス鎖を形成するヌクレオチドに関する）は、センスストレッチまたはそのようなセンスストレッチを形成するヌクレオチドに同様に当てはまることは、本発明の範囲内である。
一実施態様では、センス鎖の３’−末端における突出は、１、２、３、４および５個のヌクレオチドからなる長さから選択される。一実施態様では、アンチセンス鎖の５’−末端における突出は、１、２、３、４および５個のヌクレオチドからなる長さから選択される。一実施態様では、センス鎖の５’−末端における突出は、１、２、３、４および５個のヌクレオチドからなる長さから選択される。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡ分子は、両末端において平滑末端であり、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９個の連続したヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡ分子は、片方の末端において平滑末端であり、ｓｉＲＮＡ分子の二本鎖部分は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９個の連続したヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡ分子は両末端において突出を有し、ｓｉＲＮＡ分子の二本鎖部分は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９個の連続したヌクレオチドからなる群より選択される長さを有する。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡ分子は突出を含み、前記突出は、少なくとも１つのデオキシリボヌクレオチドを含む。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ分子は突出を含み、前記突出は、２つのデオキシリボヌクレオチドを含む。
一実施態様では、ｓｉＲＮＡ分子は、アンチセンス鎖の３’−末端およびセンス鎖の３’−末端において突出を有し、前記突出は、少なくとも１つのデオキシリボヌクレオチドを含む。一実施態様では、ｓｉＲＮＡ分子は、アンチセンス鎖の３’−末端およびセンス鎖の３’−末端において突出を有し、前記突出は、２つのデオキシリボヌクレオチドからなる。
突出を形成するヌクレオチド（単数または複数）は、（ａ）デゾキシリボヌクレオチド（単数または複数）、（ａ）リボヌクレオチド（単数または複数）、またはそれらの組み合わせであってよい。一実施態様では、アンチセンス鎖および／またはセンス鎖は、３’末端にＴＴジヌクレオチドを含む。
好ましい実施態様では、本明細書において用いられるｄＴは、デオキシリボヌクレオチド（すなわちＴ）を示し、それ以外ではＲＮＡであり、または、リボヌクレオチドからなる分子において、例えば、本明細書に示されるように修飾されてよい。
作成プロセス：本発明の核酸は、化学合成またはインビトロ（例えば、ランオフ転写）またはインビボのいずれかの核酸発現を含む、当分野における常法を用いて生産することができる。一実施態様では、ｓｉＲＮＡは、固相化学合成を用いて生産される。別の実施態様では、核酸は、発現ベクターを用いて生産される。一実施態様では、発現ベクターは、標的細胞において本発明の核酸を生産した。したがって、そのようなベクターは、薬物の製造のために用いることができる。本明細書に記載の核酸分子の合成のための方法は、当業者に公知である。そのような方法は、とりわけ、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２１１，３−１９，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，国際ＰＣＴ公報ＷＯ ９９／５４４５９，Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．， １９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３，２６７７−２６８４，Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４，５９，Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．，６１，３３−４５、および、Ｂｒｅｎｎａｎ、米国特許第６，００１，３１１号に記載される（それぞれ、それらの全体で参照により本明細書に援用される）。
本発明の任意の態様に関連して本明細書において用いられる、長さの範囲の制限を定義する用語、例えば「１３〜３５」は、１３から３５までの任意の整数、すなわち、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５を意味する。換言すれば、明確に言及される２つの整数により定義される任意の範囲は、前記制限を定義する任意の整数および前記範囲内に含まれる任意の整数を含みかつ開示することを意味する。
送達／処方：
ｓｉＲＮＡは、細胞との直接接触（「ｎａｋｅｄ」ｓｉＲＮＡ）を含む当業者に公知の様々な方法により、または、細胞への送達または標的化を促進する１つまたは複数の薬剤と組み合わせることにより、インビトロおよびインビボの両方で細胞に送達され得る。そのような薬剤および方法は、ナノエマルション（ＷＯ ２００９／１４１２５７ Ａ１）、リポプレックス、リポソーム、イオン導入、ヒドロゲル、シクロデキストリン、ナノカプセル、マイクロ−およびナノスフェアおよびタンパク性ベクター（例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．（１９９９）１０：１０６８−１０７４およびＷＯ ００／５３７２２）を含む。核酸／ビヒクルの組み合わせは、直接注入により、または注入ポンプの使用により、インビボで、局所的に送達され得る。本発明のｓｉＲＮＡは、静脈内皮下、筋肉内または皮内注入または吸入を含む様々な手段により、インビボで送達され得る。本発明の分子は、医薬品として用いることができる。好ましくは、医薬品は、対象における病態の、発生を防止する、制御する、または、治療をする（症候をある程度（好ましくは全ての症候を）緩和する）。したがって、本発明は、さらなる態様では、本発明の核酸分子およびそのような薬剤の１つを含む組成物に関し；好ましくはそのような組成物は、本明細書に記載される任意の方法での、本発明の核酸分子の送達のためのものである。
国際特許出願ＷＯ ２００９／１４１２５７ Ａ１に記載のナノエマルションは、エンドサイトーシス増強面を有する安定なパーフルオロカーボンナノエマルションであり、ここで、ナノエマルションは、非連続的なパーフルオロカーボン相および緩衝化された連続的な水相を有し、（ａ）少なくとも１つのパーフルオロカーボン化合物を含むパーフルオロカーボン成分；（ｂ）乳化成分；および（ｃ）エンドサイトーシスを介したナノエマルションの細胞取り込みを誘導する少なくとも１つの化合物を含む、エンドサイトーシス増強成分、を含む。ナノエマルションは、１００ｎｍよりも小さい粒子サイズを有してよく、好ましくは、ナノエマルションは、平均サイズが約５０ｎｍである粒子からなる。粒子サイズを測定する方法は、当技術分野で知られていて、例えば、Ｍｕｒｄｏｃｋ ＲＣ ｅｔ ａｌ．（Ｒ．Ｃ．Ｍｕｒｄｏｃｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ ｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｕｓｉｎｇ ｄｙｎａｍｉｃ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．１０１（２），２３９ （２００８））、または、Ｂｏｏｔｚ ｅｔ ａｌ．（Ａ．Ｂｏｏｔｚ，Ｖ．Ｖｏｇｅｌ，Ｄ．Ｓｃｈｕｂｅｒｔ，ａｎｄ Ｊ．Ｋｒｅｕｔｅｒ，“Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ｄｙｎａｍｉｃ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｉｚｉｎｇ ｏｆ ｐｏｌｙ（ｂｕｔｙｌ ｃｙａｎｏａｃｒｙｌａｔｅ）ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ”，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．５７（２），３６９（２００４））に記載される。典型的に、緩衝化された水相は、ナノエマルションの２５〜６０ｗｔ．％を示す。一実施態様では、エンドサイトーシスを介した細胞取り込みを誘導する少なくとも１つの化合物は、トランスフェリン、アポリポタンパク質Ａ１、グリコシルフォスファチジルイノシトール（ＧＩＰ）−アンカータンパク質、メガリン結合タンパク質、アンテナペディア（ａｔｅｎｎａｐｅｄｉａ）タンパク質、前記化合物のフラグメントおよび誘導体、および、類似の効果を有する化合物、から選択され、最も好ましくは、前記化合物は、トランスフェリンまたはそのフラグメントまたは誘導体である。別の実施態様では、少なくとも１つのパーフルオロカーボン化合物は、ＣｍＦ２ｍ＋１Ｘ、ＸＣｍＦ２ｍＸ、ＸＣｎＦ２ｎＯＣｏＦ２ｏＸ、Ｎ（ＣｏＦ２ｏＸ）３およびＮ（ＣｏＦ２ｏ＋１）３（ここで、ｍは３〜１０の整数であり、ｎおよび０は１〜５の整数であり、および、Ｘは独立に、ＣＩ、ＢｒおよびＩから選択されるさらなる存在（ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ）由来である）から選択され、好ましくは、パーフルオロカーボンは、パーフルオロオクチルブロマイドおよびパーフルオロトリブチルアミンおよびそれらの混合物から選択される。乳化成分は、必須の乳化成分として少なくとも１つのリン脂質、および、１つまたは複数の補助的脂質を含んでよい。少なくとも１つのリン脂質は、式Ｉにより表される化合物から選択される。
ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立に、ＨおよびＣ１６−２４アシル残基から選択され、飽和または不飽和であってよく、１〜３残基のＲ３を有してよく、ここで、１つまたは複数のＣ原子は、０またはＮＲ４で置換されてよく、Ｘは、Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−Ｎ（Ｒ４）３ ＋、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ（Ｎ（Ｒ４）３ ＋）−ＣＯＯ−、−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＨ２（ＣＨＯＨ）ｐ−ＣＨ２ＯＨ（ここで、ｐは１〜５の整数であり；Ｒ３は、独立に、Ｈ、低級アルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮおよびＯＨから選択され；および、Ｒ４は、独立に、Ｈ、ＣＨ３およびＣＨ２ＣＨ３から選択される）、または、薬理学的に許容できるそれらの塩から選択され、好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｈおよび非置換Ｃ１６−２４アシル残基から選択され、飽和または不飽和であってよく、および、Ｘは、コリン、セリン、エタノールアミンおよびイノシトール残基から選択され、最も好ましくは、リン脂質成分は、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン（Ｉｙｓｏｐｈｏｓｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ホスファチジルエタノールアミン（ｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）およびそれらの混合物から選択される。補助的脂質は、脂肪酸、ステロイド、ビタミンおよびそれらの混合物から選択してよい。好ましい実施態様では、ナノエマルションは、パーフルオロカーボン成分（ａ）としてパーフルオロオクチルブロマイド、リン脂質としてホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、コレステロールおよびリゾホスファチジルコリンを含む乳化成分（ｂ）、および、エンドサイトーシス増強成分（ｃ）としてトランスフェリン、を含む。
本発明の核酸分子の処方および送達において用いることもできるホスファチジルコリンを含む脂質ナノ粒子は、例えば、Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ ＶＰ （Ｖ．Ｐ．Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，“Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｗｉｔｈ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｓ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃａｒｒｉｅｒｓ”，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．４（２），１４５（２００５）），Ｏｚｐｏｌａｔ Ｂ ｅｔ ａｌ．（Ｂ．Ｏｚｐｏｌａｔ，Ａ．Ｋ．Ｓｏｏｄ，ａｎｄ Ｇ．Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，“Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｉＲＮＡ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ”，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２６７（１），４４ （２０１０））、または、Ａｂｂａｓａｌｉｐｏｕｒｋａｂｉｒ Ｒ ｅｔ ａｌ．（Ｒ．Ａｂｂａｓａｌｉｐｏｕｒｋａｂｉｒ，Ａ．Ｓａｌｅｈｚａｄｅｈ，ａｎｄ Ｒ．Ａｂｄｕｌｌａｈ，“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ ｌｉｐｉｄ ｃａｒｒｉｅｒｓ ａｓ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ”，Ｐａｋ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．１５（３），１４１ （２０１２））に記載される。
本発明の核酸分子の処方および／または送達に用いることができる別の手段は、ポリ（エチレングリコール）脂質を含む表面修飾リポソーム（ＰＥＧ−修飾、または血中滞留型（ｌｏｎｇ−ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ）リポソームまたはステルスリポソーム）である。これらの処方は、リポソームまたはリポプレックス溶液の安定性を、それらの凝集および融合を防止することにより、増大させる方法を提供する。処方は、インビボで、単核食細胞系（ＭＰＳまたはＲＥＳ）によるオプソニン化および除去に抵抗する追加の利益も有し、それにより、より長い血液循環時間およびカプセル化された薬に関する高められた組織曝露を可能にする。そのようなリポソームは、腫瘍内に選択的に蓄積することが、血管新生された（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ）標的組織における溢出および捕捉により、推定的に示されている（Ｌａｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９５，２６７，１２７５−１２７６；Ｏｋｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１２３８，８６−９０）。血中滞留型リポソームは、特に、ＭＰＳの組織内に蓄積することが知られる従来のカチオン性リポソームと比較して、ＤＮＡおよびＲＮＡの薬物動態および薬力学を高める（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９５，４２，２４８６４−２４７８０；Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，国際ＰＣＴ公報 ＷＯ ９６／１０３９１；Ａｎｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，国際ＰＣＴ公報ＷＯ ９６／１０３９０；Ｈｏｌｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，国際ＰＣＴ公報ＷＯ ９６／１０３９２）。また、血中滞留型リポソームは、ヌクレアーゼ分解からｓｉＲＮＡを守る。
本発明の核酸分子の処方および／または送達において用いることができるさらなる手段は、リポプレックスであり、例えば、ＷＯ２００５／１０５１５２に記載される。好ましい実施態様では、そのようなリポプレックスは、以下からなる正電荷のリポソームである：
（ａ）約５０ｍｏｌ％のβ−アルギニル−２，３−ジアミノプロピオン酸−Ｎ−パルミチル−Ｎ−オレイル−アミド三塩酸塩、好ましくはβ−（Ｌ−アルギニル）−２，３−Ｌ−ジアミノプロピオン酸−Ｎ−パルミチル−Ｎ−オレイル−アミドトリ−ハイドロクロライド、（ｂ）約４８〜４９ｍｏｌ％の１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰｈｙＰＥ）、および（ｃ）約１〜２ｍｏｌ％の１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリエチレン−グリコール、好ましくは、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンナトリウム塩。
医薬組成物
本発明の核酸分子は、医薬組成物として処方され得る。医薬組成物は、薬物または診断薬として、単独または他の薬剤と組み合わせて、用いられ得る。医薬組成物は、本発明の任意の方法において用いられ得る。
例えば、本発明の１つまたは複数の核酸分子および／または１つまたは複数のｓｉＲＮＡは、送達ビヒクル（例えば、ナノエマルションまたはリポソーム）および賦形剤、例えば担体、希釈剤と、組み合わせることができる。好ましい実施態様では、医薬組成物は、本明細書中の項目「送達／処方」に記載の組成物である。
また、防腐剤および安定剤のような他の薬剤を添加することもできる。核酸分子の送達のための方法は、当技術分野で知られていて、例えば、Ａｋｈｔａｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．，２，１３９；Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｅｄ．Ａｋｈｔａｒ，１９９５，Ｍａｕｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂ．Ｂｉｏｌ．，１６，１２９−１４０；Ｈｏｆｌａｎｄ ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，１９９９，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１３７，１６５−１９２；ａｎｄ Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，ＡＣＳ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．，７５２，１８４−１９２、米国特許第６，３９５，７１３号、および、ＰＣＴ ＷＯ ９４／０２５９５に記載される（それぞれ、それらの全体で参照により本明細書中に援用される）。本発明のｓｉＲＮＡは、別々または同時のいずれかで投与して、例えば、組み合わせの単位用量として、他の治療的化合物と組み合わせて投与することもできる。一実施態様では、本発明は、本発明に係る１つまたは複数のｓｉＲＮＡを、生理的に／薬学的に許容できる賦形剤、例えば安定剤、防腐剤、希釈剤、バッファーなどに含む、医薬組成物を含む。
本発明の薬物および医薬組成物に関する用量レベルは、ルーチン実験によって当業者により決定され得る。一実施態様では、単位用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇおよび約１００ｍｇ／ｋｇ体重の間のｓｉＲＮＡを含む。一実施態様では、ｓｉＲＮＡの用量は、約１０ｍｇ／ｋｇおよび約２５ｍｇ／ｋｇ体重の間である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡの用量は、約１ｍｇ／ｋｇおよび約１０ｍｇ／ｋｇ体重の間である。一実施態様では、ｓｉＲＮＡの用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇおよび約５ｍｇ／ｋｇ体重の間である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡの用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇおよび約５ｍｇ／ｋｇ体重の間である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡの用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇおよび約１ｍｇ／ｋｇ体重の間である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡの用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇおよび約０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である。別の実施態様では、ｓｉＲＮＡの用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇおよび約１ｍｇ／ｋｇ体重の間である。
一態様では、医薬組成物は、滅菌の注入可能な水性の懸濁液または溶液である。一態様では、医薬組成物は、凍結乾燥された形態である。一実施態様では、医薬組成物は、本発明のｓｉＲＮＡ分子を含むナノエマルションを含む。一実施態様では、医薬組成物は、凍結乾燥されたリポプレックスを含み、ここで、リポプレックスは、本発明のｓｉＲＮＡを含む。別の実施態様では、医薬組成物は、リポプレックスの水性懸濁液を含み、ここで、リポプレックスは、本発明のｓｉＲＮＡを含む。
本発明の医薬組成物および薬物は、開示された処置方法で、対象（哺乳類）に投与され得る。一実施態様では、哺乳類は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、マウス、ラット、ハムスターおよびモルモットからなる群より選択される。一実施態様では、哺乳類はヒトである。別の実施態様では、哺乳類はヒトでない哺乳類である。
キット
さらなる態様では、本発明はキットに関する。キットは本発明の核酸分子、好ましくは本発明のｓｉＲＮＡ、および、容器、使用説明書、バッファー、ポジティブコントロール、ネガティブコントロール、送達剤または送達剤の群より選択される少なくとも１つを含み、ここで、送達剤は、好ましくは、本明細書に開示されるもの、および反応混合物である。キットは、本発明の任意の方法の実施に有用／適切である。一実施態様では、キットは、本発明の任意の方法での使用のためのものである。
治療の方法
本発明の核酸分子は、疾患の治療および／または予防に有用であり、用いられ得る。一実施態様では、当該方法は、対象に対する核酸の投与を含む。好ましくは、対象は、疾患を患っているか、または、疾患を患うリスクがある。好ましくは、対象は哺乳類である。本明細書において好ましく用いられる哺乳類は、ヒト、エイプ、サル、マウス、ラット ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、家畜、使役動物およびコンパニオン動物を含む群より選択される動物である。より好ましくは、対象はヒトである。
本発明の核酸分子は、有効量で対象に投与される。好ましくは、そのような有効量は、薬学的有効量または治療的有効量である。
本発明の核酸分子は、原理的に、当業者に公知の任意の形態で投与することができる。好ましい投与経路は全身投与であり、より好ましくは非経口投与により、好ましくは注入による。あるいは、薬物は局所的に投与され得る。他の投与経路は、筋肉内、腹腔内、および皮下、経口（ｐｅｒ ｏｒｕｍ）、鼻腔内、気管内または肺を含む（有効性を確保しながら侵襲性が最も低い投与経路を優先する）。
非経口投与は、一般に、皮下、筋肉内または静脈内の注射（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）および注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）のために用いられる。加えて、非経口投与のための１つのアプローチは、徐放または持続放出系の注入（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）を用い、用量の一定レベルが維持されることを確保し、当業者によく知られている。
さらに、本発明の好ましい薬物は、適切な鼻腔内ビヒクル（吸入剤）の局所的使用を介した鼻腔内形態で、または、当業者によく知られた経皮皮膚パッチのこれらの形態を用いた経皮経路を介して、投与することができる。経皮送達システムの形態で投与するために、用量投与は、もちろん、投与計画を通じて間欠的であるよりむしろ連続的である。他の好ましい局所的処方は、クリーム、軟膏、ローション、エアロゾルスプレーおよびジェルを含む。
好ましい実施態様では、本発明の核酸分子は、本発明のｓｉＲＮＡである。
一実施態様では、疾患の治療および／または予防のための方法は、Ｎｏｔｃｈ １遺伝子の発現を低減させることにより、より具体的には、Ｎｏｔｃｈ １をコードするｍＲＮＡの翻訳を低減させることにより、治療することのできる疾患である。疾患のこのグループ内に含まれる具体的な疾患および医学的状態は、当業者に公知である。さらに、この種類の疾患を判定する方法は、同様に当業者に公知である。好ましい疾患は、癌、好ましくは、Ｎｏｔｃｈ １が上方制御されている場合の、Ｎｏｔｃｈ １が非疾患組織または非病変組織と比較して変更された様式で発現されている場合の、および／または、Ｎｏｔｃｈ １遺伝子の発現を低減させることにより、より具体的にはＮｏｔｃｈ １をコードするｍＲＮＡの翻訳を低減させることにより、治療効果が達成され得る場合の、癌の形態である。
一実施態様では、疾患は以下のグループの１つであり、Ｎｏｔｃｈ １の関与が証明されていて、それぞれ、Ｎｏｔｃｈ １は、新薬の開発につながるような標的として同定されている：食道癌（Ｓｔｒｅｐｐｅｌ，Ｅ．Ａ．Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ａｎｄ Ａ．Ｍａｉｔｒａ，“Ｎｅｗ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｂａｒｒｅｔｔ’ｓ Ｅｓｏｐｈａｇｕｓ”，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（２０１３）参照）、口腔扁平上皮癌（Ｒ．Ｙｏｓｈｉｄａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｉｎ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ（２０１３）参照）、頭頸部癌（Ｊ．Ｔ．Ｌｉｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｊａｇｇｅｄ−１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ”，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１７（１１），２９７６（２０１０）参照）、舌癌（Ｙ．Ｈ．Ｊｏｏ，Ｃ．Ｋ．Ｊｕｎｇ，Ｍ．Ｓ．Ｋｉｍ，ａｎｄ Ｄ．Ｉ．Ｓｕｎ，“Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｔｏｎｇｕｅ ｃａｎｃｅｒ”，Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ．Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ．１４０（４），５１２（２００９）参照）、白血病（Ｅ．Ｋａｎａｍｏｒｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ａｎｄ Ｊａｇｇｅｄ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ”，Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｄ．４（３），３９７ （２０１２）；および、Ｚｈａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ ｌｉｇａｎｄ ４ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ１ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ”，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．２８（４），１５０３（２０１２）参照）、腎細胞癌（Ｑ．Ａｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｉｇｈ−ｌｅｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ Ｔ１ ｓｔａｇｅ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．７（４），ｅ３５０２２（２０１２）およびＪ．Ｓｊｏｌｕｎｄ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｎｏｔｃｈ ａｎｄ ＴＧＦ−ｂｅｔａ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．６（８），ｅ２３０５７（２０１１）参照）、胃癌（Ｔ．Ｓ．Ｙｅｈ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｎｏｔｃｈ１ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９（１２），５０３９（２００９）、およびＹ．Ｓｕｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｎｏｔｃｈ１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｒｅｑｕｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒｓ”，Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ Ｍｅｄ．１３５（４），４５１（２０１１）参照）、結腸腺癌（Ｍ．Ｒｅｅｄｉｊｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｉｎｔ Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．３３（６），１２２３（２００８）およびＭ．Ｒｅｅｄｉｊｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｉｎｔ Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．３３（６），１２２３（２００８）参照）、子宮内膜癌／子宮体部（Ｙ．Ｍｉｔｓｕｈａｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ”，Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ６０（５），８２６（２０１２）参照）、子宮頸癌／子宮頸部（Ｌ．Ｓａｎｔｏｓ，ｅｔ ａｌ．，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｉｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｏｆ Ｍｅｘｉｃａｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ”，Ｔｕｍｏｕｒ．Ｂｉｏｌ．３２（３），５６１ （２０１１）参照）、肝内胆管癌（Ｑ．Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＢＭＣ．Ｃａｎｃｅｒ １３，２４４（２０１３）、およびＳ．Ｚｅｎｄｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２３（６），７８４ （２０１３）参照）、肝細胞癌腫（Ａ．Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｕｍｏｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ”，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １４３（６），１６６０（２０１２）、およびＲ．Ｆａｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｒａｓ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｈｉｓｔｏｌ．４２（５），４７３ （２０１１）参照）、骨肉腫（Ｊ．Ｙａｎｇ ａｎｄ Ｗ．Ｚｈａｎｇ，“Ｎｅｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２５（４），３９８（２０１３）参照）、膀胱癌（Ａ．Ｇ．Ａｂｄｏｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｎｏｔｃｈ−１ ａｎｄ Ｏｃｔ−４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＡＰＭＩＳ（２０１３）参照）、悪性メラノーマ（Ｃ．Ｓ．Ｍｕｌｌｅｒ，“Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ”，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．７２７，２５８（２０１２）参照）、甲状腺癌（Ｈ．Ｓ．Ｐａｒｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｉｎ ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｎｃｅｒ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１０３（２），３０５（２０１２）参照）、肺腺癌（Ｋ．Ａ．Ｈａｓｓａｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｗｏｒｓｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８），１９７２（２０１３）、およびＢ．Ｗｅｓｔｈｏｆｆ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ １０６（５２），２２２９３（２００９）参照）、前立腺癌（Ｈ．Ｚｈｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｌｅｖａｔｅｄ Ｊａｇｇｅｄ−１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｉｇｈ ｇｒａｄｅ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒｓ”，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｒｅｓ．５（３），３６８（２０１３））およびＭ．Ｋａｓｈａｔ，ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＲ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｍｉＲ−３４ａ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ”，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｒｅｓ．４（４），４３２（２０１２）参照）、乳癌（Ｊ．Ｓｐｅｉｓｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ−１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−４ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ”，Ｉｎｔ Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈｏｌ．２０（２），１３９（２０１２）、およびＳ．Ｍｉｔｔａｌ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ａｎｄ Ｒａｓ／ＭＡＰＫ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ”，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ ８，１２８（２００９）参照）、卵巣癌（Ｓ．Ｌ．Ｒｏｓｅ，Ｍ．Ｋｕｎｎｉｍａｌａｉｙａａｎ，Ｊ．Ｄｒｅｎｚｅｋ，ａｎｄ Ｎ．Ｓｅｉｌｅｒ，“Ｎｏｔｃｈ １ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ａｃｔｉｖｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ”，Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１１７（１），１３０（２０１０）参照）、膵癌（Ｆ．Ｈ．Ｓａｒｋａｒ，Ｓ．Ｂａｎｅｒｊｅｅ，ａｎｄ Ｙ．Ｌｉ，“Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２４（３），３２６（２００７），Ｏ．ＪＰ Ｄｅ Ｌａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ａｎｄ Ｋｒａｓ ｒｅｐｒｏｇｒａｍ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｃｉｎａｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｄｕｃｔａｌ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ １０５（４８），１８９０７（２００８）、Ｅ．Ｒｉｓｔｏｒｃｅｌｌｉ ａｎｄ Ｄ．Ｌｏｍｂａｒｄｏ，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ．１４（５），５４１（２０１０），Ｚ． Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ−１ ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｕｒｃｕｍｉｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ｃａｎｃｅｒ １０６（１１），２５０３（２００６），Ｐ．Ｂｕｃｈｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｎｅｕｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．２４２（６），７９１，ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ（２００５），Ｚ．Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ−１ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｐａ
ｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．５（３），４８３（２００６），Ｚ．Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｔｃｈ−１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ， ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ａｎｄ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（５），２７７８（２００６）参照）、および、グリオーマ（Ｘ．Ｚｈａｎｇ， ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ ａｎｄ ＮＦ−ｋａｐｐａＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖｉａ ＡＫＴ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１０３（２），１８１（２０１２），Ｌ．Ｊｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｇｌｉｏｍａ ａｎｄ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８（３），３８７（２０１１），Ｊ．Ｌｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｉｓ ａｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇｌｉｏｍａ”，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１０３（８），８１３（２０１１）、およびＳ．Ｐｕｇｅｔ， ｅｔ ａｌ．，“Ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅｓ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ９ｑ３３−３４ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｅｐｅｎｄｙｍｏｍａｓ”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２７（１１），１８８４（２００９）参照）。
本発明の核酸分子に加えて、少なくとも１つのさらなる治療的または薬学的に活性の薬剤（本明細書において「第二のさらなる薬剤」とも呼ぶ）が、治療の方法において用いられることは、本発明の範囲内である。そのような治療の方法は、併用療法とも呼ばれる。
「併用療法」（または「共同療法」）は、これらの治療薬（すなわち、本発明の薬物および前記の第二のまたはさらなる薬剤）の共同作用により有益な効果を提供することが意図される具体的な治療レジメンの一部として、本発明の核酸分子および少なくとも第二のまたはさらなる薬剤の投与を含む。組み合わせの有益な効果は、制限されないが、治療薬の組み合わせから生じる、薬物動態学的または薬力学的共同作用を含む。組み合わせでのこれらの治療薬の投与は、典型的に、所定期間（選択される組み合わせに応じて、通常、分、時間、日または週）にわたって行われる。
「併用療法」は、別個の単剤療法レジメンの一部として、２以上のこれらの治療薬の投与を含むことを意図してよいが、一般には意図しない。「併用療法」は、逐次的方法でのこれらの治療薬の投与（すなわち、ここで、各治療薬は異なる時間に投与される）、および、実質的に同時の方法でのこれらの治療薬または少なくとも２つの治療薬の投与を含むことを意図する。実質的に同時の投与は、例えば、固定比率の各治療薬を有する単一のカプセルを、または、各治療薬に関して単一カプセルを複数で、対象に投与することにより、達成することができる。
各治療薬の逐次的または実質的に同時の投与は、制限されないが、局所的経路、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、および粘膜組織を通した直接吸収を含む、任意の適切な経路により達成することができる。治療薬は、同一の経路により、または異なる経路により、投与することができる。例えば、選択された組み合わせの第一の治療薬は注入により投与してよく、一方で、組み合わせの他方の治療薬は局所的に投与してよい。あるいは、例えば、全ての治療薬を局所的に投与してよく、または、全ての治療薬を注入により投与してよい。治療薬が投与される順番は、特に記載のない限り、厳格に重大ではない。また、「併用療法」は、他の生物学的活性成分とさらに組み合わせて、上述の治療薬の投与を含んでもよい。併用療法が非薬物療法をさらに含む場合、非薬物療法は、治療薬と非薬物療法との組み合わせの共同作用による有益な効果が達成される限り、任意の適切なときに行なってよい。例えば、適切な場合では、有益な効果は、非薬物療法が、治療薬の投与から時間的に（おそらく日、または週さえ）離れている場合にさえ、達成される。
それに従って、そのようなさらなる治療的または薬学的に活性の薬剤は、対象に投与もされる。一実施態様では、さらなる治療的または薬学的に活性の薬剤は、本発明の核酸分子の前に、一緒に、または後に、投与される。一実施態様では、さらなる治療的または薬学的に活性の薬剤は、タキサン誘導体、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル（Ｑ．Ｆ．Ｙｅ，ｅｔ ａｌ．，“ｓｉＲＮＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ−１ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｉｔｏｔｉｃ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ａｓｉａｎ Ｐａｃ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ．１３（６），２４８５（２０１２），Ｃ．Ｃ．Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｍｍａ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＰＦ−０３０８４０１４ ａｎｄ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌｓ”，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２（３），２３３（２０１３），Ｋ．Ａ．Ｈａｓｓａｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｗｏｒｓｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８），１９７２（２０１３），Ｙ．Ｐ．Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｓｅｌｅｃｔｓ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＣＤ１３３＋ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７３（１），４０６（２０１３）、および、Ｓ．Ｚａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“ＲＮＡｉ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ−１ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ”，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．２３（４），８９３（２０１０）参照）、白金誘導体、例えばシスプラチンおよびオキサリプラチン（Ｋ．Ａ．Ｈａｓｓａｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｗｏｒｓｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８），１９７２（２０１３）、および、Ｚ．Ｐ．Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ａｉ．Ｚｈｅｎｇ．２８（２），１００（２００９）参照）、ヌクレオシドアナログ、例えば５−フルオロウラシル（Ｒ．Ｄ．Ｍｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“ｇａｍｍａ−Ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｂｒｏｇａｔｅ ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ−１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９（２），５７３（２００９）参照）、トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカン（Ｒ．Ｄ．Ｍｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“ｇａｍｍａ−Ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｂｒｏｇａｔｅ ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ−１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９（２），５７３（２００９）参照）、挿入物質、例えばドキソルビシン（Ｙ．Ｐ．Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｓｅｌｅｃｔｓ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＣＤ１３３＋ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７３（１），４０６（２０１３）参照）、ヌクレオシドアナログ、例えばゲムシタビン（Ｘ．Ｄｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ ａｎｄ ｓｅｒｖｅｓ ａｓ ａｎ ｕｎｆａｖｏｒａｂｌｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｓｕｒｇ．３７（７），１６８８（２０１３），Ｓ．Ｙａｂｕｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｓｐｒｅａｄ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．３３５（１），４１（２０１３）、およびＳ．Ｒｉｃｈｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒａｌ ｇａｍｍａ ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｒ０４９２９０９７ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ （ＰＨＬ−０７８／ＣＴＥＰ ８５７５）”，Ｉｎｖｅｓｔ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ（２０１３）参照）、合成グルココルチコイド、例えばデキサメタゾン（Ｑ．Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＢＭＣ．Ｃａｎｃｅｒ １３，２４４（２０１３）参照）、および、アルキル化剤、例えばテモゾロミド（Ｃ．Ａ．Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｍ．Ｃ．Ｄａｏｕ，Ｒ．Ｐ．Ｍｏｓｅｒ，ａｎｄ Ａ．Ｈ．Ｒｏｓｓ，“Ｇａｍｍａ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｎｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０（１７），６８７０（２０１０）参照）を含む群より選択されるものである。
治療の方法が併用療法である本発明の方法の一実施態様は、少なくとも１つのさらなる薬学的または治療的に活性の薬剤を投与するのではなく、対象が放射線療法を受けるものである。
放射線療法（Ｘ線治療または照射とも呼ばれる）は、癌細胞を殺すための電離放射線の使用である。放射線療法は、医療分野において、ほぼすべてのタイプの固形腫瘍を治療するために用いられている。また、照射は、白血病およびリンパ腫を治療するためにも用いられる。放射線療法は、治療される領域内の細胞を、それらの遺伝物質を損傷させることにより傷付け、または破壊し、これらの細胞が成長および分裂を続けることを不可能にさせる。放射線療法の効果は、治療される領域に局限化および限定される。各部位への放射線照射量は、それぞれの癌タイプの放射線感受性、および、放射線により損傷され得る組織および臓器が近くに存在するかどうかを含む、多くの因子に依存する。放射線療法の目標は、近くの健常組織に対する害を制限しながら、出来るだけ多くの癌細胞を損傷させることである。
本発明の核酸分子（好ましくは本発明のｓｉＲＮＡ）の対象への投与を含む、疾患の治療および／または予防のための本発明の方法のさらなる実施態様では、疾患は、好ましくは癌、より好ましくは本明細書に開示される癌であり、当該方法は、実際のところ、付加的治療の補助療法である。そのような補助療法の目的は、一次治療、好ましくは一次癌治療を補助することである。
本発明の核酸分子は、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法に有用であり、用いられ得る。一実施態様では、当該方法は、本発明の核酸の対象への投与を含み、ここで、対象は、疾患（好ましくは癌）を患っていて、そして、疾患に関与する癌細胞、および／または、対象に与えられる任意の治療により、または疾患の治療において対象に投与される任意の薬学的または治療的に活性の薬剤により、対処され、損傷され、および／または破壊される細胞は、そのような治療および／またはそのような薬学的または治療的に活性の薬剤の影響を受けにくく、または、もはや影響を受けやすくはない。典型的に、本発明の核酸分子の投与後、前記細胞は、少なくとも治療的および／または薬学的に関連のあるレベルで、再びそのような治療および／または薬学的または治療的に活性の薬剤の影響を受けやすくなる。そのような治療は、好ましくは、制限されないが、細胞増殖抑制剤に基づく治療および放射線療法を含む癌治療であり、そのような薬学的または治療的に活性の薬剤は、癌治療で用いられるものである。好ましくは、本発明の核酸分子は、本発明のｓｉＲＮＡである。
その限りにおいて、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法は、癌治療および／または癌治療で用いられる薬学的または治療的に活性の薬剤の影響を受けにくい、またはもはや影響を受けやすくはない癌細胞を、再度感受性にさせる方法である。また、癌の薬物感受性を回復させる方法は、癌の治療のための方法に関する補助療法であることも理解されよう。
疾患の治療および／または予防のための方法に関連して本明細書に開示されるものは、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法に同様に適用できることが理解されよう。これは、特に、本発明の核酸の投与経路、投与、および方法の対象などに関するそのような方法の態様に適用する。その限りにおいて、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法は、疾患の治療および／または予防のための方法の一実施態様である。癌の好ましい形態（そのような形態の癌を患っている対象に典型的に適用される治療に対して、抵抗性を獲得し得る）は以下である：
食道癌（Ｓｔｒｅｐｐｅｌ，Ｅ．Ａ．Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ａｎｄ Ａ．Ｍａｉｔｒａ，“Ｎｅｗ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｂａｒｒｅｔｔ’ｓ Ｅｓｏｐｈａｇｕｓ”，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（２０１３）参照）、口腔扁平上皮癌（Ｒ．Ｙｏｓｈｉｄａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｉｎ ｏｒａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ（２０１３）参照）、頭頸部癌（Ｊ．Ｔ．Ｌｉｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｊａｇｇｅｄ−１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ”，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１７（１１），２９７６（２０１０）参照）、舌癌（Ｙ．Ｈ．Ｊｏｏ，Ｃ．Ｋ．Ｊｕｎｇ，Ｍ．Ｓ．Ｋｉｍ，ａｎｄ Ｄ．Ｉ．Ｓｕｎ，“Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｔｏｎｇｕｅ ｃａｎｃｅｒ”，Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ．Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ．１４０（４），５１２（２００９）参照）、白血病（Ｅ．Ｋａｎａｍｏｒｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ａｎｄ Ｊａｇｇｅｄ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ”，Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｄ．４（３），３９７ （２０１２）；および、Ｚｈａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｄｅｌｔａ−ｌｉｋｅ ｌｉｇａｎｄ ４ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ１ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ”，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．２８（４），１５０３（２０１２）参照）、腎細胞癌（Ｑ．Ａｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｉｇｈ−ｌｅｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ Ｔ１ ｓｔａｇｅ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．７（４），ｅ３５０２２（２０１２）およびＪ．Ｓｊｏｌｕｎｄ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｎｏｔｃｈ ａｎｄ ＴＧＦ−ｂｅｔａ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．６（８），ｅ２３０５７（２０１１）参照）、胃癌（Ｔ．Ｓ．Ｙｅｈ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｎｏｔｃｈ１ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９（１２），５０３９（２００９）、およびＹ．Ｓｕｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｎｏｔｃｈ１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｒｅｑｕｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒｓ”，Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ Ｍｅｄ．１３５（４），４５１（２０１１）参照）、結腸腺癌（Ｍ．Ｒｅｅｄｉｊｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｉｎｔ Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．３３（６），１２２３（２００８）およびＭ．Ｒｅｅｄｉｊｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｉｎｔ Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．３３（６），１２２３（２００８）参照）、子宮内膜癌／子宮体部（Ｙ．Ｍｉｔｓｕｈａｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ”，Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ６０（５），８２６（２０１２）参照）、子宮頸癌／子宮頸部（Ｌ．Ｓａｎｔｏｓ，ｅｔ ａｌ．，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｉｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｏｆ Ｍｅｘｉｃａｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ”，Ｔｕｍｏｕｒ．Ｂｉｏｌ．３２（３），５６１ （２０１１）参照）、肝内胆管癌（Ｑ．Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＢＭＣ．Ｃａｎｃｅｒ １３，２４４（２０１３）、およびＳ．Ｚｅｎｄｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２３（６），７８４ （２０１３）参照）、肝細胞癌腫（Ａ．Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｕｍｏｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ”，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １４３（６），１６６０（２０１２）、およびＲ．Ｆａｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｒａｓ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｈｉｓｔｏｌ．４２（５），４７３ （２０１１）参照）、骨肉腫（Ｊ．Ｙａｎｇ ａｎｄ Ｗ．Ｚｈａｎｇ，“Ｎｅｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２５（４），３９８（２０１３）参照）、膀胱癌（Ａ．Ｇ．Ａｂｄｏｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｎｏｔｃｈ−１ ａｎｄ Ｏｃｔ−４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＡＰＭＩＳ（２０１３）参照）、悪性メラノーマ（Ｃ．Ｓ．Ｍｕｌｌｅｒ，“Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｌａｎｏｍａ”，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．７２７，２５８（２０１２）参照）、甲状腺癌（Ｈ．Ｓ．Ｐａｒｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｉｎ ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｎｃｅｒ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１０３（２），３０５（２０１２）参照）、肺腺癌（Ｋ．Ａ．Ｈａｓｓａｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｗｏｒｓｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８），１９７２（２０１３）、およびＢ．Ｗｅｓｔｈｏｆｆ，ｅｔ ａｌ．，“Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ １０６（５２），２２２９３（２００９）参照）、前立腺癌（Ｈ．Ｚｈｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｌｅｖａｔｅｄ Ｊａｇｇｅｄ−１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｉｇｈ ｇｒａｄｅ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒｓ”，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｒｅｓ．５（３），３６８（２０１３））およびＭ．Ｋａｓｈａｔ，ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＲ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｍｉＲ−３４ａ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ”，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｒｅｓ．４（４），４３２（２０１２）参照）、乳癌（Ｊ．Ｓｐｅｉｓｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ−１ ａｎｄ Ｎｏｔｃｈ−４ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ”，Ｉｎｔ Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈｏｌ．２０（２），１３９（２０１２）、およびＳ．Ｍｉｔｔａｌ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ ａｎｄ Ｒａｓ／ＭＡＰＫ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ”，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ ８，１２８（２００９）参照）、卵巣癌（Ｓ．Ｌ．Ｒｏｓｅ，Ｍ．Ｋｕｎｎｉｍａｌａｉｙａａｎ，Ｊ．Ｄｒｅｎｚｅｋ，ａｎｄ Ｎ．Ｓｅｉｌｅｒ，“Ｎｏｔｃｈ １ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ａｃｔｉｖｅ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ”，Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１１７（１），１３０（２０１０）参照）、膵癌（Ｆ．Ｈ．Ｓａｒｋａｒ，Ｓ．Ｂａｎｅｒｊｅｅ，ａｎｄ Ｙ．Ｌｉ，“Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２４（３），３２６（２００７），Ｏ．ＪＰ Ｄｅ Ｌａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ａｎｄ Ｋｒａｓ ｒｅｐｒｏｇｒａｍ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｃｉｎａｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｄｕｃｔａｌ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ １０５（４８），１８９０７（２００８）、Ｅ．Ｒｉｓｔｏｒｃｅｌｌｉ ａｎｄ Ｄ．Ｌｏｍｂａｒｄｏ，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ．１４（５），５４１（２０１０），Ｚ． Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ−１ ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｕｒｃｕｍｉｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ｃａｎｃｅｒ １０６（１１），２５０３（２００６），Ｐ．Ｂｕｃｈｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｎｅｕｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．２４２（６），７９１，ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ（２００５），Ｚ．Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ−１ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．５（３），４８３（２００６），Ｚ．Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｎｏｔｃｈ−１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ， ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ａｎｄ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（５），２７７８（２００６）参照）、および、グリオーマ（Ｘ．Ｚｈａｎｇ， ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ ａｎｄ ＮＦ−ｋａｐｐａＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖｉａ ＡＫＴ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１０３（２），１８１（２０１２），Ｌ．Ｊｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｇｌｉｏｍａ ａｎｄ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８（３），３８７（２０１１），Ｊ．Ｌｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｉｓ ａｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇｌｉｏｍａ”，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１０３（８），８１３（２０１１）、およびＳ．Ｐｕｇｅｔ， ｅｔ ａｌ．，“Ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅｓ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ９ｑ３３−３４ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｅｐｅｎｄｙｍｏｍａｓ”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２７（１１），１８８４（２００９）参照）。
薬物感受性を回復させるための方法により克服することのできる癌細胞の抵抗性は、Ｎｏｔｃｈ １により誘導される抵抗性であり、特に、Ｎｏｔｃｈ １により誘導される化学療法抵抗性である。その限りにおいて、癌細胞の薬物感受性を回復させるための方法は、Ｎｏｔｃｈ １により誘導される抵抗性、特に、Ｎｏｔｃｈ １により誘導される化学療法抵抗性を回復させるための方法である。細胞および癌細胞が特に化学療法に対して抵抗性であるかどうかは、ＭＭＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）−アッセイおよびフローサイトメトリーのような、当業者に公知のルーチン試験により判定され得る。
ＭＭＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）−アッセイは、細胞酵素によるＭＴＴの低減を測定する。ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ−依存性酵素を介したこの代謝活性を測定することにより、生存細胞の数を推定することが可能である。テトラゾリウム色素分析は、化学療法剤の細胞増殖抑制活性および細胞毒性の両方の測定を可能にする。
フローサイトメトリーでは、細胞は流体の流れに懸濁され、検出器を通過する。レーザー技術を用いて、細胞の数の決定およびバイオマーカーの同定を可能にする。数多くの粒子は、生物物理学的および化学的パラメーターに関して同時に分析され得る。この技術を用いて、アポトーシス細胞による生存可能を判別して、医薬品の効果を測定することが可能である。
Ｎｏｔｃｈ １により誘導される化学療法抵抗性は、例えば、Ｋ．Ｍ．Ｃａｐａｃｃｉｏｎｅ ａｎｄ Ｓ．Ｒ．Ｐｉｎｅ（Ｋ．Ｍ．Ｃａｐａｃｃｉｏｎｅ ａｎｄ Ｓ．Ｒ．Ｐｉｎｅ，“Ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ａｓ ａ ｍｅｄｉａｔｏｒ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ”，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ３４（７），１４２０（２０１３））に記載される。この参考文献および他の参考文献から、Ｎｏｔｃｈ １の発現を阻害することにより、したがって本発明の核酸分子を用いることにより、Ｎｏｔｃｈ １により誘導される化学療法抵抗性を克服することができることが妥当である。そのような他の参考文献は、限定されないが、前立腺癌に関してＹｅ，ＱＦ ｅｔ ａｌ．（Ｑ．Ｆ．Ｙｅ，ｅｔ ａｌ．，“ｓｉＲＮＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ−１ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｉｔｏｔｉｃ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ａｓｉａｎ Ｐａｃ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ．１３（６），２４８５（２０１２））、乳癌に関してＺｈａｎｇ ＣＣ ｅｔ ａｌ．（Ｃ．Ｃ．Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｍｍａ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＰＦ−０３０８４０１４ ａｎｄ ｄｏｃｅｔａｘｅｌ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌｓ”，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２（３），２３３（２０１３））、または、Ｚａｎｇ Ｓ ｅｔ ａｌ．（Ｓ．Ｚａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“ＲＮＡｉ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ−１ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ”，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．２３（４），８９３（２０１０））、肺癌に関してＨａｓｓａｎ ＫＡ ｅｔ ａｌ．（Ｋ．Ａ．Ｈａｓｓａｎ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｗｏｒｓｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８），１９７２（２０１３））、扁平上皮細胞癌に関してＺｈａｎｇ ＺＰ ｅｔ ａｌ．（Ｚ．Ｐ．Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ａｉ．Ｚｈｅｎｇ．２８（２），１００（２００９））、結腸癌に関してＭｅｎｇ ＲＤ ｅｔ ａｌ．（Ｒ．Ｄ．Ｍｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“ｇａｍｍａ−Ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｂｒｏｇａｔｅ ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｔｃｈ−１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９（２），５７３（２００９））、非小肺癌に関してＬｉｕ ＹＰ ｅｔ ａｌ．（Ｙ．Ｐ．Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｓｅｌｅｃｔｓ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＣＤ１３３＋ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７３（１），４０６（２０１３））、膵癌に関してＤｕ Ｘ ｅｔ ａｌ．（Ｘ．Ｄｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ１ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ ａｎｄ ｓｅｒｖｅｓ ａｓ ａｎ ｕｎｆａｖｏｒａｂｌｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｓｕｒｇ．３７（７），１６８８（２０１３））、または、Ｙａｂｕｕｃｈｉ Ｓ ｅｔ ａｌ（Ｓ．Ｙａｂｕｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｓｐｒｅａｄ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．３３５（１），４１（２０１３））、白血病および特にＴ細胞急性リンパ芽球性白血病に関してＺｈｏｕ Ｑ ｅｔ ａｌ．（Ｑ．Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｎｏｔｃｈ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”，ＢＭＣ．Ｃａｎｃｅｒ １３，２４４（２０１３））、および、グリオーマに関してＧｉｌｂｅｒｔ ＣＡ ｅｔ ａｌ．（Ｃ．Ａ．Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｍ．Ｃ．Ｄａｏｕ，Ｒ．Ｐ．Ｍｏｓｅｒ，ａｎｄ Ａ．Ｈ．Ｒｏｓｓ，“Ｇａｍｍａ−ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｎｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０（１７），６８７０（２０１０））を含む。
Ｎｏｔｃｈ １により誘導される抵抗性を克服することの他に、本発明の核酸分子は、Ｈｏｖｉｎｇａ ＫＥ（Ｋ．Ｅ．Ｈｏｖｉｎｇａ，ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｔｃｈ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｔａｒｇｅｔｓ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ”，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２８（６），１０１９（２０１０））、および、Ｗａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｎｏｔｃｈ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｇｌｉｏｍａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ”，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２８（１），１７（２０１０））から明らかなように、放射線に対する抵抗性を克服するためにも適切である。
本発明は、図面、実施例および配列リストによってさらに説明され、それらから、さらなる特性、実施態様および利点を得ることができる。
実施例１：材料および方法
ｓｉＲＮＡ
表１に示すｓｉＲＮＡを、標準的な化学合成を用いて調製した：
上記の表１を、配列識別子を含む表１ａとして再度示す。
このグループの中から、以下のいくつかのｓｉＲＮＡを修飾した。修飾されたｓｉＲＮＡを表２に示す。
表２：
ａ）ＸＤ−００３９５
センス鎖：５’ ＧＧＡＣＣＣＡＡＣＡＣＵＵＡＣＡＣＣＵｄＴｄＴ ３’（配列番号８７）
アンチセンス鎖：５’ ＡＧＧＵＧＵＡＡＧＵＧＵＵＧＧＧＵＣＣｄＴｄＴ ３’（配列番号８８）
ｂ）ＸＤ−００４０４
センス鎖：５’ ＧＡＣＡＵＣＧＣＡＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡｄＴｄＴ ３’（配列番号１０５）
アンチセンス鎖：５’ ＵＧＣＧＣＵＣＣＵＧＵＧＣＧＡＵＧＵＣｄＴｄＴ ３’（配列番号１０６）
ｃ）ＸＤ−００４０６
センス鎖：５’ ＣＡＵＧＧＵＧＣＣＧＡＡＣＣＡＡＵＡＣｄＴｄＴ ３’（配列番号１０９）
アンチセンス鎖：５’ ＧＵＡＵＵＧＧＵＵＣＧＧＣＡＣＣＡＵＧｄＴｄＴ ３’（配列番号１１０）
ｄ）ＸＤ−００４０７
センス鎖：５’ ＵＧＧＵＧＣＣＧＡＡＣＣＡＡＵＡＣＡＡｄＴｄＴ ３’（配列番号１１１）
アンチセンス鎖：５’ ＵＵＧＵＡＵＵＧＧＵＵＣＧＧＣＡＣＣＡｄＴｄＴ ３’（配列番号１１２）
ｅ）ＸＤ−００４０９
センス鎖：５’ ＧＡＣＣＡＧＵＧＧＵＣＣＡＧＣＵＣＧＵｄＴｄＴ ３’（配列番号１１５）
アンチセンス鎖：５’ ＡＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＣＡＣＵＧＧＵＣｄＴｄＴ ３’（配列番号１１６）
ｆ）ＸＤ−００４１０
センス鎖：５’ ＣＡＵＵＣＣＡＡＣＧＵＣＵＣＣＧＡＣＵｄＴｄＴ ３’（配列番号１１７）
アンチセンス鎖：５’ ＡＧＵＣＧＧＡＧＡＣＧＵＵＧＧＡＡＵＧｄＴｄＴ ３’（配列番号１１８）
完全安定化ｓｉＲＮＡ
表２のｓｉＲＮＡ ＸＤ−００４０４ および ＸＤ−００４０９を、完全安定化に供した。このような完全安定化ｓｉＲＮＡは以下のとおりである。
ａ）ＸＤ−００４０９
センス鎖：５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕｄＴＳｄＴ ３’（配列番号７０）
アンチセンス鎖：５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣｄＴＳｄＴ ３’（配列番号６９）
ｂ）ＸＤ−００４０４
センス鎖：５’ ＧＡｃＡｕＣｇＣａＣａＧｇＡｇＣｇＣａｄＴＳｄＴ ３’（配列番号１２８）
アンチセンス鎖：５’ ｕｇＣｇＣｕＣｃＵｇＵｇＣｇＡｕＧｕＣｄＴＳｄＴ ３’（配列番号１２７）
ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示し、および、
ここで、ｄＴｓｄＴは、３’末端において、２個のｄＴからなるジヌクレオチドが付いていることを示し、前記の２個のｄＴは、ホスホロチオエート結合を介して共有結合している。
中間安定化ｓｉＲＮＡ
中間安定化ｓｉＲＮＡは、ｄＴｓｄＴ突出がない点で完全安定化ｓｉＲＮＡと異なる。いかなる２’−Ｆ修飾も示さなかった。
Ｃ４−２細胞の培養
ＲＰＭＩ １６４０培地を用いて、Ｃ４−２細胞を、この細胞株について記載される標準的な手順に従って培養した。
Ｃ４−２細胞のトランスフェクション
リポフェクタミン２０００を用いて、Ｃ４−２細胞を様々な濃度のｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。ｓｉＲＮＡの濃度は、トランスフェクション実験において、５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭまたは０．１ｎＭであった。インキュベーション時間は２４時間であった。それ以外は標準的な手順を用いた。トランスフェクション効率を、ハウスキーパーｓｉＲＮＡを測定することにより決定した；トランスフェクションの有効性は、全ての場合において少なくとも９３％であった。
ｓｉＲＮＡのＩＣ５０の決定
標準的な手順を用いてＩＣ５０値を決定した。より具体的には、示される様々なｓｉＲＮＡを用いて記載されるようにトランスフェクトされたＣ４−２細胞を用いて、Ｎｏｔｃｈ １のｍＲＮＡの発現が５０％まで減少するｓｉＲＮＡ濃度を決定した。
ナノ担体
ナノ担体（パーフルオロカーボンナノ担体）の調製のために、リン脂質の混合物を用いてパーフルオロオクチルブロマイド（パーフルブロン）を乳化した。１グラムの混合物は、蒸留水および７５ｍＭのリン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）バッファー中に、ホスファチジルコリン（９８０ｍｇ）、スフィンゴミエリン（１０ｍｇ）、コレステロール（５ｍｇ）、リゾホスファチジルコリン（５ｍｇ）を含む。１０００μｌのパーフルオロカーボンナノ担体を得るために、４７５μｌのパーフルオロオクチルブロマイド、３６ｍｇのリン脂質、２００μｌの７５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．４）および３２５μｌの蒸留水を用いた。
まず、リン脂質、リン酸二水素ナトリウムバッファーおよび蒸留水を混合して、続いて、パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）溶液を接近させた（ａｄｊｏｉｎｅｄ）。４０秒以内に、混成物をシェーカーにより６０秒間混合して、全く中断せずに、１１００ｋＨｚの周波数で１２０秒間、３０秒間隔で超音波装置により２回ホモジナイズしなければならなかった。超音波処理ユニットは４℃の温度に保つ。その他の不溶性ＰＦＣの最終的な乳化のために、混合物を、高圧ホモジナイザーの中に入れる。２５００バールでのホモジナイズの６回以内の通過で、乳状の混成物は、透明な、青みがかったエマルションに変化する。透明性へのこの変化は、可視波長より下のパーフルオロカーボン粒子サイズの変化に関する肉眼的マーカーである。最小の可視波長（青／紫）のλ＝４００ｎｍは、混合物が透明になるとき、粒子サイズをλ／２と定義する。４回のさらなるサイクルのホモジナイズを、この時点で加える。粒子サイズを、１００ｎｍより下の全ての粒子で５０ｎｍ（平均）として電子顕微鏡において測定した。機能性ナノ担体を得るために、４ｍｇのハロトランスフェリンを、６０μｌの滅菌０．９％ ＮａＣｌ中に溶解させる。直後に、トランスフェリンを、冷却した超音波装置により、２秒間ホモジナイズする。溶解したトランスフェリンを１０００μｌのパーフルオロカーボンエマルションに添加して、４ｍｇ／ｍｌの終濃度を得る。再度、化合物を、シェーカーの上に３０秒間、直接置く。
このナノ担体は、無負荷担体またはＮＣｆ４とも呼ばれる。
Ｎｏｔｃｈ ｓｉＲＮＡ−負荷ナノ担体
Ｎｏｔｃｈ ｓｉＲＮＡ−負荷ナノ担体を、上述のナノ担体に基づいて調製した。負荷する目的のために、所望のｓｉＲＮＡ種をナノ担体に加えて、そのようにして得られた混合物を、超音波により１５秒間５００Ｗで用いてホモジナイズに供した。
動物試験−異種移植片モデル
皮下接種されたＰＡＮＣ−１ヒト膵臓腫瘍由来の腫瘍を有する、６０匹の雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウスを、１１２匹のプールから選択した。この動物モデルは、Ｌｉｅｂｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．（Ｍ．Ｌｉｅｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｔｕｍｏｒ−ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ （ｐａｎｃ−１） ｆｒｏｍ ａ ｈｕｍａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｏｃｒｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓ”，Ｉｎｔ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １５（５），７４１（１９７５））により最初に説明され、Ｍａｄｄｅｎ ＭＥ ａｎｄ Ｓａｒｒａｓ ＭＰ（Ｍ．Ｅ．Ｍａｄｄｅｎ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｓａｒｒａｓ，Ｊｒ．，“Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｄｕｃｔａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ （ＰＡＮＣ−１）”，Ｐａｎｃｒｅａｓ ３（５），５１２（１９８８））により生化学的および形態学的に特徴付けられた、ＰＡＮＣ−１細胞株を用いて膵癌および膵臓腫瘍についてそれぞれ実証された動物モデルである。そのような細胞株、および、そのような細胞株を用いて実証された動物モデルは、抗癌剤の評価に用いられている。Ｓｃｈｕｌｔｚ ＲＭ ｅｔ ａｌ．（Ｒ．Ｍ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｗ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ＭＩＡ ＰａＣａ−２ ａｎｄ ＰＡＮＣ−１ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ”，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．５（６−７），２２３（１９９３））。
接種後３３日に、マウスを、腫瘍サイズにより、１０匹の６つのグループにランダム化した（０日目）。
各グループ内のマウスは、１週間に２回、ビヒクルコントロール（無負荷ナノ担体、ＮＣｆ４）または腹腔内注入を介した６０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン、またはＮｏｔｃｈ／ゲムシタビンの組み合わせで、それぞれ記載の方法で処置した（ここで、Ｎｏｔｃｈは、静脈内注入を介して処置したＮｏｔｃｈ ｓｉＲＮＡ−負荷ナノ担体（完全安定化ＸＤ−００４０９を用いて実施例１に記載のとおりに調製）であった）。
０日目に処置を開始し、７回分を投与した。臨床観察を毎日行なった。体重および腫瘍サイズの測定を、試験の持続の間、１週間に３回行なった。
試験の終了時に（２４日目）、全ての処置群内の全てのマウスから腫瘍を摘出し、計量して、半分に切断した。片方を、ＲＮＡ単離およびｑＲＴ−ＰＣＲ分析のために、ＲＮＡｌａｔｅｒ溶液中に保存した。残りの部分を、パラフィン包埋および壊死の顕微鏡的評価のために、ホルマリン中に保存した。
動物試験−同所性モデル
６６匹の雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウスを、ＰＡＮＣ−１ヒト膵臓腫瘍細胞で同所性接種した。生着率（ｔａｋｅ−ｒａｔｅ）を、３匹のマウスにおいて、接種後２０日および２７日にそれぞれ評価した。接種後３２日に、残りの６０匹のマウスを、体重により、１０匹の６つのグループにランダム化した（０日目）。
各グループ内のマウスは、１週間に２回、ビヒクルコントロール（無負荷ナノ担体、ＮＣｆ４）、腹腔内注入を介した６０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン、または、Ｎｏｔｃｈ／ゲムシタビンの組み合わせで、それぞれ記載の方法で処置した（ここで、Ｎｏｔｃｈは、静脈内注入を介して処置したＮｏｔｃｈ ｓｉＲＮＡ−負荷ナノ担体（完全安定化ＸＤ−００４０９を用いて実施例１に記載のとおりに調製）であった）。
０日目に処置を開始し、５回分投与した。
臨床観察を毎日行なった。体重測定を、試験の持続の間、１週間に３回行なった。
試験の終了時に（１８日目）、無傷の腫瘍＋膵臓を、全ての処置群内の全てのマウスから摘出して計量した。腫瘍を膵臓から取り出して半分に切断した。片方を、随意的なＲＮＡの単離およびｑＲＴ−ＰＣＲ分析（行わなかった）のために、ＲＮＡｌａｔｅｒ溶液中に保存した。残りの部分を、パラフィン包埋および壊死の顕微鏡的評価のために、ホルマリン中に保存した。終了時に全てのマウスから肺および肝臓を摘出した。両方とも計量し、表面転移に関して評価した。パラフィン包埋のために、肺および肝臓をホルマリン中に保存した。肝臓を、マイクロ転移の存在に関して評価した。
実施例２：ヒトＮｏｔｃｈ １を標的化する未修飾ｓｉＲＮＡの有効性
Ｃ４−２細胞を培養し、実施例１に記載の表１に示される様々なｓｉＲＮＡでトランスフェクトし、ここで、ｓｉＲＮＡ濃度は５０ｎＭであった。結果を図１に示す。図１は、様々なｓｉＲＮＡを用いたＣ４−２細胞のトランスフェクション時のＮｏｔｃｈ １の相対的発現を示すダイアグラムである。発現は、コントロールを用いたＣ４−２細胞におけるＮｏｔｃｈ １の発現に対して標準化される。コントロールは、タンパク質をコードするいかなる公知のｍＲＮＡも標的化しないｓｉＲＮＡであった。
図１から理解され得るように、最良のｓｉＲＮＡは、ほぼ８０％のＮｏｔｃｈ １のｍＲＮＡのノックダウンを示す。図１から、様々なｓｉＲＮＡの有効性に有意差があることも明らかである。
最良のノックダウンを示す６個のｓｉＲＮＡは、表２のものである。これらのｓｉＲＮＡは、それらのＩＣ５０の観点からさらに特徴付けられた。結果を図２に示す。
図２は、各ｓｉＲＮＡの濃度の関数として残っている相対的Ｎｏｔｃｈ １のｍＲＮＡ発現を示す、表２の各ｓｉＲＮＡに関するダイアグラムである。前記ダイアグラムから、前記ｓｉＲＮＡのそれぞれに関するＩＣ５０を計算した。前記ｓｉＲＮＡ分子に関するＩＣ５０値を、表３に要約する。
図２および表３の両方から理解され得るように、ＩＣ５０の観点から最良のｓｉＲＮＡ分子は、ＩＣ５０が４．３ｐＭのＸＤ−００４０９である。
実施例３：ヒトＮｏｔｃｈ １を標的化する修飾ｓｉＲＮＡの有効性
表１および表２のｓｉＲＮＡ分子ＸＤ００４０４およびＸＤ−００４０９を、実施例１にも記載のように、中間安定化および完全安定化に供した。このようにして修飾されたｓｉＲＮＡ分子は、以下のとおりである。
ａ）中間安定化でのＸＤ−００４０４（ＸＤ−００７５１とも呼ばれる）：
ｂ）完全安定化でのＸＤ−００４０４（ＸＤ−００７５２とも呼ばれる）：
ｃ）中間安定化でのＸＤ−００４０９（ＸＤ−００７５３とも呼ばれる）：
ｄ）完全安定化でのＸＤ−００４０９（ＸＤ−００７５４とも呼ばれる）：
これらのｓｉＲＮＡ分子を、実施例１に記載の前記Ｃ４−２細胞のトランスフェクション時のＣ４−２細胞におけるそれらの有効性に関して試験し、ここで、ｓｉＲＮＡの濃度は、トランスフェクション実験において、１０ｎＭ、１ｎＭまたは０．１ｎＭであった。
そのような実験の結果を、図３Ａに、ｓｉＲＮＡ ＸＤ−００４０４について、その未修飾の、中間または完全に修飾された形態で、および、ｓｉＲＮＡ ＸＤ−００４０９について、その未修飾の、中間または完全に修飾された形態で、および、図３Ｂに、コントロールを用いた相対的ｍＲＮＡ発現として、示す。コントロールは、タンパク質をコードするいかなる公知のｍＲＮＡも標的化しないｓｉＲＮＡであった。
図３から理解され得るように、ｓｉＲＮＡ分子の修飾は、安定性の観点から有益であるが、ｓｉＲＮＡの両方（ＸＤ−００４０４およびＸＤ−００４０９）の修飾は、Ｎｏｔｃｈ １のｍＲＮＡの発現のノックダウンのその有効性を低減させていることが明らかである。しかしながら、驚くべきことに、ＸＤ−００４０９に対する修飾の影響は、ＸＤ−００４０４に対する修飾の影響より目立たなく、事実上存在しないことが見いだされている。その限りにおいて、ｓｉＲＮＡ ＤＸ−００４０９は、驚くべき、および、予期しない効果を示す。
実施例４：異種移植片膵臓腫瘍モデルにおける、ヒトＮｏｔｃｈ １を標的化するｓｉＲＮＡの効果
実施例１に記載のＰＡＮＣ−１ヒト膵臓腫瘍を用いた動物試験を行なった。用いたｓｉＲＮＡ種は、完全安定化ＸＤ−００４０９であった。
この試験の結果は、以下のように要約することができる：
−体重喪失は明らかでなかった。試験での合計１０匹のマウスにおいて、前足の下に小塊が存在した。
−ゲムシタビン単剤療法、およびＮｏｔｃｈ／ゲムシタビンの組み合わせを用いた処置の後に、軽度の腫瘍阻止が明らかであったが（腫瘍重量および腫瘍増殖の割合の測定により示される）、Ｎｏｔｃｈ／ゲムシタビン併用療法のみが、腫瘍重量に関してビヒクルと有意に異なった。腫瘍阻止における相乗の応答（腫瘍増殖の割合により測定される）は、併用療法Ｎｏｔｃｈ／ゲムシタビンにより示された。
−ゲムシタビン単剤療法およびＮｏｔｃｈ／ゲムシタビン併用療法により処置されたマウスは、腫瘍壊死の発生が最も低かった。
前記の動物試験の結果を、図４にも示す。図４は、コントロール（「ビヒクル（ＮＣＦ４）」）、ゲムシタビン（「ゲムシタビン」）、および、ゲムシタビンとＮｏｔｃｈ ｓｉＲＮＡ−負荷ナノ担体の組み合わせ（「Ｎｏｔｃｈ／ゲムシタビン」）を用いた、経時的な腫瘍体積の相対的増加（％±ＳＥＭとして示される）を示すダイアグラムである。薬剤または組み合わせ薬剤はそれぞれ、１週間に２回投与した。
実施例５：同所性膵臓腫瘍モデルにおける、ヒトＮｏｔｃｈ １を標的化するｓｉＲＮＡの効果
実施例１に記載のＰＡＮＣ−１ヒト膵臓腫瘍を用いた動物試験を行なった。用いたｓｉＲＮＡ種は、完全安定化ＸＤ−００４０９であった。
試験の結果は、以下のように要約することができる：
ＰＡＮＣ−１細胞に基づく転移のない動物の数は、図５に示すように、コントロールまたはゲムシタビンのみのいずれかを受けた動物と比較して、ゲムシタビンおよびＮｏｔｃｈ ｓｉＲＮＡ−負荷ナノ担体の組み合わせを受けた動物の場合において、有意に低減した。より具体的には、１０匹の動物をビヒクルのみで処置すると、３匹の動物は数個の転移を有し、３匹の動物は単一の転移を有し、および、４匹の動物は転移がなかった；１０匹の動物をゲムシタビンのみで処置すると、２匹の動物が数個の転移を有し、４匹の動物が単一の転移を有し、および、４匹の動物は転移がなかった；そして、１０匹の動物を、完全に修飾されたＸＤ−００４０９を用いてゲムシタビンおよびｓｉＲＮＡ−負荷ナノ担体の両方で処置すると、１匹の動物が数個の転移を有し、１匹の動物が単一の転移を有し、および、８匹の動物は転移がなかった。
さらに、Ｎｏｔｃｈ １特異的ｓｉＲＮＡ（完全安定化ＸＤ−００４０９）と組み合わせたゲムシタビンでの処置は、２匹のマウスにおいて、有意な平均体重喪失および身体状態の喪失と関連した。
本明細書に挙げられる様々な参考文献の内容および開示は、それらの全体で参照により本明細書中に援用される。
明細書、特許請求の範囲および／または図面に開示される本発明の特徴は、別々およびそれらの任意の組み合わせでの両方で、本発明をそれらの様々な形態において理解するための材料となり得る。

Claims (5)

  1. 二本鎖構造を含む核酸分子であって、
    前記二本鎖構造は、連続したヌクレオチドの第一のストレッチおよび連続したヌクレオチドの第二のストレッチにより形成され、
    前記核酸分子は、遺伝子の翻訳後サイレンシングを起こすことが可能であり、前記遺伝子はヒトＮｏｔｃｈ １であり、
    前記核酸分子は、
    ａ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
    ５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣｄＴｓｄＴ ３’（配列番号６９）、および
    以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
    ５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７０）、または、
    ｂ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
    ５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７１）、および
    以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
    ５’ ＧＡｃＣａＧｕＧｇＵｃＣａＧｃＵｃＧｕｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７０）、または、
    ｃ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
    ５’ ａｃＧａＧｃＵｇＧａＣｃＡｃＵｇＧｕＣｄＴｓｄＴ ３’（配列番号６９）、および
    以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
    ５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７２）、または、
    ｄ）以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第一のストレッチ：
    ５’ ｃｇＡｇＣｕＧｇＡｃＣａＣｕＧｇＵｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７１）、および
    以下のヌクレオチド配列を含む連続したヌクレオチドの第二のストレッチ：
    ５’ ＡＣｃＡｇＵｇＧｕＣｃＡｇＣｕＣｇｄＴｓｄＴ ３’（配列番号７２）、
    からなり、
    ここで、小さいヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｆ修飾されていることを示し、下線のヌクレオチドは、ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾されていることを示し、および
    ｄＴｓｄＴは、３’末端に、２個のｄＴからなるジヌクレオチドが付いていることを示し、ここで、前記の２個のｄＴは、ホスホロチオエート結合を介して共有結合している、
    核酸分子。
  2. 請求項１に記載の核酸分子の使用であって、
    疾患の治療および／または予防のための医薬の製造における、または、
    癌細胞の薬物感受性を回復させるための医薬の製造における、
    核酸分子の使用。
  3. 不連続相および連続的な水相、および、請求項１に記載の核酸分子を含む、
    ナノエマルション。
  4. 請求項３に記載のナノエマルションであって、
    疾患の治療および／または予防のための、または、
    癌細胞の薬物感受性を回復させるための、
    ナノエマルション。
  5. 請求項１に記載の核酸分子、および／または、請求項３に記載のナノエマルション、および薬学的に許容できる賦形剤を含む、
    医薬組成物。
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