JP6511075B2 - 細胞リプログラミング誘導用組成物 - Google Patents

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Description

本特許出願は、２０１４年７月１日に大韓民国特許庁に提出された大韓民国特許出願第１０—２０１４-００８１８８９号に対して優先権を主張し、前記特許出願の開示事項は、本明細書に参照として挿入される。本発明は、細胞リプログラミング誘導用組成物に関する。
高齢化社会が到来するにつれて、退行性疾患により既に多くの人々が苦痛を受けており、その数が増加している傾向にある。パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症を含んだ多数の退行性難治性疾患の最も理想的な治療法は、患者の細胞から由来した分化多能性幹細胞またはこれから分化した機能細胞を患部に移植することである。最近、退行性難治性疾患の根本的な治療のために、細胞リプログラミング（ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）または逆分化技術に基づいて、細胞治療剤及び新薬開発を主導するための世界各国の技術開発競争が熾烈を極めている。
逆分化技術は、患者に身体的損傷及び不便さがほとんどない比較的容易な方法で自家-体細胞を確保し、これから人間胎芽幹細胞のような特性の誘導多能幹細胞を製造するのを可能にすることによって、患者-体細胞から特別注文型自家全分化能幹細胞株を確立する戦略を画期的に進化させた。例えば、未分化幹細胞を誘導するために特定遺伝子が組合わせられたウイルスを利用でき、前記ウイルスを細胞内に伝達して遺伝子が細胞の誘電体に挿入された形態で該当蛋白質を発現させる方法が複数の研究者によって提示された。一方、このような方法によって製造されたリプログラミングされた細胞は、胎芽幹細胞とほぼ同等な細胞特性と分化能を有していると確認されたが、ウイルスベクトルを媒介として遺伝子を伝達したため、細胞の誘電体上にウイルス由来の遺伝物質を多量含むようになるという問題点がある。また、インビボ実験では、誘導多能幹細胞から癌を形成する副作用が現れたし、これは、誘導多能幹細胞を実際臨床に適用することがまだ非常に危険でありうることを意味する。
このように逆分化幹細胞は、リプログラミング過程で癌遺伝子（ｏｎｃｏｇｅｎｅ）を利用するという問題点を有しているから、最近では、従来のリプログラミング方式から脱皮して、体細胞を患者に必要な細胞系統に直接分化させる直接リプログラミング（ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）に対する研究が盛んに進められている。
一方、従来の化合物のうち、細胞リプログラミング用途として使用可能な化合物（例えば、リバーシン、Ａｕｒｏｒａキナーゼ阻害剤）は、細胞に毒性があるから、細胞リプログラミング組成物として使用するには適していない。
本発明者らは、上述の問題点を解消するために、細胞に毒性がないながら分化された細胞から直ちに他の形質の細胞にリプログラミング（Ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）を可能にする化合物を合成し、これを利用する場合、安全でかつ効率的な細胞リプログラミングが可能であることを確認した。
本明細書の全体にかけて多数の論文及び特許文献が参照され、その引用が表示されている。引用された論文及び特許文献の開示内容は、その全体として本明細書に参照として挿入されて、本発明が属する技術分野の水準及び本発明の内容がさらに明確に説明される。
本発明者らは、従来のインダゾール誘導体化合物より改善した生物学的プロファイル（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｆｉｌｅ）を表しながら細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）を行うことができる化合物を開発しようと鋭意研究努力した。その結果、本発明者らは、細胞リプログラミング誘導能力を有する新規なインダゾール誘導体化合物を分子設計し合成し、これらの化合物が従来のインダゾール誘導体（例えば、キナーゼ阻害剤）とは異なり、細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｃｉｃｉｔｙ）を表さないながらも優れた細胞リプログラミング能力を表すことを確認することによって、本発明を完成するに至った。
したがって、本発明の目的は、細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）誘導用組成物を提供することにある。
本発明の他の目的は、新規なインダゾール誘導体（ｉｎｄａｚｏｌｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）を提供することにある。
本発明の他の目的及び利点は、下記の発明の詳細な説明、請求の範囲及び図面によってより明確になる。
本発明の一態様によると、本発明は、下記の式Ａで表される化合物を含む細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）誘導用組成物を提供する。
前記式Ａ中、Ｒ１は、水素、ニトロ、ニトロキシまたはＹ-カルボニルであり；前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-３０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-２０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-３０アリール、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｘは、アミン、アミド、スルホンアミド、カルボニル、オキシムまたはイミドアミドである。
本発明の他の様態によれば、本発明は、本発明の細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）組成物を分化された細胞に接触させるステップと、（ｂ）前記ステップ（ａ）の細胞を培養するステップとを含む分化された細胞からリプログラミングされた細胞を製造する方法を提供する。
本発明者らは、従来のインダゾール誘導体化合物より改善された生物学的プロファイル（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｆｉｌｅ）を表しながら細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）を行うことができる化合物を開発しようと鋭意研究努力した結果、細胞リプログラミング誘導能力を有する新規なインダゾール誘導体化合物を分子設計し合成し、これらの化合物が従来のインダゾール誘導体（例えば、キナーゼ阻害剤）とは異なり、細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｃｉｃｉｔｙ）を表さないながらも優れた細胞リプログラミング能力を表したことを確認した。
式Ａで表される本発明の化合物は、分化された細胞を新しい形質の細胞にリプログラミングする化合物であって、インダゾール（ｉｎｄａｚｏｌｅ）を母核として化学的に合成される。従来のインダゾール誘導体（ｉｎｄａｚｏｌｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）化合物は、細胞リプログラミング用途として全く知られたことがなく、本発明の化合物の場合、従来のインダゾール誘導体化合物と比較して、細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）がないか、または顕著に低いながらも細胞リプログラミング能力は、極めて優れている。従来の直接リプログラミング（ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）方法は、ウイルスを利用して遺伝子を導入する方法で患者に直接適用し難く、誘導過程の効率性が低く、免疫的に問題になるという短所があった。本発明の低分子物質を利用した直接リプログラミングの場合、ウイルスを介した遺伝子導入の代わりに、低分子物質の処理だけでリプログラミングを誘導するから、安定性と経済性及び効率性面において極めて優れている。
本発明の組成物は、分化された細胞からリプログラミングされた細胞を誘導するのに極めて有効である。本発明によれば、本発明の組成物は、哺乳動物由来の分化された細胞からリプログラミングされた骨形成（ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｌｉｎｅａｇｅ）細胞または脂肪形成（ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ ｌｉｎｅａｇｅ）細胞など、多様な系統の細胞株を誘導できる。本発明の一実施例によれば、本発明の組成物は、筋芽細胞（ｍｙｏｂｌａｓｔ）から造骨細胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）または脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）への分化を誘導する。
分化された細胞とは、特に限定されず、例えば、体細胞または体細胞幹細胞を含む。体細胞とは、成体を構成する細胞として分化能及び自家生産能が制限された細胞を意味し、前記体細胞は、人間の皮膚、毛髪、脂肪または骨（ｂｏｎｅ）を構成する体細胞でありうる。
前記分化された細胞は、人間、猿、豚、馬、牛、羊、犬、猫、マウス及びうさぎなどの多様な哺乳動物から由来した細胞であっても良く、好ましくは、人間から由来した細胞でありうる。
本明細書において用語「リプログラミング（Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）」は、分化能のない細胞または一定部分に分化能のある細胞など、互いに異なる様態として存在する分化された細胞から、最終的に新しい類型の細胞または新しい類型の分化潜在力を有する状態に復元または転換されうるプロセスを意味する。本発明によれば、分化された細胞は、本発明の組成物と接触するにつれて、０％ないし１００％の異なる形質を表す細胞にリプログラミングされることができる。
本明細書において、式Ａのインダゾール誘導体を定義するために用いられる用語「ニトロ」は、ハロゲン族元素を表し、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含む。
用語「ニトロキシ」は、-Ｏ-Ｎ＝Ｏ官能基を意味する。
用語「カルボニル」は、-（Ｃ＝Ｏ）-官能基を意味する。
用語「ヒドロキシ」は、-ＯＨ官能基を意味する。
用語「ハロ」は、ハロゲン族元素を表し、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含む。
用語「アルキル」は、直鎖または分岐鎖の非置換または置換された飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソブチル、ペンチル、へキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、トリデシル、ペンタデシル及びヘプタデシルなどを含む。Ｃ１-３０アルキルは、炭素数１ないし３０のアルキルユニットを有するアルキル基を意味し、Ｃ１-３０アルキルが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。本発明によれば、式Ａ中、Ｙ位置でのＣ１-３０アルキルはＣ１-１５アルキルで、式Ａ中、Ｒ２位置のＣ１-３０アルキルは、好ましくは、Ｃ１-１５アルキルである。
用語「アルケニル」は、指定された炭素数を有する直鎖または分岐鎖の非置換または置換された不飽和炭化水素基を表し、例えば、エテニル、ビニル、プロフェニル、アリル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ｔ-ブテニル、ｎ-ペンテニル及びｎ-ヘキセニルを含む。Ｃ２-３０アルケニルが炭素数２ないし３０のアルケニルユニットを有するアルケニル基を意味し、Ｃ２-３０アルケニルが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。本発明によれば、式Ａ中、Ｙ位置でのＣ２-３０アルケニルは、Ｃ２-１５アルケニルであり、式Ａ中、Ｒ２位置のＣ２-３０アルケニルは、Ｃ２-１５アルケニルである。
用語「アルコキシ」は、１個の酸素原子と結合されたアルキル基またはアリールを意味する。例えば、メトキシ、エトキシ、プロトキシ、アリールオキシなどを含む。Ｃ１-３０アルコキシは、炭素数１ないし３０のアルコキシユニットを有するアルキル基を意味し、Ｃ１-３０アルコキシが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。
用語「アルコキシアルキル」は、アルコキシに置換されたアルキル基を意味する。Ｃ２-５アルコキシアルキルは、炭素数２ないし５のアルコキシアルキルユニットを有するアルコキシアルキル基を意味し、Ｃ２-５アルコキシアルキルが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。
用語「アルコキシカルボニル」は、アルコキシに置換されたカルボニルを意味する。Ｃ２-５アルコキシカルボニルは、炭素数２ないし５のアルコキシカルボニルユニットを有するアルコキシカルボニルを意味し、Ｃ２-５アルコキシカルボニルが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。
用語「ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むヘテロシクロアルキル」は、炭素と水素、最小一つのヘテロ原子（窒素、酸素または黄）を含む非-芳香族性サイクリック炭化水素基を意味する。前記ヘテロ原子は、好ましくは、窒素または酸素で、最も好ましくは、窒素である。本発明によれば、ヘテロ原子の数は、１-４個、１-３個、または１-２個である。Ｃ２-３０ヘテロシクロアルキルは、リング構造を形成する炭素の数が２-３０であるヘテロシクロアルキルを意味する。
一方、前記ヘテロシクロアルキルは、全体的にまたは部分的に置換または非置換された炭素輪であって、前記ヘテロシクロアルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-Ｃ５置換または非置換された直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ１-Ｃ５直鎖または分枝鎖アルコキシ、Ｃ１-Ｃ５直鎖または分枝鎖アルケニル、Ｃ２-８アルコキシアルキル、Ｃ２-８アルコキシカルボニル、ヘテロ原子として窒素を含むＣ２-８ヘテロシクロアルケニルアルキル、
、
またはこれらの組み合わせにより置換されることができる。
用語「ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むヘテロシクロアルケニル」は、炭素と水素、及び最小一つのヘテロ原子（窒素、酸素または黄）及び最小一つの二重結合を含む非-芳香族性サイクリック炭化水素基を意味する。前記ヘテロ原子は、好ましくは、酸素または窒素で、最も好ましくは、窒素である。本発明によれば、ヘテロ原子の数は、１-４個、１-３個、または１-２個である。Ｃ２-３０ヘテロシクロアルケニルは、リング構造を形成する炭素の数が２-３０であるヘテロシクロケニルを意味する。
用語「ヘテロシクロアルケニルアルキル」は、ヘテロシクロアルケニル基に置換されたアルキル基を意味する。Ｃ２-８ヘテロシクロアルケニルアルキルは、炭素数２ないし５のヘテロシクロアルケニルアルキルユニットを有するヘテロシクロアルケニルアルキルを意味し、Ｃ２-５ヘテロシクロアルケニルアルキルが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。
用語「アリール」は、全体的にまたは部分的に不飽和された置換または非置換されたモノサイクリックまたはポリサイクリック炭素輪を意味する。Ｃ６-３０アリールは、炭素数６ないし３０の炭素輪原子を有するアリール基を意味し、Ｃ６-３０アリールが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。好ましくは、アリールは、モノアリールまたはビアリールである。モノアリールは、炭素数５-６を有することが好ましく、ビアリールは、炭素数９-１０を有することが好ましい。本発明によれば、前記アリールは、置換または非置換されたフェニルである。モノアリール、例えば、フェニルが置換された場合には、多様な位置で多様な置換体により置換がなされることができ、例えば、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ１-Ｃ５置換または非置換された直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ１-Ｃ５直鎖または分枝鎖アルコキシ、Ｃ１-Ｃ５直鎖または分枝鎖アルケニルまたはこれらの組み合わせにより置換されることができる。
特に、好ましいアリール部位は、フェニル、ベンジル、ナフチル、ピロイル、ピロリジニル、ピリジニル、ピリミジニル、プリニル、キノリニル、イソキノリニル、フリル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル及びチエニルを含むが、これに限定されるものではない。
用語「アミン（ａｍｉｎｅ）」は、非結合対（ｌｏｎｅ ｐａｉｒ）を有する塩基性窒素原子を含む官能基を意味する。Ｃ１-１０アミンは、-ＮＨ２または炭素数１ないし１０のアミンユニットを有するアミン基を意味し、Ｃ１-１０アミンが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。本発明によれば、式Ａ中、Ｘ位置のＣ１-１０アミンは、Ｃ１-５アミンまたは-ＮＨ２である。
用語「アミド」は、窒素原子に結合されたアシル基から構成された官能基を意味する。Ｃ１-１０アミドは、炭素数１ないし１０のアミドユニットを有するアミド基を意味し、Ｃ１-１０アミドが置換された場合、置換体の炭素数は含まれないことである。本発明によれば、前記アミドは、Ｒ-ＣＯ-ＮＨ-Ｒ'、スルホンアミドまたはホスホリルアミドである。
用語「オキシム（ｏｘｉｍｅ）」は、ＲＲ'Ｃ＝Ｎ-ＯＨのイミン（ｉｍｉｎｅｓ）を含む官能基を意味する。
用語「イミドアミド」は、Ｎ-ＣＲ＝Ｎ'Ｈ２を含む官能基を意味する。
本発明によれば、前記式Ａ中、Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-１５アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-１５アリール、Ｃ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルである。
本発明によれば、前記Ｙ中、ヘテロシクロアルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニル、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ２-８アルコキシアルキル、Ｃ２-８アルコキシカルボニル、ヘテロ原子として窒素を含むＣ２-８ヘテロシクロアルケニルアルキル、
、
またはこれらの組み合わせにより置換されることができる。
本発明の一具現例によると、前記Ｙのヘテロシクロアルケニルアルキルは、（１Ｈ-イミダゾール-１-ｌｙ）アルキルである。
本発明によれば、前記Ｒ２は、水素、ハロ、Ｃ１-１５アリール、Ｃ１-１５アルコキシまたはＣ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルであり；前記Ｒ２におけるアリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニルまたはこれらの組み合わせにより置換されることができる。
一方、前記式Ａ中、前記Ｘがイミドアミド（
）である場合、前記Ｒ２は、前記イミドアミドのＣまたはＮ'に結合されることができる。
本発明の化合物は、一つまたはそれ以上のキラルセンター及び／または幾何異性質センターを有することができ、これに本発明は、前記式Ａで表されるすべての立体異性質体、すなわち、光学異性質体、部分立体異性質体及び幾何異性質体を含む。
本発明によれば、本発明の細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）誘導用組成物は、次の式１ないし式４５から構成された群から選択される式で表される化合物である：
本発明によれば、本発明の細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）誘導用組成物は、次の式１、式２５、式３０、式３１、式３３、式３４、式３５及び式４５から構成された群から選択される式で表される化合物である：
本発明のさらに他の容態によれば、本発明は、インダゾール誘導体（ｉｎｄａｚｏｌｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）として次の式Ａで表される化合物を提供する：
前記式Ａ中、Ｒ１は、水素、ニトロ、ニトロキシまたはＹ-カルボニルであり；前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-３０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-２０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-３０アリール、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｘは、アミン、アミド、スルホンアミド、カルボニル、オキシムまたはイミドアミドであり；ただし、前記Ｒ１がニトロで前記Ｘがアミドである場合、Ｒ２は、フェニルではなく；前記Ｒ１及びＲ３が水素で、前記ＸがＮ-ヒドロキシ-イミドアミドで前記Ｒ２がフェニルである場合、Ｒ２は、イミドアミドの炭素原子に結合しない（またはＲ２は、イミドアミドのＮ'原子に結合する）。
本発明によれば、前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-１５アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-１５アリール、Ｃ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルである。
本発明によれば、式Ａの前記Ｙにおけるヘテロシクロアルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニル、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ２-８アルコキシアルキル、Ｃ２-８アルコキシカルボニル、ヘテロ原子として窒素を含むＣ２-８ヘテロシクロアルケニルアルキル、
、
またはこれらの組み合わせにより置換されることができる。本発明の一具現例によれば、前記ヘテロシクロアルケニルアルキルは、（１Ｈ-イミダゾール-１-ｌｙ）アルキルである。
本発明によれば、前記式Ａ中、前記Ｒ２は、水素、ハロ、Ｃ１-１５アリール、Ｃ１-１５アルコキシまたはＣ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルであり、前記Ｒ２におけるアリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニルまたはこれらの組み合わせにより置換されることができる。
本発明の一具現例によれば、前記式Ａ中、前記ヘテロ原子は、窒素である。
本発明のインダゾール誘導体化合物は、次の式１、式２及び式４ないし式４５から構成された群から選択される式で表される。
本発明によれば、本発明のインダゾール誘導体化合物は、次の式１、式２５、式３０、式３１、式３３、式３４、式３５及び式４５から構成された群から選択される式で表される。
本発明のさらに他の様態によれば、本発明は、下記の式Ａで表される化合物を含む組成物を細胞に接触させて細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）を誘導する方法を提供する：
前記式Ａ中、Ｒ１は、水素、ニトロ、ニトロキシまたはＹ-カルボニルであり；前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-３０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または黄を含むＣ２-２０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-３０アリール、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｘは、アミン、アミド、スルホンアミド、カルボニル、オキシムまたはイミドアミドである。
本発明の細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）誘導方法は、上述の本発明の細胞リプログラミング誘導用組成物を利用することであって、この両者に共通した内容は、繰り返し記載による明細書の過度な複雑性を避けるために、その記載を省略する。
本発明の特徴及び利点を要約すると、以下のとおりである。
（ａ）本発明は、細胞リプログラミング誘導組成物に関する。
（ｂ）本発明のインダゾール誘導体化合物は、改善された生物学的プロファイルを表すと共に、効率的な細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）を行うことができる。
（ｃ）本発明のインダゾール誘導体化合物は、従来の低分子細胞リプログラミング誘導化合物（例えば、リバーシンまたはＢＩＯ）とは異なり、細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｃｉｃｉｔｙ）を表さないから、臨床適用時に細胞治療剤または細胞リプログラミング誘導剤市場での高成長を期待することができる。
（ｄ）一方、従来のインダゾール誘導体（ｉｎｄａｚｏｌｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）化合物は、細胞リプログラミング用途として全く知られたことがなく、非特異的細胞毒性によって高濃度処理が不可能である。
（ｅ）本発明の化合物の場合、従来のインダゾール誘導体化合物と比較して細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）がないか、または顕著に低く、かつ細胞リプログラミング能力が非常に優れており、新規な作用機序を有する。
図１は、Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞（ｍｙｏｂｌａｓｔ）を本発明の化合物と接触させた後に造骨細胞にリプログラミングされた結果を示す。本発明の化合物であるＬＤＤ-１８２１、ＬＤＤ-１６６４、ＬＤＤ-１９４５、ＬＤＤ-２１９９またはＬＤＤ-２２００と接触させた後、アリザリンレッド染色して観察した（ＡＴＤＣ５：軟骨前駆細胞株）。 図２は、Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞（ｍｙｏｂｌａｓｔ）を本発明の化合物と接触させた後に造骨細胞にリプログラミングされた結果を示す。本発明の化合物であるＬＤＤ-１８２１、ＬＤＤ-１６６４、ＬＤＤ-１９４５、ＬＤＤ-２１９９またはＬＤＤ-２２００と接触させた後、アリザリンレッド染色して観察した（ＡＴＤＣ５：軟骨前駆細胞株）。 図３は、Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞（ｍｙｏｂｌａｓｔ）を本発明の化合物と接触させて、アリザリンレッドアッセイした結果を示す。グラフは、各化合物を処理した場合の吸光度を示す。 図４は、Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞でのＭＴＴアッセイ結果を示す。
以下、実施例を通じて本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は、ただ本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の要旨によって本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されないことは、この技術分野における通常の知識を有した者にとって自明であるはずである。
［合成例］
［合成模式図１］
以下、合成例において記載する反応過程及び置換基は、前記合成模式図上の反応過程及び置換基を意味する。
［一般的合成過程］
［ステップ（ａ）の一般的過程］
出発物質（１．０ｇ，６．０２ｍｍｏｌ）をｎ-ブタノール（２０ｍＬ）に溶解させた。以後、ヒドラジンハイドレート（４２０μＬ，７．２２ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。前記混合物を１１０℃で２時間の間に撹拌し冷却させた後、メチレンクロリド（ＭＣ）を反応物に添加して生成された沈殿物をろ過することにより、目的化合物を得た。
［合成例１：５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イルアミン（化合物１）］
２-フルオロ-５-ニトロベンゾニトリル（１．０ｇ，６．０２ｍｍｏｌ）をｎ-ブタノール（２０ｍＬ）に溶解させた。以後、ヒドラジンハイドレート（４２０μＬ，７．２２ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。前記混合物を１１０℃で２時間の間に撹拌し冷却させた後、ＭＣを反応物に添加した後に生成された沈殿物をろ過して、目的化合物を得た（収率８４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ８．８９（ｄ，１Ｈ）、８．０５（ｄｄ，１Ｈ）、７．３４（ｄ，２Ｈ）、５．９８（ｓ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝１７８．１５
［合成例２：３-アミノ-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物２）］
３-シアン-４-フルオロ安息香酸（１．０ｇ，６．０２ｍｍｏｌ）をｎ-ブタノール（２０ｍＬ）に溶解させた。以後、ヒドラジンハイドレート（４２０μＬ，７．２２ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。前記混合物を１１０℃で２時間の間に撹拌し冷却させた後、生成された沈殿物をろ過した後ＭｅＯＨで洗浄して、目的化合物を得た（収率５５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．３５（ｓ，１Ｈ）、８．４５（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，２Ｈ）、７．２２（ｄ，１Ｈ）、５．５９（ｓ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝１７７．１６
［ステップ（ｂ-２）の一般的過程］
合成模式図１、化学構造式２の化合物（５０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）をピリジン（０．３ｍＬ）に溶解させた。以後、Ｒ２-ベンゾイルクロリド（１６．５μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで精製して目的化合物（化合物３ないし化合物６）を得た。
［合成例３（ＬＤＤ-１６６４）：Ｎ-（５-ニトロ-１（２）Ｈ-インダゾール-３-イル）-ベンズアミド（化合物３）］
５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イルアミン（５０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）をピリジン（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ベンゾイルクロリド（１６．５μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。カラムクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率４２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ８．９５（ｄ，１Ｈ）、８．２２（ｄｄ，１Ｈ）、８．１２（ｍ，２Ｈ）、８．１２（ｍ，２Ｈ）、７．６９（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２８２．２６
［合成例４（ＬＤＤ-１６６３）：３-ブロモ-Ｎ-（５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イル）ベンズアミド（化合物４）］
５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イルアミン（０．１４ｍｍｏｌ）をピリジン（０．４ｍＬ）に溶解させた。次に、３-ブロモベンゾイルクロリド（１９μＬ，０．１４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。前記抽出物にジクロロメタン（ＤＣＭ）とヘキサンを添加して沈殿物を作った後にろ過して、目的化合物を得た（収率３７％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．３２（ｓ，１Ｈ）、８．９３（ｄ，１Ｈ）、８．２６（ｓ，１Ｈ）、８．１９（ｄｄ，１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３６１．１６
［合成例５（ＬＤＤ-２３４８）：４-メトキシ-Ｎ-（５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-ｙｌ）ベンズアミド（化合物５）］
５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イルアミン（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をピリジン（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、４-メトキシベンゾイルクロリド（２４ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。カラムクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率４０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ８．９３（ｄ，１Ｈ）、８．２０（ｄｄ，１Ｈ）、８．１２（ｄ，２Ｈ）、７．６７（ｄ，１Ｈ）、７．１１（ｄ，２Ｈ）、３．８６（ｓ，３Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１２．２８
［合成例６（ＬＤＤ-１６６５）：３-ベンズアミド-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物６）］
３-アミノ-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をピリジン（０．５ｍＬ）に溶解させた。次に、ベンゾイルクロリド（１６．５μＬ，０．１４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。ＤＣＭを利用して沈殿物を作った後にろ過して、目的化合物を得た（収率３１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．９８（ｓ，１Ｈ）、８．１１（ｄ，２Ｈ）、７．９４（ｄｄ，１Ｈ）、７．６６（ｔ，１Ｈ）、７．５８（ｔ，３Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２８１．２７
［ステップ（ｃ-３）の一般的過程］
合成模式図１、化学構造式３の化合物（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１ｍＬ）に溶解させた。以後、（ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．０３ｍｍｏｌ）、ピペリジン（０．１７ｍｍｏｌ）及びエチレンジクロリド（ＥＤＣ、０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例７（ＬＤＤ-１８２０）：Ｎ-（５-（ピペリジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-イル）ベンズアミド（化合物７）］
３-ベンズアミド-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解させた。ＤＭＡＰ（０．０３ｍｍｏｌ）、ピペリジン（０．１７ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１１．０２（ｓ，１Ｈ）、９．２６（ｓ，１Ｈ）、８．１５（ｓ，１Ｈ）、８．０４（ｄ，２Ｈ）、７．５９（ｍ，３Ｈ）、７．３７（ｄ，１Ｈ）、７．２１（ｄ，１Ｈ）、３．５９（ｍ，４Ｈ）、１．７５（ｍ，６Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３４８．４１
［ステップ（ｄ-４）の一般的過程］
合成模式図１、化学構造式３の化合物（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解させた。ＤＭＡＰ（０．０３ｍｍｏｌ）、ｔ-ブチル４-アミノピペリジン-１-カルボキシレート（０．１７ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例８（ＬＤＤ-１６９０）：ｔｅｒｔ-ブチル４-（３-ベンズアミド１Ｈ-インダゾール-５-カルボニル）ピペラジン-１-カルボキシレート（化合物８）］
３-ベンズアミド-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解させた。ＤＭＡＰ（０．０３ｍｍｏｌ）、ｔ-ブチル４-アミノピペリジン-１-カルボキシレート（０．１７ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．８２（ｓ，１Ｈ）、８．２３（ｓ，２Ｈ）、８．０７（ｄ，２Ｈ）、７．８５（ｄ，１Ｈ）、７．６０（ｍ，４Ｈ）、３．９６（ｍ，３Ｈ）、２．７９（ｍ，２Ｈ）、１．７４（ｍ，２Ｈ）、１．４１（ｍ，１１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４４９．５１
［ステップ（ｅ-５）の一般的過程］
合成模式図１、化学構造式５の化合物（３０ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．７ｍＬ）に溶解させた。０℃でＴＦＡ（０．２ｍｌ）を入れた後に０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にアンモニアで飽和（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）されたクロロホルムとメタノールを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例９（ＬＤＤ-１６９１）：Ｎ-（５-（ピペラジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-イル）ベンズアミド（化合物９）］
ｔｅｒｔ-ブチル４-（３-ベンズアミド１Ｈ-インダゾール-５-カルボニル）ピペラジン-１-カルボキシレート（３０ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．７ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、０．２ｍｌ）を入れた後、０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にアンモニアで飽和されたクロロホルムとＭｅＯＨを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率２０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．８６（ｓ，１Ｈ）、８．４０（ｄ，１Ｈ）、８．２４（ｓ，１Ｈ）、８．０７（ｄ，２Ｈ）、７．８５（ｄ，１Ｈ）、７．６３（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３４９．３９
［合成模式図２］
以下、合成例において記載する反応過程及び置換基は、前記合成模式図上の反応過程及び置換基を意味する。
［一般的合成過程］
［ステップ（ａ）の一般的過程］
合成模式図２、化学構造式２の化合物（５０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）をピリジン （０．９ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｒ２-ベンゼンスルホニルクロリド（３６μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。ＤＣＭを利用して沈殿物を作った後にろ過して、目的化合物を得た。
［合成例１０（ＬＤＤ-１６６７）：Ｎ-（５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イル）ベンゼンスルホンアミド（化合物１０）］
５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イルアミン（５０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）をピリジン（０．９ｍＬ）に溶解させた。次に、ベンゼンスルホニルクロリド（３６μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、アセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した．ＭＣを利用して沈殿物を作った後にろ過して、目的化合物を得た（収率４３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．１４（ｓ，１Ｈ）、８．７０（ｄ，１Ｈ）、８．１２（ｄｄ，１Ｈ）、７．７８（ｄ，２Ｈ）、７．５５（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１８．３１
［合成例１１（ＬＤＤ-１６６６）：３-ブロモ-Ｎ-（５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-ｙｌ）ベンゼンスルホンアミド（化合物１１）］
５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-イルアミン（０．２８ｍｍｏｌ）をピリジン（０．９ｍＬ）に溶解させた。次に、３-ブロモベンゼンスルホニルクロリド（４０μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。前記抽出物にＤＣＭとヘキサンを添加して沈殿物を作った後にろ過して、目的化合物を得た（収率５０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．９９（ｓ，１Ｈ）、８．７２（ｄ，１Ｈ）、８．１９（ｍ，１Ｈ）、７．９９（ｔ，１Ｈ）、７．８７（ｄ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，１Ｈ）、７．６３（ｄ，１Ｈ）、７．５４（ｔ，１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３９７．２０
［合成例１２（ＬＤＤ-１６６８）：３-（フェニルスルホンアミド）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物１２）］
３-アミノ-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をピリジン（０．７ｍＬ）に溶解させた。ベンゼンスルホニルクロリド（２０μＬ，０．１４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し１時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。メタノールを利用して沈殿物を作った後にろ過して、目的化合物を得た（収率２０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．８８（ｓ，１Ｈ）、８．４２（ｓ，１Ｈ）、７．８９（ｄｄ，３Ｈ）、７．６３（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１７．３２
［ステップ（ｂ-２）の一般的過程］
合成模式図２、化学構造式７の化合物（２５ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．８ｍＬ）に溶解させた。ＤＭＡＰ（０．０２ｍｍｏｌ）、ｔ-ブチル４-アミノピペリジン-１-カルボキシレート（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１６ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例１３（ＬＤＤ-１６９２）：ｔｅｒｔ-ブチル４-（３-（フェニルスルホンアミド）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボニル）ピペラジン-１-カルボキシレート（化合物１３）］
３-（フェニルスルホンアミド）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（２５ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．８ｍＬ）に溶解させた。ＤＭＡＰ（０．０１５ｍｍｏｌ）、ｔ-ブチル４-アミノピペリジン-１-カルボキシレート（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１６ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率５０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．７７（ｓ，１Ｈ）、８．３１（ｄ，２Ｈ）、７．８３（ｍ，３Ｈ）、７．６２（ｍ，１Ｈ）、７．５７（ｔ，２Ｈ）、７．４４（ｄ，１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４８５．５６
［ステップ（ｃ-３）の一般的過程］
合成模式図２、化学構造式８の化合物（２０ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．４ｍＬ）に溶解させた。０℃でＴＦＡ（０．１５ｍｌ）を入れた後に０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にアンモニアで飽和されたクロロホルムとＭｅＯＨを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例１４（ＬＤＤ-１６９３）：Ｎ-（５-（ピペラジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-ｙｌ）ベンゼンスルホンアミド（化合物１４）］
ｔｅｒｔ-ブチル４-（３-（フェニルスルホンアミド）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボニル）ピペラジン-１-カルボキシレート（２０ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．４ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃でＴＦＡ（０．１５ｍｌ）を入れた後に０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にアンモニアで飽和されたクロロホルムとメタノールを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率２０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．９２（ｓ，１Ｈ）、８．２８（ｄ，１Ｈ）、８．２２（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｄ，１Ｈ）、７．３８（ｄ，３Ｈ）、７．２０（ｄ，１Ｈ）、３．９５（ｍ，１Ｈ）、３．１６（ｄ，３Ｈ）、２．７８（ｔ，２Ｈ）、１．８５（ｍ，２Ｈ）、１．５７（ｍ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３８５．４４
［合成模式図３］
以下、実施例において記載する反応過程及び置換基は、前記合成模式図上の反応過程及び置換基を意味する。
［一般的合成過程］
［ステップ（ａ）の一般的過程］
出発物質（１．０ｇ，６．２ｍｍｏｌ）に水（４０ｍｌ）を入れた後、水に溶かしてある亜硝酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｎｉｔｒｉｔｅ，４．３ｇ，６２ｍｍｏｌ）を添加した。次に、反応混合物に３Ｎ ＨＣｌを一滴ずつゆっくり２０分間滴加した。常温で８時間撹拌した後、生成された沈殿物をろ過した。完全に乾燥させた後に、目的化合物を得た。
［合成例１５：５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルバルデヒド（化合物１５）］
５-ニトロ-１Ｈ-インドール（１．０ｇ，６．２ｍｍｏｌ）に水（４０ｍｌ）を入れた後、水に溶かしてある亜硝酸ナトリウム（４．３ｇ，６２ｍｍｏｌ）を添加した。次に、反応混合物に３Ｎ ＨＣｌ（２１ｍｌ）を一滴ずつゆっくり２０分間滴加した。常温で８時間撹拌した後に生成された沈殿物をろ過した。真空状態で完全に乾燥させた後に、目的化合物を得た（収率４０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．９８（ｓ，１Ｈ）、９．７５（ｓ，１Ｈ）、８．８７（ｓ，１Ｈ）、８．５６（ｍ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝１９１．１５
［合成例１６：３-ホルミル-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物１６）］
１Ｈ-インドール-５-カルボン酸（１．０ｇ，６．０２ｍｍｏｌ）に水（４０ｍｌ）を入れた後、水に溶かしてある亜硝酸ナトリウム（４．３ｇ，６２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物に３Ｎ ＨＣｌ（２１ｍｌ）を１滴ずつゆっくり２０分間滴加した。常温で８時間撹拌した後に生成された沈殿物をろ過した。真空状態で完全に乾燥させた後に、目的化合物を得た（収率８４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．２０（ｓ，１Ｈ）、８．７４（ｓ，１Ｈ）、８．０２（ｄ，１Ｈ）、７．７５（ｄ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝１９０．１６
［ステップ（ｂ-２）の一般的過程］
合成模式図３、化学構造式１１の化合物（５００ｍｇ，２．６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１３ｍＬ）に溶解させた。次に、ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（５５０ｍｇ，７．８９ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１１０μＬ，７．８９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し８０℃で１２時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。別の精製過程無しで次の反応を行うための目的化合物を得た。
［合成例１７：５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキサルデヒドオキシム（化合物１７）］
５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルバルデヒド（５００ｍｇ，２．６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１３ｍＬ）に溶解させた。ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（５５０ｍｇ，７．８９ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１１０μＬ，７．８９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し８０℃で１２時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。別の精製過程無しで次の反応を行うための目的化合物を得た（収率９３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．９８（ｓ，１Ｈ）、１１．１２（ｓ，１Ｈ）、８．８７（ｓ，１Ｈ）、８．５６（ｍ，２Ｈ）、７．９５（ｓ，１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２０６．１６
［合成例１８：３-（（ヒドロキシイミノ）メチル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物１８）］
３-ホルミル-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（５００ｍｇ，２．６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１３ｍＬ）に溶解させた。ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（５５０ｍｇ，７．８９ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１１０μＬ，７．８９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し８０℃で１２時間の間に撹拌した後、エチルアセテート及び１Ｎ ＨＣｌで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。別の精製過程無しで次の反応を行うための目的化合物を得た（収率９３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．６１（ｓ，１Ｈ）、８．７５（ｓ，１Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｄ，２Ｈ）、７．６２（ｄ，１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２０５．１７
［ステップ（ｃ-３）の一般的過程］
合成模式図３、化学構造式１２の化合物（５００ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｎ-クロロスクシンイミド（３２０ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を４０℃で１時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。別の精製過程無しで得た目的物を用いて次の反応を進行した。
［合成例１９：Ｎ-ヒドロキシ-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルイミドイルクロリド（化合物１９）］
５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキサルデヒドオキシム（５００ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解させた。Ｎ-クロロスクシンイミド（３２０ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を４０℃で１時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。別の精製過程無しで目的化合物を得た（収率８０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．９８（ｓ，１Ｈ）、１１．１２（ｓ，１Ｈ）、８．８７（ｓ，１Ｈ）、８．５６（ｍ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２４０．６０
［合成例２０：３-（クロロ（ヒドロキシイミノ）メチル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物２０）］
３-（（ヒドロキシイミノ）メチル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（５００ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解させた。Ｎ-クロロスクシンイミド（３２０ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に混合物を４０℃で１時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。別の精製過程無しで目的化合物を得た（収率８６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．９８（ｓ，１Ｈ）、８．７８（ｓ，１Ｈ）、７．９９（ｄ，１Ｈ）、７．６８（ｄ，１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２３９．６２
［ステップ（ｄ-４）の一般的過程］
合成模式図３、化学構造式１３の化合物（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｒ２-アニリン（３５μＬ，０．３８ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例２１（ＬＤＤ-２３６９）：Ｎ'-ヒドロキシ-５-ニトロ-Ｎ-フェニル-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物２１）］
Ｎ-ヒドロキシ-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルイミドイルクロリド（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。アニリン（３５μＬ，０．３８ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．９７（ｓ，１Ｈ）、８．９０（ｄ，１Ｈ）、８．４７（ｓ，１Ｈ）、８．２３（ｄｄ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，１Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２９７．２７
［合成例２２（ＬＤＤ-２３７０）：Ｎ-（４-フルオロフェニル）-Ｎ'-ヒドロキシ-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物２２）］
Ｎ-ヒドロキシ-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルイミドイルクロリド（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、４-フルオロアニリン（３７μＬ，０．３８ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．９５（ｓ，１Ｈ）、８．９２（ｄ，１Ｈ）、８．４９（ｓ，１Ｈ）、８．２３（ｄｄ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，１Ｈ）、６．９４（ｍ，２Ｈ）、６．７５（ｍ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１５．２６
［合成例２３（ＬＤＤ-２３７１）：Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-ヒドロキシフェニル）-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシミドアミド（化合物２３） ］
Ｎ-ヒドロキシ-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルイミドイルクロリド（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、４-ヒドロキシアニリン（４１ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．６５（ｓ，１Ｈ）、８．９２（ｓ，１Ｈ）、８．８４（ｄ，１Ｈ）、８．２１（ｄｄ，１Ｈ）、８．０９（ｓ，１Ｈ）、７．７２（ｄ，１Ｈ）、６．６０（ｍ，２Ｈ）、６．５０（ｍ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１３．２７
［合成例２４（ＬＤＤ-２３７２）：Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-メトキシフェニル）-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシミドアミド（化合物２４）］
Ｎ-ヒドロキシ-５-ニトロ-１Ｈ-インダゾール-３-カルイミドイルクロリド（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、４-メトキシアニリン（４１ｍｇ，４７ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．７４（ｓ，１Ｈ）、８．８７（ｄ，Ｈ）、８．２３（ｓ，１Ｈ）、８．２１（ｄｄ，１Ｈ）、７．７２（ｄ，１Ｈ）、６．６８（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３２７．３０
［合成例２５（ＬＤＤ-１９８６）：３-（Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-フェニルカルバムイミドイル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物２５）］
３-（クロロ（ヒドロキシイミノ）メチル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、アニリン（３５μＬ，０．３８ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率７５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．８２（ｓ，１Ｈ）、８．６６（ｓ，１Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｄｄ，１Ｈ）、７．６０（ｄ，１Ｈ）、７．０７（ｔ，２Ｈ）、６．７８（ｔ，１Ｈ）、６．６９（ｄ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２９６．２９
［合成例２６（ＬＤＤ-２１９７）：３-Ｎ-（４-フルオロフェニル）-Ｎ'-ヒドロキシカルバムイミドイル-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物２６）］
３-（クロロ（ヒドロキシイミノ）メチル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、４-フルオロアニリン（３７μＬ，０．３８ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率２９％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．７９（ｓ，１Ｈ）、８．６７（ｓ，１Ｈ）、８．４０（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｄｄ，１Ｈ）、７．６０（ｄｄ，１Ｈ）、６．９３（ｍ，２Ｈ）、６．７１４（ｍ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１４．２８
［合成例２７（ＬＤＤ-２３４９）：３-（Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-ヒドロキシフェニル）カルバムイミドイル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物２７）］
３-（クロロ（ヒドロキシイミノ）メチル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、４-ヒドロキシアニリン（４１ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１３．２３（ｓ，１Ｈ）、１０．４５（ｓ，１Ｈ）、８．９３（ｓ，１Ｈ）、８．９０（ｓ，１Ｈ）、７．９２（ｍ，２Ｈ）、７．４７（ｄ，１Ｈ）、６．６４（ｄ，２Ｈ）、６．４０（ｄ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１２．２８
［合成例２８（ＬＤＤ-２１９８）：３-（Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-メトキシフェニル）カルバムイミドイル）-１Ｈ-ｉインダゾール-５-カルボン酸（化合物２８）］
３-（クロロ（ヒドロキシイミノ）メチル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解させた。次に、４-メトキシアニリン（４１ｍｇ，４７ｍｍｏｌ）を添加した後に混合物を８０℃で２時間の間に撹拌した。得られた残余物は、エタノールを濃縮して除去した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．６０（ｓ，１Ｈ）、８．５９（ｓ，１Ｈ）、８．１１（ｓ，１Ｈ）、７．８９（ｄｄ，１Ｈ）、７．５４（ｄｄ，１Ｈ）、６．６１（ｓ，４Ｈ）、３．５８（ｓ，３Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３２６．３１
［ステップ（ｅ-５）の一般的過程］
合成例２５にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）-ジアゾメタン（１００μＬ）をゆっくり滴加した後に０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例２９（ＬＤＤ-２１９６）：メチル-３-（Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-フェニルカルバムイミドイル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボキシレート（化合物２９）］
合成例２５にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃でＴＭＳ-ジアゾメタン（１００μＬ）をゆっくり滴加した後に０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率８３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１２．２７（ｓ，１Ｈ）、９．５６（ｄｄ，１Ｈ）、９．２０（ｓ，１Ｈ）、８．６５（ｄｄ，１Ｈ）、８．２５（ｄｄ，１Ｈ）、７．５４（ｍ，２Ｈ）、７．１９（ｔ，１Ｈ）、７．０６（ｄｄ，２Ｈ）、３．５５（ｓ，３Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１０．３１
［ステップ（ｆ-６）の一般的過程］
合成模式図３、化学構造式１４の化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ヒドロキシベンゾトリアゾル（ＨＯＢｔ，０．０４ｍｍｏｌ）、ピペリジン（０．０９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び飽和されたＮＨ４Ｃｌ水溶液で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例３０（ＬＤＤ-１８２１）：Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-フェニル-５-（ピペリジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシミドアミド（化合物３０）］
合成例２５にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０４ｍｍｏｌ）、ピペリジン（０．０９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び飽和されたＮＨ４Ｃｌ水溶液で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率６５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．６７（ｓ，１Ｈ）、８．３６（ｓ，１Ｈ）、７．８３（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，１Ｈ）、７．３４（ｄ，１Ｈ）、７．０２（ｔ，２Ｈ）、６．７３（ｔ，１Ｈ）、６．６４（ｄ，２Ｈ）、３．５６（ｍ，４Ｈ）、１．５８（ｍ，６Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３６３．４２
［合成例３１（ＬＤＤ-２１９９）：Ｎ-（４-フルオロフェニル）-Ｎ'-ヒドロキシ-５-（ピペリジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシミドアミド（化合物３１）］
合成例２６にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０４ｍｍｏｌ）、ピペリジン（０．０９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び飽和されたＮＨ４Ｃｌ水溶液で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率７２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．６７（ｓ，１Ｈ）、８．４１（ｓ，１Ｈ）、７．８８（ｓ，１Ｈ）、７．５８（ｄｄ，１Ｈ）、７．３８（ｄｄ，１Ｈ）、６．９１５（ｍ，２Ｈ）、６．７１（ｍ，２Ｈ）、３．３３（ｍ，４Ｈ）、１．６２（ｍ，６Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３８１．４１
［合成例３２（ＬＤＤ-２３５０）：Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-ヒドロキシフェニル）-５-（ピペリジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシミドアミド（化合物３２）］
合成例２７にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０４ｍｍｏｌ）、ピペリジン（０．０９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び飽和されたＮＨ４Ｃｌ水溶液で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率６５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１３．２５（ｓ，１Ｈ）、１０．３４（ｓ，１Ｈ）、８．８４（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｓ，１Ｈ）、７．７４（ｓ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，１Ｈ）、７．３１（ｄｄ，１Ｈ）、６．５３（ｍ，２Ｈ）、６．４４（ｍ，２Ｈ）、３．３９（ｍ，４Ｈ）、１．６０（ｍ，６Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３７９．４２
［合成例３３（ＬＤＤ-２２００）：Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-メトキシフェニル）-５-（ピペリジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシミドアミド（化合物３３）］
合成例２８にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０４ｍｍｏｌ）、ピペリジン（０．０９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び飽和されたＮＨ４Ｃｌ水溶液で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率４１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．４８（ｓ，１Ｈ）、８．１６（ｓ，１Ｈ）、７．８２（ｓ，１Ｈ）、７．５６（ｄｄ，１Ｈ）、７．３６（ｄｄ，１Ｈ）、３．５５（ｓ，３Ｈ）、３．４６（ｍ，４Ｈ）、１．６２（ｍ，６Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３９３．４５
［合成例３４（ＬＤＤ-１９８７）：Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-フェニル-５-（４-プロピルピペラジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシミドアミド（化合物３４）］
合成例２５にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０４ｍｍｏｌ）、１-プロピルピペラジン（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率４１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．６９（ｓ，１Ｈ）、８．３７（ｓ，１Ｈ）、７．８７（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｄ，１Ｈ）、７．３９（ｄｄ，１Ｈ）、７．０６（ｔ，２Ｈ）、６．７７（ｔ，１Ｈ）、６．６９（ｄ，２Ｈ）、３．４５（ｍ，４Ｈ）、２．３７（ｍ，４Ｈ）、２．２９（ｔ，２Ｈ）、１．４７（ｑ，２Ｈ）、０．８８（ｍ，３Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４０６．４９
［合成例３５（ＬＤＤ-１９８８）：Ｎ'-ヒドロキシ-５-（４-（２-メトキシエチル）ピペラジン-１-カルボニル）-Ｎ-フェニル-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物３５）］
合成例２５にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０４ｍｍｏｌ）、１-（２-メトキシエチル）ピペラジン（０．０９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．０９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で３時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率３６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．７０（ｓ，１Ｈ）、８．３９（ｓ，１Ｈ）、７．８７（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｄ，１Ｈ）、７．３９（ｄｄ，１Ｈ）、７．０６（ｔ，２Ｈ）、６．７７（ｔ，１Ｈ）、６．６９（ｄ，２Ｈ）、３．４６（ｍ，６Ｈ）、３．２４（ｓ，１Ｈ）、２．５２（ｍ，２Ｈ）、２．４０（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４２２．４９
［合成例３６（ＬＤＤ-２３５１）：５-（４-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-イル）エチル）ピペラジン-１-カルボニル）-Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-フェニル-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物３６）］
合成例２５にて得られた化合物（２０ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．６ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０８ｍｍｏｌ）、１-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-ｙｌ）エチル）ピペラジン（０．１９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で１時間の間に撹拌した。得られた残余物をＭＣ：ＭｅＯＨ＝１０：１混合溶媒及び飽和されたＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。アンモニアで飽和されたクロロホルムとメタノールを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率１６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．７４（ｓ，１Ｈ）、８．３７（ｓ，１Ｈ）、７．８７０（ｓ，１Ｈ）、７．６５（ｓ，１Ｈ）、７．５８（ｄｄ，１Ｈ）、７．３８（ｄｄ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．０５（ｔ，２Ｈ）、６．８７（ｍ，１Ｈ）、６．７７（ｔ，１Ｈ）、６．６８（ｄ，２Ｈ）、４．１０（ｔ，２Ｈ）、３．４６（ｍ，４Ｈ）、２．６８（ｔ，２Ｈ）、２．４２（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４５８．５３
［合成例３７（ＬＤＤ-２３５２）：５-（４-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-イル）エチル）ピペラジン-１-カルボニル）-Ｎ-（４-フルオロフェニル）-Ｎ'-ヒドロキシ-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物３７）］
合成例２５にて得られた化合物（２０ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．６ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０８ｍｍｏｌ）、１-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-ｙｌ）エチル）ピペラジン（０．１９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で１時間の間に撹拌した。得られた残余物をＭＣ：ＭｅＯＨ＝１０：１混合溶媒及び飽和されたＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。アンモニアで飽和されたクロロホルムとメタノールを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率２９％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．７４（ｓ，１Ｈ）、８．４２（ｓ，１Ｈ）、７．９０（ｓ，１Ｈ）、７．６５（ｓ，１Ｈ）、７．５８（ｄ，１Ｈ）、７．３９（ｄｄ，１Ｈ）、７．２０（ｔ，１Ｈ）、６．９２（ｍ，３Ｈ）、６．７０（ｍ，２Ｈ）、４．１０（ｔ，２Ｈ）、３．５０（ｍ，４Ｈ）、２．６８（ｔ，２Ｈ）、２．４０（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４７６．５２
［合成例３８（ＬＤＤ-２３５４）：５-（４-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-イル）エチル）ピペラジン-１-カルボニル）-Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-ヒドロキシフェニル）-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物３８）］
合成例２５にて得られた化合物（２０ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．６ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０８ｍｍｏｌ）、１-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-ｙｌ）エチル）ピペラジン（０．１９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で１時間の間に撹拌した。得られた残余物をＭＣ：ＭｅＯＨ＝１０：１混合溶媒及び飽和されたＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。アンモニアで飽和されたクロロホルムとメタノールを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率１４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１３．２９（ｓ，１Ｈ）、１０．４１（ｓ，１Ｈ）、８．８８（ｓ，１Ｈ）、７．９９（ｓ，１Ｈ）、７．７９（ｓ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，１Ｈ）、７．３６（ｄｄ，１Ｈ）、７．２２（ｍ，１Ｈ）、６．９０（ｍ，１Ｈ）、６．５５（ｍ，２Ｈ）、６．４９（ｍ，２Ｈ）、４．１０（ｔ，２Ｈ）、３．５０（ｍ，４Ｈ）、２．６７（ｔ，２Ｈ）、２．４２（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４７４．５２
［合成例３９（ＬＤＤ-２３５３）：５-（４-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-イル）エチル）ピペラジン-１-カルボニル）-Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（４-メトキシフェニル）-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物３９）］
合成例２５にて得られた化合物（２０ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．６ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．０８ｍｍｏｌ）、１-（２-（１Ｈ-イミダゾール-１-ｙｌ）エチル）ピペラジン（０．１９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で１時間の間に撹拌した。得られた残余物をＭＣ：ＭｅＯＨ＝１０：１混合溶媒及び飽和されたＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。アンモニアで飽和されたクロロホルムとＭｅＯＨを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率＝３１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１３．２９（ｓ，１Ｈ）、１０．４１（ｓ，１Ｈ）、８．８８（ｓ，１Ｈ）、７．９９（ｓ，１Ｈ）、７．７９（ｓ，１Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，１Ｈ）、７．３６（ｄｄ，１Ｈ）、７．２２（ｍ，１Ｈ）、６．９０（ｍ，１Ｈ）、６．５５（ｍ，２Ｈ）、６．４９（ｍ，２Ｈ）、４．１０（ｔ，２Ｈ）、３．５０（ｍ，４Ｈ）、２．６７（ｔ，２Ｈ）、２．４２（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４８８．５５
［合成例４０（ＬＤＤ-２３１９）：ｔｅｒｔ-ブチル（２-（２-（２-（４-（３-（Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-フェニルカルバムイミドイル）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボニル）ピペラジン-１-イル）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（化合物４０）］
合成例２５にて得られた化合物（２０ｍｇ，０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．６ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．１１ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ-ブチル（２-（２-（２-（ピペラジン-１-イル）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（０．１４ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．１４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で２時間の間に撹拌した。得られた残余物をエチルアセテート及び水で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率９０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．６８（ｓ，１Ｈ）、８．３６（ｓ，１Ｈ）、７．８２（ｓ，１Ｈ）、７．５３（ｄ，１Ｈ）、７．３３（ｄｄ，１Ｈ）、６．９９（ｔ，２Ｈ）、６．７１（ｍ，２Ｈ）、６．６３（ｄ，２Ｈ）、３．４９（ｍ、８Ｈ）、３．２９（ｍ，４Ｈ）、３．０１（ｍ，２Ｈ）、２．４９（ｍ，２Ｈ）、２．３７（ｍ，４Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）．ＭＡＳＳ＝５９５．７
［合成例４１（ＬＤＤ-２３２０）：５-（４-（２-（２-（２-アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン-１-カルボニル）-Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-フェニル-１Ｈ-インダゾール-３-カルボキシイミドアミド（化合物４１）］
合成例２５にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃でＴＦＡ（０．１５ｍｌ）を入れた後に０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にアンモニアで飽和されたクロロホルムとメタノールを利用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率８５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１０．７５（ｓ，１Ｈ）、８．４０（ｓ，１Ｈ）、７．８６（ｓ，１Ｈ）、７．５７（ｄ，１Ｈ）、７．３８（ｄｄ，１Ｈ）、７．０３（ｔ，２Ｈ）、６．７５（ｔ，１Ｈ）、６．６８（ｄ，２Ｈ）、３．５４（ｍ，１２Ｈ）、２．８６（ｍ，２Ｈ）、２．４９（ｍ，２Ｈ）、２．４２（ｍ，４Ｈ）．ＭＡＳＳ＝４９５．５８
［合成模式図４］
以下、合成例において記載する反応過程及び置換基は、前記合成模式図上の反応過程及び置換基を意味する。
［一般的合成過程］
［ステップ（ａ）の一般的過程］
合成模式図４、化学構造式２の化合物（２０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を１，４-ジオキサン（１ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｒ２-Ｎ-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド（０．１７ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（０．２２ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。前記混合物を常温で１８時間撹拌した後に、得られた残余物をエチルアセテート及び飽和されたＮＨ４Ｃｌ水溶液で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例４２（ＬＤＤ-２１９４）：３-（Ｎ'-ヒドロキシベンズイミドアミド）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボン酸（化合物４２）］
合成例２にて得られた化合物（２０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を１，４-ジオキサン（１ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｎ-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド（０．１７ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（０．２２ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。前記混合物を常温で１８時間撹拌した後に、得られた残余物をエチルアセテート及び飽和されたＮＨ４Ｃｌ水溶液で抽出した。以後、シリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率２３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１２．３１（ｓ，１Ｈ）、８．６２（ｍ，１Ｈ）、７．６３（ｄｄ，１Ｈ）、７．４３（ｍ，３Ｈ）、７．３３（ｍ，２Ｈ）、７．１６（ｄｄ，１Ｈ）、６．８１（ｓ，２Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２９６．２９
［合成例４５（ＬＤＤ-１９４５）：Ｎ'-ヒドロキシ-Ｎ-（５-（ピペリジン-１-カルボニル）-１Ｈ-インダゾール-３-イル）ベンズイミドアミド（化合物４５）］
合成例４４にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）を１，４-ジオキサン（０．４ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｎ-ヒドロキシベンズイミドイルクロリド（０．０４ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（０．０８ｍｍｏｌ）を溶液に添加した。前記混合物を常温で１８時間撹拌した後に生成された沈殿物をろ過しＭＣで洗浄した後に、目的化合物を得た（収率３１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１２．２８（ｓ，１Ｈ）、７．９１（ｓ，１Ｈ）、７．４３（ｍ，３Ｈ）、７．３２（ｄ，２Ｈ）、７．１８（ｍ，２Ｈ）、６．４８（ｓ，２Ｈ）、３．５７（ｍ，４Ｈ）、１．５４（ｍ，６Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３６３．４２
［ステップ（ｂ-２）の一般的過程］
合成模式図４、化学構造式１７の化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃でＴＭＳ-ジアゾメタン（１００μＬ）をゆっくり滴加した後に、０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た。
［合成例４３（ＬＤＤ-２１９５）：メチル-３-（Ｎ'-ヒドロキシベンズイミドアミド）-１Ｈ-インダゾール-５-カルボキシレート（化合物４３）］
合成例４２にて得られた化合物（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３ｍＬ）に溶解させた。次に、０℃でＴＭＳ-ジアゾメタン（１００μＬ）をゆっくり滴加した後に０℃で３０分間撹拌した。真空で濃縮した後にシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、目的化合物を得た（収率８５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１２．３１（ｓ，１Ｈ）、８．６６（ｍ，１Ｈ）、７．６４０（ｄｄ，１Ｈ）、７．４３（ｍ，３Ｈ）、７．３３（ｍ，２Ｈ）、７．１９（ｄｄ，１Ｈ）、６．８７（ｓ，２Ｈ）、３．８４（ｓ，３Ｈ）．ＭＡＳＳ＝３１０．３１
［ステップ（ｃ-３）の一般的過程］
合成模式図４、化学構造式２の化合物（１００ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．８５ｍｍｏｌ）、多様なアミン（０．６８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．７ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（１．１３ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で１２時間の間に撹拌した。得られた残余物を飽和されたＮａＨＣＯ３水溶液及びエチルアセテートで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。ＤＣＭとヘキサンを利用して沈殿を作った後にろ過して、目的化合物を得た。
［合成例４４：（３-アミノ-１Ｈ-インダゾール-５-イル）（ピペリジン-１-イル）メタノン（化合物４４）］
合成模式図４、化学構造式２の化合物（１００ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解させた。次に、ＨＯＢｔ（０．８５ｍｍｏｌ）、多様なアミン（０．６８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．７ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（１．１３ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した後に、混合物を常温で１２時間の間に撹拌した。得られた残余物を飽和されたＮａＨＣＯ３水溶液及びエチルアセテートで抽出した。合わせられた有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後に真空で濃縮した。ＤＣＭとヘキサンを利用して沈殿を作った後にろ過して、目的化合物を得た（収率４１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ６）δ１１．５８（ｓ，１Ｈ）、７．８１（ｍ，１Ｈ）、７．２４（ｓ，２Ｈ）、５．５０（ｓ，２Ｈ）、３．４０（ｍ，４Ｈ）、１．６１（ｍ，６Ｈ）．ＭＡＳＳ＝２４４．３０
［実験例］
実験例１：アリザリンレッド染色（Ａｌｉｚａｒｉｎ ｒｅｄ ｓｔａｉｎｉｎｇ）を利用した細胞スクリーニング
直接細胞リプログラミング（Ｄｉｒｅｃｔ ｃｅｌｌ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）を誘導する低分子化合物のスクリーニング
細胞リプログラミングを誘導する化合物を探すための方法は、従来の骨形成誘導による筋肉細胞の骨細胞転換研究ＰＭＩＤ：２３０４４０１０及び１８９７４７７３とリバーシン（ｒｅｖｅｒｓｉｎｅ）論文を基盤とする（Ｃｈｅｎ Ｓ ２００４）。Ｃ２Ｃ１２マウス骨格筋細胞は、２４-ウェル形態の細胞培養皿にウェル当たりの１ｘ１０４の密度で分注した。分注後２４時間後、関心化合物を１の濃度で三個のウェルに添加した。陽性対照群（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）では、１００ｎＭリバーシンまたは２μＭ ＢＩＯが細胞に処理された。両化合物は、筋肉芽細胞の骨細胞転換を誘導させると知られた化合物である（Ｃｈｅｎ Ｓ ２００４ ａｎｄ Ｋｉｍ ＷＨ ｒｅｃａｐｉｔｕｌａｔｅ ｐａｐｅｒｓ）。音声対照群（Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）としてＤＭＳＯを細胞に処理するか、何らの処理もしなかった。化合物は、総７２時間の間に細胞に処理されたが、４８時間後に化合物を補充するために追加処理した。化合物の細胞毒性は、細胞のなくなった部分と培養する時に浮遊する細胞カスにより分かることができるが、毒性を引き起こす化合物は、２５０ｎＭの濃度で再度スクリーニングした。７２時間後、骨形成分化誘導培地（１０％ＦＢＳ，５０μｇ／ｍＬアスコルビン酸-２-フォスフェート、０．１μＭデキサメタゾン、１０ｍＭβ-グリセロフォスフェート、５０ｕｎｉｔｓ ｍＬ-１ペニシリン、５０-１ストレプトマイシンが添加されたＤＭＥＭを１４日間処理）に変えた。骨形成誘導培地は、従来の直接細胞リプログラミング（ｒｅｖｅｒｓｉｎｅ ｐａｐｅｒｓ，Ｃｈｅｎ Ｓ ２００４ ａｎｄ Ｃｈｅｎ Ｓ ２００７）で描写したことを基盤とした。筋肉細胞から骨細胞への直接細胞リプログラミングは、骨系統細胞にあるカルシウム堆積（Ｇｒｅｇｏｒｙ ＣＡ ２００４：ＰＭＩＤ：１５１３６１６９）の有無を感知するアリザリンレッド染色（ａｌｉｚａｒｉｎ ｒｅｄ ｓｔａｉｎｉｎｇ）を介して探知された。
アリザリンレッド染色（Ａｌｉｚａｒｉｎ ｒｅｄ ｓｔａｉｎｉｎｇ）
細胞をＰＢＳで一度洗った後、ｐｈｏｓｐｈａｔｅ-ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｆｏｒｍａｌｉｎを利用して２０分間固定した。固定された細胞を蒸留水で洗った後、水に溶かした１％アリザリンレッド-Ｓ（Ｓｉｇｍａ-Ａｌｄｒｉｃｈ）に５分間浸漬させた。残った染色液は、蒸留水を利用して洗い落とした。細胞を乾かした後に光学顕微鏡（ＣＫＸ４１ Ｏｌｙｍｐｕｓ）を利用して染色された細胞の写真を撮影した。染色された細胞は、明るい赤色部分にみえ、それは、「ヒット（ｈｉｔ）」化合物として選択されて、より多くの分析を行った。
上述のアッセイ方法を利用して合成されたインダゾール化合物の細胞リプログラミング能力を評価した。ＬＤＤ-１６６４、ＬＤＤ-１８２１、ＬＤＤ-１９４５、ＬＤＤ-２１９９、ＬＤＤ-２２００は、造骨細胞への分化において陽性対照群であるリバーシンだけ強力なリプログラミング能力を見せ、ＬＤＤ-１９８６、ＬＤＤ-１９８７、ＬＤＤ-１９８８もリプログラミング能力を見せた。脂肪細胞への分化を確認することができるオイルレッドＯ染色では、ＬＤＤ-１８２１、ＬＤＤ-１９８６、ＬＤＤ-１９８７、ＬＤＤ-１９８８物質が強力なリプログラミング能力を見せた。特に、ＬＤＤ-１８２１の場合、造骨細胞と脂肪細胞への分化において両方とも強力なリプログラミング能力を見せた（図１、図２及び図３参照）。
＋＋（強い陽性、ｓｔｒｏｎｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ）、＋（弱い陽性、ｗｅａｋ ｐｏｓｉｔｉｖｅ）、-（陰性、ｎｅｇａｔｉｖｅ）
実験例２：キナーゼ（Ｋｉｎａｓｅ）アッセイ
インダゾール誘導体のＧＳＫ-３β及びＡｕｒｏｒａ Ａに対する抑制活性は、ＨＴＲＦ（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ｔｉｍｅ-ｓｅｓｏｌｖｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）アッセイを介して確認した。ＨＴＲＦアッセイは、ＡＴＰ存在下にペプチド物質のリン酸化を確認するアッセイ方法である。リン酸化された物質は、ＴＲ-ＦＲＥＴ（Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ-Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）信号により検出された。再組み合わせられたＧＳＫ-３β及びＡｕｒｏｒａ Ａキナーゼは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）で購買した。ＨＴＲＦＫｉｎＥＡＳＥキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を使用してアッセイを行い、各々ＧＳＫ-３β及びＡｕｒｏｒａ Ａにインダゾール物質を１μＭＳずつ処理した後に阻害されたリン酸化程度を確認した。アッセイは、キナーゼ反応バッファ（２５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、０．５ｍＭオルトバナデート（ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ）、０．０５％ ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ３）に溶けてある物質-酵素混合物とペプチド物質から構成される。検出バッファを追加した後、ＴＲ-ＦＲＥＴ信号は、ＥｎＶｉｓｉｏｎ ｍｕｌｔｉ-ｌａｂｅｌ ｒｅａｄｅｒにより検出された。
ＬＤＤ-１６６４、ＬＤＤ-１６６７、ＬＤＤ-１８２０、ＬＤＤ-１８２１を１μＭＳずつそれぞれＧＳＫ-３β及びＡｕｒｏｒａ Ａに処理した後、酵素活性が阻害された程度を下記の表に表した。表２に表した結果のように、４通りの誘導体とも１μＭ濃度でＧＳＫ-３β及びＡｕｒｏｒａ Ａ全部に対して５０％未満の阻害活性を表した。また、優れた細胞リプログラミング能力を見せたＬＤＤ-１８２１の場合、２通りの酵素に対して１μＭ濃度において全く阻害活性を見せなかった。したがって、ＧＳＫ-３βまたはＡｕｒｏｒａ Ａの阻害諸であるＢＩＯ及びリバーシンとは異なる機序を介して細胞リプログラミングを誘導することと見られる。
実験例３：ＭＴＴアッセイ
Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞（ｍｙｏｂｌａｓｔ）を９６ウェルプレートにウェル当たりの３ｘ１０３個細胞の密度で分注した。細胞を一日間培養した後に物質を処理した。以後、二日間培養した後に３-（４，５-ジメチルチアゾール-２-イル）-２，５-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）を含むｓｅｒｕｍ-ｆｒｅｅ ＤＭＥＭを細胞に３時間の間に処理した。培地を除去した後に振りながら、ＤＭＳＯで１０分間培養した。吸光度は、５７０ｎｍでマイクロリーダー（ＶｅｒｓａＭａｘ，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）により測定した（図４参照）。
下記の表３に整理された化合物の細胞毒性をＭＴＴアッセイを介して評価した結果、評価されたすべてのインダゾール誘導体が１０μＭ以上のＩＣ５０を表した。このような点でインダゾール誘導体は、従来の高い細胞毒性を表したＢＩＯ及びリバーシンと比較すると、優れた長所を有する。
以上、本発明の特定の部分を詳細に述べたが、この技術分野における通常の知識を有した者にとって、このような具体的な記述は、ただ好ましい具現例に過ぎず、これにより、本発明の範囲が制限されるものではないことは明らかである。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付した請求の範囲とその等価物により定義されねばならない。

Claims (23)

  1. 下記の式Ａで表される化合物を含む細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）誘導用組成物：
    前記式Ａ中、Ｒ１は、水素、ニトロ、ニトロキシまたはＹ-カルボニルであり；前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-３０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-２０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-３０アリール、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｘは、アミン、アミド、スルホンアミド、カルボニル、オキシムまたはイミドアミドであり、
    前記組成物は、分化された細胞からリプログラミングされた造骨細胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）または脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）を誘導することを特徴とする組成物。
  2. 前記細胞は、哺乳動物由来であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
  3. 前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-１５アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-１５アリール、Ｃ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
  4. 前記Ｙにおけるヘテロシクロアルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニル、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ２-８アルコキシアルキル、Ｃ２-８アルコキシカルボニル、ヘテロ原子として窒素を含むＣ２-８ヘテロシクロアルケニルアルキル、またはこれらの組み合わせにより置換されることができることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
  5. 前記ヘテロシクロアルケニルアルキルは、（１Ｈ-イミダゾール-１-ｌｙ）アルキルであることを特徴とする請求項４に記載の組成物。
  6. 前記Ｒ２は、水素、ハロ、Ｃ１-１５アリール、Ｃ１-１５アルコキシまたはＣ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
  7. 前記Ｒ２におけるアリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニルまたはこれらの組み合わせにより置換されることができることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
  8. 前記式Ａ中、前記Ｘは、イミドアミド（
    ）で、前記Ｒ２は、前記イミドアミドのＣまたはＮ'に結合されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
  9. 前記ヘテロ原子は、窒素であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
  10. 前記化合物は、次の式１ないし式４５から構成された群から選択される式で表されることを特徴とする請求項１に記載の組成物：
  11. 前記化合物は、次の式１、式２５、式３０、式３１、式３３、式３４、式３５及び式４５から構成された群から選択される式で表されることを特徴とする請求項１０に記載の組成物：
  12. （ａ）請求項１ないし請求項１１に記載の細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）組成物を分化された細胞に接触させるステップと、（ｂ）前記ステップ（ａ）の細胞を培養するステップとを含む分化された細胞からリプログラミングされた細胞を製造する方法。
  13. 下記の式Ａで表される化合物を含む組成物を細胞に接触させて細胞リプログラミング（ｒｅ-ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ）を誘導する方法：
    前記式Ａ中、Ｒ１は、水素、ニトロ、ニトロキシまたはＹ-カルボニルであり；前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-３０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-２０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-３０アリール、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-３０アリール、Ｃ１-３０アルコキシ、Ｃ１-３０アルキルまたはＣ２-３０アルケニルであり；Ｘは、アミン、アミド、スルホンアミド、カルボニル、オキシムまたはイミドアミドであり、
    前記組成物は、分化された細胞からリプログラミングされた造骨細胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）または脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）を誘導することを特徴とする方法。
  14. 前記細胞は、哺乳動物由来であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  15. 前記Ｙは、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-１５アルコキシ、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄を含むＣ２-１５ヘテロシクロアルケニル、Ｃ６-１５アリール、Ｃ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルであることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  16. 前記Ｙにおけるヘテロシクロアルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニル、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ２-８アルコキシアルキル、Ｃ２-８アルコキシカルボニル、ヘテロ原子として窒素を含むＣ２-８ヘテロシクロアルケニルアルキル、またはこれらの組み合わせにより置換されることができることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  17. 前記ヘテロシクロアルケニルアルキルは、（１Ｈ-イミダゾール-１-ｌｙ）アルキルであることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
  18. 前記Ｒ２は、水素、ハロ、Ｃ１-１５アリール、Ｃ１-１５アルコキシまたはＣ１-１５アルキルまたはＣ２-１５アルケニルであることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  19. 前記Ｒ２におけるアリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１-５アルコキシ、Ｃ１-５アルキル、Ｃ２-５アルケニルまたはこれらの組み合わせにより置換されることができることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  20. 前記式Ａ中、前記Ｘは、イミドアミド（
    ）で、前記Ｒ２は、前記イミドアミドのＣまたはＮ'に結合されることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  21. 前記ヘテロ原子は、窒素であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
  22. 前記化合物は、次の式１ないし式４５から構成された群から選択される式で表されることを特徴とする請求項１３に記載の方法：
  23. 前記化合物は、次の式１、式２５、式３０、式３１、式３３、式３４、式３５及び式４５から構成された群から選択される式で表されることを特徴とする請求項２２に記載の方法：

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