JP6475714B2 - 貯蔵安定性凍結乾燥トリペプチド製剤 - Google Patents

Description

本発明は、貯蔵の際に安定しているリシル−プロリル−トレオニン凍結乾燥製剤、特にＬ−リシル−Ｄ−プロリル−Ｌ−トレオニン凍結乾燥製剤、及び前記凍結乾燥製剤を調製する方法に関する。さらに、本発明は、哺乳動物における疼痛関連疾患、掻痒症関連疾患、炎症性疾患、及び／又は他の疾患の治療的及び／又は予防的処置、診断、並びに／或いは治療に用いられる、前記凍結乾燥製剤を含む医薬品及び化粧品組成物に関する。

トリペプチドであるリシル−プロリル−トレオニン（ＫＰＴ、ＫｄＰＴ）は、下記式：
に示されるような化学構造を有する。

これは、炎症性疾患の治療に有効であることが当技術分野において知られている（国際公開第０２／０６４１３１号）。リシル−プロリル−トレオニン及びその塩の調製は、例えば、参照により本明細書に援用される欧州特許出願公開第０３３５６６２Ａ１号に記載されている。さらに、リシル−プロリル−トレオニンは市販されている。

しかしながら、リシル−プロリル−トレオニンは吸湿性が高く、リシン−プロリンジケトピペラジンの形成下で容易に分解する。加えて、リシル−プロリル−トレオニンは溶液中、特に水溶液中で安定性が低く、室温条件下では長くて１週間しか十分な安定性がない。これらのことにより、化合物自体のみならず、これを含む薬剤も貯蔵安定性が著しく低い。結局のところ、リシル−プロリル−トレオニンを活性成分として含む薬物の安全性及び有効性に関する大きな懸念がある。

したがって、貯蔵安定性が向上したリシル−プロリル−トレオニンを提供する必要性が存在する。特に、長期間にわたって安全性及び有効性を維持する薬剤としての投与に適した形態のリシル−プロリル−トレオニンを提供する必要性が存在する。

したがって、本発明の基本的な目的は、貯蔵安定性を有するリシル−プロリル−トレオニン、並びにこれを含み長期間にわたって安全性及び有効性を維持する薬剤を提供することである。

驚くべきことに、この目的は添付の請求項に示す本発明によって達成された。

特に、驚くべきことに、凍結乾燥製剤における（即ち、凍結乾燥物としての）リシル−プロリル−トレオニンは、リシル−プロリル−トレオニンそのもの（即ち、非凍結乾燥又は凍結乾燥形態）と比較して向上した貯蔵安定性を示すことが本発明者らによって見出された。凍結乾燥による非晶質形態のリシル−プロリル−トレオニン活性成分を主に含む凍結乾燥物は、少なくとも部分的には結晶形態で存在するリシル−プロリル−トレオニンそのものよりも安定しているのでこの知見は驚くべきものである。凍結乾燥製剤におけるリシル−プロリル−トレオニンは表面積が著しく大きいため、当業者であれば実際には貯蔵安定性が低下することを予測するはずであり、この貯蔵安定性の向上はさらに驚くべきことである。換言すれば、より大きな表面積も有する非晶質形態のリシル−プロリル−トレオニンがリシン−プロリンジケトピペラジンへは分解されにくく、結果的に、結晶形態のリシル−プロリル−トレオニンよりも貯蔵安定性が高いことは、先行技術においては全く予測されないことであった。

したがって、本発明の主題は、リシル−プロリル−トレオニン又はその薬学的に許容可能な塩を含む凍結乾燥製剤である。

さらに、本発明によれば、凍結乾燥製剤は、薬剤としての使用のためのものであり、好ましくは、疼痛関連疾患、掻痒症関連疾患、炎症性疾患、及び／又は他の疾患の治療的及び／又は予防的処置、診断、並びに／或いは治療における使用のためのものである。

さらに、本発明の主題は、凍結乾燥製剤を調製する方法及び前記方法によって得られる凍結乾燥製剤に関するものであり、前記方法は、
（ａ）以下の成分、すなわち、リシル−プロリル−トレオニン又はその薬学的に許容可能な塩と、水性キャリアと、所望により１種以上の増量剤と、所望により１種以上の緩衝剤と、所望により１種以上のｐＨ調整剤とを（任意の適切な順序で）混合して、リシル−プロリル−トレオニンの遊離塩基の濃度が水性調製物に対して０．１〜１７５ｍｇ／ｇである、ｐＨが３．０〜５．０の範囲内の水性調製物を提供する工程と、
（ｂ）前記水性調製物を凍結乾燥して固体形態の凍結乾燥製剤を提供する工程と、
を含むものである。

好ましい態様において、本発明は、凍結乾燥製剤を調製する方法及び前記方法によって得られる凍結乾燥製剤に関するものであり、前記方法は、
（ａ）水性キャリアを１種以上の緩衝剤と混合し、
（ｂ）リシル−プロリル−トレオニン又はその薬学的に許容可能な塩を加え、
（ｃ）１種以上の増量剤を加え、
（ｄ）所望により１種以上のｐＨ調整剤を加えて、
リシル−プロリル−トレオニンの遊離塩基の濃度が水性調製物に対して０．１〜１７５ｍｇ／ｇである、ｐＨが３．０〜５．０の範囲内の水性調製物を提供する工程と、
（ｅ）前記水性調製物を凍結乾燥して固体形態の凍結乾燥製剤を提供する工程と、
を（この順序で）含むものである。

水性調製物は、懸濁液／分散液又は溶液であってもよい。好ましい態様の工程（ａ）〜（ｄ）は、最終的な水性調製物が水溶液となるように成分を溶解して行われるのがより好ましい。

凍結乾燥工程（ｅ）は、バイアル、ブリスター、又は他のより大きな容器（例えばステンレストレイ若しくはタンク、いわゆる「バルク凍結乾燥」）で行うことができる。

また、本発明は、凍結乾燥製剤と、１種以上の医薬品又は化粧品賦形剤とを含む、医薬品又は化粧品組成物に関する。

最後に、本発明は、凍結乾燥製剤の、好ましくは哺乳動物の皮膚及び／又は粘膜の美容的処置のための、化粧品としての非治療的使用に関する。

本発明では、「リシル−プロリル−トレオニン」という用語は、アミノ酸であるリシン（Ｌｙｓ）、プロリン（Ｐｒｏ）、及びトレオニン（Ｔｈｒ）からこの順序でなるトリペプチドを意味し、ＫＰＴ又はＫｄＰＴとしても（例えば国際公開第０２／０６４１３１号又はＥＰ０３３５６６２より）知られているである。これには、（Ｌ）Ｌｙｓ―（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、又はこれらの任意の混合物が含まれる。（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒが好ましい。

本発明によれば、リシル−プロリル−トレオニンは、遊離塩基として又はその薬学的に／美容的に許容可能な塩の形態で存在してもよい。本発明に係る化合物の適切な薬学的に許容可能な塩及び／又は美容的に許容可能な塩は、例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、塩酸塩、臭化水素酸塩、スルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、メタン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、グルタル酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、安息香酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及び／又はアミノ酸の塩、好ましくはタンパク質性アミノ酸の塩からなる群より選択される。コハク酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、及び酢酸塩が好ましい。酢酸塩が特に好ましい。また、本発明に従って適切なものは、それらの溶媒和物及び／又は水和物である。

リシル−プロリル−トレオニン又はその塩は、凍結乾燥製剤の全重量１００ｍｇに対して遊離塩基０．１〜５０ｍｇに相当する量で凍結乾燥製剤中に存在する。好ましくは、凍結乾燥製剤の全重量１００ｍｇに対して遊離塩基０．４〜４５ｍｇ、より好ましくは遊離塩基０．４〜４０ｍｇ、より好ましくは遊離塩基１〜３０ｍｇ、さらに好ましくは遊離塩基１〜２５ｍｇに相当する量である。

本発明に従って用いられる「凍結乾燥製剤／凍結乾燥物」という用語は、当技術分野において知られる任意の凍結乾燥及び／又は冷凍乾燥法により得られる製剤を一般的に意味する。これは、リシル−プロリル−トレオニン又はその塩と他の適切な賦形剤とを含む製剤を包含する。

本発明に係る製剤は凍結乾燥されており、リシル−プロリル−トレオニン又はその塩は主に非結晶（非晶質）形態で存在する。結晶性は、Ｘ線回折又はＤＳＣによってなどの当技術分野において公知の方法に従って決定してもよい。

本発明に係るリシル−プロリル−トレオニン又はその塩の貯蔵安定性は、リシル−プロリル−トレオニンの主な分解生成物であるリシン−プロリンジケトピペラジン（ＤＫＰ）の量を測定することにより決定される。一般的に、凍結乾燥製剤又は医薬品／化粧品組成物中のリシン−プロリンジケトピペラジン量の経時的な増加率は、リシル−プロリル−トレオニンの貯蔵安定性を示すものである。ＤＫＰ量が多いほど、リシル−プロリル−トレオニン及び／又はこれを含む製剤の貯蔵安定性が低い。リシン−プロリンジケトピペラジンの量は、ＨＰＬＣ（特に逆相ＨＰＬＣ）によってなどの通常の方法によって決定することができる。

好ましくは、本発明に係る凍結乾燥製剤は、１種以上の増量剤及び／又は１種以上の緩衝剤及び、所望により、１種以上のｐＨ調整剤を追加の適切な賦形剤として含む。増量剤及び／又は緩衝剤の存在により、凍結乾燥製剤におけるリシル−プロリル−トレオニンの貯蔵安定性がさらに向上する。任意であるｐＨ調整剤により、さらに、特定のｐＨ範囲内、好ましくはｐＨ３〜５に製剤のｐＨ値を調節できる。これは貯蔵安定性の一層の向上をもたらす。

本発明に係る増量剤は、好ましくは、マンニトール、スクロース、グリシン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルデンプン、炭酸カルシウム及びトレハロース、並びにこれらの混合物からなる群より選択される。特に好ましくは、マンニトール、スクロース及びトレハロース、又はこれらの混合物、特にマンニトールとトレハロースの混合物である。最も好ましくは、トレハロースである（例えば、その二水和物の形態で）。増量剤の適切な量は、凍結乾燥製剤の全重量１００ｍｇに対して３０〜９５ｍｇ、好ましくは４０〜９０ｍｇ、より好ましくは４０〜７５ｍｇである。

本発明に係る緩衝剤は、好ましくは、クエン酸、リン酸二水素ナトリウム、酢酸、コハク酸、グルタメート、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）及びヒスチジン、並びにこれらの混合物からなる群より選択される。特に好ましくは、クエン酸、リン酸二水素ナトリウム、及びヒスチジンであり、最も好ましくはクエン酸である。緩衝剤の適切な量は、凍結乾燥製剤の全重量１００ｍｇに対して０．５〜５０ｍｇ、好ましくは１〜２０ｍｇ、より好ましくは２〜１８ｍｇ、さらに好ましくは５〜１５ｍｇである。

本発明に係るｐＨ調整剤は、好ましくは、水酸化ナトリウム及び塩酸より選択される。これによりｐＨが特定の値に維持できる。貯蔵安定性の観点からは、凍結乾燥製剤のｐＨ値は、好ましくは３．０〜５．０であり、より好ましくは３．５〜４．５である。これらの範囲外では、貯蔵安定性は著しく低下する。上記ｐＨ値を調整するためのｐＨ調整剤の適切な量は、当業者によって容易に決定することができる。

本発明に係る特に好ましい態様は、（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ（好ましくは酢酸塩として）と、増量剤としてのトレハロース又はトレハロースとマンニトールの混合物と、緩衝剤としてのクエン酸との組み合わせである。凍結乾燥物は、これらの成分のみからなっていてもよい。

本発明に係る化合物は、リシル−プロリル−トレオニン又はその薬学的に許容可能な塩と、水性キャリアと、所望により１種以上の増量剤と、所望により１種以上の緩衝剤と、所望により１種以上のｐＨ調整剤とを任意の順序で混合して水性調製物を提供した後、前記水性調製物を凍結乾燥して固体形態の凍結乾燥製剤を提供することを含む方法により、調製することができる。好ましくは、まず水性キャリアが１種以上の緩衝剤と混合され、次いでリシル−プロリル−トレオニン又はその薬学的に許容可能な塩が混合物に加えられ、続いて１種以上の増量剤が加えられる。混合工程で得られた水性調製物は、通常、３．０〜５．０の範囲、好ましくは３．５〜４．５、より好ましくは３．８〜４．２の範囲のｐＨを有する。必要であれば、１種以上のｐＨ調整剤が加えられて、ｐＨが上記の値に調整される。水性調製物において、リシル−プロリル−トレオニンの濃度（遊離塩基として算出）は、水性調製物に対して０．１〜１７５ｍｇ／ｇ、好ましくは０．５〜１５０ｍｇ／ｇ、より好ましくは１〜１４０ｍｇ／ｇ、より好ましくは２〜１００ｍｇ／ｇ、より好ましくは２〜７０ｍｇ／ｇ、さらに好ましくは４〜２０ｍｇ／ｇの範囲内である。さらに、存在する場合には、水性調製物において増量剤の濃度は、水性調製物に対して５０〜１７５ｍｇ／ｇ、好ましくは５０〜１５０ｍｇ／ｇ、より好ましくは５０〜１４０ｍｇ／ｇ、より好ましくは５０〜９５ｍｇ／ｇ、より好ましくは５２〜８０ｍｇ／ｇ、さらに好ましくは５５〜７５ｍｇ／ｇの範囲内である。加えて、存在する場合には、水性調製物において緩衝剤の濃度は、水性調製物に対して１〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは２〜７５ｍｇ／ｇ、より好ましくは２．５〜４０ｍｇ／ｇ、より好ましくは２．５〜２０ｍｇ／ｇ、より好ましくは３〜１５ｍｇ／ｇ、さらに好ましくは３．５〜９．５ｍｇ／ｇの範囲内である。

本発明に係る水性キャリアは、凍結乾燥法において適切であるとして先行技術で公知のものである。好ましい水性キャリアは、水、及び水とアルコール（例えば、エタノール及び／又はｎ−若しくはイソ−プロパノール）などの適切な有機溶媒の混合物である。

本発明に係る凍結乾燥は、通常の条件を用いた通常の凍結乾燥装置（例えばＨｏｆ Ｓｏｎｄｅｒａｎｌａｇｅｎｂａｕ、Ｌｏｈｒａ／ドイツの凍結乾燥装置）、又は動的凍結乾燥装置（Ｍｅｒｉｄｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｕｅｌｌｈｅｉｍ／ドイツのものなど）中で行ってもよい。凍結乾燥物は、走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）によって分析してそれらの構造を評価してもよく、凍結乾燥物の総水分量は、比色カールフィッシャー滴定によって測定することができる。純度分析は、ＲＰ ＨＰＬＣによって行ってもよい。

本発明に係る凍結乾燥製剤は、水性キャリアを用いて再構成して、薬剤又は化粧品としての投与に適した水性調製物を形成してもよい。得られた水性調製物は、溶液又は懸濁液、好ましくは水溶液であってもよい。好ましくは、再構成は、固体の凍結乾燥製剤を水性キャリアと混合することによって行われる。特に好ましくは、再構成は、生じる水性調製物をそれを必要とする患者に投与する直前に行われる。再構成率は、凍結乾燥製剤（凍結乾燥物）の量と水性キャリアの量の比として規定される。好ましくは１：０．５〜１：１０００の間、より好ましくは１：５〜１：１００、最も好ましくは１：１０〜１：６０である。再構成に用いられる水性キャリアは、香料、ｐＨ調整剤、及び／又は防腐剤などの追加の通常の薬学的に許容可能な賦形剤を含みうる水溶液であってもよい。凍結乾燥物の再構成に最も好ましいものは水である。本発明によれば、固体凍結乾燥物の改善した安定性（本明細書で説明するようにＤＫＰ量の低下によって示される）により、先行技術のＫｄＰＴ溶液と比較してＤＫＰ量も低下した水性調製物の安定性及び品質の改善ももたらされる。

凍結乾燥製剤の再構成は、好ましくは、患者に投与する直前、つまり投与の１０秒〜２０分前、好ましくは投与の１〜１０分前、より好ましくは投与の２〜５分前に行われる。

また、再構成する代わりに、凍結乾燥製剤をそのまま使用するか又は１種以上の（固体）キャリア物質若しくは追加の医薬品賦形剤／補助物質と混合して（固体）医薬品組成物を提供してもよい。

本発明に係る凍結乾燥製剤は、好ましくは疼痛関連疾患、掻痒症関連疾患、炎症性疾患、及び／又は他の疾患を含む又はからなる群より選択される疾患の治療的及び／又は予防的処置、診断、並びに／或いは治療における使用のための薬剤として使用してもよい。

本発明は、疼痛若しくは掻痒症関連疾患、炎症性疾患、及び／又は他の疾患を含む又はからなる群より選択される疾患の治療的及び／又は予防的処置、診断、並びに／或いは治療のための薬剤の調製のための本発明に係る凍結乾燥製剤の使用も提供する。

本発明に係る凍結乾燥製剤は、それ自体単独で又は公知の物質と組み合わせて、疼痛若しくは掻痒症関連疾患、炎症性疾患、及び／又は他の疾患を含む群より選択される疾患の処置のために使用することができる。

疼痛関連疾患は、背部痛、顔面痛、頭痛、片頭痛、関節痛、筋痛症候群、炎症性疼痛関連疾患、神経障害性疼痛、末梢性疼痛、末梢神経損傷、内臓痛、腹痛、月経症状、腎石及び胆石疼痛、掻痒症、癌及び腫瘍疼痛、交感神経性疼痛、術後疼痛、外傷後疼痛、痛覚過敏、及び／又は炎症性疼痛を含む群より選択される。

炎症性疾患は、胃腸管の炎症性疾患、特にクローン病及び／又は潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患、胆嚢の炎症を伴う急性又は慢性炎症性変化、炎症性偽ポリープ、深在性嚢胞性大腸炎、腸壁嚢状気腫、膵臓炎、虫垂炎、アテローム性動脈硬化症による心血管炎症、虚血、再狭窄及び／又は血管炎、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）、敗血症（ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、アレルギー、喘息、シェーグレン症候群、肺炎症、慢性気道炎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、腫瘍増殖、腫瘍転移、移植拒絶反応、関節リウマチのような関節の炎症性疾患、外陰腟炎（あらゆる原因による）、及び／又は脳、皮膚、毛嚢、尿生殖路及び目の炎症性疾患を含む群より選択される。さらなる炎症性疾患としては、副鼻腔炎、腱滑膜炎、滑液包炎、腱炎、外側上顆炎、癒着性関節包炎、骨髄炎、骨関節炎、眼炎症、耳炎症及び自己免疫性炎症が挙げられる。

掻痒症（痒み）は、ある種の疼痛刺激として通常は経験される皮膚治療において頻繁にある症状である。掻痒感は、影響を受けた領域を掻きたいという欲求を引き起こす。掻くことにより損傷を受けた皮膚は、良好な栄養媒体を感染性病原体にさらに提供し、掻くことによって開いた皮膚領域の炎症は珍しいものではない。掻痒性皮膚及び毛髪疾患は、掻痒症、乾癬、乾癬性関節炎、接触皮膚炎、アトピー性湿疹、強皮症及び他の繊維性疾患、全身性エリテマトーデス、蕁麻疹、扁平苔癬、リンパ腫及び／又はアレルギー性疾患を含む群より選択されるか、或いは肥満細胞の関与を特徴とする。

本発明の意味において疾患は、低ナトリウム血症、浮腫、イレウス、咳、緑内障、ＭＳ（多発性硬化症）、パーキンソン病及びアルツハイマー病などの他の疾患も含む。

疼痛若しくは掻痒症関連疾患及び／又は炎症性疾患に関与する器官は、特にいわゆるバリア器官、すなわち胃腸管、皮膚、肺、尿生殖路；脳；耳鼻咽喉管；歯；骨；肝臓；及び毛髪である。本発明の特に好ましい態様は、バリア器官の疾患の処置に関する。

胃腸管の疾患は、過敏性腸症候群、胃病変、胃腸潰瘍、胃腸粘膜に対する外因性及び内因性の損傷、胃腸管の機能不全、特に腸内での腺腫、及び／又は若年性ポリープを含む群より選択される。

肺の疾患（呼吸器疾患）としては、炎症性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの閉塞性肺疾患、拘束性肺疾患、上気道感染症や下気道感染症などの気道感染症、悪性腫瘍及び良性腫瘍、胸膜腔疾患、肺血管疾患、並びに新生児疾患が挙げられる。

尿生殖路の疾患としては、鎮痛薬性腎症、膀胱癌、膀胱瘤（膀胱脱）、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、糸球体腎炎、糸球体硬化症、グッドパスチャ−症候群、血尿症（尿中の血液）、溶血性尿毒症症候群、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）腎症、インポテンツ／勃起障害、間質性膀胱炎、腎臓癌、腎臓結石、腎臓移植、男性不妊症、ネフロ−ゼ症候群、過敏膀胱、ペイロニ−病、及び多発性嚢胞腎が挙げられる。

本発明の化合物で治療される場合があるさらなる疾患は、本明細書に参照により援用される米国特許出願公開第２０１１／０２１２８８２Ａ１号に記載されている。

好ましくは、凍結乾燥製剤及び凍結乾燥製剤を含む医薬品又は化粧品組成物は、皮膚の炎症性疾患の、消化管の炎症性疾患の、（血）管の炎症性疾患の、自己免疫性炎症、アレルギー反応及び／又は移植拒絶反応の、処置及び／又は予防のために使用される。

本発明に係る凍結乾燥製剤はまた、化粧品として、つまり哺乳動物の皮膚及び／又は粘膜の非治療的／美容的処置のために使用されてもよい。

固体形態又は再構成形態のいずれであっても本発明に係る凍結乾燥製剤、又は当該凍結乾燥製剤を含む組成物は、全身的に又は局所的に投与することができる。好ましくは、本発明に係る凍結乾燥製剤又は組成物は、固体で（そのまま又は１種以上の（固体）キャリア物質若しくは追加の医薬品賦形剤／補助物質と混合してのいずれかで）又は再構成形態、特に水性の溶液又は懸濁液の形態で全身的に投与される。

本発明の文脈においては、「予防的処置」という用語は、疾患の症状が起こるか又は疾患の危険性が存在する以前に本発明に係る凍結乾燥製剤を投与することができるということを特に意味するものとして理解される。

固体形態であるか又は再構成された凍結乾燥製剤としてのいずれか、好ましくは水性の溶液又は懸濁液の形態である、本発明に係る凍結乾燥製剤は、従来の方法に従って、例えば、経口的、経皮的、鼻腔内的、経粘膜的、経肺的、経腸的、口腔的、経直腸的、尿道内的、耳介的、吸入により、注入という手段により、例えば、静脈内的、非経口的、腹腔内的、皮内的、皮下的及び／又は筋肉内的及び／又は局所的、例えば、身体の痛みのある領域に投与することができる。経口投与及び注入による投与が特に好ましい。経口投与が最も好ましい。

本発明に係る凍結乾燥製剤は、少なくとも１種のキャリア物質又は補助物質と共に適切な剤形にすることによって、特に薬剤（医薬品組成物）の調製のために使用することができる。上記のように、本発明に係る１つの好ましい形態は、水性キャリアとの再構成形態である。一般に、適切な形態は、例えば、注射剤、点滴剤、ジュース剤、シロップ剤、スプレー剤、懸濁剤、錠剤、貼付剤、カプセル剤、絆創膏、坐剤、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、乳剤、エアゾール剤、或いは多粒子形態、例えば、ペレット又は顆粒の形態である。スティックパック又は小袋として使用してもよい。

遅延放出性を有する医薬剤形（徐放性製剤）は、本発明に係る化合物の経口投与のためにさらに好ましい。遅延放出性を有する製剤の例は、徐放性マトリクス錠、シェラックをベースとしたコーティングなどのコーティングが、例えば、胃液に耐性となるように作成することができる多層錠、生分解性高分子、例えば、ポリ乳酸重合体を用いた徐放性カプセル又は製剤である。

キャリア材料、充填剤、溶媒、希釈剤、湿潤剤、乳化剤、染料、防腐剤、崩壊剤、滑沢剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、緩衝物質、芳香剤、及び／又はバインダーを含む群より好ましく選択される従来の生理学的に許容可能な医薬品又は化粧品補助物質は、凍結乾燥製剤に（固体形態又は再構成された水性調製物のいずれかに）加えることができ、よって医薬品及び化粧品組成物の調製のために使用することができる。

本発明に係る凍結乾燥製剤（及びそれを含む医薬品組成物）は、とりわけ実際の医薬品剤形、投与経路、及び処置すべき疾患に応じて、それを必要とする患者に例えば１日に１回以上投与することができる。

次に、具体的な実施例を参照して本発明をさらに詳細に説明する。

ＫｄＴＰ塩基をそれぞれ４ｍｇ／ｇ、１０ｍｇ／ｇ、及び２０ｍｇ／ｇ含む水性調製物の凍結乾燥によって得られた凍結乾燥物の走査電子顕微鏡画像を示す。上段の３つの画像は１００倍の倍率で得られ、下段の３つの画像は５００倍の倍率で得られた。画像は、スポンジ様構造を有する凍結乾燥物の非結晶（非晶質）形態を示している。 結晶形態のＫｄＰＴ酢酸塩単体の光学顕微鏡画像を示す。

１．本発明の凍結乾燥製剤の調製
必要な注射用水（ＷＦＩ；１８〜２２℃）の約６０％をガラスビーカーに移した。絶えず撹拌しながら、必要量のクエン酸一水和物をビーカーに移し溶解させた。絶えず撹拌しながら、必要量の活性成分ＫｄＰＴ酢酸塩をビーカーに移し溶解させた。絶えず撹拌しながら、必要量のトレハロース二水和物をビーカーへ移し溶解させた。ｐＨ値を測定し、必要であれば１Ｍの水酸化ナトリウム溶液でｐＨを３．８〜４．２に修正した。値が４．２を超える場合は修正しなかった。製剤にＷＦＩを入れて最終重量にした。ｐＨ値を確認し、必要であれば１Ｍの水酸化ナトリウム溶液でｐＨを３．８〜４．２に修正した。値が４．２を超える場合は修正しなかった。０．２μｍのＰＴＦＥフィルタでろ過した。調合した水性調製物の詳細な組成は下記のとおりである。

バイアルを超音波浴中にて１５分間純水で洗浄した。その後、バイアルを３００℃で２時間乾燥させ発熱物質を除去した。冷却後、上記の表１〜３に示す対応する水性調製物をバイアルにピペッティングして充填し、栓を凍結乾燥位置にセットした。充填したバイアルを凍結乾燥装置（Ｈｏｆ Ｓｏｎｄｅｒａｎｌａｇｅｎｂａｕから）へ移した。空のバイアルを二列に並べて熱を遮蔽して、凍結乾燥における充填したバイアルに対する外部温度の影響をできるだけ小さくした。バイアル中の溶液を凍結乾燥した。その後、凍結乾燥室を窒素で５００ｍｂａｒまで通気し、バイアルを閉めた。大気圧まで通気した後、バイアルに蓋をし、５℃で貯蔵した。

圧力や棚温度などの凍結乾燥のプロセスデータを制御コンピューターによって記録し、グラフに視覚化した。凍結乾燥プロセス中のバイアル内部をモニタリングする熱電対が、必要な乾燥時間を検知するのに役立った。

凍結乾燥物はガラスバイアル内で検査した。発展工程では、凍結乾燥物はバイアルから取り出しかつ放射断面に沿って割り、内部を調べた。

凍結乾燥物は、ＳＥＭにより構造を分析した。ＳＥＭを用いると肉眼では見えない凍結乾燥物の小さな欠陥を検出することができる。凍結乾燥物を割り、鉛直方向に割れた部分に１０^−１ｍｂａｒアルゴン雰囲気中で２０ｍＡのスパッタ電流で３０秒間金の薄層を用いてスパッタリングした。試料と金源の間の距離は約８ｃｍであった。ＳＥＭによる分析は、５０倍、１００倍、２５０倍、及び５００倍の倍率で行った。図１にいくつかの結果を示す。

２．本発明の凍結乾燥製剤の安定性測定
上記１に記載の表１〜３の水性調製物から得られた３種類の本発明の凍結乾燥物（例１：２０ｍｇ／ｇ、例２：１０ｍｇ／ｇ、及び例３：４ｍｇ／ｇ）の安定性を、２５℃での２４か月間の貯蔵期間にわたってＨＰＬＣにより内部のリシン−プロリンジケトピペラジン（ＤＫＰ）の量を測定することにより決定する。結果を表４に示す。比較目的のため、ＫｄＰＴの固体化合物を単独で用いて同じ測定を行った。結果を表５に示す。全ての実施例及び比較例におけるＤＫＰの量は、ＫｄＰＴの安定性と相関している、つまりＤＫＰ量が多いほど、ＫｄＰＴの安定性が低い。

ＨＰＬＣ測定を下記の条件下で行った。
カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｈｙｄｒｏ ＲＰ（４μｍ）８０Å ２５０×４．６ｍｍ
溶離液：Ａ：過塩素酸の水溶液
Ｂ：過塩素酸の水／アセトニトリル溶液
勾配：

注入容量： ２５μｌ
流量： １．０ｍｌ／分
オーブン温度： ３０℃
オートサンプラー温度：５℃
検出： ＵＶ２２０ｎｍ

下記の結果が得られた。

得られたデータは、ＫｄＰＴ遊離塩基の量に対するＤＫＰの％値である。

２４か月の期間にわたり測定したＤＫＰの量は、例１〜３の全てでほぼ一定のままであることが表４から明らかである（例１：０．４〜０．８％；例２：０．４〜０．６％；例３：０．４〜０．４％）。これらの結果は、本発明に係る凍結乾燥物の形態におけるＫｄＰＴの貯蔵安定性を明確に示している。

得られたデータは、ＫｄＰＴ遊離塩基の量に対するＤＫＰの％値である。

２４か月間の期間にわたり測定したＤＫＰの量は、比較例１では著しく増加したことが表５から明らかである（比較例１：０．７〜４．５％）。さらに、白色粉体は１２か月後には黄色っぽくなり、ＫｄＰＴが徐々に分解してＤＫＰ不純物の量が増加したことを示した。これらの結果は、先行技術に係るＫｄＰＴの固体化合物は貯蔵安定性が低いことを明確に示している。

３．直接打錠（比較例２）
３．１ 方法
凍結乾燥に代えて、適切な賦形剤と共にＫｄＰＴの直接打錠を行った。直接打錠のために、ＫｄＰＴ、直接打錠用賦形剤、崩壊剤、及び流動促進剤／滑沢剤（下記参照）を含む最終混合物を製造する。次いでこの製剤を直径が９ｍｍのポンチ（凸型）を用いた偏心プレス上で打錠してそれぞれの重量にした。

３．２ 製剤
直接打錠（ＤＣ）試験は、直接打錠に典型的に使用される様々な賦形剤を用いて行った。下記のＤＣ賦形剤を用いた。
ＭＣＣ１０１（結晶セルロース）
ソルビトールＤＣ
Ｇａｌｅｎ ＩＱ ７２０（イソマルト）
トレハロース
マンニトール２００ＤＣ

これらの賦形剤は、ＫｄＰＴと比べてほぼ３〜４倍の量で用いた。さらに、二酸化ケイ素及びステアリン酸マグネシウムを通常の量で打錠用の最終混合物に加えた。崩壊剤（クロスカルメロース）を製剤に加え、満足のいく崩壊時間を達成した。目標とした錠剤の質量は、全ての製剤でほぼ２５０〜２７０ｍｇであった。

製剤をさらにコーティングして、最終的な錠剤におけるＫｄＰＴの安定性を向上させた。コーティング用ポリマーとしてＰＶＡ（ポリビニルアルコール）を用いた。用いた品質は、カラコン社からのそのままで使えるオパドライＩＩホワイトであった。塗布したポリマーの量はほぼ４％であり、これは耐水蒸気層をもたらすべく塗布されるコーティングの通常の量である。

コーティング試験は、ほぼ１．２〜１．４ｋｇのバッチサイズで実験室用コーティング装置Ｇｌａｔｔ ＧＣ３００を用いて行った。

上記の方法に沿って直接打錠により下記の錠剤試料を製造した。さらに、水蒸気バリアとしてＰＶＡを基材とするコーティング（即ち、そのままで使えるオパドライＩＩホワイト）を塗布した。

試料は、制御した環境条件下でＡｌｕ／Ａｌｕブリスターに封入した。

３．３ 結果
ＭＣＣ１０１、ソルビトールＤＣ、及びＧａｌｅｎ ＩＱ ７２０（イソマルト）を含む製剤は、直接打錠の際に満足のいく打錠特性を示した。トレハロースは打錠可能なものではなかった（満足のいく錠剤の硬さを達成できなかった）。ソルビトール、イソマルト、及びＭＣＣをベースにした完成した錠剤は、５０〜８０Ｎの範囲又はそれ以上の耐圧壊性を有する錠剤にまで打錠することができた。崩壊時間は全ての製剤で５分以下であった。最も安定性が高い錠剤は、上記の表６に示すＭＣＣ１０１を用いたものである。

得られたデータは、ＫｄＰＴ遊離塩基の量に対するＤＫＰの％値である。

３か月間の期間にわたり測定したＤＫＰの量は、比較例２では既に著しく増加していることが表７から明らかである（比較例２：０．３５から３か月後には１．１９％）。これらの結果は、コーティングを塗布したにもかかわらず凍結乾燥をしていないＫｄＰＴ製剤は、貯蔵安定性が低いことを明確に示している。

４．医薬品組成物の調製
上記項１．に記載されるように得られた例１〜３の凍結乾燥物を、５ｍＬのＷＦＩを加えることにより再構成して、例えば経口投与用の水溶液をそれぞれ形成した。所望であれば、再構成前に香料、ｐＨ調整剤、及び／又は保存料などの追加の従来の薬学的に許容可能な賦形剤を水溶液に或いはＷＦＩに加えてもよい。

Claims (12)

1. リシル−プロリル−トレオニン又はその薬学的に許容可能な塩を含み、１種以上の増量剤と、１種以上の緩衝剤とをさらに含み、前記増量剤が、マンニトール、スクロース、及びトレハロースからなる群より選択され、前記緩衝剤が、クエン酸、リン酸二水素ナトリウム、酢酸、コハク酸、グルタメート、トリス（Ｔｒｉｓ）及びヒスチジンからなる群より選択される、凍結乾燥製剤。
2. １種以上のｐＨ調整剤をさらに含む、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。
3. 前記リシル−プロリル−トレオニンが、（Ｌ）Ｌｙｓ―（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、（Ｌ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｄ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｌ）Ｔｈｒ、（Ｄ）Ｌｙｓ−（Ｌ）Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｔｈｒ、又はこれらの混合物である、請求項１又は２に記載の凍結乾燥製剤。
4. 前記ｐＨ調整剤が、水酸化ナトリウム及び塩酸より選択される、ｐＨ値を３．０〜５．０に維持する酸又は塩基である、請求項２又は３に記載の凍結乾燥製剤。
5. 薬剤としての使用のための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
6. 疼痛関連疾患、掻痒症関連疾患、炎症性疾患、並びに／又は低ナトリウム血症、浮腫、イレウス、咳、緑内障、多発性硬化症、パーキンソン病及びアルツハイマー病より選択される、他の疾患を含む群より選択される疾患の治療的並びに／或いは予防的処置における使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
7. 固体形態で患者に投与されるか、又は
   水性キャリアで再構成して水性調製物を形成した後、前記水性調製物が患者に投与されるものである、
   請求項５又は６に記載の使用のための凍結乾燥製剤。
8. 請求項１〜７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤を調製する方法であって、
   （ａ）以下の成分、すなわち、
   （ｉ）リシル−プロリル−トレオニン又はその薬学的に許容可能な塩と、
   （ｉｉ）水性キャリアと、
   （ｉｉｉ）マンニトール、スクロース、及びトレハロースからなる群より選択される１種以上の増量剤と、
   （ｉｖ）クエン酸、リン酸二水素ナトリウム、酢酸、コハク酸、グルタメート、トリス（Ｔｒｉｓ）及びヒスチジンからなる群より選択される１種以上の緩衝剤と、
   （ｖ）存在する場合には、１種以上のｐＨ調整剤と
   を任意の順序で混合して、リシル−プロリル−トレオニンの遊離塩基の濃度が水性調製物に対して０．１〜１７５ｍｇ／ｇである、ｐＨが３．０〜５．０の範囲内の水性調製物を提供する工程と、
   （ｂ）前記水性調製物を凍結乾燥して固体形態の凍結乾燥製剤を提供する工程と、
   を含む、方法。
9. 請求項１〜７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤と、１種以上の医薬品賦形剤とを含む、医薬品組成物。
10. 請求項１〜４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤と、１種以上の化粧品賦形剤とを含む、化粧品組成物。
11. 請求項１〜７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤の、化粧品としての非治療的使用。
12. 哺乳動物の皮膚及び／又は粘膜の美容的処置のための、請求項１１に記載の凍結乾燥製剤の非治療的使用。