JP6291842B2 - 検出方法、マイクロアレイの解析方法および蛍光読取装置 - Google Patents
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Description
平らなスライドガラスの上に厚さ150μmのテープをはり、それを上記のスキャナー1にセットした。オフセット量+250μmの状態で、Cy5の蛍光を測定するレーザー(波長635nm)を使用し、フィルタとしてはCy3を測定する際に使用するバンドパスフィルタと同じものを用いて、アライメント用画像に相当する画像データを得た。この条件は図4−1で示す角度θが90度に相当する。その結果を図12−1〜12−3に示す。
11,12 レーザー光源
13 対物レンズ
14 穴あきミラー
14a 微小ミラー
15 カットフィルタ
15a,15b 励起光カットフィルタ
16 結像レンズ
17 画像取得部
18,19 ミラー
20 制御部
20a 検出部
20b 補正部
20c 決定部
21 駆動部
100 DNAチップ
101 ブロック
102 スポット
103 凹部
104 保持部
140 穴
Claims (10)
- レンズによって集光されたレーザー光を、凹凸形状を有する基板に照射し、該基板からの反射光および/または散乱光の光強度を画像データとして取得して前記凹凸形状の高さの差異を検出する検出方法であって、
前記レンズの焦点位置よりも前記レンズに近い位置であって、前記レンズの焦点距離をf、前記基板を前記焦点位置から前記レンズに近づける距離をαとしたとき、α/fが所定の範囲内となるように設定されるαに応じた位置に前記基板の光照射面を配置し、該光照射面からの反射光および/または散乱光を検出光として受光し、該受光した光の強度の変化に基いて前記基板の高さの差異を検出することを特徴とする検出方法。 - 前記基板の光照射面を前記焦点位置に配置した場合に、該光照射面からの正反射光を前記検出光から分離する光学系を用いることを特徴とする請求項1に記載の検出方法。
- 前記α/fの範囲は、0.017〜0.17であることを特徴とする請求項1または2に記載の検出方法。
- 凹凸形状が形成され、各々蛍光標識されたサンプルと結合可能な複数のプローブが配置されたマイクロアレイに対し、対物レンズを介して前記蛍光標識の励起波長を含む光を照射し、かつ前記マイクロアレイからの光を受光して、該受光した光に基づく画像をもとに前記マイクロアレイの解析を行うマイクロアレイの解析方法であって、
前記蛍光標識からの蛍光を検出して蛍光画像データを取得する蛍光画像データ取得ステップと、
前記対物レンズの焦点距離をf、前記マイクロアレイを前記対物レンズの焦点位置から前記対物レンズに近づける距離をαとしたとき、α/fが所定の範囲内となるように設定されるαに応じた位置に前記マイクロアレイの表面を配置し、前記マイクロアレイの表面からの光を検出して、前記蛍光画像データのアライメントを行うアライメント用画像データを取得するアライメント用画像データ取得ステップと、
前記アライメント用画像データの光強度の変化をもとに、前記凹凸形状の高さの差異を検出する検出ステップと、
前記検出ステップによって検出された前記凹凸形状の高さの差異に基づいて前記蛍光画像データを補正する補正ステップと、
前記補正ステップによって補正された前記蛍光画像データにおける各プローブの位置を決定する位置決定ステップと、
を含み、
前記アライメント用画像データ取得ステップは、前記マイクロアレイの表面を、前記対物レンズの焦点位置に対して該対物レンズに近い位置に配置した状態で、前記アライメント用画像データを取得することを特徴とするマイクロアレイの解析方法。 - 前記検出ステップは、前記アライメント用画像データにおいて、前記光強度の変化に基づいて3つ以上の基準点を検出し、
前記補正ステップは、検出した基準点を基に前記蛍光画像データの歪みを補正することを特徴とする請求項4に記載のマイクロアレイの解析方法。 - 前記補正ステップは、前記基準点に基づく前記アライメント用画像データの傾斜角度θx,θyを取得して、該傾斜角度θx,θyおよび下記式(1),(2)をもとに、前記蛍光画像データの剪断変形歪みを補正することを特徴とする請求項5に記載のマイクロアレイの解析方法。
- 前記α/fの範囲は、0.017〜0.17であることを特徴とする請求項4〜6のいずれか一つに記載のマイクロアレイの解析方法。
- 前記マイクロアレイは、DNAマイクロアレイであることを特徴とする請求項4〜7のいずれか一つに記載のマイクロアレイの解析方法。
- 凹凸形状が形成され、各々蛍光標識されたサンプルと結合可能な複数のプローブが配置された基板から、前記蛍光標識の蛍光を含む光を受光して、該受光した光に基づく画像データを取得する蛍光読取装置であって、
少なくとも所定波長の励起光を含む照明光を出射する光源と、
前記照明光を前記基板に照射するとともに、該照明光が照射された前記基板の表面からの光を受光する対物レンズと、
前記対物レンズが受光した光を検出して、該検出した蛍光による蛍光画像データおよび前記基板からの光による基板画像データを取得する画像取得部と、
画像取得部によって取得された前記基板画像データをもとに、前記凹凸形状の高さの差異を検出する検出部と、
前記検出部によって検出された前記凹凸形状の高さの差異をもとに、前記蛍光画像データを補正する補正部と、
前記基板を保持する保持手段と、
前記保持手段を前記対物レンズの光軸に沿って移動させる駆動部と、
を備え、
前記駆動部は、前記画像取得部により前記基板画像データを取得する際、前記対物レンズの焦点位置に対して、前記対物レンズに近い位置であって、前記対物レンズの焦点距離をf、前記基板を前記焦点位置から前記対物レンズに近づける距離をαとしたとき、α/fが所定の範囲内となるように設定されるαに応じた位置に前記基板を配置するように前記保持手段を移動させることを特徴とする蛍光読取装置。 - 前記α/fの範囲は、0.017〜0.17であることを特徴とする請求項9に記載の蛍光読取装置。
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