JP6542797B2 - 標的の増幅およびマイクロアレイ検出を集積したマイクロ流体装置 - Google Patents
標的の増幅およびマイクロアレイ検出を集積したマイクロ流体装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6542797B2 JP6542797B2 JP2016559817A JP2016559817A JP6542797B2 JP 6542797 B2 JP6542797 B2 JP 6542797B2 JP 2016559817 A JP2016559817 A JP 2016559817A JP 2016559817 A JP2016559817 A JP 2016559817A JP 6542797 B2 JP6542797 B2 JP 6542797B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reservoir
- microfluidic device
- amplification
- microchip
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
- B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502723—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by venting arrangements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/10—Integrating sample preparation and analysis in single entity, e.g. lab-on-a-chip concept
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/04—Closures and closing means
- B01L2300/046—Function or devices integrated in the closure
- B01L2300/048—Function or devices integrated in the closure enabling gas exchange, e.g. vents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0636—Integrated biosensor, microarrays
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0681—Filter
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
- B01L2300/0867—Multiple inlets and one sample wells, e.g. mixing, dilution
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/16—Surface properties and coatings
- B01L2300/161—Control and use of surface tension forces, e.g. hydrophobic, hydrophilic
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
- B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
- B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/06—Valves, specific forms thereof
- B01L2400/0633—Valves, specific forms thereof with moving parts
- B01L2400/0655—Valves, specific forms thereof with moving parts pinch valves
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本願は、2014年3月31日出願された中国特許出願第201410126515.6号の優先権利益を主張し、当該中国特許出願のすべての内容があらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。
いくつかの態様において、本開示は、生体分子を解析するための方法および装置に関する。特定の態様において、本開示は、(例えば、マイクロアレイを使用して)核酸の増幅および検出を行うための集積マイクロ流体装置、および当該集積マイクロ流体装置を使用する方法に関する。
分子診断の発展に伴い、核酸解析は、臨床検査、司法鑑識、食品検査および学術研究などの分野に広く応用されている。核酸解析に与えられた試料の量が通常少なく、試料中の標的分子の量も通常微量であるため、検出または定量する前に、しばしば、標的ヌクレオチド配列を増幅する必要がある。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)は、よく使用されているDNAの特定の断片を増幅する技術のうち1つである。DNAは、増幅されると、さまざまな技術、例えばリアルタイム蛍光検出、ゲル電気泳動、毛細管電気泳動およびマイクロアレイ検出によって検出することができる。マイクロアレイ技術は、試料内の複数の特定の標的DNA配列を高感度で且つ同時に測定することができるため、診断に広く使用される。従来のマイクロアレイ解析方法は、以下の処理工程、すなわち、核酸を増幅する工程、増幅産物をハイブリダイゼーション試薬と混合する工程、混合物をハイブリダイゼーションチャンバに移送する工程、ハイブリダイゼーション反応を保温する工程、洗浄工程および検出工程を必要とする。さまざまな市販装置、例えばマイクロアレイハイブリッド形成装置、清浄装置およびマイクロアレイスキャナを利用して、各々の処理工程を行うことができる。しかしながら、各処理工程を行うために、対応する装置が必要され、実験中に試料を添加および/または移送するために、並びに1つの装置から別の装置に試料を移送するために、手動操作が必要される。増幅された産物をマイクロアレイチャンバに移送する間に、増幅されたPCR産物は、空気に曝されるため、試料の交差汚染を引き起こす可能性が高い。したがって、PCR産物の移送汚染を排除または低減することができるように、増幅機能および検出機能の両方を備える集積装置が望まれる。
概要は、特許請求の範囲に記載の主題の範囲を限定するために用いられることを意図していない。特許請求の範囲に記載の主題の他の特徴、詳細、用途および利点が、添付の図面および添付の請求項に開示された態様を含む詳細な説明から明らかになるであろう。
特許請求の範囲に記載の1つ以上の実施形態の詳細な説明は、特許請求の範囲に記載の主題の原理を示す添付の図面とともに、以下に提供される。特許請求の範囲に記載の主題は、これらの実施形態に関連して説明されるが、いずれの特定の実施形態には限定されない。理解すべきことは、特許請求の範囲に記載の主題は、さまざまな形態で具体化されることができ、多数の代替物、変形物および均等物を含むことである。したがって、本明細書に開示された具体的な詳細は、限定的であると解釈すべきではなく、請求項の基礎および当業者が事実上任意の適切な詳細なシステム、構造または態様で特許請求の範囲に記載の主題を採用するための代表的な基礎として解釈すべきである。本開示の完全な理解を提供するために、以下の説明では多数の具体的な詳細を記載する。これらの詳細は、例示のために提供され、特許請求の範囲に記載の主題は、これらの具体的な詳細の一部またはすべてを省いても、請求項に従って実施され得る。理解すべきことは、他の実施形態を使用することができ、特許請求の範囲に記載の主題の範囲から逸脱することなく、構造的な変更を行うことができることである。理解すべきことは、1つ以上の実施形態に別々記載されたさまざまな特徴および機能は、これらの特徴および機能を記載している特定の実施形態にしか適用できないと限定されないことである。その代わりに、これらの特徴および機能は、単独でまたは何らかの組合せで、本明細書に記載されていない他の実施形態またはこれらの特徴および機能を一部として記載していない他の実施形態の1つ以上に適用可能である。明確にするために、特許請求の範囲に記載の主題に関連する技術分野において公知の技術的事項は、特許請求の範囲に記載の主題を不必要に不明瞭にしないように、詳細に記載されていない。
本明細書および添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形「a」、「an」および「the」は、特に断りのない限り、複数の対象物を含む。例えば、「a」または「an」は、「少なくとも1つ」または「1つ以上」を意味する。したがって、「試薬(a reagent)」を言及する場合、1つ以上の試薬を意味し、「当該方法(the method)」を言及する場合、本明細書に開示される同等の工程および方法、および/または当業者に公知の同等の工程および方法を意味する等である。
一態様において、本発明の目的は、核酸の増幅および検出(例えば、マイクロアレイを用いた検出)を行うための組立式または集積式マイクロ流体装置およびその方法を提供することである。一態様において、本発明の目的は、バルブ、流路、リザーバおよび検出チャンバを含むさまざまなマイクロ流体特徴を備えるように、マイクロ流体装置を構成することによって達成される。いくつかの実施形態において、装置は、PCRを行うための1つ以上の増幅チャンバ、および/またはマイクロアレイを有するハイブリダイゼーション検出チャンバのような1つ以上の解析チャンバを含む。一態様において、マイクロ流体装置の一部またはすべての特徴は、特定の応用のために1つ以上の試薬の輸送を可能にするように、相互接続される。
本明細書の装置を用いて検出される標的ポリヌクレオチドは、一本鎖、二本鎖またはより高次鎖であってもよく、直鎖状または環状であってもよい。例示の一本鎖の標的ポリヌクレオチドは、mRNA、rRNA、tRNA、hnRNA、マイクロRNA、ssRNAまたはssDNAウイルスゲノムおよびウイロイドを含む。これらのポリヌクレオチドは、内部相補的な配列および有意な二次構造を含んでもよい。例示的な二本鎖の標的ポリヌクレオチドは、ゲノムDNA、糸粒体DNA、葉緑体DNA、dsRNAまたはdsDNAウイルスゲノム、プラスミド、ファージ、shRNA(小ヘアピンRNAまたは短ヘアピンRNA)、およびsiRNA(小/短鎖干渉RNA)を含む。標的ポリヌクレオチドは、調製された生物学的供給源またはそれらの組み合わせから、組み換え的にまたは合成的に精製されることができる。標的ポリヌクレオチドは、試料の1つ以上の望ましくない成分を除去または減少することによって、または増幅前に標的ポリヌクレオチドを濃縮することによって、精製され得る。逆に、標的ポリヌクレオチドの濃度が特定のアッセイに高すぎる場合、標的ポリヌクレオチドを希釈することができる。
高処理量のマイクロアレイ技術は、数万個の分子相互作用を同時に評価することができる。マイクロアレイは、生物学、医学、薬物の発見に大きな影響を与えてきた。マイクロアレイに基づくDNAアッセイは、遺伝子発現の解析、変異体、一塩基多型(SNP)および短反復配列(STR)の遺伝子型決定などの応用に広く使用されてきた。ポリペプチドおよび化学マイクロアレイは、プロテオミクス分野における2つの重要なツールとして現れてきた。また、組み合わせライブラリーの一種である化学マイクロアレイは、リードの識別並びにこれらのリードの最適化のために使用することができる。バイオテロの時代において、法執行機関は、環境中の生物薬剤または化学薬剤の含量を検出することができるマイクロアレイの開発に大きな興味を持つでしょう。
本発明のマイクロ流体チップを任意の適切なアッセイに使用して、アッセイの精度、再現性および/または感度、特に小さな反応容量を含むアッセイの精度、再現性および/または感度を改善することができる。例えば、マイクロ流体チップは、さまざまな部分、例えば核酸間の相互作用、タンパク質関与の免疫反応、タンパク質と核酸との間の相互作用、リガンド−収容体間の相互作用、および小分子とタンパク質または核酸との間の相互作用をアッセイするのに使用することができる。
核酸の増幅およびマイクロアレイ検出を行うためのマイクロ流体装置組立体は、マイクロチップ(例えば、基板マイクロチップ)を備えることを特徴とする。
実施形態1のマイクロ流体装置において、リザーバを覆うための蓋は、上部の空気入口と、蓋の内側に取り付けられ、内側から空気入口を覆うための疎水性通気膜とを含む。
実施形態1または2に記載のマイクロ流体装置において、接続部は、ネジ付き接管、スリーブ接続部、または鋳造接続部である。
実施形態1〜3のいずれかに記載のマイクロ流体装置において、増幅チャンバは、ガラス、石英、ゴムおよびプラスチックからなる群から選択される材料を含む。
実施態様1〜4のいずれかに記載のマイクロ流体装置において、増幅チャンバは、弾性チューブを介して接続部に接続され、弾性チューブは、必要に応じて、シリコン、プラスチックおよびゴムからなる群から選択される材料を含む。
実施形態1〜5のいずれかに記載のマイクロ流体装置において、マイクロ流体装置は、サブシステムのさまざまな素子の間の相互作用を容易にするように、チューブおよび流路を適所に保持する支持プラットフォームを備え、支持プラットフォームは、増幅チューブを封入または埋入するための1つ以上の溝を有する金属板を備え、支持プラットフォームは、マイクロ流体装置に集積された一部であってもよく、またはマイクロチップから取り外し可能であってもよい。
実施形態1〜6のいずれかに記載のマイクロ流体装置において、なくとも1つの混合リザーバの容積は、少なくとも1つの試料リザーバおよび少なくとも1つの試薬リザーバの合計容積よりも大きい。
実施態様1〜7のいずれかに記載のマイクロ流体装置において、弾性バルブ、相変化バルブまたはトルクバルブである。
この例において、本明細書に開示された例示的なマイクロ流体装置および制御サブシステムを用いて、難聴に関連する遺伝子変異を解析および検出した。
1)洗浄溶液の調製
図2に示すように、溶液1(0.3×SSCおよび0.1%SDS)を容器71に充填し、溶液2(0.06×SSC)を容器72に充填した。
ピンチバルブ47を開放し、「a」側を閉合し、「b」側を開放するように、双方向バルブ49を切換えた。溶液容器71は、流体制御システムのチューブおよびサブシステムの内部流路(図示せず)を介して、廃棄物容器73と流体連通した。蠕動ポンプを反時計回り方向に動かすことによって、流路のチューブに液体を充填した。その後、ピンチバルブ47を閉合し、ピンチバルブ48を開放した。次いで、ピンチバルブ49を(「a」側を開放し、「b」側を閉合する)他方側に切換え、流路の他の分岐チューブに液体を充填した。
その後、制御システムを含む機器に、充填された試料および試薬を有するマイクロ流体装置を装入した。いくつかの態様において、光学センサまたは磁気センサを用いて、装置の位置を確認した。同時に、バネまたはスロット設計を用いて、マイクロ流体装置と加熱素子との密着を保証した。また、マイクロチップ上の流体界面は、流体制御サブシステム内の流体マニホールドに密接に接続された。
すべてのバルブを閉合した。「a」側を開放し、「b」側を閉合するように、双方向バルブ49を切換えた。その後、バルブ41および42を開放した。PCR試料を増幅チューブにポンプした。その後、バルブ41および42を閉合した。同様に、バルブ43および44を制御することによって、別のPCR試料を対応する増幅チューブに導入した。予め設定された熱循環プログラムに従って、PCRを行った。
ピンチバルブ41および42を開放し、増幅産物を混合リザーバにポンプした。その後、バルブ41および42を閉合した。その後、バルブ43および44を制御することによって、他の増幅チューブに同様の操作を行った。続いて、バルブ45を開放することによって、ハイブリダイゼーション試薬を混合リザーバに吸入した。蠕動ポンプを前後に移動するように操作することによって、混合リザーバ内の混合物に往復運動を加えた。徹底的に混合されたPCR産物は、ハイブリダイゼーションのために、準備された。
バルブ46を開放し、「b」側を開くように双方向バルブ49を切換えた。PCR産物およびハイブリダイゼーション試薬の混合物をマイクロアレイチャンバ31内に導入した。温度制御素子を設定することによって、マイクロアレイチャンバを60℃に加熱した。再び、蠕動ポンプを前後に移動するように操作することによって、マイクロアレイ内の混合物に往復運動を加えた。この動的ハイブリダイゼーション手順は、標的核酸配列がチャンバ上に固定化プローブに結合する効率を大幅に改善した。
ハイブリッド反応を保温した後、マイクロアレイチャンバの温度を25℃に下げた。ピンチバルブ47を開放した。容器71からマイクロアレイチャンバに溶液を汲み上げ、プローブに結合していない核酸を洗い流す。結合していない核酸を含む液体は、廃棄物チャンバに導入された。同様に、容器72内の溶液を用いて、ハイブリダイゼーション検出チャンバ(マイクロアレイチャンバ)を洗浄した。
LED光源およびCCDカメラを用いて、マイクロアレイの画像または動画を撮影した。
Claims (20)
- 標的の増幅および検出を集積したマイクロ流体装置であって、
マイクロチップを備え、
前記マイクロチップは、
少なくとも1つの試料リザーバと、
前記マイクロチップを少なくとも1つの増幅チャンバに接続するように構成された少なくとも1つの接続構造と、
少なくとも1つの試薬リザーバと、
少なくとも1つの混合リザーバと、
前記マイクロチップから取り外し可能である少なくとも1つの増幅チャンバと、
少なくとも1つの検出チャンバとを含み、前記少なくとも1つの検出チャンバは、前記マイクロチップから取り外し可能であり、
前記少なくとも1つの試薬リザーバは、前記少なくとも1つの混合リザーバに接続され、
前記少なくとも1つの混合リザーバは、前記少なくとも1つの検出チャンバに接続される、マイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの試料リザーバは、前記少なくとも1つの増幅チャンバに接続され、
前記少なくとも1つの増幅チャンバは、前記少なくとも1つの混合リザーバに接続される、請求項1に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの増幅チャンバは、前記少なくとも1つの接続構造を介して、前記マイクロチップ上に組み立てられ、
前記少なくとも1つの接続構造は、1つ以上の接続部を含む、請求項1または2に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの試料リザーバは、前記マイクロチップ上に設けられ、試料を収容するためのリザーバと、前記試料リザーバ上に設けられた取り外し可能な蓋とを含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。
- 前記取り外し可能な蓋は、空気入口と、前記蓋の内側に取り付けられ、内側から前記空気入口を覆うための疎水性通気膜とを含む、請求項4に記載のマイクロ流体装置。
- 前記少なくとも1つの試料リザーバは、前記マイクロチップに設けられた第1流路、第1接続部、第1弾性チューブ、またはそれらの組み合わせを介して、前記少なくとも1つの増幅チャンバに接続され、
前記第1流路は、前記流路の開閉を制御するバルブを含み、
前記第1接続部は、ネジ付き接管、スリーブ接続部または鋳造接続部であり、
前記第1弾性チューブは、シリコーン、プラスチックまたはゴムを含み、
前記バルブは、弾性バルブ、相変化バルブまたはトルクバルブである、請求項1〜5のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの増幅チャンバは、前記マイクロチップに設けられた第2流路、第2接続部、第2弾性チューブ、またはそれらの組み合わせを介して、前記少なくとも1つの混合リザーバに接続され、
前記第2流路は、前記流路の開閉を制御するバルブを含み、
前記第2接続部は、ネジ付き接管、スリーブ接続部または鋳造接続部であり、
前記第2弾性チューブは、シリコーン、プラスチックまたはゴムを含み、
前記バルブは、弾性バルブ、相変化バルブまたはトルクバルブである、請求項6に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの試料リザーバは、前記マイクロチップに設けられた前記第1流路に接続され、
前記第1流路は、前記第1接続部に接続され、
前記第1接続部は、前記第1弾性チューブに接続され、
前記第1弾性チューブは、前記少なくとも1つの増幅チャンバに接続され、
前記少なくとも1つの増幅チャンバは、前記第2弾性チューブに接続され、
前記第2弾性チューブは、前記第2接続部に接続され、
前記第2接続部は、前記マイクロチップに設けられた前記第2流路に接続され、
前記第2流路は、前記少なくとも1つの混合リザーバに接続される、請求項7に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの検出チャンバは、前記マイクロチップに設けられた第1導入流路を介して、導入流路開口に接続され、
前記少なくとも1つの検出チャンバは、前記マイクロチップに設けられた第2導入流路に接続され、
前記マイクロチップに設けられた前記第2導入流路は、前記マイクロチップに設けられた第3流路を介して、前記少なくとも1つの混合リザーバに接続される、請求項1〜8のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの試薬リザーバは、前記マイクロチップに設けられた第4流路を介して、前記少なくとも1つの混合リザーバに接続され、
前記第4流路は、前記流路の開閉を制御するバルブを含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの試薬リザーバは、前記マイクロチップ上に設けられ、少なくとも1つの試薬を収容するためのリザーバと、前記試薬リザーバ上に設けられた取り外し可能な蓋とを含み、
前記取り外し可能な蓋は、空気入口と、前記蓋の内側に取り付けられ、内側から前記空気入口を覆う疎水性通気膜とを含み、
前記少なくとも1つの試薬は、核酸ハイブリッドを形成するための試薬である、請求項1〜10のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。 - 前記少なくとも1つの検出チャンバは、試料から少なくとも1つの標的分子を検出するためのアレイを含み、
前記アレイは、核酸マイクロアレイ、タンパク質マイクロアレイ、組織マイクロアレイ、抗体マイクロアレイ、またはそれらの組み合わせである、請求項1〜11のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。 - 前記マイクロ流体装置は、支持プラットフォームをさらに含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。
- 前記支持プラットフォームは、熱伝導性材料を含み、
前記支持プラットフォームは、前記少なくとも1つの増幅チャンバを封入するまたは埋入するための少なくとも1つの溝を備えた板を含む、請求項13に記載のマイクロ流体装置。 - 前記支持プラットフォームは、前記マイクロチップに集積された一部であるまたは前記マイクロチップから取り外し可能である、請求項13または14に記載のマイクロ流体装置。
- 制御サブシステムをさらに含み、
前記制御サブシステムは、流体制御サブシステム、光学サブシステムおよび/または熱制御サブシステムを含み、
前記流体制御サブシステムは、前記導入流路開口、前記排出流路開口、および/または前記混合リザーバ開口に直接接続される、請求項1〜15のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。 - 前記流体制御システムは、双方向バルブを介して、前記排出流路開口および前記混合リザーバ開口の両方に接続されたポンプを含む、請求項16に記載のマイクロ流体装置。
- 前記少なくとも1つの混合リザーバの容積は、前記少なくとも1つの試料リザーバおよび前記少なくとも1つの試薬リザーバの合計容積よりも大きい、請求項1〜17のいずれか1項に記載のマイクロ流体装置。
- 標的の増幅および検出を集積した方法であって、
(1)標的を含有するまたは標的を含有する疑いのある試料を請求項1〜18のいずれか1項に記載の前記マイクロ流体装置の少なくとも1つの試料リザーバに添加し、前記少なくとも1つの試料リザーバを封止することと、
(2)少なくとも1つの試薬を少なくとも1つの試薬リザーバに添加し、前記少なくとも1つの試薬リザーバを封止することと、
(3)前記マイクロ流体装置を動作させ、前記試料を少なくとも1つの増幅チャンバに移送し、前記標的が前記試料中に存在する場合、前記標的の増幅反応を行うことと、
(4)前記マイクロ流体装置を動作させ、前記増幅反応の産物を前記少なくとも1つの混合リザーバに移送することと、
(5)前記マイクロ流体装置を動作させ、前記少なくとも1つの試薬を前記少なくとも1つの混合リザーバに移送し、前記増幅反応の前記産物と混合することによって、混合物を形成することと、
(6)前記マイクロ流体装置を動作させ、前記混合物を前記少なくとも1つの検出チャンバに移動することによって、ハイブリダイゼーション反応を行うことと、
(7)前記ハイブリダイゼーション反応の産物を検出することとを含み、前記ハイブリダイゼーション反応の産物の存在、不存在または量は、前記試料中に前記標的の存在、不存在または量を表し、
前記標的は、ポリヌクレオチド、ポリペプチドまたは小分子である、方法。 - 前記試料は、結合組織、上皮組織、筋肉組織または神経組織、脳、肺、肝臓、脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リンパ、血液、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精巣、卵巣、子宮、直腸、神経系、腺体および内部血管からなる群から選択される組織、または血液、尿、唾液、骨髄、精子、腹水、およびそれらの亜分画物からなる群から選択される体液から取得される、請求項19に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410126515 | 2014-03-31 | ||
CN201410126515.6 | 2014-03-31 | ||
PCT/CN2015/000225 WO2015149569A1 (en) | 2014-03-31 | 2015-03-31 | Integrated microfluidic device for target amplification and microarray detection |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017516083A JP2017516083A (ja) | 2017-06-15 |
JP2017516083A5 JP2017516083A5 (ja) | 2018-05-10 |
JP6542797B2 true JP6542797B2 (ja) | 2019-07-10 |
Family
ID=54161579
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016559817A Active JP6542797B2 (ja) | 2014-03-31 | 2015-03-31 | 標的の増幅およびマイクロアレイ検出を集積したマイクロ流体装置 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11396020B2 (ja) |
EP (1) | EP3126485B1 (ja) |
JP (1) | JP6542797B2 (ja) |
CN (2) | CN204727866U (ja) |
WO (1) | WO2015149569A1 (ja) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN204727866U (zh) * | 2014-03-31 | 2015-10-28 | 博奥生物集团有限公司 | 一种集核酸扩增和微阵列检测于一体的微流控装置 |
WO2017112911A1 (en) * | 2015-12-22 | 2017-06-29 | Canon U.S. Life Sciences, Inc | Sample-to-answer system for microorganism detection featuring target enrichment, amplification and detection |
US9845499B2 (en) * | 2016-04-04 | 2017-12-19 | Combinati Incorporated | Microfluidic siphoning array for nucleic acid quantification |
US11285478B2 (en) | 2016-04-04 | 2022-03-29 | Combinati Incorporated | Microfluidic siphoning array for nucleic acid quantification |
WO2018094091A1 (en) | 2016-11-17 | 2018-05-24 | Combinati Incorporated | Methods and systems for nucleic acid analysis and quantification |
CN107723210B (zh) * | 2017-11-19 | 2021-05-04 | 杭州安弼晟生物科技有限公司 | 新型核酸检测微流控芯片装置 |
CN107893026A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-04-10 | 苏州绘真医学检验所有限公司 | 检测人类病毒核酸的微流控芯片、检测方法及检测系统 |
CN110117646A (zh) * | 2018-02-05 | 2019-08-13 | 北京博奥晶典生物技术有限公司 | 一种检测23项遗传性耳聋基因突变的方法 |
CN108728327B (zh) * | 2018-05-23 | 2021-11-23 | 博奥生物集团有限公司 | 一种全自动样本制备微流控系统及其制备方法与使用方法 |
CN108642148B (zh) * | 2018-07-09 | 2024-01-30 | 南京岚煜生物科技有限公司 | 一种核酸扩增检测微流控芯片及其检测方法 |
CN109234154B (zh) * | 2018-08-20 | 2021-10-15 | 中国科学院半导体研究所 | 一种具有温度控制功能的硅基生化检测芯片 |
CN109055203A (zh) * | 2018-09-21 | 2018-12-21 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种全自动生物芯片工作站及其检测方法 |
US11097274B2 (en) * | 2018-12-20 | 2021-08-24 | Cerflux, Inc. | Biomimetic array device and methods of using same |
CN109576150A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-04-05 | 西南民族大学 | 膜芯片杂交仪 |
CN112175787B (zh) * | 2019-07-01 | 2022-05-06 | 申翌生物科技(杭州)有限公司 | 利用pcr反应系统进行pcr反应的方法 |
JP7310475B2 (ja) * | 2019-09-13 | 2023-07-19 | ウシオ電機株式会社 | 光照射装置 |
TW202142856A (zh) | 2019-11-17 | 2021-11-16 | 美商伯克利之光生命科技公司 | 用於生物樣本之分析的系統及方法 |
CN110904274A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-03-24 | 福建工程学院 | 一种流控式的hpv基因分型芯片检测方法 |
US20230105360A1 (en) * | 2020-03-09 | 2023-04-06 | Nuclein, Llc | Apparatus and methods for molecular diagnostics |
CN111269823B (zh) * | 2020-03-10 | 2020-11-03 | 杭州博日科技股份有限公司 | 热循环装置及pcr仪 |
CN111635931B (zh) * | 2020-05-27 | 2021-10-22 | 北京理工大学 | 一种多靶标miRNA检测微流控芯片、检测方法及其快速定量检测系统 |
CN114768894B (zh) * | 2021-01-22 | 2023-08-11 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 一种检测芯片及检测方法 |
CN113583839A (zh) * | 2021-08-04 | 2021-11-02 | 苏州含光微纳科技有限公司 | 一种多轴向微流控芯片及其加工方法 |
CN113736643A (zh) * | 2021-09-23 | 2021-12-03 | 吉特吉生物技术(苏州)有限公司 | 一种核酸扩增检测微流控芯片 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE60014676T2 (de) * | 1999-05-28 | 2005-11-17 | Cepheid, Sunnyvale | Vorrichtung und verfahren zur analyse flüssiger proben |
DK1181098T4 (da) * | 1999-05-28 | 2011-09-26 | Cepheid | Patron til udførelse af en kemisk reaktion |
CA2501857A1 (en) * | 2002-10-09 | 2004-04-22 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Microfluidic systems and components |
US8883487B2 (en) * | 2004-12-23 | 2014-11-11 | Abbott Point Of Care Inc. | Molecular diagnostics system and methods |
JP4643277B2 (ja) * | 2005-01-24 | 2011-03-02 | 株式会社島津製作所 | 反応容器、遺伝子多型検出方法及び装置 |
CN102268367A (zh) * | 2005-06-23 | 2011-12-07 | 拜欧卡蒂斯股份公司 | 用于自动医疗诊断的盒体、系统和方法 |
WO2007044917A2 (en) * | 2005-10-11 | 2007-04-19 | Handylab, Inc. | Polynucleotide sample preparation device |
WO2007142692A2 (en) * | 2005-11-14 | 2007-12-13 | The Government Of The Usa, As Represented By The Secretary Of The Navy | Automated sample-to-microarray system |
CN101004423B (zh) * | 2006-01-19 | 2011-12-28 | 博奥生物有限公司 | 流体样品分析用卡盒系统 |
WO2010132834A1 (en) * | 2009-05-14 | 2010-11-18 | Icubate, Inc. | Apparatus for performing amplicon rescue multiplex pcr |
KR20120031218A (ko) * | 2009-06-05 | 2012-03-30 | 인터젠엑스 인크. | 만능 샘플 제조 시스템 및 집적 분석 시스템에서의 사용 |
CN102906573B (zh) * | 2010-02-23 | 2015-02-18 | 瑞昂尼克公司 | 独立式生物检测装置、方法和应用 |
BR112012021202B1 (pt) | 2010-02-23 | 2020-06-09 | Genturadx Usa Inc | aparelho e métodos para preparação, reação e detecção integradas de amostras |
AU2011254887C1 (en) * | 2010-05-19 | 2014-07-24 | Curetis Gmbh | Reaction vessel for PCR device and method of performing PCR |
AU2012340344B2 (en) * | 2011-11-17 | 2015-10-29 | Rheonix, Inc. | Microfluidic apparatus, method, and applications |
CN103571740B (zh) * | 2013-10-15 | 2017-11-24 | 周国华 | 集核酸提取、扩增与检测一体化的装置 |
CN204727866U (zh) * | 2014-03-31 | 2015-10-28 | 博奥生物集团有限公司 | 一种集核酸扩增和微阵列检测于一体的微流控装置 |
-
2015
- 2015-03-30 CN CN201520185304.XU patent/CN204727866U/zh active Active
- 2015-03-30 CN CN201510145687.2A patent/CN104946510B/zh active Active
- 2015-03-31 WO PCT/CN2015/000225 patent/WO2015149569A1/en active Application Filing
- 2015-03-31 JP JP2016559817A patent/JP6542797B2/ja active Active
- 2015-03-31 EP EP15774049.9A patent/EP3126485B1/en active Active
- 2015-03-31 US US15/128,794 patent/US11396020B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3126485A1 (en) | 2017-02-08 |
US20170095818A1 (en) | 2017-04-06 |
US11396020B2 (en) | 2022-07-26 |
EP3126485B1 (en) | 2019-04-24 |
CN104946510A (zh) | 2015-09-30 |
EP3126485A4 (en) | 2017-11-29 |
CN204727866U (zh) | 2015-10-28 |
CN104946510B (zh) | 2017-06-06 |
WO2015149569A1 (en) | 2015-10-08 |
JP2017516083A (ja) | 2017-06-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6542797B2 (ja) | 標的の増幅およびマイクロアレイ検出を集積したマイクロ流体装置 | |
JP6957517B2 (ja) | 集積型マイクロ流体チップおよび使用方法 | |
Chang et al. | Nucleic acid amplification using microfluidic systems | |
JP6754701B2 (ja) | マルチインデックス検出マイクロ流体チップおよび使用方法 | |
EP2473625B1 (en) | Devices and methods for microarray selection | |
EP3013983B1 (en) | Spatially encoded biological assays using a microfluidic device | |
KR101940833B1 (ko) | 유전자 및 생물학적 분석을 위한 시스템 및 방법 | |
JP5523327B2 (ja) | 統合型マイクロ流体デバイスおよび方法 | |
CN107002006B (zh) | 用于检测目标基因的微流体装置、用于制造微流体装置的方法及用于使用微流体装置进行检测的方法 | |
EP2855658A1 (en) | Integrated system for real-time monitoring of microfluidic reactions | |
KR20110081808A (ko) | 특이적 화학적 타겟과 결합하는 핵산의 신속한 확인을 위한 장치 | |
CN110964796A (zh) | 大规模平行单细胞分析 | |
EP4165208A2 (en) | Flow cell systems and devices | |
Huang et al. | An automated microfluidic DNA microarray platform for genetic variant detection in inherited arrhythmic diseases | |
US20220307079A1 (en) | System for combined electric, magnetic, and convective acceleration of chemical and biochemical reactions and methods of use thereof | |
US20020110835A1 (en) | Microfluidic devices and methods | |
WO2017205267A1 (en) | Multifunctional microfluidic device for capturing target cells and analyzing genomic dna isolated from the target cells while under flow conditions | |
İnce et al. | Micro-polymerase chain reaction for point-of-care detection and beyond: a review microfluidics and nanofluidics | |
EP2532754A1 (en) | Devices and methods for efficient capture of nucleic acids | |
US20100021907A1 (en) | Method of detecting a plurality of nucleic acids | |
Tai et al. | An integrated microfluidic system capable of sample pretreatment and hybridization for microarrays | |
CN116179668A (zh) | 靶向反应复合物及其在靶向多重检测中的用途 | |
WO2024057089A1 (en) | Device for parallel detection and quantification of nucleic acid based markers | |
JP2023545478A (ja) | 次世代配列決定ライブラリ調製のための電気泳動デバイスおよび方法 | |
WO2006047911A1 (fr) | Type de biopuce a haut debit et son application |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180323 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180323 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190122 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190125 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190422 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190521 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190613 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6542797 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |