JP6300260B2 - レプリカマイクロアレイの作成方法及びその方法によって作製された対象物質含有オリジナルマイクロアレイ - Google Patents
レプリカマイクロアレイの作成方法及びその方法によって作製された対象物質含有オリジナルマイクロアレイ Download PDFInfo
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
こうしたハイブリダイゼーション技術は、表面が多孔性のニトロセルロース膜やナイロン膜とラジオアイソトープが用いられており、フォーマットの微小化ができないという問題を抱えていた。また、フォトリソグラフィーや圧電技術の適用ができないこと、蛍光測定や複数のサンプルの同時分析ができないという問題点もあった。このため、こうした欠点を改良する技術としてマイクロアレイが開発されたのである(非特許文献1参照、以下、「従来技術1」という。)。
このため、フォーマットの微小化が可能な非多孔性の表面を有し、パラレル分析が可能な技術が開発され、そうした技術の1つとして、96ウェルマイクロプレートよりもはるかに小さいサイズのマイクロウェルアレイ容器(以下、「MMV」という。)が開発され、その利用法が研究されつつある。
しかし、治療できないといわれてきた疾病が、新規な薬剤によって治療可能となりつつある昨今では、こうした新規薬剤の開発の分野において、さらに大量の候補化合物を含む試料を短時間のうちに効率よく処理し、薬剤の候補化合物を見出すことができる、高速スクリーニング方法が必須となってきた。
例えば、微生物の二次代謝産物の中からこうした候補化合物を見出すという処理は、試料中に含まれる量の多い化合物については既に検討がなされているため、含有量が少ない化合物について検討することになる。候補化合物の濃縮やある程度の精製が必要となるため、スクリーニングの工程は多段階となり、複雑なものとなる。一方で、こうした処理に必要とされる試薬は高額となっており、系を最少化する必要がある。
このため、高速スクリーニングが可能な、マイクロアレイに対する強い社会的要請があった。
すなわち、本願発明の第1の態様は、2次元マトリクス状に配置された複数の有底のマイクロウェルのそれぞれに、予め定められた属性を有する対象物質が注入されたオリジナルマイクロウェルアレイ(以下、マイクロアレイと称する)を作成するオリジナルマイクロウェルアレイ作成工程と;前記オリジナルマイクロウェルアレイにおける複数の有底のマイクロウェルの配置面と同形である、空のレプリカ用マイクロウェルアレイを用意するレプリカ用マイクロウェルアレイ準備工程と;前記オリジナルマイクロウェルアレイの各マイクロウェルに注入されている対象物質を、前記レプリカ用マイクロウェルアレイの対応するマイクロウェルアレイに移送する第1移送工程と;前記レプリカ用マイクロウェルアレイの各マイクロウェルに移送された対象物質を、前記オリジナルマイクロウェルアレイにおける対応するマイクロウェルアレイに移送し、レプリカ用マイクロウェルアレイの各マイクロウェル内に、前記対象物質の一部が固定されたレプリカマイクロウェルアレイを作成する第2移送工程と;を備えることを特徴とするレプリカマイクロウェルアレイの作成方法である。
また、前記対象物質が前記タンパク質の元となる情報を含むDNAである場合には、前記レプリカマイクロウェルアレイ中で増幅されたDNAを用いて、インビトロでタンパク質を産生させる工程をさらに含むことが好ましい。
前記生体細胞は、口腔粘膜、唾液、皮膚寄生微生物、排泄物、土壌微生物及び環境微生物群からなる群から選ばれるものであることが好ましい。
また、この方法によれば、上記オリジナルマイクロアレイを元にして、ほぼ無限に上記オリジナルマイクロアレイと鏡像対照であるか、又は全く同じ構成内容を含むレプリカマイクロアレイを作製することができる。
さらに、上記レプリカマイクロアレイを用いて、同じ配列で並べられたDNAからそれらを増幅させることができる。また、DNAに代えて細胞を用いた場合には、細胞を増殖させることができる。
ペプチド又はタンパク質の元となる情報を含むDNAの場合には、インビトロでタンパク質を産生させることができる。
本発明のレプリカマイクロアレイの作成方法で使用するMMVは、図1Aに示すように、2.5cmx2.5cmx0.21Cm(WxLxH)のサイズのブロックに、直径0.6mm、深さ2mm、容量0.5μLの有底孔が、1024本、マトリックス状に配置されたもの(以下、「深型MMV」という。)、及び容量が0.1μLとなっている以外は、深型MMVと同じ構成となっているMMV(以下、「浅型MMV」という。)を使用する。なお、浅型MMVは、深型MMVのウェルにその容積の一部だけ試料を注入する際に使用する。
ここで、いずれのMMVにも、対角線上の隅に、後述するスペーサーを固定するためのピンと、開口とが設けられている。
以上のようにして溶液をチャージしたMMVのウェルから、空のMMVのウェルにチャージされた溶液を移送する場合は、スペーサーを用いて、以下のような手順で行う。このスペーサーには、図1Cに示すように、四隅に開口部が設けられている。この開口部のうち、2つに、移送された溶液を受容する空のMMV(以下、「受容側MMV」又は「アクセプターMMV」ということがある。)のピンを通して重ね、スペーサーの開口部と受容側MMVの開口部とがきれいに一致するようにする。
このようにセットしたMMV−スペーサー−MMVのブロック(以下、「移送用ブロック」という。)を、断面で見ると、図1C及び図2に示すように、上段の供給側MMVに溶液がチャージされており、下段の受容側MMVは空の状態となっている。
溶液の移送後、上記サンドイッチブロックの天地を再び返して、上記と同様に移送することによって、MMV-2のウェル内の溶液をMMV-1のウェル内に戻すことができる。
図3(A)には、10枚のスペーサーを示したが、左から5枚目まで(20〜24)のような開口部を有するスペーサーを用意し、それらを90度回転させることによって左から6枚目〜10枚目(25〜29)のパターンを作成することができる。
図3(A)の各スペーサーを使用すると、開口部が形成されている部分に対応するウェルにのみ溶液をチャージすることができる。
図3(A)に示される20〜25までの5枚のスペーサーを使用することで、29通りの条件を設定することができる。
又は、タンパク質の情報を含むDNAであれば、機能を発揮するタンパク質をインビトロで構成できる。
要素1をチャージするMMVと、要素2をチャージするMMVとを別々に用意する。1枚目のMMV上に要素1を載せ、低速、例えば、1,000〜1,500xgで遠心して、すべてのウェルに要素1をチャージする。このMMVの上に所定のパターンとなるように開口部を形成したスペーサーを重ねてMMVの天地を返して同様に遠心し、開口部が形成されている部分に対応するウェルから要素1を除去する。この操作によって、所望のウェルに要素1がチャージされたE1-MMVが調製される。
E2-MMVの上に、MMVの全てのウェルに対応した開口部を有するスペーサー(以下、「全開口スペーサー」という。)を、位置を合わせるように載せる。上記スペーサーの上に、図4Aに示す通り、E1-MMVにチャージされた要素1が、E2-MMVの側のウェルに移送できるように、E1-MMVの開口部と上記スペーサーの開口部との位置を合わせて載せ、移送用ブロックとする(図4B上段参照)。
E1-MMVで要素1がチャージされていないウェルと、E2-MMVで要素2がチャージされたウェルトとは相補的になっているため、以上の操作によって、E2-MMV中のウェルはすべて、要素1又は要素2のいずれかでチャージされ、オリジナルMMVが完成する。
使用する要素の数が多い場合には、以上の手順を繰り返して、オリジナルMMVを完成させる(図4B中段参照)。
上記要素1がペプチドの元となる情報をコードするDNAである場合には、要素2としてこのDNAを増幅させるためのPCR混合物を使用し、所定の条件でPCRを行うことによって、要素1であるDNAを増幅させることができる。
例えば、要素1が特定のタンパク質に結合するペプチド遺伝子を含有するDNAである場合には、まず、フレームをMMVに取り付け、MMV上にこのDNAを含有するPCR混合物を載せて、低速で遠心し、MMVのウェルに上記PCR混合物をチャージする。このMMVに、所定の形に開口部が設けられたスペーサーを重ね合わせて遠心し、開口部に対応するウェルからPCR混合物を除く。この操作によって、E1-MMVを調製する。
ここで、上記DNAを、Aβ42-結合ペプチド遺伝子を含有するDNAとし、上記PCR混合物を、例えば、1xFast Buffer I(タカラ社製)、200〜300μMのdNTP混合物、0.02〜0.08μMのCAプライマー(タカラバイオ(株)製)、0.010〜0.050U/μLのSpeedSTAR HS DNAポリメラーゼ(タカラ社製)を含む溶液とすることができる。
また、使用するスペーサーは、厚みが約0.6〜1.0mm、開口部の直径はMMVのウェルの直径と同じ約0.6mmとすることが、操作性の観点から好ましい。
このブロックを、例えば、1,000xg〜1,600xgで30秒〜2分間遠心し、E1-MMVのウェル内の要素1をwell-to-wellでE2-MMVに移送する。この移送によって、要素1と要素2とによってすべてのウェルがチャージされたオリジナルMMV(DNA)が完成する。
オリジナルMMVと、レプリカMMVとを、同じ条件でPCRに供し、所望の回数、例えば、106回増幅させたところで反応を停止させ、所望の色素又は標識で染色する。こうした色素や標識としては、SYBRグリーンその他を挙げることができ、必要に応じて適宜選択すればよい。
選択した色素や標識によって、蛍光観察その他の観察を行い、対象物質の増幅又は増殖を確認する。
要素1を大腸菌として、上記の移送の操作を、受容側MMVを新しいものに代えながら繰り返し、複数のレプリカMMVを作成する。
オリジナルMMVとレプリカMMVとを同じ条件の下で培養し、現れた図形を対比することによって、オリジナルMMVで観察される図形の鏡像となっていることを確認することができる。また、移送の回数と現れる図形の鮮明さ等を比較することもできる。
以上のようにして、オリジナルMMVの鏡像である図形がレプリカMMVから得られることから、この方法を「スタンプ法」という。
オリジナルMMVの各ウェルに、インビトロ翻訳を行うためのバッファーをチャージし、翻訳物であるペプチドを得ることができる。
結合していた場合には、例えば、さらに、蛍光標識を結合させ、標的タンパク質を含む複合体を酵素で切断し、上清を集めて蛍光を測定することができる。
このときに、受容側MMVのウェル中には、種々の増幅されたペプチドが含まれているため、各ウェル中に、例えば、標的タンパク質と結合したビオチンとストレプトアビジンを結合させた磁性粒子を入れることによって、標的タンパク質と結合するペプチドを選択することができる(図9参照)。
さらに、別の技術と組み合わせることによって、複雑な操作を行うことなく、配列決定やクラスタリングを行うこともできる。
(1−1)MMVの作製
2つのタイプのポリカーボネート(以下、「PC」と略す。)製のMMVチップ(以下、「PC-MMV」ということがある。)を設計し、エンプラスに製作を依頼して入手した(埼玉県、日本国)。1つは底面がPCである有底型のMMVであり、もう1つは貫通型のMMVの底面に透明なシートを貼りつけたMMVである。これらのうち、底面に透明シートを貼り付けたMMVを顕微鏡観察用に使用した。
作製されたMMVチップは、深型MMVチップの場合に、3.3 cmx3.7 cmx0.2cm(縦x横x高さ)で、2.5cm四方に、容量0.5μL、直径0.6mm、深さ2mmのウェルが1024本設けられていた(図1A参照)。また、ウェルの深さがウェルの深さが1.4mmであり、ウェルの容量が0.35μLである点を除いて深型と同じである、浅型MMVチップも作製した。深型と同じである、浅型MMVチップも作製した。
後述するMMV相互の溶液の移送(I-モード)には、シリコン-PET-粘着スペーサー(ファインテック製)を使用した。このスペーサーは、厚み0.2mmで、直径0.6mmの穴が、MMVの開口部と位置が合うように開けられている(図1B及び図2参照)。
また、特定のウェルへの選択的付加を行い際には、異なるタイプの粘着性のフィルタースペーサー(ファインテック製)を使用した。図3に示すようなそれぞれ異なる開口パターンを有しているスペーサーを使用して、受容側MMVに試料を選択的にチャージした(図3(A)及び(B)参照)。
(2−1)MMVへの試料のチャージと除去
最初の試料を各ウェルにチャージするためには、紫外線及びアルコール、又はガスで滅菌したMMVを試料溶液中に浸漬した。1つのMMVチップは、超純水と70%エタノールとを用いて、遠心と超音波により洗浄すると、何回か再利用することができる。
次いで、MMVのウェルの表面に盛り上がっている溶液を、1,400xgで1分間遠心し、ウェル内に落とし込んだ(図1B参照)。
試料溶液を上記のまま使用する場合には、MMVの表面に残っている溶液をMMVを傾けて除去し、ウェル中の溶液の蒸発を防ぐために、シリコン製のテープ(シリコントミーテープ(自己融着タイプ)、厚み0.5mm、アズワン)で、全てのウェルをシールした。
通常の溶液を、あるMMVチップ(MMV-1)から別のMMVチップ(MMV-2)に移送する際には、上記のシリコン-PET-粘着スペーサー(ファインテック社製)を使用した。MMV-1のウェル中の液体をMMV-2に移送するために、MMV-1に上記のスペーサーをかぶせ、その上に、MMV-2の開口部がMMV-1の開口部の位置とぴったり合うように重ねた。次に、これらのMMVの天地を返し、1,400xgで2分間、室温で遠心した。この操作によって、MMV-1に入っていた試料を、MMV-2に、鏡に映した状態で移送した(図4A及びB参照)。
また、一旦MMV-1からMMV-2へ移送した試料溶液を、上記と同様の操作を行って再度MMV-1へ移送するという実験を、2枚のMMVを使用して繰り返し行った。残存した試料溶液の量は当初加えた液量に対して、約0.1%であった。
以上より、上記のスペーサーを介して、試料溶液のロスがほとんどない移送を行うことができることが示された。
(1−1)MMVのコーティング
レプリカMMVチップの作製に当たり、使用するMMVチップの壁に生体分子が吸着することを防ぐために、MMVの表面を、主としてウシ血清アルブミン(以下、「BSA」という。シグマ社製)でコーティングし、後述する細胞培養及びPCR等に使用した。
MMVを予め高圧蒸気滅菌し、BSAは濾過滅菌した。また、以下の操作は全てクリーンベンチ内で行った。
まず、0.1%(w/v)のBSA溶液をMMV上に載せてスピンコートした(1,400xgで1分)。スピンコートしたMMVの開口部をシリコンテープでシールし、4℃で終夜インキュベートした。インキュベーション終了後、ウェル内の溶液を遠心して除去した。BSAが開口面に残っていると投入用フレーム(ウレタンエラストマー製)の張り付きが悪くなるため、70%エタノールで湿らせたレンズペーパー又はキムワイプで拭った。
以上のようにして、BSAでコーティングしたMMVを作製した。液体投入用のフレームや周辺備品は、70%エタノールを散布等して殺菌した。
次に、桜の花の形と、桜の花の向かって左側のみに十字の図形とを表わす図案を用いて、直径0.5mmの開口部をレーザーで形成した#1フィルター(単層のウレタンエラストマー製)を作製した(図5参照)。この#1フィルターを用いて、Aβ42-結合ペプチド遺伝子を含有するPCR混合物をウェル当たり0.5μLチャージしたMMV-E1と、Aβ42-結合ペプチド遺伝子を含有しないPCR混合物をウェル当たり0.5μLチャージしたMMV-E2とを、実施例1と同様に調製した。
上記PCR混合物は、1×Fast Buffer I(タカラ製)、250μMのdNTP混合物、0.04μMのCAプライマー(タカラバイオ(株)製)、0.025U/μLのSpeedSTAR HS DNAポリメラーゼ(タカラ製)を含む溶液とした。
同様にして、MMV-E3〜MMV-E6を調製した。MMV-E2〜E6では、各ウェル内に要素2を0.5μLずつ加え、MMV-E1とともに、PCRに供した。PCRの条件は、下記の通りとした。
PCRは、95℃で変性(30秒)、50℃でアニール(2分)、及び65℃で伸長反応(2分)を30サイクル繰り返した。
MMV-E1〜E6のセットアップは、従来のサーモサイクラー(バイオラッド社製、Bio-Rad C1000 Touch)中で行った。熱伝導を良くするために、このサーモサイクラー中、PCRブロックとMMVチップとの間に銅板を挿入した。
上記の各MMVを個別にシリコンテープでシールし、アルミフォイルで遮蔽して、サーモサイクラー中に置いた。MMVと蓋とが離れないようにシリコンテープでとめた。
MMV-E1〜E6でのPCR反応産物のイメージングを以下のようにして行った。
PCR産物のSYBRグリーンI(ロンザ社製)を用いて、製造元の指示書に従って染色を行った。このときに、浅型MMV(ウェルの容量0.1μL)に、0.1μL/ウェルでSYBRグリーンを入れた。
染色液を上記の各MMVに移送する前に、各MMVをクリーンベンチ内で数分間蓋を開けたままにしておき、各ウェル中の溶液の量を減少させた。次いで、浅型MMVを、MMV-E1〜MMV-E6にそれぞれ実施例1と同様にして重ね合わせ、1,300xgで1分遠心して移送し、増幅されたDNAを染色した。
以上より、レプリカMMVに残存した微量のアリコートをPCRのシードとして使用できることが確認された。また、レプリカMMV中に残存した微量のアリコートは実施例1でも確認した通り、最初に各ウェルに加えた試料溶液量の約0.1%であった。
オリジナルMMVは、試料を入れたままの状態でシリコンテープ等で蓋をすれば、冷蔵又は凍結保存(液体窒素処理を含む)が可能である。そして、レプリカ作製には非常に微量の試料を使用すればよいこと、また、オリジナルMMVのウェル中のペプチドの含有量が減少した場合には、レプリカで増幅させたペプチドを用いて補充ができることから、ほぼ、無限にレプリカを作製できることが示された。
GFPを発現している大腸菌細胞を、LB培地(0.5%(w/v)の酵母抽出物、1%(w/v)のトリプトン、1%(w/v)のNaCl及び50μg/mLのアンピシリン及び1mMのIPTGを含む、以下、「培養培地」という。)中で、培養した。
本実施例においても、実施例2及び3で使用した#1フィルターと#2フィルターとを使用した。
まず、#1フィルターを使用して、0.5μLのGFP発現−大腸菌を含む懸濁液(1x104個/mL)MMV-F1にチャージした。次に、#2フィルターを用いて、0.5μL上記培養培地をMMV-F2にチャージした。これによって、GFP発現−大腸菌をチャージしたMMV-F1と相補的なパターンで、上記培養培地を含むMMV-F2が形成された。
MMV-F2に代えて、新たな空のMMVを上記と同様に重ねて同じ操作を繰り返し、MMV-F3〜F6を、MMV−F2と同様に、スタンプ法によるレプリカとして調製した。
MMV-F2〜F6のすべてのウェルに上記培養培地を、ウェル当たり0.5μLずつ加え、CO2インキュベーター中で、37℃にて21時間培養した。培養後、発現した緑色蛍光タンパク質を観察した。結果を図6に示す。
以上より、オリジナルMMV中に含まれるものが細菌であっても、移送したウェル内に残った上記の試料とともに大腸菌を別のMMVへ移送できたこと、各レプリカMMVに残存するアリコートをシードとして大腸菌を増殖させることができることが証明された。
また、オリジナルMMV(MMV-F1)は、試料を入れたままの状態でシリコンテープ等で蓋をすれば、冷蔵又は凍結保存が可能である。このため、実施例2と同様な理由から、MMVのウェル中の大腸菌数が減少した場合には、レプリカで増幅させた大腸菌を用いて補充ができ、ほぼ、無限にレプリカを作製できることが示された。
(1−1)POMM (Panning on microarray MMV)
機能ベースペプチド選択システム(Function-based peptide selection system)によるMMVによるパニング(以下、「POMM」と略す。)を以下のようにして行った。
ペプチドコード化DNAs(機能既知及び未知の両方を使用、それらの比率は10: 106)を、MMVのウェル(1,000 DNA分子/ウェル)でチャージした。PCRには、1x Ex Taqバッファー、200μMのdNTPs(N=G,A,T,C)、0.001 U/μLのEx Taqポリメラーゼ、及び0.4μMのCAプライマー(タカラバイオ(株)製)を使用した。
これらを、MMV-G1の各ウェルに0.5μLずつ、図1Bに示す方式で入れ、厚さ0.5mmの自己粘着性シリコンテープでシールして、サーモサイクラー(Bio-Rad C1000 Touch)を用いて、95℃で40秒間変性、60℃で60秒間アニーリング、72℃で60秒間伸長を40サイクル行い、増幅産物を得た。
インビトロ転写/翻訳(In-vitro transcription/translation、以下、「IVT」と略す。)溶液を、容量が制御MMV-C(0.25μL/ウェルのMMV)の各ウェルに、図1Cのようにしてチャージした。IVT溶液は、PUREfrex(商標)溶液(I液(500μL)、II液(50μL)、及びIII液(50μL)を含んでいる(ジーンフロンティア製、千葉、日本国)。MMV-CからMMV-B1へ、実施例3と同様の条件で遠心して移送した(S-モード)。移送完了後、MMV-B1をシリコンテープでシールして、37℃で2〜4時間インキュベートした。
この混合物を、PBSバッファー及び0.1%のTriton-Xを含む新たなMMV(MMV-D)中に、図1Bのようにしてチャージした。MMV-Dの底面磁石を置いてウェル内の磁性ビーズを引きつけ、上清を室温にてスピンニング(100xg、1分)して除き、図10のようにしてMMVチップ-Dに移した。
この操作によって、チップ-B1中のIVT産物を、Aβ42とAβ42-結合ペプチドとが出あうようにした。マグネットを、MMVの上下を往復移動させながら室温にて1時間、Aβ42とAβ42-結合ペプチドとを結合させた。
0.1%のTriton-Xで20倍希釈したフルオレセイン標識FLAG特異的抗体含有溶液(モノクローナル抗FLAG(登録商標)M2-FITC(シグマ−アルドリッチ社製))を、未使用のMMV(MMV-E)にチャージし、遠心(1,400xg、1分)によってMMV-Dに移送した。このMMV-Dを磁性ビーズと混合し、シリコンテープでシールして1時間、室温にてインキュベートし、FITC標識抗体と結合させて、FLAG-融合ペプチドとした。
MMV-D中のウェルに0.1%のTriton-Xを含むプロテイナーゼK(1/50x濃度、インビトロジェン社製)をウェル当たり0.5μL加え、37℃にて1時間インキュベートして、Aβ42-結合ペプチドを遊離させた。
次いで、MMV-Dのウェル中の試料を、新たなMMV-Fに移送し(M-モード)、MMV-Fのウェルの蛍光を、FITCフィルターをつけたレーザースキャナーにて検出した。結果を、図12に示す。
図12では、Aβ42に結合したペプチドが光って(図では黒く)みえる。すなわち、磁性ビーズにビオチン・アビジン結合を介して結合しているAβ42にペプチドが結合し、そのペプチドに融合して発言しているFLAG配列にFITCラベルされた抗FLAG抗体が結合し、結局Aβ42とペプチドの結合の存在が、レポートされた。
以上によって、ペプチドをコードするDNA(DNAライブラリコンストラクト)を使用してペプチドを産生できることが示された。
Claims (6)
- 2次元マトリクス状に配置された複数の有底のマイクロウェルのそれぞれに、予め定められた属性を有する対象物質が注入されたオリジナルマイクロウェルアレイを作成するオリジナルマイクロウェルアレイ作成工程と;
前記オリジナルマイクロウェルアレイにおける複数の有底のマイクロウェルの配置面と同形である、空のレプリカ用マイクロウェルアレイを用意するレプリカ用マイクロウェルアレイ準備工程と;
前記オリジナルマイクロウェルアレイの各マイクロウェルに注入されている対象物質を、前記レプリカ用マイクロウェルアレイの対応するマイクロウェルアレイに移送する第1移送工程と;
前記レプリカ用マイクロウェルアレイの各マイクロウェルに移送された対象物質を、前記オリジナルマイクロウェルアレイにおける対応するマイクロウェルアレイに移送し、レプリカ用マイクロウェルアレイの各マイクロウェル内に、前記対象物質の一部が固定されたレプリカマイクロウェルアレイを作成する第2移送工程と;
を備えることを特徴とするレプリカマイクロウェルアレイの作成方法。 - 前記対象物質は、ペプチド又はタンパク質の情報をコードしているDNA、細菌、真菌、酵母、単細胞浮遊液とした生体細胞、及びハイブリドーマ細胞からなる群から選ばれるいずれかの増殖可能な物質であることを特徴とする、請求項1に記載のレプリカマイクロウェルアレイの作成方法。
- 前記対象物質がタンパク質の元となる情報を含むDNAである場合には、前記レプリカマイクロウェルアレイ中で増幅されたDNAを用いて、インビトロでタンパク質を産生させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項1に記載のレプリカマイクロウェルアレイの作成方法。
- 前記細菌は、ロイコノストック属、ロシア属、疫病菌、及びパラインフルエンザ菌からなる群から選ばれる、いずれかのものである、請求項2に記載のレプリカマイクロウェルアレイの作成方法。
- 前記真菌は、アスペルギルス属、クロノバクター属、トリコスポロン属、及び分裂酵母属からなる群から選ばれる、請求項2に記載のレプリカマイクロウェルアレイの作成方法。
- 前記生体細胞は、口腔粘膜、唾液、皮膚寄生微生物、排泄物、土壌微生物及び環境微生物群からなる群から選ばれる、請求項2に記載のレプリカマイクロウェルアレイの作成方法。
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