CN112121160A - 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物 - Google Patents

诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN112121160A
CN112121160A CN202011101485.5A CN202011101485A CN112121160A CN 112121160 A CN112121160 A CN 112121160A CN 202011101485 A CN202011101485 A CN 202011101485A CN 112121160 A CN112121160 A CN 112121160A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
composition
hiv
leu
lys
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011101485.5A
Other languages
English (en)
Inventor
D·巴罗什
J·斯海特马克
M·G·帕乌
D·范马嫩
F·托马卡
J·A·亨德里克斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Janssen Vaccines and Prevention BV
Beth Israel Deaconess Medical Center Inc
Original Assignee
Janssen Vaccines and Prevention BV
Beth Israel Deaconess Medical Center Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Vaccines and Prevention BV, Beth Israel Deaconess Medical Center Inc filed Critical Janssen Vaccines and Prevention BV
Publication of CN112121160A publication Critical patent/CN112121160A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/24043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明描述了诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)感染的保护性免疫性的组合物、疫苗和方法。一或多个病毒表达载体与分离的抗原性多肽的异源疫苗组合诱导针对一或多个HIV进化枝感染的强力保护性免疫性。

Description

诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组 合物
本申请是2015年09月24日提交的题为“诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物”的中国专利申请201580063229.2的分案申请。
相关申请的交叉参考
本申请根据35U.S.C.§119(e)有权要求2014年9月26日申请的美国临时专利申请号62/056,059的优先权，所述申请以其全文并入本文作参考。
关于联邦资助研究或开发的声明
本发明受国立卫生研究院(National Institutes of Health)基金号AI078526和AI096040的政府支持而完成。政府对本发明具有一定权利。
关于电子形式提交的序列表
本申请包含序列表，其电子方式作为ASCII格式化序列表通过EFS-Web提交，文件名为“688097-53WO Sequence Listing”，生成日期为2015年9月15日，文件大小为47kB。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分且以其全文并入本文作参考。
发明领域
本发明涉及诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)感染的保护性免疫性的组合物、疫苗和方法。特别地，本发明涉及一或多个病毒表达载体与分离的抗原性多肽的异源疫苗组合以诱导针对一或多个HIV进化枝感染的保护性免疫性。
发明背景
人免疫缺陷病毒(HIV)影响世界上数百万人，HIV的预防即使在普遍的抗逆转录病毒治疗的时代也是高度优选的。在美国，疾病控制中心(CDC)估计所有HIV阳性美国人大约1/5未察觉其状态，这小部分人群每年传播一半新感染病例[2]。在世界范围内，迅速诊断和治疗的缺口很大。在2010年末，世界范围估计3千4百万人感染HIV，比2001年增加17％。尽管在撒哈拉以南非洲地区大多数新HIV感染持续发生，但是CDC估计在美国在2008-2011年期间HIV感染的年发生率保持稳定在大约15-16/100,000，每年有超40,000个新感染案例。因此，优先考虑的紧迫的全球健康问题是发现一种安全且有效的HIV疫苗，其将在诊断之前预防HIV感染或者削弱其初始影响，包括破坏肠道CD4集合[3]及传播的高风险[4]。
预期完全有效的疫苗能激发有效的细胞应答以及能中和不同进化枝的HIV-1变体的广泛中和抗体。
此外，近来的临床研究表明非中和Env特异性抗体可具有与亚型特异性抗体功能相关的一些保护性能力[9]。广泛中和抗体针对病毒包膜中的高度保守区域。直至最近，大多数抗HIV疫苗均使用纯化的HIV抗原性蛋白质，如以可溶形式存在的gp160、gp41或gp120。大多数基于包膜蛋白(Env)的免疫原是单体包膜分子，其激发结合抗体，而不是有效的中和抗体。这部分是由于中和抗体识别病毒包膜蛋白的天然三聚体结构上的三级和四级表位所致。此外，大多数基于单体Env的免疫原不诱导细胞介导的应答。据报导HIV-1 Env的稳定化三聚体在体内诱导针对HIV-1的广泛中和抗血清。见例如US 2012/0045472。
已经证实活的减毒疫苗在人体中及在非人灵长类动物(NHP)中针对某些病毒疾病是高效的，例如活的减毒的基于猿猴免疫缺陷病毒(SIV)的疫苗预防SIV感染。不幸地，由于与活的减毒HIV相关的安全性风险，这种策略不适用于HIV人体疫苗。
为了激发有效的细胞应答和广泛中和抗体，重组载体用于在体内表达HIV抗原性蛋白的基因作为活的减毒病毒疫苗的备选。已经探究了无复制能力的重组病毒载体作为疫苗及其它类型基因治疗的应用。特别地，对无复制能力的重组腺病毒载体、特别是腺病毒血清型2和5(Ad2和Ad5)的基因输送应用包括免疫接种已经广泛进行了研究。尽管这种基于无复制能力的Ad5载体疫苗已经示出在多种动物模型中激发保护性免疫应答，但是基于重组Ad5载体的HIV疫苗及其它病原体的用途在人群中受到Ad5特异性中和抗体(NAb)的高血清阳性率的限制[17]。例如，在世界范围4,381个对象的血清阳性率研究中，观测到Ad5 Nab滴度几乎是普遍性的，在撒哈拉以南非洲地区呈现高滴度，大多数个体呈现出Ad5 Nab滴度>200[14]。
使用基于重组Ad5载体的疫苗已经进行了一些HIV-1疫苗效力试验。这些研究包括HVTN 502/STEP(Merck Ad5)、HVTN 503/Phambili(Merck Ad5)和HVTN 505(NIH VRC DNA/Ad5)HIV-1疫苗效力试验。然而，利用非复制性Ad5和DNA/Ad5疫苗的所有这三种HIV-1疫苗效力研究示出无对抗HIV-1感染的效力。此外，与使用安慰剂相比，在用来自STEP研究的Merck Ad5疫苗接种的对象中观测到HIV-1感染增加的倾向。迄今为止使用无复制能力的载体如腺病毒血清型5作为HIV疫苗的尝试是令人失望的，在一些效力试验中未示出益处[5-8]。
关于Ad5载体安全性的关注，特别是来自STEP研究[8，10]，已经趋于探究来自供选血清型的生物学显著不同的Ad载体作为病毒疫苗载体[11-13]。Ad5的一个供选腺病毒血清型是腺病毒血清型26(Ad26)。Ad26在人体中是一种相对不常见的病毒，未知在任何其它物种中复制。在不同群体中关于腺病毒的许多调查已经示出其很少被分离，甚至当分离时也很少有相关症状。同样，实验性免疫示出极少的严重感染迹象。参见例如[14]及[27]-[43]。因此，从观察性研究中无迹象表明Ad26在健康成年人中导致临床症状，来自Ad26攻击研究的实验数据也提示肠道Ad26感染不产生症状[44]。复制缺陷的腺病毒载体rAd26在适于大规模及临床级别生产这些载体的Ad5 E1补足细胞系中可以生长至高滴度[11]，且这个载体已经示出在引发-加强疫苗接种策略中诱导体液和细胞介导的免疫应答[11,21]。另一供选载体是rAd35，这是衍生自腺病毒血清型35的复制缺陷的腺病毒载体。rAd35载体在适于产生临床级别疫苗的细胞系上生长至高滴度[61]，且已经配制为注射剂以及稳定的可吸入粉末[62]。
这些供选腺病毒载体示出人树突状细胞的有效转导[63，22]，及因此具有介导高水平抗原输送和呈递的能力。
在猕猴中，在至少受体使用、体内向性、与树突状细胞相互作用、先天免疫模式、获得性免疫表型及针对SIV的保护性效力方面，已经证实Ad26与Ad5在生物学方面极为不同[11，12，15，19-22]。此外，非复制性Ad26载体的安全性和免疫原性已经在人体中证实(ClinicalTrials.Gov NCT01215149)。此外，在Ad5与Ad26之间的许多有利的生物学差异如在人体中较低的血清阳性率及低中和抗体滴度也存在于Ad5与Ad35之间。
修饰的安卡拉痘苗病毒(MVA)是一种复制缺陷的痘苗病毒毒株，也已经用作病毒载体以重组表达HIV抗原性蛋白。见例如US20110159036、US 8197825等。MVA与痘苗病毒相关，是痘病毒科正痘病毒属的一个成员。已知痘病毒由于其胞质内表达而是CD8T细胞应答的良好诱导剂。然而，通常认为其在产生CD4 MHC II类限制的T细胞方面较差。见例如[64]。
无复制能力的病毒载体的一个可能缺点是要输送至宿主的靶基因从病毒载体的表达在给予所述载体后可能降低。由于在宿主中不能复制或增殖，因此病毒载体不能产生随后可用于增加基因表达的任何新拷贝，因此需要再给予该病毒载体。如果再次给予宿主相同腺病毒血清型，宿主可以产生针对该特定腺病毒血清型的中和抗体，导致血清型特异性抗腺病毒应答。这种血清型特异性抗腺病毒应答可阻止有效再次给予病毒载体，使其作为疫苗或基因输送载体的效率较低。
因此，在本领域需要可用于诱导针对HIV感染的保护性免疫性的改良的疫苗。这种疫苗优选便于给予、长效及具有最小的副作用。进一步优选是有效对抗众多流传类型的HIV传播，包括世界多发地区的最常见类型。
发明概述
本发明部分基于发现分离的HIV抗原性蛋白与编码HIV抗原的表达载体如无复制能力的病毒载体的组合诱导针对一或多个HIV进化枝的增加的保护性免疫性。
因此，本发明的一方面涉及在需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的疫苗组合，其包含：
(i)第一组合物，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；
(ii)第二组合物，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽及药物可接受的运载体；和
(iii)免疫有效量的编码一或多个另外的抗原性多肽的一或多个另外的表达载体；
其中第一和第二组合物的一个用于引发免疫且另一组合物用于加强免疫，并且免疫有效量的另外的表达载体存在于第二组合物中或者在与第二组合物一起给予的第三组合物中以引发或加强免疫。
在本发明的实施方案中，所述疫苗组合的分离的抗原性多肽包含HIV包膜糖蛋白，及优选HIV gp140的稳定化三聚体。在本发明的特定实施方案中，分离的抗原性多肽包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列。
在本发明的实施方案中，所述疫苗组合的一或多个表达载体及一或多个另外的表达载体是腺病毒载体如rAd26、rAd35、rAd48、rAd5HVR48载体或者MVA载体。在本发明的特定实施方案中，所述一或多个另外的表达载体存在于所述疫苗组合的第三组合物中。
在本发明的特定实施方案中，由所述一或多个表达载体和/或所述一或多个另外的表达载体编码的一或多个抗原性多肽包含一或多个HIV嵌合抗原，更优选一或多个嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原，及更优选包含选自SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列。在本发明的其它特定实施方案中，所述一或多个表达载体是编码一或多个包含选自SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的HIV抗原性多肽的rAd26载体，并且所述一或多个另外的表达载体是编码一或多个包含选自SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的HIV抗原性多肽的MVA载体。
在本发明优选的实施方案中，疫苗组合包含第一组合物、第二组合物和第三组合物，所述第一组合物包含免疫有效量的编码分别具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4所示氨基酸序列的三种HIV抗原性多肽的rAd26载体及药物可接受的运载体；所述第二组合物包含免疫有效量的包含具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的HIV gp140的稳定化三聚体的分离的抗原性多肽及药物可接受的运载体；所述第三组合物包含免疫有效量的编码具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的四种HIV抗原性多肽的MVA载体。
本发明另一方面涉及根据本发明实施方案的疫苗组合，用于产生针对人免疫缺陷病毒(HIV)感染的保护性免疫应答，其中所述第一组合物用于引发免疫应答，所述第二组合物和免疫有效量的一或多个另外的表达载体用于加强免疫应答。
本发明另一方面涉及包含根据本发明实施方案的疫苗组合的试剂盒。
本发明再一方面涉及一种在需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法，所述方法包括：
(i)给予所述对象第一组合物，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；
(ii)给予所述对象第二组合物，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽及药物可接受的运载体；和
(iii)给予所述对象免疫有效量的编码一或多个另外的HIV抗原性多肽的一或多个另外的表达载体，
其中步骤(i)和(ii)以任一顺序进行，一个步骤用于引发免疫且另一步骤用于加强免疫，并且所述免疫有效量的一或多个另外的表达载体存在于第二组合物中或者在与第二组合物一起给予的第三组合物中用于引发或加强免疫。
在本发明的实施方案中，所述第一组合物用于引发免疫，并且所述第二组合物和所述免疫有效量的一或多个另外的表达载体用于加强免疫。
在本发明另一个实施方案中，所述一或多个另外的表达载体存在于第三组合物中。
本发明另一方面涉及一种在需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法，所述方法包括：
(i)给予所述对象引发疫苗，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；和
(ii)给予所述对象加强疫苗，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽、免疫有效量的编码一或多个另外的HIV抗原性多肽的一或多个另外的表达载体及药物可接受的运载体；
其中所述分离的抗原性多肽及所述一或多个另外的表达载体存在于同一组合物中或者在分开的组合物中；并且其中所述加强疫苗在给予引发疫苗之后给予。
在本发明优选的实施方案中，引发疫苗及加强疫苗之一或二者是一次或多次再次给予以进一步诱导免疫应答，其中引发疫苗在初次给予其之后但是在第一次给予加强疫苗之前再次给予。
在本发明优选的实施方案中，所述分离的抗原性蛋白质是HIV包膜糖蛋白，更优选是稳定化HIV包膜糖蛋白，如稳定化HIV gp140三聚体蛋白质或者稳定化嵌合gp140三聚体蛋白质，及更优选包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列。
在本发明另一个优选实施方案中，所述一或多个表达载体和/或一或多个另外的表达载体编码一或多个HIV嵌合抗原，更优选一或多个嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原，及更优选编码包含选自SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的一或多个嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原。
在再一个本发明优选的实施方案中，所述一或多个表达载体或者另外的表达载体是腺病毒载体，如rAd26、rAd35、rAd48、rAd5HVR48载体，或者MVA载体。更优选地，所述用于引发免疫的一或多个载体衍生自与用于加强免疫的那些不同类型的病毒。例如，当腺病毒载体如rAd26或rAd35载体用于引发免疫时，MVA载体与分离的HIV抗原性蛋白质一起用于加强免疫。
在本发明的一个实施方案中，所述一或多个表达载体是rAd26载体，且所述一或多个另外的表达载体是MVA载体。在另一个实施方案中，所述一或多个表达载体是MVA载体且所述一或多个另外的表达载体是rAd26载体。在另外的实施方案中，所述一或多个表达载体是rAd26载体且所述一或多个另外的表达载体也是rAd26载体。
在本发明的一个特定实施方案中，用于引发免疫的组合物包含分别编码包含SEQID NO:1、3和4所示氨基酸序列的一或多个抗原性蛋白质的rAd26载体；且用于加强免疫的一或多个组合物包含分离的蛋白质，所述分离的蛋白质包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列，且包含分别编码具有SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的一或多个抗原性蛋白质的MVA载体。更优选地，MVA载体存在于第三组合物中。
附图简述
关于本发明的前文概述以及如下详细描述结合附图得以更好地理解。应理解本发明不限于图中示出的明确的实施方案。
在图中：
图1A和1B示出对取自用不同疫苗组合免疫接种的猕猴(Macaca mulatta)(NHP)在初次给予引发疫苗之后28周和56周的血清样品进行进化枝C gp140包膜(Env)蛋白和嵌合包膜(Env)蛋白酶联免疫吸附测定(ELISA)的结果；图中示出log10-转化的EC90ELISA滴度，符号表示检测的各个动物的滴度；水平线表示组几何平均数滴度，虚线表示检测低限；图1A：在第28周的进化枝C gp140 Env和嵌合Env ELISA滴度；图1B：在第56周的进化枝Cgp140 Env和嵌合Env ELISA滴度；
图2示出使用生物素酰化的进化枝C Env和嵌合Env抗原对自从免疫接种的NHP在第28周获得的血清样品纯化的免疫球蛋白G(IgG)抗体进行的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)测定的结果；图中示出各个动物的吞噬作用分值应答；符号表示来自检测的各个动物的分值，灰色列表示组几何平均数滴度；
图3示出对在TZM-b1细胞中从免疫接种的NHP在第56周获得的血清样品进行的针对第1级Env HIV-1假病毒的中和抗体(nAb)测定的结果；检测的第1级Env HIV-1假病毒包括MW965.26(进化枝C)、SF162.LS(进化枝B)、MN-3(进化枝A)、DJ263.8(进化枝A)和BaL.26(进化枝B)；符号表示各个动物的log10-转化的ID50(平均感染剂量)滴度，组几何平均数滴度以水平线表示；及
图4示出使用总体潜在的T细胞表位(PTE)肽集合对从免疫接种的NHP在第54周获得的样品进行的IFN-γ酶联免疫斑点(ELISPOT)测定的结果；结果以平均斑点形成单位(SFU)/106外周血单个核细胞(PBMC)示出；符号表示各个动物的数值；水平线表示组几何平均数，虚线表示检测低限阈值。
发明详述
在发明背景和整个说明书中引用或描述了许多出版物、文章和专利，这些均以其全文并入本文作参考。本说明书中包括的对这些文档、法案、材料、装置、条款的讨论等是为了本发明提供语境的目的。这种讨论不是承认这些中的任何或全部构成了相对于本文公开或请求保护的发明的现有技术的一部分。
除非特别限定，本文使用的所有技术和学术术语均具有本发明所属领域技术人员通常理解的相同含义。另外，本文中使用的某些术语具有在本说明书中阐述的含义。本文引用的所有专利、公开的专利申请及出版物均就如全文显示一样并入本文作参考。
必须注意如本文及在所附权利要求书中所用，除非上下文明确指出，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数形式。
除非特别指出，在一系列成分之前的术语“至少”应理解为是指这个系列的每一成分。本领域技术人员使用不超过常规实验将意识到或者能确定本文描述的本发明的具体实施方案的许多等价物。这种等价物为本发明所涵盖。
在本说明书及权利要求书中，除非上下文语境需要，则单词“包含”应理解为是指包含指定的整数或步骤或者一组整数或步骤，但是不除外任何其它整数或步骤或者一组整数或步骤。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”、“包括”代替，或者有时使用术语“具有”。
当在本文中使用时，“由…组成”排除在要求的要素中未指定的任何要素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本由…组成”不排除不实质上影响权利要求的基本和新特性的材料或步骤。任何前述术语“包含”、“含有”、“包括”和“具有”当在本发明的某方面或实施方案中使用时，可以用术语“由…组成”或者“基本由…组成”代替以改变公开的范围。
如本文所用，在多个列举的要素之间使用的连接词“和/或”应理解为涵盖个体及组合选项。例如，在两个要素由“和/或”连接时，第一个选项是指第一个要素无第二个要素的应用。第二个选项是指第二个要素无第一个要素的应用。第三个选项是指第一个和第二个要素一起的应用。任一这些选项应理解为在该含义范围内，因此符合如本文所用术语“和/或”的要求。也应理解一种以上的选项的同时应用也在该含义范围内，因此符合术语“和/或”的要求。
如本文所用，“对象”是指将通过或者已经通过本发明实施方案的方法治疗的任何动物，优选哺乳动物，最优选人。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。举例的哺乳动物包括但不限于牛、马、羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、非人灵长类动物(NHP)如猴或猿、人等，更优选人。
如本文所用，术语“保护性免疫性”或者“保护性免疫应答”是指接种的对象能控制针对其进行免疫接种的病原性物质的感染。通常，已经产生“保护性免疫应答”的对象仅发生轻度至中等程度的临床症状或者根本无症状。通常，对某物质具有“保护性免疫应答”或者“保护性免疫性”的对象将不因所述物质感染而死亡。
“腺病毒衣壳蛋白”是指在腺病毒衣壳上的蛋白质(例如Ad26、Ad35、rAd48、rAd5HVR48载体)，其参与确定特定腺病毒的血清型和/或向性。腺病毒衣壳蛋白典型包括纤维、五邻体和/或六邻体蛋白质。如本文所用，特定腺病毒的“衣壳蛋白”如“Ad26衣壳蛋白”或者“Ad35衣壳蛋白”可例如是嵌合衣壳蛋白，其包括至少部分Ad26或Ad35衣壳蛋白。在某些实施方案中，衣壳蛋白是Ad26或Ad35的完整衣壳蛋白。在某些实施方案中，六邻体、五邻体和纤维是Ad26或Ad35的六邻体、五邻体和纤维。
如本文所用，术语“共同输送”或“一起给予”是指同时给予两种成分，如病毒表达载体和分离的抗原性多肽。“同时给予”可以是至少在同一天内给予两种成分。当两种成分是“一起给予”时，其可以在分开的组合物中在短时间内相继给予，如在24、20、16、12、8或4小时内，或者在1小时内，或者其可以在一个组合物中同时给予。
术语“佐剂”和“免疫刺激剂”在本文可互换使用，定义为引起免疫系统刺激的一或多种物质。在本文中，佐剂用于增强对本发明的表达载体及抗原性多肽如本发明的腺病毒载体、MVA载体和/或抗原性HIV抗原性多肽的免疫应答。
如本文所用，术语“感染”是指致病物质对宿主的侵袭。当致病物质能侵袭宿主并在宿主体内复制或增殖时，认为其是“感染性的”。举例的感染性物质包括病毒，例如人免疫缺陷病毒(HIV)和某些腺病毒、朊病毒、细菌、真菌、原生动物等物种。
人免疫缺陷病毒(HIV)是慢病毒属(其是逆转录病毒科的一部分)的一个成员。两个HIV物种感染人：HIV-1和HIV-2。HIV-1是最常见的HIV病毒株，已知其比HIV-2更具致病性。如本文所用，术语“人免疫缺陷病毒”和“HIV”是指但不限于HIV-1和HIV-2。在某些举例的实施方案中，本文描述的包膜蛋白是指存在于经识别的五个慢病毒血清群任何上的那些：灵长类动物(例如HIV-1、HIV-2、猿猴免疫缺陷病毒(SIV))；绵羊和山羊(例如绵羊髓鞘脱落病毒、山羊关节炎脑炎病毒)；马(马传染性贫血病毒)；猫(例如猫免疫缺陷病毒(FIV))；及牛(例如牛免疫缺陷病毒(BIV))(见International Committee on Taxonomy ofViruses描述)。
将HIV分类为具有高度遗传趋异的多个进化枝。如本文所用，术语“HIV进化枝”或者“HIV亚型”是指根据其遗传相似性程度分类的相关人免疫缺陷病毒。目前有三组HIV-1分离株：M、N和O。M组(主要毒株)由至少10个进化枝A-J组成。O组(外部毒株)可以由相似数目的进化枝组成。N组是新的HIV-1分离株，其未被分类为M组或O组。在某些举例的实施方案中，本文描述的广泛中和抗体将识别并产生针对2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个进化枝和/或两或多组HIV的免疫应答。
本发明发现异源引发-加强组合、特别是用编码一或多个HIV抗原性蛋白质的表达载体如rAd26引发及随后用分离的HIV抗原性蛋白质如HIV包膜糖蛋白加强、及优选进一步用编码一或多个HIV抗原性蛋白质的rAd26或MVA加强，在产生针对一或多个HIV亚型的保护性免疫应答中惊人地有效。
HIV抗原性蛋白质
如本文所用，术语“HIV的抗原性多肽”、“HIV抗原性多肽”、“HIV抗原性蛋白质”、“HIV免疫原性多肽”或者“HIV免疫原”是指在需要其的对象中能诱导针对HIV的免疫应答如体液和/或细胞介导的应答的多肽。抗原性多肽可以是HIV的蛋白质、其片段或表位或者多个HIV蛋白质或其部分的组合，其可以在需要其的对象中诱导针对HIV的免疫应答或者产生免疫性例如保护性免疫性。
优选地，抗原性多肽在宿主中能产生保护性免疫应答，例如诱导针对病毒疾病或感染的免疫应答，和/或在对象(即接种)中产生针对病毒疾病或感染的免疫性，其保护对象对抗所述病毒疾病或感染。例如，抗原性多肽可包含来自猿猴免疫缺陷病毒(SIV)或HIV的蛋白质或其片段，如HIV或SIV包膜gp160蛋白、HIV或SIV基质/衣壳蛋白以及HIV或SIV gag、pol和env基因产物。
根据本发明的实施方案，抗原性多肽可以是HIV-1或HIV-2抗原或其片段。举例的HIV抗原包括但不限于gag、pol和env基因产物，其编码结构蛋白和必需酶。gag、pol和env基因产物是作为多聚蛋白合成的，其进一步被加工为多个其它的蛋白质产物。gag基因的初始蛋白质产物是病毒结构蛋白gag多聚蛋白，其被进一步加工为MA、CA、SP1、NC、SP2和P6蛋白质产物。pol基因编码病毒酶(Pol，聚合酶)，初始蛋白质产物被进一步加工为RT、RNase H、IN和PR蛋白质产物。env基因编码结构蛋白，特别是病毒粒包膜的糖蛋白。env基因的初始蛋白质产物是gp160，其被进一步加工为gp120和gp41。HIV抗原的其它实例包括基因调节蛋白Tat和Rev；辅助蛋白Nef、Vpr、Vif和Vpu；衣壳蛋白、核壳蛋白和p24病毒蛋白。本发明的异源核酸序列可编码任何HIV抗原，优选编码gag、env和/或pol基因产物或者其一部分。
根据一个优选的实施方案，所述抗原性多肽包含HIV Gag、Env或者Pol抗原，或者其任何部分或组合，更优选HIV-1Gag、Env或Pol抗原或者其任何部分或组合。
根据另一个优选的实施方案，由本发明的载体编码的抗原性多肽或肽是嵌合HIV抗原。如本文所用，“嵌合抗原”是指从天然序列的片段装配的重组蛋白质。“嵌合抗原”可以是使用遗传算法经计算产生及优化的。嵌合抗原与天然抗原类似，但是经优化以使得最大化覆盖在天然序列中发现的潜在T细胞表位，这样改良了免疫应答的宽度和覆盖。
本发明的嵌合HIV抗原优选是嵌合Gag-Pol-Env抗原，更优选是嵌合HIV-1 Gag-Pol-Env抗原。如本文所用，“嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原”特别是指包含衍生自HIV的Gag、Pol和Env多聚蛋白序列的一或多个的多个表位的嵌合抗原。本发明的嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原的表位序列与天然HIV抗原的序列类似，但是经优化为存在更宽大的可能的T细胞表位阵列以改良在循环HIV序列中发现的表位的覆盖。
例如，为了提供潜在的T细胞表位的最大覆盖，嵌合Gag、Pol和Env抗原被设计为提供一或多个HIV进化枝的优化的覆盖。选择序列数据库经计算机模拟的9个连续氨基酸(9-聚体)的片段的重组序列，其与真实蛋白质相似并使得疫苗候选物与全局数据库之间9-聚体序列匹配数最大化。嵌合Gag、Pol和Env抗原具有与天然抗原相似的结构域结构，完全由无人工连接的天然序列组成。Pol抗原可含有突变体以消除催化活性。单体Env gp140嵌合抗原可含有点突变以消除裂解和融合活性。
在一个实施方案中，本发明的嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原是具有衍生自gag基因产物序列的表位的嵌合HIV Gag抗原、具有衍生自pol基因产物序列的表位的嵌合HIV Pol抗原，或者具有衍生自env基因产物序列的表位的嵌合HIV Env抗原。
在另一个实施方案中，本发明的嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原包含衍生自gag、pol和/或env基因产物序列的表位的组合。示例的及非限制性示例包括具有衍生自env和pol基因产物序列的表位的嵌合Env-Pol抗原、具有衍生自env和gag基因产物序列的表位的嵌合Env-Gag抗原、具有衍生自gag和pol基因产物序列的表位的嵌合Gag-Pol抗原，以及具有衍生自gag和env基因产物序列的表位的嵌合Gag-Env抗原。
在再一个实施方案中，本发明的嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原包含衍生自来自一或多个进化枝的gag、pol和env基因产物序列的表位的组合。
举例的嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原包括在例如US20120076812、Barouch et al.,Nat Med 2010,16:319-323[54]、Barouch et al.,Cell 155:1-9,2013[65]中描述的那些，所有这些文献均以其全文并入本文作参考。
优选地，嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原包括但不限于包含选自SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的抗原。
鉴于本发明揭示，嵌合HIV抗原可以使用本领域已知的方法产生。见例如US20120076812、Fischer et al,Nat Med,2007.13(1):p.100-6[53]、Barouch et al.,NatMed 2010,16:319-323[54]所述，所有这些文献均以其全文并入本文作参考。
包膜糖蛋白
如本文所用，术语“包膜糖蛋白”、“env糖蛋白”及“Env”每个均是指但不限于在HIV病毒粒包膜表面上及HIV感染的细胞的浆膜表面上表达的糖蛋白或者其片段，其在需要的对象中可诱导针对HIV的免疫应答或者产生免疫性。
所述env基因编码gp160，gp160被蛋白酶解为gp120和gp41。更特别地，gp160三聚体化为(gp160)3，然后经历裂解为两个非共价相关的片段gp120和gp41。随后通过gp120/gp41异二聚体的三聚体介导病毒进入。Gp120是受体结合片段，结合具有CD4受体的靶细胞如T辅助细胞上的CD4受体。Gp41与gp120非共价结合，是融合片段并提供使HIV进入细胞的第二步。Gp41最初包埋在病毒包膜内，但是当gp120结合CD4受体时，gp120改变其构象导致gp41暴露，在此其可有助于与宿主细胞融合。Gp140是三聚体gp160-即(gp160)3-的未裂解的胞外域，其已经用作天然状态的裂解的病毒刺突(viral spike)的代用品。
根据本发明的一个实施方案，可以给予env糖蛋白(例如gp160、gp140、gp120或gp41)、优选稳定化三聚体gp140蛋白，引发或加强免疫以增强由表达载体单独诱导的免疫性。
如本文所用，术语“稳定化三聚体gp140蛋白”和“稳定化gp140三聚体”均是指gp140多肽的三聚体，包括增加三聚体结构稳定性的多肽序列。gp140多肽可具有或者可以被修饰为包括三聚体化结构域以稳定gp140的三聚体。举例的三聚体化结构域包括但不限于T4-fibritin“foldon”三聚体化结构域、衍生自GCN4的卷曲螺旋三聚体化结构域[66]以及大肠杆菌天冬氨酸氨甲酰基转移酶的催化亚单位作为三聚体标签[67]。
在本发明的特定实施方案中，稳定化的三聚体gp140蛋白质包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列。
根据本发明的一个实施方案，稳定化的三聚体gp140蛋白质可以作为加强免疫给予或者作为加强免疫的成分与病毒表达载体一起给予。优选地，稳定化三聚体gp140蛋白质是进化枝C或者进化枝A gp140蛋白质，更优选是进化枝C gp140蛋白质。进化枝C三聚体gp140蛋白质在豚鼠中能诱导针对来自不同进化枝的一系列HIV-1变体及具有不同中和敏感性的强力中和抗体应答[68,60]。
根据本发明的另一个实施方案，“包膜糖蛋白”是包含衍生自一或多个HIV进化枝的一或多个Env多聚蛋白序列的多个表位的嵌合包膜蛋白。例如，如本文所用，“gp140蛋白”可以是“嵌合gp140蛋白”，其含有衍生自一或多个HIV进化枝的一或多个gp140蛋白质序列的多个表位。
在本发明的特定实施方案中，嵌合gp140蛋白质是包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的嵌合gp140的稳定化三聚体。
分离的gp140蛋白质可以与腺病毒表达载体或MVA表达载体共同输送。根据一个优选的实施方案，gp140蛋白质与Ad26或MVA是作为两个独立配制物分别给予的，或者在单一配制物中一起给予。同时给予或者共同输送可以在同时、在1小时内或者在同一天内进行。此外，gp140蛋白质可以在佐剂化的配制物中给予。合适的佐剂可以是例如磷酸铝或者基于皂苷的佐剂。
鉴于本发明揭示，抗原性多肽可以使用本领域已知的任何方法产生和分离。例如，抗原性多肽可以从宿主细胞表达，优选针对抗原性多肽生产而优化的重组宿主细胞。根据本发明的一个实施方案，重组基因用于表达含有消除裂解和融合活性的突变的gp140蛋白，优选在对象(例如人)免疫(例如当掺入本发明组合物时，例如本发明疫苗)时产生的抗病毒免疫应答(例如细胞或体液免疫应答)具有增加的宽度、强度、深度或者寿命的优化的gp140蛋白。优化的gp140蛋白也可以包括一或多个裂解位点突变、因子Xa位点和/或foldon三聚体化结构域。前导/信号序列可以与优化的gp140蛋白质的N末端可操纵地连接以用于最大化的蛋白质表达。前导/信号序列通常在转运至内质网内腔中期间从新生多肽裂解。可以使用适于感兴趣的宿主细胞的任何前导/信号序列。举例的前导/信号序列包含SEQ ID NO:7所示氨基酸序列。
在本发明优选的实施方案中，分离的抗原性多肽是稳定化三聚体gp140，如在Nkolola et al 2010,J.Virology 84(7):3270-3279[68]、Kovacs et al,PNAS 2012,109(30):12111-6[60]、WO 2010/042942和WO 2014/107744中描述的那些，所有这些文献均以其全文并入本文作参考。
腺病毒
本发明的腺病毒属于腺病毒科(Adenoviridae)家族，优选是属于哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)。其可以是人腺病毒，但也可以是感染其它物种的腺病毒，包括但不限于牛腺病毒(例如牛腺病毒3，BAdV3)、犬腺病毒(例如CAdV2)、猪腺病毒(例如PAdV3或5)，或者猿猴腺病毒(包括猴腺病毒和猿腺病毒，如黑猩猩腺病毒或大猩猩腺病毒)。优选地，腺病毒是人腺病毒(HAdV或AdHu)，或者猿猴腺病毒如黑猩猩或大猩猩腺病毒(ChAd、AdCh或SAdV)。在本发明中，如果未指明物种的Ad，是指人腺病毒，例如缩写符号“Ad5”是指与HAdV5相同，其是人腺病毒血清型5。如本文所用，符号“rAd”是指重组腺病毒，例如“rAd26”是指重组人腺病毒26。
大多数深入研究已经使用人腺病毒进行，根据本发明的某些方面优选人腺病毒。在某些优选的实施方案中，本发明的重组腺病毒基于人腺病毒。在优选的实施方案中，重组腺病毒基于人腺病毒血清型5、11、26、34、35、48、49、50、52等。根据本发明的一个特别优选的实施方案，腺病毒是血清型26或35之一的人腺病毒。这些血清型的优势是在人群中的低血清阳性率和/或低现存中和抗体滴度。rAd26载体的制备在例如WO 2007/104792及在Abbink et al.,(2007)Virol 81(9):4654-63[11]中描述，所述文献均以其全文并入本文作参考。举例的Ad26基因组序列见于GenBank登记号EF 153474及WO 2007/104792中SEQ IDNO:1。rAd35载体的制备在例如美国专利号7,270,811、WO 00/70071及在Vogels et al.,(2003)J Virol 77(15):8263-71[12]中描述，所有这些文献均以其全文并入本文作参考。举例的Ad35基因组序列见于GenBank登记号AC_000019及WO 00/70071的图6。
猿猴腺病毒通常在人群中也具有低血清阳性率和/或低现有中和抗体滴度，也已经报道了使用黑猩猩腺病毒载体进行的大量工作(例如US6083716，WO 2005/071093，WO2010/086189，WO 2010085984，Farina et al,2001,J Virol 75:11603-13[13]；Cohen etal,2002,J Gen Virol 83:151-55[69]；Kobinger et al,2006,Virology 346:394-401[70]；Tatsis et al.,2007,Molecular Therapy 15:608-17[71]；也参见Bangari andMittal,2006,Vaccine 24:849-62[72]；及Lasaro and Ertl,2009,Mol Ther 17:1333-39[73])。因此，在其它优选的实施方案中，本发明的重组腺病毒基于猿猴腺病毒，例如黑猩猩腺病毒。在某些实施方案中，重组腺病毒基于猿猴腺病毒类型1、7、8、21、22、23、24、25、26、27.1、28.1、29、30、31.1、32、33、34、35.1、36、37.2、39、40.1、41.1、42.1、43、44、45、46、48、49、50或SA7P。
优选地，腺病毒载体是复制缺陷重组病毒载体，如rAd26、rAd35、rAd48、rAd5HVR48等。
在本发明的一个优选实施方案中，腺病毒载体包含来自两个罕见血清型：Ad26和Ad35的衣壳蛋白。在典型的实施方案中，所述载体是rAd26或rAd35病毒。
因此，可用于本发明实施方案中的载体包括Ad26或Ad35衣壳蛋白(例如纤维、五邻体或六邻体蛋白)。本领域技术人员将意识到非必须是完整Ad26或Ad35衣壳蛋白用于本发明载体中。因此，包含至少一部分Ad26或Ad35衣壳蛋白的嵌合衣壳蛋白可用于本发明载体中。根据本发明实施方案的载体也可以包含这样的衣壳蛋白，其中所述纤维、五邻体和六邻体蛋白均衍生自不同血清型，只要至少一个衣壳蛋白衍生自Ad26或Ad35即可。在优选的实施方案中，所述纤维、五邻体和六邻体蛋白均衍生自Ad26或均衍生自Ad35。
本领域技术人员意识到衍生自多个血清型的元件可以组合在一个重组腺病毒载体中。因此，可以产生组合了不同血清型的希望性质的嵌合腺病毒。因此，在一些实施方案中，本发明的嵌合腺病毒可以组合Ad26和Ad35血清型现有免疫性的缺失与如在靶细胞中温度稳定性、装配、锚定、产品收得率、重定向或改良的感染、DNA的稳定性等特性。
在某些实施方案中，可用于本发明中的重组腺病毒载体主要或者全部衍生自Ad35或Ad26(即载体是rAd35或rAd26)。在一些实施方案中，腺病毒是复制缺陷的，例如由于其在基因组E1区域中含有缺失所致。对于衍生自Ad26或Ad35的本发明的腺病毒，典型地将腺病毒的E4-orf6编码序列与人腺病毒亚群C如Ad5的E4-orf6交换。这样使得这种腺病毒在熟知的表达Ad5的E1基因的补充细胞系如293细胞、PER.C6细胞等中增殖(见例如Havenga,etal.,2006,J Gen Virol 87:2135-43[61]，WO 03/104467)。然而，这种腺病毒在不表达Ad5的E1基因的非补充细胞中不能复制。
在某些实施方案中，腺病毒是人腺病毒血清型35，在其中已经克隆了编码一或多个HIV抗原性多肽的核酸的E1区域中具有缺失，以及具有Ad5的E4-orf6区域。在某些实施方案中，腺病毒是人腺病毒血清型26，在其中已经克隆了编码一或多个HIV抗原性多肽的核酸的E1区域中具有缺失，及具有Ad5的E4 orf6区域。对于Ad35腺病毒，典型地保留在腺病毒中E1B 55K开放读框的3‘末端，例如在pIX开放读框直接上游的166bp或者包含其的片段如在pIX起始密码子直接上游的243bp片段，在5‘末端由Bsu36I限制位点作记号，因为这样由于pIX基因的启动子部分存在于这个区域而增加腺病毒的稳定性(见例如[61]，如前；WO2004/001032)。
重组腺病毒载体的制备为本领域熟知。rAd26载体的制备在例如WO 2007/104792及在Abbink et al.,(2007)Virol 81(9):4654-63[11]中描述。举例的Ad26基因组序列见于GenBank登记号EF 153474及WO 2007/104792中SEQ ID NO:1。rAd35载体的制备在例如美国专利号7,270,811及在Vogels et al.,(2003)J Virol 77(15):8263-71[12]中描述。举例的Ad35基因组序列见于GenBank登记号AC_000019。
在本发明的实施方案中，可用于本发明的载体包括在WO2012/082918中描述的那些载体，所述文献以其全文并入本文作参考。
典型地，可用于本发明中的载体是使用包含完整重组腺病毒基因组的核酸产生的(例如质粒、粘粒或者杆状病毒载体)。因此，本发明还提供了编码本发明腺病毒载体的分离的核酸分子。本发明的核酸分子可以是通过克隆获得的或者合成产生的RNA形式或者DNA形式。所述DNA可以是双链或单链的。
可用于本发明中的腺病毒载体典型是复制缺陷的。在这些实施方案中，通过缺失或失活病毒复制关键区域如E1区域而使病毒复制缺陷。所述区域可以通过例如在该区域内插入感兴趣的基因如编码抗原性多肽的基因(通常与启动子连接)而基本上缺失或失活。在一些实施方案中，本发明的载体可以在其它区域如E2、E3或E4区域中含有缺失，或者在一或多个这些区域内插入与启动子连接的异源基因。对于E2-和/或E4-突变的腺病毒，通常使用E2-和/或E4-补充细胞系产生重组腺病毒。在腺病毒E3区域中的突变不需要由这类细胞系补充，因为E3不是复制所需的。
包装细胞系典型用于产生足量的腺病毒载体以用于本发明中。包装细胞是包含在复制缺陷载体中已经缺失或失活的那些基因的细胞，因此使得病毒在细胞中复制。合适的包装细胞系包括例如PER.C6、911、293和E1 A549。
如上所述，众多的HIV抗原性多肽可以在载体中表达。如果需要，编码HIV抗原性多肽的异源基因可以经密码子优化以保证在处理的宿主(例如人)中正确表达。密码子优化是本领域中广泛应用的一种技术。典型地，异源基因克隆进腺病毒基因组的E1和/或E3区域中。
异源HIV基因可以在腺病毒衍生的启动子(例如主要晚期启动子)的控制下(即可操纵地连接)，或者可以在异源启动子的控制下。举例的合适的异源启动子包括巨细胞病毒(CMV)启动子和Rous肉瘤病毒(RSV)启动子。优选地，所述启动子位于表达盒内感兴趣的异源基因的上游。
如上所述，可用于本发明的腺病毒载体可以编码本领域技术人员已知的多种HIV抗原性多肽，包括但不限于本文论述的抗原性多肽。
在本发明优选的实施方案中，腺病毒载体是rAd26载体，如在Abbink,J Virol,2007.81(9):p.4654-63[11]中所述那些载体，所述文献以其全文并入本文作参考。
MVA载体
可用于本发明的MVA载体利用衍生自修饰的痘苗安卡拉病毒的弱化的病毒，特征在于其丧失在人细胞系中再生复制的能力。MVA载体可以表达本领域技术人员已知的任何HIV抗原性多肽，包括但不限于本文论述的抗原性多肽。
MVA已经通过在经皮肤接种安卡拉痘苗病毒毒株的鸡胚胎成纤维细胞上超过570次连续传代而产生[Chorioallantois vaccinia virus Ankara virus,CVA；参见Mayr etal.(1975),Infection 3,6-14[74]]，所述毒株维持在土耳其安卡拉的接种学会(Vaccination Institute)多年并用作人体接种疫苗的基础。然而，由于与痘苗病毒相关的常见的严重接种后并发症，进行了一些尝试以产生更弱化的较安全的天花疫苗。
在1960-1974年间，Prof.Anton Mayr通过在CEF细胞中超过570次连续传代在弱化CVA方面取得成功[74]。在多种动物模型中示出所得MVA是无毒性的[75]。MVA作为前天花疫苗的早期开发的一部分，有在处于痘苗病毒不良反应危险的对象中使用MVA-517组合Lister Elstree的临床试验[77,78]。在1976年，衍生自MVA-571种子病毒(相应于第571代)的MVA在德国注册为在二期肠道外天花疫苗接种程序中的引发疫苗。随后，MVA-572用于大约120,000个高加索白人个体，大多数儿童在1-3岁之间，未报道严重副作用，尽管该群中许多对象处于与痘苗病毒相关并发症的高危险中[76]。MVA-572保藏在European Collectionof Animal Cell Cultures，保藏号ECACC V94012707。
作为用于弱化MVA而进行传代的结果，根据在CEF细胞中进行的传代数而有许多不同毒株或分离株。例如，在德国在天花根除程序期间MVA-572以小剂量用作前疫苗，MVA-575普遍地用作兽用疫苗。MVA以及MVA-BN与祖先CVA病毒相比缺少大约15％(六个区域的31kb)的基因组。所述缺失影响许多毒力和宿主范围基因，以及A型包涵体基因。MVA-575于2000年12月7日保藏在European Collection of Animal Cell Cultures(ECACC)，保藏号为V00120707。弱化的CVA-病毒MVA(修饰的安卡拉痘苗病毒)通过CVA在原代鸡胚成纤维细胞上系列增殖(超过570代)而获得。
即使Mayr等在二十世纪七十年代期间证实MVA在人体和哺乳动物中是高度弱化和无毒性的，但是一些研究人员报道MVA在哺乳动物和人细胞系中不是充分弱化的，因为在这些细胞中可发生残留的复制[79,80；美国专利号5,185,146；81]。推测使用各种已知的MVA毒株已经获得了在这些出版物中报道的结果，因为使用的病毒的性质显然不同，特别是其在不同细胞系中的生长习性不同。这种残留的复制出于各种原因包括在人体中使用相关联的安全性原因而是不合需要的。
已经开发了具有增强的安全性模式以开发更安全的产物如疫苗或药物的MVA毒株，如Bavarian Nordic所揭示。Bavarian Nordic将MVA进一步传代并称作MVA-BNA。MVA-BN的一个代表性样品于2000年8月30日保藏在European Collection of Cell Cultures(ECACC)，保藏号为V00083008。MVA-BN在WO 02/42480(US 2003/0206926)和WO 03/048184(US 2006/0159699)中进一步描述，所述文献以其全文并入本文作参考。
MVA的“衍生物”或“变体”是指呈现出与本文所述MVA基本相同的复制特性、但是在其基因组的一或多个部分存在不同的病毒。例如，MVA-BN以及MVA-BN的衍生物或变体在人和小鼠、甚至在重度免疫抑制的小鼠体内不能再生地复制。更特别地，MVA-BN或者MVA-BN的衍生物或变体优选在鸡胚成纤维细胞(CEF)中也具有再生复制能力，但是在人角化细胞系HaCat[82],、人骨肉瘤细胞系143B(ECACC保藏号91112502)、人胚胎肾细胞系293(ECACC保藏号85120602)及人子宫颈腺癌细胞系HeLa(ATCC保藏号CCL-2)中无再生复制能力。此外，MVA-BN的衍生物或变体在Hela细胞和HaCaT细胞系中较MVA-575具有低至少2倍、更优选3倍的病毒扩增比率。关于MVA变体的这些性质的检测和测定在WO 02/42480(US 2003/0206926)和WO 03/048184(US 2006/0159699)中描述。
术语“不能再生复制”或者“无再生复制能力”在例如WO 02/42480中描述，其也教导了怎样获得具有上述希望性质的MVA。该术语适用于使用WO 02/42480或者美国专利号6,761,893所述测定法在感染4天后病毒扩增比率低于1的病毒，所述文献以其全文并入本文作参考。
术语“不能再生复制”是指在感染4天后病毒扩增比率低于1的病毒。在WO 02/42480或者美国专利号6,761,893中描述的测定法可用于确定病毒扩增比率。
病毒的扩增或复制通常以从感染的细胞中产生的病毒的量(输出)与最初用于感染细胞的病毒的量(输入)的比率表示，称作“扩增比率”。扩增比率为“1”定义为其中从感染的细胞中产生的病毒的量与最初用于感染细胞的病毒的量相同，意味着感染的细胞容许病毒感染且再生。相反，扩增比率低于1，即输出与输入水平相比降低，表示缺少再生复制及因此病毒弱化。
基于MVA的疫苗的优势包括其安全性以及可以大规模产生疫苗的能力。进一步地，除了其效力，工业化规模生产的可行性也是有利的。此外，基于MVA的疫苗可以输送多个异源抗原并容许同时诱导体液和细胞免疫性。
可用于本发明的MVA载体可以使用本领域已知方法制备，如在WO/2002/042480、WO/2002/24224、US20110159036、US 8197825等中描述的那些方法，所述文献的相关内容并入本文作参考。
另一方面，复制缺陷的MVA病毒毒株也可以适用于本发明，如毒株MVA-572和MVA-575，或者任何其它相似弱化的MVA毒株。也适用于本发明的毒株可以是突变体MVA，如缺失的绒毛膜尿囊安卡拉痘苗病毒(dCVA)。dCVA包含在MVA基因组的del I、del II、del III、del IV、del V和del VI缺失位点。所述位点特别用于插入多个异源序列。dCVA在人细胞系(如人293、143B和MRC-5细胞系)中可再生复制(扩增比率大于10)，然后通过进一步突变优化可用于基于病毒的疫苗接种策略中(见WO 2011/092029)。
在本发明优选的实施方案中，MVA载体包含编码一或多个抗原性HIV蛋白如HIV嵌合抗原的核酸。在其它优选的实施方案中，MVA载体编码一或多个包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的HIV抗原性多肽、更优选编码四个具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的HIV抗原性多肽。
编码HIV抗原性蛋白质的核酸序列可以插入MVA的一或多个基因间区域(IGR)。在某些实施方案中，IGR选自IGR07/08、IGR 44/45、IGR 64/65、IGR 88/89、IGR 136/137和IGR148/149。在某些实施方案中，重组MVA的少于5、4、3或2个IGR包含编码HIV如嵌合抗原和/或进一步的HIV抗原性多肽的抗原决定簇的异源核苷酸序列。所述异源核苷酸序列可另外或替代地插入MVA基因组的一或多个天然发生的缺失位点中，特别是插入主要缺失位点I、II、III、IV、V或VI中。在某些实施方案中，重组MVA的少于5、4、3或2个天然发生的缺失位点包含编码HIV包膜糖蛋白和/或进一步的HIV蛋白的抗原决定簇的异源核苷酸序列。
包含编码HIV蛋白的抗原决定簇的异源核苷酸序列的MVA的插入位点的数目可以是1、2、3、4、5、6、7或更多。在某些实施方案中，异源核苷酸序列插入4、3、2或更少的插入位点中。优选地，使用两个插入位点。在某些实施方案中，使用三个插入位点。优选地，重组MVA包含插入2或3个插入位点的至少2、3、4、5、6或7个基因。
本发明提供的重组MVA病毒可以通过本领域已知常规方法产生。获得重组痘病毒或者在痘病毒基因组中插入外来编码序列的方法为本领域技术人员熟知。例如，标准分子生物学技术方法如DNA克隆、DNA和RNA分离、Western印迹分析、RT-PCR及PCR扩增技术在Molecular Cloning,A laboratory Manual(2nd Ed.)[83]中描述，处理和操纵病毒的技术在Virology Methods Manual[B.W.J.Mahy et al.(eds.),Academic Press(1996)]中描述。相似地，对MVA进行处理、操纵和遗传工程化的技术和专门技能在Molecular Virology:A Practical Approach[A.J.Davison&R.M.Elliott(Eds.),The Practical ApproachSeries,IRL Press at Oxford University Press,Oxford,UK(1993)(见例如Chapter 9:Expression of genes by Vaccinia virus vectors)]和Current Protocols inMolecular Biology[John Wiley&Son,Inc.(1998)(见例如Chapter 16,Section IV:Expression of proteins in mammalian cells using vaccinia viral vector)]中描述。
对于本发明揭示的各种重组MVA的产生，可以使用不同的方法。插入病毒中的DNA序列可以置于其中已经插入与MVA的一部分DNA同源的DNA的大肠杆菌质粒构建体中。单独地，插入的DNA序列可以与启动子连接。启动子-基因连接可以位于质粒构建体中，以便所述启动子-基因连接在两端具有与在含有非必需基因座的MVA DNA的区域两侧的DNA序列同源的DNA。所得质粒构建体可以通过在大肠杆菌内增殖而扩增并分离。含有插入的DNA基因序列的分离的质粒可以转染进例如鸡胚成纤维细胞(CEF)的细胞培养物中，同时将该培养物用MVA感染。分别在质粒和病毒基因组中在同源MVA DNA之间的重组可以产生由于存在外源DNA序列而修饰的MVA。
根据一个优选的实施方案，合适的细胞培养物的细胞如CEF细胞可以用痘病毒感染。感染的细胞随后可以用包含一或多个外源或异源基因的第一质粒载体转染，优选在痘病毒表达控制元件的转录控制下。如上所述，质粒载体还包含能指导外源序列插入痘病毒基因组的所选择部分的序列。任选地，质粒载体还含有包含与痘病毒启动子可操纵地连接的标记和/或选择基因的盒。合适的标记或选择基因是例如编码绿色荧光蛋白、β-半乳糖苷酶、新霉素-磷酸核糖基转移酶的基因或者其它标记。选择或标记盒的使用简化了产生的重组痘病毒的鉴别与分离。然而，重组痘病毒也可以通过PCR技术鉴别。随后，进一步的细胞可以用如上述获得的重组痘病毒感染及用包含一或多个第二外来或异源基因的第二载体转染。这种基因应导入痘病毒基因组的不同插入位点，第二载体在指导一或多个第二外来基因整合进痘病毒基因组中的痘病毒同源序列方面也不同。在同源重组发生后，可以分离包含两或更多个外来或异源基因的重组病毒。对于将另外的外来基因导入重组病毒中，可以重复感染和转染步骤，使用在之前的步骤中分离的重组病毒进行感染及使用包含进一步的一或多个外来基因的进一步的载体进行转染。
或者，上述感染和转染步骤可互换，即将合适的细胞首先用包含外来基因的质粒载体转染，然后用痘病毒感染。再或者，也可以将每个外来基因导入不同病毒中，用所有获得的重组病毒共同感染细胞并筛选包含所有外来基因的重组体。第三种选项是在体外连接DNA基因组与外来序列并使用辅助病毒重建重组的痘苗病毒DNA基因组。第四种选项是在大肠杆菌或另一细菌物种中在克隆的作为细菌人工染色体(BAC)的痘苗病毒基因组与两侧是与痘苗病毒基因组中希望的整合位点两侧序列同源的DNA序列的线性外来序列之间进行同源重组。
所述异源HIV基因如编码一或多个HIV抗原性多肽的核酸可以在一或多个痘病毒启动子的控制下(即可操纵地连接)。在某些实施方案中，痘病毒启动子是Pr7.5启动子、杂合早期/晚期启动子或者PrS启动子、PrS5E启动子、合成或天然的早期或晚期启动子，或者牛痘病毒ATI启动子。
在本发明优选的实施方案中，MVA载体表达多价嵌合Env/Gag/Pol抗原，如在Barouch et al.,Nat Med 2010,16:319-323[54]、Barouch et al.,Cell 155:1-9,2013[65]中描述的那些，所有这些文献均以其全文并入本文作参考。根据本发明的实施方案，MVA载体可表达本文描述的任何抗原性多肽，包括但不限于HIV嵌合抗原如HIV嵌合Gag-Pol-Env抗原。
免疫原性组合物
如本文所用，“免疫有效量”是指组合物在有需要的对象中足以诱导希望的免疫作用或免疫应答的量。在一个实施方案中，免疫有效量是指在有需要的对象中足以诱导免疫应答的量。在另一个实施方案中，免疫有效量是指在有需要的对象中足以产生免疫性的量，例如提供针对如病毒感染等疾病的保护作用。免疫有效量根据多种因素而可以变化，如对象的身体状况、年龄、体重、健康状况等；特定的应用，是诱导免疫应答或是提供保护性免疫性；给予的特定重组载体；由给予的重组载体编码的免疫原；给予的特定抗原性多肽；以及需要这种免疫性的特定疾病如病毒感染。本领域技术人员通过本发明揭示可易于确定免疫有效量。
作为一般指导，当关于重组病毒载体使用的免疫有效量可以是在大约108个病毒颗粒至大约1012个病毒颗粒的范围，例如108、109、1010、1011、1012个病毒颗粒。免疫有效量可以在单一组合物中给予，或者在多个组合物中给予，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个组合物(例如片剂、胶囊或注射剂)，其中多个胶囊或注射剂的给予共同为对象提供免疫有效量。通常，当关于多肽如分离的抗原性多肽使用时，免疫有效量的范围可以是例如大约0.3至大约3000微克(μg)，例如1-1000μg、例如10-500μg、例如大约50、100、150、200、250、300、350、400、450或500μg。也可以为对象给予免疫有效量，随后以所谓的引发-加强方案给予同一对象另一剂的免疫有效量。引发-加强方案的一般概念为疫苗领域技术人员熟知。如果需要，在该方案中可以任选增加给予进一步的加强免疫。
免疫原性组合物是包含免疫有效量的用于本发明的纯化或者部分纯化的腺病毒或MVA载体的组合物。根据本领域熟知的方法可以将所述组合物配制为疫苗(也称作“免疫原性组合物”)。这种组合物可包含佐剂以增强免疫应答。配制物中每种成分的最佳比率可以通过本领域技术人员熟知的技术根据本发明揭示确定。
免疫原性组合物的制备和使用为本领域技术人员熟知。液态药物组合物通常包括液体运载体如水、石油、动物油或植物油、矿物油或合成油。组合物中也可以包含生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖溶液或二醇如乙二醇、丙二醇或者聚乙二醇。
本发明的组合物可包含其它HIV-1抗原或者所述引发或加强免疫可包括其它抗原。与本发明的腺病毒载体组合使用的其它抗原对于本发明不是关键的，可例如是HIV-1抗原及表达其的核酸。
可用于本发明的免疫原性组合物可包括佐剂。根据本发明适于共同给予的佐剂应是在人体中潜在安全的、良好耐受和有效的佐剂，包括QS-21、Detox-PC、MPL-SE、MoGM-CSF、TiterMax-G、CRL-1005、GERBU、TERamide、PSC97B、Adjumer、PG-026、GSK-I、GcMAF、B-alethine、MPC-026、Adjuvax、CpG ODN、Betafectin、铝盐(例如AdjuPhos)、Adjuplex和MF59。
可以给予的其它佐剂包括凝集素、生长因子、细胞因子和淋巴因子如α-干扰素、γ-干扰素、血小板衍生生长因子(PDGF)、粒细胞集落刺激因子(gCSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gMCSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子(EGF)、IL-I、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10和IL-12或者其编码核酸。
本发明的组合物可包含药物可接受的赋形剂、运载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员熟知的其它材料。这种材料应是无毒的且应不干扰活性成分的效力。运载体或其它材料的精确性质可依赖于给予途径，例如肌内、皮下、口腔、静脉内、经皮、粘膜内(例如肠道)、鼻内或者腹膜内途径。
在动物或人生物体中在给予时诱导或刺激抗HIV免疫应答的能力可以在体外或体内使用本领域标准化的多种测定评估。关于可用于评估免疫应答发生和激活的技术的一般性描述见例如Coligan et al.(1992and 1994,Current Protocols in Immunology；ed JWiley&Sons Inc,National Institute of Health)所述。细胞免疫性的测量可以通过测量由激活的效应细胞包括衍生自CD4+和CD8+T细胞的那些细胞分泌的细胞因子状况(例如通过ELISPOT量化IL-10或IFNγ产生细胞)、通过确定免疫效应细胞的激活状态(例如通过传统的[3H]胸苷吸收的T细胞增殖测定)、通过在敏化的对象中测定抗原特异性T淋巴细胞(例如在细胞毒性测定中肽特异性裂解等)进行。
刺激细胞和/或体液应答的能力可以通过抗体结合和/或结合竞争确定(见例如Harlow,1989,Antibodies,Cold Spring Harbor Press)。例如，应答给予的提供免疫原的组合物产生的抗体的滴度可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量。免疫应答也可以通过中和抗体测定测量，其中病毒的中和定义为通过病毒与特异性抗体的反应/抑制/中和而丧失的感染性。免疫应答可进一步通过抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)测定进行测量。
根据本发明的实施方案，在给予对象时，表达载体如重组腺病毒载体或重组MVA载体表达免疫原性多肽。本文描述的任何抗原性多肽均可以由表达载体编码并使用本发明的方法给予对象。表达的免疫原性多肽呈递给对象的免疫系统，从而诱导需要的应答以产生免疫性，或者诱导免疫应答以治疗或预防疾病或感染。例如，应答可以是产生特异于所述免疫原性多肽的抗体。
优选地，在给予对象时，表达载体表达嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原。根据表达的嵌合HIV抗原的序列组成，本发明的嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原呈递给对象的免疫系统可诱导产生特异于HIV gag、pol和/或env基因产物的抗体。
疫苗组合
本发明的一个一般方面涉及疫苗组合以在有需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答，所述疫苗组合包含：
(i)第一组合物，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；
(ii)第二组合物，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽及药物可接受的运载体；和
(iii)免疫有效量的编码一或多个另外的抗原性多肽的一或多个另外的表达载体，
其中第一和第二组合物之一用于引发免疫且另一个组合物用于加强免疫，并且免疫有效量的另外的表达载体存在于第二组合物中或者在与第二组合物一起给予的第三组合物中用于引发或加强免疫。
在优选的实施方案中，分离的抗原性多肽包含HIV包膜糖蛋白。举例的包膜糖蛋白包括上述任何HIV包膜糖蛋白，包括但不限于来自任何HIV进化枝的gp160、gp140、gp120或gp41。优选地，分离的抗原性多肽包含稳定化的HIV包膜蛋白三聚体，如稳定化的HIV gp140三聚体，特别是进化枝C的稳定化的HIV gp140三聚体，如包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的多肽。在本发明另一个实施方案中，HIV包膜糖蛋白是嵌合HIV包膜糖蛋白，如嵌合HIVgp140蛋白质，如包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的蛋白质。
在另一优选的实施方案中，所述表达载体或另外的表达载体是腺病毒载体或MVA载体。优选地，不同来源的载体用于引发和加强免疫。例如，当腺病毒载体用于引发免疫时，MVA载体用于加强免疫。同样，当MVA载体用于引发免疫时，腺病毒载体用于加强免疫。在本发明优选的实施方案中，使用一或多个腺病毒载体、更优选rAd26载体引发免疫，使用一或多个MVA载体与分离的HIV抗原性多肽如HIV包膜蛋白一起用于加强免疫。
在本发明的其它实施方案中，一或多个腺病毒载体、优选rAd26载体用于引发免疫，及一或多个腺病毒载体、优选rAd26载体与分离的HIV抗原性多肽如HIV包膜蛋白、优选稳定化的三聚体gp140蛋白一起用于加强免疫。用于加强免疫的腺病毒载体可编码与用于引发免疫的腺病毒载体编码的那些蛋白质相同的抗原性蛋白质。
在本发明的再一个实施方案中，分离的HIV抗原性多肽及一或多个腺病毒载体、优选rAd26载体用于引发免疫，分离的HIV抗原性多肽及一或多个腺病毒载体、优选rAd26载体用于加强免疫。
根据本发明的实施方案，上述任何HIV抗原性多肽均可以由所述表达载体和另外的表达载体编码。在优选的实施方案中，抗原性多肽是HIV嵌合抗原，更优选是嵌合HIVGag-Pol-Env抗原。举例的嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原包括但不限于包含SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的嵌合抗原。
在本发明的一个实施方案中，第一组合物包含编码一或多个嵌合HIV抗原性多肽如嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原的rAd26载体，第二组合物包含分离的HIV包膜蛋白，如稳定化的HIV gp140三聚体或者嵌合HIV包膜蛋白，以及所述另外的表达载体是编码一或多个嵌合HIV抗原性多肽如嵌合HIV Gag-Pol-Env抗原的MVA载体。
在本发明优选的实施方案中，第一组合物包含编码具有SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的一或多个蛋白质的rAd26载体，第二组合物包含具有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的分离的抗原性多肽，以及所述另外的表达载体是编码具有SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的一或多个蛋白质的MVA载体。
在本发明特别优选的实施方案中，第一组合物包含编码分别具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的三种嵌合HIV蛋白的rAd26载体，第二组合物包含具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的分离的稳定化HIV gp140三聚体，以及MVA载体存在于第三组合物中及编码具有SEQ ID NO:1-4所示氨基酸序列的四种嵌合HIV抗原性蛋白。
根据本发明的实施方案，第一组合物可包含一个表达载体或者一个以上的表达载体。在一个实施方案中，第一组合物包含一个表达载体，如腺病毒载体，更优选rAd26载体。在另一个实施方案中，第一组合物包含一个以上的表达载体，如1、2、3或4个表达载体，优选腺病毒载体，如rAd26载体。所述一或多个表达载体可表达相同或不同HIV抗原性多肽。每个表达载体可表达一个HIV抗原性多肽序列，或者表达一个以上HIV抗原性多肽序列。作为说明性及非限制性例子，第一组合物可包含三个rAd26载体，每个载体表达不同的HIV抗原性多肽，优选选自SEQ ID NO:1-4所示多肽、更优选SEQ ID NO:1、3和4所示多肽。
根据本发明的实施方案，所述一或多个另外的表达载体可以是一个表达载体或者一个以上的表达载体，如2、3、4或更多个表达载体。所述一或多个另外的表达载体可表达相同或不同的抗原性多肽。所述一或多个另外的表达载体的每个载体可表达一个抗原性多肽序列或者多个抗原性多肽序列。作为说明性和非限制性例子，使用两个另外的表达载体，优选MVA载体，每个MVA载体编码不同的嵌合HIV抗原序列，如选自SEQ ID NO:1-4的嵌合HIVGag-Pol-Env抗原序列。优选地，在本发明这种实施方案中，一个MVA载体编码包含SEQ IDNO:1和3所示序列的HIV抗原性多肽，另一MVA载体编码包含SEQ ID NO:2和4所示序列的HIV抗原性多肽。
根据本发明实施方案的疫苗组合有效地诱导针对一或多个HIV进化枝的免疫应答。
诱导针对HIV感染的保护性免疫性的方法
本发明提供了使用一或多个表达载体组合分离的抗原性多肽在有需要的对象中引发和加强对一或多个HIV进化枝的免疫应答的方法。
根据本发明的一个一般方面，在有需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法包括如下步骤：
(i)给予对象第一组合物，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；
(ii)给予对象第二组合物，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽及药物可接受的运载体；
(iii)给予对象免疫有效量的编码一或多个另外的HIV抗原性多肽的一或多个另外的表达载体，
其中步骤(a)和(b)以任一顺序进行，一个步骤用于引发免疫且另一个步骤用于加强免疫，并且免疫有效量的一或多个另外的表达载体存在于第二组合物中或者在与第二组合物一起给予的第三组合物中用于引发或加强免疫。
根据本发明的实施方案的任何疫苗组合均可用于本发明方法中。
根据本发明的实施方案，当涉及本发明描述的方法使用的术语“诱导免疫应答”涵盖了提供保护性免疫性和/或接种对象以对抗感染如HIV感染的预防目的，以及在有需要的对象中引起希望的免疫应答或有效抗感染如HIV感染的治疗目的。优选地，本发明的方法用于预防目的，如提供保护性免疫性。
可用于本发明方法中的分离的抗原性多肽、表达载体、另外的表达载体、由表达载体编码的抗原性多肽等的实施方案在上文详细描述和下文示例的实施例中论述。
在本发明揭示的方法的一个实施方案中，编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒载体用于引发免疫应答。一或多个分离的HIV抗原性多肽可以与一或多个腺病毒载体一起用于引发免疫。引发免疫可以给予多次，例如初始引发免疫在第0时给予，随后再次引发免疫在初始引发免疫给予之后大约10-14周给予。一或多个分离的HIV抗原性多肽与编码一或多个另外的HIV抗原性多肽的一或多个另外的腺病毒或MVA载体一起用于加强免疫应答。加强免疫也可以多次给予，例如首次在初始引发免疫给予后大约22-26周给予，随后再次加强免疫在初始引发免疫给予后大约46-50周给予。监测由所述免疫诱导的免疫应答。
本发明揭示的方法的实施方案还涵盖较短的引发-加强方案，是指最终的加强免疫是在初始引发免疫给予后大约22-26周给予。引发免疫可以在第0周给予。加强免疫可以多次给予，例如首次在初始引发免疫给予之后大约7-9周或者11-13周给予，随后再一次加强免疫在初始引发免疫给予后大约22-26周给予。在某些实施方案中，一或多个分离的HIV抗原性多肽与一或多个腺病毒载体一起给予以引发免疫。
本领域技术人员易于意识到引发和加强给予的方案可以基于在给予后测量的免疫应答而调整。例如，加强组合物通常在给予引发组合物之后几周或几个月后给予，例如在给予引发组合物之后大约2-3周或4周、或者8周、或者16周、或者20周、或者24周、或者28周、或者30周、或者32周或者1-2年给予。
在本发明优选的实施方案中，用于本文揭示的方法中的腺病毒载体包括rAd26载体。在一个举例的实施方案中，rAd26载体用于引发免疫应答，MVA载体与分离的抗原性多肽一起用于加强免疫应答，反之亦然。
在所述方法的一或多个实施方案中，多个rAd26载体用于引发免疫应答，及多个分离的抗原性蛋白质任选与多个MVA载体一起用于加强免疫应答，反之亦然。
在根据本发明方法的一个优选实施方案中，多个rAd26载体用于引发免疫，随后多个MVA载体及分离的抗原性多肽用于加强免疫。优选地，加强免疫是在最后的引发之后10-36周、更优选在引发后12-24周给予。
在各自的引发组合物和加强组合物(然而使用许多加强组合物)中的抗原不需要是相同的，但是应共有抗原决定簇或者彼此基本相似。
包含表达载体和/或抗原性多肽的免疫原性组合物的给予典型是肌内或皮下给予。然而，也可以考虑其它给予方法如静脉内、经皮、真皮内或经鼻给予。肌内给予免疫原性组合物可以通过使用注射针注射表达载体如腺病毒和/或MVA载体和/或抗原性多肽的悬浮液而完成。另一种选择是使用无针注射装置给予所述组合物(例如使用BiojectorTM)或者含有所述疫苗的冻干粉末。
对于静脉内、经皮或皮下注射或者在病患部位注射，所述载体是肠道外可接受的水溶液形式，其是无热原的且具有合适pH、等渗性和稳定性。另外，分离的抗原性多肽是肠道外可接受的溶液形式，具有合适的pH、等渗性和稳定性。本领域技术人员使用例如等渗载体如氯化钠注射液、林格注射液、乳酸化林格注射液能制备合适的溶液。如果需要，可以包含防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。也可以应用缓释制剂。
典型地，给予根据本发明实施方案的疫苗组合物具有预防性目的以在感染或者症状发生之前产生针对HIV抗原的免疫应答。根据本发明可以治疗或预防的疾病和病症包括其中免疫应答可发挥保护性或治疗性作用的那些。在其它实施方案中，可以给予表达载体如腺病毒载体和/或MVA载体和/或抗原性多肽用于暴露后预防。
将含有表达载体例如腺病毒载体和/或MVA载体及抗原性多肽的免疫原性组合物给予对象，在对象中产生抗HIV免疫应答。足以诱导可检测的免疫应答的组合物的量定义为“免疫有效剂量”。如下文实施例所示，本发明的免疫原性组合物诱导体液及细胞介导的免疫应答。在本发明的典型实施方案中，免疫应答是保护性免疫应答。
给予的实际量、速率和时程依赖于治疗的疾病的性质和严重度。治疗处方如剂量的决定等在全科医生及其它医生或者在兽用时在兽医的职责内，典型地要考虑治疗的疾病、患者个体的状况、给予部位、给予方法及为医生已知的其它因素。示例的上述技术和方案可见于Remington′s Pharmaceutical Sciences,16th edition,Osol,A.ed.,1980。
在产生腺病毒和MVA载体及任选将这种颗粒配制为组合物之后，可以将载体给予个体、特别是人或其它灵长类动物。可以给予人或者另外的哺乳动物如小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、绵羊、山羊、猪、马、牛、驴、猴、狗或猫。给予非人哺乳动物不需要是为了治疗目的，而是可用于实验，例如研究对于gp140蛋白质或者由腺病毒或MVA载体表达的抗原的免疫应答的机制。
在一个示例的方案中，给予的(例如肌内给予)腺病毒或MVA载体的范围是大约100μl至大约10ml含有大约104至大约1012个病毒颗粒/ml浓度的盐水溶液。典型地，在一次给予期间给予人对象的腺病毒或MVA载体的量为大约109至大约1012个病毒颗粒(vp)，更典型为大约1010至大约1012vp。最初接种之后如上述进行加强。可例如给予范围为大约0.001-30mg/kg体重的分离的HIV抗原性多肽。技术人员将意识到某些因素可影响有效治疗对象需要的剂量，包括但不限于对象的疾病或病症的严重度、先前的治疗、一般状况和/或年龄及存在的其它疾病。
如果需要，所述组合物可以存在于试剂盒、包装或分配器中，其可包含含有活性成分一或多个单位剂量形式。所述试剂盒例如可包含金属或塑料箔，如泡罩包装。所述试剂盒、包装或分配器可以附有给药说明书。
本发明的组合物可以单独给予或者组合其它治疗，根据治疗的状况及可以影响治疗的其它因素同时或相继给予。
实施方案
实施方案1是疫苗组合物，其在有需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答，其包含：
(i)第一组合物，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；
(ii)第二组合物，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽及药物可接受的运载体；和
(iii)免疫有效量的编码一或多个另外的抗原性多肽的一或多个另外的表达载体，
其中第一和第二组合物之一用于引发免疫且另一组合物用于加强免疫，并且免疫有效量的另外的表达载体存在于第二组合物中或者在与第二组合物一起给予的第三组合物中用于引发或加强免疫。
实施方案2是根据实施方案1的疫苗组合，其中分离的抗原性多肽包含HIV包膜糖蛋白。
实施方案3是根据实施方案2的疫苗组合，其中分离的抗原性多肽包含稳定化HIVgp140三聚体。
实施方案4是根据实施方案1-3任一项的疫苗组合，其中一或多个表达载体及一或多个另外的表达载体是腺病毒载体或MVA载体。
实施方案5是根据实施方案4的疫苗组合，其中一或多个表达载体是rAd26载体及一或多个另外的表达载体是MVA载体；一或多个表达载体是MVA载体及一或多个另外的表达载体是rAd26载体；或者一或多个表达载体是rAd26载体及一或多个另外的表达载体也是rAd26载体。
实施方案6是根据实施方案1-5任一项的疫苗组合，其中一或多个表达载体及一或多个另外的表达载体编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽。
实施方案7是根据实施方案6的疫苗组合，其中一或多个表达载体是编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽的rAd26载体；分离的抗原性多肽包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列；并且一或多个另外的表达载体是编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽的MVA载体。
实施方案8是根据实施方案7的疫苗组合，其中第一组合物用于引发免疫，第二组合物和免疫有效量的一或多个另外的表达载体用于加强免疫。
实施方案9是根据实施方案8的疫苗组合，其中免疫有效量的一或多个另外的表达载体存在于第三组合物中。
实施方案10是根据实施方案9的疫苗组合，其中第一组合物包含编码分别具有SEQID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的三个HIV抗原性多肽的rAd26载体；分离的抗原性多肽包含具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的稳定化HIV gp140三聚体；并且第三组合物包含编码具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的四个HIV抗原性多肽的MVA载体。
实施方案11是根据实施方案1-10任一项的疫苗组合，其中将所述疫苗组合给予对象诱导针对多个HIV进化枝的免疫应答。
实施方案12是根据实施方案1-11任一项的疫苗组合，用于产生针对HIV感染的保护性免疫应答，其中第一组合物用于引发免疫应答，第二组合物和免疫有效量的一或多个另外的表达载体用于加强免疫应答。
实施方案13是包含实施方案1-12任一项的疫苗组合的试剂盒。
实施方案14是一种在需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法，所述方法包括：
(i)给予对象第一组合物，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；
(ii)给予对象第二组合物，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽及药物可接受的运载体；和
(iii)给予对象免疫有效量的编码一或多个另外的HIV抗原性多肽的一或多个另外的表达载体，
其中步骤(i)和(ii)以任一顺序进行，其中一个步骤用于引发免疫且另一个步骤用于加强免疫，并且所述免疫有效量的一或多个另外的表达载体存在于第二组合物中或者存在于与第二组合物一起给予的第三组合物中用于引发或加强免疫。
实施方案15是根据实施方案14的方法，其中分离的抗原性多肽包含HIV包膜糖蛋白。
实施方案16是根据实施方案15的方法，其中分离的抗原性多肽包含稳定化的HIVgp140三聚体。
实施方案17是根据实施方案14-16任一项的方法，其中一或多个表达载体及一或多个另外的表达载体是腺病毒载体或MVA载体。
实施方案18是根据实施方案17的方法，其中一或多个表达载体是rAd26载体及一或多个另外的表达载体是MVA载体；一或多个表达载体是MVA载体及一或多个另外的表达载体是rAd26载体；或者一或多个表达载体是rAd26载体及一或多个另外的表达载体也是rAd26载体。
实施方案19是根据实施方案14-18任一项的方法，其中一或多个表达载体和一或多个另外的表达载体编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽。
实施方案20是根据实施方案19的方法，其中一或多个表达载体是编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽的rAd26载体；分离的抗原性多肽包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列；并且一或多个另外的表达载体是编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽的MVA载体。
实施方案21是根据实施方案20的方法，其中第一组合物用于引发免疫，第二组合物和免疫有效量的一或多个另外的表达载体用于加强免疫。
实施方案22是根据实施方案21的方法，其中免疫有效量的一或多个另外的表达载体存在于第三组合物中。
实施方案23是根据实施方案22的方法，其中第一组合物包含编码分别具有SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的三个HIV抗原性多肽的rAd26载体；分离的抗原性多肽包含具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的稳定化HIV gp140三聚体，并且第三组合物包含编码具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的四个HIV抗原性多肽的MVA载体。
实施方案24是根据实施方案14-23任一项的方法，其中给予对象所述疫苗组合诱导针对多个HIV进化枝的免疫应答。
实施方案25是在需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法，所述方法包括：
(i)给予对象引发疫苗，其包含免疫有效量的编码一或多个HIV抗原性多肽的一或多个表达载体及药物可接受的运载体；和
(ii)给予对象加强疫苗，其包含免疫有效量的分离的抗原性多肽、免疫有效量的编码一或多个另外的HIV抗原性多肽的一或多个另外的表达载体及药物可接受的运载体，
其中分离的抗原性多肽及一或多个另外的表达载体存在于同一组合物或分开的组合物中；并且
其中加强疫苗在给予引发疫苗之后给予。
实施方案26是根据实施方案25的方法，其中加强疫苗在初始给予引发疫苗之后大约22-26周首次给予。
实施方案27是根据实施方案25或26的方法，进一步包括在初始给予对象引发疫苗之后但是在首次给予加强疫苗之前再次给予引发疫苗。
实施方案28是根据实施方案27的方法，其中在初始给予引发疫苗之后大约10-14周再次给予引发疫苗。
实施方案29是根据实施方案25-28任一项的方法，进一步包括再次给予对象加强疫苗。
实施方案30是根据实施方案29的方法，其中在前次给予加强疫苗之后大约22-26周再次给予加强疫苗。
实施方案31是根据实施方案25-30任一项的方法，其中一或多个表达载体是rAd26载体及一或多个另外的表达载体是MVA载体；一或多个表达载体是MVA载体及一或多个另外的表达载体是rAd26载体；或者一或多个表达载体是rAd26载体及一或多个另外的表达载体也是rAd26载体。
实施方案32是根据实施方案25-30任一项的方法，其中一或多个表达载体是编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽的rAd26载体；其中分离的抗原性多肽包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列；并且一或多个另外的表达载体是编码包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列的一或多个HIV抗原性多肽的rAd26载体或MVA载体。
实施方案33是根据实施方案32的方法，其中一或多个另外的表达载体是rAd26载体。
实施方案34是根据实施方案32的方法，其中一或多个另外的表达载体是MVA载体。
实施方案35是根据实施方案25的方法，其中加强疫苗在初始给予引发疫苗之后大约8-12周首次给予，以及在初始给予引发疫苗之后大约24周再次给予。
实施方案36是根据实施方案35的方法，其中引发疫苗进一步包含免疫有效量的分离的HIV抗原性多肽，其中分离的HIV抗原性多肽存在于同一组合物中或者在分开的组合物中。
实施方案37是根据实施方案34-35任一项的方法，其中一或多个表达载体是编码一或多个HIV抗原性多肽序列的rAd26载体，所述HIV抗原性多肽序列优选包含选自SEQ IDNO:1-4的氨基酸序列，其中分离的抗原性多肽是HIV包膜糖蛋白，优选包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列，并且一或多个另外的表达载体是编码一或多个HIV抗原性多肽序列的rAd26或MVA载体，所述HIV抗原性多肽序列优选包含选自SEQ ID NO:1-4的氨基酸序列。
实施方案38是根据实施方案37的方法，其中一或多个表达载体是编码SEQ ID NO:1、3和4所示HIV抗原性多肽序列的rAd26载体；以及一或多个另外的表达载体是编码SEQ IDNO:1、3和4所示HIV抗原性多肽序列的rAd26载体。
实施方案39是在需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法
，所述方法包括：
(i)给予对象引发疫苗，其包含免疫有效量的编码SEQ ID NO:1、3和4所示HIV抗原性多肽的一或多个rAd26表达载体及药物可接受的运载体；和
(ii)给予对象加强疫苗，其包含免疫有效量的包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的分离的HIV包膜糖蛋白及药物可接受的运载体；并且
其中加强疫苗在给予引发疫苗之后给予。
实施方案40是根据实施方案39的方法，其中加强疫苗包含佐剂、优选铝盐，更优选磷酸铝。
实施方案41是根据实施方案39或40的方法，其中加强疫苗中的分离的HIV包膜糖蛋白包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列。
实施方案42是根据实施方案39-41任一项的方法，其中第二引发疫苗在步骤(i)之后及在步骤(ii)之前给予对象，所述第二引发疫苗包含免疫有效量的编码SEQ ID NO:1、3和4所示HIV抗原性多肽的一或多个rAd26表达载体及药物可接受的运载体。
实施方案43是根据实施方案39-42任一项的方法，其中进一步的加强疫苗在步骤(ii)之后给予对象，所述进一步的加强疫苗包含免疫有效量的包含SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:6、优选SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的分离的HIV包膜糖蛋白及药物可接受的运载体。
实施方案44是根据实施方案39-43任一项的方法，其中免疫有效量的包含SEQ IDNO:5所示氨基酸序列的分离的HIV包膜糖蛋白是250μg。
实施方案45是根据实施方案39-44任一项的方法，其中免疫有效量的编码SEQ IDNO:1、3和4所示HIV抗原性多肽的一或多个rAd26表达载体由包含三个rAd26载体组成，第一个载体编码SEQ ID NO:1所示HIV抗原性多肽，第二个载体编码SEQ ID NO:3所示HIV抗原性多肽，以及第三个载体编码SEQ ID NO:4所示HIV抗原性多肽，其中三个rAd26表达载体的给予总剂量为5×1010vp。
如下本发明的实施例进一步阐述本发明的性质。应理解如下实施例不限制本发明，本发明的范围由所附权利要求书确定。
实施例
实施例1：在非人灵长类动物中研究HIV疫苗方案
进行动物研究以鉴别多价HIV-1疫苗方案以进行持续试制。所述研究检测了使用两次引发免疫(在第0周和12周)及第一次加强免疫(在第24周)的延长接种时间方案。第二次加强免疫在第52周给予。特别地，所述研究检测了使用腺病毒或MVA载体与包膜糖蛋白的组合在异源疫苗组合中的影响。体液和细胞免疫应答在接种的非人灵长类动物(也称作“NHP”)中检测。
接种和实验设计
使用四个不同的疫苗平台接种猕猴(Macaca mulatta)(NHP)，每组12只动物(组II-V)，两个对照组(组I和VI)也具有12只动物/组。第一个对照组(组I)接受表达HIV-1嵌合Env1(SEQ ID NO:1)、嵌合GagPol1(SEQ ID:NO 3)和嵌合GagPol2(SEQ ID NO:4)基因而无任何分离的HIV抗原性蛋白质的Ad26载体的引发和加强疫苗。Ad26载体分别称作“Ad26.mos1Env”、“Ad26.mos1Gag-Pol”和“Ad26.mos2Gag-Pol”，统称为“Ad26mos”。第二个对照组(组VI)仅接受安慰剂(“Sham”)引发和加强疫苗。
除了组VI之外的所有组均在第0周和第12周接受两次Ad26mos引发疫苗，随后在第24周接受第一次加强疫苗。随后的加强疫苗在第52周给予。
特别地，II组接受两次Ad26mos引发疫苗，随后接受两次加强疫苗，使用250μg进化枝C Env gp140三聚体蛋白(SEQ ID NO:5)及佐剂磷酸铝(后文称作“gp140药物产品”或者“gp140 DP”)。III组接受两次引发疫苗Ad26mos，随后接受两次加强疫苗，即共同给予的Ad26mos与gp140 DP。IV组接受两次Ad26mos引发疫苗，随后接受两次加强疫苗，即含有两个不同MVA载体的组合物，一个MVA载体表达嵌合Env1基因(SEQ ID NO:1)和嵌合GagPol1基因(SEQ ID NO:3)，另一个MVA载体表达嵌合Env2基因(SEQ ID NO:2)和嵌合GagPol2基因(SEQID NO:4)，所述基因位于载体上分开的位置。所述MVA载体称作“MVA.mos1Env/Gag-Pol”和“MVA.mos2Env/Gag-Pol”，统称为“MVAmos”。V组接受两次引发疫苗Ad26mos，随后接受两次加强疫苗，即共同给予MVAmos和gp140DP。在NHP上检测的疫苗方案在下表1A中概括示出。
表1A：在NHP上检测的疫苗方案
Figure BDA0002725497400000341
Figure BDA0002725497400000351
1Ad26mos＝Ad26.mos1Gag-Pol+Ad26.mos1Env+Ad26.mos2Gag-Pol(总共5x1010 vp)
2MVAmos＝MVA.mos1Env/Gag-Pol+MVA.mos2Env/Gag-Pol(总共1x108 pfu)
3gp140 DP＝通过即时混合制备的纯化的进化枝C Env gp140三聚体蛋白与佐剂(250μg蛋白质+0.425mg磷酸铝)
对取自根据表1A所述方案在初始给予引发疫苗之后在28周和/或54/56周的处理的NHP的样品进行如下初始核心测定实验，包括ELISA结合抗体测定、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)测定及ELISPOT测定。在第72周进行猿猴/人免疫缺陷病毒(SHIV)攻击实验。
ELISA结合抗体(Ab)测定
HIV-1特异性体液应答在第28和56周通过修改的酶联免疫吸附测定(ELISA)确定。96孔平底平板(Nunc)的一列孔用100μL/孔的在10mL的1×Dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水(DPBS)(Gibco/Life Technologies)中稀释的10μg进化枝C(C97ZA.012)gp140包被蛋白(SEQ ID NO:5)或者10μg嵌合1蛋白质(SEQ ID NO:6)包被，在4℃保温过夜。来自先前研究的已知阳性血清样品用作阳性对照，预接种(pre-vaccination)血清样品用作阴性对照。
将平板用200μL的ELISA Wash(1000mL PBS(1×)和0.5mL Tween 20(Sigma))洗涤一次。将孔用250μL封闭液(在PBS中Blocker Casein(Pierce))封闭并在室温保温3-4小时。在保温后，弃去封闭液。然后，在每个平板的第一列的孔中加入150μL封闭液和6μL样品血清，在所有其它孔中加入100μL封闭液。然后沿着平板系列稀释50μL至100μL封闭液，从最终列弃去50μL，由此每个孔具有100μL样品。将平板在室温保温1小时。弃去孔的内容物，然后将孔用200μL的ELISA Wash洗涤3次。
然后，在每个孔中加入在封闭液中的100μL的1:2000二级抗体Peroxidase-AffiniPure山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch Labs)。将平板再次在室温保温1小时及用ELISA Wash洗涤3次。将孔用100μL的SeruBlue TMB Microwell Solution(KPLLaboratories)显色，在使用100μL的TMB Stop Solution(KPL Research Products)之后0.5分钟终止显色。
将平板在ELISA平板读器上在450nm和550nm读数(Molecular Devices-Versamax，及Softmax Pro 4.7.1软件)。使用如下等式(I)计算ELISA EC90滴度，其中变量得自通过SoftMaxPro产生的四参数曲线拟合：
Figure BDA0002725497400000361
其中H表示斜率，F表示应答百分比。
使用关于joint ranking的Dunn方法，通过与对照组非参数比较进行数据的统计学分析，具有最高几何平均数滴度的组分别定义为对照组。
进化枝C gp140(C97)和嵌合1(Mos1)ELISA测定实验的结果在图1A(28周)和图1B(56周)中概括示出。进化枝C gp140 Env和嵌合1Env抗原显示无偏差的良好相关性(数据未示出)。
抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)测定
使用纯化自在第28周从处理的NHP获得的血清样品的免疫球蛋白G抗体(IgG)测量功能性非中和抗体应答。使用Melon Gel柱(Thermo Scientific)纯化IgG并使用Nanodrop分光光度计(Thermo Scientific)量化。如以其全文并入本文作参考的Ackerman et al.(2011)(A robust,high-throughput assay to determine the phagocytic activity ofclinical antibody samples.J.Immunol.Methods 366,8-19)所述进行ADCP测定。
更特别地，将进化枝C(C97)Env(SEQ ID NO:5)和嵌合M(mos 1)(SEQ ID NO:6)Env生物素酰化的抗原与1μm黄绿色荧光中性抗生物素蛋白珠(Invitrogen)保温过夜。然后洗涤该珠并以终稀释度1:100重悬浮于磷酸盐缓冲液盐水-牛血清白蛋白(PBS-BSA)中。将纯化自血清样品的抗体和9×105抗原标记的珠在圆底96孔平板中混合，将该平板保温2小时。然后将得自急性髓性白血病的人单个核细胞(THP-1细胞，2×104个细胞)加入每个孔中，终体积为200μL，将平板保温过夜。
第二天，除去一半的培养体积，用100μL的4％多聚甲醛替换，之后将平板在装备了HTS平板读器的BD LSR II流式细胞分析仪上分析。为了进行分析，将样品门控活细胞，并确定THP-1细胞吞噬作用珠的比例。如下计算吞噬作用得分：(阳性珠百分比)×(阳性珠平均荧光强度)。
在第28周进行ADCP测定获得的结果在图2中概括示出，结果示出个体动物的吞噬作用得分应答。使用关于joint ranking的Dunn方法对所有配对通过非参数比较进行数据统计学分析。
进化枝C gp140 Env和嵌合M Env抗原展示无偏差的良好相关性，这与上述ELISA及下文描述的中和抗体(nAb)测定的结果一致。
中和抗体(nAb)测定
在TZM.bl细胞中使用基于荧光素酶的病毒中和测定测量针对第1级(tier 1)HIVEnv假病毒的中和抗体(nAb)应答。特别地，在第1级的病毒包括MW965.26(进化枝C)、SF162.LS(进化枝B)、MN-3(进化枝A)、DJ263.8(进化枝A)和BaL.26(进化枝B)。
简而言之，将96孔平底平板用得自在第56周的NHP的血清样品包被，制备在100μL的10％Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)中三倍系列稀释的血清样品。然后，在每个孔中加入体积为50μL的200TCID50病毒(组织培养感染剂量，或者在50％接种的细胞培养物中产生病理学改变的致病物质的量)。将平板在37℃保温1小时。然后加入1×104个细胞/孔的TZM.bl细胞，在100μL体积的含有DEAE-葡聚糖终浓度为11μg/mL的10％DMEM(Sigma)中。
IC50以与未稀释的病毒对照组相比在减去细胞对照相关发光单位(无病毒存在的TZM.bl细胞)之后导致相关发光单位降低50％的血清稀释度计算。
图3示出在56周得自NHP的样品中针对MW965.26(进化枝C)、SF162.LS(进化枝B)、MN-3(进化枝A)、DJ263.8(进化枝A)和BaL.26(进化枝B)的HIV-1第1级TZM-bl中和测定的结果。符号表示检测的个体动物的log10转化的ID50滴度，组几何平均滴度以水平线表示。nAb测定的结果与ELISA测定的结果一致。
ELISPOT测定
如前以其全文并入本文作参考的Liu et al.,2009,Nature 457:87-91所述通过IFN-γELISPOT测定评估HIV-1特异性细胞免疫应答。ELISPOT测定利用覆盖总体潜在的人T细胞表位的HIV-1潜在T细胞表位(PTE)肽的集合。在早期研究中，细胞免疫宽度分析利用覆盖每个抗原的10-16个肽的子集，随后使用各个肽进行表位作图，基本上如我们先前在Barouch et al.,2010,Nat.Med.16:319-323[54]中所报道，所述文献以其全文并入本文作参考。表位特异性CD8+和CD4+T淋巴细胞应答通过细胞耗竭研究确定。
简而言之，经处理的NHP的免疫原性在第54周获得的样品中通过IFN-γELISPOT测定使用PTE肽集合进行评估。用PTE肽集合刺激外周血单个核细胞(PBMC)，及在保温后对细胞进行洗涤、标记及显色以显现斑点形成细胞。以平均斑点形成单位(SFU)/106个PBMC表示的ELISPOT测定的结果在图4中示出。
研究结论
如上述动物研究结果及图1-4示出，在引发-加强组合中rAd载体和/或MVA载体与分离的抗原性多肽的组合可用于在灵长类动物中产生广泛的HIV特异性体液和细胞免疫应答。特别地，证实了在灵长类动物中在一或多次加强免疫中掺入gp140蛋白在产生广泛HIV特异性体液和细胞免疫应答中的用途。此外，检测的所有疫苗接种方案在所有免疫的动物(组II-V)中均示出免疫原性。
特别地，给予表达一或多个HIV-1抗原的一或多个rAd26载体(第0周和第12周)，随后在第24周和52周用rAd26载体或MVA载体及分离的进化枝C gp140蛋白质加强免疫，导致对于HIV-1有效的加强体液应答，通过ELISA和ADCP测定结果示出(见图1A、1B和2，特别是组III(标示为Ad26/Ad26+Env)及组V(标示为Ad26/MVA+Env))。此外，给予一或多个rAd26载体，随后在第24周和52周用有或无进化枝C gp140蛋白的MVA载体加强免疫，通过ELISPOT测定测量能显著增加细胞免疫应答(见图4，特别是组IV(标示为Ad26/MVA)和组V(标示为Ad26/MVA+Env))。
实施例2：在人体中HIV疫苗方案的研究
在健康的未感染HIV的成年男性和女性中进行如下多中心、随机的、平行组、安慰剂对照的、双盲临床研究：1/2a期研究以评估同源Ad26嵌合载体疫苗接种方案或者Ad26嵌合及MVA嵌合异源载体载体疫苗接种方案的安全性/耐受性和免疫原性，使用高剂量、低剂量或者无进化枝C gp140蛋白加佐剂进行HIV预防。这项研究在进行中。
总体原则
进行研究以评估7个引发-加强免疫接种方案的安全性/耐受性和免疫原性。对象接受四剂研究疫苗：在第0周和第12周给予Ad26mos或安慰剂；及在第24周和48周给予Ad26mos或MVAmos，均有或无糖蛋白140药物产品(低或高剂量)，或者仅给予安慰剂。
使用的研究疫苗是如下所述的Ad26mos、MVAmos和gp140 DP(也见实施例1)：
(i)Ad26mos由在同一小瓶中提供及以2:1:1比率给予的如下三个疫苗产物组成：Ad26.Mos1Env、Ad26.Mos1Gag-Pol和Ad26.Mos2Gag-Pol，其分别表达HIV-1嵌合Env1(SEQID NO:1)、嵌合GagPol1(SEQ ID:NO 3)及嵌合GagPol2(SEQ ID NO:4)基因；
(ii)MVAmos由在单独的小瓶中提供及以1:1比率给予的如下两个疫苗产物组成：MVA-嵌合1(表达具有SEQ ID NO:1和3序列的嵌合1HIV-1Gag、Pol和Env蛋白的MVA病毒)和MVA-嵌合2(表达具有SEQ ID NO:2和4序列的嵌合2HIV-1Gag、Pol和Env蛋白的MVA病毒)；及
(iii)gp140药物产品含有HIV-1进化枝C糖蛋白140(具有SEQ ID NO:5序列的重组三聚体gp140)，通过构建为产生gp140的转化的
Figure BDA0002725497400000392
细胞系产生。在这项研究中，gp140药物产品与作为佐剂的磷酸铝一起给予，给予的gp140药物产品简称为“gp140 DP”。
目的
这项研究的主要目的包括(1)评估含有Ad26mos、MVAmos和/或gp140 DP成分的各种引发-加强接种方案的安全性/耐受性，及(2)比较不同疫苗接种方案之间的HIV Env结合抗体应答。
这项研究的第二个目的包括评估其它抗体结合、抗体效应子功能和抗体鉴定，以及细胞应答。
这项研究的探究性研究目的包括(1)探究在一亚组对象的粘膜分泌物中的对不同疫苗接种方案的免疫应答；(2)探究不同的疫苗接种方案之间的基因表达模式；及(3)探究针对Ad26抗体的中和抗体。
接种与实验设计
所述研究包括48周接种时期，期间在基线(第0周)、12周和24周接种对象，及在第48周加强免疫接种，48-周随访期至在第96周的最终访视。如表1B所示给予接种，在特定门诊访视取血样以评估免疫应答。
基于第28周的数据分析，随后选择接受随机化方案的对象持续长期随访(在第96周后大约2年)以进行进一步研究。如果第28周数据是不确定的，则在方案选择中考虑第52周数据。在不能明确确定的情况中，这种延长的随访期可包括一组以上的对象，以评估免疫应答的持续性。研究结束是对对象的最后一次访视。
表1B：在人体检测的疫苗接种方案
Figure BDA0002725497400000391
Figure BDA0002725497400000401
*adj是
Figure BDA0002725497400000402
(无菌磷酸铝湿凝胶悬浮液；用作gp140的佐剂；铝含量为0.425mg/0.5mL剂；50μg(低剂量)和250μg(高剂量)是指gp140蛋白的总蛋白质含量。
剂量和给予
根据随机化在四个时间点对象接受研究疫苗剂，在第0周的第一天、第12周和第24周及在第48周加强，通过在三角肌肌内注射给予。对于仅注射一次的观测(即在第0周和12周)，可以使用任一三角肌注射。当在一次观测时给予两次研究疫苗注射时(即第24周和48周)，每次注射使用不同的三角肌(医学指征允许除外)。给予的研究疫苗的剂量如下所示：
(i)Ad26mos(Ad26.Mos1Env+Ad26.Mos1Gag-Pol+Ad26.Mos2Gag-Pol)：
总剂量为5×1010病毒颗粒(vp)/0.5mL注射
(ii)MVAmos(MVA-嵌合1+MVA-嵌合2)：
总剂量为108噬斑形成单位(pfu)/0.5mL注射
(iii)gp140 DP：
低剂量：每0.5mL注射液中50μg gp140 DP总蛋白质，混合药用磷酸铝佐剂(0.425mg铝)，
高剂量：每0.5mL注射液中250μg gp140 DP总蛋白质，混合药用磷酸铝佐剂(0.425mg铝)。
(iv)安慰剂：
0.9％盐水，0.5mL注射液
免疫原性评估
进行评估体液免疫应答的测定，包括但不限于：Env特异性血清结合抗体测定、nAb测定及抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)测定，以及表位作图(见表2)。
表2：体液免疫应答测定
Figure BDA0002725497400000403
Figure BDA0002725497400000411
ADCP＝抗体依赖性细胞吞噬作用；ELISA＝酶联免疫吸附测定；GMT＝几何平均数滴度；Ig＝免疫球蛋白；mo＝月；nAb＝中和抗体；vac＝接种；
a根据对抗体介导的中和作用的敏感性的HIV-1病毒分类：极高(1A级)，高于平均(1B级)，中等(2级)，或者低(3级)1。如果1级示出阳性结果则仅评估2级。
进行评估细胞免疫应答的测定，包括但不限于：ELISPOT、细胞内细胞因子染色，及多参数流式细胞计量术(见表3)。
表3：T细胞免疫应答测定
Figure BDA0002725497400000412
ELISPOT＝酶联免疫斑点测定；HLA＝人白细胞抗原；IFNγ＝干扰素γ；IL-2＝白细胞介素2；mo＝月；PBMC＝外周血单个核细胞；TNFα＝肿瘤坏死因子α；vac＝接种。
注意：HLA仅检测一次(使用基线血样)
实施例3：在人体中进一步研究HIV疫苗接种方案
在人体中进行进一步临床研究以评估在健康未感染HIV的对象中使用表达嵌合HIV抗原的rAd26载体和分离的进化枝C gp140三聚体蛋白的不同疫苗接种方案的安全性/耐受性和免疫原性。特别地，与实施例2所述研究对比，检测较短时间的方案和较少剂量的方案。优化疫苗接种方案可以增加对完整方案的顺应性和/或便于使用及易于给予。
接种和实验设计
在健康的未感染HIV的18-50岁的成年男性和女性中进行单中心的、随机的、平行组、安慰剂对照的、双盲1期临床研究。这项研究中由36个目标人对象参与。将对象分成三组(组1-3)，每组随机12个对象。将每组的对象进一步随机分成两个亚组：亚组A(10个对象)和亚组B(2个对象)。亚组A中的对象接受研究疫苗，亚组B的对象接受安慰剂。不考虑对象的基线Ad26血清阳性率，均注册于研究中。
所述研究包括48周最大接种时期，及直至72周的接种后随访期。对象根据下表4所示方案接受研究疫苗或安慰剂。见实施例2关于用于研究中的疫苗组合物的描述。
表4：在研究中给予研究疫苗的方案
Figure BDA0002725497400000421
组1表示“基本情况”方案，其允许这项研究与实施例2中的研究的数据桥连。在第0、12、24和48周给予组1中的对象四次接种，这是与实施例2的研究中的组1中的对象相同剂量方案(见实施例2中表1B)。在24周内组2和3接受三次接种(组2：第0、12和24周；组3：第0、8和24周)。在特定门诊访视取血样以评估免疫应答。
更特别地，组2探究一种较短的更便利的方案，与“基本情况”不同，这不需要对象返回门诊在第48周后期加强接种。
组3检验了rAd26载体引发与完整方案在性质上相似的应答的能力，在24周后由于在第二次接种给予额外剂量的gp140 DP而获得超过“基本情况”方案的水平的免疫原性水平。
一旦所有对象在第28周完成或较早停止接种，进行期中分析(盲)。一旦所有对象在第52周完成或较早停止接种，进行初始分析(非盲)。一旦所有对象在第72周完成其最终研究，进行最终分析。
实施例4：在人体中对HIV疫苗接种方案的另外研究
也进行在人体中的进一步临床研究以评估在健康的未感染HIV的对象中使用MVA载体和进化枝C gp140三聚体蛋白的不同的疫苗接种方案的安全性/耐受性和免疫原性，其中检测了与实施例2中的研究相比较短给予时间方案和较少剂量方案。对象根据下表5所述方案接受研究疫苗或安慰剂。研究中使用的疫苗组合物如实施例2所述。将研究参与者如实施例3中的研究所述随机分组。
表5：在研究中给予研究疫苗的方案
Figure BDA0002725497400000431
第一组(组1)再次表示“基本情况”方案，其允许这项研究与实施例2的研究的数据桥连。在第0、12、24和48周给予对象四次接种，这与实施例2的研究中组4的对象接受的剂量方案相同(见实施例2中表1B)。其它组(组2和3)接受较短时间方案，在第0、8或12周及24周接种。这项研究中的引发是使用Ad26载体，加强是使用MVA载体。这些方案的可能的优势包括与组1的方案(共48周)相比更加便利及更短时间(共24周)。在特定的门诊访视取血样以评估免疫应答。
应理解本文描述的实施例和实施方案只是例证本发明，在不偏离本发明精神的范围内可以对上述实施方案进行改变。因此应理解本发明不限于所揭示的特定实施方案，而是涵盖在所附权利要求书限定的本发明精神和范围内的修改。
参考文献
1.Gurwith,M.,et al.,Safety and immunogenicity of an oral,replicatingadenovirus serotype 4 vector vaccine for H5N1 influenza:a randomised,double-blind,placebo-controlled,phase 1study.Lancet Infect Dis,2013.13(3):p.238-50.
2.Centers for Disease,Control,and Prevention,Vital signs:HIVprevention through care and treatment--United States.MMWR Morb Mortal WklyRep,2011.60(47):p.1618-23.
3.Centlivre,M.,et al.,In HIV-1pathogenesis the die is cast duringprimary infection.AIDS,2007.21(1):p.1-11.
4.Wawer,M.J.,et al.,Rates of HIV-1transmission per coital act,bystage of HIV-1infection,in Rakai,Uganda.J Infect Dis,2005.191(9):p.1403-9.
5.Flynn,N.M.,et al.,Placebo-controlled phase 3trial of a recombinantglycoprotein 120vaccine to prevent HIV-1infection.J Infect Dis,2005.191(5):p.654-65.
6.Pitisuttithum,P.,et al.,Randomized,double-blind,placebo-controlledefficacy trial of a bivalent recombinant glycoprotein 120HIV-1vaccine amonginjection drug users in Bangkok,Thailand.J Infect Dis,2006.194(12):p.1661-71.
7.Gray,G.E.,et al.,Safety and efficacy of the HVTN 503/Phambili studyof a clade-B-based HIV-1vaccine in South Africa:a double-blind,randomised,placebo-controlled test-of-concept phase 2b study.Lancet Infect Dis,2011.11(7):p.507-15.
8.Buchbinder,S.P.,et al.,Efficacy assessment of a cell-mediatedimmunity HIV-1 vaccine(the Step Study):a double-blind,randomised,placebo-controlled,test-of-concept trial.Lancet,2008.372(9653):p.1881-93.
9.Rerks-Ngarm,S.,et al.,Vaccination with ALVAC and AIDSVAX to preventHIV-1 infection in Thailand.N Engl J Med,2009.361(23):p.2209-20.
10.McElrath,M.J.,et al.,HIV-1vaccine-induced immunity in the test-of-concept Step Study:a case-cohort analysis.Lancet,2008.372(9653):p.1894-905.
11.Abbink,P.,et al.,Comparative seroprevalence and immunogenicity ofsix rare serotype recombinant adenovirus vaccine vectors from subgroups B andD.J Virol,2007.81(9):p.4654-63.
12.Vogels,R.,et al.,Replication-deficient human adenovirus type 35vectors for gene transfer and vaccination:efficient human cell infection andbypass of preexisting adenovirus immunity.J Virol,2003.77(15):p.8263-71.
13.Farina,S.F.,et al.,Replication-defective vector based on achimpanzee adenovirus.J Virol,2001.75(23):p.11603-13.
14.Barouch,D.H.,et al.,International seroepidemiology of adenovirusserotypes 5,26,35,and 48 in pediatric and adult populations.Vaccine,2011.29:p.5203-5209.
15.Mast,T.C.,et al.,International epidemiology of human pre-existingadenovirus(Ad)type-5,type-6,type-26 and type-36 neutralizing antibodies:correlates of high Ad5 titers and implications for potential HIV vaccinetrials.Vaccine,2010.28(4):p.950-7.
16.Chen,H.,et al.,Adenovirus-based vaccines:comparison of vectorsfrom three species of adenoviridae.J Virol,2010.84(20):p.10522-32.
17.Thorner,A.R.,et al.,Age dependence of adenovirus-specificneutralizing antibody titers in individuals from sub-Saharan Africa.J ClinMicrobiol,2006.44(10):p.3781-3.
18.Sprangers,M.C.,et al.,Quantifying adenovirus-neutralizingantibodies by luciferase transgene detection:addressing preexisting immunityto vaccine and gene therapy vectors.J Clin Microbiol,2003.41(11):p.5046-52.
19.Waddington,S.N.,et al.,Adenovirus serotype 5 hexon mediates livergene transfer.Cell,2008.132(3):p.397-409.
20.Liu,J.,et al.,Magnitude and phenotype of cellular immune responseselicited by recombinant adenovirus vectors and heterologous prime-boostregimens in rhesus monkeys.J Virol,2008.82(10):p.4844-52.
21.Liu,J.,et al.,Immune control of an SIV challenge by a T-cell-basedvaccine in rhesus monkeys.Nature,2009.457(7225):p.87-91.
22.Lore,K.,et al.,Myeloid and plasmacytoid dendritic cells aresusceptible to recombinant adenovirus vectors and stimulate polyfunctionalmemory T cell responses.J Immunol,2007.179(3):p.1721-9.
23.unpublished,Barouch.et al.
24.Barouch et al.,.in AIDS Vaccine.2009.Paris,France.
25.Kuschner,R.A.,et al.,A phase 3,randomized,double-blind,placebo-controlled study of the safety and efficacy of the live,oral adenovirus type4 and type 7 vaccine,in U.S.military recruits.Vaccine,2013.31(28):p.2963-71.
26.Masopust,D.and L.J.Picker,Hidden memories:frontline memory T cellsand early pathogen interception.J Immunol,2012.188(12):p.5811-7.
27.Bell,J.A.,et al.,Illness and microbial experiences of nurserychildren at junior village.American Journal of Hygiene,1961.74:p.267-292.
28.Rhee,E.G.and D.H.Barouch,Adenoviruses,in Principles and Practiceof Infectious Diseases,G.L.Mandell,J.E.Bennett,and R.Dolin,Editors.2010,Elsevier:Philadelphia,PA.
29.Brandt,C.D.,et al.,Infections in 18,000 infants and children in acontrolled study of respiratory tract disease.I.Adenovirus pathogenicity inrelation to serologic type and illness syndrome.Am J Epidemiol,1969.90(6):p.484-500.
30.Fox,J.P.,et al.,The virus watch program:a continuing surveillanceof viral infections in metropolitan New York families.VI.Observations ofadenovirus infections:virus excretion patterns,antibody response,efficiencyof surveillance,patterns of infections,and relation to illness.Am JEpidemiol,1969.89(1):p.25-50.
31.Fox,J.P.,C.E.Hall,and M.K.Cooney,The Seattle VirusWatch.VII.Observations of adenovirus infections.Am J Epidemiol,1977.105(4):p.362-86.
32.Noel,J.,et al.,Identification of adenoviruses in faeces frompatients with diarrhoea at the Hospitals for Sick Children,London,1989-1992.JMed Virol,1994.43(1):p.84-90.
33.Faden,H.,et al.,Pediatric adenovirus infection:relationship ofclinical spectrum,seasonal distribution,and serotype.Clin Pediatr(Phila),2011.50(6):p.483-7.
34.Abbas,K.Z.,et al.,Temporal changes in respiratory adenovirusserotypes circulating in the greater Toronto area,Ontario,during December2008 to April 2010.Virol J,2013.10:p.15.
35.Diarrhea:Why children are still dying and what can be done,2009,The United Nations Chidlren′s Fund(UNICEF)/World Health Organization(WHO):NewYork,NY.
36.Ramani,S.and G.Kang,Viruses causing childhood diarrhoea in thedeveloping world.Curr Opin Infect Dis,2009.22(5):p.477-82.
37.Kotloff,K.L.,et al.,Burden and aetiology of diarrhoeal disease ininfants and young children in developing countries(the Global EntericMulticenter Study,GEMS):a prospective,case-control study.Lancet,2013.382(9888):p.209-22.
38.Magwalivha,M.,et al.,High prevalence of species D humanadenoviruses in fecal specimens from Urban Kenyan children with diarrhea.JMed Virol,2010.82(1):p.77-84.
39.Liu,L.Y.,et al.,[Investigation of adenovirus infection inhospitalized children with diarrhea during 2010 in Beijing,China].Zhonghua ErKe Za Zhi,2012.50(6):p.450-4.
40.Ouyang,Y.,et al.,Etiology and epidemiology of viral diarrhea inchildren under the age of five hospitalized in Tianjin,China.Arch Virol,2012.157(5):p.881-7.
41.Lee,J.I.,et al.,Detection and molecular characterization ofadenoviruses in Korean children hospitalized with acutegastroenteritis.Microbiol Immunol,2012.56(8):p.523-8.
42.Espinola,E.E.,et al.,Genetic diversity of human adenovirus inhospitalized children with severe acute lower respiratory infections inParaguay.J Clin Virol,2012.53(4):p.367-9.
43.Mast,T.C.,et al.,International epidemiology of human pre-existingadenovirus(Ad)type-5,type-6,type-26 and type-36 neutralizing antibodies:correlates of high Ad5 titers and implications for potential HIV vaccinetrials.Vaccine,2010.28:p.950-957.
44.Kasel,J.A.,et al.,Conjunctivitis and enteric infection withadenovirus types 26 and 27:responses to primary,secondary and reciprocalcross-challenges.Am J Hyg,1963.77:p.265-82.
45.Hierholzer,J.C.,et al.,Adenoviruses from patients with AIDS:aplethora of serotypes and a description of five new serotypes of subgenus D(types 43-47).J Infect Dis,1988.158(4):p.804-13.
46.Khoo,S.H.,et al.,Adenovirus infections in human immunodeficiencyvirus-positive patients:clinical features and molecular epidemiology.J InfectDis,1995.172(3):p.629-37.
47.Curlin,M.E.,et al.,Frequent detection of human adenovirus from thelower gastrointestinal tract in men who have sex with men.PLoS One,2010.5(6):p.e11321.
48.Dubberke,E.R.,et al.,Acute meningoencephalitis caused byadenovirus serotype 26.J Neurovirol,2006.12(3):p.235-40.
49.Koneru,B.,et al.,Adenoviral infections in pediatric livertransplant recipients.JAMA,1987.258(4):p.489-92.
50.Venard,V.,et al.,Genotyping of adenoviruses isolated in anoutbreak in a bone marrow transplant unit shows that diverse strains areinvolved.J Hosp Infect,2000.44(1):p.71-4.
51.Al Qurashi,Y.M.,M.Guiver,and R.J.Cooper,Sequence typing ofadenovirus from samples from hematological stem cell transplant recipients.JMed Virol,2011.83(11):p.1951-8.
52.Janes,H.,et al.,MRKAd5 HIV-1Gag/Pol/Nef vaccine-induced T-cellresponses inadequately predict distance of breakthrough HIV-1sequences to thevaccine or viral load.PLoS One,2012.7(8):p.e43396.
53.Fischer,W.,et al.,Polyvalent vaccines for optimal coverage ofpotential T-cell epitopes in global HIV-1variants.Nat Med,2007.13(1):p.100-6.
54.Barouch,D.H.,et al.,Mosaic HIV-1 vaccines expand the breadth anddepth of cellular immune responses in rhesus monkeys.Nat Med,2010.16(3):p.319-23.
55.Santra,S.,et al.,Mosaic vaccines elicit CD8+T lymphocyte responsesthat confer enhanced immune coverage of diverse HIV strains in monkeys.NatMed,2010.16(3):p.324-8.
56.Li,Q.,et al.,Visualizing antigen-specific and infected cells insitu predicts outcomes in early viral infection.Science,2009.323(5922):p.1726-9.
57.Baden,L.R.,et al.,First-in-human evaluation of the safety andimmunogenicity of a recombinant adenovirus serotype 26HIV-1Env vaccine(IPCAVD001).J Infect Dis,2013.207(2):p.240-7.
58.Barouch,D.H.,et al.,Characterization of humoral and cellularimmune responses elicited by a recombinant adenovirus serotype 26HIV-1Envvaccine in healthy adults(IPCAVD 001).J Infect Dis,2013.207(2):p.248-56.
59.WO 2010/042942，题目“Biochemically stabilized HIV-1ENV TrimerVaccine”
60.Kovacs et al,“HIV-1envelope trimer elicits more potentneutralizing antibody responses than monomeric gp120,”PNAS 2012,109(30):12111-6.
61.Havenga,et al.,(2006)J Gen Virol 87(Pt 8):2135-43.
62.Jin,et al.,Vaccine 28(27):4369-75.
63.de Gruijl,et al.,(2006)J Immunol 177(4):2208-15.
64.Haslett et al.Journal of Infectious Diseases 181:1264-72(2000),page 1268.
65.Barouch et al.,Cell 155:1-9,2013.
66.Yang et al.(2002)J.Virol.76:4634.
67.Chen et al.(2004)J.Virol.78:4508.
68.Nkolola et al.,2010.Breadth of Neutralizing Antibodies Elicited byStable,Homogeneous Clade A and Clade C HIV-1 gp140 Envelope Trimers in GuineaPigs.J.Virology 84(7):3270-3279.
69.Cohen et al,2002,J Gen Virol 83:151-55.
70.Kobinger et al,2006,Virology 346:394-401.
71.Tatsis et al.,2007,Molecular Therapy 15:608-17.
72.Bangari and Mittal,2006,Vaccine 24:849-62.
73.Lasaro and Ertl,2009,Mol Ther 17:1333-39.
74.Mayr et al.(1975),Infection 3,6-14.
75.Mayr,A.&Danner,K.(1978),Dev.Biol.Stand.41:225-234.
76.Mayr et al.(1978),Zentralbl.Bacteriol.(B)167:375-390.
77.Stickl(1974),Prev.Med.3:97-101.
78.Stickl and Hochstein-Mintzel(1971),Munch.Med.Wochenschr.113:1149-1153.
79.Blanchard et al.(1998),J.Gen.Virol.79:1159-1167.
80.Carroll&Moss(1997),Virology 238:198-211.
81.Ambrosini et al.(1999),J.Neurosci.Res.55:569.
82.Boukamp et al(1988),J.Cell Biol.106:761-771.
83.J.Sambrook et al.,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989).
序列表
<110> 贝斯以色列护理医疗中心有限公司 扬森疫苗与预防公司
<120> 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物
<130> 688097-53WO (CRU5171WOPCT/0246 WO 00 ORD)
<160> 7
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 685
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mos1.Env mosaic antigen sequence
<400> 1
Met Arg Val Thr Gly Ile Arg Lys Asn Tyr Gln His Leu Trp Arg Trp
1 5 10 15
Gly Thr Met Leu Leu Gly Ile Leu Met Ile Cys Ser Ala Ala Gly Lys
20 25 30
Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu Ala Thr
35 40 45
Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Asp Thr Glu Val
50 55 60
His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro
65 70 75 80
Gln Glu Val Val Leu Glu Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp Lys
85 90 95
Asn Asn Met Val Glu Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp
100 105 110
Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu
115 120 125
Asn Cys Thr Asp Asp Val Arg Asn Val Thr Asn Asn Ala Thr Asn Thr
130 135 140
Asn Ser Ser Trp Gly Glu Pro Met Glu Lys Gly Glu Ile Lys Asn Cys
145 150 155 160
Ser Phe Asn Ile Thr Thr Ser Ile Arg Asn Lys Val Gln Lys Gln Tyr
165 170 175
Ala Leu Phe Tyr Lys Leu Asp Val Val Pro Ile Asp Asn Asp Ser Asn
180 185 190
Asn Thr Asn Tyr Arg Leu Ile Ser Cys Asn Thr Ser Val Ile Thr Gln
195 200 205
Ala Cys Pro Lys Val Ser Phe Glu Pro Ile Pro Ile His Tyr Cys Ala
210 215 220
Pro Ala Gly Phe Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asp Lys Lys Phe Asn Gly
225 230 235 240
Thr Gly Pro Cys Thr Asn Val Ser Thr Val Gln Cys Thr His Gly Ile
245 250 255
Arg Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly Ser Leu Ala Glu
260 265 270
Glu Glu Val Val Ile Arg Ser Glu Asn Phe Thr Asn Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Ile Met Val Gln Leu Asn Val Ser Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Pro
290 295 300
Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile His Ile Gly Pro Gly Arg Ala Phe
305 310 315 320
Tyr Thr Ala Gly Asp Ile Ile Gly Asp Ile Arg Gln Ala His Cys Asn
325 330 335
Ile Ser Arg Ala Asn Trp Asn Asn Thr Leu Arg Gln Ile Val Glu Lys
340 345 350
Leu Gly Lys Gln Phe Gly Asn Asn Lys Thr Ile Val Phe Asn His Ser
355 360 365
Ser Gly Gly Asp Pro Glu Ile Val Met His Ser Phe Asn Cys Gly Gly
370 375 380
Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Ser Thr Lys Leu Phe Asn Ser Thr Trp Thr
385 390 395 400
Trp Asn Asn Ser Thr Trp Asn Asn Thr Lys Arg Ser Asn Asp Thr Glu
405 410 415
Glu His Ile Thr Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp
420 425 430
Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Arg Gly Gln Ile
435 440 445
Arg Cys Ser Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Asp Gly Gly
450 455 460
Asn Asp Thr Ser Gly Thr Glu Ile Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp Met
465 470 475 480
Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys Ile
485 490 495
Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg Arg Val Val Gln
500 505 510
Ser Glu Lys Ser Ala Val Gly Ile Gly Ala Val Phe Leu Gly Phe Leu
515 520 525
Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Met Thr Leu Thr Val
530 535 540
Gln Ala Arg Leu Leu Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Asn Asn Leu
545 550 555 560
Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln His Leu Leu Gln Leu Thr Val Trp
565 570 575
Gly Ile Lys Gln Leu Gln Ala Arg Val Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu
580 585 590
Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile
595 600 605
Cys Thr Thr Thr Val Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn Lys Ser Leu
610 615 620
Asp Lys Ile Trp Asn Asn Met Thr Trp Met Glu Trp Glu Arg Glu Ile
625 630 635 640
Asn Asn Tyr Thr Ser Leu Ile Tyr Thr Leu Ile Glu Glu Ser Gln Asn
645 650 655
Gln Gln Glu Lys Asn Glu Gln Glu Leu Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala
660 665 670
Ser Leu Trp Asn Trp Phe Asp Ile Ser Asn Trp Leu Trp
675 680 685
<210> 2
<211> 684
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mos2.Env mosaic antigen sequence
<400> 2
Met Arg Val Arg Gly Ile Gln Arg Asn Trp Pro Gln Trp Trp Ile Trp
1 5 10 15
Gly Ile Leu Gly Phe Trp Met Ile Ile Ile Cys Arg Val Met Gly Asn
20 25 30
Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu Ala Lys
35 40 45
Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Glu Lys Glu Val
50 55 60
His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro
65 70 75 80
Gln Glu Met Val Leu Glu Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp Lys
85 90 95
Asn Asp Met Val Asp Gln Met His Glu Asp Ile Ile Arg Leu Trp Asp
100 105 110
Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu
115 120 125
Glu Cys Arg Asn Val Arg Asn Val Ser Ser Asn Gly Thr Tyr Asn Ile
130 135 140
Ile His Asn Glu Thr Tyr Lys Glu Met Lys Asn Cys Ser Phe Asn Ala
145 150 155 160
Thr Thr Val Val Glu Asp Arg Lys Gln Lys Val His Ala Leu Phe Tyr
165 170 175
Arg Leu Asp Ile Val Pro Leu Asp Glu Asn Asn Ser Ser Glu Lys Ser
180 185 190
Ser Glu Asn Ser Ser Glu Tyr Tyr Arg Leu Ile Asn Cys Asn Thr Ser
195 200 205
Ala Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Ser Phe Asp Pro Ile Pro Ile
210 215 220
His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Tyr Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asn Lys
225 230 235 240
Thr Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Asn Asn Val Ser Thr Val Gln Cys
245 250 255
Thr His Gly Ile Lys Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly
260 265 270
Ser Leu Ala Glu Glu Glu Ile Ile Ile Arg Ser Glu Asn Leu Thr Asn
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Ile Ile Val His Leu Asn Glu Thr Val Asn Ile Thr
290 295 300
Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gly Pro
305 310 315 320
Gly Gln Thr Phe Tyr Ala Thr Gly Asp Ile Ile Gly Asp Ile Arg Gln
325 330 335
Ala His Cys Asn Leu Ser Arg Asp Gly Trp Asn Lys Thr Leu Gln Gly
340 345 350
Val Lys Lys Lys Leu Ala Glu His Phe Pro Asn Lys Thr Ile Asn Phe
355 360 365
Thr Ser Ser Ser Gly Gly Asp Leu Glu Ile Thr Thr His Ser Phe Asn
370 375 380
Cys Arg Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Ser Gly Leu Phe Asn Gly
385 390 395 400
Thr Tyr Met Pro Asn Gly Thr Asn Ser Asn Ser Ser Ser Asn Ile Thr
405 410 415
Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp Gln Glu Val Gly
420 425 430
Arg Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Ala Gly Asn Ile Thr Cys Arg Ser
435 440 445
Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Asp Gly Gly Ser Asn Asn Gly
450 455 460
Val Pro Asn Asp Thr Glu Thr Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp Met Arg
465 470 475 480
Asn Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Glu Val Lys
485 490 495
Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Glu Ala Lys Arg Arg Val Val Glu Ser
500 505 510
Glu Lys Ser Ala Val Gly Ile Gly Ala Val Phe Leu Gly Ile Leu Gly
515 520 525
Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Ile Thr Leu Thr Val Gln
530 535 540
Ala Arg Gln Leu Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Ser Asn Leu Leu
545 550 555 560
Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln His Met Leu Gln Leu Thr Val Trp Gly
565 570 575
Ile Lys Gln Leu Gln Thr Arg Val Leu Ala Ile Glu Arg Tyr Leu Gln
580 585 590
Asp Gln Gln Leu Leu Gly Leu Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile Cys
595 600 605
Thr Thr Ala Val Pro Trp Asn Thr Ser Trp Ser Asn Lys Ser Gln Thr
610 615 620
Asp Ile Trp Asp Asn Met Thr Trp Met Gln Trp Asp Lys Glu Ile Gly
625 630 635 640
Asn Tyr Thr Gly Glu Ile Tyr Arg Leu Leu Glu Glu Ser Gln Asn Gln
645 650 655
Gln Glu Lys Asn Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Ser Trp Lys Asn
660 665 670
Leu Trp Asn Trp Phe Asp Ile Thr Asn Trp Leu Trp
675 680
<210> 3
<211> 1350
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mos1.Gag-Pol mosaic antigen sequence
<400> 3
Met Gly Ala Arg Ala Ser Val Leu Ser Gly Gly Glu Leu Asp Arg Trp
1 5 10 15
Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Arg Leu Lys
20 25 30
His Ile Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro
35 40 45
Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu
50 55 60
Gln Pro Ser Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn
65 70 75 80
Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Ile Lys Asp
85 90 95
Thr Lys Glu Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys
100 105 110
Lys Lys Ala Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val
115 120 125
Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Ile Gln Gly Gln Met Val His
130 135 140
Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu
145 150 155 160
Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser
165 170 175
Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly
180 185 190
Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu
195 200 205
Ala Ala Glu Trp Asp Arg Val His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala
210 215 220
Pro Gly Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr
225 230 235 240
Ser Thr Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile
245 250 255
Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys
260 265 270
Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Val Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gln Gly
275 280 285
Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu
290 295 300
Arg Ala Glu Gln Ala Ser Gln Asp Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr
305 310 315 320
Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala
325 330 335
Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly
340 345 350
Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser
355 360 365
Gln Val Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg
370 375 380
Asn Gln Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His
385 390 395 400
Ile Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys
405 410 415
Gly Lys Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn
420 425 430
Phe Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser Asn Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe
435 440 445
Leu Gln Asn Arg Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu Glu Ser Phe Arg
450 455 460
Phe Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp
465 470 475 480
Lys Glu Met Tyr Pro Leu Ala Ser Leu Lys Ser Leu Phe Gly Asn Asp
485 490 495
Pro Ser Ser Gln Met Ala Pro Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val Pro Val
500 505 510
Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Arg Val Lys Gln Trp Pro Leu
515 520 525
Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Thr Ala Ile Cys Glu Glu Met Glu
530 535 540
Lys Glu Gly Lys Ile Thr Lys Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr
545 550 555 560
Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu
565 570 575
Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val
580 585 590
Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val
595 600 605
Thr Val Leu Ala Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu Asp Glu
610 615 620
Gly Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Thr Asn Asn Glu
625 630 635 640
Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys
645 650 655
Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Cys Ser Met Thr Arg Ile Leu Glu Pro
660 665 670
Phe Arg Ala Lys Asn Pro Glu Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met Ala Ala
675 680 685
Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln His Arg Ala Lys Ile
690 695 700
Glu Glu Leu Arg Glu His Leu Leu Lys Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp
705 710 715 720
Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu Trp Met Gly Tyr Glu Leu
725 730 735
His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile Gln Leu Pro Glu Lys Asp
740 745 750
Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu Val Gly Lys Leu Asn Trp
755 760 765
Ala Ser Gln Ile Tyr Pro Gly Ile Lys Val Arg Gln Leu Cys Lys Leu
770 775 780
Leu Arg Gly Ala Lys Ala Leu Thr Asp Ile Val Pro Leu Thr Glu Glu
785 790 795 800
Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val
805 810 815
His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu Ile Ala Glu Ile Gln
820 825 830
Lys Gln Gly His Asp Gln Trp Thr Tyr Gln Ile Tyr Gln Glu Pro Phe
835 840 845
Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Lys Met Arg Thr Ala His Thr
850 855 860
Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala Val Gln Lys Ile Ala Met Glu
865 870 875 880
Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys Phe Arg Leu Pro Ile Gln
885 890 895
Lys Glu Thr Trp Glu Thr Trp Trp Thr Asp Tyr Trp Gln Ala Thr Trp
900 905 910
Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro Pro Leu Val Lys Leu Trp
915 920 925
Tyr Gln Leu Glu Lys Asp Pro Ile Ala Gly Val Glu Thr Phe Tyr Val
930 935 940
Ala Gly Ala Ala Asn Arg Glu Thr Lys Leu Gly Lys Ala Gly Tyr Val
945 950 955 960
Thr Asp Arg Gly Arg Gln Lys Ile Val Ser Leu Thr Glu Thr Thr Asn
965 970 975
Gln Lys Thr Ala Leu Gln Ala Ile Tyr Leu Ala Leu Gln Asp Ser Gly
980 985 990
Ser Glu Val Asn Ile Val Thr Ala Ser Gln Tyr Ala Leu Gly Ile Ile
995 1000 1005
Gln Ala Gln Pro Asp Lys Ser Glu Ser Glu Leu Val Asn Gln Ile
1010 1015 1020
Ile Glu Gln Leu Ile Lys Lys Glu Arg Val Tyr Leu Ser Trp Val
1025 1030 1035
Pro Ala His Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Gln Val Asp Lys Leu
1040 1045 1050
Val Ser Ser Gly Ile Arg Lys Val Leu Phe Leu Asp Gly Ile Asp
1055 1060 1065
Lys Ala Gln Glu Glu His Glu Lys Tyr His Ser Asn Trp Arg Ala
1070 1075 1080
Met Ala Ser Asp Phe Asn Leu Pro Pro Val Val Ala Lys Glu Ile
1085 1090 1095
Val Ala Ser Cys Asp Gln Cys Gln Leu Lys Gly Glu Ala Met His
1100 1105 1110
Gly Gln Val Asp Cys Ser Pro Gly Ile Trp Gln Leu Ala Cys Thr
1115 1120 1125
His Leu Glu Gly Lys Ile Ile Leu Val Ala Val His Val Ala Ser
1130 1135 1140
Gly Tyr Ile Glu Ala Glu Val Ile Pro Ala Glu Thr Gly Gln Glu
1145 1150 1155
Thr Ala Tyr Phe Ile Leu Lys Leu Ala Gly Arg Trp Pro Val Lys
1160 1165 1170
Val Ile His Thr Ala Asn Gly Ser Asn Phe Thr Ser Ala Ala Val
1175 1180 1185
Lys Ala Ala Cys Trp Trp Ala Gly Ile Gln Gln Glu Phe Gly Ile
1190 1195 1200
Pro Tyr Asn Pro Gln Ser Gln Gly Val Val Ala Ser Met Asn Lys
1205 1210 1215
Glu Leu Lys Lys Ile Ile Gly Gln Val Arg Asp Gln Ala Glu His
1220 1225 1230
Leu Lys Thr Ala Val Gln Met Ala Val Phe Ile His Asn Phe Lys
1235 1240 1245
Arg Lys Gly Gly Ile Gly Gly Tyr Ser Ala Gly Glu Arg Ile Ile
1250 1255 1260
Asp Ile Ile Ala Thr Asp Ile Gln Thr Lys Glu Leu Gln Lys Gln
1265 1270 1275
Ile Ile Lys Ile Gln Asn Phe Arg Val Tyr Tyr Arg Asp Ser Arg
1280 1285 1290
Asp Pro Ile Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly Glu
1295 1300 1305
Gly Ala Val Val Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile Lys Val Val Pro
1310 1315 1320
Arg Arg Lys Val Lys Ile Ile Lys Asp Tyr Gly Lys Gln Met Ala
1325 1330 1335
Gly Ala Asp Cys Val Ala Gly Arg Gln Asp Glu Asp
1340 1345 1350
<210> 4
<211> 1341
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mos2.Gag-Pol mosaic antigen sequence
<400> 4
Met Gly Ala Arg Ala Ser Ile Leu Arg Gly Gly Lys Leu Asp Lys Trp
1 5 10 15
Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys His Tyr Met Leu Lys
20 25 30
His Leu Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Leu Asn Pro
35 40 45
Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Lys Gln Ile Ile Lys Gln Leu
50 55 60
Gln Pro Ala Leu Gln Thr Gly Thr Glu Glu Leu Arg Ser Leu Phe Asn
65 70 75 80
Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Ala Glu Ile Glu Val Arg Asp
85 90 95
Thr Lys Glu Ala Leu Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Gln
100 105 110
Gln Lys Thr Gln Gln Ala Lys Glu Ala Asp Gly Lys Val Ser Gln Asn
115 120 125
Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met Val His Gln Pro Ile
130 135 140
Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Ile Glu Glu Lys Ala
145 150 155 160
Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Thr Ala Leu Ser Glu Gly Ala
165 170 175
Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln
180 185 190
Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Asp Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu
195 200 205
Trp Asp Arg Leu His Pro Val His Ala Gly Pro Val Ala Pro Gly Gln
210 215 220
Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Asn Leu
225 230 235 240
Gln Glu Gln Ile Ala Trp Met Thr Ser Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly
245 250 255
Asp Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg
260 265 270
Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Lys Gln Gly Pro Lys Glu
275 280 285
Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Phe Lys Thr Leu Arg Ala Glu
290 295 300
Gln Ala Thr Gln Asp Val Lys Asn Trp Met Thr Asp Thr Leu Leu Val
305 310 315 320
Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Arg Ala Leu Gly Pro
325 330 335
Gly Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly
340 345 350
Pro Ser His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln Thr Asn
355 360 365
Ser Thr Ile Leu Met Gln Arg Ser Asn Phe Lys Gly Ser Lys Arg Ile
370 375 380
Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile Ala Arg Asn Cys
385 390 395 400
Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly His
405 410 415
Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys Ile
420 425 430
Trp Pro Ser His Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg Pro
435 440 445
Glu Pro Thr Ala Pro Pro Ala Glu Ser Phe Arg Phe Glu Glu Thr Thr
450 455 460
Pro Ala Pro Lys Gln Glu Pro Lys Asp Arg Glu Pro Leu Thr Ser Leu
465 470 475 480
Arg Ser Leu Phe Gly Ser Asp Pro Leu Ser Gln Met Ala Pro Ile Ser
485 490 495
Pro Ile Glu Thr Val Pro Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro
500 505 510
Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val
515 520 525
Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly
530 535 540
Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Ile Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp
545 550 555 560
Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg
565 570 575
Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly
580 585 590
Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Ala Val Gly Asp Ala Tyr
595 600 605
Phe Ser Val Pro Leu Asp Glu Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr
610 615 620
Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn
625 630 635 640
Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser
645 650 655
Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val
660 665 670
Ile Tyr Gln Tyr Met Ala Ala Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile
675 680 685
Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg
690 695 700
Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe
705 710 715 720
Leu Trp Met Gly Tyr Glu Leu His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro
725 730 735
Ile Val Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys
740 745 750
Leu Val Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Ala Gly Ile Lys
755 760 765
Val Lys Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala Leu Thr Glu
770 775 780
Val Val Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg
785 790 795 800
Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys
805 810 815
Asp Leu Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln Trp Thr Tyr
820 825 830
Gln Ile Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala
835 840 845
Arg Met Arg Gly Ala His Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala
850 855 860
Val Gln Lys Ile Ala Thr Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro
865 870 875 880
Lys Phe Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu Thr Trp Glu Ala Trp Trp Thr
885 890 895
Glu Tyr Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr
900 905 910
Pro Pro Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu Pro Ile Val
915 920 925
Gly Ala Glu Thr Phe Tyr Val Ala Gly Ala Ala Asn Arg Glu Thr Lys
930 935 940
Leu Gly Lys Ala Gly Tyr Val Thr Asp Arg Gly Arg Gln Lys Val Val
945 950 955 960
Ser Leu Thr Asp Thr Thr Asn Gln Lys Thr Ala Leu Gln Ala Ile His
965 970 975
Leu Ala Leu Gln Asp Ser Gly Leu Glu Val Asn Ile Val Thr Ala Ser
980 985 990
Gln Tyr Ala Leu Gly Ile Ile Gln Ala Gln Pro Asp Lys Ser Glu Ser
995 1000 1005
Glu Leu Val Ser Gln Ile Ile Glu Gln Leu Ile Lys Lys Glu Lys
1010 1015 1020
Val Tyr Leu Ala Trp Val Pro Ala His Lys Gly Ile Gly Gly Asn
1025 1030 1035
Glu Gln Val Asp Lys Leu Val Ser Arg Gly Ile Arg Lys Val Leu
1040 1045 1050
Phe Leu Asp Gly Ile Asp Lys Ala Gln Glu Glu His Glu Lys Tyr
1055 1060 1065
His Ser Asn Trp Arg Ala Met Ala Ser Glu Phe Asn Leu Pro Pro
1070 1075 1080
Ile Val Ala Lys Glu Ile Val Ala Ser Cys Asp Lys Cys Gln Leu
1085 1090 1095
Lys Gly Glu Ala Ile His Gly Gln Val Asp Cys Ser Pro Gly Ile
1100 1105 1110
Trp Gln Leu Ala Cys Thr His Leu Glu Gly Lys Val Ile Leu Val
1115 1120 1125
Ala Val His Val Ala Ser Gly Tyr Ile Glu Ala Glu Val Ile Pro
1130 1135 1140
Ala Glu Thr Gly Gln Glu Thr Ala Tyr Phe Leu Leu Lys Leu Ala
1145 1150 1155
Gly Arg Trp Pro Val Lys Thr Ile His Thr Ala Asn Gly Ser Asn
1160 1165 1170
Phe Thr Ser Ala Thr Val Lys Ala Ala Cys Trp Trp Ala Gly Ile
1175 1180 1185
Lys Gln Glu Phe Gly Ile Pro Tyr Asn Pro Gln Ser Gln Gly Val
1190 1195 1200
Val Ala Ser Ile Asn Lys Glu Leu Lys Lys Ile Ile Gly Gln Val
1205 1210 1215
Arg Asp Gln Ala Glu His Leu Lys Thr Ala Val Gln Met Ala Val
1220 1225 1230
Phe Ile His Asn Phe Lys Arg Lys Gly Gly Ile Gly Glu Tyr Ser
1235 1240 1245
Ala Gly Glu Arg Ile Val Asp Ile Ile Ala Ser Asp Ile Gln Thr
1250 1255 1260
Lys Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Lys Ile Gln Asn Phe Arg Val
1265 1270 1275
Tyr Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly Pro Ala Lys
1280 1285 1290
Leu Leu Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val Val Ile Gln Asp Asn Ser
1295 1300 1305
Asp Ile Lys Val Val Pro Arg Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg Asp
1310 1315 1320
Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly Asp Asp Cys Val Ala Ser Arg Gln
1325 1330 1335
Asp Glu Asp
1340
<210> 5
<211> 679
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> clade C gp140 trimeric protein
<400> 5
Ala Glu Asn Leu Trp Val Gly Asn Met Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Val Pro Val Trp Thr Asp Ala Lys Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp
20 25 30
Thr Lys Ala Tyr Asp Arg Glu Val His Asn Val Trp Ala Thr His Ala
35 40 45
Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro Gln Glu Ile Val Leu Glu Asn Val
50 55 60
Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp Lys Asn Asp Met Val Asp Gln Met His
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys
85 90 95
Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu His Cys Thr Asn Ala Thr Phe Lys
100 105 110
Asn Asn Val Thr Asn Asp Met Asn Lys Glu Ile Arg Asn Cys Ser Phe
115 120 125
Asn Thr Thr Thr Glu Ile Arg Asp Lys Lys Gln Gln Gly Tyr Ala Leu
130 135 140
Phe Tyr Arg Pro Asp Ile Val Leu Leu Lys Glu Asn Arg Asn Asn Ser
145 150 155 160
Asn Asn Ser Glu Tyr Ile Leu Ile Asn Cys Asn Ala Ser Thr Ile Thr
165 170 175
Gln Ala Cys Pro Lys Val Asn Phe Asp Pro Ile Pro Ile His Tyr Cys
180 185 190
Ala Pro Ala Gly Tyr Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asn Lys Thr Phe Ser
195 200 205
Gly Lys Gly Pro Cys Asn Asn Val Ser Thr Val Gln Cys Thr His Gly
210 215 220
Ile Lys Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly Ser Leu Ala
225 230 235 240
Glu Lys Glu Ile Ile Ile Arg Ser Glu Asn Leu Thr Asp Asn Val Lys
245 250 255
Thr Ile Ile Val His Leu Asn Lys Ser Val Glu Ile Val Cys Thr Arg
260 265 270
Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Met Arg Ile Gly Pro Gly Gln Thr
275 280 285
Phe Tyr Ala Thr Gly Asp Ile Ile Gly Asp Ile Arg Gln Ala Tyr Cys
290 295 300
Asn Ile Ser Gly Ser Lys Trp Asn Glu Thr Leu Lys Arg Val Lys Glu
305 310 315 320
Lys Leu Gln Glu Asn Tyr Asn Asn Asn Lys Thr Ile Lys Phe Ala Pro
325 330 335
Ser Ser Gly Gly Asp Leu Glu Ile Thr Thr His Ser Phe Asn Cys Arg
340 345 350
Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Thr Arg Leu Phe Asn Asn Asn Ala
355 360 365
Thr Glu Asp Glu Thr Ile Thr Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile
370 375 380
Asn Met Trp Gln Gly Val Gly Arg Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Ala
385 390 395 400
Gly Asn Ile Thr Cys Lys Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Val Arg
405 410 415
Asp Gly Gly Glu Asp Asn Lys Thr Glu Glu Ile Phe Arg Pro Gly Gly
420 425 430
Gly Asn Met Lys Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val
435 440 445
Ile Glu Leu Lys Pro Leu Gly Ile Ala Pro Thr Gly Ala Lys Glu Arg
450 455 460
Val Val Glu Arg Glu Glu Arg Ala Val Gly Ile Gly Ala Val Phe Leu
465 470 475 480
Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Leu Thr
485 490 495
Leu Thr Val Gln Ala Arg Gln Leu Leu Ser Ser Ile Val Gln Gln Gln
500 505 510
Ser Asn Leu Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln His Met Leu Gln Leu
515 520 525
Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln Leu Gln Thr Arg Val Leu Ala Ile Glu
530 535 540
Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly
545 550 555 560
Lys Leu Ile Cys Thr Thr Asn Val Pro Trp Asn Ser Ser Trp Ser Asn
565 570 575
Lys Ser Gln Thr Asp Ile Trp Asn Asn Met Thr Trp Met Glu Trp Asp
580 585 590
Arg Glu Ile Ser Asn Tyr Thr Asp Thr Ile Tyr Arg Leu Leu Glu Asp
595 600 605
Ser Gln Thr Gln Gln Glu Lys Asn Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp
610 615 620
Ser Trp Lys Asn Leu Trp Ser Trp Phe Asp Ile Ser Asn Trp Leu Trp
625 630 635 640
Tyr Ile Lys Ser Arg Ile Glu Gly Arg Gly Ser Gly Gly Tyr Ile Pro
645 650 655
Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp
660 665 670
Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu
675
<210> 6
<211> 695
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mosaic gp140 chimeric protein
<400> 6
Ala Gly Lys Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys
1 5 10 15
Glu Ala Thr Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Asp
20 25 30
Thr Glu Val His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp
35 40 45
Pro Asn Pro Gln Glu Val Val Leu Glu Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn
50 55 60
Met Trp Lys Asn Asn Met Val Glu Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser
65 70 75 80
Leu Trp Asp Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys
85 90 95
Val Thr Leu Asn Cys Thr Asp Asp Val Arg Asn Val Thr Asn Asn Ala
100 105 110
Thr Asn Thr Asn Ser Ser Trp Gly Glu Pro Met Glu Lys Gly Glu Ile
115 120 125
Lys Asn Cys Ser Phe Asn Ile Thr Thr Ser Ile Arg Asn Lys Val Gln
130 135 140
Lys Gln Tyr Ala Leu Phe Tyr Lys Leu Asp Val Val Pro Ile Asp Asn
145 150 155 160
Asp Ser Asn Asn Thr Asn Tyr Arg Leu Ile Ser Cys Asn Thr Ser Val
165 170 175
Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Ser Phe Glu Pro Ile Pro Ile His
180 185 190
Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Phe Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asp Lys Lys
195 200 205
Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Thr Asn Val Ser Thr Val Gln Cys Thr
210 215 220
His Gly Ile Arg Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly Ser
225 230 235 240
Leu Ala Glu Glu Glu Val Val Ile Arg Ser Glu Asn Phe Thr Asn Asn
245 250 255
Ala Lys Thr Ile Met Val Gln Leu Asn Val Ser Val Glu Ile Asn Cys
260 265 270
Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile His Ile Gly Pro Gly
275 280 285
Arg Ala Phe Tyr Thr Ala Gly Asp Ile Ile Gly Asp Ile Arg Gln Ala
290 295 300
His Cys Asn Ile Ser Arg Ala Asn Trp Asn Asn Thr Leu Arg Gln Ile
305 310 315 320
Val Glu Lys Leu Gly Lys Gln Phe Gly Asn Asn Lys Thr Ile Val Phe
325 330 335
Asn His Ser Ser Gly Gly Asp Pro Glu Ile Val Met His Ser Phe Asn
340 345 350
Cys Gly Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Ser Thr Lys Leu Phe Asn Ser
355 360 365
Thr Trp Thr Trp Asn Asn Ser Thr Trp Asn Asn Thr Lys Arg Ser Asn
370 375 380
Asp Thr Glu Glu His Ile Thr Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile
385 390 395 400
Asn Met Trp Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Arg
405 410 415
Gly Gln Ile Arg Cys Ser Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg
420 425 430
Asp Gly Gly Asn Asp Thr Ser Gly Thr Glu Ile Phe Arg Pro Gly Gly
435 440 445
Gly Asp Met Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val
450 455 460
Val Lys Ile Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Lys Ala Lys Glu Arg
465 470 475 480
Val Val Gln Arg Glu Glu Arg Ala Val Gly Ile Gly Ala Val Phe Leu
485 490 495
Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Met Thr
500 505 510
Leu Thr Val Gln Ala Arg Leu Leu Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln
515 520 525
Asn Asn Leu Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln His Leu Leu Gln Leu
530 535 540
Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln Leu Gln Ala Arg Val Leu Ala Val Glu
545 550 555 560
Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly
565 570 575
Lys Leu Ile Cys Thr Thr Thr Val Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn
580 585 590
Lys Ser Leu Asp Lys Ile Trp Asn Asn Met Thr Trp Met Glu Trp Glu
595 600 605
Arg Glu Ile Asn Asn Tyr Thr Ser Leu Ile Tyr Thr Leu Ile Glu Glu
610 615 620
Ser Gln Asn Gln Gln Glu Lys Asn Glu Gln Glu Leu Leu Glu Leu Asp
625 630 635 640
Lys Trp Ala Ser Leu Trp Asn Trp Phe Asp Ile Ser Asn Trp Leu Trp
645 650 655
Tyr Ile Lys Ser Arg Ile Glu Gly Arg Gly Ser Gly Gly Tyr Ile Pro
660 665 670
Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp
675 680 685
Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu
690 695
<210> 7
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> exemplary leader sequence for gp140 stabilized trimeric protein
production
<400> 7
Met Arg Val Arg Gly Ile Gln Arg Asn Cys Gln His Leu Trp Arg Trp
1 5 10 15
Gly Thr Leu Ile Leu Gly Met Leu Met Ile Cys Ser Ala
20 25

Claims (25)

1.诱导对象中针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的疫苗组合，其包含：
(i)第一组合物，其包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒26(rAD26)载体及药物可接受的运载体；
(ii)第二组合物，其包含免疫有效量的分离的HIV包膜多肽及药物可接受的运载体，所述分离的HIV包膜多肽包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列；以及
(iii)免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个MVA载体，
其中第一组合物用于引发免疫且第二组合物用于加强免疫，并且所述免疫有效量的MVA载体存在于第二组合物中或者在与第二组合物一起给予的第三组合物中用于加强免疫。
2.权利要求1的疫苗组合，其中免疫有效量的一或多个MVA载体存在于第三组合物中。
3.权利要求1的疫苗组合，其中所述第二组合物还包含佐剂。
4.权利要求3的疫苗组合，其中所述佐剂是磷酸铝。
5.权利要求1的疫苗组合，其中所述分离的HIV包膜多肽包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列。
6.权利要求1至5中任一项的疫苗组合，其用于产生针对HIV感染的保护性免疫应答。
7.包含权利要求1的疫苗组合的试剂盒。
8.疫苗组合在制备用于在有需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的药物中的用途，所述疫苗组合包含：
(i)第一组合物，其包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒26(rAd26)载体及药物可接受的运载体；
(ii)第二组合物，其包含免疫有效量的SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的分离的HIV包膜多肽及药物可接受的运载体；以及
(iii)免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个MVA载体，
其中第一组合物用于引发免疫且第二组合物用于加强免疫，并且所述免疫有效量的一或多个MVA载体存在于第二组合物中或者在与第二组合物一起给予的第三组合物中用于加强免疫。
9.权利要求8的用途，其中第二组合物还包含佐剂。
10.权利要求9的用途，其中所述佐剂是磷酸铝。
11.权利要求8的用途，其中所述免疫有效量的一或多个MVA载体存在于第三组合物中。
12.疫苗组合在制备用于在有需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的药物中的用途，所述疫苗组合包含：
(i)包含第一组合物的引发疫苗，所述第一组合物包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒26(rAd26)载体及药物可接受的运载体；和
(ii)包含第二组合物以及第三组合物的加强疫苗，所述第二组合物包含免疫有效量的SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的分离的HIV包膜多肽及药物可接受的运载体，所述第三组合物包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个MVA载体及药物可接受的运载体；
其中所述分离的HIV包膜多肽和一或多个MVA载体存在于分离的组合物中；并且其中在给予引发疫苗之后给予所述加强疫苗。
13.权利要求12的用途，其中所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约10-14周再次给予，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约22-26周首次给予，且所述加强疫苗再次给予所述对象。
14.权利要求12或13的用途，其中所述分离的HIV包膜多肽含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列。
15.权利要求14的用途，其中第二组合物还包含佐剂。
16.权利要求15的用途，其中所述佐剂是磷酸铝。
17.第一组合物，其包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒26(rAD26)载体及药物可接受的运载体，在诱导对象中针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法中，与包含免疫有效量的包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列的分离的HIV包膜糖蛋白、佐剂及药物可接受的运载体的第二组合物以及免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个另外rAd26载体一起使用，
所述方法包含给予所述第一组合物用于引发免疫，给予所述第二组合物用于加强免疫，以及给予所述免疫有效量的另外rAd26载体，其中所述免疫有效量的另外rAd26载体存在于第二组合物中或者存在于与第二组合物一起给予的第三组合物中用于加强免疫。
18.第二组合物，其包含免疫有效量的分离的HIV包膜糖蛋白、佐剂及药物可接受的运载体，所述分离的HIV包膜糖蛋白包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列，在诱导对象中针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法中，与包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒26(rAd26)载体及药物可接受的运载体的第一组合物，以及免疫有效量的编码具有SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的HIV抗原性多肽的一或多个另外rAd26载体一起使用，
所述方法包含给予所述第一组合物用于引发免疫，给予所述第二组合物用于加强免疫，以及给予所述免疫有效量的另外rAd26载体，其中所述免疫有效量的另外rAd26载体存在于第二组合物中或者存在于与第二组合物一起给予的第三组合物中用于加强免疫。
19.权利要求17的第一组合物或权利要求18的第二组合物，其中所述免疫有效量的一或多个另外rAd26载体存在于第三组合物中。
20.权利要求17的第一组合物或权利要求18的第二组合物，其中所述分离的HIV包膜糖蛋白包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列。
21.权利要求17的第一组合物或权利要求18的第二组合物，其中所述佐剂是磷酸铝。
22.第一组合物，其包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒26(rAD26)载体及药物可接受的运载体，在诱导对象中针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法中，与包含免疫有效量的包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列的分离的HIV包膜糖蛋白、佐剂及药物可接受的运载体的第二组合物，以及免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个MVA载体一起使用，
所述方法包含给予所述第一组合物用于引发免疫，给予所述第二组合物用于加强免疫，以及给予所述免疫有效量的所述MVA载体，其中所述免疫有效量的所述MVA载体存在于与第二组合物一起给予的第三组合物中用于加强免疫。
23.第二组合物，其包含免疫有效量的分离的HIV包膜糖蛋白、佐剂及药物可接受的运载体，所述分离的HIV包膜糖蛋白包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列，在诱导对象中针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法中，与包含免疫有效量的编码具有氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的HIV抗原性多肽的一或多个腺病毒26(rAd26)载体及药物可接受的运载体的第一组合物，以及免疫有效量的编码具有SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的HIV抗原性多肽的一或多个MVA载体一起使用，
所述方法包含给予所述第一组合物用于引发免疫，给予所述第二组合物用于加强免疫，以及给予所述免疫有效量的所述MVA载体，其中所述免疫有效量的所述MVA载体存在于与第二组合物一起给予的第三组合物中用于加强免疫。
24.权利要求22的第一组合物或权利要求23的第二组合物，其中所述分离的HIV包膜糖蛋白包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列。
25.权利要求22的第一组合物或权利要求23的第二组合物，其中所述佐剂为磷酸铝。
CN202011101485.5A 2014-09-26 2015-09-24 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物 Pending CN112121160A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462056059P 2014-09-26 2014-09-26
US62/056,059 2014-09-26
CN201580063229.2A CN106999571B (zh) 2014-09-26 2015-09-24 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580063229.2A Division CN106999571B (zh) 2014-09-26 2015-09-24 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112121160A true CN112121160A (zh) 2020-12-25

Family

ID=55581992

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580063229.2A Expired - Fee Related CN106999571B (zh) 2014-09-26 2015-09-24 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物
CN202011101485.5A Pending CN112121160A (zh) 2014-09-26 2015-09-24 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580063229.2A Expired - Fee Related CN106999571B (zh) 2014-09-26 2015-09-24 诱导针对人免疫缺陷病毒感染的保护性免疫性的方法和组合物

Country Status (28)

Country Link
US (4) US10137191B2 (zh)
EP (2) EP3197489B1 (zh)
JP (2) JP6438575B2 (zh)
KR (2) KR102159626B1 (zh)
CN (2) CN106999571B (zh)
AP (1) AP2017009846A0 (zh)
AU (2) AU2015320574B2 (zh)
BR (1) BR112017005917A2 (zh)
CA (1) CA2961024A1 (zh)
CY (1) CY1124254T1 (zh)
DK (1) DK3197489T3 (zh)
EA (2) EA202092521A1 (zh)
ES (1) ES2865150T3 (zh)
HR (1) HRP20210608T1 (zh)
HU (1) HUE053585T2 (zh)
IL (2) IL251114B (zh)
LT (1) LT3197489T (zh)
MA (1) MA40765B1 (zh)
MX (2) MX2017003946A (zh)
MY (1) MY175620A (zh)
PH (1) PH12017500449A1 (zh)
PL (1) PL3197489T3 (zh)
PT (1) PT3197489T (zh)
RS (1) RS61902B1 (zh)
SG (1) SG11201702110RA (zh)
SI (1) SI3197489T1 (zh)
WO (1) WO2016049287A1 (zh)
ZA (1) ZA201702053B (zh)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102159626B1 (ko) 2014-09-26 2020-09-25 베쓰 이스라엘 디코니스 메디칼 센터 인크 인간 면역 결핍 바이러스 감염에 대한 방어 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물
MA40783A (fr) 2014-10-03 2017-08-08 Los Alamos Nat Security Llc Vaccins contre le vih comprenant un ou plusieurs antigènes episensus de population
DK3390430T3 (da) 2015-12-15 2019-11-18 Janssen Vaccines & Prevention Bv Human immundefektvirus-antigener, vektorer, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
EP3416978A4 (en) * 2016-02-16 2019-11-06 Geovax, Inc. MULTIVALENT VACCINE RECALL COMPOSITIONS AGAINST HIV AND METHODS OF USE
AU2017286375B2 (en) 2016-06-16 2019-04-18 Janssen Vaccines & Prevention B.V. HIV vaccine formulation
AU2017318689A1 (en) * 2016-09-02 2019-04-11 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
IL265186B (en) 2016-09-15 2022-09-01 Janssen Vaccines Prevention B V HIV envelope proteins with trimer-stabilizing mutations
CN110958887B (zh) * 2017-06-15 2023-10-31 扬森疫苗与预防公司 编码hiv抗原的痘病毒载体及其使用方法
CN110891601A (zh) 2017-07-19 2020-03-17 扬森疫苗与预防公司 三聚体稳定性hiv包膜蛋白突变
US20190022212A1 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for safe induction of cross-clade immunity against human immunodeficiency virus infection in human
US20190083620A1 (en) * 2017-09-18 2019-03-21 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
EP3856238A1 (en) * 2018-09-25 2021-08-04 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Method of inducing an immune response against human immunodeficiency virus by co-localized administration of vaccine components
US20220211835A1 (en) * 2019-04-17 2022-07-07 The Wistar Institute Replication Deficient Adenoviral Vectors for HIV Vaccine Applications
AU2020279988A1 (en) * 2019-05-22 2021-12-23 Aelix Therapeutics, S.L. Dosage regimens for vaccines
WO2020237052A1 (en) * 2019-05-22 2020-11-26 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
KR20220047277A (ko) 2019-07-16 2022-04-15 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Hiv 백신, 및 이의 제조 및 사용 방법
AU2020381082B2 (en) * 2019-11-07 2022-09-22 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Protein purification
EP4277652A1 (en) 2021-01-14 2023-11-22 Gilead Sciences, Inc. Hiv vaccines and methods of using
WO2023198815A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Sequential administration of adenoviruses

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014107744A1 (en) * 2013-01-07 2014-07-10 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Stabilized human immunodeficiency virus (hiv) envelope (env) trimer vaccines and methods of using the same

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4603112A (en) 1981-12-24 1986-07-29 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus
CA1341245C (en) 1988-01-12 2001-06-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant vaccinia virus mva
US5298416A (en) 1989-01-18 1994-03-29 British Technology Group Ltd. Attenuated polioviruses
US5505947A (en) 1994-05-27 1996-04-09 The University Of North Carolina At Chapel Hill Attenuating mutations in Venezuelan Equine Encephalitis virus
UA68327C2 (en) 1995-07-04 2004-08-16 Gsf Forschungszentrum Fur Unwe A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals
US6479258B1 (en) 1995-12-07 2002-11-12 Diversa Corporation Non-stochastic generation of genetic vaccines
WO1998010087A1 (en) 1996-09-06 1998-03-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania Chimpanzee adenovirus vectors
GB0023203D0 (en) 2000-09-21 2000-11-01 Isis Innovation Vaccination method
DE60045138D1 (de) 1999-05-17 2010-12-02 Crucell Holland Bv Rekombinantes Adenovirus des Ad26-Serotyps
US6913922B1 (en) 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6710173B1 (en) 1999-06-25 2004-03-23 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Stabilized viral envelope proteins and uses thereof
CA2384271A1 (en) 1999-09-17 2001-03-22 Joseph G. Sodroski Stabilized soluble glycoprotein trimers
CN101676389A (zh) 2000-11-23 2010-03-24 巴法里安诺迪克有限公司 改良安卡拉痘苗病毒变体
EP2280074A3 (en) 2001-07-05 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Polynucleotides encoding antigenic HIV type B and/or type C polypeptides, polypeptides and uses thereof
EP2345665A3 (en) 2001-12-04 2012-02-15 Bavarian Nordic A/S Flavivirus NS1 subunit vaccine
ATE447037T1 (de) 2002-04-25 2009-11-15 Crucell Holland Bv Mittel und verfahren zur herstellung von adenovirusvektoren
AU2003271738C1 (en) 2002-04-25 2008-04-17 Crucell Holland B.V. Stable adenoviral vectors and methods for propagation thereof
WO2004044155A2 (en) 2002-11-07 2004-05-27 Beth Israel Deaconess Medical Center MIP-1α AND GM-CSF AS ADJUVANTS OF IMMUNE RESPONSE
US7901690B2 (en) 2002-12-03 2011-03-08 University Of Massachusetts Polyvalent, primary HIV-1 glycoprotein DNA vaccines and vaccination methods
CA2520637A1 (en) 2003-03-28 2004-10-14 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Se Cretary, Department Of Health And Human Services Mva virus expressing modified hiv envelope, gag, and pol genes
EP1667631A4 (en) * 2003-09-15 2010-04-14 Novartis Vaccines & Diagnostic COMBINED APPROACHES TO PRODUCE IMMUNE RESPONSES
US20070298051A1 (en) 2003-11-19 2007-12-27 Beth Israel Deaconess Medical Center Adjuvants Of Immune Response
EP1711518B1 (en) 2004-01-23 2009-11-18 Istituto di Richerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A. Chimpanzee adenovirus vaccine carriers
EP1766097A4 (en) 2004-06-15 2008-03-19 Progenics Pharm Inc HIV-1 NEUTRALIZATION ANTIBODIES ELICITED BY A TRIMERIC COMPLEX OF HIV-1 ENVELOPE GLYCOPROTEINS
ATE527281T1 (de) 2004-07-16 2011-10-15 Us Gov Health & Human Serv Impfstoffe gegen aids umfassend cmv/r nucleinsäurekonstrukte
DK1789438T3 (en) 2004-08-27 2015-07-20 Us Government Recombinant MVA viruses expressing MODIFIED env, gag and pol genes of HIV CLADE A / G, CLADE CLADE B AND C
CA2583843C (en) 2004-10-13 2010-09-21 Crucell Holland B.V. Improved adenoviral vectors and uses thereof
EP1814583A2 (en) * 2004-11-01 2007-08-08 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Combination approaches for generating immune responses
WO2007005934A2 (en) 2005-07-06 2007-01-11 University Of Maryland Biotechnology Institute Constrained hiv envelope-based immunogen that simultaneously presents receptor and coreceptor binding sites
AU2006283101B2 (en) 2005-08-23 2013-03-07 Beth Israel Deaconess Medical Center Polyvalent vaccine
US20100143302A1 (en) 2006-03-16 2010-06-10 Crucell Holland B.V. Recombinant Adenoviruses Based on Serotype 26 and 48, and Use Thereof
CA2655934A1 (en) 2006-06-19 2007-12-27 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Soluble stabilized trimeric hiv env proteins and uses thereof
CA2667358A1 (en) 2006-10-23 2008-05-29 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Modified gp140 envelope polypeptides of hiv-1 isolates, compositions, stabilized trimeric complexes, and uses thereof
US20080279879A1 (en) 2006-11-17 2008-11-13 New York University INDUCTION OF BROADLY REACTIVE NEUTRALIZING ANTIBODIES BY FOCUSING THE IMMUNE RESPONSE ON V3 EPITOPES OF THE HIV-1 gp120 ENVELOPE
MX2009009342A (es) 2007-03-02 2009-09-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Metodo novedoso y composiciones.
PL3335728T3 (pl) 2008-10-10 2020-06-29 Children's Medical Center Corporation Biochemicznie stabilizowana szczepionka zawierająca trimer env wirusa HIV-1
SG10201408784SA (en) 2008-11-18 2015-02-27 Beth Israel Hospital Antiviral vaccines with improved cellular immunogenicity
WO2010085984A1 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Okairos Ag Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof
BRPI1008018A2 (pt) 2009-02-02 2016-03-15 Okairos Ag ácidos nucleicos de adenovírus símio e sequências de aminoácidos, vetores contendo os mesmos e uso dos mesmos
WO2010096561A1 (en) 2009-02-18 2010-08-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic hiv/siv gag proteins and uses thereof
CN102711794B (zh) 2010-01-04 2015-11-25 Kj生物科学有限公司 用于疫苗和诊断学的Dps融合蛋白
DK2529010T3 (en) 2010-01-28 2017-07-24 Bavarian Nordic As MUTANTS OF VACCINIAVIRUS CONTAINING THE MAIN GENOMIC DELETIONS OF VAT
AU2011214262B2 (en) * 2010-02-15 2015-05-21 Crucell Holland B.V. Method for the production of Ad26 adenoviral vectors
CA3059961C (en) 2010-08-31 2021-04-13 Theraclone Sciences, Inc. Human immunodeficiency virus (hiv)-neutralizing antibodies
EP2627774B1 (en) 2010-10-15 2018-11-21 Bavarian Nordic A/S Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) influenza vaccine
PL2655604T3 (pl) * 2010-12-14 2019-02-28 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Szczepionki adenowirusowe serotyp 26 i serotyp 35 przeciwko filowirusom
WO2013036791A2 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Modified adenoviral vectors and methods of treatment using same
US20130189754A1 (en) 2011-09-12 2013-07-25 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
WO2013055908A1 (en) 2011-10-12 2013-04-18 The Scripps Research Institute An hiv-1 gp120 mini v3 loop and uses thereof
US9683268B2 (en) 2012-09-19 2017-06-20 Beth Israel Deaconess Viruses associated with immunodeficiency and enteropathy and methods using same
WO2014078688A2 (en) 2012-11-16 2014-05-22 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Recombinant adenoviruses and use thereof
WO2014124301A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Self-assembling protein nanostructures
US10376583B2 (en) 2013-09-30 2019-08-13 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Human immunodeficiency virus therapies utilizing N332-glycan-dependent antibodies and a reservoir activator
CN103992396B (zh) * 2014-04-17 2017-03-29 南开大学 一种潜在的高效重组HIV‑1 CRF07‑BC gp140免疫原的制备方法
WO2016037154A1 (en) 2014-09-04 2016-03-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Recombinant hiv-1 envelope proteins and their use
KR102159626B1 (ko) * 2014-09-26 2020-09-25 베쓰 이스라엘 디코니스 메디칼 센터 인크 인간 면역 결핍 바이러스 감염에 대한 방어 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물
US9630994B2 (en) 2014-11-03 2017-04-25 University Of Washington Polypeptides for use in self-assembling protein nanostructures
DK3390430T3 (da) 2015-12-15 2019-11-18 Janssen Vaccines & Prevention Bv Human immundefektvirus-antigener, vektorer, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
AU2017318689A1 (en) * 2016-09-02 2019-04-11 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014107744A1 (en) * 2013-01-07 2014-07-10 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Stabilized human immunodeficiency virus (hiv) envelope (env) trimer vaccines and methods of using the same

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NORMAN L. LETVIN等: "Potent, protective anti-HIV immune responses generated by bimodal HIV envelope DNA plus protein vaccination", PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 94, pages 9378 - 9383 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20170066454A (ko) 2017-06-14
US20180250385A1 (en) 2018-09-06
JP2019038849A (ja) 2019-03-14
HRP20210608T1 (hr) 2021-06-11
US20220096622A1 (en) 2022-03-31
AU2018267669B2 (en) 2020-03-05
IL251114A0 (en) 2017-04-30
AU2015320574B2 (en) 2018-12-06
ZA201702053B (en) 2021-09-29
CY1124254T1 (el) 2022-07-22
JP2017531627A (ja) 2017-10-26
EP3197489A4 (en) 2018-03-14
HUE053585T2 (hu) 2021-07-28
MA40765B1 (fr) 2021-04-30
SI3197489T1 (sl) 2021-08-31
MA40765A (fr) 2017-08-02
EP3197489A1 (en) 2017-08-02
BR112017005917A2 (pt) 2017-12-12
CA2961024A1 (en) 2016-03-31
EP3868398A1 (en) 2021-08-25
DK3197489T3 (da) 2021-04-19
KR101971808B1 (ko) 2019-04-23
SG11201702110RA (en) 2017-04-27
CN106999571B (zh) 2020-10-02
KR102159626B1 (ko) 2020-09-25
US10471137B2 (en) 2019-11-12
CN106999571A (zh) 2017-08-01
AU2018267669A1 (en) 2018-12-13
LT3197489T (lt) 2021-07-26
JP6625716B2 (ja) 2019-12-25
EP3197489B1 (en) 2021-02-17
WO2016049287A1 (en) 2016-03-31
US20160089432A1 (en) 2016-03-31
MY175620A (en) 2020-07-02
IL265733B (en) 2021-05-31
US20200030437A1 (en) 2020-01-30
US11207400B2 (en) 2021-12-28
NZ730841A (en) 2021-08-27
EA037583B1 (ru) 2021-04-16
KR20190042736A (ko) 2019-04-24
MX2017003946A (es) 2017-12-20
PH12017500449A1 (en) 2017-07-31
US10137191B2 (en) 2018-11-27
EA201790717A1 (ru) 2018-02-28
IL265733A (en) 2019-05-30
EA202092521A1 (ru) 2021-05-31
ES2865150T3 (es) 2021-10-15
IL251114B (en) 2019-05-30
MX2020013153A (es) 2021-02-18
PT3197489T (pt) 2021-04-30
PL3197489T3 (pl) 2021-11-08
RS61902B1 (sr) 2021-06-30
AP2017009846A0 (en) 2017-03-31
AU2015320574A1 (en) 2017-04-06
JP6438575B2 (ja) 2018-12-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11207400B2 (en) Compositions and methods for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection
AU2018283811B2 (en) Poxvirus vectors encoding HIV antigens, and methods of use thereof
JP2019123734A (ja) 免疫応答の増進を目的とする方法及び組成物
JP2015509707A (ja) Ｈｉｖワクチン接種のための免疫原
Zhao et al. Boosting of SIV-specific immune responses in rhesus macaques by repeated administration of Ad5hr–SIVenv/rev and Ad5hr–SIVgag recombinants
US20190022212A1 (en) Methods for safe induction of cross-clade immunity against human immunodeficiency virus infection in human
Schulte et al. Mucosal prior to systemic application of recombinant adenovirus boosting is more immunogenic than systemic application twice but confers similar protection against SIV-challenge in DNA vaccine-primed macaques
EP2142212A2 (en) Method of elicting immune response with a modified mva viral hiv-1 vector
NZ730841B2 (en) Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection
OA18541A (en) Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection
NZ767061B2 (en) Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection
NZ767061A (en) Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20201225