JP6438575B2 - ヒト免疫不全ウイルス感染に対する防御免疫を誘導するための方法および組成物 - Google Patents

ヒト免疫不全ウイルス感染に対する防御免疫を誘導するための方法および組成物 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年９月２６日に出願された米国特許仮出願第６２／０５６，０５９号の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に従う優先権の権利を主張するものである。この仮出願の開示内容は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる。
連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載
本発明は、米国立衛生研究所によって付与された助成金番号ＡＩ０７８５２６およびＡＩ０９６０４０での政府の補助を伴ってなされた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
電子形式により提出した配列表の参照
本出願は配列表を含み、配列表はＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で、ファイル名「６８８０９７−５３ＷＯ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ」、作成日は２０１５年９月１５日で４７ｋＢのサイズを有するＡＳＣＩＩ形式の配列表として電子形式により提出されている。ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で提出した本配列表は本明細書の一部を構成し、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる。
〔技術分野〕
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染に対する防御免疫を誘導するための組成物、ワクチンおよび方法に関する。特に、本発明は、１または２以上のＨＩＶのクレードによる感染に対する防御免疫を誘導するための、１または２以上のウイルス発現ベクターと単離された抗原性ポリペプチドとの異種ワクチン組合せ物に関する。
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は世界中で何百万人もの人々を冒しており、ＨＩＶの予防は、抗レトロウイルス処置が広く行き渡っている時代であっても依然として優先順位が非常に高い。米国では、米疾病対策センター（Center for Disease Control）（ＣＤＣ）により、ＨＩＶ陽性の米国在住者全体のうち、およそ５分の１は自身の状態に気づいておらず、この少数割合が、毎年の新たな感染の半数の伝染原因となっていると推計されている［２］。世界的に、迅速な診断と処置における格差がさらに大きくなっている。２０１０年の終わりでは、世界中で推定３４００万人の人々がＨＩＶを保有して生活し、２００１年から１７％上昇した。新たなＨＩＶ感染の大部分はサハラ以南のアフリカで発生し続けているが、ＣＤＣにより、米国での２００８年〜２０１１年のＨＩＶ感染の年間発生率は１００，０００人に１５〜１６人前後と安定状態が維持され、毎年、新たな感染は４０，０００例を超えると推計された。したがって、ＨＩＶ感染を予防し得るか、またはその診断前の初期の影響（例えば、腸内ＣＤ４プールの破壊［３］および高い伝染リスク［４］の両方）を鈍化させ得る安全で強力なＨＩＶワクチンを見出すことが国際保健における緊急の優先事項である。
充分に効果があるワクチンにより、強力な細胞応答と、異なるクレードのＨＩＶ−１バリアントを中和し得る広域中和抗体の両方を誘起できることが期待される。
さらに、最近の臨床試験では、Ｅｎｖ特異的非中和抗体が、サブタイプ特異的抗体の機能と関連しているいくらかの防御能を有しているかもしれないことが示されている［９］。広域中和抗体は、ウイルスエンベロープの高度に保存された領域に対して指向される。最近まで、ほとんどの抗ＨＩＶワクチンには、精製されたＨＩＶ抗原性タンパク質、例えばｇｐ１６０、ｇｐ４１またはｇｐ１２０（可溶性形態で提示される）が使用されていた。ほとんどのエンベロープ（Ｅｎｖ）タンパク質ベースの免疫原は、結合抗体を誘起するが強力な中和抗体は誘起されない単量体型のエンベロープ分子である。これは、一部において、中和抗体が、ウイルスエンベロープタンパク質の天然の三量体型の構造の３次構造的および４次構造的エピトープを認識するという事実のためである。また、ほとんどの単量体型のＥｎｖベースの免疫原では細胞媒介性応答が誘導されない。ＨＩＶ−１ Ｅｎｖの安定化三量体によりインビボでＨＩＶ−１に対する広域中和抗血清が誘導されることが報告された。例えば、ＵＳ２０１２／００４５４７２参照。
弱毒化した生ワクチン、例えば、生きた弱毒化サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）ベースのワクチン（ＳＩＶ感染の予防用）は、ヒトおよび非ヒト霊長類（ＮＨＰ）において特定のウイルス性疾患に対する効果が非常に高いことが証明されている。残念ながら、生きた弱毒化ＨＩＶに伴う安全性リスクのため、かかるストラテジーはＨＩＶヒトワクチンには適用可能ではない。
強力な細胞応答および広域中和抗体の両方を誘起するため、生きた弱毒化ウイルスワクチンの代替法として、インビボでＨＩＶ抗原性タンパク質の遺伝子を発現させるための組換えベクターが使用されている。複製不全組換えウイルスベクターの使用は、ワクチンおよび他の型の遺伝子療法で探究されている。特に、複製不全組換えアデノウイルスベクター、特にアデノウイルス血清型２および５（Ａｄ２およびＡｄ５）は、遺伝子送達用途、例えばワクチン接種のために広く研究されている。かかる複製不全Ａｄ５ベクターベースのワクチンは、さまざまな動物モデルにおいて防御免疫応答を誘起することが示されているが、ＨＩＶおよび他の病原体に対する組換えＡｄ５ベクターベースのワクチンの有用性は、ヒト集団におけるＡｄ５特異的中和抗体（ＮＡｂ）の高い血清有病率により限定的であり得る［１７］。例えば、世界中の４，３８１例の対象の血清疫学試験において、Ａｄ５ ＮＡｂ力価はほぼ普遍的であり、サハラ以南のアフリカでは高力価であり、大部分の個体がＡｄ５ ＮＡｂ力価＞２００を示すことが観察された［１４］。
ＨＩＶ−１ワクチン効果のいくつかの治験が、組換えＡｄ５ベクターベースのワクチンをベースにしたワクチンを用いて実施されている。このような試験としては、ＨＶＴＮ ５０２／ＳＴＥＰ（Ｍｅｒｃｋ Ａｄ５）、ＨＶＴＮ ５０３／Ｐｈａｍｂｉｌｉ（Ｍｅｒｃｋ Ａｄ５）、およびＨＶＴＮ ５０５（ＮＩＨ ＶＲＣ ＤＮＡ／Ａｄ５）のＨＩＶ−１ワクチン効果の治験が挙げられる。しかしながら、これらの３つのＨＩＶ−１ワクチン効果試験はすべて、非複製性のＡｄ５およびＤＮＡ／Ａｄ５ワクチンが使用され、ＨＩＶ−１感染に対する有効性は示されなかった。さらに、ＳＴＥＰ試験でＭｅｒｃｋ Ａｄ５ワクチンをワクチン接種した対象では、プラセボと比べてＨＩＶ−１感染が増大する傾向が観察された。ＨＩＶワクチンに関する複製不全ベクター、例えばアデノウイルスサブタイプ５でのこれまでの実績は期待外れであり、いくつかの有効性の治験において有益性が示されていない［５〜８］。
Ａｄ５ベクター、特にＳＴＥＰ試験［８，１０］での安全性に関する懸念により、代替的な血清型の生物学的に実質的に異なるＡｄベクターをウイルスワクチンベクターとして利用するに至った［１１〜１３］。Ａｄ５の代替的なアデノウイルス血清型の一例はアデノウイルス血清型２６（Ａｄ２６）である。Ａｄ２６は、ヒトにおいては比較的珍しいウイルスであり、任意の他の種での複製は知られていない。異なる集団でのアデノウイルスに関するいくつかの調査により、これが分離されるのはごく稀であり、分離された場合であっても、めったに症状を伴わないことが示されている。実験的免疫処置でも、同様に、重篤な感染の形跡はほとんど示されなかった。例えば、参考文献［１４］および［２７］〜［４３］を参照のこと。したがって、Ａｄ２６が健常成人において臨床症状を引き起こすという観察試験による証拠はなく、また、Ａｄ２６抗原刺激試験の実験データでも、Ａｄ２６腸管感染は症状をもたらさないことが示された［４４］。複製欠陥アデノウイルスベクターｒＡｄ２６は、このベクターを大規模に臨床等級で製造するのに適したＡｄ５ Ｅ１−相補性細胞株において高力価まで増殖され得［１１］、このベクターは、プライム−ブーストワクチンストラテジーにおいて体液性および細胞媒介性の免疫応答を誘導することが示されている［１１，２１］。別の代替例は、アデノウイルス血清型３５に由来する複製欠陥アデノウイルスベクターｒＡｄ３５である。ｒＡｄ３５ベクターは、臨床等級のワクチンの生産に適した細胞株において高力価まで増殖され［６１］、注射剤ならびに安定な吸入用粉末剤に製剤化されている［６２］。
これらの代替的アデノウイルスベクターはヒト樹状細胞の有効な形質導入を示し［６３，２２］、したがって、高いレベルの抗原の送達および提示を媒介する能力を有する。
少なくとも受容体使用、インビボ指向性、樹状細胞との相互作用、自然免疫プロフィール、適応免疫表現型、およびアカゲザルにおけるＳＩＶに対する防御的有効性の点で、Ａｄ２６はＡｄ５と生物学的に非常に異なることが証明されている［１１，１２，１５，１９〜２２］。さらに、ヒトにおける非複製性Ａｄ２６ベクターの安全性および免疫原性が実証されている（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．Ｇｏｖ ＮＣＴ０１２１５１４９）。さらに、Ａｄ５とＡｄ２６間の好都合な生物学的な差の多く、例えば、ヒトにおける低血清有病率および低い中和抗体力価がＡｄ５とＡｄ３５間にも存在している。
また、ワクシニアウイルスの複製欠損株である改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）ウイルスも、ＨＩＶ抗原性タンパク質の組換え発現のためのウイルスベクターとして使用されている。例えば、ＵＳ２０１１０１５９０３６、ＵＳ８１９７８２５などを参照のこと。ＭＶＡは、ポックスウイルス科のオルトポックスウイルス属の構成員であるワクシニアウイルスと類縁関係である。ポックスウイルスは、その細胞質内発現のため、ＣＤ８ Ｔ細胞応答の良好な誘導因子であることが知られている。しかしながら、このウイルスは一般的に、ＣＤ４ ＭＨＣクラスＩＩ拘束Ｔ細胞の生成においては不充分であると考えられている。例えば、［６４］を参照のこと。
複製不全ウイルスベクターの考えられ得る欠点の１つは、ウイルスベクターから宿主に送達される標的遺伝子の発現が、該ベクターの投与後に減少し得ることである。宿主内で複製または増殖できないため、ウイルスベクターは、遺伝子発現を増大させるために後続で使用され得る新たなコピーを全く生成させることができず、したがって、ウイルスベクターの再投与が必要とされ得る。同じアデノウイルス血清型を宿主に再投与した場合、宿主には、この特定のアデノウイルス血清型に対する中和抗体が生成され、血清型特異的抗アデノウイルス応答が生じ得る。かかる血清型特異的抗アデノウイルス応答によってウイルスベクターの有効な再投与が抑制され得、ワクチンまたは遺伝子送達媒体としての有効性が低いものとなる。
したがって、当分野において、ＨＩＶ感染に対する防御免疫を誘導するために使用され得る改善されたワクチンの必要性が存在している。かかるワクチンは好ましくは、投与するのが簡単であり、長時間作用性であり、有する有害効果が最小限のものであり得る。さらに、これは好ましくは、多種多様な循環型のＨＩＶ伝染、例えば、世界中の複数の地域で最も頻出するものに対して有効なものであり得る。
米国特許出願公開第２０１２／００４５４７２号 米国特許出願公開第２０１１０１５９０３６号 米国特許第８１９７８２５号
本発明は、一部において、単離されたＨＩＶ抗原性タンパク質と、ＨＩＶ抗原をコードしている発現ベクター、例えば複製不全ウイルスベクターとの組合せにより、１または２以上のＨＩＶのクレードに対する防御免疫の増大が誘導されるという知見に基づいている。
したがって、本発明の一般的な一態様は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するためのワクチン組合せ物であって：
（ｉ）１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物；
（ｉｉ）免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物；ならびに
（ｉｉｉ）１または２以上のさらなる抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクター
を含むものであり、
ここで、第１および第２の組成物のうち一方はプライム免疫処置のためのものであり、他方の組成物はブースト免疫処置のためのものであり、該免疫原的有効量の該さらなる発現ベクターが第２組成物に、またはプライムもしくはブースト免疫処置のための該第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在している
ワクチン組合せ物に関する。
本発明の一実施形態では、ワクチン組合せ物の単離された抗原性ポリペプチドが、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質、好ましくは、ＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含む。本発明の特定の実施形態では、単離された抗原性ポリペプチドが、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むものである。
本発明の一実施形態では、ワクチン組合せ物の１または２以上の該発現ベクターおよび１または２以上の該さらなる発現ベクターが、アデノウイルスベクター、例えばｒＡｄ２６、ｒＡｄ３５、ｒＡｄ４８、ｒＡｄ５ＨＶＲ４８ベクターなど、またはＭＶＡベクターである。本発明の特定の一実施形態では、１または２以上の該さらなる発現ベクターがワクチン組合せ物の第３組成物に存在している。
本発明の特定の実施形態では、１または２以上の該発現ベクターおよび／または１または２以上の該さらなる発現ベクターにコードされた１または２以上の抗原性ポリペプチドは、１または２以上のＨＩＶモザイク抗原、より好ましくは、１または２以上のモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原を含むものであり、より好ましくは、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むものである。本発明の他の特定の実施形態では、１または２以上の該発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターである。
本発明の好ましい一実施形態では、ワクチン組合せ物は、それぞれ配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量のｒＡｄ２６ベクターと、薬学的に許容され得る担体とを含む第１組成物；配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含む免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチドと、薬学的に許容され得る担体とを含む第２組成物；ならびに配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する４種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量のＭＶＡベクターを含む第３組成物を含むものである。
本発明の別の一般的な態様は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染に対する防御免疫応答の生成に使用するための本発明の一実施形態によるワクチン組合せ物であって、第１組成物が免疫応答をプライムするために使用され、第２組成物および該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターが免疫応答をブーストするために使用されるワクチン組合せ物に関する。
本発明の別の一般的な態様は、本発明の一実施形態によるワクチン組合せ物を含むキットに関する。
本発明のまた別の一般的な態様は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって：
（ｉ）該対象に、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物を投与すること；
（ｉｉ）該対象に、免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物を投与すること；ならびに
（ｉｉｉ）該対象に、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクターを投与すること
を含むものであり、
ここで、工程（ｉ）および（ｉｉ）はいずれかの順序で行われ、該工程のうち一方はプライム免疫処置のため、他方はブースト免疫処置のためのものであり、該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターは、第２組成物に、またはプライムもしくはブースト免疫処置のための該第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在する方法に関する。
本発明の一実施形態では、第１組成物がプライム免疫処置のためのものであり、第２組成物および該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターがブースト免疫処置のためのものである。
本発明の別の実施形態では、１または２以上の該さらなる発現ベクターが第３組成物に存在している。
本発明のさらなる一般的な一態様は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって：
（ｉ）該対象に、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むプライマーワクチンを投与すること；ならびに
（ｉｉ）免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチド、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むブースターワクチンを該対象に投与すること
を含むものであり；
ここで、該単離された抗原性ポリペプチドおよび１または２以上の該さらなる発現ベクターは同じ組成物または別々の組成物に存在しており；該ブースターワクチンは、該プライマーワクチンが投与された後に投与される方法に関する。
本発明の好ましい一実施形態では、プライマーワクチンとブースターワクチンの一方または両方が、免疫応答をさらに誘導するために１回または多数回、再投与され、ここで、プライマーワクチンは、その初期投与後だがブースターワクチンが最初に投与される前に再投与される。
本発明の好ましい一実施形態では、単離された抗原性タンパク質はＨＩＶエンベロープ糖タンパク質、より好ましくは安定化ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質、例えば安定化ＨＩＶ ｇｐ１４０三量体タンパク質または安定化モザイクｇｐ１４０三量体タンパク質であり、なおより好ましくは、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むものである。
本発明の別の好ましい実施形態では、１または２以上の該発現ベクターおよび／または１または２以上の該さらなる発現ベクターが、１または２以上のＨＩＶモザイク抗原、より好ましくは１または２以上のモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原をコードしているものであり、なおより好ましくは、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原をコードしているものである。
本発明のまた別の好ましい実施形態では、１または２以上の該発現ベクターまたはさらなる発現ベクターが、アデノウイルスベクター、例えばｒＡｄ２６、ｒＡｄ３５、ｒＡｄ４８、ｒＡｄ５ＨＶＲ４８ベクターまたはＭＶＡベクターである。より好ましくは、プライム免疫処置に使用される１または２以上の該ベクターは、ブースト免疫処置に使用されるものと異なる型のウイルスに由来するものである。例えば、アデノウイルスベクター、例えばｒＡｄ２６またはｒＡｄ３５ベクターがプライム免疫処置に使用される場合、ＭＶＡベクターは、ブースト免疫処置のための単離されたＨＩＶ抗原性タンパク質と一緒に使用される。
本発明の一実施形態では、１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがＭＶＡベクターである。別の実施形態では、１または２以上の該発現ベクターがＭＶＡベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターである。また別の実施形態では、１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターもまたｒＡｄ２６ベクターである。
本発明の特定の一実施形態では、プライム免疫処置に使用される組成物が、それぞれ配列番号：１、３および４のアミノ酸配列を含む１または２以上の抗原性タンパク質をコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；ブースト免疫処置に使用される１または２以上の該組成物が、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含む単離されたタンパク質と、それぞれ配列番号：１〜４のアミノ酸配列を有する１または２以上の抗原性タンパク質をコードしているＭＶＡベクターとを含むものである。最も好ましくは、ＭＶＡベクターが第３組成物に存在している。
前述の概要、ならびに以下の本発明の詳細説明は、添付の図面と併せて読むと、よりよく理解されよう。本発明は、図面に示した厳密な実施形態に限定されないことは理解されよう。
図１Ａおよび１Ｂは、異なるワクチン組合せ物でワクチン接種したアカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）（ＮＨＰ）から、プライマーワクチンの初期投与後２８週目および５６週目に採取した血清試料でのクレードＣ ｇｐ１４０エンベロープ（Ｅｎｖ）タンパク質およびモザイクエンベロープ（Ｅｎｖ）タンパク質の酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）の結果を示す；ｌｏｇ１０に変換したＥＣ９０ ＥＬＩＳＡ力価を示しており、記号は個々の試験動物での力価を表す；横線は群の幾何平均力価を示し、点線は検出下限を表す；図１Ａ：２８週目のクレードＣ ｇｐ１４０ ＥｎｖおよびモザイクＥｎｖのＥＬＩＳＡ力価；図１Ｂ：５６週目のクレードＣ ｇｐ１４０ ＥｎｖおよびモザイクＥｎｖのＥＬＩＳＡ力価。 図２は、ビオチン化クレードＣ ＥｎｖおよびモザイクＥｎｖ抗原を用いてワクチン接種したＮＨＰから２８週目に採取した血清試料から精製した免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体での抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイの結果を示す；個々の動物の貪食応答スコアを示す；記号は個々の試験動物のスコア値を表し、灰色のカラムは群の幾何平均力価を示す。 図３は、ティア（tier）１ Ｅｎｖ ＨＩＶ−１偽（sham）ウイルスに対するＴＺＭ−ｂ１細胞におけるワクチン接種したＮＨＰから５６週目に採取した血清試料での中和抗体（ｎＡｂ）アッセイの結果を示す；試験するティア１ Ｅｎｖ ＨＩＶ−１偽ウイルスには、ＭＷ９６５．２６（クレードＣ）、ＳＦ１６２．ＬＳ（クレードＢ）、ＭＮ−３（クレードＡ）、ＤＪ２６３．８（クレードＡ）およびＢａＬ．２６（クレードＢ）を含めた；記号は、個々の動物のｌｏｇ１０に変換したＩＤ５０（感染値量中央値）力価を表し、群の幾何平均力価を横線で示している。 図４は、包括的（global）潜在的Ｔ細胞エピトープ（ＰＴＥ）ペプチドプールを用いてワクチン接種したＮＨＰから５４週目に採取した試料でのＩＦＮ−γ酵素結合イムノスポット（Immunospot）（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイの結果を示す；結果は、１０６末梢血単核球（ＰＢＭＣ）あたりの平均スポット形成単位（ＳＦＵ）として示している；記号は個々の動物の値を表す；横線は群の幾何平均値を示し、点線は、検出下限の閾値を表す。
種々の刊行物、論文および特許を背景および本明細書の至る箇所に引用または記載している；これらの参考文献の各々は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に含めた文献、法令、物質、デバイス、論文などの論考は、本発明での状況を示す目的のためのものである。かかる論考は、これらのもののいずれかまたはすべてが、開示した、または請求項に記載の任意の発明に関する先行技術の一部を構成しているという是認ではない。
特に定義していない限り、本明細書で用いる科学技術用語はすべて、本発明が関する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。そうでなければ、本明細書で用いる一部の特定の用語は、本明細書に示した意味を有する。本明細書において引用した特許、公開特許出願および刊行物はすべて、引用により、あたかも本明細書に完全に示されているかのように組み込まれる。
本明細書で用いる場合、および添付の特許請求の範囲において、単数形「a」、「an」および「the」は本文中にそうでないことを明示していない限り、複数の言及を包含していることに注意されたい。
特に記載のない限り、一連の要素の前に示される用語「少なくとも」は、該一連の要素のどれもを示していると理解されたい。当業者には、常套的な範囲内の実験手法を用いて、本明細書に記載の発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物が認識されるか、または確認できよう。かかる均等物は、本発明に包含されることを意図する。
本明細書および以下の特許請求の範囲全体を通して、文脈からそうでないことが求められない限り、文言「comprise（〜を含む）」ならびに変化形、例えば「comprises」および「comprising」は、記載の整数もしくは工程または整数もしくは工程の群を含むが、任意の他の整数もしくは工程または整数もしくは工程の群を排除しないことを含意していることは理解されよう。本明細書で用いる場合、用語「comprising」は、用語「containing（〜を含む／含有する）」もしくは「including（〜を含む）」または場合によっては、本明細書で用いる場合は用語「having（〜を有する）」と置き換えられ得る。
本明細書で用いる場合、「consisting of（〜からなる）」は、請求項の要素に明記されていない任意の要素、工程または成分を排除する。本明細書で用いる場合、「consisting essentially of（本質的に〜からなる）」は、請求項の基本的で新規な特性に実質的に影響しない物質または工程は排除しない。前述の用語「comprising」、「containing」、「including」および「having」はいずれも、本発明の態様または実施形態の状況において本明細書で用いる場合はいつでも、本開示の範囲を多様化するために用語「consisting of」または「consisting essentially of」で置き換えられ得る。
本明細書で用いる場合、記載の複数の要素間の接続用語「および／または」は、個々の選択肢と組み合わせた選択肢の両方を包含していると理解されたい。例えば、２つの要素が「および／または」で結合されている場合、第１選択肢は、第２要素なしでの第１要素の適用性をいう。第２選択肢は、第１要素なしでの第２要素の適用性をいう。第３選択肢は、第１要素と第２要素の一緒の適用性をいう。これらの選択肢の任意の１つがこの意味の範囲に含まれ、したがって、本明細書で用いる場合の用語「および／または」の要件を満たすと理解されたい。また、これらの選択肢の１つより多くの同時適用性もこの意味の範囲に含まれ、したがって、用語「および／または」の要件を満たすと理解されたい。
本明細書で用いる場合、「対象」は、本発明の一実施形態による方法によって処置されるか、または処置された任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。用語「哺乳動物」は、本明細書で用いる場合、任意の哺乳動物を包含している。哺乳動物の例としては、限定されないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）、例えばサルまたは類人猿、ヒトなど、より好ましくはヒトが挙げられる。
本明細書で用いる場合、用語「防御免疫」または「防御免疫応答」は、ワクチン接種された対象が、このワクチン接種を行った対象の病原性因子による感染を防除できることを意味する。通常、「防御免疫応答」が発現されている対象は、軽度から中等度の臨床症状を発現するにすぎないか、または症状を全く発現しない。通常、ある特定の因子に対する「防御免疫応答」または「防御免疫」を有する対象は、前記因子による感染の結果として死亡することはない。
「アデノウイルスカプシドタンパク質」は、具体的なアデノウイルスの血清型および／または指向性の決定に関与しているアデノウイルス（例えば、Ａｄ２６、Ａｄ３５、ｒＡｄ４８、ｒＡｄ５ＨＶＲ４８ベクター）のカプシドのタンパク質をいう。アデノウイルスのカプシドタンパク質としては典型的には、突起（fiber）、ペントンおよび／またはヘキソンタンパク質が挙げられる。本明細書で用いる場合、具体的なアデノウイルスの「カプシドタンパク質」、例えば「Ａｄ２６カプシドタンパク質」または「Ａｄ３５カプシドタンパク質」は、例えばＡｄ２６またはＡｄ３５カプシドタンパク質の少なくとも一部分を含むキメラカプシドタンパク質であり得る。一部の特定の実施形態では、カプシドタンパク質はＡｄ２６またはＡｄ３５のカプシドタンパク質全体である。一部の特定の実施形態では、ヘキソン、ペントンおよび突起がＡｄ２６またはＡｄ３５のものである。
本明細書で用いる場合、用語「共送達」または「〜と一緒に投与される」は、２つの成分、例えばウイルス発現ベクターと単離された抗原性ポリペプチドの同時投与をいう。「同時投与」は、２つの成分の少なくとも同日内の投与であり得る。２つの成分が「〜と一緒に投与される」場合、これらは、別々の組成物で短期間、例えば２４、２０、１６、１２、８もしくは４時間内あるいは１時間以内に逐次投与され得るか、または単一の組成物で同時に投与され得る。
用語「アジュバント」および「免疫刺激剤」は、本明細書において互換的に用いており、免疫機構の刺激を引き起こす１または２以上の物質と定義する。これに関連して、アジュバントは、本発明の発現ベクターおよび抗原性ポリペプチド、例えば本発明のアデノウイルスベクター、ＭＶＡベクター、および／または抗原性ＨＩＶ抗原性ポリペプチドに対する免疫応答を向上させるために使用される。
本明細書で用いる場合、用語「感染」は、宿主への疾患原因因子による侵入をいう。疾患原因因子は、宿主に侵入し、該宿主内で複製または増殖し得る場合、「感染性」であるとみなされる。感染性因子の例としては、ウイルス、例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）および特定のアデノウイルス種、プリオン、細菌、真菌、原虫などが挙げられる。
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、レトロウイルス科の一部であるレンチウイルス属の構成員である。２つの種のＨＩＶ：ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２がヒトに感染する。ＨＩＶ−１は、最も一般的なＨＩＶウイルス株であり、ＨＩＶ−２よりも病原性であることが知られている。本明細書で用いる場合、用語「ヒト免疫不全ウイルス」および「ＨＩＶ」は、限定されないがＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２をいう。一部の特定の例示的な実施形態では、本明細書に記載のエンベロープタンパク質は、認知されているレンチウイルスの５つの血清群：霊長類（例えば、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ））；ヒツジおよびヤギ（例えば、ビスナウイルス、山羊関節炎脳脊髄炎ウイルス）；ウマ（ウマ伝染性貧血ウイルス）；ネコ（例えば、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ））；およびウシ（例えば、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ））のいずれかに存在するものをいう（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅｓの説明を参照のこと）。
ＨＩＶは、高度な遺伝的多様性を有する複数のクレードに分類される。本明細書で用いる場合、用語「ＨＩＶクレード」または「ＨＩＶサブタイプ」は、遺伝的類似性の度合に従って分類された関連するヒト免疫不全ウイルスをいう。現在、３つのグループのＨＩＶ−１分離菌：Ｍ、ＮおよびＯが存在している。グループＭ（主系統）は、少なくとも１０個のクレードＡ〜Ｊからなる。グループＯ（分類外系統）は、同様の数のクレードからなるものであり得る。グループＮは、グループＭまたはＯのいずれにも分類されていない新型のＨＩＶ−１分離菌である。一部の特定の例示的な実施形態では、本明細書に記載の広域中和抗体は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１以上のクレードおよび／または２もしくは３以上のグループのＨＩＶを認識して、それらに対する免疫応答を起こすものである。
本発明において、異種プライム−ブースト組合せ物、特に、１または２以上のＨＩＶ抗原性タンパク質をコードしている発現ベクター、例えばｒＡｄ２６でプライムし、続いて、単離されたＨＩＶ抗原性タンパク質、例えばＨＩＶエンベロープ糖タンパク質でブーストし、好ましくは、１または２以上のＨＩＶ抗原性タンパク質をコードしているｒＡｄ２６またはＭＶＡでさらにブーストすると、１または２以上のサブタイプのＨＩＶに対する防御免疫応答の生成に驚くほど有効であることが見出された。
ＨＩＶ抗原性タンパク質
本明細書で用いる場合、用語「ＨＩＶの抗原性ポリペプチド」、「ＨＩＶ抗原性ポリペプチド」、「ＨＩＶ抗原性タンパク質」、「ＨＩＶ免疫原性ポリペプチド」または「ＨＩＶ免疫原」は、ＨＩＶに対する免疫応答、例えば体液性および／または細胞性の媒介性応答を、それを必要とする対象において誘導し得るポリペプチドをいう。抗原性ポリペプチドは、ＨＩＶに対して、免疫応答を、それを必要とする対象において誘導し得るか、または免疫、例えば防御免疫を、それを必要とする対象において生じ得るＨＩＶのタンパク質、その断片もしくはエピトープ、または複数種のＨＩＶタンパク質もしくはその一部分の組合せであり得る。
好ましくは、抗原性ポリペプチドは、宿主において、対象をウイルス性疾患またはウイルス感染から防御する防御免疫応答を起こし得る、例えばウイルス性疾患もしくはウイルス感染に対する免疫応答を誘導し得る、および／または対象においてウイルス性疾患もしくはウイルス感染に対する免疫を生じさせ得る（すなわち、ワクチン接種される）ものである。例えば、抗原性ポリペプチドには、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）またはＨＩＶのタンパク質またはその断片、例えばＨＩＶまたはＳＩＶのエンベロープｇｐ１６０タンパク質、ＨＩＶまたはＳＩＶのマトリックス／カプシドタンパク質、ならびにＨＩＶまたはＳＩＶのｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子産物が包含され得る。
本発明の実施形態によれば、抗原性ポリペプチドはＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２抗原またはその断片であり得る。ＨＩＶ抗原の例としては、限定されないが、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ遺伝子産物（これらは、構造タンパク質および必須酵素をコードしている）が挙げられる。ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ遺伝子産物はポリタンパク質として合成され、これはさらに、複数種の他のタンパク質産物にプロセッシングされる。ｇａｇ遺伝子の一次タンパク質産物はウイルスの構造タンパク質ｇａｇポリタンパク質であり、これはさらに、ＭＡ、ＣＡ、ＳＰ１、ＮＣ、ＳＰ２およびＰ６タンパク質産物にプロセッシングされる。ｐｏｌ遺伝子は、ウイルスの酵素（Ｐｏｌ，ポリメラーゼ）をコードしており、一次タンパク質産物はさらに、ＲＴ、ＲＮａｓｅ Ｈ、ＩＮおよびＰＲタンパク質産物にプロセッシングされる。ｅｎｖ遺伝子は、構造タンパク質、具体的にはビリオンエンベロープの糖タンパク質をコードしている。ｅｎｖ遺伝子の一次タンパク質産物はｇｐ１６０であり、これはさらにｇｐ１２０およびｇｐ４１にプロセッシングされる。ＨＩＶ抗原の他の例としては、遺伝子調節タンパク質ＴａｔおよびＲｅｖ；アクセサリータンパク質Ｎｅｆ、Ｖｐｒ、ＶｉｆおよびＶｐｕ；カプシドタンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質、ならびにｐ２４ウイルスタンパク質が挙げられる。本発明による異種核酸配列は、任意のＨＩＶ抗原をコードしているものであり得、好ましくは、ｇａｇ、ｅｎｖおよび／またはｐｏｌ遺伝子産物あるいはその一部分をコードしているものである。
好ましい一実施形態によれば、抗原性ポリペプチドは、ＨＩＶのＧａｇ、ＥｎｖもしくはＰｏｌ抗原またはその任意の一部分もしくは組合せ、より好ましくは、ＨＩＶ−１のＧａｇ、ＥｎｖもしくはＰｏｌ抗原またはその任意の一部分もしくは組合せを含むものである。
別の好ましい実施形態によれば、抗原性ポリペプチドまたは本発明によるベクターにコードされたペプチドはモザイクＨＩＶ抗原である。本明細書で用いる場合、「モザイク抗原」は、天然配列の断片からアセンブルされる組換えタンパク質をいう。「モザイク抗原」を、遺伝的アルゴリズムを用いてコンピューテーションによって生成および最適化してもよい。モザイク抗原は、天然抗原と類似しているが、天然配列にみられる潜在的Ｔ細胞エピトープの適用範囲が最大限となり、それにより免疫応答の幅および適用範囲が改善されるように最適化されている。
本発明によるモザイクＨＩＶ抗原は、好ましくはモザイクＧａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原、より好ましくはモザイクＨＩＶ−１ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原である。本明細書で用いる場合、「モザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原」は具体的には、ＨＩＶのＧａｇ、ＰｏｌおよびＥｎｖポリタンパク質配列のうちの１または２以上に由来する複数種のエピトープを含むモザイク抗原をいう。本発明によるモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原のエピトープ配列は、天然ＨＩＶ抗原の配列と類似しているが、流行型のＨＩＶ配列にみられるエピトープの適用範囲が改善されるようにＴ細胞エピトープの考えられ得る広範なアレイが提示されるように最適化されている。
例えば、潜在的Ｔ細胞エピトープの最大限の適用範囲を得るため、モザイクＧａｇ、ＰｏｌおよびＥｎｖ抗原は、１または２以上のＨＩＶクレードの至適適用範囲が得られるように設計される。実際のタンパク質と類似し、ワクチン候補とグローバルデータベース間の９量体配列のマッチ数が最大限になる９個の連続するアミノ酸（９量体）の断片のインシリコ組換え配列の配列データベースが選択される。モザイクＧａｇ、ＰｏｌおよびＥｎｖ抗原は、天然抗原と同様のドメイン構造を有し、完全に天然配列からなり、人工的な接合部がないものである。Ｐｏｌ抗原は、触媒活性を消失させる変異型を含むものであってもよい。単量体型Ｅｎｖ ｇｐ１４０モザイク抗原は、切断および融合活性を消失させる点変異を含むものであってもよい。
一実施形態では、本発明によるモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原は、ｇａｇ遺伝子産物の配列に由来するエピトープを有するモザイクＨＩＶ Ｇａｇ抗原；ｐｏｌ遺伝子産物の配列に由来するエピトープを有するモザイクＨＩＶ Ｐｏｌ抗原；またはｅｎｖ遺伝子産物の配列に由来するエピトープを有するモザイクＨＩＶ Ｅｎｖ抗原である。
別の実施形態では、本発明によるモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、および／またはｅｎｖ遺伝子産物の配列に由来するエピトープの組合せを含むものである。実例としての非限定的な例としては、ｅｎｖおよびｐｏｌの遺伝子産物の配列に由来するエピトープを有するモザイクＥｎｖ−Ｐｏｌ抗原；ｅｎｖおよびｇａｇの遺伝子産物の配列に由来するエピトープを有するモザイクＥｎｖ−Ｇａｇ抗原；ｇａｇおよびｐｏｌの遺伝子産物の配列に由来するエピトープを有するモザイクＧａｇ−Ｐｏｌ抗原；ならびにｇａｇおよびｅｎｖの遺伝子産物の配列に由来するエピトープを有するモザイクＧａｇ−Ｅｎｖ抗原が挙げられる。
また別の実施形態では、本発明によるモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原は、１または２以上のクレードのｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖの遺伝子産物の配列に由来するエピトープの組合せを含むものである。
モザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原の例としては、例えばＵＳ２０１２００７６８１２、Barouch et al.,Nat Med 2010,16:319-323［５４］；Barouch et al.,Cell 155:1-9,2013［６５］（これらはすべて、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のものが挙げられる。
好ましくは、モザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原としては、限定されないが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む抗原が挙げられる。
本開示に鑑みると、モザイクＨＩＶ抗原は、当分野で公知の方法を用いて調製され得る。例えば、ＵＳ２０１２００７６８１２、Fischer et al,Nat Med,2007.13(1):p.100-6［５３］；Barouch et al.,Nat Med 2010,16:319-323［５４］（これらはすべて、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
エンベロープ糖タンパク質
本明細書で用いる場合、用語「エンベロープ糖タンパク質」、「ｅｎｖ糖タンパク質」および「Ｅｎｖ」の各々は、限定されないが、ＨＩＶビリオンのエンベロープの表面上およびＨＩＶ感染細胞の原形質膜の表面上に発現される糖タンパク質、またはＨＩＶに対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導し得るか、もしくは免疫を、それを必要とする対象において生じさせ得るその断片をいう。
ｅｎｖ遺伝子はｇｐ１６０をコードしており、これはｇｐ１２０とｇｐ４１にタンパク質分解的に切断される。より具体的には、ｇｐ１６０は（ｇｐ１６０）３に三量体化し、次いで、２つの非共有結合的会合断片ｇｐ１２０およびｇｐ４１への切断を受ける。続いて、ウイルスの侵入が、ｇｐ１２０／ｇｐ４１ヘテロ二量体の三量体によって媒介される。ｇｐ１２０は受容体結合断片であり、標的細胞上のＣＤ４受容体に結合する（標的細胞は、かかる受容体を有するもの、例えばＴ−ヘルパー細胞などである）。ｇｐ４１は、ｇｐ１２０に非共有結合しており、融合断片であり、ＨＩＶが細胞に侵入する第２工程を提供する。ｇｐ４１は、最初はウイルスエンベロープ内に埋もれているが、ｇｐ１２０がＣＤ４受容体に結合すると、ｇｐ１２０のコンホメーションが変化してｇｐ４１が露出状態になることが引き起こされ、このとき、宿主細胞との融合が補助され得る。ｇｐ１４０は、天然状態の切断型ウイルススパイクのサロゲートとして使用されている三量体型ｇｐ１６０、すなわち（ｇｐ１６０）３の未切断型エクトドメインである。
本発明の一実施形態によれば、ｅｎｖ糖タンパク質（例えば、ｇｐ１６０、ｇｐ１４０、ｇｐ１２０またはｇｐ４１）、好ましくは、安定化された三量体型ｇｐ１４０タンパク質が、発現ベクター単独によって誘導される免疫を向上させるためのプライムまたはブースト免疫処置のために投与され得る。
本明細書で用いる場合、用語「安定化された三量体型ｇｐ１４０タンパク質」および「ｇｐ１４０の安定化三量体」の各々は、ｇｐ１４０ポリペプチドの三量体であって、該三量体型の構造の安定性を増大させるポリペプチド配列を含んでいるものをいう。ｇｐ１４０ポリペプチドは、ｇｐ１４０の三量体を安定化させる三量体化ドメインを有するものであり得るか、または該三量体化ドメインを含むように修飾されたものであり得る。三量体化ドメインの例としては、限定されないが、Ｔ４−フィブリチン「フォルドン」三量体化ドメイン；ＧＣＮ４に由来するコイルドコイル三量体化ドメイン［６６］；および三量体タグとしての大腸菌アスパラギン酸カルバモイルトランスフェラーゼの触媒性サブユニット［６７］が挙げられる。
本発明の特定の一実施形態では、安定化三量体型ｇｐ１４０タンパク質が配列番号：５のアミノ酸配列を含むものである。
本発明の一実施形態によれば、安定化三量体型ｇｐ１４０タンパク質は、ブースト免疫処置として、またはブースト免疫処置の一成分としてウイルス発現ベクターと一緒に投与され得る。好ましくは、安定化三量体型ｇｐ１４０タンパク質は、クレードＣまたはクレードＡのｇｐ１４０タンパク質、より好ましくはクレードＣのｇｐ１４０タンパク質である。クレードＣの三量体型ｇｐ１４０タンパク質は、モルモットにおいて異なる中和感受性を有する異なるクレードの一組のＨＩＶ−１バリアントに対して強力な中和抗体応答を誘導し得るものである［６８，６０］。
本発明の別の実施形態によれば、「エンベロープ糖タンパク質」は、１または２以上のＨＩＶクレードの１または２以上のＥｎｖポリタンパク質配列に由来する複数種のエピトープを含むモザイクエンベロープタンパク質である。例えば、本明細書で用いる場合、「ｇｐ１４０タンパク質」は、１または２以上のＨＩＶクレードの１または２以上のｇｐ１４０タンパク質配列に由来する複数種のエピトープを含む「モザイクｇｐ１４０タンパク質」であり得る。
本発明の特定の一実施形態では、モザイクｇｐ１４０タンパク質は、配列番号：６のアミノ酸配列を含むモザイクｇｐ１４０の安定化三量体である。
単離されたｇｐ１４０タンパク質は、アデノウイルス発現ベクターまたはＭＶＡ発現ベクターと共送達され得る。好ましい一実施形態によれば、ｇｐ１４０タンパク質とＡｄ２６またはＭＶＡは、２つの相違する製剤として別々に投与されるか、または単一の製剤で一緒に投与される。同時投与または共送達は１時間以内または同日内に同時に行われ得る。さらに、ｇｐ１４０タンパク質をアジュバント含有製剤で投与してもよい。好適なアジュバントは、例えばリン酸アルミニウムまたはサポニンベースのアジュバントであり得る。
抗原性ポリペプチドは、本開示に鑑みて当分野で公知の任意の方法を用いて調製および単離され得る。例えば、抗原性ポリペプチドを宿主細胞により、好ましくは、該抗原性ポリペプチドの産生のために最適化された組換え宿主細胞により発現させてもよい。本発明の一実施形態によれば、切断および融合活性を消失させる変異を含むｇｐ１４０タンパク質、好ましくは、対象（例えば、ヒト）に免疫処置すると（例えば、本発明の組成物、例えば本発明のワクチンに組み込んだ場合に）生成する抗ウイルス免疫応答（例えば、細胞性または体液性免疫応答）の幅、強度、深さまたは持続期間の増大を有する最適化されたｇｐ１４０タンパク質を発現させるための組換え遺伝子が使用される。また、最適化されたｇｐ１４０タンパク質は、切断部位変異（１つもしくは複数）、第Ｘａ因子部位および／またはフォルドン三量体化ドメインを含むものであり得る。最大限のタンパク質発現のために、リーダー／シグナル配列を、最適化されたｇｐ１４０タンパク質のＮ末端に作動可能に連結させてもよい。リーダー／シグナル配列は通常、小胞体ルーメン内への輸送中に、生成中のポリペプチドから切断される。対象とする宿主細胞に適した任意のリーダー／シグナル配列が使用され得る。例示的なリーダー／シグナル配列は配列番号：７のアミノ酸配列を含むものである。
本発明の好ましい一実施形態では、単離された抗原性ポリペプチドは、Nkolola et al 2010,J.Virology 84(7):3270-3279［６８］；Kovacs et al,PNAS 2012,109(30):12111-6［６０］、ＷＯ２０１０／０４２９４２およびＷＯ２０１４／１０７７４４（これらはすべて、引用によりその全体が組み込まれる）に記載のもののような安定化三量体型ｇｐ１４０である。
アデノウイルス
本発明によるアデノウイルスはアデノウイルス科に属しており、好ましくは、マストアデノウイルス属に属するものである。これはヒトアデノウイルスであり得るが、また、他の種に感染するアデノウイルス、例えば限定されないが、ウシアデノウイルス（例えば、ウシアデノウイルス３，ＢＡｄＶ３）、イヌアデノウイルス（例えば、ＣＡｄＶ２）、ブタアデノウイルス（例えば、ＰＡｄＶ３もしくは５）またはサル（simian）アデノウイルス（これには、サル（monkey）アデノウイルスおよび類人猿アデノウイルス、例えばチンパンジーアデノウイルスもしくはゴリラアデノウイルスが包含される）であってもよい。好ましくは、アデノウイルスは、ヒトアデノウイルス（ＨＡｄＶもしくはＡｄＨｕ）またはサル（simian）アデノウイルス、例えばチンパンジーもしくはゴリラアデノウイルス（ＣｈＡｄ、ＡｄＣｈもしくはＳＡｄＶ）である。本発明において、種の表示なしでＡｄと称する場合はヒトアデノウイルスを意図しており、例えば短い表記「Ａｄ５」は、ヒトアデノウイルス血清型５であるＨＡｄＶ５と同じものを意味する。また、本明細書で用いる場合、表記「ｒＡｄ」は組換えアデノウイルスを意味し、例えば「ｒＡｄ２６」は組換えヒトアデノウイルス２６をいう。
ヒトアデノウイルスを用いて非常に高度な研究が実施されており、本発明の一部の特定の態様によればヒトアデノウイルスが好ましい。一部の特定の好ましい実施形態では、本発明による組換えアデノウイルスはヒトアデノウイルスをベースにしたものである。好ましい実施形態では、組換えアデノウイルスは、ヒトアデノウイルス血清型５、１１、２６、３４、３５、４８、４９、５０、５２などをベースにしたものである。本発明の特に好ましい一実施形態によれば、アデノウイルスは、血清型２６または３５のうちの一方のヒトアデノウイルスである。これらの血清型の利点の１つは、ヒト集団における低い血清有病率および／または低い先在中和抗体力価である。ｒＡｄ２６ベクターの調製は、例えばＷＯ２００７／１０４７９２およびAbbink et al．,（2007）Virol 81（9）：4654-63［１１］（これらはともに、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。Ａｄ２６の例示的なゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ＥＦ １５３４７４およびＷＯ２００７／１０４７９２の配列番号：１を見るとよい。ｒＡｄ３５ベクターの調製は、例えば米国特許第７，２７０，８１１号、ＷＯ００／７００７１およびVogels et al．,（2003）J Virol 77（15）：8263-71［１２］（これらはすべて、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。Ａｄ３５の例示的なゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ＡＣ＿００００１９およびＷＯ００／７００７１の図６を見るとよい。
また、サルアデノウイルスも一般的には、ヒト集団において低い血清有病率および／または低い先在中和抗体力価を有し、チンパンジーアデノウイルスベクターを用いた相当な量の研究が報告されている（例えば、ＵＳ６０８３７１６；ＷＯ２００５／０７１０９３；ＷＯ２０１０／０８６１８９；ＷＯ２０１００８５９８４；Farina et al，2001，J Virol 75：11603-13［13］；Cohen et al，2002，J Gen Virol 83：151-55［69］；Kobinger et al，2006，Virology 346：394-401［70］；Tatsis et al．，2007，Molecular Therapy 15：608-17［71］；また、Bangari and Mittal，2006，Vaccine 24：849-62［72］による概説；およびLasaro and Ertl，2009，Mol Ther 17：1333-39［73］による概説も参照のこと）。したがって、他の好ましい実施形態では、本発明による組換えアデノウイルスは、サルアデノウイルス、例えばチンパンジーアデノウイルスをベースにしたものである。一部の特定の実施形態では、組換えアデノウイルスは、サルアデノウイルス型１、７、８、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７．１、２８．１、２９、３０、３１．１、３２、３３、３４、３５．１、３６、３７．２、３９、４０．１、４１．１、４２．１、４３、４４、４５、４６、４８、４９、５０またはＳＡ７Ｐをベースにしたものである。
好ましくは、アデノウイルスベクターは、複製欠損組換えウイルスベクター、例えばｒＡｄ２６、ｒＡｄ３５、ｒＡｄ４８、ｒＡｄ５ＨＶＲ４８などである。
本発明による好ましい一実施形態では、アデノウイルスベクターは、２つの稀な血清型：Ａｄ２６およびＡｄ３５由来のカプシドタンパク質を含むものである。典型的な実施形態では、該ベクターはｒＡｄ２６またはｒＡｄ３５ウイルスである。
したがって、本発明の一実施形態に使用され得る該ベクターは、Ａｄ２６またはＡｄ３５カプシドタンパク質（例えば、突起、ペントンまたはヘキソンタンパク質）を含むものである。当業者には、Ａｄ２６またはＡｄ３５カプシドタンパク質全体を本発明のベクターに使用することは必要でないことが認識されよう。したがって、Ａｄ２６またはＡｄ３５カプシドタンパク質の少なくとも一部分を含むキメラカプシドタンパク質を本発明のベクターに使用してもよい。また、本発明の実施形態によるベクターは、突起、ペントンおよびヘキソンタンパク質が各々、異なる血清型に由来するカプシドタンパク質を含むものであってもよい（少なくとも１種類のカプシドタンパク質がＡｄ２６またはＡｄ３５に由来するものである限り）。好ましい実施形態では、突起、ペントンおよびヘキソンタンパク質が各々、Ａｄ２６に由来するものであるか、または各々がＡｄ３５に由来するものである。
当業者には、複数の血清型に由来する要素を合わせて単一の組換えアデノウイルスベクターにしてもよいことが認識されよう。したがって、異なる血清型の望ましい特性を兼ね備えたキメラアデノウイルスが調製され得る。したがって、一部の実施形態では、本発明のキメラアデノウイルスは、Ａｄ２６およびＡｄ３５の血清型の先在免疫の非存在と、例えば温度安定性、アセンブリ、アンカリング、調製歩留り、再指令または改善された感染、標的細胞内でのＤＮＡの安全性などの特性とを兼ね備えたものであり得る。
一部の特定の実施形態では、本発明に有用な組換えアデノウイルスベクターは主に、または完全にＡｄ３５またはＡｄ２６に由来するものである（すなわち、該ベクターはｒＡｄ３５またはｒＡｄ２６である）。一部の実施形態では、アデノウイルスは、例えばゲノムのＥ１領域内に欠失を含有しているため複製欠損である。本発明のアデノウイルスでは、Ａｄ２６またはＡｄ３５に由来するものであるため、アデノウイルスのＥ４−ｏｒｆ６コード配列を、Ａｄ５などのヒト下位群ＣのアデノウイルスのＥ４−ｏｒｆ６と置換することが典型的である。これにより、かかるアデノウイルスの増殖が、Ａｄ５のＥ１遺伝子を発現する周知の相補性細胞株、例えば２９３細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞などにおいて可能になる（例えば、Havenga，et al．，2006，J Gen Virol 87：2135-43［６１］；ＷＯ０３／１０４４６７を参照のこと）。しかしながら、かかるアデノウイルスは、Ａｄ５のＥ１遺伝子を発現しない非相補性細胞では複製され得ない。
一部の特定の実施形態では、アデノウイルスは、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている核酸がクローニングされているＥ１領域内に欠失を有し、Ａｄ５のＥ４−ｏｒｆ６領域を有する血清型３５のヒトアデノウイルスである。一部の特定の実施形態では、アデノウイルスは、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている核酸がクローニングされているＥ１領域内に欠失を有し、Ａｄ５のＥ４ ｏｒｆ６領域を有する血清型２６のヒトアデノウイルスである。Ａｄ３５アデノウイルスでは、該アデノウイルス内のＥ１Ｂ ５５Ｋオープンリーディングフレームの３’末端、例えば、ｐＩＸオープンリーディングフレームのすぐ上流の１６６ｂｐまたはこれを含む断片、例えば、ｐＩＸ開始コドンのすぐ上流の２４３ｂｐ断片（５’末端においてＢｓｕ３６Ｉ制限部位によってマーキングされる）を保持することが典型的であり、それは、これにより、ｐＩＸ遺伝子のプロモーターがこの領域内に部分的に存在しているため該アデノウイルスの安定性が増大するためである（例えば、［６１］（上掲）；ＷＯ２００４／００１０３２を参照のこと）。
組換えアデノウイルスベクターの調製は当分野で周知である。ｒＡｄ２６ベクターの調製は、例えば、ＷＯ２００７／１０４７９２およびAbbink et al．,（2007）Virol 81（9）：4654-63［１１］に記載されている。Ａｄ２６の例示的なゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ＥＦ １５３４７４およびＷＯ２００７／１０４７９２の配列番号：１を見るとよい。ｒＡｄ３５ベクターの調製は、例えば、米国特許第７，２７０，８１１号およびVogels et al．,（2003）J Virol 77（15）：8263-71［１２］に記載されている。Ａｄ３５の例示的なゲノム配列はＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ＡＣ＿００００１９において知得される。
本発明の一実施形態では、本発明に有用なベクターとしては、ＷＯ２０１２／０８２９１８（その開示内容は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のものが挙げられる。
典型的には、本発明に有用なベクターは、組換えアデノウイルスゲノム全体を含む核酸（例えば、プラスミド、コスミド、またはバキュロウイルスベクター）を用いて調製される。したがって、本発明により、本発明のアデノウイルスベクターをコードしている単離された核酸分子もまた提供する。本発明の核酸分子はＲＮＡの形態、またはクローニングによって得られるか、もしくは合成により調製されるＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは二本鎖であっても一本鎖であってもよい。
本発明に有用なアデノウイルスベクターは典型的には複製欠損である。このような実施形態では、ウイルスは、該ウイルスの複製に極めて重要な領域、例えばＥ１領域の欠失または不活性化によって複製欠損にする。該領域は、例えば、目的の遺伝子、例えば、抗原性ポリペプチド（通常、プロモーターに連結させる）をコードしている遺伝子を該領域内に挿入することによって実質的に欠失または不活性化され得る。一部の実施形態では、本発明のベクターは、他の領域、例えばＥ２、Ｅ３もしくはＥ４領域内に欠失、またはこれらの領域内の１もしくは２以上に、プロモーターに連結させた異種遺伝子の挿入を含むものであり得る。Ｅ２−および／またはＥ４−変異型アデノウイルスでは、一般的には、Ｅ２−および／またはＥ４−相補性細胞株が組換えアデノウイルスを調製するために使用される。アデノウイルスのＥ３領域内の変異では、Ｅ３が複製に必要とされないため細胞株によって相補的にする必要はない。
本発明に用いるためのアデノウイルスベクターを充分な量で調製するため、パッケージング細胞株が典型的に使用される。パッケージング細胞は、複製欠損ベクター内に欠失または不活性化されているこれらの遺伝子を含んでいる細胞であり、したがって、該細胞内では該ウイルスは複製される。好適なパッケージング細胞株としては、例えばＰＥＲ．Ｃ６、９１１、２９３およびＥ１ Ａ５４９が挙げられる。
上記のように、多種多様なＨＩＶ抗原性ポリペプチドが、該ベクターにおいて発現され得る。必要であれば、ＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている異種遺伝子をコドン最適化して、処置する宿主（例えば、ヒト）における適正な発現が確実となるようにしてもよい。コドン最適化は、当分野で広く応用されている技術である。典型的には、該異種遺伝子は、アデノウイルスゲノムのＥ１および／またはＥ３領域内にクローニングされる。
異種ＨＩＶ遺伝子は、アデノウイルス由来プロモーター（例えば、主要後期プロモーター）の制御下にあって（すなわち、作動可能に連結していて）もよく、異種プロモーターの制御下にあってもよい。好適な異種プロモーターの例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターおよびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターが挙げられる。好ましくは、該プロモーターは、発現カセット内において目的の異種遺伝子の上流に位置する。
上記のように、本発明に有用なアデノウイルスベクターは、当業者に公知の多種多様なＨＩＶ抗原性ポリペプチド、例えば限定されないが、本明細書において論考した抗原性ポリペプチドをコードすることができる。
本発明の好ましい一実施形態では、アデノウイルスベクターは、例えば、Abbink，J Virol，2007．81（9）：p．4654-63［１１］（これは引用により本明細書に組み込まれる）に記載されているｒＡｄ２６ベクターである。
ＭＶＡベクター
本発明に有用なＭＶＡベクターは、ヒト細胞株において再生的に複製する能力がないことを特徴とする改変ワクシニアアンカラウイルスに由来する弱毒化ウイルスを利用したものである。ＭＶＡベクターは、当業者に公知の任意のＨＩＶ抗原性ポリペプチド、例えば限定されないが、本明細書において論考した抗原性ポリペプチドを発現するものであり得る。
ＭＶＡは、ニワトリ胚線維芽細胞において、Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（アンカラ，トルコ）に長年維持され、ヒトのワクチン接種のベースとして使用された皮膚ワクシニア株アンカラ［漿尿膜ワクシニアウイルスアンカラウイルス，ＣＶＡ；概説については、Mayr et al．（1975），Infection 3，6-14［７４］参照］の５７０回より多くの連続継代によって調製されている。しかしながら、ワクシニアウイルスに随伴するしばしば重度のワクチン接種後の合併症のため、より弱毒化されたより安全な天然痘ワクチンを調製するためのいくつかの試みがなされていた。
１９６０年〜１９７４年の間、Ａｎｔｏｎ Ｍａｙｒ教授が、ＣＥＦ細胞内での５７０回を超える連続継代によってＣＶＡの弱毒化に成功した［７４］。さまざまな動物モデルにおいて、得られたＭＶＡが無発病性であることが示された［７５］。プレ天然痘（pre-smallpox）ワクチンとしてのＭＶＡの初期段階の開発の一部として、ワクシニアによる有害反応のリスクがある対象においてＭＶＡ−５１７をＬｉｓｔｅｒ Ｅｌｓｔｒｅｅと組み合わせて使用した臨床試験があった［７７，７８］。１９７６年、ＭＶＡ−５７１原種菌（５７１回目の継代物に相当）に由来するＭＶＡがドイツで、２段階非経口天然痘ワクチン接種プログラムにおけるプライマーワクチンとして登録された。その後、ＭＶＡ−５７２は、およそ１２０，０００名の白人個体に使用され、その大部分は１〜３歳の子供であり、対象の多くは該集団の中でもワクシニアに伴う合併症の高いリスクを有していたにもかかわらず、重度の副作用は報告されなかった［７６］。ＭＶＡ−５７２は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ ＣｕｌｔｕｒｅｓにＥＣＡＣＣ Ｖ９４０１２７０７として寄託された。
ＭＶＡを弱毒化するために使用した継代の結果、ＣＥＦ細胞において実施した継代回数に応じて、いくつかの異なる菌株または分離菌が存在する。例えば、ＭＶＡ−５７２は少用量でプレワクチンとして、ドイツで天然痘撲滅プログラムにおいて使用され、ＭＶＡ−５７５は、獣医用ワクチンとして広く使用された。ＭＶＡならびにＭＶＡ−ＢＮは、祖先ＣＶＡウイルスと比べるとゲノムのおよそ１５％（６つの領域の３１ｋｂ）がない。この欠失は、いくつかのビルレンス遺伝子および宿主域遺伝子ならびにＡ型の封入体の遺伝子に影響を及ぼす。ＭＶＡ−５７５は２０００年１２月７日に、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）に受託番号Ｖ００１２０７０７で寄託された。弱毒化ＣＶＡ−ウイルスＭＶＡ（改変ワクシニアウイルスアンカラ）は、一次ニワトリ胚線維芽細胞でのＣＶＡの連続増殖（５７０回より多くの継代）によって得られた。
Ｍａｙｒ ｅｔ ａｌ．によって１９７０年代に、ＭＶＡは高度に弱毒化されており、ヒトおよび哺乳動物において無発病性であることが実証されたものの、一部の研究者らにより、ＭＶＡは、哺乳動物細胞株およびヒト細胞株では、これらの細胞において残留複製が起こり得る可能性があるため、完全に弱毒型ではないことが報告されている［７９，８０；米国特許第５，１８５，１４６号；８１］。使用されたウイルスは、その特性、特に、種々の細胞株における増殖挙動が本質的に異なるため、これらの刊行物に報告されている結果は、種々の公知の菌株のＭＶＡで得られたと仮定される。かかる残留複製は種々の理由で、例えば、ヒトでの使用に関する安全性の懸念のため望ましくない。
より安全な製剤品、例えばワクチンまたは医薬品の開発のための向上した安全性プロフィールを有するＭＶＡ株が、例えばＢａｖａｒｉａｎ Ｎｏｒｄｉｃによって開発されている。ＭＶＡは、Ｂａｖａｒｉａｎ Ｎｏｒｄｉｃによってさらに継代され、ＭＶＡ−ＢＮＡと命名されている。ＭＶＡ−ＢＮの代表的な試料は２０００年８月３０日に、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）に受託番号Ｖ０００８３００８で寄託された。ＭＶＡ−ＢＮは、ＷＯ０２／４２４８０（ＵＳ２００３／０２０６９２６）およびＷＯ０３／０４８１８４（ＵＳ２００６／０１５９６９９）（これらはともに、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。
ＭＶＡの「誘導体」または「バリアント」は、本明細書に記載のＭＶＡと本質的に同じ複製特性を示すがゲノムの１または２以上の部分において違いを示すウイルスをいう。例えば、ＭＶＡ−ＢＮならびにＭＶＡ−ＢＮの誘導体またはバリアントは、ヒトおよびマウスにおいて、重度に免疫抑制されたマウスにおいてでも、インビボで再生的に複製できない。より具体的には、ＭＶＡ−ＢＮまたはＭＶＡ−ＢＮの誘導体もしくはバリアントは好ましくは、ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）においても再生的複製能を有するが、ヒトケラチノサイト細胞株ＨａＣａｔ［８２］、ヒト骨肉腫細胞株１４３Ｂ（ＥＣＡＣＣ寄託番号９１１１２５０２）、ヒト胚腎臓細胞株２９３（ＥＣＡＣＣ寄託番号８５１２０６０２）、およびヒト子宮頸部腺癌細胞株ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ寄託番号ＣＣＬ−２）においては再生的複製能を有しない。さらに、ＭＶＡ−ＢＮの誘導体またはバリアントは、Ｈｅｌａ細胞およびＨａＣａＴ細胞株において少なくとも２倍少ない、より好ましくは３倍少ないＭＶＡ−５７５ウイルス増幅倍率（amplification ratio）を有する。ＭＶＡバリアントのこのような特性に関する試験およびアッセイは、ＷＯ０２／４２４８０（ＵＳ２００３／０２０６９２６）およびＷＯ０３／０４８１８４（ＵＳ２００６／０１５９６９９）に記載されている。
用語「再生的複製能がない」または「再生的複製能がない」は、例えばＷＯ０２／４２４８０に記載されており、これにも、上記の所望の特性を有するＭＶＡをどのようにして得るかが教示されている。この用語は、ＷＯ０２／４２４８０または米国特許第６，７６１，８９３号（これらはともに、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のアッセイの使用で、感染後４日目に有するウイルス増幅倍率が１未満であるウイルスに適用される。
用語「再生的に複製できない」は、ウイルスが、感染後４日目に有するウイルス増幅倍率が１未満であることをいう。ＷＯ０２／４２４８０または米国特許第６，７６１，８９３号に記載のアッセイが、ウイルス増幅倍率の測定に適用可能である。
ウイルスの増幅または複製は、通常、初めに細胞を感染させるために最初に使用された量（インプット）に対する感染細胞から生成されたウイルス（アウトプット）の比として表示され、「増幅倍率」と称される。増幅倍率「１」は、感染細胞から生成されたウイルスの量が細胞を感染させるために最初に使用された量と同じである増幅状態と定義し、感染細胞がウイルスの感染および再生に対して許容性であることを意味する。対照的に、１未満の増幅倍率、すなわちインプットレベルと比べてアウトプットの減少は、再生的複製の欠如、したがってウイルスの弱毒化を示す。
ＭＶＡベースのワクチンの利点としては、その安全性プロフィールならびに大規模ワクチン生産に対する利用可能性が挙げられる。さらに、その有効性に加えて、工業規模での製造の実現可能性が有益であり得る。さらに、ＭＶＡベースのワクチンにより複数種の異種抗原を送達することができ、体液性免疫と細胞性免疫の同時誘導が可能になり得る。
本発明に有用なＭＶＡベクターは、当分野で公知の方法、例えばＷＯ／２００２／０４２４８０、ＷＯ／２００２／２４２２４、ＵＳ２０１１０１５９０３６、ＵＳ８１９７８２５など（これらの該当する開示内容は引用により本明細書に組み込まれる）に記載のものを用いて調製され得る。
別の態様では、複製欠損ＭＶＡウイルス株、例えばＭＶＡ−５７２株およびＭＶＡ−５７５株または任意の他の同様に弱毒化されたＭＶＡ株もまた本発明に用いるのに好適であり得る。また、変異型ＭＶＡ、例えば欠失型漿尿膜ワクシニアウイルスアンカラ（ｄＣＶＡ）も好適であり得る。ｄＣＶＡは、ＭＶＡゲノムのｄｅｌ Ｉ、ｄｅｌ ＩＩ、ｄｅｌ ＩＩＩ、ｄｅｌ ＩＶ、ｄｅｌ Ｖ、およびｄｅｌ ＶＩ欠失部位を含むものである。該部位は、複数の異種配列の挿入に特に有用である。ｄＣＶＡは、ヒト細胞株（例えば、ヒト２９３、１４３ＢおよびＭＲＣ−５細胞株）において、再生的に複製することができ（１０より大きい増幅倍率で）、そのため、これにより、ウイルスベースのワクチン接種ストラテジーに有用なさらなる変異による最適化が可能である（ＷＯ２０１１／０９２０２９参照）。
本発明の好ましい一実施形態では、ＭＶＡベクター（１種類または複数種）は、１または２以上の抗原性ＨＩＶタンパク質、例えばＨＩＶモザイク抗原をコードしている核酸を含むものである。他の好ましい実施形態では、ＭＶＡベクターは、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしており、より好ましくは、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する４種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている。
ＨＩＶ抗原性タンパク質をコードしている核酸配列は、ＭＶＡの１または２以上の遺伝子間領域（ＩＧＲ）内に挿入され得る。一部の特定の実施形態では、ＩＧＲは、ＩＧＲ０７／０８、ＩＧＲ ４４／４５、ＩＧＲ ６４／６５、ＩＧＲ ８８／８９、ＩＧＲ １３６／１３７およびＩＧＲ １４８／１４９から選択される。一部の特定の実施形態では、組換えＭＶＡの５、４、３または２つ未満のＩＧＲが、ＨＩＶ、例えばモザイク抗原および／またはさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドの抗原性決定基をコードしている異種ヌクレオチド配列を含むものである。異種ヌクレオチド配列を、付加的または択一的に、１または２以上の天然に存在している欠失部位内に、特に、ＭＶＡゲノムの主要欠失部位Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶまたはＶＩ内に挿入してもよい。一部の特定の実施形態では、組換えＭＶＡの５、４、３または２つ未満の天然に存在している欠失部位が、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質および／またはさらなるＨＩＶタンパク質の抗原性決定基をコードしている異種ヌクレオチド配列を含むものである。
ＨＩＶタンパク質の抗原性決定基をコードしている異種ヌクレオチド配列を含むＭＶＡの挿入部位の数は１、２、３、４、５、６、７または８以上であり得る。一部の特定の実施形態では、異種ヌクレオチド配列は４つ、３つ、２つまたはそれより少ない挿入部位に挿入される。好ましくは、２つの挿入部位が使用される。一部の特定の実施形態では、３つの挿入部位が使用される。好ましくは、組換えＭＶＡは、２つまたは３つの挿入部位内に挿入された少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つの遺伝子を含むものである。
本明細書において提供する組換えＭＶＡウイルスは、当分野で公知の常套的な方法によって調製され得る。組換えポックスウイルスを得るための方法、または外来コード配列をポックスウイルスゲノム内に挿入するための方法は当業者に周知である。例えば、標準的な分子生物学手法、例えば、ＤＮＡのクローニング、ＤＮＡおよびＲＮＡの単離、ウエスタンブロット解析、ＲＴ−ＰＣＲおよびＰＣＲ増幅手法のための方法はMolecular Cloning，A laboratory Manual（第2版）［８３］に記載されており、ウイルスの取り扱いおよび操作のための手法はVirology Methods Manual［B．W．J．Mahy et al．（編），Academic Press（1996）］に記載されている。同様に、ＭＶＡの取り扱い、操作および遺伝子工学のための手法およびノウハウはMolecular Virology：A Practical Approach［A．J．Davison & R．M．Elliott（編），The Practical Approach Series，IRL Press at Oxford University Press，Oxford，UK（1993）（例えば、第9章：Expression of genes by Vaccinia virus vectorsを参照のこと）］およびCurrent Protocols in Molecular Biology［John Wiley & Son，Inc．（1998）（例えば、第16章，第IVセクション:Expression of proteins in mammalian cells using vaccinia viral vectorを参照のこと）］に記載されている。
本明細書に開示した種々の組換えＭＶＡの調製には種々の方法が適用可能であり得る。ウイルスに挿入するＤＮＡ配列を、ＭＶＡのＤＮＡセクションに相同なＤＮＡが挿入されている大腸菌プラスミド構築物内に配置してもよい。別途に、挿入するＤＮＡ配列をプロモーターにライゲーションしてもよい。このプロモーター−遺伝子連結体はプラスミド構築物内に、該プロモーター−遺伝子連結体の両端が、非必須遺伝子座を含むＭＶＡ ＤＮＡ領域にフランキングしているＤＮＡ配列に相同なＤＮＡによってフランキングされるように配置され得る。得られたプラスミド構築物は大腸菌細菌内での増殖によって増幅され、単離され得る。挿入するＤＮＡ遺伝子配列を含有している単離されたプラスミドによって細胞培養物、例えばニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）のものがトランスフェクトされ得ると同時に該培養物はＭＶＡに感染する。プラスミド内およびウイルスゲノム内のそれぞれの相同ＭＶＡ ＤＮＡ間の組換えにより、外来ＤＮＡ配列の存在によって修飾されたＭＶＡが調製され得る。
好ましい一実施形態によれば、適当な細胞培養物の細胞、例えばＣＥＦ細胞などをポックスウイルスに感染させ得る。感染細胞は、続いて、外来遺伝子または異種遺伝子（１つまたは複数）を含む第１のプラスミドベクターで、好ましくはポックスウイルス発現制御エレメントの転写制御下でトランスフェクトされ得る。上記に説明したように、プラスミドベクターはまた、外来配列の挿入をポックスウイルスゲノムの選択された部分に指令し得る配列を含むものである。任意選択で、プラスミドベクターはまた、ポックスウイルスのプロモーターに作動可能に連結されたマーカーおよび／または選択遺伝子を含むカセットを含有しているものである。好適なマーカーまたは選択遺伝子は、例えば、緑色蛍光タンパク質β−ガラクトシダーゼ、ネオマイシン−ホスホリボシルトランスフェラーゼまたは他のマーカーをコードしている遺伝子である。選択カセットまたはマーカーカセットの使用により、調製された組換えポックスウイルスの同定および単離が簡素化される。しかしながら、組換えポックスウイルスをＰＣＲ技術によって同定することもできる。続いて、さらなる細胞を、上記のようにして得られた組換えポックスウイルスに感染させ、第２の外来遺伝子または異種遺伝子（１つまたは複数）を含む第２のベクターでトランスフェクトしてもよい。万一に備えて、この遺伝子は、ポックスウイルスゲノムの異なる挿入部位に導入すべきであり、また、第２のベクターも、ポックスウイルスのゲノム内への第２の外来遺伝子（１つまたは複数）の組込みを指令するポックスウイルス相同配列が異なっている。相同組換えが起こった後、２または３以上の外来遺伝子または異種遺伝子を含む組換えウイルスが単離され得る。さらなる外来遺伝子を組換えウイルスに導入するため、先の工程で単離した組換えウイルスを感染に使用することにより、およびさらなる外来遺伝子（１つまたは複数）を含むさらなるベクターをトランスフェクションに使用することにより、感染とトランスフェクションの工程を繰り返してもよい。
あるいはまた、上記の感染とトランスフェクションの工程は互換性である、すなわち、適当な細胞を、最初に、外来遺伝子を含むプラスミドベクターによってトランスフェクトし、次いでポックスウイルスに感染させてもよい。さらなる択一例として、各外来遺伝子を異なるウイルスに導入し、細胞を、得られたすべての組換えウイルスに共感染させ、すべての外来遺伝子を含む組換え体をスクリーニングすることも可能である。第３の択一例は、ＤＮＡゲノムと外来配列のインビトロでのライゲーションおよびヘルパーウイルスを用いた組換えワクシニアウイルスＤＮＡゲノムの再構築である。第４の択一例は、大腸菌または別の細菌種での細菌人工染色体（ＢＡＣ）としてクローニングされたワクシニアウイルスゲノムと、ワクシニアウイルスゲノム内の所望の組込み部位にフランキングしている配列に相同なＤＮＡ配列にフランキングされた線状外来配列間での相同組換えである。
異種ＨＩＶ遺伝子、例えば、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている核酸を、１または２以上のポックスウイルスプロモーターの制御下に存在（すなわち、作動可能に連結）させてもよい。一部の特定の実施形態では、ポックスウイルスプロモーターはＰｒ７．５プロモーター、ハイブリッド初期／後期プロモーター、またはＰｒＳプロモーター、ＰｒＳ５Ｅプロモーター、合成もしくは天然の初期もしくは後期プロモーター、または牛痘ウイルスＡＴＩプロモーターである。
本発明の好ましい一実施形態では、ＭＶＡベクターは、多価のモザイクＥｎｖ／Ｇａｇ／Ｐｏｌ抗原、例えばBarouch et al．，Nat Med 2010，16：319-323［54］；Barouch et al．，Cell 155：1-9，2013［６５］（これらはすべて、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のものを発現するものである。本発明の実施形態によれば、ＭＶＡベクターは、本明細書に記載の任意の抗原性ポリペプチド、例えば限定されないが、ＨＩＶモザイク抗原、例えばＨＩＶモザイクＧａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原を発現するものであり得る。
免疫原性組成物
本明細書で用いる場合、「免疫原的有効量」または「免疫学的有効量」は、所望の免疫効果または免疫応答が、それを必要とする対象において誘導されるのに充分な組成物の量を意味する。一実施形態では、免疫原的有効量は、免疫応答が、それを必要とする対象において誘導されるのに充分な量を意味する。別の実施形態では、免疫原的有効量は、免疫が、それを必要とする対象において生じる、例えばウイルス感染などの疾患に対する防御効果がもたらされるのに充分な量を意味する。免疫原的有効量は、さまざまな要素、例えば対象の体調、年齢、体重、健康状態など；免疫応答を誘導するのか防御免疫をもたらすのかの具体的な用途；投与される具体的な組換えベクター；投与される組換えベクターにコードされた免疫原；投与される具体的な抗原性ポリペプチド；および免疫が所望される具体的な疾患（例えば、ウイルス感染）に応じて異なり得る。免疫原的有効量は、本開示に鑑みて当業者によって容易に決定され得る。
一般手引きとして、組換えウイルスベクターに関して用いる場合の免疫原的有効量は、約１０８ウイルス粒子〜約１０１２ウイルス粒子の範囲、例えば１０８、１０９、１０１０、１０１１または１０１２ウイルス粒子であり得る。免疫原的有効量は単一の組成物で投与してもよく、複数の組成物、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０種類の組成物（例えば、錠剤、カプセル剤または注射剤）で投与してもよく、この場合、複数のカプセル剤または注射剤の投与が全体で対象に免疫原的有効量をもたらす。一般に、ポリペプチド、例えば単離された抗原性ポリペプチドに関して用いる場合、免疫原的有効量は、例えば約０．３〜約３０００マイクログラム（μｇ）、例えば１〜１０００μｇ、例えば１０〜５００μｇの範囲、例えば約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００μｇであり得る。また、免疫原的有効量を対象に投与し、続いて別の用量の免疫原的有効量を同じ対象に、いわゆるプライム−ブーストレジメンで投与することも可能である。プライム−ブーストレジメンのこの一般的概念はワクチン分野の当業者には周知である。必要に応じて、さらなるブースター投与を任意選択的にレジメンに加えてもよい。
免疫原性組成物は、免疫原的有効量の精製または一部精製された本発明に用いるのためのアデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターを含む組成物である。前記組成物は、当分野で周知の方法に従ってワクチン（「免疫原性組成物」とも称する）として製剤化され得る。かかる組成物に、免疫応答を向上させるためにアジュバントを含めてもよい。製剤中における各成分の最適な比率は、本開示に鑑みて当業者に周知の手法によって決定され得る。
免疫原性組成物の調製および使用は当業者に周知である。液状の医薬組成物には、一般的には液状担体、例えば、水、石油、動物油もしくは植物油、鉱物油または合成油が含められる。また、生理食塩水溶液、デキストロースもしくは他の糖類液またはグリコール、例えばエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールを含めてもよい。
本発明の組成物に他のＨＩＶ−１抗原を含めてもよく、またはプライム免疫処置もしくはブースト免疫処置に他の抗原を含めてもよい。本発明のアデノウイルスベクターと組み合わせて使用される該他の抗原は、本発明にとって重要ではなく、例えばＨＩＶ−１抗原および該抗原を発現する核酸であり得る。
本発明に有用な免疫原性組成物はアジュバントを含むものであり得る。本発明による共投与に適したアジュバントは、潜在的に安全であり、耐容性が良好であり、大衆に有効であるものであるのがよく、ＱＳ−２１、Ｄｅｔｏｘ−ＰＣ、ＭＰＬ−ＳＥ、ＭｏＧＭ−ＣＳＦ、ＴｉｔｅｒＭａｘ−Ｇ、ＣＲＬ−１００５、ＧＥＲＢＵ、ＴＥＲａｍｉｄｅ、ＰＳＣ９７Ｂ、Ａｄｊｕｍｅｒ、ＰＧ−０２６、ＧＳＫ−Ｉ、ＧｃＭＡＦ、Ｂ−ａｌｅｔｈｉｎｅ、ＭＰＣ−０２６、Ａｄｊｕｖａｘ、ＣｐＧ ＯＤＮ、Ｂｅｔａｆｅｃｔｉｎ、アルミニウム塩（例えば、ＡｄｊｕＰｈｏｓ）、Ａｄｊｕｐｌｅｘ、およびＭＦ５９が挙げられる。
投与され得る他のアジュバントとしては、レクチン、成長因子、サイトカインおよびリンホカイン、例えばα−インターフェロン、γインターフェロン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（ｇＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｇＭＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１ＯおよびＩＬ−１２またはこれらのコード核酸が挙げられる。
本発明の組成物に薬学的に許容され得る賦形剤、担体、バッファー、安定剤または当業者に周知の他の物質を含めてもよい。かかる物質は無毒性であるのがよく、活性成分の有効性に干渉しないものであるのがよい。担体または他の物質の厳密な性質は、投与経路（例えば筋肉内、皮下、経口、静脈内、経皮、粘膜内（例えば、腸）、鼻腔内または腹腔内経路）に依存し得る。
動物またはヒトである生物体に投与されると抗ＨＩＶ免疫応答を誘導または刺激する能力は、インビトロまたはインビボのいずれかで、当分野において標準的なさまざまなアッセイを用いて評価され得る。免疫応答の開始および活性化を評価するために利用可能な手法の一般的な説明については、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２年版および１９９４年版のCurrent Protocols in Immunology；編集J Wiley & Sons Inc，National Institute of Health）を参照のこと。細胞性免疫の測定は、活性型エフェクター細胞（例えばＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に由来するもの）によって分泌されたサイトカインプロフィールの測定（例えば、ＥＬＩＳＰＯＴによるＩＬ−１０またはＩＦＮγ−産生細胞の定量）、エフェクター免疫細胞の活性化状態の測定（例えば、古典的な［３Ｈ］チミジン取込みによるＴ細胞増殖アッセイ）、感作対象において抗原特異的Ｔリンパ球をアッセイすること（例えば、細胞傷害性アッセイにおけるペプチド特異的溶解など）によって行われ得る。
細胞性および／または体液性応答を刺激する能力は、抗体結合および／または結合における競合によって測定され得る（例えば、Harlow，1989，Antibodies，Cold Spring Harbor Press参照）。例えば、免疫原をもたらす組成物の投与に応答して産生される抗体の力価は酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定され得る。また、免疫応答は中和抗体アッセイによっても測定され得、この場合、ウイルスの中和は、特異的抗体との反応／特異的抗体による阻害／中和によるウイルスの感染力の喪失と定義される。さらに、免疫応答は、抗体依存性細胞貪食（Antibody-Dependent Cellular Phagocytosis（ADCP））アッセイによっても測定され得る。
本発明の実施形態によれば、対象に投与されると、発現ベクター、例えば組換えアデノウイルスベクターまたは組換えＭＶＡベクターは免疫原性ポリペプチドを発現する。本明細書に記載の任意の抗原性ポリペプチドが、本発明の方法において発現ベクターにコードされ、対象に投与され得る。発現された免疫原性ポリペプチドは対象の免疫機構に提示され、それにより、免疫を生じさせるための必要とされる応答が誘導されるか、または疾患もしくは感染を処置もしくは予防するための免疫応答が誘導される。例えば、応答は、免疫原性ポリペプチドに特異的な抗体の産生であり得る。
好ましくは、対象に投与されると、発現ベクターはモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原を発現する。本発明によるモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原が対象の免疫機構に提示されると、発現されたモザイクＨＩＶ抗原の配列組成に応じた、ＨＩＶ ｇａｇ、ｐｏｌおよび／またはｅｎｖ遺伝子産物に特異的な抗体の産生が誘導され得る。
ワクチン組合せ物
本発明の一般的な一態様は、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するためのワクチン組合せ物であって：
（ｉ）１または２以上のHIV抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物；
（ｉｉ）免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物；ならびに
（ｉｉｉ）１または２以上のさらなる抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクター
を含むものであり、
ここで、第１および第２の組成物のうち一方はプライム免疫処置のためのものであり、他方の組成物はブースト免疫処置のためのものであり、該免疫原的有効量の該さらなる発現ベクターが第２組成物に、またはプライムもしくはブースト免疫処置のための該第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在している
ワクチン組合せ物に関する。
好ましい一実施形態では、単離された抗原性ポリペプチドがＨＩＶエンベロープ糖タンパク質を含む。該エンベロープ糖タンパク質の例としては、上記の任意のＨＩＶエンベロープ糖タンパク質、例えば限定されないが、任意のクレードのＨＩＶ由来のｇｐ１６０、ｇｐ１４０、ｇｐ１２０またはｇｐ４１が挙げられる。好ましくは、単離された抗原性ポリペプチドは、ＨＩＶエンベロープタンパク質の安定化三量体、例えばＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体、特にクレードＣのＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体、例えば配列番号：５のアミノ酸配列を含むものを含む。本発明の別の実施形態では、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質はモザイクＨＩＶエンベロープ糖タンパク質、例えばモザイクＨＩＶ ｇｐ１４０タンパク質、例えば配列番号：６のアミノ酸配列を含むものである。
別の好ましい実施形態では、発現ベクターまたは該さらなる発現ベクターがアデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターである。好ましくは、プライム免疫処置とブースト免疫処置には異なる起源のベクターが使用される。例えば、アデノウイルスベクターがプライム免疫処置のために使用される場合、ＭＶＡベクターはブースト免疫処置のために使用される。同様に、ＭＶＡベクターがプライム免疫処置のために使用される場合、アデノウイルスベクターはブースト免疫処置のために使用される。本発明の好ましい一実施形態では、１または２以上のアデノウイルスベクター、より好ましくはｒＡｄ２６ベクターがプライム免疫処置に使用され、１または２以上のＭＶＡベクターが、単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチド、例えばＨＩＶエンベロープタンパク質と一緒にブースト免疫処置に使用される。
本発明の他の実施形態では、１または２以上のアデノウイルスベクター、好ましくはｒＡｄ２６ベクターがプライム免疫処置に使用され、１または２以上のアデノウイルスベクター、好ましくはｒＡｄ２６ベクターが、単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチド、例えばＨＩＶエンベロープタンパク質、好ましくは安定化三量体型ｇｐ１４０タンパク質と一緒にブースト免疫処置に使用される。ブースト免疫処置に使用されるアデノウイルスベクターは、プライム免疫処置に使用されるアデノウイルスベクターにコードされたものと同じ抗原性タンパク質をコードしているものであってもよい。
本発明のまた別の実施形態では、単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドと１または２以上のアデノウイルスベクター、好ましくはｒＡｄ２６ベクターがプライム免疫処置に使用され、単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドと１または２以上のアデノウイルスベクター、好ましくはｒＡｄ２６ベクターがブースト免疫処置に使用される。
本発明の実施形態によれば、上記に論考した任意のＨＩＶ抗原性ポリペプチドが該発現ベクター（１種類または複数種）および該さらなる発現ベクター（１種類または複数種）にコードされ得る。好ましい一実施形態では、抗原性ポリペプチドはＨＩＶモザイク抗原、より好ましくはモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原である。モザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原の例としては、限定されないが、配列番号：１〜４のアミノ酸配列を含むモザイク抗原が挙げられる。
本発明の一実施形態では、第１組成物が、１または２以上のモザイクＨＩＶ抗原性ポリペプチド、例えばモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原をコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；第２組成物が、単離されたＨＩＶエンベロープタンパク質、例えばＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体またはモザイクＨＩＶエンベロープタンパク質を含むものであり；該さらなる発現ベクターが、１または２以上のモザイクＨＩＶ抗原性ポリペプチド、例えばモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原をコードしているＭＶＡベクターである。
本発明の好ましい一実施形態では、第１組成物が、配列番号：１〜４のアミノ酸配列を有する１または２以上のタンパク質をコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；第２組成物が、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を有する単離された抗原性ポリペプチドを含むものであり；該さらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４のアミノ酸配列を有する１または２以上のタンパク質をコードしているＭＶＡベクターである。
本発明の特に好ましい一実施形態では、第１組成物が、それぞれ配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のモザイクＨＩＶタンパク質をコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；第２組成物が、配列番号：５のアミノ酸配列を有する単離されたＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含むものであり；ＭＶＡベクターは第３組成物に存在しており、配列番号：１〜４のアミノ酸配列を有する４種類のモザイクＨＩＶ抗原性タンパク質をコードしている。
本発明の実施形態によれば、第１組成物は、１種類の発現ベクターまたは１種類より多くの発現ベクターを含むものであり得る。一実施形態では、第１組成物が、１種類の発現ベクター、例えばアデノウイルスベクター、より好ましくはｒＡｄ２６ベクターを含むものである。別の実施形態では、第１組成物が、１種類より多くの発現ベクター、例えば１、２、３または４種類などの発現ベクターを含むものであり、該発現ベクターは好ましくはアデノウイルスベクター、例えばｒＡｄ２６ベクターである。１または２以上の該発現ベクターは、同じまたは異なるＨＩＶ抗原性ポリペプチドを発現するものであり得る。発現ベクターの各々は、１つのＨＩＶ抗原性ポリペプチド配列または１つより多くのＨＩＶ抗原性ポリペプチド配列を発現するものであり得る。実例としての非限定的な一例として、第１組成物は、各々が、好ましくは配列番号：１〜４、より好ましくは配列番号：１、３および４からなる群より選択される異なるＨＩＶ抗原性ポリペプチドを発現する３種類のｒＡｄ２６ベクターを含むものであり得る。
本発明の実施形態によれば、１または２以上の該さらなる発現ベクターは１種類の発現ベクター、またはより多くの発現ベクター、例えば２、３、４種類もしくはそれより多くの発現ベクターであり得る。１または２以上の該さらなる発現ベクターは、同じまたは異なる抗原性ポリペプチドを発現するものであり得る。さらに１または２以上のさらなる発現ベクターの各々は、１つの抗原性ポリペプチド配列または複数の抗原性ポリペプチド配列を発現するものであり得る。実例としての非限定的な一例として、２種類のさらなる発現ベクター、好ましくはＭＶＡベクターが使用され、各ＭＶＡベクターは、異なるモザイクＨＩＶ抗原配列、例えば、配列番号：１〜４からなる群より選択されるモザイクＨＩＶ Ｇａｇ−Ｐｏｌ−Ｅｎｖ抗原配列をコードしている。好ましくは、本発明のかかる実施形態では、一方のＭＶＡベクターが、配列番号：１と３を含むＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしており、他方のＭＶＡベクターが、配列番号：２と４を含むＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている。
本発明の実施形態によるワクチン組合せ物は、１つまたは複数のＨＩＶのクレードに対する免疫応答を誘導するのに有効である。
ＨＩＶ感染に対する防御免疫を誘導するための方法
本発明により、１または２以上のＨＩＶクレードに対する免疫応答を、それを必要とする対象において、１または２以上の発現ベクターを単離された抗原性ポリペプチドと組み合わせて用いてプライムおよびブーストする方法を提供する。
本発明の一般的な一態様によれば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法は：
（ｉ）該対象に、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物を投与すること；
（ｉｉ）該対象に、免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物を投与すること；
（ｉｉｉ）該対象に、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクターを投与すること
を含むものであり、
ここで、工程（ａ）および（ｂ）はいずれかの順序で行われ、該工程のうち一方はプライム免疫処置のため、他方はブースト免疫処置のためのものであり、該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターは、第２組成物に、またはプライムもしくはブースト免疫処置のための該第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在する。
本発明の実施形態による任意のワクチン組合せ物が本方法において使用され得る。
本発明の実施形態によれば、「免疫応答を誘導する」とは、本明細書に記載の方法に関して用いる場合、感染、例えばＨＩＶ感染に対して、予防目的で対象に防御免疫をもたらすこと、および／またはワクチン接種すること、ならびに感染、例えばＨＩＶ感染に対して、治療目的で所望の免疫応答または有効性を、それを必要とする対象において引き起こすことを包含している。好ましくは、本発明の方法は予防目的のため、例えば防御免疫をもたらすためのものである。
本発明の方法において使用され得る単離された抗原性ポリペプチド、発現ベクター、さらなる発現ベクター、該発現ベクターにコードされた抗原性ポリペプチドなどの実施形態は、上記および実例としての以下の実施例で詳細に論考している。
本開示の方法の一実施形態では、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている１または２以上のアデノウイルスベクターが、免疫応答をプライムするために使用される。１または２以上の単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが、プライム免疫処置のための１または２以上のアデノウイルスベクターと一緒に使用され得る。プライム免疫処置は複数回で、例えば、時間０で初期プライム投与、その後、初期プライム投与の約１０〜１４週間後にさらなるプライム投与で投与され得る。１または２以上の単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドは、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている１または２以上のさらなるアデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターと一緒に免疫応答をブーストするために使用される。また、ブースト免疫処置も複数回で、例えば、初期プライム投与後、約２２〜２６週目に最初に、その後、初期プライム投与後、約４６〜５０週目にさらなるブースト投与で投与してもよい。免疫処置によって誘導される免疫応答はモニタリングされる。
また、本開示の方法の実施形態では、最終ブースト免疫処置が初期プライム投与の約２２〜２６週間後に投与されることを意味する短期プライム−ブーストレジメンも想定される。プライム免疫処置は０週目に投与され得る。ブースト免疫処置は複数回で、例えば、初期プライム投与後、約７〜９週目または１１〜１３週目に最初に、その後、初期プライム投与後、約２２〜２６週目にさらなるブースト投与で投与され得る。一部の特定の実施形態では、１または２以上の単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが、プライム免疫処置のための１または２以上のアデノウイルスベクターと一緒に投与される。
プライム投与およびブースト投与のためのレジメンは、投与後に測定された免疫応答に基づいて調整され得ることは当業者によって容易に認識されよう。例えば、ブースト組成物は一般的には、プライム組成物の投与の数週間または数ヶ月後、例えば、プライム組成物の投与の約２〜３週間もしくは４週間、または８週間、または１６週間、または２０週間、または２４週間、または２８週間、または３０週間もしくは３２週間または１〜２年後に投与される。
本発明の好ましい一実施形態において、本明細書に開示の方法に使用されるアデノウイルスベクターとしてはｒＡｄ２６ベクターが挙げられる。例示的な一実施形態では、ｒＡｄ２６ベクターが免疫応答をプライムするために使用され、ＭＶＡベクターが、単離された抗原性ポリペプチドと一緒に免疫応答をブーストするために使用され、または逆も同様である。
本記載の方法の１以上の実施形態では、複数のｒＡｄ２６ベクターが免疫応答をプライムするために使用され、複数の単離された抗原性タンパク質が、任意選択で複数のＭＶＡベクターと一緒に免疫応答をブーストするために使用され、または逆も同様である。
本明細書における方法による好ましい一実施形態では、複数のｒＡｄ２６ベクターがプライム免疫処置に使用された後、複数のＭＶＡベクターおよび単離された抗原性ポリペプチドでのブースト免疫処置が行われる。好ましくは、ブースト免疫処置は、最後のプライムの１０〜３６週間後、より好ましくはプライムの１２〜２４週間後に投与される。
それぞれのプライム組成物およびブースト組成物（しかしながら、多くのブースト組成物が使用される）中の抗原は同一である必要はないが、抗原性決定基を共有しているか、または互いに実質的に類似しているのがよい。
発現ベクターおよび／または抗原性ポリペプチドを含む免疫原性組成物の投与は、典型的には筋肉内または皮下である。しかしながら、他の投与様式、例えば静脈内、経皮、皮内または経鼻も同様に想定され得る。免疫原性組成物の筋肉内投与は、発現ベクター、例えばアデノウイルスベクターおよび／またはＭＶＡベクター、および／または抗原性ポリペプチドの懸濁剤を注射するためのニードルを使用することにより行われ得る。択一法は、該組成物を投与するための無針注射デバイス（例えばＢｉｏｊｅｃｔｏｒ（商標）の使用）またはワクチンを含有している凍結乾燥粉末剤の使用である。
静脈内、経皮もしくは皮下注射または罹病部位での注射のためには、該ベクターは、パイロジェンフリーであり適当なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口に許容され得る水性液剤の形態である。同様に、単離された抗原性ポリペプチドは、適当なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口に許容され得る液剤の形態である。当業者は、適当な液剤を例えば等張性ビヒクルを用いて、例えば塩化ナトリウム注射剤、リンゲル注射剤、乳酸加リンゲル注射剤を用いて調製することが充分にできよう。必要に応じて、保存料、安定剤、バッファー、酸化防止剤および／または他の添加剤を含めてもよい。また、低速放出製剤を使用してもよい。
典型的には、本発明の実施形態によるワクチン組成物の投与は、感染または症状の発現前にＨＩＶ抗原に対する免疫応答を生成させるための予防目的を有するものである。本発明に従って処置または予防され得る疾患および障害としては、免疫応答が防御的または治療的役割を果たし得るものが挙げられる。他の実施形態では、発現ベクター、例えばアデノウイルスベクターおよび／またはＭＶＡベクター、および／または抗原性ポリペプチドは、曝露後の予防のために投与され得る。
発現ベクター、例えばアデノウイルスベクターおよび/またはＭＶＡベクター、および抗原性ポリペプチドを含有している免疫原性組成物を対象に投与すると、抗ＨＩＶ免疫応答が該対象において生じる。検出可能な免疫応答が誘導されるのに充分な組成物の量を「免疫原的有効用量」と定義する。以下の実施例に示すように、本発明の免疫原性組成物により体液性ならびに細胞媒介性免疫応答が誘導される。本発明の典型的な一実施形態では、免疫応答は防御免疫応答である。
投与される実際の量ならびに投与の速度および時間推移は、処置されるものの性質および重症度に依存する。処置の処方、例えば投薬量の決定などは、一般開業医および他の医師または獣医の状況では獣医の責任の範囲内であり、典型的には、処置される障害、個々の患者の体調、送達部位、投与方法および実行者に公知の他の要素が考慮される。上記の手法およびプロトコルの例は、Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol，A．編，1980において知得され得る。
アデノウイルスベクターおよびＭＶＡベクターの調製ならびにかかる粒子の組成物への任意選択の製剤化後、該ベクターは、個体、特にヒトまたは他の霊長類に投与され得る。投与は、ヒトまたは別の哺乳動物、例えばマウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、ウシ、ロバ、サル、イヌまたはネコに対するものであり得る。非ヒト哺乳動物への送達は治療目的である必要はなく、実験の状況、例えば、ｇｐ１４０タンパク質またはアデノウイルスベクターもしくはＭＶＡベクターによって発現された抗原に対する免疫応答の機構の究明に使用するためであってもよい。
例示的なレジメンの１つでは、アデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターは、約１０４〜１０１２ウイルス粒子／ｍｌの濃度を含有する約１００μｌ〜約１０ｍｌの範囲の生理食塩水溶液で投与される（例えば、筋肉内）。典型的には、アデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターは、ヒト対象に１回の投与で約１０９〜約１０１２ウイルス粒子（ｖｐ）、より典型的には約１０１０〜約１０１２ｖｐの量で投与される。初期ワクチン接種の後に上記のようにブーストが行われる。単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドは、例えば、約０．００１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与され得る。当業者には、特定の要素、例えば限定されないが、疾患もしくは障害の重症度、処置歴、対象の一般健康状態および／または年齢ならびに存在する他の疾患が、対象を有効に処置するために必要とされる投薬量に影響を及ぼす場合があり得ることが認識されよう。
該組成物は、所望により、活性成分を含有する１または２以上の単位投薬形態を含むものであり得るキット、パックまたはディスペンサーで提示され得る。キットは、例えば、金属またはプラスチックのホイルを含むもの、例えばブリスターパックであり得る。キット、パックまたはディスペンサーに投与のための使用説明書を付随させてもよい。
本発明の組成物は単独で、または他の処置との併用で、処置される病状および処置に影響を及ぼし得る他の要素に応じて同時もしくは逐次のいずれかで投与され得る。
実施形態
実施形態１は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するためのワクチン組合せ物であって：
（ｉ）１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物；
（ｉｉ）免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物；ならびに
（ｉｉｉ）１または２以上のさらなる抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクター
を含むものであり、
ここで、第１および第２の組成物のうち一方はプライム免疫処置のためのものであり、他方の組成物はブースト免疫処置のためのものであり、該免疫原的有効量の該さらなる発現ベクターが第２組成物に、またはプライムもしくはブースト免疫処置のための該第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在しているワクチン組合せ物である。
実施形態２は、単離された抗原性ポリペプチドがＨＩＶエンベロープ糖タンパク質を含む実施形態１に記載のワクチン組合せ物である。
実施形態３は、単離された抗原性ポリペプチドがＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含む実施形態２に記載のワクチン組合せ物である。
実施形態４は、１または２以上の該発現ベクターおよび１または２以上の該さらなる発現ベクターがアデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターである実施形態１〜３のいずれか一つに記載のワクチン組合せ物である。
実施形態５は、１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがＭＶＡベクターであるか；１または２以上の該発現ベクターがＭＶＡベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであるか；または１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターもまたｒＡｄ２６ベクターである実施形態４に記載のワクチン組合せ物である。
実施形態６は、１または２以上の該発現ベクターおよび１または２以上の該さらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているものである実施形態１〜５のいずれか一つに記載のワクチン組合せ物である。
実施形態７は、１または２以上の該発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターであり；単離された抗原性ポリペプチドが、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むものであり；１または２以上の該さらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターである実施形態６に記載のワクチン組合せ物である。
実施形態８は、第１組成物がプライム免疫処置のためのものであり、第２組成物および該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターがブースト免疫処置のためのものである実施形態７に記載のワクチン組合せ物である。
実施形態９は、該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターが第３組成物に存在している実施形態８に記載のワクチン組合せ物である。
実施形態１０は、第１組成物が、それぞれ配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；単離された抗原性ポリペプチドが、配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含むものであり；第３組成物が、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する４種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターを含むものである実施形態９に記載のワクチン組合せ物である。
実施形態１１は、対象への投与により複数のＨＩＶのクレードに対する免疫応答が誘導される実施形態１〜１０のいずれかに記載のワクチン組合せ物である。
実施形態１２は、第１組成物が免疫応答をプライムするために使用され、第２組成物および該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターが免疫応答をブーストするために使用される、ＨＩＶ感染に対する防御免疫応答の生成に使用するための実施形態１〜１１のいずれか一つに記載のワクチン組合せ物である。
実施形態１３は、実施形態１〜１２のいずれかのワクチン組合せ物を含むキットである。
実施形態１４は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって：
（ｉ）該対象に、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物を投与すること；
（ｉｉ）該対象に、免疫原的有効量の単離された抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物を投与すること；ならびに
（ｉｉｉ）該対象に、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクターを投与すること
を含むものであり、
ここで、工程（ｉ）および（ｉｉ）はいずれかの順序で行われ、該工程のうち一方はプライム免疫処置のため、他方はブースト免疫処置のためのものであり、該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターは、第２組成物に、またはプライムもしくはブースト免疫処置のための該第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在する
方法である。
実施形態１５は、単離された抗原性ポリペプチドがＨＩＶエンベロープ糖タンパク質を含む実施形態１４に記載の方法である。
実施形態１６は、単離された抗原性ポリペプチドがＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含む実施形態１５に記載の方法である。
実施形態１７は、１または２以上の該発現ベクターおよび１または２以上の該さらなる発現ベクターがアデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターである実施形態１４〜１６のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態１８は、１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがＭＶＡベクターであるか；１または２以上の該発現ベクターがＭＶＡベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであるか；または１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターもまたｒＡｄ２６ベクターである実施形態１７に記載の方法である。
実施形態１９は、１または２以上の該発現ベクターおよび１または２以上の該さらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているものである実施形態１４〜１８のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態２０は、１または２以上の該発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターであり；単離された抗原性ポリペプチドが、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むものであり；１または２以上の該さらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターである実施形態１９に記載の方法である。
実施形態２１は、第１組成物がプライム免疫処置のためのものであり、第２組成物および該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターがブースト免疫処置のためのものである実施形態２０に記載の方法である。
実施形態２２は、該免疫原的有効量の１または２以上の該さらなる発現ベクターが第３組成物に存在している実施形態２１に記載の方法である。
実施形態２３は、第１組成物が、それぞれ配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；単離された抗原性ポリペプチドが、配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含むものであり；第３組成物が、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する４種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターを含むものである実施形態２２に記載の方法である。
実施形態２４は、対象への投与により複数のＨＩＶのクレードに対する免疫応答が誘導される実施形態１４〜２３のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態２５は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって：
（ｉ）該対象に、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むプライマーワクチンを投与すること；ならびに
（ｉｉ）免疫原的有効量の単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチド、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むブースターワクチンを該対象に投与すること
を含むものであり、
ここで、単離された抗原性ポリペプチドおよび１または２以上の該さらなる発現ベクターは同じ組成物または別々の組成物に存在しており；
該ブースターワクチンは、該プライマーワクチンが投与された後に投与される
方法である。
実施形態２６は、ブースターワクチンが、プライマーワクチンが初期投与された後、約２２〜２６週目に最初に投与される実施形態２５に記載の方法である。
実施形態２７はさらに、プライマーワクチンを対象に、プライマーワクチンが初期投与された後だがブースターワクチンが最初に投与される前に再投与することを含む実施形態２５または２６に記載の方法である。
実施形態２８は、プライマーワクチンが、プライマーワクチンが初期投与された後、約１０〜１４週目に再投与される実施形態２７に記載の方法である。
実施形態２９はさらに、ブースターワクチンを対象に再投与することを含む実施形態２５〜２８のいずれかに記載の方法である。
実施形態３０は、ブースターワクチンが、前回のブースターワクチンの投与後、約２２〜２６週目に再投与される実施形態２９に記載の方法である。
実施形態３１は、１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがＭＶＡベクターであるか；１または２以上の該発現ベクターがＭＶＡベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであるか；または１または２以上の該発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、１または２以上の該さらなる発現ベクターもまたｒＡｄ２６ベクターである実施形態２５〜３０のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態３２は、１または２以上の該発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターであり；単離された抗原性ポリペプチドが、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むものであり；１または２以上の該さらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターまたはＭＶＡベクターである実施形態２５〜３０のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態３３は、１または２以上の該さらなる発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターである実施形態３２に記載の方法である。
実施形態３４は、１または２以上の該さらなる発現ベクターがＭＶＡベクターである実施形態３２に記載の方法である。
実施形態３５は、ブースターワクチンが、プライマーワクチンが初期投与されてから約８〜１２週間後に最初に投与され、プライマーワクチンが初期投与された後、約２４週目に再投与される実施形態２５に記載の方法である。
実施形態３６は、プライマーワクチンがさらに、免疫原的有効量の該単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドを含むものであり、該単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが同じ組成物または別々の組成物に存在する実施形態３５に記載の方法である。
実施形態３７は、１または２以上の該発現ベクターが、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチド配列（好ましくは、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むもの）をコードしているｒＡｄ２６ベクターであり；該単離された抗原性ポリペプチドがＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（好ましくは、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むもの）であり；１または２以上の該さらなる発現ベクターが、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチド配列（好ましくは、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むもの）をコードしているｒＡｄ２６またはＭＶＡベクターである実施形態３４〜３５のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態３８は、１または２以上の該発現ベクターが、配列番号：１、３および４のＨＩＶ抗原性ポリペプチド配列をコードしているｒＡｄ２６ベクターであり；１または２以上の該さらなる発現ベクターが、配列番号：１、３および４のＨＩＶ抗原性ポリペプチド配列をコードしているｒＡｄ２６ベクターである実施形態３７に記載の方法である。
実施形態３９は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって：
（ｉ）該対象に、配列番号：１、３および４のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のｒＡｄ２６発現ベクターと薬学的に許容され得る担体とを含むプライマーワクチンを投与すること；ならびに
（ｉｉ）該対象に、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含む免疫原的有効量の単離されたＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と薬学的に許容され得る担体とを含むブースターワクチンを投与すること
を含むものであり；
ここで、該ブースターワクチンは、該プライマーワクチンが投与された後に投与される
方法である。
実施形態４０は、ブースターワクチンが、アジュバント、好ましくはアルミニウム塩、より好ましくはリン酸アルミニウムを含むものである実施形態３９に記載の方法である。
実施形態４１は、ブースターワクチン中の単離されたＨＩＶエンベロープ糖タンパク質が配列番号：５のアミノ酸配列を含むものである実施形態３９または４０に記載の方法である。
実施形態４２は、配列番号：１、３および４のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のｒＡｄ２６発現ベクターと薬学的に許容され得る担体とを含むものである第２のプライマーワクチンが、該対象に、工程（ｉ）の後であって工程（ｉｉ）の前に投与される実施形態３９〜４１のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態４３は、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列、好ましくは配列番号：５を含む免疫原的有効量の単離されたＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と薬学的に許容され得る担体とを含むものであるさらなるブースターワクチンが、該対象に、工程（ｉｉ）の後に投与される実施形態３９〜４２のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態４４は、配列番号：５のアミノ酸配列を含むものである単離されたＨＩＶエンベロープ糖タンパク質の免疫原的有効量が２５０μｇである実施形態３９〜４３のいずれか一つに記載の方法である。
実施形態４５は、配列番号：１、３および４のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のｒＡｄ２６発現ベクターが３種類のｒＡｄ２６ベクターからなるものであり、該ベクターのうち第１ベクターは、配列番号：１のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしており、第２ベクターは、配列番号：３のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしており、第３ベクターは、配列番号：４のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしており、該３種類のｒＡｄ２６発現ベクターは５×１０１０ｖｐの総用量で投与される実施形態３９〜４４のいずれか一つに記載の方法である。
本発明の以下の実施例は、本発明の性質をさらに例示するためのものである。以下の実施例は本発明を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって決定されることは理解されよう。
実施例１．非ヒト霊長類でのＨＩＶワクチンレジメンの試験．
継続的な開発の進展ための多価ＨＩＶ−１ワクチンレジメンを特定するための動物試験を実施した。この試験では、２回のプライム免疫処置（０週目と１２週目）および１回目のブースト免疫処置（２４週目）を使用する長期ワクチン接種スケジュールを試験した。２回目のブースト免疫処置は５２週目に投与した。特に、この試験では、アデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターとエンベロープ糖タンパク質との組合せを異種ワクチン組合せ物において使用する影響を試験した。体液性および細胞性の免疫学的応答を、ワクチン接種した非ヒト霊長類（「ＮＨＰ」とも称する）で試験した。
ワクチン接種および実験計画
アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）（ＮＨＰ）に、各々１２匹の動物の２つの対照群（グループＩおよびＶＩ）に加えて、１群あたり１２匹の動物（グループＩＩ〜Ｖ）で４種類の異なるワクチンプラットフォームを用いて、ワクチン接種した。第１対照群（グループＩ）には、ＨＩＶ−１モザイクＥｎｖ１（配列番号：１）、モザイクＧａｇＰｏｌ１（配列番号：（SEQ ID：NO）３）およびモザイクＧａｇＰｏｌ２（配列番号：４）遺伝子を発現するＡｄ２６ベクターのプライマーワクチンおよびブースターワクチンを、単離されたＨＩＶ抗原性タンパク質を全くなしで投与した。Ａｄ２６ベクターは、それぞれ、“Ａｄ２６．ｍｏｓ１Ｅｎｖ、Ａｄ２６．ｍｏｓ１Ｇａｇ−ＰｏｌおよびＡｄ２６．ｍｏｓ２Ｇａｇ−Ｐｏｌと称するものであり、集合的に「Ａｄ２６ｍｏｓ」と称する。第２対照群（グループＶＩ）には、プラセボ（「偽（sham）」）のプライマーワクチンおよびブースターワクチンのみを投与した。
グループＶＩを除くすべての群に、２回のプライマーワクチンをＡｄ２６ｍｏｓにより０週目と１２週目に、その後、１回目のブースターワクチンを２４週目に投与した。後続のブースターワクチンは５２週目に投与した。
特に、グループＩＩには、Ａｄ２６ｍｏｓの２回のプライマーワクチン、その後、アジュバントのリン酸アルミニウムを加えた２５０μｇのクレードＣ Ｅｎｖ ｇｐ１４０三量体タンパク質（配列番号：５）による２回のブースターワクチン（以下、本明細書において「ｇｐ１４０薬物製剤品」または「ｇｐ１４０ ＤＰ」と称する）を投与した。グループＩＩＩには、Ａｄ２６ｍｏｓの２回のプライマーワクチン、その後、共送達したＡｄ２６ｍｏｓとｇｐ１４０ ＤＰによる２回のブースターワクチンを投与した。グループＩＶには、Ａｄ２６ｍｏｓの２回のプライマーワクチン、その後、２種類の異なるＭＶＡベクターを含む組成物による２回のブースターワクチンを投与し、一方のＭＶＡベクターは、モザイクＥｎｖ１遺伝子（配列番号：１）とモザイクＧａｇＰｏｌ１遺伝子（配列番号：３）を発現するものであり、他方のＭＶＡベクターは、モザイクＥｎｖ２遺伝子（配列番号：２）とモザイクＧａｇＰｏｌ２遺伝子（配列番号：４）を発現するものであり、該遺伝子はベクター上の別の位置に存在させた。ＭＶＡベクターは「ＭＶＡ．ｍｏｓ１Ｅｎｖ／Ｇａｇ−Ｐｏｌ」および「ＭＶＡ．ｍｏｓ２Ｅｎｖ／Ｇａｇ−Ｐｏｌ」と称するものであり、集合的に「ＭＶＡｍｏｓ」と称する。グループＶには、Ａｄ２６ｍｏｓの２回のプライマーワクチン、その後、共送達したＭＶＡｍｏｓとｇｐ１４０ ＤＰによる２回のブースターワクチンを投与した。ＮＨＰで試験したワクチンレジメンを以下の表１Ａにまとめる。
以下の初期コアアッセイ実験、例えば、ＥＬＩＳＡ結合抗体アッセイ、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイおよびＥＬＩＳＰＯＴアッセイを、表１Ａに記載のレジメンに従って処置したＮＨＰからプライマーワクチンの初期投与後、２８週目および／または５４／５６週目に採取した試料で行った。サル／ヒト免疫不全ウイルス（ＳＨＩＶ）抗原刺激実験は７２週目に行う。
ＥＬＩＳＡ結合抗体（Ａｂ）アッセイ
ＨＩＶ−１特異的体液性応答を２８週目と５６週目に、変形した酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。９６ウェル平底プレート（Ｎｕｎｃ）の１つの列のウェルを、１０μｇのクレードＣ（Ｃ９７ＺＡ．０１２）ｇｐ１４０コーティングタンパク質（配列番号：５）、または１０μｇのモザイク１タンパク質（配列番号：６）（１０ｍＬの１×ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で希釈）により１００μＬ／ウェルでコートし、４℃で一晩インキュベートした。以前の試験からの陽性の公知血清試料を陽性対照として使用し、ワクチン接種前の血清試料を陰性対照として使用した。
プレートのウェルを、２００μＬのＥＬＩＳＡ Ｗａｓｈ（１０００ｍＬのＰＢＳ（１×）と０．５ｍＬのＴｗｅｅｎ ２０（Ｓｉｇｍａ））で１回洗浄した。ウェルを２５０μＬのブロッキング溶液（ブロッキング剤カゼイン含有ＰＢＳ（Ｐｉｅｒｃｅ））でブロックし、室温で３〜４時間インキュベートした。インキュベーション後、ブロッキング溶液を廃棄した。次いで、１５０μＬのブロッキング溶液と６μＬの血清試料を各プレートの第１列に、および１００μＬのブロッキング溶液を他のすべてのウェルに添加した。次いで、５０μＬを１００μＬのブロッキング溶液に加える連続希釈をプレート全体において行い、５０μＬを最後の列から廃棄し、各ウェルが１００μＬの試料を有するようにした。プレートを室温で１時間インキュベートした。ウェルの内容物を廃棄し、次いで、ウェルを２００μＬのＥＬＩＳＡ Ｗａｓｈで３回洗浄した。
次いで、１００μＬの１：２０００の二次抗体Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ）（ブロッキング溶液中）を各ウェルに添加した。プレートを室温で１時間、再度インキュベートし、ＥＬＩＳＡ Ｗａｓｈで３回洗浄した。ウェルを、１００μＬのＳｅｒｕＢｌｕｅ ＴＭＢ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＫＰＬ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で発色させ、０．５分後、１００μＬのＴＭＢ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＫＰＬ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）で発色を停止させた。
プレートの読み取りをＥＬＩＳＡプレートリーダーにて、４５０ｎｍおよび５５０ｎｍで行った（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ−ＶｅｒｓａｍａｘおよびＳｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏ ４．７．１ソフトウェア）。ＥＬＩＳＡ ＥＣ９０力価を以下の式（Ｉ）を用いて計算し、ここで、変数は、ＳｏｆｔＭａｘＰｒｏによって作成した４パラメータ曲線フィッティングにより誘導した：
式中、Ｈは傾きを表し、Ｆは応答パーセントを表す。
データの統計解析を、対照とのノンパラメトリック比較によりジョイントランキングのためのＤｕｎｎ法を用いて行い、それぞれ、最も高い幾何平均力価を有する群を対照と規定した。
クレードＣ ｇｐ１４０（Ｃ９７）およびモザイク１（Ｍｏｓ１）のＥＬＩＳＡアッセイ実験の結果を図１Ａ（２８週目）および図１Ｂ（５６週目）にまとめる。Ｃｌａｄｅ Ｃ ｇｐ１４０ Ｅｎｖおよびモザイク１ Ｅｎｖ抗原は、バイアスなしの良好な相関を示した（データ未記載）。
抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイ
機能性非中和抗体応答を、処置ＮＨＰから２８週目に採取した血清試料から精製した免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体を用いて測定した。ＩｇＧは、Ｍｅｌｏｎ Ｇｅｌカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて精製し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて定量した。ＡＤＣＰアッセイは、Ackerman et al．（2011）（臨床抗体試料の貪食活性を測定するためのロバストなハイスループットアッセイ．J．Immunol．Methods 366，8-19）（これは引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のとおりに行った。
より具体的には、クレードＣ（Ｃ９７）Ｅｎｖ（配列番号：５）およびモザイクＭ（ｍｏｓ １）（配列番号：６）Ｅｎｖのビオチン化抗原を１μｍの黄緑色蛍光ニュートラアビジンビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに一晩インキュベートした。次いで、ビーズを洗浄し、１：１００の最終希釈度でリン酸緩衝生理食塩水−ウシ血清アルブミン（ＰＢＳ−ＢＳＡ）中に再懸濁させた。血清試料から精製した抗体と９×１０５個の抗原標識ビーズを丸底９６ウェルプレート内で混合し、プレートを２時間インキュベートした。次いで、急性骨髄性白血病に由来するヒト単核球細胞（ＴＨＰ−１細胞；２×１０４細胞）を各ウェルに２００μＬの最終容量で添加し、プレートを一晩インキュベートした。
翌日、培養液の容量の半分を除去して１００μＬの４％パラホルムアルデヒドと交換した後、プレートを、ＨＴＳプレートリーダーを備えたＢＤ ＬＳＲ ＩＩ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで解析した。解析のため、試料を生細胞においてゲーティングし、ＴＨＰ−１細胞が貪食したビーズの割合を測定した。貪食スコアを以下のとおりに計算した：（陽性ビーズのパーセント）に（陽性ビーズの平均蛍光（fluorescense）強度）を乗算。
ＡＤＣＰアッセイの２８週目に得られた結果を図２にまとめる。この図は個々の動物の貪食応答スコアを示す。データの統計解析を、ノンパラメトリック比較によりすべてのペアについて、ジョイントランキングのためのＤｕｎｎ法を用いて行った。
クレードＣ ｇｐ１４０ ＥｎｖおよびモザイクＭ Ｅｎｖの抗原はバイアスなしの良好な相関を示した。これは、上記のＥＬＩＳＡアッセイおよび後述する中和抗体（ｎＡｂ）アッセイの結果と整合している。
中和抗体（ｎＡｂ）アッセイ
ティア１ ＨＩＶ−１ Ｅｎｖ偽（sham）ウイルスに対する中和抗体（ｎＡｂ）応答を、ルシフェラーゼベースのウイルス中和アッセイを用いてＴＺＭ．ｂｌ細胞において測定した。具体的には、ティア１パネルのウイルスには、ＭＷ９６５．２６（クレードＣ）、ＳＦ１６２．ＬＳ（クレードＢ）、ＭＮ−３（クレードＡ）、ＤＪ２６３．８（クレードＡ）およびＢａＬ．２６（クレードＢ）を含めた。
簡単には、９６ウェル平底プレートを、ＮＨＰから５６週目に採取した血清試料でコートし、１００μＬの１０％ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で血清試料の３倍希釈物を調製した。次いで、２００ ＴＣＩＤ５０のウイルス（組織培養感染値量、または接種した培養細胞の５０％に病理学的変化をもたらす病原性因子の量）を各ウェルに５０μＬの容量で添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートした。次いで、ＴＺＭ．ｂｌ細胞を１×１０４細胞／ウェルで、１００μＬの容量の１０％ＤＭＥＭ含有ＤＥＡＥ−デキストラン（Ｓｉｇｍａ）中に１１μｇ／ｍＬの終濃度で添加した。
ＩＣ５０を、細胞対照の相対発光単位（ウイルスが存在しないＴＺＭ．ｂｌ細胞）を差し引いた後に未希釈ウイルス対照と比べたときの相対発光単位の５０％減少をもたらす血清希釈度として計算した。
ＮＨＰから５６週目に採取した試料におけるＭＷ９６５．２６（クレードＣ）、ＳＦ１６２．ＬＳ（クレードＢ）、ＭＮ−３（クレードＡ）、ＤＪ２６３．８（クレードＡ）およびＢａＬ．２６（クレードＢ）に対するＨＩＶ−１ティア１ ＴＺＭ−ｂｌ中和アッセイの結果を図３に示す。記号は個々の試験動物のｌｏｇ１０に変換したＩＤ５０力価を表し、群の幾何平均力価を横線で示している。ｎＡｂアッセイの結果はＥＬＩＳＡアッセイの結果と整合している。
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＨＩＶ−１特異的細胞性免疫応答を、Liu et al．，2009，Nature 457：87-91（これは引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に既報のＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって評価した。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイでは、包括的潜在的ヒトＴ細胞エピトープを包含するＨＩＶ−１潜在的Ｔ細胞エピトープ（ＰＴＥ）ペプチドプールを使用した。以前の試験では、細胞性免疫の幅の解析に、各抗原を包含する１０〜１６ペプチドのサブプールを使用し、その後、個々のペプチドを用いて、本質的には本発明者らがBarouch et al．，2010，Nat．Med．16：319-323［５４］（これは引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）において既報のとおりにエピトープマッピングした。エピトープ特異的ＣＤ８＋およびＣＤ４＋ Ｔリンパ球応答を、細胞枯渇試験によって測定した。
簡単には、処置ＮＨＰの免疫原性を、５４週目に採取した試料において、ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによりＰＴＥペプチドプールを用いて評価した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＰＴＥペプチドプールで刺激し、インキュベーション後、細胞を洗浄し、標識し、発色させてスポット形成細胞を可視化した。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果（１０６ ＰＢＭＣあたりの平均スポット形成単位（ＳＦＵ）として表示）を図４に示す。
試験の結論
上記の動物試験の結果によって示されるように、また、図１〜４にまとめているように、ｒＡｄベクターおよび／またはＭＶＡベクターと単離された抗原性ポリペプチドとをプライム−ブースト併用において組み合わせることは、霊長類において広範なＨＩＶ特異的体液性および細胞性免疫応答を生じさせるのに有用である。具体的には、霊長類において広範なＨＩＶ特異的体液性および細胞性免疫応答を生じさせる際において、ｇｐ１４０タンパク質を１または２以上のブースト免疫処置に組み込むことの有用性が実証された。さらに、試験したすべてのワクチンレジメンは、すべての免疫処置動物（グループＩＩ〜Ｖ）において免疫原性であることが示された。
特に、１または２以上のＨＩＶ−１抗原を発現する１または２以上のｒＡｄ２６ベクターを投与した（０週目と１２週目）後、２４週間と５２週間に、ｒＡｄ２６ベクターまたはＭＶＡベクターと単離されたクレードＣ ｇｐ１４０タンパク質でブースト免疫処置すると、ＥＬＩＳＡアッセイおよびＡＤＣＰアッセイの結果によって示されるように、ＨＩＶ−１に対する体液性応答の有効なブーストがもたらされた（図１Ａ、１Ｂおよび２、具体的には、グループＩＩＩ（「Ａｄ２６／Ａｄ２６＋Ｅｎｖ」と表示）およびグループＶ（「Ａｄ２６／ＭＶＡ＋Ｅｎｖ」と表示）参照）。さらに、１または２以上のｒＡｄ２６ベクターの投与、その後、２４週間と５２週間にクレードＣ ｇｐ１４０タンパク質ありまたはなしでのＭＶＡベクターでのブースト免疫処置では、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによる測定時、細胞性免疫応答を有意に増大させることができた（図４、具体的には、グループＩＶ（「Ａｄ２６／ＭＶＡ」と表示）およびグループＶ（「Ａｄ２６／ＭＶＡ＋Ｅｎｖ」と表示）参照）。
実施例２．ヒトでのＨＩＶワクチンレジメンの試験．
健常な非HIV感染成人の男性および女性において、以下の多施設無作為プラセボ対照並行群間比較二重盲検臨床試験：Phase 1/2a Study to Evaluate the Safety/Tolerability and Immunogenicity of Homologous Ad26 Mosaic Vector Vaccine Regimens or Ad26 Mosaic and MVA Mosaic Heterologous Vector Vaccine Regimens，with High-Dose，Low-Dose or no Clade C gp140 Protein Plus Adjuvant for HIV Prevention（ＨＩＶ予防に対する高用量，低用量または無クレードＣ ｇｐ１４０タンパク質＋アジュバントでの同種Ａｄ２６モザイクベクターワクチンレジメンまたはＡｄ２６モザイクとＭＶＡモザイクの異種ベクターワクチンレジメンの安全性／耐容性および免疫原性を評価するためのフェーズ１／２ａ試験）を実施する。この試験は進行中である。
総括的根拠
試験は、７つのプライム−ブーストワクチンレジメンの安全性／耐容性および免疫原性を評価するために行う。対象には４回の試験用量ワクチンを投与する：Ａｄ２６ｍｏｓまたはプラセボを０週目と１２週目に投与し；Ａｄ２６ｍｏｓまたはＭＶＡｍｏｓを、ともに糖タンパク質１４０薬物製剤品（低用量もしくは高用量）ありもしくはなしで、またはプラセボのみを２４週目と４８週目に投与する。
使用した試験ワクチンは、以下のとおりのＡｄ２６ｍｏｓ、ＭＶＡｍｏｓおよびｇｐ１４０ ＤＰである（また、実施例１も参照のこと）：
（ｉ）Ａｄ２６ｍｏｓは、同じバイアルにて提供される以下の３種類のワクチン製剤品：それぞれ、ＨＩＶ−１モザイクＥｎｖ１（配列番号：１）、モザイクＧａｇＰｏｌ１（配列番号：３）およびモザイクＧａｇＰｏｌ２（配列番号：４）遺伝子を発現するＡｄ２６．Ｍｏｓ１Ｅｎｖ、Ａｄ２６．Ｍｏｓ１Ｇａｇ−ＰｏｌおよびＡｄ２６．Ｍｏｓ２Ｇａｇ−Ｐｏｌで構成されており、２：１：１の比で投与され；
（ｉｉ）ＭＶＡｍｏｓは、別々のバイアルにて提供される以下の２種類のワクチン製剤品：ＭＶＡ−Ｍｏｓａｉｃ１（配列番号：１と３を有するＭｏｓａｉｃ１ ＨＩＶ−１ Ｇａｇ、ＰｏｌおよびＥｎｖタンパク質を発現するＭＶＡウイルス）とＭＶＡ−Ｍｏｓａｉｃ２（配列番号：２と４を有するＭｏｓａｉｃ２ ＨＩＶ−１ Ｇａｇ、ＰｏｌおよびＥｎｖタンパク質を発現するＭＶＡウイルス）で構成されており、１：１の比で投与され；
（ｉｉｉ）ｇｐ１４０薬物製剤品は、ｇｐ１４０を産生するように構築された形質転換ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞株によって産生させたＨＩＶ−１クレードＣ糖タンパク質１４０（配列番号：５を有する組換え三量体型ｇｐ１４０）を含むものである。この試験では、ｇｐ１４０薬物製剤品に、リン酸アルミニウムをアジュバントとして加え、この添加されたｇｐ１４０薬物製剤品を単に「ｇｐ１４０ ＤＰ」と称する。
目的
この試験の主目的は、（１）Ａｄ２６ｍｏｓ、ＭＶＡｍｏｓおよび／またはｇｐ１４０ ＤＰ成分を含む種々のプライム−ブーストレジメンの安全性／耐容性を評価すること；ならびに（２）異なるワクチンレジメン間のＨＩＶ Ｅｎｖ結合抗体応答を比較することを含む。
この試験の二次的目的は、他の抗体結合、抗体のエフェクター機能および抗体の特性評価ならびに細胞応答の評価することを含む。
この試験の探索的（exploratory）目的は、（１）異なるワクチンレジメンに対する免疫応答をサブセットの対象の粘膜分泌物において調べること；（２）異なるワクチンレジメン間の遺伝子発現パターンを調べること；および（３）Ａｄ２６ベクターに対する中和抗体を調べることを含む。
ワクチン接種および実験計画
この試験は、４８週間のワクチン接種期間（この期間中、対象には、ベースライン（０週目）、１２週目および２４週目、ブースターを４８週目にワクチン接種する）と、９６週目の最終来院までの４８週間の追跡期間を含む。ワクチン接種は表１Ｂに示したとおりに投与し、血液試料を指定の治験来院時に採取し、免疫応答を評価する。
長期の追跡期間（９６週目の後、およそ２年間）を、２８週目のデータの解析に基づいて今後の試験のために後に選択された対象（レジメンに無作為化する）について継続する。２８週目のデータが完結的でない場合は、５２週目のデータをレジメン選択に考慮する。明白な決定ができない場合は、免疫応答の持続性を評価する目的で、この長期追跡期間に１つより多くの群の対象を含めてもよい。試験の終了は最後の対象の最終来院である。
投薬量および投与
対象には、試験用量ワクチンを４つの時間点で無作為化により、０週目の１日目、１２週目および２４週目と、ブースターを４８週目に三角筋への筋肉内注射による投与によって投与する。１回だけの注射の来院（すなわち、０週目と１２週目）では、いずれかの三角筋が注射に使用され得る。２種類の試験ワクチン注射を１回の来院時に投与する場合は（すなわち、２４週目と４８週目）、異なる三角筋が各注射で使用される（医学的指示がある場合は例外を認める）。試験ワクチンおよび投与される用量は以下のとおりである：
（ｉ）Ａｄ２６ｍｏｓ（Ａｄ２６．Ｍｏｓ１Ｅｎｖ＋Ａｄ２６．Ｍｏｓ１Ｇａｇ−Ｐｏｌ＋Ａｄ２６．Ｍｏｓ２Ｇａｇ−Ｐｏｌ）：
総用量は０．５ｍＬの注射につき５×１０１０ウイルス粒子（ｖｐ）である
（ｉｉ）ＭＶＡｍｏｓ（ＭＶＡ−Ｍｏｓａｉｃ１＋ＭＶＡ−Ｍｏｓａｉｃ２）：
総用量は０．５ｍＬの注射につき１０８プラーク形成単位（ｐｆｕ）である
（ｉｉｉ）ｇｐ１４０ ＤＰ：
低用量：０．５ｍＬの注射につき５０μｇの総タンパク質を有し、薬局でリン酸アルミニウムアジュバント（０．４２５ｍｇのアルミニウム）と混合されたｇｐ１４０ ＤＰ
高用量：０．５ｍＬの注射につき２５０μｇの総タンパク質を有し、薬局でリン酸アルミニウムアジュバント（０．４２５ｍｇのアルミニウム）と混合されたｇｐ１４０ ＤＰ
（ｉｖ）プラセボ：
０．９％生理食塩水，０．５ｍＬの注射
免疫原性の評価
体液性免疫応答を評価するためのアッセイ、例えば限定されないが：Ｅｎｖ特異的血清結合抗体アッセイ、ｎＡｂアッセイ、および抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイ、ならびにエピトープマッピングを行う（表２参照）。
細胞性免疫応答を評価するためのアッセイ、例えば限定されないが：ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色、およびマルチパラメータフローサイトメトリーを行う（表３参照）。
実施例３．ヒトでのＨＩＶワクチンレジメンのさらなる試験
健常ＨＩＶ非感染対象において、モザイクＨＩＶ抗原を発現するｒＡｄ２６ベクターと単離されたクレードＣ ｇｐ１４０三量体タンパク質での異なるワクチンスケジュールの安全性／耐容性および免疫原性を評価するため、ヒトにおいてさらなる臨床試験を行う。特に、実施例２に記載の試験と比べて短期のレジメンおよび低用量投薬のレジメンを試験する。ワクチンスケジュールの最適化により、完全スケジュールのコンプライアンスが向上し得る、および／または使用がより簡単になり、投与がより容易になり得る。
ワクチン接種および実験計画
年齢１８〜５０歳の健常ＨＩＶ非感染成人の男性および女性での単施設無作為化プラセボ対照並行群間比較二重盲検フェーズ１臨床試験を実施する。目標とする３６例のヒト対象がこの試験に参加している。対象を３つの群（グループ１〜３）に分け、１２例の対象を各群に無作為化する。各群の対象をさらに、２つの下位群：サブグループＡ（１０例の対象）とサブグループＢ（２例の対象）に無作為化している。サブグループＡの対象には試験ワクチンを投与し、サブグループＢの対象にはプラセボを投与する。対象は、ベースラインＡｄ２６の血清反応陽性に関係なく試験に登録されている。
この試験は、最長４８週間のワクチン接種期間と、７２週目までのワクチン接種後の追跡期間を含む。対象には、試験ワクチンまたはプラセボを、以下の表４のスケジュールに従って投与する。試験に使用するワクチン組成物の説明については実施例２を参照のこと。
グループ１は「基本ケース」レジメンを表し、これにより、この試験のデータの実施例２での試験へのブリッジングが可能になる。グループ１の対象には、４回のワクチン接種が０、１２、２４および４８週目に投与され、これは、実施例２での試験のグループ１の対象と同じ投薬スケジュールである（実施例２の表１Ｂ参照）。グループ２と３には、３回のワクチン接種を２４週間にわたって投与する（グループ２：０、１２および２４週目；グループ３：０、８および２４週目）。血液試料を指定の治験来院時に採取し、免疫応答を評価する。
より具体的には、グループ２は、「基本ケース」とは異なり、対象を４８週目での後期ブーストのためにクリニックに戻す必要性を省くことにより、より短期でより簡便なレジメンで調べる。
グループ３では、ｒＡｄ２６ベクターが、完全レジメンと定性的に同様の応答でプライムするが、２４週目の後、２回目のワクチン接種での付加的用量のｇｐ１４０ ＤＰによって「基本ケース」レジメンよりも優れた免疫原性レベルを達成する能力を調べる。
中間解析（盲検）は、すべての対象が２８週目の来院を終えるか、または早期の中止があったら行う。主要解析（非盲検）は、すべての対象が５２週目の来院を終えるか、または早期の中止があったら行う。最終解析は、すべての対象が７２週目の最後の治験来院を終えたら行う。
実施例４．ヒトでのＨＩＶワクチンレジメンのさらなる試験
また、健常ＨＩＶ非感染対象において、ＭＶＡベクターとクレードＣ ｇｐ１４０三量体タンパク質での異なるワクチンスケジュールの安全性／耐容性および免疫原性も評価するため、ヒトでのさらなる臨床試験を行い、この場合、実施例２での試験と比べて短期の投薬レジメンおよび低用量を有するレジメンを試験する。対象には、試験ワクチンまたはプラセボを、以下の表５のスケジュールに従って投与する。試験に使用するワクチン組成物は実施例２に記載のとおりである。試験参加者は、実施例３での試験で上記のとおりに無作為化する。
第１群（グループ１）は、この場合も「基本ケース」レジメンを表し、これにより、この試験のデータの実施例２での試験へのブリッジングが可能になる。対象には、４回のワクチン接種が０、１２、２４および４８週目に投与され、これは、実施例２での試験のグループ４の対象と同じ投薬スケジュールである（実施例２の表１Ｂ参照）。その他の群（グループ２と３）には、短期レジメンを投与し、０、８または１２および２４週目にワクチン接種する。この試験でのプライムはＡｄ２６ベクターによるものであり、ブーストはＭＶＡベクターによるものである。このようなレジメンの考えられ得る利点としては、グループ１でのレジメン（全４８週間）と比べて短期間（全２４週間）により簡便性が大きいことが挙げられる。血液試料を指定の治験来院時に採取し、免疫応答を評価する。
本明細書に記載の実施例および実施形態は例示の目的のためのものにすぎないこと、および上記の実施形態に対してその広い発明思想から逸脱することなく変更がなされ得ることは理解されよう。したがって、本発明は、開示した特定の実施形態に限定されるのではなく、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の趣旨および範囲内の変形例を包含していることが意図されていることが理解されよう。
本発明は以下を提供する。
［１］
（ｉ）１または２以上のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物；
（ｉｉ）免疫原的有効量の単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物；ならびに
（ｉｉｉ）１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクター
を含むものであり、
ここで、前記第１組成物および前記第２組成物のうち一方はプライム免疫処置のためのものであり、他方の組成物はブースト免疫処置のためのものであり、前記免疫原的有効量の前記さらなる発現ベクターは前記第２組成物に、またはプライムもしくはブースト免疫処置のための前記第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在している、
ＨＩＶに対する免疫応答を対象において誘導するためのワクチン組合せ物。
［２］
前記単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質、好ましくはＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含み、前記１または２以上の発現ベクターおよび前記１または２以上のさらなる発現ベクターがアデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターである、［１］に記載のワクチン組合せ物。
［３］
前記１または２以上の発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、前記１または２以上のさらなる発現ベクターがＭＶＡベクターであるか、または前記１または２以上の発現ベクターがＭＶＡベクターであり、前記１または２以上のさらなる発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、好ましくは、前記１または２以上の発現ベクターおよび前記１または２以上のさらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているものであり、好ましくは、前記１または２以上の発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターであり；前記単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むものであり；前記１または２以上のさらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターである、［２］に記載のワクチン組合せ物。
［４］
前記第１組成物が前記プライム免疫処置のためのものであり、前記第２組成物および前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなる発現ベクターが前記ブースト免疫処置のためのものである、［３］に記載のワクチン組合せ物。
［５］
前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなる発現ベクターが前記第３組成物に存在している、［４］に記載のワクチン組合せ物。
［６］
前記第１組成物が、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；前記単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが、配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含み；前記第３組成物が、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する４種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターを含むものである、［１］から［５］のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物。
［７］
前記第１組成物が前記免疫応答をプライムするために使用され、前記第２組成物および前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなる発現ベクターが前記免疫応答をブーストするために使用される、ＨＩＶ感染に対する防御免疫応答の生成に使用するための［１］から［６］のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物。
［８］
［１］から［７］のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物を含むキット。
［９］
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって：
（ｉ）前記対象に、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物を投与すること；
（ｉｉ）前記対象に、免疫原的有効量の単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物を投与すること；ならびに
（ｉｉｉ）前記対象に、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクターを投与すること
を含むものであり、
ここで、工程（ｉ）および（ｉｉ）はいずれかの順序で行われ、前記工程のうち一方はプライム免疫処置のため、他方はブースト免疫処置のためのものであり、前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなる発現ベクターは前記第２組成物に、または前記プライムもしくは前記ブースト免疫処置のための前記第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在する、方法。
［１０］
前記単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質、好ましくはＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含み、前記１または２以上の発現ベクターおよび前記１または２以上のさらなる発現ベクターがアデノウイルスベクターまたはＭＶＡベクターである、［９］に記載の方法。
［１１］
前記１または２以上の発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、前記１または２以上のさらなる発現ベクターがＭＶＡベクターであるか、または前記１または２以上の発現ベクターがＭＶＡベクターであり、前記１または２以上のさらなる発現ベクターがｒＡｄ２６ベクターであり、好ましくは、前記１または２以上の発現ベクターおよび前記１または２以上のさらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているものであり、好ましくは、前記１または２以上の発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターであり；前記単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列を含むものであり；前記１または２以上のさらなる発現ベクターが、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターである、［１０］に記載の方法。
［１２］
前記第１組成物が前記プライム免疫処置のためのものであり、前記第２組成物および前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなる発現ベクターが前記ブースト免疫処置のためのものである、［１１］に記載の方法。
［１３］
前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなる発現ベクターが前記第３組成物に存在している、［１２］に記載の方法。
［１４］
前記第１組成物が、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；前記単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドが、配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含み；前記第３組成物が、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する４種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているＭＶＡベクターを含むものである、［９］から［１３］のいずれか一項に記載の方法。
［１５］
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導する方法であって：
（ｉ）前記対象に、１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上の発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むプライマーワクチンを投与すること；ならびに
（ｉｉ）前記対象に、免疫原的有効量の単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチド、１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなる発現ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むブースターワクチンを投与すること
を含むものであり；
ここで、前記単離されたＨＩＶ抗原性ポリペプチドおよび前記１または２以上のさらなる発現ベクターは同じ組成物または別々の組成物に存在しており；前記ブースターワクチンは、前記プライマーワクチンが投与された後に投与される、方法。
参考文献
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Claims (19)

  1. （ｉ）配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のアデノウイルス２６（ｒＡｄ２６）ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物；
    （ｉｉ）免疫原的有効量の単離されたＨＩＶエンベロープポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物、ここで、前記単離されたＨＩＶエンベロープポリペプチドは、配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体および配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体の少なくとも一つを含む；ならびに
    （ｉｉｉ）配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなるアデノウイルス２６（ｒＡｄ２６）ベクター
    を含むものであり、
    ここで、前記第１組成物はプライム免疫処置のためのものであり、前記第２組成物はブースト免疫処置のためのものであり、前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターは前記第２組成物に、またはブースト免疫処置のための前記第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在している、
    ワクチン組合せ物。
  2. 前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターが前記第３組成物に存在している、請求項１に記載のワクチン組合せ物。
  3. 前記第１組成物が、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；前記単離されたＨＩＶエンベロープポリペプチドが、配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含み；前記第３組成物が、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものである、請求項１または２に記載のワクチン組合せ物。
  4. ＨＩＶ感染に対する防御免疫応答の生成に使用するための請求項１から３のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物。
  5. 請求項１から４のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物を含むキット。
  6. ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するためのワクチン組合せ物であって、前記ワクチン組合せ物が：
    （ｉ）配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のアデノウイルス２６（ｒＡｄ２６）ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含む第１組成物；
    （ｉｉ）免疫原的有効量の単離されたＨＩＶエンベロープポリペプチドおよび薬学的に許容され得る担体を含む第２組成物、ここで、前記単離されたＨＩＶエンベロープポリペプチドは、配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体および配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体の少なくとも一つを含む；ならびに
    （ｉｉｉ）配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなるアデノウイルス２６（ｒＡｄ２６）ベクター
    を含むものであり、
    ここで、前記第１組成物はプライム免疫処置のためのものであり、前記第２組成物はブースト免疫処置のためのものであり、前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターは前記第２組成物に、またはブースト免疫処置のための前記第２組成物と一緒に投与される第３組成物に存在している、ワクチン組合せ物。
  7. 前記免疫原的有効量の前記１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターが前記第３組成物に存在している、請求項６に記載のワクチン組合せ物。
  8. 前記第１組成物が、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；前記単離されたＨＩＶエンベロープポリペプチドが、配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含み；前記第３組成物が、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものである、請求項６または７に記載のワクチン組合せ物。
  9. ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を、それを必要とする対象において誘導するためのワクチン組合せ物であって、前記ワクチン組合せ物が：
    （ｉ）配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のｒＡｄ２６ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むプライマーワクチン；ならびに
    （ｉｉ）免疫原的有効量の配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含む単離されたＨＩＶ ｇｐ１４０ポリペプチド、配列番号：１〜４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１または２以上のさらなるＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしている免疫原的有効量の１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターおよび薬学的に許容され得る担体を含むブースターワクチン
    を含むものであり；
    ここで、前記単離されたＨＩＶ ｇｐ１４０ポリペプチドおよび前記１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターは別々の組成物に存在しており；前記ブースターワクチンは、前記プライマーワクチンが投与された後に投与される、ワクチン組合せ物。
  10. 前記免疫原的有効量の単離されたＨＩＶ ｇｐ１４０ポリペプチドが配列番号：６のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体をさらに含む、請求項９に記載のワクチン組合せ物。
  11. 前記プライマーワクチンが、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものであり；前記単離されたＨＩＶ ｇｐ１４０ポリペプチドが、配列番号：５のアミノ酸配列を有するＨＩＶ ｇｐ１４０の安定化三量体を含み；前記ブースターワクチンが、配列番号：１、配列番号：３および配列番号：４のアミノ酸配列を有する３種類のＨＩＶ抗原性ポリペプチドをコードしているｒＡｄ２６ベクターを含むものである、請求項９または１０に記載のワクチン組合せ物。
  12. プライマーワクチンが、プライマーワクチンが初期投与されてから約１０〜１４週間後に再投与され、ブースターワクチンが、プライマーワクチンが初期投与されてから約２２〜２６週間後に最初に投与され、ブースターワクチンが対象に再投与されるものである、請求項９〜１１のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物。
  13. 第１組成物と第３組成物とが同一である、請求項１、２、６または７に記載のワクチン組合せ物。
  14. ブースターワクチン中の単離されたＨＩＶ ｇｐ１４０ポリペプチドが、ブースターワクチン中の１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターとは別の組成物に存在する、請求項９〜１２のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物。
  15. プライマーワクチンと、１または２以上のさらなるｒＡｄ２６ベクターを含む別個の組成物とが同一である、請求項１４に記載のワクチン組合せ物。
  16. 第２組成物がアジュバントをさらに含む、請求項１〜４、６〜８および１３のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物または請求項５に記載のキット。
  17. ブースターワクチン中の免疫原的有効量の単離されたＨＩＶ ｇｐ１４０ポリペプチドを含む組成物がアジュバントをさらに含む、請求項９〜１２、１４〜１５のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物。
  18. 各組成物またはワクチンが筋肉内注射により投与される、請求項６〜１７のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物。
  19. 各ｒＡｄ２６ベクターが複製欠損である、請求項１〜４、６〜１８のいずれか一項に記載のワクチン組合せ物または請求項５または１６に記載のキット。
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