JP6453224B2 - インビボで血液がんの幹細胞を排除するため、および血液がんの再発を防ぐための、チロシンキナーゼ阻害剤のような抗がん剤と、好ましくはチアゾリジンジオンであるｓｔａｔ５アンタゴニストとの組み合わせ - Google Patents

Description

関連出願
本出願は、２０１２年１１月５日に出願された米国仮出願第６１／７２２，６３３号および２０１３年３月１５日に出願された第６１／７９４，３６７号に基づく優先権および利益を主張し、これらそれぞれの内容が本明細書によって本明細書中で参考として援用される。

背景
骨髄の造血幹細胞（ＨＳＣｓ）は、自己再生し、そして分化して全ての成熟血液細胞型を生産する独特の能力によって機能上定義される。一般的に、多能性前駆細胞から特定の機能を有する成熟細胞への発生のプロセスは、他の系列に発生する潜在能力を漸進的に失うことを含む。このプロセスは、ひとたび細胞が発生の選択を行うと、戻ることができないという意味において直線的（ｌｉｎｅａｒ）であると考えられている。成体マウスの骨髄における最初期の公知のリンパ球拘束性細胞はリンパ系共通前駆細胞（ＣＬＰ）であり、そして成体マウスの骨髄における最初期の公知の骨髄系拘束性細胞は骨髄前駆細胞（ＣＭＰ）である。ＣＤ３４^＋細胞は事実上、全てのインビトロのクローン原性潜在力を有する；しかし、ＣＤ３４^＋細胞群は不均質（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）である。成熟系列マーカー（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４およびＣＤ１５；Ｌｉｎ−）を発現しないＣＤ３４^＋細胞の少数（１〜１０％）だけが、複数系列（リンパ系および骨髄系）に発生する潜在力を有する。ＣＤ３４^＋細胞の大部分（９０〜９９％）はＣＤ３８抗原を共発現し、そしてこのサブセットは系列に制限される前駆細胞の大部分を含む。正常にはＨＳＣにおいてしっかりと制御される自己再生経路の調節解除は最近、白血病進行における重要なステップとして認識されている。

骨髄性の（骨髄性または非リンパ球性の）血液疾患として、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および骨髄増殖性骨髄異形成疾患（ＭＰＤｓまたはＣＭＰｓ）と名付けられた慢性血液疾患が挙げられる。急性白血病は、未熟血液細胞の急速な増加によって特徴付けられ、そして小児（ＡＬＬ）および若年成人（ＡＭＬ）において生じ得る。骨髄増殖性疾患（ＭＰＤｓ）は、末梢血における１つ以上の造血細胞系列の細胞増殖によって特徴付けられる慢性クローン性疾患の不均質な群であり、急性白血病とは異なる。増殖は進行するのに数か月から数年かかり、そして比較的に成熟した異常な血液細胞の過剰な増大によって区別され；末梢血中の顆粒球、赤血球および／または血小板の数の増加をもたらす。骨髄増殖性疾患として：慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、慢性原発性骨髄線維症（特発性骨髄化生（ＡＩＭ））、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、慢性好酸球性白血病／特発性好酸球増加症候群（ＣＥＬ／ＨＥＳ）および全身性肥満細胞症（ＳＭ）が挙げられる。骨髄増殖性疾患は別の骨髄増殖性状態の一つに進展するか、急性白血病に変化するかまたはその両方が起こり得る。

慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を例外として、大部分の慢性骨髄増殖性疾患（ＣＭＰＤｓ）の分子的な病因は十分に理解されておらず、そして大部分のＣＭＰＤの症例は正常または異数体の核型を有する。しかし、ＣＭＬおよびいくつかのＣＭＰＤは、それぞれＫＩＴ、ＦＬＴ３およびＪＡＫ２遺伝子か、またはＡＢＬ、ＰＤＧＦＲ、１５ ＦＧＦＲＩおよびＦＧＦＲ３遺伝子かの点変異または染色体転座による膜または細胞質のタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）の活性化と関連する。慢性骨髄性白血病は、ｔ（９；２２）（ｑ３４；ｑ１１）相互転座（ｄｅｒ２２またはＰｈ＋染色体）およびＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質の発現によって特徴付けられる。調節不全のＢＣＲ−ＡＢＬの細胞質チロシンキナーゼ活性は、白血病性の表現型の原因である。ＢＣＲ−ＡＢＬタンパク質は、ｐ１８５^{ｂｃｒ−ａｂｌ}またはｐ２１０^{ｂｃｒ−ａｂｌ}と言及され、ＢＣＲの２番目のエキソンの含有に依存する。ｐ１８５^{ｂｃｒ−ａｂｌ}は急性白血病（典型的にはリンパ芽球性）を引き起こし；ｐ２１０^{ｂｃｒ−ａｂｌ}は通常、骨髄性またはリンパ球性の急性転化に進行し得るＣＭＬを引き起こす。真性多血症、本態性血小板血症および骨髄線維症において、広く行き渡った遺伝子損傷は、Ｊａｎｕｓキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子内のアミノ酸位置６１７（Ｖ６１７Ｆ）でのバリンからフェニルアラニンへの置換であるようである。ＡＭＬおよび全身性肥満細胞症は、ＫＩＴ遺伝子のＤ８１６変異と関連付けられている。ＢＣＲ−ＰＤＧＦＲαまたはＦ１Ｐ１Ｌ１−ＰＤＧＦＲα融合物が、特発性好酸球増加症候群の患者において検出されている。

イマチニブ（２−フェニルアミノピリミジン分子）はＡＴＰ結合部位を占有し、そしてＡＢＬ、ｃ−ＫＩＴおよびＰＤＧＦＲαのチロシンリン酸化を阻害する。イマチニブメシレート（ＳＴＩ５７１、Ｇｌｅｅｖｅｃ ｏｒ Ｇｌｉｖｅｃ）は、インビボで首尾よく試験されたＢＣＲ−ＡＢＬを標的とする初のチロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）であり、そして現在は慢性期における新規ＣＭＬの処置のための至適基準である（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００３，３４８，９９４−１００４；Ｄｒｕｋｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００６，３５５，２４０８−２４１７）。しかし、イマチニブの顕著な効能は、この疾患を根絶しそこない、そして残存したＣＭＬ疾患は、大部分の患者についてＰＣＲによって検出可能なままである。２年より多くの年数の間、分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）であった患者においてさえ、６か月以内の分子再発が患者の半分において観測される（Ｒｏｕｓｓｅｌｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００７ Ｊａｎ １；１０９（１）：５８−６０．Ｅｐｕｂ ２００６ Ｓｅｐ １４）。

イマチニブはＢＣＲ−ＡＢＬのチロシンキナーゼ活性を阻害し、そしてＣＭＬ細胞の増殖プールを根絶するが、ＣＭＬ静止期細胞に対しては活性がない。

最近の研究で、末梢血に由来しようと骨髄（ｂｌｏｏｄ ｍａｒｒｏｗ）に由来しようと、全てのＣＭＬ患者において稀な原始的な静止期の幹細胞（ＬＳＣｓ）の細胞群が検出された。これらの幹細胞は主にＰｈ＋であり、高レベルのＣＤ３４^＋を発現するが、マーカーであるＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡまたはＣＤ７１を欠き、そして自発的にＧ_０を出て継続的に増殖する状態に入り、Ｐｈ＋の後代を生産し得る（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００２，９９，３１９−３２５；Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ，２００６，５，２８６２−２８６６）。これらの細胞は、イマチニブメシレートを含む従来の化学療法剤に対して例外的に高いレベルの固有の非感受性を示す。このような非感受性は、ＡＢＬのキナーゼドメインにおける点変異を有するＢＣＲ−ＡＢＬを含むサブクローンの選択によってイマチニブに対する抵抗性を高頻度に媒介する薬物への慢性的な曝露の後に生じる獲得抵抗性とは異なる。イマチニブに対する臨床抵抗性（獲得抵抗性または２次的抵抗性）に関係する他の機序として、ＢＣＲ−ＡＢＬの過剰発現、ＢＣＲ−ＡＢＬがん遺伝子の増幅および増強された薬物流出（ｅｆｆｌｕｘ）が挙げられる。

薬物処置に対するこの固有の非感受性または抵抗性は、特にイマチニブによって誘導された寛解の後に生じる再発に関して、ＣＭＬ−の臨床的管理のための重要な意味を有する。しかし、イマチニブに対する獲得抵抗性に反して、ＣＭＬ静止期細胞の非感受性の原因となる分子的機序は公知でない。したがって、明確な分子標的はなく、そしてＣＭＬ静止期細胞を標的にするためにイマチニブと組み合わせるべき薬剤はどれかということに関して合理的な選択はなされ得ない。いくつかの手法が、イマチニブの有効性の改善を試みるために使用されている；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に対する断続的な曝露および特異的細胞毒性Ｔ細胞応答を誘導することができるＴペプチドを用いたワクチン接種。したがって、血液がんの再発を防ぐための治療法の改善が必要とされている。

Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００３，３４８，９９４−１００４；Ｄｒｕｋｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２００６，３５５，２４０８−２４１７ Ｒｏｕｓｓｅｌｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００７ Ｊａｎ １；１０９（１）：５８−６０．Ｅｐｕｂ ２００６ Ｓｅｐ １４ Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００２，９９，３１９−３２５；Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ，２００６，５，２８６２−２８６６

本発明は、抗がん剤（例えば、ＴＫＩ）、続いてＨＩＦ２ａをその後下方制御するシグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）アゴニスト（例えば、ＰＰＡＲγアゴニスト）を共投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）することによって、インビボで血液がんの幹細胞を減少させるか、または排除し、ひいては再発を防ぐための方法を提供する。

概要
一つの局面において、本発明は、インビボで血液がんの幹細胞を排除する方法であって：（Ａ）血液がんの患者に、有効量の抗がん剤を投与することと；（Ｂ）この患者に有効量のシグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）アンタゴニストを投与することと、を含む方法を提供する。

別の局面において、本発明は、血液がんの再発を防ぐ方法であって：（Ａ）血液がんの患者に、有効量の抗がん剤を投与することと；（Ｂ）この患者に有効量のＳＴＡＴ５アンタゴニストを投与することと、を含む方法を提供する。

本発明の上記局面のそれぞれは１つ以上の以下の実施形態を含み得る。

いくつかの実施形態において、抗がん剤（例えば、ＴＫＩ）は、患者における反応の安定した累積発生率が達成されるまで、ＳＴＡＴ５アンタゴニスト（例えば、チアゾリジンジオン化合物）より前に投与される。特定の実施形態において、この反応は、血液学的完全寛解（ＣＨＲ）、細胞遺伝学的大寛解（ＭＣＲ）、細胞遺伝学的完全寛解（ＣＣＲ）、分子遺伝学的効果（ＭＭＲ）および分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）からなる群から選択される。様々な実施形態において、この抗がん剤は、このＳＴＡＴ５アンタゴニストの投与の前に少なくとも３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０または３３か月か、あるいはそれより多くの間投与される。

別の実施形態において、ＳＴＡＴ５アンタゴニストは、少なくとも２、４、６、８、１０または１２か月、あるいは任意のこれらの間の範囲（例えば、２〜１２か月または２〜６か月あるいはそれより多く）の間、この抗がん剤とともに、投与される（上記の抗がん剤による処置の最初の期間の後）。このＳＴＡＴ５アンタゴニストの投与を終了した（一時的にであろうと、永久にであろうと終了した）後、この抗がん剤の投与は継続され得る。様々な実施形態において、完全な寛解（例えば、ＣＭＲ）を維持することが必要であるとき、この抗がん剤の投与は、さらに２〜１２か月またはより長く（生涯にわたってさえ）の間継続される。別の実施形態において、ひとたび臨床的完全寛解が患者において達成されたとき、この抗がん剤は永久に中止される。

様々な実施形態において、ＳＴＡＴ５アンタゴニストは、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニストである。特定の実施形態において、このＳＴＡＴ５アンタゴニストは、グリタゾン化合物（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エングリタゾン、シグリタゾンまたはネトグリタゾン）のようなチアゾリジンジオン化合物である。特定の実施形態において、このチアゾリジンジオン化合物はピオグリタゾンである。本発明において利用されるＳＴＡＴ５アンタゴニストは、転写因子ＨＩＦ２ａの発現を抑制するように働き、静止期の幹細胞（ＬＳＣｓ）が増殖することを可能とし、そしてＴＫＩのような抗がん治療法の効果を増強する。

別の様々な実施形態において、患者は白血病を患っている。特定の実施形態において、この患者は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）または急性骨髄性白血病を患っている。

さらなる実施形態において、抗がん剤はチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。特定の実施形態において、このＴＫＩは、イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、ルキソリチニブ、キザルチニブおよびスニチニブからなる群から選択される。特定の実施形態において、このＴＫＩはイマチニブである。

特定の実施形態において、ＳＴＡＴ５アンタゴニストは、約１５〜６０ｍｇ／日（例えば、約３０〜５０ｍｇ／日または許容される毒性のその他の範囲内で）の用量で投与される。例えば、このＳＴＡＴ５アンタゴニストは、２か月間は約３０ｍｇ／日そして約４５ｍｇ／日の用量で投与され得る。別の実施形態において、抗がん剤は、約３００〜８００ｍｇ／日（例えば、約３００〜４００ｍｇ／日）の用量で投与される。

特定の実施形態において、血液がんは骨髄性のがん（例えば、ＣＭＬ）であり、チアゾリジンジオン化合物はピオグリタゾンであり、そしてＴＫＩはイマチニブである。好ましくは、このＴＫＩは、反応の安定した累積発生率が患者において達成されるまで投与され、続いてピオグリタゾンが、分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）が達成されるまで投与される。一つの実施形態において、このＴＫＩ（たとえば、イマチニブ）は約３００〜４００ｍｇ／日で投与され、そしてこのチアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾン）は約３０〜５０ｍｇ／日で投与される。

本発明のその他の特徴および利点は、以下の記載および特許請求から明らかである。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
インビボで血液がんの幹細胞を排除する方法であって：
（Ａ）血液がんの患者に有効量の抗がん剤を投与する工程と；
（Ｂ）該患者に有効量のシグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）アンタゴニストを投与する工程と；
を含む、方法。
（項目２）
患者における血液がんの再発を防ぐ方法であって：
（Ａ）該患者に有効量の抗がん剤を投与する工程と；
（Ｂ）該患者に有効量のＳＴＡＴ５アンタゴニストを投与する工程と；
を含む、方法。
（項目３）
前記抗がん剤が、前記患者における反応の安定した累積発生率が達成されるまで、前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストの前に投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目４）
前記反応が、血液学的完全寛解（ＣＨＲ）、細胞遺伝学的大寛解（ＭＣＲ）、細胞遺伝学的完全寛解（ＣＣＲ）、分子遺伝学的効果（ＭＭＲ）および分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）からなる群から選択される、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記抗がん剤が、前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストの投与の前に少なくとも３か月間投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストが前記抗がん剤と併用して２〜１２か月の間投与される、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記抗がん剤の投与が、前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストの投与が中止された後に継続される、項目６に記載の方法。
［［特に、２〜１２か月、例えば２〜６か月］］
（項目８）
前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストが、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニストである、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目９）
前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストがチアゾリジンジオン化合物である、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記チアゾリジンジオン化合物が、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エングリタゾン、シグリタゾンおよびネトグリタゾンからなる群から選択されるグリタゾンである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記チアゾリジンジオン化合物がピオグリタゾンである、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記患者が白血病を患っている、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１３）
前記患者が慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）または急性骨髄性白血病を患っている、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記白血病がＣＭＬである、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記抗がん剤がチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１６）
前記ＴＫＩが、イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、ルキソリチニブ、キザルチニブおよびスニチニブからなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ＴＫＩがイマチニブである、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストが約１５〜６０ｍｇ／日の用量で投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目１９）
前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストが約３０〜５０ｍｇ／日の用量で投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記抗がん剤が約３００〜８００ｍｇ／日の用量で投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記抗がん剤が約３００〜４００ｍｇ／日の用量で投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２２）
インビボの骨髄性幹細胞を排除する方法であって：
（Ａ）骨髄性がんの患者に約３００〜４００ｍｇ／日のＴＫＩを投与する工程と；
（Ｂ）該患者に約３０〜５０ｍｇ／日のチアゾリジンジオン化合物を投与する工程と；を含む、方法。
（項目２３）
骨髄性がんの再発を防ぐ方法であって：
（Ａ）骨髄性がんの患者に約３００〜４００ｍｇ／日のＴＫＩを投与する工程と；
（Ｂ）該患者に約３０〜５０ｍｇ／日のチアゾリジンジオン化合物を投与する工程と；を含む、方法。
（項目２４）
前記チアゾリジンジオン化合物がピオグリタゾンである、項目２２または項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記ＴＫＩがイマチニブである、項目２２または項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記ＴＫＩが、反応の安定した累積発生率が前記患者において達成されるまで投与される、項目２２または項目２３に記載の方法。
（項目２７）
前記ピオグリタゾンが、ＣＭＲが達成されるまで約２〜１２か月の間投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２８）
前記ピオグリタゾンが、２か月の間約３０ｍｇ／日の用量で投与され、そしてその後に合計１２か月の間約４５ｍｇ／日の用量で投与される、前記項目のいずれかに記載の方法。
（項目２９）
臨床的完全寛解が前記患者において達成されているとき、前記抗がん剤および前記ＳＴＡＴ５アンタゴニストの投与が中止される、前記項目のいずれかに記載の方法。

図１（ａ）〜（ｄ）は、ＣＭＬ細胞に対するピオグリタゾンおよびイマチニブの特異な効果および相乗的な効果を示す。 図１（ａ）〜（ｄ）は、ＣＭＬ細胞に対するピオグリタゾンおよびイマチニブの特異な効果および相乗的な効果を示す。 図２（ａ）〜（ｅ）は、ピオグリタゾンによる静止期のＣＭＬ幹細胞（ＬＳＣ）の除去を示す。 図２（ａ）〜（ｅ）は、ピオグリタゾンによる静止期のＣＭＬ幹細胞（ＬＳＣ）の除去を示す。 図２（ａ）〜（ｅ）は、ピオグリタゾンによる静止期のＣＭＬ幹細胞（ＬＳＣ）の除去を示す。 図２（ａ）〜（ｅ）は、ピオグリタゾンによる静止期のＣＭＬ幹細胞（ＬＳＣ）の除去を示す。 図３（ａ）〜（ｆ）は、ＣＭＬのＬＳＣにおけるピオグリタゾンの標的としてのＰＰＡＲγ−ＳＴＡＴ５経路を示す。 図３（ａ）〜（ｆ）は、ＣＭＬのＬＳＣにおけるピオグリタゾンの標的としてのＰＰＡＲγ−ＳＴＡＴ５経路を示す。 図３（ａ）〜（ｆ）は、ＣＭＬのＬＳＣにおけるピオグリタゾンの標的としてのＰＰＡＲγ−ＳＴＡＴ５経路を示す。 図３（ａ）〜（ｆ）は、ＣＭＬのＬＳＣにおけるピオグリタゾンの標的としてのＰＰＡＲγ−ＳＴＡＴ５経路を示す。 図３（ａ）〜（ｆ）は、ＣＭＬのＬＳＣにおけるピオグリタゾンの標的としてのＰＰＡＲγ−ＳＴＡＴ５経路を示す。 図４は、ＣＭＬ患者におけるピオグリタゾン誘導ＣＭＲおよび退薬後の維持を示す。 図５（ａ）〜（ｃ）は、ＰＰＡＲγを通してＢＣＲ−ＡＢＬ発現細胞におけるＳＴＡＴ５のアゴニスト作用の特異性を示す。 図６（ａ）〜（ｂ）は、ピオグリタゾンとイマチニブとの組み合わせに反応するＣＰ−ＣＭＬ細胞における標的遺伝子の発現を示す。 図７は、４００ｍｇ／日の経口的イマチニブを用いた処置の後の反応の累積発生率（ＣＩＲ）を示す。 図８は、ＨＩＦ１ａおよびＨＩＦ２ａ発現に対するＢＣＲ−ＡＢＬ発現（ＣＤ３４＋）細胞におけるＳＴＡＴ５のアンタゴニスト作用の特異性を示す。 図９は、ＨＩＦ２ａ抑制による静止期のＣＭＬ幹細胞（ＬＳＣ）の除去を示す。

詳細な説明
本発明は、静止期のがん幹細胞（例えば、骨髄性白血病の幹細胞）は、ＳＴＡＴ５に高度に依存「耽溺（ａｄｄｉｃｔｅｄ）」しており、そしてしたがって特に従来の化学療法の間または後にＳＴＡＴ５を下方制御することによって選択的に標的にされ得、そして根絶され得るという予期せぬ発見に部分的に基づく。

多くの場合、静止期の幹細胞は再発の原因であり、そして標準的な化学療法に抵抗性であることを考慮して、本発明は、がんの再発を防ぐための標的を定めた効果的な方法を提供する。本明細書において実証されるように、標準的な化学療法（例えば、抗がん剤の投与）の後の白血病患者に対するＳＴＡＴ５阻害剤（例えば、グリタゾンのようなＰＰＡＲγアゴニスト）の投与は、持続する長期の寛解を検出不可能なレベルでさえもたらす。さらに、静止期の幹細胞のＳＴＡＴ５への有意な依存性は、患者によって許容されるレベルでのＳＴＡＴ５阻害剤の投与を可能にする。患者における幹細胞の大部分を、ＳＴＡＴ５依存性ではない正常な幹細胞でさえ、根絶する（非選択的な様式において）のに十分な高用量の阻害剤を投与することが必須であると考えられてきたので、本発明の前には、このことが可能であるとは考えられていなかった。

定義
本明細書中で使用されるとき、「患者」とはヒトのがん患者をいう。

本明細書中で使用されるとき、「処置」とは、有益な効果、例えば疾患または不調の症状の少なくとも一つの改善、を生み出す処置をいう。有益な効果はベースラインに対しての改善、すなわち本方法に従った治療の開始前に行われた計測または観測に対する改善、という形態をとり得る。有益な効果は、がんのマーカーの有害な進行の阻止、妨害、根絶、軽減、緩慢化、遅延または安定化という形態もまたとり得る。例えば、処置は、血液がんの幹細胞のクローン原性活性を減少させることを言い得る。処置は、ＢＣＲ−ＡＢＬ陽性細胞の成長を阻害することもまた言い得る。さらに、処置は、血液がんの幹細胞におけるクローン原性および／または増殖性の欠損を誘導することを言い得る。処置は、血液がんの幹細胞におけるＳＴＡＴ５活性を下方制御することもまた言い得る。さらに、処置は、血液がんを患う患者において分子遺伝学的効果（ＭＭＲ）、分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）または細胞遺伝学的完全寛解（ＣＣＲ）を達成することを言い得る。

本明細書中で使用されるとき、「血液がん」とは、血液、骨髄およびリンパ節に影響を及ぼすがんをいう。特定の実施形態において、このがんは、２つの主要な細胞系列：骨髄系およびリンパ系細胞系列、のいずれかに由来し得る。いくつかの実施形態において、この血液がんは骨髄性がんを含む。様々な実施形態において、この骨髄性がんは、慢性骨髄性がん（ＣＭＬ）および急性骨髄性がん（ＡＣＬ）を含む。

本明細書中で使用されるとき、「幹細胞」とは、正常な幹細胞に関連する特徴（例えば、特定のがん試料において見出される全ての細胞型を生み出す能力）を有し、血液がんの中に見出されるがん幹細胞（ＣＳＣｓ）またはがん細胞をいう。ＣＳＣは、腫瘍原性の（腫瘍を形成する）細胞である。いくつかの実施形態において、ＣＳＣは自己再生および複数の細胞型への分化という幹細胞のプロセスを通して腫瘍を発生させ得る。特定の実施形態において、このような細胞は異なる細胞群として腫瘍の中で生き残り得、そして新たな腫瘍を生み出すことによって再発および転移を引き起こし得る。

本明細書中で使用されるとき、「有効量」とは、患者において反応の安定した累積発生率をもたらす１種類以上の薬剤の量をいう。反応の安定した累積発生率は、例えば、血液がんを患う患者における、安定した血液学的完全寛解（ＣＨＲ）、細胞遺伝学的大寛解（ＭＣＲ）または（ＭＣｙＲ）、細胞遺伝学的完全寛解（ＣＣＲ）または（ＣＣｙＲ）、分子遺伝学的効果（ＭＭＲ）あるいは分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）の形態において達成され得る。特定の実施形態において、ＭＣＲまたはＣＣＲについては、反応の安定した累積発生率は、６か月間にわたる複数の連続した骨髄試験において測定されたフィラデルフィア染色体（Ｐｈ陽性）分裂中期の値が、２０％より大きく変動しないとき達成される。別の実施形態において、ＭＣＲまたはＣＣＲについては、反応の安定した累積発生率は、６か月間にわたる複数の連続した試験において、例えば定量的リアルタイムＰＣＲを使用して測定されたＢＣＲ−ＡＢＬ転写物のレベルが２０％より大きく変動しないとき達成される。図７は、４００ｍｇ／日の経口的イマチニブを用いた処置の後の反応の累積発生率（ＣＩＲ）を示す。例えばそれぞれＣＨＲ、ＭＣＲ、ＣＣＲ、ＭＭＲおよびＣＭＲを表す各々の曲線がプラトーに達したとき、すなわち６か月間にわたる反応の累積発生率における差が０．２以下であるとき、反応の安定した累積発生率が達成される。

本明細書中で使用されるとき、「血液学的完全寛解（ＣＨＲ）」とは、患者の血液計数が正常なレベル、すなわち、健康な人において通常観測されるレベル、に戻ったときの段階を達成することをいう。

本明細書中で使用されるとき、「細胞遺伝学的大寛解（ＭＣＲ）または（ＭＣｙＲ）」とは、細胞遺伝学的反応の合わせた数が３５％以下のフィラデルフィア染色体（Ｐｈ陽性）分裂中期に相当するときの段階を達成することをいう。

本明細書中で使用されるとき、「細胞遺伝学的完全寛解（ＣＣＲ）または（ＣＣｙＲ）」とは、最小でも３０の分裂中期を試験して、２回の連続した骨髄試験においてフィラデルフィア染色体（Ｐｈ陽性）分裂中期を一つも検出しない段階を達成することをいう。いくつかの実施形態において、ＣＣＲとは、ＳＴＡＴ５の活性化に関連する骨髄性血液疾患を以前患っており、抗がん剤によって処置された被験者の血液および骨髄における骨髄系列（芽細胞）のがん細胞の非存在をいう。細胞遺伝学的反応は、光学顕微鏡形態検出、クローン原性アッセイ、免疫表現型解析、核型解析、蛍光ハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションを含む当技術分野において公知の方法によってアッセイされる。

本明細書中で使用されるとき、「分子遺伝学的効果（ＭＭＲ）」とは、ＢＣＲ−ＡＢＬ転写物の数において有意な減少を達成することをいう。いくつかの実施形態において、ＭＭＲは、ＢＣＲ−ＡＢＬ転写物の数における１０倍の減少が検出されるとき達成される。特定の実施形態において、ＭＭＲは、２回の連続した分子研究に基づく転写物レベルにおける３ｌｏｇの減少が観測されるときに達成される。

本明細書中で使用されるとき、「分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）」とは、事実上検出不可能であるＢＣＲ−ＡＢＬ転写物の減少をいう。いくつかの実施形態において、ＢＣＲ−ＡＢＬ転写物の数における１０００倍の減少が検出されるときに達成される。様々な実施形態において、ＣＭＲは、２つの連続した試料が検出可能な転写物をもたらさないときに達成される。

ＣＭＲはまた、ＳＴＡＴ５の活性化と関連する骨髄性血液疾患を以前有しており、抗がん剤によって処置された患者の血液および骨髄において骨髄性血液疾患の分子マーカーを発現する骨髄性系列の細胞の非存在もいう。この分子マーカーは、骨髄性血液疾患の原因となる変異したチロシンキナーゼであり得、当技術分野において公知の方法によって、例えばＲＴ−ＱＰＣＲによって検出される。通常、がん細胞に特異的なマーカーおよび同じ型の正常細胞に特異的なマーカーは、処置の効率を決定するために同時に検出される。

本明細書中で使用されるとき、「臨床的完全寛解」とは、延長期間にわたって検出不可能なレベルのＢＣＲ−ＡＢＬ転写物を達成することをいう。いくつかの実施形態において、臨床的完全寛解とは、１年間累積発生率がＣＭＲ４．５であることをいう。ＣＭＲ４．５は、ＢＣＲ−ＡＢＬ／ＡＢＬのＩＳ比率が０．００３２％以下であることによって定義される。特定の実施形態において、臨床的完全寛解とは、ＳＴＡＴ５アンタゴニストおよび抗がん剤の退薬後の数年間に持続した４．５までのＣＭＲを達成することをいう。

本明細書中で使用されるとき、「（薬）剤（ａｇｅｎｔ）」とは、化学物質、化合物、化学的化合物の混合物、生物学的巨大分子あるいはバクテリア、植物、菌類もしくは動物（特に哺乳類）の細胞または組織のような生物学的材料から作製された抽出物をいう。

本明細書中で使用されるとき、「抗がん剤」とは、ＳＴＡＴ５アンタゴニストおよびＰＰＡＲγアゴニストを除く、骨髄性系列の造血細胞の増殖を阻害する機能的特性および骨髄性血液疾患（ｍｙｅｌｏｉｄ ｈｅｒｎｏｐａｔｈｙ）の発達または進行を阻害する機能的特性を有する任意の薬剤をいう。抗がん剤として；ビンブラスチンのような有糸分裂阻害剤；シスプラチン、カルボプラチンおよびシクロホスファミドのようなアルキル化剤；５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、ヒドロキシ尿素のような抗代謝薬；アドリアマイシンおよびブレオマイシンのような核酸インターカレート剤；アスパルギナーゼのような酵素；エトポシドのようなトポイソメラーゼ阻害剤；インターフェロンのような生物学的反応修飾剤；アクチノマイシンＤのようなアポトーシス剤；抗ホルモン剤、例えばタモキシフェンのような抗エストロゲン剤、または例えば抗アンドロゲン剤；腫瘍に対する免疫応答を増加させる薬剤およびシグナル伝達阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。その他の抗がん剤の例として：熱ショックタンパク質阻害剤（１７−ＡＡＧ）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ザルネストラ）、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＳＡＨＡ、デプシペプチド、ＭＳ−２７５など）、ＣＤＫ阻害剤（フラボピリドール）、プロテアソーム阻害剤（ボルテゾミブ）、脱メチル化剤（デシタビン、ビダーザ（ｖｉｚａｄａ））、Ｂｃｌ−２阻害剤（ＡＢＴ−７３７）、アントラサイクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、シタラビン、エトポシド、デキサメタゾン、メトトレキサート、チオグアニン、６−メルカプトプリン、ＡＴＲＡ、ゲンシタビン、ビンクリスチン、プレドニゾン、ミトキサントロンおよびリツキサンが挙げられる。

本明細書中で使用されるとき、「ＴＫＩ」とは、チロシンキナーゼ阻害剤、すなわち酵素チロシンキナーゼの機能を阻害し得る薬剤をいう。

いくつかの実施形態において、抗がん剤はチロシンキナーゼ阻害剤である。チロシンキナーゼ阻害剤の例として：イマチニブ、ＡＭＮ１０７、ダサチニブ（Ｄａｓｉｔｉｎｉｂ）（ＢＭＳ−３５４８２５）、ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂｂ）（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標）、ＮＯＶＡＲＴＩＳ）、ＣＨＩＲ−２５８、ＣＥＰ−７０１、ＰＫＣ４１２、ＳＵ１１２４８、ＳＵ５４１６、ＳＵ５４０２、ＰＤ１７３０７４およびＭＬＮ５１８が挙げられる。好ましくは、このチロシンキナーゼ阻害剤はＢＣＲ−ＡＢＬのリン酸化を阻害する。より好ましくは、このチロシンキナーゼ阻害剤は、イマチニブ、ＡＭＮ１０７、ダサチニブ（Ｄａｓｉｔｉｎｉｂ）（ＢＭＳ−３５４８２５）およびニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標）、ＮＯＶＡＲＴＩＳ）からなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、ＴＫＩはイマチニブである。特定の実施形態において、このＴＫＩはダサチニブである。様々な実施形態において、このＴＫＩはニロチニブである。いくつかの実施形態において、このＴＫＩはボスチニブである。特定の実施形態において、このＴＫＩはポナチニブである。様々な実施形態において、このＴＫＩはルキソリチニブである。いくつかの実施形態において、このＴＫＩはキザルチニブである。

本明細書中で使用されるとき、「ＳＴＡＴ５アンタゴニスト」とは、次にＨＩＦ２ａの発現を制御するＳＴＡＴ５の発現および／または活性を阻害する任意の阻害剤をいう。このような薬剤として、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよび公知の小分子化合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＳＴＡＴ５アンタゴニストはＰＰＡＲγアゴニストである。

本明細書中で使用されるとき、「ＰＰＡＲγ」とは、特に、脂肪細胞および造血細胞において発現されるペルオキシソーム増殖剤活性化受容体ファミリーのメンバーをいい（Ｂｒａｉｓｓａｎｔ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３７（１）：３５４−６６）、そしてこれは分化の重要な調節因子として機能する。この定義の中で熟慮されるものには、例えば１次ＲＮＡ転写物の選択的スプライシングによって生成される異なるＮ末端を有する２つのアイソフォームであるＰＰＡＲγｌおよびＰＰＡＲγ２のようなこれの変異体がある（Ｔｏｎｔｏｎｏｚ，Ｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖ．，１９９４，８：１２２４−３４；Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，２６８：２６８１７−２０）。

本明細書中で使用されるとき、「ＰＰＡＲγアゴニスト」とは、造血細胞においてＰＰＡＲγ受容体に対する天然のリガンドを模倣し、そしてＳＴＡＴ５の転写を阻害する薬剤をいう。これは、ＰＰＡＲγタンパク質に選択的かつ特異的に結合し、そして結合したときにＰＰＡＲγ応答因子を含む遺伝子の転写を活性化する任意の天然に生じるかまたは非天然に生じる薬剤を含む。このようなリガンドの例として、チアゾリジンジオンおよびこれの誘導体、またはプロスタグランジン（ＰＧ）代謝物、例えばプロスタグランジン１５−デオキシ−Ａ２’１４、ＰＧＪ２、およびこれらの誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明を実施するために有用な化合物およびこれらの化合物を作製する方法は公知である。ＰＰＡＲγアゴニストの例は国際ＰＣＴ出願である国際公開第９１／０７１０７号；国際公開第９２／０２５２０号；国際公開第９４／０１４３３号；国際公開第８９／０８６５１号；国際公開第３０ ９５／１８５３３号；国際公開第９５／３５１０８号；国際公開第９８／２５５９８号；国際公開第０１／１６１２２号；国際公開第０１／１６１２３号；日本国特許出願第６９３８３／９２号；ならびに米国特許第５，５２３，３１４号；第５，５２１，２０２号；第５，５１０，３６０号；第５，４９８，６２１号；第５，４９６，６２１号；第５，４９４，９２７号；第５，４８０，８９６号；第５，４７８，８５２号；第５，４６８，７６２号；第５，４６４，８５６号；第５，４５７，１０９号；第４，２８７，２００号；第４，３４０，６０５号；第４，４３８，１４１号；第４，４４４，７７９号；：第４，４６１，９０２号；第４，５７２，９１２号；第４，６８７，７７７号；第４，７０３，０５２号；第４，７２５，６１０号．，第４，８７３，２５５号；第４，８９７，３９３号；第４，８９７，４０５号；第４，９１８，０９１号；第４，９４８，９００号；第５，００２，９５３号；第５，０６１，７１７号；第５，１２０，７５４号；第５，１３２，３１７号；第５，１９４，４４３号；第５，２２３，５２２号；第５ ５，２３２，９２５号；第５，２６０，４４５号；第５，８１４，６４７号および第６，２００，９９８号に開示されている。

特定の実施形態において、ＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えば、ＰＰＡＲγアゴニストはチアゾリジンジオン化合物である。本発明の組み合わせた調製物において使用されるチアゾリジンジオン化合物は以下から選択され得る：
５−［４−［２−（５−エチルピリジン−２−イル）エトキシル］ベンジル］チアジアゾリジン−２，４−ジオン（５−［４４２−（５−ｅｔｈｙｌｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）ｅｔｈｏｘｙｌＴｈｅｎｚｙｌｉｔｈｉａｄｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）または５−（（４−（２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ）フェニル）メチル）−２，４−チアゾリジンジオン（５−４４−（２−（５−ｅｔｈｙｌ−２−ｐｙｒｉｄｉｎｙｐｅｔｈｏｘｙ）ｐｈｅｎｙＯｍｅｔｈｙｌ）−２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ） ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａ．ｚｏｎｅ）（Ａｃｔｏｓ（登録商標）（Ａｃｔｏｓｅ）またはＧｌｕｔｉｎ（登録商標）ＴＡＫＥＤＡ）；
５−［４−［（１−メチルシクロヘキシル）メトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４−［（１−ｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｒｎｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｎｚｙｌｉｔｈｉａｄｉａｚｏｌｉｃｌｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；シグリタゾン；
５−［（２−ベンジル−２，３−ジヒドロベンゾピラン−５−イル）メチル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５−［（２−ｂｅｎｚｙ１−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏｂｅｎｚｏｐｙｒａｎ）−５−ｙｈｎｅｔｈｙｌ］ｔｈｉａｄｉａｚｏｌｉｎｅ−２，４ｄｉｏｎｅ）：エングリタゾン；
５−［［４−［（３，４−ジヒドロ−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（５４［４１−［（３，４−ｄｉｈｙｄｒｏ−６−ｈｙｄｒｏｘｙ−２，５，７，８−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙ１−２Ｈ−１−ｂｅｎｚｏｐｙｒａｎ−２−ｙＯｍｅｔｈｏｘｙ］ｐｈｅｎｙｌｉｍｅｔｈｙｌｌ−２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）または５−（４−（（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル−メトキシ）ベンジル）−２，４−チアゾリジンジオン（５−（４４（６−ｈｙｄｒｏｘｙ−２，５，７，８−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｃｈｒｏｍａｎ−２−ｙｌ−ｍｅｔｈｏｘｙ）ｂｅｎｚｙ１）−２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｃｌｉｔｔｅｄｉｏｎｅ） トログリタゾン（Ｒｅｚｕｌｉｎ（登録商標）、Ｒｅｓｕｌｉｎ（登録商標）またはＲｏｍｏｚｉｎ（登録商標）（Ｒｏｍｏｚｉｎｅ））；
５−［［４−［２−（メチル−２−ピリジニルアミノ）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（５４［４−２−（ｍｅｔｈｙ１−２−ｐｙｒｉｄｉｎｙｌａｍｉｎｏ）ｅｔｈｏｘｙ］ｐｈｅｎｙｌｊｍｅｔｈｙ１１２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｃｌｉｏｎｅ） ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ（登録商標）；ＧＬＡＸＯＳＭＩＴＨＫＬＩＮＥ）５−［（２−アルコキシ−５−ピリジル）メチル］−２，４−チアゾリジンジオン（５−［（２−ａｌｋｏｘｙ−５−ｐｙｒｉｄｙｌ）ｍｅ−ｔｈｙ１］−２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
５−［（置換−３−ピリジル）メチル］−２，４−チアゾリジンジオン；
５−［４−（２−メチル−２−フェニルプロポキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４−（２−ｍｅｔｈｙ１−２−ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌｌｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［３−（４−メトキシフェニル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］メトキシ］ベンジル−２，４−チアゾリジンジオン（５４４４３ −（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙＩ）−２−ｏ ｘｏｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ−５−ｙｌｉ−ｍ ｅｔｈｏｘｙｊｂｅｎ ｚｙ１−２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［３−（３，４−ジフルオロフェニル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］メトキシ］ベンジル−２，４−チアゾリジンジオン（５４４− ［３ （３，４−ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙ１）−２−ｏｘｏｏｘａｚｏｌｉ ｄｉｎ−５−ｙ１ ］−ｒｎｅｔｈｏｘｙ］ ｂｅｎｚｙ１−２，４−ｔｈｉａｚｏ−１ｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［３−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］メトキシ］ベンジル−２，４−チアゾリジンジオン（５４４４３ −（４−ｃｈｌｏｒｏ−２−ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙ１）−２−ｏｘｏｏｘａｚｏｌ ｉｄｉｎ−５−ｙｌｊｒｎｅｔｈｏｘｙｊｂｅｎｚｙｌ２，４ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉ ｏｎｅ）；
５−［４−［３−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］メトキシ］ベンジル−２，４−チアゾリジンジオン（５ ５−［４−［３−（４−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｒｎｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙ１）−２−ｏｘｏｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ−５−ｙｌ］ｍｅｔｈｏｘｙｌｂｅｎｚｙｌ−Ｚ４ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］メトキシ］ベンジル−２，４−チアゾリジンジオン（５４４−［３ −（４−ｔｒｉｆｆｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙ１）−２−ｏｘｏｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ−５−ｙｌ］ｒｎｅｔｈｏｘｙｌｂｅｎｚｙｌ−２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−［３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（５４４４２− ［３ −（４−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｒｎｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙ１）−２−ｏｘｏｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ−５ −ｙｌｊ ｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｒｉｚｙｌ］−２，４− ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−［３−（４−クロロ−２−フルオロフェニル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］エトキシ］ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオン（５４４４２４３ −（４−ｅｈｌｏｒｏ−２−ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙ１）−２−ｏｘｏｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ−５−ｙ１ｊｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｎｚｙｌｉ− ．４− ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［３−（４−ピリジル）−２−オキソオキサゾリジン−５−イル］メトキシ］ベンジル−２，４−チアゾリジンジオン（５４４４３ −（４−ｐｙｒｉｄｙ１）−２−ｏｘｏｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ−５−ｙｌｊｒｎｅｔｈｏｘｙｌ−ｂｅｎｚｙ１−２，４−ｔｈｉａｚｏｌ ｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）；
４−（２−ナフチルメチル）−１，２，３，５−オキサチアジアゾール−２−オキシド（４−（２−ｎａｐｈｉｈｙｌｔｎｅｔｈｙｌ）−１，２，３，５−ｏｘａｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅ−２−ｏｘｉｄｅ）；
５−［４−［２−［Ｎ−（ベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ−メチルアミノ］エトキシ］ベンジル］−５−メチルチアゾリジン−２，４−ジオン（１５ ５４４−４２４Ｎ−（ｂｅｎｚｏｘａｚｏｌ−２−ｙ１）−Ｎ−ｔｎｅｔｈｙｌ ａｍｉｎｏ｝ ｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｎｚｙＩ｝−５−ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ− ２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−（２，４−ジオキソ−５−フェニルチアゾリジン−３−イル）エトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４４２４２，４−ｄｉｏｘｏ−５−ｐｈｅｎｙｌｔｈｉａｚｏｌｉｃｌｉｎ−３−ｙｐｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｎｚｙｌｉｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（フェノキシカルボニル）アミノ］エトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４４２−｛Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｎ−（ｐｈｅｎｏｘｙｅａｒｂｏｎｙｐａｉｎｉｎｏ］ｅｔｈｏｘｙ］ｂｅｎｚｙｌ］ ｔｈｉａｚｏ ｌｉｄｉｎｅ−Ｚ４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−（２−フェノキシエトキシ）ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４−（２−ｐｈｅｎｏｘｙｅｔｈｏｘｙ）ｂｅｎｚｙｌｉｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−（４−クロロフェニル）エチルスルホニル］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４４２−（４−ｅｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙＤｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌｉｂｅｎｚｙｌｌｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［３−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロピオニル］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５ −［４− ［３ −（５−ｍｅｔｈｙ１−２−ｐｈｅｎｙ１ｏｘａｚｏｌ−４−ｙ０ｐｒｏｐｉｏｎｙｌ］ｂｅｎｚｙｌｌｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［（３−ヒドロキシ−１−メチルシクロヘキシル）メトキシ］ベンジル］チアジアゾリジン−２，４−ジオン（５− ［［４−（３ −ｈｙｄｒｏｘｙ− １ −ｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏ ｈｅｘｙｐｔｎｅｔｈｏｘｙｊｂｅｎｚｙ１ｉｔｈｉａｄｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）エトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４４２−（５−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｐｈｅｎｙｌｏｘａｚｏｌ−４−ｙｌ）ｅｔｈｏｘｙｌｉｂｅｎｚｙｌ］ｔｈｉａｄｉｚｏｌｉｄｉｏｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［［２−（２−ナフチルメチル）ベンゾオキサゾール−５−イル］メチル］チアジアゾリジン−２，４−ジオン（５−［［２−（２−ｎａｐｈｔｈｙｌｍｅｔｌａｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｏｌ］−５−ｙｌｍｅｔｈｙｌｉｔｌｉｉａｄｉａｚｏｌｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−（３−フェニルウレイド）エトキシ］ベンジル］チアジアゾリジン−２，４−ジオン（２５ ５４４［２−（３−ｐｈｅｎｙｌｕｒｅｉｄｏ）ｅｔｈｏｘｙｌｊｂｅｎｚｙｌｉｔｈｉａｄｉａｚｏｌｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−［Ｎ−（ベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ−メチルアミノ］エトキシル］ベンジル］チアジアゾリジン−２，４−ジオン（５４４４２− ［Ｎ−（ｂｅｎｚｏｘａｚｏｌ−２−ｙ１）−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ］ ｅｔｈｏｘｙＴｈｅｎｚｙｊｔｈｉａｄｉａｚｏｌｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［３−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イル）プロピオニル］ベンジル］チアジアゾリン−２，４−ジオン（５ ４４−［３ −（５−ｍｅｔｈｙ１−２−ｐｈｅｎｙｌｏｘａｚｏｌ−４−３７１）ｐｒｏｐｉｏｎｙｌＴｈｅｎｚｙ ｌ］ｔｈｉ− ａｄｉａｚｏｌｉｎｅ−１ ７４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［２−（５−メチル−２−フェニルオキサゾール−４−イルメチル）ベンゾフラン−５−イルメチル］オキサゾリジン−２，４−ジオン；
５−［４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ピリジル）アミノ］エトキシ］ベンジル］チアゾリジン−２，４−ジオン（５４４４２−［Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ−Ｎ−（２−ｐｙｒｉｄｙｌ）ａｍｉｎｏ］ｅｔｈｏｘｙｌｂｅｎｚｙｌｉｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）；
５−［４−［２−［Ｎ−（ベンゾオキサゾール−２−イル）−Ｎ−メチルアミノ］エトキシ］ベンジル］オキサゾリジン−２，４−ジオン（５４４４２−［Ｎ−（ｂｅｎｚｏｘａｚｏｌ−２−ｙ１）−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｉｅｔｈｏｘｙｌｂｅｎｚｙｌ］−ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎｅ−２，４−ｄｉｏｎｅ）および
５−（（６−（（２−フルオロフェニル）メトキシ）−２−ナフタレニル）メチル）−２，４−チアゾリジンジオン（５４（６４（２−ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｐｍｅｔｈｏｘｙ）−２−ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ）ｒｎｅｔｈｙｌ）−２，４−ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ） ネトグリタゾン（ＭＣＣ ５５５、ＭＣＣ−５５５またはＲＷＪ−２４１９４７；ＭＩＴＳＵＢＩＳＨＩ−ＴＯＫＹＯ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ）。

本発明の方法において使用されるチアゾリジンジオンの特定の例は、糖尿病の処置のために従来公知であった化合物である。例えば、このような化合物の代表的な源は米国特許第４，８１２，５７０号；第４，７７５，６８７号；第４，７２５，６１０号；第４，５８２，８３９号；および第４，５７２，９１２号を参照のこと。米国特許第５，５２１，２０１号ならびに欧州特許出願第０００８２０３号、第０１３９４２１号、第０１５５８４５号、第０１７７３５３号、第０１９３２５６号、第０２０７５８１号および第０２０８４２０号；ならびにＣｈｅｍ，Ｐｈａｒｍ，Ｂｕｌｌ ３０（１０）３５８０−３６００は、チアゾリジンジオン誘導体に関係し、そして様々なＳＴＡＴ５アンタゴニストおよびＳＴＡＴ５アンタゴニスト様類似体について商業的な源／合成スキームを記載しており、これは本発明の組み合わせた調製物の遂行において有用であり得る。いくつかの実施形態において、チアゾリジンジオン化合物として；トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンおよびネトグリタゾンが挙げられる。

特定の実施形態において、骨髄性血液疾患は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ならびに、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、慢性原発性骨髄線維症（特発性骨髄化生（ＡＭＭ））、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、慢性好酸球性白血病／突発性好酸球増加症（ＣＥＬ／Ｉ−ＪＥＳ）および全身性肥満細胞症（ＳＭ）を含む骨髄増殖性／骨髄異形成疾患からなる群から選択される。特定の実施形態において、この骨髄性血液疾患は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。

ＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニスト、および抗がん剤は、経口投与に適した薬理学的組成物の形態において調製される。いくつかの実施形態において、このＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニスト、およびこの抗がん剤は、単一の投薬形態においてであるか、または経口投与に適した分離した投薬形態（カプセル（単数または複数）、小袋（ｓａｃｈｅｔ）（単数または複数）、錠剤（単数または複数））としてである。

組み合わせた調製物は、有効量のＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニスト、および有効量の抗がん剤を含む。特定の実施形態において、この組み合わせはＣＭＲを達成するための有効量において投与される。

投与される組み合わせた調製物中で使用されるべき、ＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニスト、の的確な量および抗がん剤の的確な量は、関係のある特定の過形成細胞／がん細胞および特定の疾患のような要因；その疾患の度合いまたはその疾患の関与もしくは重症度；患者の大きさ、年齢および全体的な健康状態；個々の患者の反応；投与される特定の化合物；投与される調製物の生物学的利用能の特徴；選択される投与計画；併用処置の種類；化合物の薬力学的な特徴ならびにこれの投与の様式および経路；ならびに医師または当業者のような者が、公知の技術の使用によって、そして類似の状況下で取得された結果を観測することによって容易に決定するその他の関連する特徴、に従って変動する。

いくつかの実施形態において、本発明は、単一の投薬形態においてまたは経口投与に適した分離した投薬形態として３００〜４００ｍｇのイマチニブおよび３０〜５０ｍｇのピオグリタゾンの投与を伴う。特定の実施形態において、このイマチニブは、反応の安定した累積発生率が達成されるまで初めに投与され、続いて患者が分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）を達成するまでＳＴＡＴ５アンタゴニスト（例えば、ＰＰＡＲγアゴニスト）が毎日投与される。

したがって、ＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニスト、および抗がん剤は併用してかまたは逐次的に投与され得る。特定の実施形態において、このＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニスト、およびこの抗がん剤は骨髄性血液疾患を患う患者に併用して投与され、この投与は分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）が患者において観測されるときまで実行される。同時投与は一般的に、この抗がん剤に対して乏しい反応しか示さない患者のために使用される；このＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニストはこの抗がん剤の効果を増強するために使用される（例えば、抗がん剤によって排除されるように、骨髄性系列（単数または複数）のがん幹細胞を静止期から引き出すことによって）。

従って、逐次的な投与は一般的に、反応の適切な累積発生率が達成されるまでの、抗がん剤による第一選択の治療を含む。その後、ＳＴＡＴ５アンタゴニスト（例えばＰＰＡＲγアゴニスト）が、分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）が達成されるまで投与され、これによって骨髄性系列（単数または複数）の残存するがん細胞を排除することによって疾患の再発を防ぐ（ｐｒｅｅｖｎｔｉｎｇ）。逐次的な投与は一般的に患者が良好な反応（抗がん剤に対する迅速そして長期の細胞遺伝学的反応）を示すとき実行される。

別の局面において、本発明は、単一の投薬形態としてか、または分離した投薬形態として、上記で定義した通りのＳＴＡＴ５アンタゴニストまたはＰＰＡＲγアゴニストと、少なくとも１種類の上記で定義した通りの抗がん剤とを含む、上記で定義した通りの組み合わせた調製物の投与を遂行するためのキットを提供する。

そうではないと示されない限り、本発明の実施は、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニックの生物学、微生物学、組み換えＤＮＡおよび免疫学の従来の技術を利用し、これらは当技術分野の技術範囲内である。このような技術は文献の中で完全に説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ，ＡＵＳＵＢＥＬ，２０００，Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ ｓｏｎ Ｉｎｃ，アメリカ議会図書館、米国）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，２００１，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ．Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｏｌｉｇｏｎｕｅｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ ｅｄ．，１９８４）；：Ｍｕｌｌｉｓら米国特許第４，６８３，１９５号；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｒｒｉｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．１９８４）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｂｌａｍｅｓ ＆ Ｓ，Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．１９８４）；Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ｒ．Ｌ Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；叢書、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ｊ．Ａｂｅｌｓｏｎ ａｎｄ Ｍ．Ｓｉｍｏｎ，ｅｄｓ．−ｉｎ−ｃｈｉｅｆ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、特に、１５４巻および１５５巻（Ｗｕらｅｄｓ．）ならびに１８５巻、「Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」（Ｄ，Ｇｏｅｄｄｅｌ，ｅｄ）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｎｕｎａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ．Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）； Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｉ〜ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）；およびＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，（Ｃｏｌｄ．Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８６）．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ １０ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，２００８）、特に１２章「Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ」および１３章「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ」）を参照のこと。

上記の主要文献に加えて、本発明は、以下に続く記載から明らかな別の主要文献を含み、そして実施例は、標準的ながん治療の後の血液がんの寛解を維持するためのＳＴＡＴ５アンタゴニスト、例えばＰＰＡＲγアゴニストの使用を例証している。
１．Ｎｇｕｙｅｎ， Ｌ． Ｖ．， Ｖａｎｎｅｒ， Ｒ．， Ｄｉｒｋｓ， Ｐ．， Ｅａｖｅｓ， Ｃ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ： ａｎ ｅｖｏｌｖｉｎｇ ｃｏｎｃｅｐｔ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２， １３３−１４３ （２０１２）．
２．Ｃｈｏｍｅｌ， Ｊ． Ｃ．， Ｔｕｒｈａｎ， Ａ． Ｇ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｒａ ｏｆ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ： ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ， ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ａｎｄ ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｄｏｒｍａｎｃｙ． Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ２， ７１３−７２７ （２０１１）．
３．ｄｅ Ｌａｖａｌｌａｄｅ， Ｈ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｍａｔｉｎｉｂ ｆｏｒ ｎｅｗｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ： ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ａｎ ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６， ３３５８−３３６３ （２００８）．
４．Ｇｒａｈａｍ， Ｓ． Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ， ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｒｅ ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ＳＴＩ５７１ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ｂｌｏｏｄ ９９， ３１９−３２５ （２００２）．
５．Ｃｏｐｌａｎｄ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ｄａｓａｔｉｎｉｂ （ＢＭＳ−３５４８２５） ｔａｒｇｅｔｓ ａｎ ｅａｒｌｉｅｒ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｔｈａｎ ｉｍａｔｉｎｉｂ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ＣＭＬ ｂｕｔ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｅｌｉｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ ｆｒａｃｔｉｏｎ． Ｂｌｏｏｄ １０７， ４５３２−４５３９ （２００６）．
６．Ｃｏｒｂｉｎ， Ａ． Ｓ．， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ｉｍａｔｉｎｉｂ ｄｅｓｐｉｔｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＢＣＲ−ＡＢＬ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２１， ３９６−４０９ （２０１１）．
７．Ｌｕｏ， Ｊ．， Ｓｏｌｉｍｉｎｉ， Ｎ． Ｌ．， Ｅｌｌｅｄｇｅ， Ｓ． Ｊ． Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ： ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｎｄ ｎｏｎ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｄｄｉｃｔｉｏｎ． Ｃｅｌｌ １３６， ８２３−８３７ （２００９）．
８．Ｐｒｏｓｔ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｓｉｍｉａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓｅｓ ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅ ｅａｒｌｙ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ Ｎｅｆ／ＰＰＡＲｇａｍｍａ／ＳＴＡＴ５ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｍａｃａｑｕｅｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１８， １７６５−１７７５ （２００８）．
９．Ｂｅｒｒｉａ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｃｒｉｔ ａｎｄ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｓ ｎｏｔ ｈｅｍｏｄｉｌｕｔｉｏｎａｌ ｉｎ Ｔｙｐｅ ＩＩ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ． Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ８２， ２７５−２８１ （２００７）．
１０．Ｈｏｌｙｏａｋｅ， Ｔ．， Ｊｉａｎｇ， Ｘ．， Ｄｒｕｍｍｏｎｄ， Ｍ．， Ｅａｖｅｓ， Ａ．， Ｅａｖｅｓ， Ｃ． Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｎｇ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ． Ｌｅｕｋｅｍｉａ １６， ５４９−５５８ （２００２）．
１１．Ｂｏｎｎｅｔ， Ｄ．， Ｄｉｃｋ， Ｊ． Ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｉｓ ｏｒｇａｎｉｚｅｄ ａｓ ａ ｈｉｅｒａｒｃｈｙ ｔｈａｔ ｏｒｉｇｉｎａｔｅｓ ｆｒｏｍ ａ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ． Ｎａｔ Ｍｅｄ ３， ７３０−７３７ （１９９７）．
１２．Ｗａｎｇ， Ｚ．， Ｌｉ， Ｇ．， Ｔｓｅ， Ｗ．， Ｂｕｎｔｉｎｇ， Ｋ． Ｄ． Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＡＴ５ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｍｏｕｓｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｃａｕｓｅｓ ｌｏｓｓ ｏｆ ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｅｒｍｉｔｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｎｏｎａｂｌａｔｉｖｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ． Ｂｌｏｏｄ １１３， ４８５６−４８６５ （２００９）．
１３．Ｉｌａｒｉａ， Ｒ． Ｌ． Ｊｒ．， Ｖａｎ Ｅｔｔｅｎ， Ｒ． Ａ． Ｐ２１０ ａｎｄ Ｐ１９０（ＢＣＲ／ＡＢＬ） ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＳＴＡＴ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１， ３１７０４−３１７１０ （１９９６）．
１４．Ｎｉｅｂｏｒｏｗｓｋａ−Ｓｋｏｒｓｋａ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ （ＳＴＡＴ）５ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＢＣＲ／ＡＢＬ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｉｎｔａｃｔ Ｓｒｃ ｈｏｍｏｌｏｇｙ （ＳＨ）３ ａｎｄ ＳＨ２ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｆ ＢＣＲ／ＡＢＬ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８９， １２２９−１２４２ （１９９９）．
１５．Ｎｅｌｓｏｎ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ＳＴＡＴ５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｐｉｍｏｚｉｄｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ． Ｂｌｏｏｄ １１７， ３４２１−３４２９ （２０１１）．
１６．Ｈｏｅｌｂｌ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． Ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｓｔａｔ５ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｂｅｌｓｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｂｌｏｏｄ １０７， ４８９８−４９０６ （２００６）．
１７．Ｈｏｅｌｂｌ， Ａ．， ｅｔ ａｌ． Ｓｔａｔ５ ｉｓ ｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｂｃｒ／ａｂｌ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｌｅｕｋａｅｍｉａ． ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ２， ９８−１１０ （２０１０）．
１８．Ｗａｌｚ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｓｔａｔ５ａ／ｂ ｉｎ ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＢＣＲ−ＡＢＬ１ ａｎｄ ＪＡＫ２（Ｖ６１７Ｆ） ｉｎ ｍｉｃｅ． Ｂｌｏｏｄ １１９， ３５５０−３５６０ （２０１２）．
１９．Ｗａｒｓｃｈ， Ｗ．， ｅｔ ａｌ． Ｈｉｇｈ ＳＴＡＴ５ ｌｅｖｅｌｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｉｍａｔｉｎｉｂ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ． Ｂｌｏｏｄ １１７， ３４０９−３４２０ （２０１１）．
２０．Ｗａｎｇ， Ｌ．， Ｇｉａｎｎｏｕｄｉｓ， Ａ．， Ａｕｓｔｉｎ， Ｇ．， Ｃｌａｒｋ， Ｒ． Ｅ． Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｍａｔｉｎｉｂ ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ． Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ ４０， ８１１−８１９ （２０１２）．
２１．Ｃｈｏｍｅｌ， Ｊ． Ｃ．， ｅｔ ａｌ． Ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｕｎｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｂｌｏｏｄ １１８， ３６５７−３６６０ （２０１１）．
２２．Ｌａｕｒｉｅ， Ｃ． Ｃ． ｅｔ ａｌ． Ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｃｌｏｎａｌ ｍｏｓａｉｃｉｓｍ ｆｒｏｍ ｂｉｒｔｈ ｔｏ ｏｌｄ ａｇｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｃａｎｃｅｒ． Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ４４， ６４２−６５０ （２０１２）．
２３．Ｍａｈｏｎ， Ｆ． Ｘ．， ｅｔ ａｌ． Ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍａｔｉｎｉｂ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋａｅｍｉａ ｗｈｏ ｈａｖｅ ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ ｆｏｒ ａｔ ｌｅａｓｔ ２ ｙｅａｒｓ： ｔｈｅ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ， ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ Ｓｔｏｐ Ｉｍａｔｉｎｉｂ （ＳＴＩＭ） ｔｒｉａｌ． Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ １１， １０２９−１０３５ （２０１０）．
２４．Ｉｋｅｚｏｅ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ５ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｊａｎｕｓ ｋｉｎａｓｅｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｄｏｒｍａｎｔ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｅｍｉａ ＣＤ３４＋ ／ＣＤ３８− ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ ｔｈｅｍ ｔｏ ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉａ ａｇｅｎｔｓ． Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２８， ２３１７−２３２５ （２０１１）．
２５．Ｇｏｕｇｈ， Ｄ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ． Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＳＴＡＴ３ ｓｕｐｐｏｒｔｓ Ｒａｓ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２４， １７１３−１７１６ （２００９）．

上記の刊行物の全体の内容が、その全体が参考として本明細書中に援用される。

材料および方法
試薬。インビトロのアッセイのために、ＰＰＡＲγアゴニストはＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌから提供された（ＰＰＡＲγ−ＰＡＫ；Ｂｅｒｔｉｎ−ｐｈａｒｍａ）。イマチニブメシレートはＮｏｖａｒｔｉｓによって提供され、そして培養液中で１μＭ（患者の血漿中の達成可能な薬物レベルにもまた接近するよく確立されたインビトロの阻害濃度）で使用した。

細胞培養および増殖アッセイ。Ｋ５６２細胞（２×１０^５）は９６−ウェルプレートにおいて、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）がこれのみまたは可変の濃度のピオグリタゾンもしくはトログリタゾンとともに、補われた完全Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ培地中で培養した。細胞は１μＣｉ／ウェルの［^３Ｈ］チミジンの存在下７日間培養し、遠心分離によって回収し、そしてプレートリーダー（Ｗａｌｌａｃ １４５０ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｐｌｕｓ）上で計数した。８反復をそれぞれの条件のセットについて使用し、そして３回の独立した試験の後に結果を取得した。診断時にＣＰ−ＣＭＬであった患者からの、または臍帯血からのＣＤ３４^＋細胞は、製造元の指示に従って免疫選択した（ＣＤ３４ ｍｉｃｒｏＢｅａｄ Ｋｉｔ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）。ＣＤ３４^＋細胞の濃縮は抗−ＣＤ３４モノクローナル抗体（ｃｌｏｎｅ ５８１；ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用してフローサイトメトリーによって確認した。Ｐｈ１^＋−ＣＤ３４^＋細胞は、成長因子を含まない無血清培地（ＳＦＭ）ＳｔｅｍＳｐａｎ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。

コロニー形成細胞（ＣＦＣ）アッセイおよび長期培養開始細胞（ＬＴＣ−ＩＣ）アッセイ。ＣＦＣアッセイのために、ＣＤ３４^＋細胞を、３ｍｌのａｌｐｈａ−ＭＥＭを基礎とするメチルセルロース培地（ＧＦ Ｈ４４３４、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に懸濁した（１×１０^４）。細胞を、３７℃および５％ＣＯ_２での１４日間のインキュベーションの後、点数化し、そして回収した。点数化の後、コロニーはＰＢＳを用いて洗浄され、そしてその後の解析のためにＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で冷凍されたまま維持された。ＬＴＣ−ＩＣ限界希釈アッセイ（ＬＤＡ）を、濃度毎に１６反復ウェルを用いて、９６−ウェルプレートにおいて、ＣＤ３４^＋細胞のいくつかの希釈（Ｐｈ１^＋ＣＤ３４^＋細胞についてはウェル毎に３００、１５０、７５または３７個の細胞、そして健康な提供者からのＣＤ３４^＋についてはウェル毎に２００、１００、５０または２５個の細胞）で、放射線照射されたＭＳ５単層上、ＳｔｅｍＳｐａｎ ＳＦＥＭ培地（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で実行した。毎週２分の１の培地体積を交換しながら５週間後、全ての細胞を、ａｌｐｈａ−ＭＥＭを基礎とするメチルセルロース培地（ＧＦ Ｈ４４３４、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に移動させて、それぞれのＬＴＣについての合計のクローン原性細胞の含有量を決定した。ＬＴＣ−ＩＣの出現頻度は、Ｌ−Ｃａｌｃソフトウェア（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して決定した。

フローサイトメトリー。以下の抗体を使用した：フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−結合ＩｇＧ１（ｃｌｏｎｅ ６７９．１Ｍｃ７、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８−結合−ＩｇＧ１（ｃｌｏｎｅ ＭＯＰＣ−２１、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）−ＩｇＧ１（ｃｌｏｎｅ ＭＯＰＣ−２１、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ペリジニンクロロフィルタンパク質−シアニン５．５（ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）−結合ＩｇＧ１（ｃｌｏｎｅ Ｘ４０、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、フィコエリスリンシアニン（ＰＥ−Ｃｙ７）−結合ＩｇＧ１（ｃｌｏｎｅ ＭＯＰＣ−２１、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、（ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）−結合ＣＤ４５（ｃｌｏｎｅ ２Ｄ１、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、（ＡＰＣ）−結合ＣＤ３４（ｃｌｏｎｅ ５８１、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、（ＰＥ−Ｃｙ７）−結合ＣＤ３８（ｃｌｏｎｅ ＨＢ７、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８−結合抗−ＳＴＡＴ５（ｐＹ６９４）（ｃｌｏｎｅ ４７、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、（ＰＥ）−結合抗−ＧＬＵＴ１（ＦＡＢ１４１８Ｐ、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）。全ての試験について、細胞生存率はＳＹＴＯＸ（登録商標）Ｂｌｕｅ死細胞染色（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して評価した。

アポトーシスアッセイ。ＦＩＴＣに結合させられたアネキシンＶおよびヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ ｋｉｔ、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、製造元に従ってアポトーシス細胞を定量するために使用した。

細胞内ＳＴＡＴ５リン酸化アッセイ。簡潔に述べると、５％ＣＯ_２中３７℃で、１０％ウシ胎児血清（ＰＡＡ）のみが補われた、およびピオグリタゾン（１０μＭ）またはイマチニブ（１μＭ）とともにか、あるいはなしで１０％ウシ胎児血清（ＰＡＡ）が補われた完全Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ培地中で培養された３．１０^５／ｍｌのＫ５６２細胞は、示す通り可変な時間で収集した。細胞を、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用して固定し、そして透過処理を施し、そしてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８−抗−ホスホ−ＳＴＡＴ５ ｍＡｂ（ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ）またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８−アイソタイプ−適合対照を用いて染色して、それぞれの試験において比較を引いた蛍光（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｎｕｓ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ）を取得した。解析は、生存細胞ゲートにおいて５０，０００イベントの最小数で遂行された。薬物処理後のｐ−ＳＴＡＴ５のデルタ平均蛍光強度（ｐ−ＳＴＡＴ５ΔＭＦＩ）は以下の通り決定した：（非処理細胞ｐ−ＳＴＡＴ５のＭＦＩ−非処理細胞アイソタイプ−対照のＭＦＩ）−（薬物処理細胞ｐ−ＳＴＡＴ５のＭＦＩ−薬物処理細胞アイソタイプ−対照のＭＦＩ）。

ＣＳＦＥアッセイ。新鮮なＣＤ３４^＋濃縮細胞は、２μＭの５−（および６−）カルボキシフルオレセインジアセテートスクシニミジルジエステル（ＣＦＳＥ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて染色した。その後、成長因子を含まず、そしてピオグリタゾン（１０μＭ）またはイマチニブ（１μＭ）を含むかまたは含まないＳＦＭ ＳｔｅｍＳｐａｎ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で細胞を培養した（５．１０^５／ｍＬを播いた）。Ｃｏｌｃｅｍｉｄ（登録商標）（１００ｎｇ／ｍｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の存在下で培養した細胞を、標識後インキュベーションの間に分裂しなかった細胞によって提示される蛍光の範囲を確立するために使用した。細胞を、示すとおり可変な時間で収集し、絶対計数のためにＢＤ Ｔｒｕｃｏｕｎｔ（登録商標）チューブ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中に回収し、そして抗−ＣＤ４５および抗−ＣＤ３４を用いて標識した。その後、細胞を、２％ウシ胎児血清（ＰＡＡ）を含む１ｍＬのリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に希釈し、そして生存率のために染色した。全ての解析は、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ２ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ上で遂行した。

ＲＮＡ抽出およびＲＴ−ｑＰＣＲ解析。ＲＮＡは、ＲＮＡｑｕｅｏｕｓ−４ＰＣＲ（Ａｍｂｉｏｎ）を使用して２×１０^５個の細胞から抽出した。逆転写は、製造元の指示に従ってＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）Ｖｉｌｏ（登録商標）ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して４２℃で１時間遂行した。リアルタイムＰＣＲは、ｉＣｙｃｌｅｒサーモサイクラー（ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ）（ＣＦＸ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ）中で実行した。Ｔａｑｍａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびｉＱ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ＳＹＢＲ ＧＲＮ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）とともに使用されたプライマー対を、それぞれ表２ａおよび表２ｂ中に載せる。比較ＣＴ法（ΔΔＣＴ）を、異なる培養条件間の遺伝子発現レベルを比較するため（ＧＡＰＤＨと比較して）に使用した。

ウエスタンブロット解析。ＳＴＡＴ５タンパク質の解析のために、Ｋ５６２細胞（２．５×１０^５）を、氷上、ＲＩＰＡ溶解緩衝液中で溶解した。全細胞抽出物を、Ｌａｅｍｍｌｉ試料緩衝液中で５分間煮沸し、そして４−１２％アクリルアミドゲル（Ｎｕｐａｇｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。タンパク質を、Ｈｙｂｏｎｄ Ｎ＋フィルター（Ａｍｅｒｓｈａｍ）に移動させた。膜は以下の抗体を用いて調べた：ＳＴＡＴ５（ｓｃ−１６５６）、アクチン（ｓｃ−８４３２）およびヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（ｓｃ−２００５）（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．）。抗体結合は、増強化学発光ＥＣＬ＋（Ａｍｅｒｓｈａｍ）によって検出した。

レンチウイルスベクター生産および形質導入。ＳＴＡＴ５Ｂレンチウイルスベクター． ＳＴＡＴ５ＢをコードするｃＤＮＡをクローニングし、配列決定し（Ｇｅｎｂａｎｋ取得番号ＤＱ２６７９２６）、そして以前に記載した通りＳＩＮ−ｃＰＰＴ−ＰＧＫ−ＷＨＶレンチウイルス導入ベクターの中に挿入した。ＳＩＮ−ｃＰＰＴ−ＰＧＫ−ｅＧＦＰ−ＷＨＶレンチウイルスベクターを対照のために使用した。

ｓｈＲＮＡレンチウイルスベクター抗−ＰＰＡＲγ。ＰＰＡＲγのｍＲＮＡと対になる配列５’−ＴＧＴＴＣＣＧＴＧＡＣＡＡＴＣＴＧＴＣ−３’（Ｇｅｎｂａｎｋ受け入れ番号ＨＵＭＰＰＡＲΓＢ）を、以下のようにｓｈＲＮＡ構造中にそれぞれの末端で特有の制限部位を含むように設計し、そして合成した：

オリゴヌクレオチドをアニーリングし、そして直鎖状ｐＳｕｐｅｒプラスミドのＢｇｌＩＩおよびＸｈｏＩ部位に連結した。ＰｏｌＩＩＩ Ｈ１プロモーター（ｐｒｏｍｏｔｅｕｒ）−ｓｈＲＮＡ ＰＰＡＲγを、その後ｐＴＲＩＰレンチウイルスベクター中でサブクローニングした。ベクターは以前に記載した通り生産した。

ＢＣＲ−ＡＢＬレンチウイルスベクター。Ｋ５６２細胞からの全ＲＮＡを、ＴＲＩＺＯＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して抽出した。逆転写は、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して５０℃で１時間遂行した。２回の独立したＰＣＲは、それぞれＢＣＲ−ＡＢＬ Ｆ１、５’−ＡＴＧＧＴＧＧＡＣＣＣＧＧＴＧＧＧＣＴＴ−３’とＢＣＲ−ＡＢＬ Ｒ２８３１、５’−ＣＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＧＣＡＣＴＡＴＧＴＣＡＣＴＧ−３’およびＢＣＲ−ＡＢＬ Ｆ２６８５、５’−ＴＣＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＧＧＡ−３’とＢＣＲ−ＡＢＬ Ｒ６０９７、５’−ＣＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＧＣＡＣＴＡＴＧＴＣＡＣＴＧ−３’を使用して実行された。特定の増幅バンドをプールし、３分間で９５℃まで加熱し、そして４５分間かけて２５℃まで傾斜冷却した。アニーリング産物を、以下のプライマー対を使用するＬＡ Ｔａｑ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼ（Ｔａｋａｒａ）を用いた３回目のＰＣＲに提出した：ＢＣＲ−ＡＢＬ Ｆ１ ａｓｃ１：５’−ＡＧＧＣＧＣＧＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＣＣＣＧＧＴＧＧＧＣＴＴ−３’およびＢＣＲ−ＡＢＬ Ｒ６０９７ ｓｂｆ１：５’−ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＧＣＡＣＴＡＴＧＴＣＡＣＴＧ−３’。ＳＩＶ ＧＡＥ−ＳＳＦＶレンチウイルス導入ベクター中に挿入する前に、増幅産物を、ｐＣＲ（登録商標）−ＸＬ−ＴＯＰＯ（登録商標）プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中でサブクローニングし、続いてＤＮＡ配列決定を行った。ＳＩＶ ＧＡＥ−ＳＳＦＶ−ｅＧＦＰベクターを対照として使用した。ＳＩＶベクターは以前に記載した通り生産した。

ＣＤ３４^＋細胞形質導入。ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｔａｋａｒａ Ｓｈｕｚｏ Ｃｏ．、Ｊａｐａｎ）によってコーティングされた９６−ウェルプレートにおいて、硫酸プロタミン（４μｇ／ｍｌ）、ＳＣＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）、Ｆｌｔ−３−Ｌ（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−３（２０ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍｌ）が補われたＳｔｅｍＳｐａｎ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｆｒａｎｃｅ）中に細胞を懸濁した（１ｘ１０^６／ｍｌ）。細胞懸濁液を１６時間インキュベートした。レンチウイルスベクターをその後添加し、そして細胞懸濁液を１２時間インキュベートした。播く前に、細胞を２回洗浄した。

ｓｉＲＮＡアッセイ。ヒトＰＰＡＲγ配列５’−ＴＧＴＴＣＣＧＴＧＡＣＡＡＴＣＴＧＴＣ−３’を標的とするｓｉＲＮＡを合成した（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｐｒｏｌｉｇｏ）。ＣＤ３４^＋ＢＭ細胞に、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在下でＰＰＡＲγ特異的ｓｉＲＮＡ（２５ｎＭ）または対照ｓｉＲＮＡをトランスフェクトし、そしてＣＦＣアッセイの前に４８時間維持した。対照ｓｉＲＮＡは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した（ＢＬＯＣＫ−ｉＴ）。トランスフェクション効率は、フルオレセイン標識した２本鎖ＲＮＡ２重鎖（ＢＬＯＣＫ−ｉＴ ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＯｌｉｇｏ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して評価した。

統計的解析。培養アッセイおよび定量的リアルタイムＰＣＲのために、値は、少なくとも３回反復で実行された別々の試験の３つについての平均±標準偏差として計算した。試料および反復された試験の特定の数は図の説明文中に示す。対比較および非対比較を、それぞれノンパラメトリックＷｉｌｃｏｘｏｎ順位検定およびＭａｎｎ＆Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を使用して行った。限界希釈解析は、Ｌ−Ｃａｌｃソフトウェア（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて遂行した。全ての統計的解析は、ＳｔａｔＶｉｅｗソフトウェア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を用いて遂行した。

Ｎｅｇｒｅ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｓａｆｅ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｓｉｍｉａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ （ＳＩＶｍａｃ２５１） ｔｈａｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｔｒａｎｓｄｕｃｅ ｍａｔｕｒｅ ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ７，１６１３−１６２３（２０００）．

実施例１
Ｋ５６２細胞に対する２つの異なるＳＴＡＴ５アンタゴニストの抗増殖効果が、標的特異性の指標の一つである段階的用量反応曲線に従うことを初めて決定した（図５ａ）。特異性は、ＰＰＡＲγのｍＲＮＡに対するｓｈＲＮＡを含有することによってさらに支持され（図５ｂ）。その後、健康な提供者からの臍帯血ＣＤ３４^＋細胞に、ｐ２１０ ＢＣＲ−ＡＢＬを発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。

結果
図５は、ＰＰＡＲγを通じてＢＣＲ−ＡＢＬ発現細胞におけるＳＴＡＴ５アンタゴニストの作用の特異性を示す。ａ，７日間の［^３Ｈ］チミジンの取り込みによって評価したＫ５６２細胞の増殖に対する２つのＳＴＡＴ５アンタゴニストの用量反応曲線（３試験、それぞれ８反復）。ｂ，ピオグリタゾン（２５μＭ）への曝露があるときまたはないときの、そしてＰＰＡＲγのｍＲＮＡに対するｓｈ−ＲＮＡ（ｓｈ−ＰＰＡＲγ）のレンチウイルス媒介発現があるときまたはないときの、示差的なＫ５６２細胞増殖（３試験）。ｃ，図５ｂにおいて使用したｓｈ−ＰＰＡＲγレンチベクターの特異性の検証。ＣＤ３４^＋細胞に、無関係なまたはＰＰＡＲγを標的とするｓｉ−ＲＮＡ（それぞれ２５ｎＭ）をトランスフェクトしたか、あるいはｓｈ−ＰＰＡＲγまたはｅＧＦＰレンチベクターを形質導入した。ＰＰＡＲγの転写物をＧＡＰＤＨの転写物に対して正規化し、そして非トランスフェクト／非形質導入細胞において計測されたレベルに関して表した。

実施例２
上記のインビトロの研究から、薬理学的用量でのピオグリタゾンは、ＰＰＡＲγ／ＳＴＡＴ５経路の活性化を通じてＢｃｒ−Ａｂｌ陽性細胞株Ｋ５６２の細胞増殖を阻害することを実証した。さらなるインビトロの研究を実行し、これは、ＢＣＲ−ＡＢＬが発現されているとき、ピオグリタゾンの存在下で、コロニー形成細胞（ＣＦＣ）における減少の度合いは１．９倍大きい（ｐ＜０．００２）ということを示した（図１ａ）。ピオグリタゾンとイマチニブとを組み合わせることは、３倍（ｐ＜０．０００１）の阻害的効果をもたらした（図１ａ）。

結果
図１は、ＣＭＬ細胞に対するピオグリタゾンおよびイマチニブの示差的かつ相乗的な効果を示す。ａ，ヒト臍帯血ＣＤ３４^＋細胞におけるＢＣＲ−ＡＢＬまたはｅＧＦＰ（負の対照）のレンチウイルス媒介発現後のＣＦＣアッセイ。３回反復における３人の平均および標準偏差（ＳＤ）。ｂ，診断時の患者からのＣＤ３４^＋ＣＰ−ＣＭＬ細胞を用いたＣＦＣアッセイ。２９人の患者の平均およびＳＤ。ｃ，サイトカインを含まない無血清培地中の液体培養（７日）におけるＣＤ３４^＋ＣＰ−ＣＭＬ細胞。７人の患者、それぞれをその人の非処置対照の百分率として点数化した（表１を参照のこと）。ｄ，動態（図１ｃの患者４）。全てのＣＦＣアッセイにおいて、イマチニブおよび／またはピオグリタゾンは事前に４８時間にわたり添加していた。

実施例３
そのＣＤ３４^＋細胞が９０％より多くＰｈ１^＋であった診断時の慢性期（ＣＰ）ＣＭＬ患者２９人のコホートをテストした。観測されたクローン原性欠損は、実施例２において記載したそれと同様であったが、上記薬物の組み合わせの効果は、より明白であった（６倍、ｐ＜０．０００１）（図１ｂ）。サイトカインの非存在下でのＣＰ−ＣＭＬ ＣＤ３４^＋細胞の液体培養において、類似の傾向が観察されたが、単一の薬について低い反応を示した人および高い反応を示した人（７人の患者が試験された）がいた（図１ｃおよび表１）。しかし、イマチニブとピオグリタゾンとを組み合わせたとき、反応はより大きく、そしてより小さく分散した（図１ｃ）。

ＣＭＬのＬＳＣは、一般的に正常のヒトＨＳＣと表現型的に区別不可能であり、そして免疫不全マウス中に容易に移植可能ではない。長期培養開始細胞（ＬＴＣ−ＩＣ）アッセイは、ＣＭＬのＬＳＣの定量のために適した手法であり得る。

ＣＴＲＬ：薬物なしでの対照細胞、Ｄ３：培養における３日目、Ｄ７：培養におけるＤ７、Ｐｉｏ：ピオグリタゾン、Ｓｏｒｔ：細胞選別後の百分率、ｖｉａｂ：生存細胞、ｅｘｐ：拡大（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）。

実施例４
イマチニブ単独は、ＣＰ−ＣＭＬのＬＴＣ−ＩＣの頻度を有意に減少させることができなかった（ｐ＝０．０６７およびｐ＝０．０２）。しかし、ピオグリタゾンは、単一の薬として２．４倍（ｐ＝０．００８）だけか、またはイマチニブの存在下で相乗効果によって３．５倍（ｐ＜０．００１）だけもしくはダサチニブの存在下で相乗効果によって５倍（（ｐ＝０．００３８）だけか、のいずれかでそうすることができた（図２ａおよびｂ）。ピオグリタゾンは、静止期から出ること、そしてより大きな速度の細胞増殖を引き起こすことによって細胞周期の状態に対してイマチニブと反対の効果を有した（図２ｃ−ｅ）。さらに、ピオグリタゾンとイマチニブとを組み合わせることは、細胞周期の状態に対するイマチニブの有害な効果を大いに打消し、そしてそのために相乗的に効果的に作用して増殖細胞と非増殖細胞との両方を枯渇させた（図２ｄおよびｅ）。

結果
図２は、ピオグリタゾンによる静止期のＣＭＬのＬＳＣの除去を示す。ａおよびｂ，ＬＴＣ−ＩＣアッセイを用いた限界希釈解析（ＬＤＡ）および計算されたＬＴＣ−ＩＣ頻度。播かれたＣＤ３４^＋の数を示す。ａ，７人の患者のうちの４人について（それぞれについて１６反復）、イマチニブの存在下。ｂ，１人の患者について（１６反復）、ダサチニブの存在下。ｃ，サイトカインを含まない無血清培地中の液体培養後のＣＦＳＥ解析（患者４）。それぞれの細胞分裂数について１つの網掛けのピーク。Ｐ、コルセミド停止「親細胞」。ｄ，図２ｃにおいて示すそれぞれの分裂ピークＣＤ３４^＋細胞の分布（％）。ｅ，患者２以外は同一の培養条件、そして絶対細胞計数。左の尺度、ＣＤ３４^＋細胞対ＣＤ３４⁻細胞を示す合計細胞（ヒストグラム）。右の尺度、非分裂ＣＤ３４^＋細胞（点および線）。

細胞周期の状態は、ＣＭＬのＬＳＣの除去が効果的であり得るかどうか評価または予測するための別の基準である。ＣＦＳＥアッセイは、サイトカインを欠く液体培養においてＣＰ−ＣＭＬのＣＤ３４^＋細胞を用いて実行した（図２ｃ）。データは、百分率（図２ｄ）および一度も分裂していない（「Ｐ」）か、または所定の回数の分裂を経た細胞の絶対計数（図２ｅ）の両方として解析した。非処理対照のＣＰ−ＣＭＬのＣＤ３４^＋細胞は活発に増殖し、そして分化した。イマチニブ曝露は、活発に分裂する細胞の排除だけでなく、一度も分裂していないまたはただ一度だけ分裂した細胞の生存ＣＤ３４^＋細胞の蓄積ももたらした（非処理対照については５％であるのに対して３４％）（図２ｄ）。絶対細胞計数解析を行い、そしてこの現象が、（１）イマチニブの細胞毒性に対する静止期のＣＭＬ細胞の耐性と、（２）ＣＰ−ＣＭＬのＣＤ３４^＋細胞が静止期を出て、そしてさらなる細胞分裂を続ける速度を減少させるイマチニブの抗増殖効果と、の両方によって引き起こされ得るということを示した（図２ｅ）。

実施例５
ＣＭＬのＬＳＣに対するピオグリタゾンの活性を媒介する可能な分子経路を調査した。シグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）は考慮すべき標的であった。ＰＰＡＲγは、ＳＴＡＴ５（ＡおよびＢ）の負の転写調節因子であり得、そしてＨＩＶ感染宿主およびＳＩＶ感染宿主においてクローン原性欠損を引き起こし得る。ＳＴＡＴ５（ＡおよびＢ）は、対立遺伝子用量依存的様式においてマウスにおける正常ＨＳＣの維持およびフィットネス（ｆｉｔｎｅｓｓ）のために決定的であり得る。ＣＭＬ細胞において、ＳＴＡＴ５の活性はＢＣＲ−ＡＢＬキナーゼの活性に依存するが、ＳＴＡＴ５発現のノックダウンまたはこれのリン酸化の阻害は、インビトロでのＣＭＬ細胞のアポトーシスに対する非依存性およびサイトカイン独立性を抑制する。ＳＴＡＴ５の抑止は、そうでなければＢＣＲ−ＡＢＬのレトロウイルスの導入によってもたらされるＣＭＬ状態の開始および維持を防ぎ得る。ＳＴＡＴ５の発現レベルは、マウスモデルにおける疾患の進行の度合い、およびヒトにおける初期ＴＫＩ感受性の度合いと相関する。

結果
図３は、ＣＭＬのＬＳＣにおけるピオグリタゾンの標的としてのＰＰＡＲγ−ＳＴＡＴ５経路を示す。ａ，１０日目での図２ｅにおけるのと同様の培養。ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡに対して正規化されたＳＴＡＴ５ＢのＲＴ−ｑＰＣＲ（５複製およびＳＤ）。ｂ，ＣＤ３４^＋ＣＰ−ＣＭＬ細胞におけるＳＴＡＴ５ＢまたはｅＧＦＰレンチベクターを用いたＣＦＣアッセイ。５人の患者の平均およびＳＤ。ｃ，Ｋ５６２細胞。図３ａにおけるものと同じＲＴ−ｑＰＣＲ。ｓｉ−ＰＰＡＲγ、ＰＰＡＲγのｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ。６複製の平均およびＳＤ。ｄ，リン酸化（Ｔｙｒ６９４）ＳＴＡＴ５に対するＩｇＧを用いた透過処理の施されたＫ５６２細胞のフローサイトメトリー。非処理（黒のアウトライン（ｏｕｌｉｎｅ））および薬物処理（灰色の網掛けまたは灰色のアウトライン）。対照パネル、薬物処理ではなく無関係なＩｇＧアイソタイプ対照（灰色のピーク）。上段右、全−ＳＴＡＴ５抗体および抗−アクチン抗体を用いたウエスタンブロット解析、列４において３．２倍（正規化）のＳＴＡＴ５の減少を示す。ｅ，ＣＤ３４^＋ＣＰ−ＣＭＬ細胞におけるＳＴＡＴ５ＢまたはｅＧＦＰレンチベクターを用いたＣＦＳＥアッセイおよび図２ｅにおけるのと同様の絶対細胞計数。黒の点、非分裂ＣＤ３４^＋細胞。右のパネル、ＳＴＡＴ５Ｂレンチベクター対照。ｆ，正常のＣＤ３４^＋細胞に対比してＣＰ−ＣＭＬについて増加したピオグリタゾンの毒性を示すＬＴＣ−ＩＣ（ＬＤＡ）。

１０日間のサイトカインなしでの液体培養の後、ＣＰ−ＣＭＬ細胞において、それぞれピオグリタゾン、イマチニブおよびこれら薬物の組み合わせの存在下で８．５倍（ｐ＜０．０００１）、１．５倍（ｐ＝０．０８）そして１０．５倍（ｐ＜０．０００１）だけＳＴＡＴ５ＢのｍＲＮＡレベルが減少することを見出した（図３ａ）。同様の値がＳＴＡＴ５Ａについて取得された。レンチウイルスの導入の後にＳＴＡＴ５Ｂを過剰発現させたとき、ピオグリタゾンの存在下でのＣＰ−ＣＭＬのＣＤ３４^＋細胞のコロニー形成能の減少はなくなった（図３ｂ）。ＳＴＡＴ５ＢのｍＲＮＡレベルの減少もまたＫ５６２細胞において観測され、そしてこの効果は、ＰＰＡＲγのｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡによって打ち消された（図３ｃ）。細胞毒性の動態は、イマチニブの存在下よりもピオグリタゾン単独を用いる方が緩徐なので（図１ｄ）、ＳＴＡＴ５活性に対するこれらの示差的な作用機序を調査した。イマチニブは、ＳＴＡＴ５のリン酸化を防ぐことによって迅速に（数分で）作用する一方、ピオグリタゾンは、ＳＴＡＴ５のタンパク質レベルを減少させることによって緩徐に（数日で）作用することを発見した（図３ｄ）。ＣＦＳＥアッセイにおいて絶対細胞計数によって評価したような、ピオグリタゾンのＣＰ−ＣＭＬ細胞を静止期から引き出す特性と、細胞毒性である特性との両方は、ＳＴＡＴ５Ｂをレンチウイルスの導入によって過剰発現させたとき完全に阻害された（図３ｅ）。重要なことに、ピオグリタゾンは、正常のＬＴＣ−ＩＣに対するよりもＣＭＬのＬＴＣ−ＩＣに対しての方が阻害的／細胞毒性的であることを見出した（図３ｆ）。

実施例６
１０日間、ピオグリタゾンとともにかまたはなしかで、イマチニブに曝露させた後、ＣＭＬのＬＳＣに関係するＳＴＡＴ５および／またはＰＰＡＲΓの推定上の下流転写標的７つのｍＲＮＡ発現レベルを用いて、１０人の患者からのＣＰ−ＣＭＬのＣＤ３４^＋細胞のサイトカインなしでの培養物を検査した。これらはＳＴＡＴ３、ＳＩＲＴ１、ＧＬＵＴ１、ＯＣＴ１、ＰＭＬ１、ＭＤＲ１およびＡＬＯＸ５を含む。ＯＣＴ１のｍＲＮＡレベルだけが、イマチニブ単独と比較してピオグリタゾン＋イマチニブの存在下での培養の後、中程度に（３．７５倍；ｐ＝０．０４９）増加させられることを見出した（図６）。ＯＣＴ１発現の上方制御はイマチニブの細胞取り込みを増加させ得るが、ＣＭＬのＬＳＣは、ＢＣＲ−ＡＢＬキナーゼ活性に軽度に依存していることが公知である。

結果
図４は、ＣＭＬ患者におけるピオグリタゾン誘導ＣＭＲおよび退薬後の維持を示す。国際（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）（ＩＳ）比での患者の有核血液細胞についてのＢＣＲ−ＡＢＬ／ＡＢＬのためのＲＴ−ｑＰＣＲアッセイ。３人の患者は、様々な期間（水平方向の矢印）でｔ＝０でピオグリタゾンを受けて、継続的なイマチニブ治療（灰色のブロック）にもかかわらず３から６年の間ＢＣＲ−ＡＢＬのｍＲＮＡ^＋血液細胞が持続して存在することを示した。ピオグリタゾン処置は１８から５４か月前に停止したが、患者１は糖尿病のために短期間処置を再び続けた。患者２は１年間のＣＭＲの後に退薬した。患者３はまた６か月間分子的再発なくイマチニブ処置を停止した。全ての患者は、１２より多くの月から５６か月の間にＣＭＲ（４．５ｌｏｇ）に到達した。

患者１を、２００２年に６２歳で低ＳｏｋａｌスコアのＣＭＬと診断し、このときイマチニブを開始した（３００〜４００ｍｇ／日−血漿レベル９２４ｎｇ／ｍｌ）。１７か月の治療の後、分子遺伝学的効果を達成したが、彼女は一度もＣＭＲに到達しなかった（０．０１％と０．０４％との間のＢＣＲ−ＡＢＬ／ＡＢＬのｍＲＮＡのＩＳ比）。５年間のイマチニブ治療の後、ピオグリタゾン３０ｍｇ／日が、２００７年６月に彼女の内分泌科医によって開始された。ピオグリタゾンを２００８年４月に一時的に停止し、そして糖尿病のため２０１０年８月から２０１１年４月まで短期間再び続けた。予期せぬことに、ＣＭＲ（５ｌｏｇ）が２００８年６月に達成され、そして５６か月前からＣＭＲ（５ｌｏｇ）中に留まっている（図４）。患者２を、２００２年に６１歳で高ＳｏｋａｌスコアのＣＭＬと診断し、このときイマチニブを開始した（３００〜４００ｍｇ／日−血漿レベル３１０ｎｇ／ｍｌ）。反応の最良の分子レベルは０．０２％であった。２００８年３月に、６年間のイマチニブ治療の後、ピオグリタゾン３０ｍｇ／日を開始した。ＣＭＲ（５ｌｏｇ）を２０１０年８月に取得し、そして１２か月間維持し、そのとき彼女は退薬した（図４）。正式な臨床試験の申請を提出する前に、ピオグリタゾンを３番目のＣＭＬ患者に処方した。患者３を、２００５年に５８歳で低ＳｏｋａｌスコアのＣＭＬと診断し、このときイマチニブを開始した（４００ｍｇ／日−血漿レベル７９０ｎｇ／ｍｌ）。彼の最良のＢＣＲ−ＡＢＬ／ＡＢＬのＩＳ比は０．０１２％と０．０７％との間であった。ピオグリタゾンを、２００９年１２月に開始した（４５ｍｇ／日）。６か月間のピオグリタゾン治療の後、彼はＣＭＲ（５ｌｏｇ）に到達し、これを２０１１年４月に停止した。彼はそれ以来（合計２８か月）ＣＭＲ（５ｌｏｇ）中に留まっている（図４）。

最近の報告において、イマチニブおよび／またはインターフェロン処置の後、多くの年数（１１年より多く）の間ＣＭＲであった珍しいＣＭＬ患者から収集された骨髄ＣＤ３４^＋細胞を用いて実行したＣＦＣアッセイによってＢＣＲ−ＡＢＬのｍＲＮＡを発現する細胞が高頻度で検出された。ここで、ＢＣＲ−ＡＢＬのｍＲＮＡ発現は、ピオグリタゾンの開始の１年後にＣＭＲ（５ｌｏｇ）に到達した患者３からのＣＦＣプールにおいてＲＴ−ｑＰＣＲによって検出可能であるが、定量可能でないことが見出された。

もし２年間ＣＭＲであった患者の５０％より多くがＴＫＩを停止した１年後に再発するならば、その後の試験が、イマチニブとピオグリタゾンとの両方を中止した後に患者がＣＭＲのまま留まるかどうかを確認するために実行され得る。

前述の実施例は、ＣＭＬのＬＳＣは、マウスモデルにおいて以前提唱されたようなＳＴＡＴ５に対する「非がん遺伝子依存性（ｎｏｎ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｄｄｉｃｔｉｏｎ）」を有することを示す。これは、多くのより分化したＣＭＬ細胞におけるＳＴＡＴ５の標準的なＢＣＲ−ＡＢＬ媒介活性化とはおそらく異なる。ＣＭＬのＬＳＣは、細胞周期への移行のためにＳＴＡＴ５レベルに特に敏感であり得るか、またはＳＴＡＴ５の依然として証明されていない機能に依存し得、腫瘍形成においてＳＴＡＴ３によって担われる補助的なミトコンドリアの役割を連想させる。

実施例７
２７人の患者を臨床試験に登録し、そして２４人が評価可能であった（１人はＣＭＲ４．５なので除外し、１人の患者はＭＭＲでないので除外し、そして１人の患者は同意退薬した）。年齢の中央値は６１．６歳（２４．１〜７９）であり、そして組み入れ後の経過観察の中央値は１３か月（９．８〜２１）であった。全ての評価可能な患者は計画通りにピオグリタゾンを始めた。７人の患者（２９．２％）は１２か月の前にピオグリタゾンを中止し、有害事象のために中止した患者はいなかった。中止は３か月目と９か月目との間に起った。ピオグリタゾン治療期間の中央値は１１．２か月であり（２．６〜１５．４）、１日量の中央値は３９．９ｍｇであった。ピオグリタゾン開始の前（中央値８５０ｎｇ／ｍｌ）および後（中央値９２７ｎｇ／ｍｌ）の通しのレベル（ｔｈｒｏｕｇｈ ｌｅｖｅｌ）の面からイマチニブとピオグリタゾンとの間に相互作用は観測されなかった（ｐ＝ｎｓ）。主な有害事象は、３人の患者における体重増加およ体液貯留の悪化であった。３人の患者（１４％）では、確認された検出不可能なレベルのＢＣＲ−ＡＢＬ転写物が取得された。ＣＭＲ４．５の１年間の累積発生率は５７％であった。Ｓｔａｔ５のｍＲＮＡの定量は、ベースラインの値と比較してＭ６およびＭ１２での患者試料において有意に減少し、そしてクローン原性潜在力の減少もまたＭ６およびＭ１２での骨髄細胞において観測された。「対照患者」を同様の特徴によって集めた（ｎ＝２０）。ピオグリタゾン群における５７％と比較すると（ｐ＝０．０２）、この対照群におけるＣＭＲ４．５の累積発生率は２７％であった。

結果
図６は、ピオグリタゾンとイマチニブとの組み合わせに反応したＣＰ−ＣＭＬ細胞における標的遺伝子の発現を示す。ａ，イマチニブ単独（１μＭ）またはイマチニブおよびピオグリタゾン（それぞれ１μＭおよび１０μＭ）のいずれかによって７日間、サイトカインなしの無血清培地中でＣＰ−ＣＭＬのＣＤ３４^＋細胞を培養した。その後、ヒトＯＣＴ１、ＭＤＲ１、ＳＩＲＴ１、ＳＴＡＴ３、ＡＬＯＸ５およびＰＭＬ１に特異的なプライマーおよびプローブを用いたＲＴ−ｑＰＣＲアッセイのために細胞を処理した ＰＰＡＲγアゴニストによって上方制御されることが公知であるＣＤ３６を正の対照として使用した。結果をＧＡＰＤＨのｍＲＮＡレベルに対して正規化し、そして「イマチニブ単独」条件についてのｍＲＮＡ発現に関して表した（それぞれの評価した遺伝子について１１人の患者の平均およびＳＤ）。ｂ，ＧＬＵＴ１の細胞表面発現はフローサイトメトリーによって定量した（５人の患者の平均）。

ＰＰＡＲγ／ＳＴＡＴ５経路が、ＣＭＬ患者からのＣＤ３４^＋細胞におけるクローン原性欠損を誘発することを観測した。さらに、ＰＰＡＲγ／ＳＴＡＴ５経路の活性化は、ＣＭＬのＬＴＣ−ＩＣにおいてクローン原性および増殖性欠損もまた誘発する。その後、イマチニブが非感受性の休止期のＣＭＬ細胞の選択を誘発することを確認し、そしてこの効果はＰＰＡＲγ／ＳＴＡＴ５経路の活性化によって阻害されることを示した。

ＦＡＭ：６−カルボキシフルオレセインエステル、ＨＥＸ：ヘキサクロロフルオレセイン、ＴＡＭＲＡ：テトラメチル−６−カルボキシローダミン、ＴＡＭＲＡ：テトラメチル−６−カルボキシローダミン、ＢＨＱ１：Ｂｌａｃｋ Ｈｏｌｅ Ｑｕｅｎｃｈｅｒ、Ｃｏｎｃ：濃度。

実施例８
イマチニブと組み合わせられたとき、ＳＴＡＴ５の下方制御は、転写因子ＨＩＦ２ａの異常に高い発現を減少させ、休止期のＣＭＬ幹細胞（ＬＳＣ）の除去をもたらすことを示すために研究を実行した。ＨＩＦ２ａのｓｉＲＮＡを、単独およびイマチニブとの組み合わせで、ＣＤ３４＋幹細胞における発現を阻害するために使用した。図９に７日目での結果を示す。ＨＩＦ２ａ阻害とイマチニブとの組み合わせが幹細胞の有意な衰退を引き起こすことが示される。ＬＳＣは、ＳＴＡＴ５によって制御されるＨＩＦ２ａに依存するので、ＳＴＡＴ５阻害剤（例えば、ピオグリタゾンのようなＰＰＡＲアゴニスト）によるＨＩＦ２ａの抑制はＬＳＣの増殖を誘発し、イマチニブ治療の効果を増強する。

実施例９
ピオグリタゾンによってＳＴＡＴ５の発現を標的にすることが、インビトロで慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞のクローン原性活性に影響し、インビボで分子的反応の改善をもたらすかどうかを評価するために以下の研究を実行した。

患者および方法
予備的なインビトロの研究で、ＣＭＬ患者からのＣＤ３４^＋初代細胞の生存率とコロニー形成能とに影響を与えるピオグリタゾンの能力を試験した。クローン原性研究およびＬＴＣ−ＩＣ研究を行った。培養したＰｈ^＋−ＣＤ３４^＋細胞をｆａｃｓによって特徴付け、そしてＣＳＦＥアッセイによって解析した。ＢＣＲ−ＡＢＬおよびＳＴＡＴ５の発現をリアルタイムＰＣＲによって定量した。対照実験は、Ｓｔａｔ５およびＰＰＡＲ−γについてのレンチウイルスベクターおよびｓｉＲＮＡアッセイを使用して行った。

少なくとも３か月間は安定した１日量を用いて、少なくとも２年間、イマチニブによって処置され、そしてＣＭＲ４．５（ＢＣＲ−ＡＢＬ／ＡＢＬのＩＳ比≦０．００３２％によって定義される）を達成することなく分子遺伝学的効果があった場合、ＣＭＬ患者はＡＣＴＩＭ試験（ＥｕｄｒａＣＴ ２００９−０１１６７５−７９）に適格であった。組み入れ後、患者はイマチニブを受け（用量の変更をせず）、そして２か月間３０ｍｇ／ｄで、そしてその後１２か月間４５ｍｇ／ｄでピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ（登録商標））を始めた。ＢＣＲ−ＡＢＬ転写物のレベルを、研究期間の間３か月毎にモニタリングした。第一目的は、確認された検出不可能なレベルのＢＣＲ−ＡＢＬ転写物を達成している患者の割合であった。第二目的にはＣＭＲ４．５の累積発生率および安全性が含まれた。コンパニオン生物製剤（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃ）の研究で、イマチニブの通しのレベルと、ベースライン、６か月目および１２か月目での骨髄中のＳＴＡＴ５発現と、ベースライン、６か月目および１２か月目での骨髄単核細胞のクローン原性活性とを評価した。

結果
インビトロの研究から、初めに、薬理学的用量でのピオグリタゾンはＰＰＡＲ−γ／ＳＴＡＴ５経路の活性化を通じてＢｃｒ−Ａｂｌ陽性細胞系列Ｋ５６２の細胞増殖を阻害することが実証された。次に、ＰＰＡＲ−γ／ＳＴＡＴ５経路がＣＭＬ患者からのＣＤ３４＋細胞においてクローン原性欠損を誘発することが示された。さらに、ＰＰＡＲ−γ／ＳＴＡＴ５経路の活性化は、ＣＭＬのＬＴＣ−ＩＣにおけるクローン原性および増殖性欠損もまた誘発した。その後、イマチニブが非感受性の休止期のＣＭＬ細胞の選択を誘発することが確認され、そしてこの効果がＰＰＡＲ−γ／ＳＴＡＴ５経路の活性化によって阻害されることが示された。

２７人の患者を臨床試験に登録し、そして２４人が評価可能であった（１人はＣＭＲ４．５であると除外し、１人の患者はＭＭＲでないので除外し、そして１人の患者は同意退薬した）。年齢の中央値は６１．６歳（２４．１−７９）であり、そして組み入れ後の経過観察の中央値は１３か月（９．８−２１）であった。全ての評価可能な患者は計画通りにピオグリタゾンを始めた。７人の患者（２９．２％）は１２か月の前にピオグリタゾンを中止し、６人は膀胱がんの危険性に関するフランス保健省の警告の後に研究者の決定に従って中止し、そして１人は自身の決断の後に中止した。有害事象のために中止した患者はいなかった。中止は３か月目と９か月目との間に起った。ピオグリタゾン治療期間の中央値は１１．２か月であり（２．６−１５．４）、１日量の中央値は３９．９ｍｇであった。イマチニブのレベルは、ピオグリタゾン開始の前（中央値８５０ｎｇ／ｍｌ）および後（中央値９２７ｎｇ／ｍｌ）で有意に影響を受けず（ｐ＝ｎｓ）、相互作用のないことが示された。主な有害事象は、３人の患者における体重増加および体液貯留の悪化であった。３人の患者（１４％）では、確認された検出不可能なレベルのＢＣＲ−ＡＢＬ転写物が取得された。ＣＭＲ４．５の１年間の累積発生率は５７％であった。ＳＴＡＴ５のｍＲＮＡの定量は、ベースラインの値と比較してＭ６およびＭ１２での患者試料において有意に減少し、そしてクローン原性潜在力の減少もまたＭ６およびＭ１２での骨髄細胞において観測された。同様の特徴を有する「対照患者」を集めた（ｎ＝２０）。ピオグリタゾン群における５７％と比較すると（ｐ＝０．０２）、確認されたＣＭＲが取得された患者はおらず、そしてこの対照群におけるＣＭＲ４．５の累積発生率は２７％であった。

結論
本インビボ研究は、ＰＰＡＲ−γアゴニストがＣＭＬのＣＤ３４＋細胞におけるＳＴＡＴ５の下方制御をもたらし、そしてＣＦＣおよびＬＴＣ−ＩＣアッセイにおいてそれらのクローン原性かつ長期の潜在力を優先的に減少させるということを示した以前のインビトロの結果を拡張した。特に、本研究は、ピオグリタゾンとイマチニブとの組み合わせを用いて処置された患者の半分より多くにおいてＭＭＲを達成したことによってこれらの効果がインビボに変換できることを実証し、インビボで休止期のＣＭＬ細胞を標的とすることが可能であり得ることを示唆し、そして幹細胞プールの衰退という考えを支持した。

Claims (20)

1. 患者におけるＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質の発現により特徴付けられる白血病の再発を防ぐ方法において使用するための組み合わせ物であって：該組み合わせ物は、
   （Ａ）有効量の抗がん剤であって、ＢＣＲ−ＡＢＬのリン酸化を阻害するチロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）である抗がん剤と；
   （Ｂ）有効量のペルオキシソーム増殖剤活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニストであって、シグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）の転写を阻害するチアゾリジンジオン化合物であるＰＰＡＲγアゴニストと；
   を含み、
   該抗がん剤が、該患者における反応の安定した累積発生率が達成されるまで、ＰＰＡＲγアゴニストより前に投与されることを特徴とする、組み合わせ物。
2. 前記チアゾリジンジオン化合物が、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エングリタゾン、シグリタゾンおよびネトグリタゾンからなる群から選択される、請求項１に記載の組み合わせ物。
3. 前記チアゾリジンジオン化合物がピオグリタゾンである、請求項１または２に記載の組み合わせ物。
4. 前記患者が慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）または急性骨髄性白血病を患っている、請求項１〜３のいずれかに記載の組み合わせ物。
5. 前記ＴＫＩが、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、およびポナチニブからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の組み合わせ物。
6. 前記ＴＫＩが、イマチニブである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組み合わせ物。
7. 前記チアゾリジンジオン化合物が約１５〜６０ｍｇ／日の用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の組み合わせ物。
8. 前記チアゾリジンジオン化合物が約３０〜５０ｍｇ／日の用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の組み合わせ物。
9. 前記ＴＫＩが約３００〜８００ｍｇ／日の用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載の組み合わせ物。
10. 前記ＴＫＩが約３００〜４００ｍｇ／日の用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれかに記載の組み合わせ物。
11. 前記反応が、血液学的完全寛解（ＣＨＲ）、細胞遺伝学的大寛解（ＭＣＲ）、細胞遺伝学的完全寛解（ＣＣＲ）、分子遺伝学的効果（ＭＭＲ）および分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれかに記載の組み合わせ物。
12. 前記ＴＫＩが、前記チアゾリジンジオン化合物の投与の前に少なくとも３か月間投与されることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれかに記載の組み合わせ物。
13. 前記チアゾリジンジオン化合物が前記ＴＫＩと併用して２〜１２か月の間投与されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれかに記載の組み合わせ物。
14. 前記ＴＫＩの投与が、前記チアゾリジンジオン化合物の投与が中止された後に継続されることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれかに記載の組み合わせ物。
15. 前記ＴＫＩが、約３００〜４００ｍｇ／日の用量で投与され、前記チアゾリジンジオン化合物が前記患者に約３０〜５０ｍｇ／日の用量で投与されことを特徴とする、請求項１〜１４のいずれかに記載の組み合わせ物。
16. 前記チアゾリジンジオン化合物が、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エングリタゾン、シグリタゾンおよびネトグリタゾンからなる群から選択され、前記チアゾリジンジオン化合物が、ＣＭＲが達成されるまで約２〜１２か月間投与されることを特徴とする、請求項１５に記載の組み合わせ物。
17. 前記チアゾリジンジオン化合物が、２か月の間約３０ｍｇ／日の用量で投与され、そしてその後に合計１２か月の間約４５ｍｇ／日の用量で投与されることを特徴とする、請求項１６に記載の組み合わせ物。
18. 前記患者が、ｔ（９；２２）（ｑ３４；ｑ１１）相互転座（ｄｅｒ２２またはＰｈ＋染色体）およびＢＣＲ−ＡＢＬ融合タンパク質の発現によって特徴付けられるＣＭＬを有し、前記ＴＫＩがＢＣＲ−ＡＢＬのリン酸化を阻害し、約３００〜４００ｍｇ／日の用量で投与され、前記ＰＰＡＲγアゴニストがチアゾリジンジオン化合物であり、分子遺伝学的完全寛解（ＣＭＲ）が達成されるまで約３０〜５０ｍｇ／日の用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の組み合わせ物。
19. （ａ）前記ＴＫＩが、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、およびポナチニブからなる群から選択され、
    （ｂ）前記チアゾリジンジオン化合物が、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エングリタゾン、シグリタゾンおよびネトグリタゾンからなる群から選択される、
    請求項１〜１８のいずれかに記載の組み合わせ物。
20. 前記ＴＫＩがイマチニブであり、前記チアゾリジンジオン化合物がピオグリタゾンである、請求項１〜１９のいずれかに記載の組み合わせ物。
    

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