JP6273215B2 - 免疫療法分子および使用 - Google Patents

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Description

本発明は、免疫療法分子に関する。特に、腫瘍またはその他の疾患を引き起こす細胞などの望ましくない細胞の存在を特徴とする状態を予防または治療するために使用され得る免疫療法分子に関する。
悪性疾患を標的とする免疫療法戦略は、トランスレーショナルクリニカルリサーチの活発な領域であり、数十年間そうであった。現在のモデルは、癌が、宿主の免疫療法処置で治療され得る、機能的または体質的免疫不全のいずれかに相当することを決定づけるものである。これらの試みは、２つの群に広く分類され得る。第１のものは、ワクチン接種、サイトカイン支援（ＩＬ−２、ＩＦＮγ）または免疫抑制環境を低減すること（イピリムマブ）などの手段によって内因性抗腫瘍免疫性を増強または支援するよう働くのに対し、第２のものは、機能的免疫応答の成分を用いて絶対的な欠乏症を回復させようとする（抗体を用いる受動免疫療法、ＴＣＲ移入、幹細胞移植および養子免疫治療）。これらのアプローチは、高度に有効な機能的抗腫瘍免疫応答が実際にあり得るという議論によって統合される。有効な抗腫瘍免疫応答の反論できない証拠が存在するが、いくつかの場合には、腫瘍免疫学のこの中心的な柱は、多くの試みにもかかわらず、癌患者の大部分にとって有効な免疫療法が入手可能ではないという現在の臨床的現実によって圧倒的に反撃される。ありとあらゆる癌ワクチン接種試験が、陰性結果を提供し、陽性データを提供するものは、小さい効果を最も頻繁に実証する。現実は、治療用抗体は、腫瘍学の領域において極めて控えめな臨床上の利益を提供するということである。したがって、より効率的な免疫治療薬への要求が残っている。
二重特異性抗体は、異なる特異性の２つの抗原結合部位を単一の構築物に統合し、それらに精巧な特異性を有する２種の別個の抗原を一緒にする能力を与える。第１の二重特異性抗体は、天然免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子と似ており、これでは、２つのアームが別個の結合特異性を備えていた。これらの二重特異性抗体を使用して、細胞傷害性Ｔ細胞を癌細胞溶解のために結合するという概念は、元々、１９８５年にＳｔａｅｒｚら（非特許文献１）によって示された。それ以来、同じ目的のために種々の種類の構築物が作製および開発されてきた。最近、全免疫グロブリン中に存在するＦｃ部分を省きながら、２つの一本鎖Ｆｖ領域（ｓｃＦｖ抗体断片）を連結することによって抗体構築物を作製することに焦点が絞られていた。このような構築物中の各ｓｃＦｖユニット（いわゆる、二重特異性Ｔ細胞結び付け剤またはＢｉＴＥ抗体）は、合成ポリペプチドリンカーを介して互いに連結されている、重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）抗体の各々に由来する１つの可変ドメインで構成されている。したがって、得られた二重特異性一本鎖抗体は、およそ５５ｋＤａの単一のポリペプチド鎖上に単一のポリペプチド鎖上に異なる特異性の２つのＶＨ／ＶＬ対を含有する種である。
ＢｉＴＥ抗体の使用から、有望な実験結果が現れている。Ｋｕｆｅｒらは、この設計のＣＤ３／標的抗原−二重特異性抗体が、並はずれて高い効力を有し、極めて低いエフェクター対標的比で、癌細胞の再指示された溶解のためにＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞を結合できることを実証した（非特許文献２）。抗体は、腫瘍の治療において（非特許文献３、非特許文献４および非特許文献５）およびまた、非腫瘍疾患の治療において（非特許文献６）可能性を示した。抗体は、Ｔ細胞上の抗原と特異的に結合することによってＴ細胞を活性化できる一方のｓｃＦｖユニットおよび破壊に向けられた標的細胞上の抗原と特異的に結合するもう一方のｓｃＦｖユニットに頼る。このような方法で、抗体は、病的細胞の破壊のための免疫系の細胞傷害性能を活性化、再指示できる。
２種のＢｉＴＥ抗体が、臨床治験において現在試験されている。Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ（ＭＴ１０３としても知られる）は、Ｔ細胞上のＣＤ３およびＢ細胞上のＣＤ１９に対して二重特異性であり、非ホジキンリンパ腫および急性リンパ芽球性白血病の治療について試験されている。ＭＴ１１０は、ＣＤ３および上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）に対して二重特異性であり、肺および胃腸癌患者の治療について試験されている。
しかし、ＢｉＴＥ抗体および同様の二重特異性治療用抗体の制限は、それらが、ターゲッティング抗原を発現する任意の標的との結合時に、Ｔ細胞を活性化し得るということである。例えば、ＢｉＴＥまたは二重特異性抗体が、多数の上皮癌において高レベルで発現されるが、健常組織において中程度のレベルで発現されるＥＧＦ受容体をターゲッティングするよう設計された場合には、健常および癌組織の両方がターゲッティングされる。さらに、この物質は、任意の表面に結合されると活性になり、したがって、非抗原結合の形での表面との非特異的結合が、Ｔ細胞活性化および的外れの効果につながり得る。これらの理由のために、すべてのＢｉＴＥ抗体は、開発において、極めて低濃度で与えられる。
Ｎａｔｕｒｅ １９８５年、３１４：６２８ Ｍａｃｋ、ＰＮＡＳ （１９９５年）、９２：７０２１〜５頁 Ｍａｃｋ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９９７年）、１５８：３９６５〜７０頁 Ｋｕｆｅｒ、Ｃａｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ （１９９７年）、４５：１９３〜７頁 Ｌｏｆｆｌｅｒ、Ｂｌｏｏｄ（２０００年）、９５：２０９８〜１０３頁 Ｂｒｕｈｌ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００１年）、１６６：２４２０〜６頁
したがって、二重特異性抗体構築物は、身体の自身の免疫系に、望ましくない細胞の根絶または中和を達成するよう再指示することにおいて大きな治療的価値を有するが、このような再指示の活性化は、細胞傷害性の可能性が、意図される指示でのみ補充され、適用されるようしっかりと制御されることが必要である。したがって、上記の制限を克服するさらなる免疫治療薬が非常に必要とされる。
本発明者らは、免疫細胞が、ターゲッティングされる細胞の近くにある場合にのみ活性化される、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を動員し、活性化して、望ましくない細胞をターゲッティングする手段を発明した。以下で明らかとなるように、このような免疫細胞の選択的活性化は、望ましくない細胞の近くにある薬剤による、望ましくない標的細胞の近くの免疫細胞結合領域の選択的アンマスキングに基づいている。このようにして、この技術は、望ましくない細胞の近くで（例えば、癌関連プロテアーゼの存在下で）のみアンマスクされている免疫細胞結合領域のために、望ましくない細胞に対してより特異的（例えば、より癌特異的）である。これは、二重特異性抗体の治療域を著しく拡大し、そのようにして、より大きな標的効果につながる、投与される薬物のより多量の用量を容易にする。
したがって、本発明の第１の態様は、（ｉ）望ましくない細胞を直接的または間接的にターゲッティングできるターゲッティング部分と、（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を有して、さらなる部分の免疫細胞との結合を防ぐさらなる部分とを含み、分子が望ましくない細胞の近くにある場合に、マスクされた免疫細胞結合領域が選択的にアンマスクされて、さらなる部分の免疫細胞との結合を可能にし得る分子を提供する。ターゲッティング部分は、例えば、ＢｉＴＥ抗体の抗原特異性が構築物を癌細胞にターゲッティングするものと同一の方法で、さらなる部分を望ましくない細胞に近づけるよう機能する。望ましくない細胞の近くの免疫細胞結合領域を選択的アンマスキングすることによって、さらなる部分が、望ましくない細胞の近くにある場合にのみ免疫細胞と結合し得ることを確実にする。
本発明は、以下の図面および実施例を用いてさらに詳細に記載される。
本発明の分子を例示する模式図である。ターゲッティング部分（１）は、望ましくない細胞（２）に特異的なＶＨおよびＶＬドメインを含み、さらなる部分（３）は、ＣＤ３抗原に特異的なＶＨおよびＶＬドメインを含む。さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインは、対合を可能にするのに不十分な長さのものであるリンカーによって接続され、そうして、さらなる部分のＴ細胞結合領域はマスクされる。分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合のリンカー中の切断部位（５）の切断によって、Ｔ細胞結合領域（４）のアンマスキングが可能となる。 本発明の分子を例示する模式図である。ターゲッティング部分（１）は、望ましくない細胞（２）上の抗原に特異的な、対を形成しているＶＨおよびＶＬドメインを含む。さらなる部分（３）は、ＣＤ３抗原に特異的なＶＨおよびＶＬドメインを含む。しかし、さらなる部分のＴ細胞結合領域は、それぞれのリンカーによってさらなる部分に連結されている２つのマスキング部分、ＣＨドメインおよびＣＬドメイン（６）の存在によって遮断されている。分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合のリンカー中の切断部位（５）の切断によって、Ｔ細胞結合領域（４）のアンマスキングが可能となる。 本発明の分子を例示する模式図である。ターゲッティング部分（１）は、望ましくない細胞（２）上の抗原に特異的な、対を形成しているＶＨおよびＶＬドメインを含む。さらなる部分（３）は、ＣＤ３抗原に特異的なＶＨおよびＶＬドメインを含む。しかし、さらなる部分のＴ細胞結合領域は、Ｔ細胞結合領域と結合する免疫細胞抗原であり、共有結合リンカーによってさらなる部分に安全につながれているマスキング部分（６）の存在によって遮断されている。分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合の、リンカー中の切断部位（５）の切断によって、マスキング部分がＴ細胞結合領域から離れ、そうして、Ｔ細胞結合領域（４）がアンマスクされる。 本発明の分子を例示する模式図である。ターゲッティング部分（１）は、望ましくない細胞（２）上の抗原に特異的な対を形成しているＶＨおよびＶＬドメインを含む。さらなる部分（３）は、ＣＤ３抗原に特異的なＶＨおよびＶＬドメインを含む。しかし、さらなる部分（３）のＶＨおよびＶＬドメインは、それぞれ、ＶＬおよびＶＨドメインを含む２つのマスキング部分（６）の存在のために対を形成できない。マスキング部分のＶＬおよびＶＨドメインは、さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインと対を形成するダミードメインとして作用し、そうして、さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインを対合から妨げる。したがって、Ｔ細胞結合領域（４）は、マスクされる。分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合の、さらなる部分を１以上のマスキング部分と連結するリンカー中の切断部位（５）の切断によって、マスキング部分のダミーＶＨおよびＶＬドメインとの対合からＶＨおよびＶＬドメインが放出され、そうしてさらなる部分のＶＨドメインおよびＶＬドメインが対を形成し得る。Ｔ細胞結合領域（４）は、それによってアンマスクされ得る。 （Ａ）は、本発明の分子を例示する模式図である。ターゲッティング部分のｓｃＦｖを包含するＶＨおよびＶＬ領域は、単一のペプチドリンカーを介して、さらなる部分のＶＨ領域と連結されており、これは、順に、プロテアーゼ切断部位を含有する単一のペプチドリンカーを介して、マスキング部分のＣＨ領域と連結されている。さらなる部分のＶＬ領域は、プロテアーゼ切断部位を含有する単一のペプチドリンカーを介して、マスキング部分のＣＬ領域と連結される。さらなる部分のＶＨおよびＶＬ領域ならびにマスキング部分のＣＨおよびＣＬ領域は、タンパク質が一緒にインキュベートされると対を形成する。したがって、マスキング部分のＣＨおよびＣＬ領域は、さらなる部分のＶＨおよびＶＬ領域がその天然リガンド（例えば、ＣＤ３）と相互作用するのを、またＴ細胞を活性化するのを妨げる。しかし、標的部分を介した望ましくない細胞との結合後、望ましくない細胞の近くで特異的タンパク質分解による切断が起こり、マスキング部分がそれによって放出されて、Ｔ細胞の、望ましくない細胞との相互作用が可能となる。 （Ｂ）（Ａ）に表わされているタンパク質鎖の遺伝子構造を表す模式図である。Ｒｉｃｋｙｍａｂ（Ｈｅａｖｙ）は、さらなる部分のＶＨおよびマスキング部分のＣＨ領域を含み、これは、標的部分のｓｃＦｖと一緒に分子的にクローニングされる。Ｒｉｃｋｙｍａｂ（Ｌｉｇｈｔ）は、実施形態を作製できる細胞にＤＮＡを導入した後に、Ｒｉｃｋｙｍａｂ （Ｈｅａｖｙ）のＶＨおよびＣＨ領域と対を形成する、さらなる部分のＶＬ領域およびマスキング部分のＣＬ領域を含む。 （Ａ）図４に見られるポリペプチド鎖を形成するために一緒に組み合されるＤＮＡの領域を表す模式図である。矢印によるさらなる指摘は、図１、２、４および５に見られる分子を作製するための分子内の領域の移動を可能にする、プロテアーゼ切断部位およびＤＮＡ酵素切断の部位（ＢａｍＨ、ＳａｃおよびＸｈｏ）を表す。（Ｂ）蛍光色素と結合された、（Ａ）中の標的部分のＶＨおよびＣＨ領域を構成するＤＮＡの領域を表す模式図である。その他の分子のＶＨおよびＣＨ領域（例えば、図１〜５）はまた、ＤＮＡの酵素消化およびその後の蛍光色素との連結によって蛍光色素と連結され得る。標識された分子が、細胞を標識するために使用されると、それらの細胞は、フローサイトメトリーを使用して見られ得る。これによって、標的部分が、任意の望ましい細胞種ではなく、対象の望ましくない細胞と結合するという実証が可能になる。 ２人のドナー（異なるＨＬＡ型を有する）から得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、図３に例示された分子（抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ（さらなる部分）に連結され、ＣＤ３εドメイン（マスキング部分）−Ｂ．ｍａｂにさらに連結された抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ターゲッティング部分）を含む）とともにインキュベートし、さらなる部分の活性部位を放出するようプロテアーゼを添加して３７℃で一晩インキュベートした。翌日、細胞を抗ＣＤ３に対する抗体を用いて標識して、分子とともにインキュベートした後のＴ細胞の存在を決定し、抗ＣＤ１９も同様に、Ｂ細胞の存在／不在を決定した（実施例２を参照のこと）。予測されたように、分子とともにインキュベートすることによって、ＰＢＭＣからすべてのＢ細胞が除去される。 標的細胞、Ｂリンパ芽球様細胞株（Ｂ−ＬＣＬ））が、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ（さらなる部分）と連結され、ＣＤ３εドメイン（マスキング部分）とさらに連結された抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ターゲッティング部分）を含む分子（図３）で標識されている図である。結合していない実施形態を除去した後、Ｂ−ＬＣＬ細胞を、Ｔ細胞とともにか、または伴わずに一晩インキュベートし、Ｂ−ＬＣＬは、マスキング部分を切断して、さらなる部分を放出するプロテアーゼを産生した。対照尺度として、Ｔ細胞を分子とともに標的細胞は伴わずにインキュベートして、結合していない分子のバックグラウンド活性化を決定した。一晩インキュベートした後、各培養物中のインターフェロンγ（ＩＦＮ−ｙ）の量をアッセイして、Ｔ細胞活性化の程度を決定した。標的細胞が分子を用いて標識された場合には（実施例１を参照のこと）Ｔ細胞の活性化のみがあった。 条件的に活性化される二重特異性構築物を示す図である。健常ドナーから得られた末梢血単核細胞を、一晩培養した後にフローサイトメトリーを使用して評価した。細胞を、抗ＣＤ３（Ｙ軸）および抗ＣＤ１９（ｘ軸）を使用して染色して、Ｔ細胞およびＢ細胞の数を示した。ｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２−ＣＤ３ｅ構築物は、ＣＤ３ｅキャップとｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２活性化領域の間に、因子Ｘａプロテアーゼを使用して切断され得るプロテアーゼ切断可能なセクションを含有していた。ｓｃＦｖ１は、抗ＣＤ１９実体であるのに対し、ｓｃＦＶ２は、ＣＤ３ｅに対して親和性を有する。（Ａ）培地のみで一晩培養したＰＢＭＣ；（Ｂ）ＰＢＭＣ＋ｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２−ＣＤ３ｅ構築物；（Ｃ）ＰＢＭＣ＋ｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２−ＣＤ３ｅ構築物＋因子Ｘａプロテアーゼ（０．０１μｇ／ｍｌ）；（Ｄ）ＰＢＭＣ＋ｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２−ＣＤ３ｅ構築物＋因子Ｘａプロテアーゼ（０．１μｇ／ｍｌ）；（Ｅ）ＰＢＭＣ＋ｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２−ＣＤ３ｅ構築物＋因子Ｘａプロテアーゼ（０．５μｇ／ｍｌ）；（Ｆ）ＰＢＭＣ＋ｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２−ＣＤ３ｅ構築物＋因子Ｘａプロテアーゼ（１μｇ／ｍｌ）。図からわかるように、プロテアーゼが添加される場合にのみ、キャップが切断除去され、それによって、Ｂ細胞の枯渇が可能となる。構築物は、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ（さらなる部分）に連結され、ＣＤ３εドメイン（マスキング部分）にさらに連結された抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ターゲッティング部分）を含んでいた。 マスキングドメインの除去によって条件的に活性化される二重特異性構築物を示す図である。（Ａ）哺乳類発現系（２９３Ｔ）において同時発現される場合に、ｓｃＦｖ１−ｓｃＦｖ２−Ｃａｐを産生し、抗ＣＤ３結合領域（ｓｃＦｖ２）が免疫グロブリン定常領域（ＣＨ、ＣＬ）によってマスクされている、２種の構築物Ｒｉｃｋｙ２Ａ（配列番号３０）およびＲｉｃｋｙ２Ｂ（配列番号３１）の設計。定常領域は、マスキングドメインと結合ドメインの間にＭＭＰ２認識部位ＩＰＶＳＬＲ（配列番号３２）を含めることによって、腫瘍関連プロテアーゼ（ＭＭＰ２）によって切断除去される。この場合には、構築物のために、抗ＭＵＣ１（ｓｃＦｖ１）および抗ＣＤ３（ｓｃＦｖ２）ドメインが使用され；（Ｂ）フローサイトメトリーを使用して評価されるように、実験に使用されたＴ細胞は、ＣＤ３−ＰＥ（ｘ軸）および抗ＣＤ１３８−ＡＰＣ（ｙ軸）を使用して染色した；（Ｃ）フローサイトメトリーを使用して評価されるように、実験に使用されたＭｕｃ１を発現するＵ２６６細胞は、ＣＤ３−ＰＥ（ｘ軸）および抗ＣＤ１３８−ＡＰＣ（ｙ軸）を使用して染色した；（Ｄ）Ｕ２６６細胞のＴ細胞との同時培養；（Ｅ）Ｕ２６６集団の１２％の低減を示す、Ｕ２６６細胞のＴ細胞＋Ｒｉｃｋｙ２Ａ／２Ｂ活性化可能なマスクされた二重特異性との同時培養。
分子の個々の成分を以下に詳細に記載する。
ターゲッティング部分
「ターゲッティング部分」によって、本発明者らは、望ましくない細胞をターゲッティングできる任意の部分という意味を含む。好ましくは、ターゲッティング部分は、望ましくない細胞を選択的にターゲッティングできる。例えば、ターゲッティング部分が、正常な細胞をターゲッティングするよりも大きな程度に望ましくない細胞をターゲッティングする場合が好ましく、望ましくない細胞のみをターゲッティングすることが最も好ましい。
当然のことではあるが、ターゲッティング部分の正常細胞との結合は、それらがその他の治療手段と機能的に置換され得る場合に、または生命にとって必須ではない場合に許容され得る。したがって、癌細胞ならびに、例えば、内分泌組織または器官をターゲッティングするターゲッティング部分は除外されない。この場合には、ターゲッティング部分は、望ましくない細胞に対する、および治療手段によって機能的に置換され得るその他の細胞の両方に対する免疫応答を再指示するよう作用する。救命状況では、その機能が生命にとって必須ではないならば、例えば、精巣、前立腺または膵臓の場合には、またはホルモン補充療法によって供給され得るならば、例えば、組織または器官が犠牲にされ得る。このような考察は、例えば、甲状腺、副甲状腺、副腎皮質および卵巣に当てはまる。
ターゲッティング部分は、望ましい細胞とは対照的に望ましくない細胞を選択的にターゲッティングできる部分であり得るということになり、これでは、望ましくない細胞は、宿主におけるその存在が望まれていない細胞および所望により、宿主におけるその存在が望まれるが、その存在が治療手段によって機能的に置換され得る細胞を含み得る。
免疫細胞結合領域の選択的アンマスキングは、免疫細胞結合領域がアンマスクされ、そして、ターゲッティング部分の、その近くで免疫細胞結合領域がアンマスクされていない正常細胞のとの結合も許容され得る場合に、特異性を付与するということも理解される。
しかし、ターゲッティング部分が、望ましくない細胞を、任意のその他の細胞とは対照的に選択的にターゲッティングすることが最も好ましい。
一実施形態では、ターゲッティング部分は、望ましくない細胞を直接的にターゲッティングできる。しかし、以下に記載されるように、ターゲッティング部分は、例えば、望ましくない細胞の近くに位置する（例えば、望ましくない細胞との結合によって）別の部分をターゲッティングすることによって、望ましくない細胞を間接的にターゲッティングするものである場合もある。
好都合なことに、ターゲッティング部分は、望ましくない細胞によって発現されたか、またはそれと関連している実体の特異的結合パートナーである。通常、発現される実体は、望ましくない細胞で選択的に発現される。例えば、発現される実体の存在量は、通常、治療される身体内のその他の細胞よりも、望ましくない細胞で１０または１００または５００または１０００または５０００または１００００高い。しかし、上記に記載されるように、望ましくない細胞の近くの免疫細胞結合領域の選択的アンマスキングは、免疫細胞結合領域がアンマスクされ、そして、結合パートナーが、身体内のその他の細胞に対して、望ましくない細胞で同様にまたはさらに低く発現される実体と結合し得る場合にさらなる特異性を提供する。
「結合パートナー」によって、本発明者らは、特定の細胞によって発現される実体と結合する分子という意味を含む。好ましくは、結合パートナーは、その実体と選択的に結合する。例えば、結合パートナーが、別の細胞（例えば、正常な細胞種）によって発現される少なくとも１種のその他の実体のものよりも、少なくとも５または１０倍低い、好ましくは、１００または５００倍超低いＫｄ値（解離定数）（すなわり、より高い親和性）を有する場合に好ましい。より好ましくは、その実体の結合パートナーは、別の細胞（例えば、正常細胞種）によって発現される少なくとも１種のその他の実体の１０００または５０００倍超低いＫｄ値を有する。Ｋｄ値は、当技術分野で周知の方法を使用して容易に決定され得る。しかし、上記で論じられるように、結合パートナーは、正常細胞が機能的に置換され得るか、あるいは、生命にとって必須ではないという条件で、望ましくない細胞によって、および正常細胞によって発現された実体と選択的に結合し得るということは理解される。例えば、リンパ腫では、抗ＣＤ２０（すべてのＢ細胞をターゲッティングする）は極めて有効であり、健常および悪性すべてのＢ細胞を死滅させる。しかし、これは、Ｂ細胞が健康にとって重要ではないので許容され得る。さらに、黒色腫、リンパ腫、前立腺癌、甲状腺、精巣または卵巣癌の場合には、健常な対応物組織をターゲッティングすることも許容され得る。
通常、結合パートナーとは、任意の正常細胞においてよりも、望ましくない細胞中または望ましくない細胞上で、大幅に高い濃度で、存在するか、結合パートナーに接近しやすい実体と結合するものである。したがって、結合パートナーは、正常細胞上よりも相当に高い量で発現される望ましくない細胞上の表面分子または抗原と結合し得る。同様に、結合パートナーは、望ましくない細胞によって、正常細胞によってよりも高い程度に細胞外液中に分泌された実体と結合し得る。例えば、結合パートナーは、細胞膜上に発現されるか、または腫瘍細胞外液中に分泌された腫瘍関連抗原と結合し得る。
ターゲッティング部分は、ポリペプチドまたはペプチドであり得る。特に好ましい実施形態では、ターゲッティング部分は、望ましくない細胞によって発現された抗原、例えば、腫瘍関連抗原と結合する抗体である。
好ましい抗体標的（括弧中に望ましくない細胞種の例を有する）として、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ（上皮悪性腫瘍）；ＣＤ２２（Ｂ細胞、自己免疫または悪性）；ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）（上皮悪性腫瘍）；ＥＧＦＲ（上皮悪性腫瘍）；ＰＭＳＡ（前立腺癌腫）；ＣＤ３０（Ｂ細胞悪性腫瘍）；ＣＤ２０（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＣＤ３３（骨髄悪性腫瘍）；膜ＩｇＥ（アレルギー性Ｂ細胞）；ＩｇＥ受容体（ＣＤ２３）（アレルギー性疾患における肥満細胞またはＢ細胞）、ＣＤ８０（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＣＤ８６（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＣＤ２（Ｔ細胞またはＮＫ細胞リンパ腫）；ＣＡ１２５（卵巣癌腫を含む多発癌）；炭酸脱水酵素ＩＸ（腎細胞癌を含む多発癌）；ＣＤ７０（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＣＤ７４（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＣＤ５６（Ｔ細胞またはＮＫ細胞リンパ腫）；ＣＤ４０（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＣＤ１９（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ｃ−ｍｅｔ／ＨＧＦＲ（胃腸管および肝臓悪性腫瘍；ＴＲＡＩＬ−Ｒ１（卵巣および結腸直腸癌腫を含む多発悪性腫瘍）；ＤＲ５（卵巣および結腸直腸癌腫を含む多発悪性腫瘍）；ＰＤ−１（Ｂ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＰＤ１Ｌ（上皮腺癌を含む多発悪性腫瘍）；ＩＧＦ−１Ｒ（上皮腺癌を含むほとんどの悪性腫瘍）；ＶＥＧＦ−Ｒ２（上皮腺癌を含む悪性腫瘍の大部分と関連している脈管構造；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）（前立腺上皮内腫瘍）；ＭＵＣ１（上皮悪性腫瘍）；ＣａｎＡｇ（結腸および膵臓の癌腫などの腫瘍）；メソテリン（食道および卵巣および膵臓腺癌を含む多数の腫瘍）；Ｐ−カドヘリン（乳腺癌を含む上皮悪性腫瘍）；ミオスタチン（ＧＤＦ８）（肉腫ならびに卵巣および膵臓腺癌を含めた多数の腫瘍）；Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ１）（結腸、乳房、肺、卵巣および膵臓癌を含めた上皮悪性腫瘍）；ＡＣＶＲＬ１／ＡＬＫ１（白血病およびリンパ腫を含めた多発悪性腫瘍）；ＭＵＣ５ＡＣ（乳腺癌を含めた上皮悪性腫瘍）；ＣＥＡＣＡＭ（乳腺癌を含めた上皮悪性腫瘍）；ＣＤ１３７（Ｂ細胞またはＴ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ＣＸＣＲ４（Ｂ細胞またはＴ細胞、自己免疫、アレルギー性または悪性）；ニューロピリン１（肺癌を含めた上皮悪性腫瘍）；グリピカン（肝臓、脳および乳癌を含む多発癌）；ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ（上皮悪性腫瘍）ＰＤＧＦＲａ（上皮悪性腫瘍）；ＥｐｈＡ２（神経芽腫、黒色腫、乳癌および小細胞肺癌腫を含む多発癌）；およびＣＤ１３８（骨髄腫）が挙げられる。
特に好ましいターゲッティング部分抗体として、セツキシマブなどの抗上皮増殖因子受容体抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体、イノツズマブなどの抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ７０抗体、ｈｐ６７．６またはゲムツズマブなどの抗ＣＤ３３抗体、ＧＰ１．４およびＳＭ３などの抗ＭＵＣ１抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗Ｐ−カドヘリン抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗Ｅ−カドヘリン抗体、抗ＣＥＡ抗体および抗ＦＧＦＲ３抗体が挙げられる。
望ましくない細胞の存在を特徴とする種々の状態を予防または治療するのに有用ななおさらなる選択的標的を、以下に提供する。以下の例のすべてについて、治療用抗体は、既に入手可能であるか、または当業者によって容易に調製され得る。
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ターゲッティング部分によってターゲッティングされ得る腫瘍関連、免疫細胞関連および感染試薬関連抗原の例が、表１に示されている。
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１Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら（１９８６年） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４６、３９１７〜３９２３頁
２Ｃｌａｒｋｅら（１９８５年） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２、１７６６〜１７７０頁
その他の抗原として、αフェトプロテイン（ａｌｐｈａｆｏｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ）、Ｃａ−１２５および前立腺特異的抗原が挙げられる。
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本明細書において、用語「抗体」として、それだけには限らないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、一本鎖、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって製造された断片および二重特異性抗体が挙げられる。このような断片は、標的物質に対するその結合活性を保持する全抗体の断片、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）およびＦ（ａｂ’）２断片ならびに一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、融合タンパク質および抗体の抗原結合部位を含むその他の合成タンパク質を含む。抗体の一部のみを含むターゲッティング部分は、血液からのクリアランスの速度を最適化するために有利であり得る、Ｆｃ部分による非特異的結合を受ける可能性が低い場合がある。また、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディー、ラクダ化抗体および操作されたラクダ化抗体も含まれる。さらに、ヒトへの投与には、抗体およびその断片は、現在では当技術分野で周知であるヒト化抗体であり得る（Ｊａｎｅｗａｙら（２００１年） Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．、第５版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）；Ａｎら（２００９年） Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ、ＩＳＢＮ：９７８−０−４７０−１１７９１−０）。
非対称性ＩｇＧ様抗体（例えば、トリオマブ（ｔｒｉｏｍａｂ）／クアドローマ、Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ；ノブ−イントゥー−ホールズ（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｃｒｏｓｓ ＭＡｂｓ、Ｒｏｃｈｅ；静電気的に対応される抗体、ＡＭＧＥＮ；ＬＵＺ−Ｙ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；鎖交換操作されたドメイン（ｓｔｒａｎｄ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｄｏｍａｉｎ）（ＳＥＥＤ）ボディー、ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ；ｂｉｏｌｏｎｉｃ、ＭｅｒｕｓおよびＦａｂ交換抗体、Ｇｅｎｍａｂ）、対称性ＩｇＧ様抗体（例えば、二重ターゲッティング（ＤＴ）−ｌｇ、ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ；ツーインワン（ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ）抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；架橋ＭＡｂ、ｋａｒｍａｎｏｓ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｎｔｅｒ；ｍＡｂ２、Ｆ−ｓｔａｒおよびＣｏｖ Ｘ−ｂｏｄｙ、Ｃｏｖ Ｘ／Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩｇＧ融合物（例えば、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−ｌｇ、Ａｂｂｏｔｔ；ＩｇＧ様二重特異性抗体、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ；Ｔｓ２Ａｂ、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡＺ；ＢｓＡｂ、ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ；ＨＥＲＣＵＬＥＳ、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｅ；ＴｖＡｂ、Ｒｏｃｈｅ）Ｆｃ融合物（例えば、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合物、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ；ＳＣＯＲＰＩＯＮ、Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ、ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ；二重親和性再ターゲッティング技術（Ｆｃ−ＤＡＲＴ）、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ；二重（ＳｃＦｖ）２−Ｆａｂ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ） Ｆａｂ融合物（例えば、Ｆ（ａｂ）２、Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ；二重作用またはＢｉｓ−Ｆａｂ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｄｏｃｋ−ａｎｄ−Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）、ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ；二価二重特異性、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ；およびＦａｂ−Ｆｖ、ＵＣＢ−Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）、ＳｃＦｖ−およびダイアボディーベースの抗体（例えば、二重特異性Ｔ細胞結び付け剤（ＢｉＴＥ）、Ｍｉｃｒｏｍｅｔ；タンデムダイアボディー（Ｔａｎｄａｂ）、Ａｆｆｉｍｅｄ；ＤＡＲＴ、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ；一本鎖ダイアボディー、Ａｃａｄｅｍｉｃ；ＴＣＲ様抗体、ＡＩＴ、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｌｏｇｉｃｓ；ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合物、ＭｅｒｒｉｍａｃｋおよびＣＯＭＢＯＤＩＥＳ、Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩｇＧ／非ＩｇＧ融合物（例えば、免疫サイトカイン、ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ、Ｐｈｉｌｏｇｅｎ、ＩｍｍｕｎＧｅｎｅ、ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ；超抗原融合タンパク質、Ａｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈおよび癌に対する免疫動員性ｍＴＣＲ、ＩｍｍＴＡＣ）およびオリゴクローナル抗体（例えば、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ ａｎｄ Ｍｅｒｕｓ）も含まれる。
抗体は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃａｒｔｅｒ （２００６年） 「Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｂｙ ｄｅｓｉｇｎ」、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６（５）：３４３〜５７頁およびＣａｒｔｅｒ （２０１１年） 「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｃｕｒｒｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ： ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ． ３１７（９）：１２６１〜９頁によって記載される抗体様スキャフォールドのいずれかを、本明細書に記載される特異性決定領域と一緒に有し得る。したがって、用語「抗体」はまた、アフィボディー（ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ）および非免疫グロブリンベースのフレームワークも含む。
全抗体ではなく抗体断片を使用することの利点は、数倍である。断片の小さい大きさは、固形組織のより良好な浸透などの改善された薬理学的特性につながり得る。さらに、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片などの抗原結合性断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）または酵母中で発現され、またはそれから分泌され得、したがって、実験室における好都合な製造および商業的規模での経済的製造を可能にする。
抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＤクラスのいずれかのものであり得、任意の種に由来し得る。抗体が、ＩｇＧである場合には、ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３またはｌｇＧ４のいずれかであり得る。しかし、薬剤が特定の宿主に投与するためのものである場合には、抗体または少なくともその定常領域は、その宿主に由来することが好ましい。例えば、薬剤が、ヒトに投与される予定である場合には、抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体などであることが好ましい。
望ましくない細胞によって発現される特定の抗原と結合する適した抗体は、当技術分野で長年にわたって確立された技術を使用して当業者によって製造され得る。モノクローナル抗体および抗体断片の調製方法は、当技術分野で周知であり、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ （１９７５年） 「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ ｆｕｓｅｄ ｃｅｌｌｓ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄ ｏｆ ｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． Ｎａｔｕｒｅ ２５６： ４９５〜４９７頁）；抗体ファージディスプレイ（Ｗｉｎｔｅｒら（１９９４年） 「Ｍａｋｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｙ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．」 Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １２： ４３３〜４５５頁）；リボソームディスプレイ（Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌら（１９９９年） 「Ｒｉｂｏｓｏｍｅ ｄｉｓｐｌａｙ： ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｌｉｂｒａｒｙ．」Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１： １１９〜１３５頁）；および反復性コロニーフィルタースクリーニング（Ｇｉｏｖａｎｎｏｎｉら（２００１） 「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ａ ｌａｒｇｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｂｙ ｃｏｌｏｎｙ ｆｉｌｔｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．」 Ｎｕｃｌｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２９： Ｅ２７）が挙げられる。さらに、本発明において使用するのに適した抗体および抗体断片は、例えば、以下の刊行物：「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、Ｈｕｒｒｅｌｌ （ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、１９８２）；「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｈ． Ｚｏｌａ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、１９８７、ＩＳＢＮ： ０−８４９３６−４７６−０；「Ａｎｔｉｖｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｆ １ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ、Ｅｄｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８８． ＩＳＢＮ ０−８７９６９−３１４−２；「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｆ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ、Ｅｄｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年 ＩＳＢＮ ０−８７９６９−５４３−９；および「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」 Ｓｔｅｆａｎ Ｄｕｂｅｌ、Ｅｄ．、１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ、− Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、２００７． ＩＳＢＮ： ３−５２７−３１４５３−９に記載されている。
ターゲッティング部分が、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含むｓｃＦｖ抗体などの一本鎖抗体である場合は、そのドメインが可動性ペプチドリンカーによって一緒に接続していることが特に好ましい。一本鎖抗体が、上記のもののいずれかを含めた、望ましくない細胞によって発現される実体と結合することが好ましい。しかし、ターゲッティング部分は、重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインなどの１つだけの抗体可変ドメインを含む場合もあり、このようなドメインは、望ましくない細胞によって発現される実体と結合し得るということも理解されよう。
当然のことではあるが、ターゲッティング部分はまた、望ましくない細胞によって発現される実体と非免疫的に特異的に結合するか、そうでなければ、望ましくない細胞と結合するようになる任意の化合物またはその一部であり得る。したがって、特異的結合パートナーは、ホルモン、増殖因子、サイトカインまたは受容体リガンド（例えば、アゴニストまたはアンタゴニスト）のいずれかであり得る。
例えば、サイトカインは、侵入する細菌に毒素をターゲッティングするためにこれまで使用されてきた。遺伝子工学を使用して、例えば、ＩＬ−２および結合ドメインが欠失したシュードモナス外毒素タンパク質を含有する組換えタンパク質が製造されている（Ｌｏｒｄｅｒｂｏｕｍ−Ｇａｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ、１９８８ （６２））。この免疫毒素は、実験動物モデルにおいて有効であった（Ｋｏｚａｋ ｅｔ ａｌ、１９９０ （６３））。ＩＬ−４、ＩＬ−６、α−ＭＳＨ、ＥＧＦおよびＴＮＦ−αを有する融合タンパク質も製造されており（Ｗａｌｄｍａｎｎ １９９２ （３５）に概説されている）、それらのすべてが、本発明においてターゲッティング部分として使用するのに適当である。
特に有用なターゲッティング部分として、ＩＬ−２、ＥＧＦ、ＶＥＧＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＨＧＦ、ＩＧＦ、ＩＬ−６またはＩＬ−４などのサイトカインが挙げられる。ＩＬ−２およびＩＬ−４は、高親和性ＩＬ−２受容体を発現する成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫細胞をターゲッティングし得るが、正常な休止Ｔ細胞またはＩＬ−４受容体を発現するＴ細胞はターゲッティングしない。ヒトＩＬ−４受容体と結合するモノクローナル抗体ＭＲ６は、クローニングされたヘルパーＴ細胞のＩＬ−４誘導性増殖およびポリクローナルＢ細胞によるＩｇＥの産生を阻害し得るということがこれまでにわかっている（Ｌａｒｃｈｅら、１９８８年（３６））。このようなターゲッティング部分は、自己免疫疾患またはアレルギーにおいてリンパ球細胞小集団を排除するために使用され得る。
インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−１１）は、悪性細胞によって選択的に取り込まれ、そのようにして腫瘍細胞をターゲッティングするために使用され得る。同様に、ＥＧＦが、ＥＧＦ受容体を上方制御する悪性細胞をターゲッティングするために使用され得る。また、腫瘍関連血管は、ＶＥＧＦ受容体を過剰発現し、そのようにして、ＶＥＧＦ増殖因子のファミリーによってターゲッティングされ得る。
Ｆｌｔ３受容体は、白血病において過剰発現され、急性および慢性白血病および骨髄増殖性疾患の治療標的であり得る。
骨髄腫細胞は、ＩＬ−６受容体を発現し、また、ＩＬ−６を分泌し、これは細胞増殖を刺激するよう自己分泌様式で作用する。したがって、ＩＬ−６は、骨髄腫のターゲッティング部分として使用され得る。
別の例では、ターゲッティング部分は、黒色腫細胞において多数で発現されるＭＳＨ受容体と結合する黒色腫刺激性ホルモン（ＭＳＨ）である。
当業者ならば、例えば、その望ましくない細胞にとって特異的である表面抗原または分子を同定することおよびその抗原または分子の結合パートナーを見出すことによって、任意の所与の望ましくない細胞の適した結合パートナーを容易に選択できるということは理解される。上記のように、腫瘍関連抗原、免疫細胞抗原および感染性病原体に対する抗体およびその断片に関する相当な研究が実施されてきた。したがって、好都合なことに、所与の細胞種の適当なターゲッティング部分を選択することは、通常、文献を検索することを含む。あるいは、望ましくない細胞が、患者から採取され（例えば、生検によって）、細胞に対する抗体が調製される。このような「テーラーメイド」抗体は、既に公知である。抗体は、得られた患者に由来する腫瘍細胞だけでなく、多数のその他の患者にも結合を付与することが実証されている。したがって、複数のこのような抗体が市販されるようになった。所与の望ましくない細胞の適した結合パートナーを同定するその他の方法として、遺伝的アプローチ（例えば、マイクロアレイ）、プロテオミクスアプローチ（例えば、示差質量分析）、免疫学的アプローチ（例えば、動物を腫瘍細胞を用いて免疫処置することおよび悪性細胞を特異的にターゲッティングする抗体を分泌するクローンを同定すること）および標的がシステムバイオロジーアプローチを使用して同定されるコンピュータによるアプローチが挙げられる。
さらなる選択的標的および適した結合パートナーが表２に示されている。
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種々の癌の予防または治療において有用なさらなる標的は、以下に提供される。
Figure 0006273215
特異的結合パートナーであるターゲッティング部分の代替物として、ターゲッティング部分は、対象へ投与した後に、望ましくない細胞の近くで蓄積できる非特異的分子であり得る。例えば、高分子が、腫瘍中に非特異的蓄積することは知られている。腫瘍中で非特異的に蓄積することが知られている高分子として、アルブミン、免疫グロブリン、トランスフェリン、リポソーム、ナノ粒子（例えば、コロイド状ナノ粒子）ならびにデキストラン、ポリエチレングリコール、ポリリジンおよびヒドロキシプロピルメチルアクリルアミドを含めた生分解性ポリマーが挙げられる。高分子は、ヌードマウスにおけるヒト異種移植腫瘍において腫瘍１グラムあたりの投与される用量の最大約２．０％蓄積する。ポリエチレングリコールおよびデキストランなどの高分子は、それが結合している物質のクリアランス速度を改変することおよび腫瘍中のその濃度を改変することがわかっている（Ｍｅｌｔｏｎら、１９８７年；Ｅｎｏ−Ａｍｍｏｑｕａｙｅら、１９９６年）。例外的な腫瘍では、非特異的高分子は、分泌される抗原に向けられた抗体よりも高い濃度で蓄積し得る（Ｓｅａｒｌｅら、１９８１年）。
このような高分子が腫瘍において蓄積するという発見は、血管透過性および滞留性亢進（ＥＰＲ）効果と呼ばれており、腫瘍毛細血管の漏れやすさおよび不十分なリンパ排出に起因していた（Ｍａｔｓｕｍｕｒａ ＆ Ｍａｃｄａ、１９８６）。
したがって、望ましくない細胞が腫瘍細胞である場合には、ターゲッティング部分は、腫瘍中に蓄積するこれらの高分子のいずれかであり得る。本発明において使用された高分子は、親水性であり、体液において、および非経口投与のための従来の流体において可溶性であることを特徴とすることが好ましい。高分子は、反復投与の間の全身蓄積が避けられるよう、生分解性であることが適している。しかし、望ましくない細胞（例えば、腫瘍）の部位で蓄積できないほど迅速に分解されてはならないことは明らかである。このような高分子ターゲッティング部分を含む薬剤の分子量および大きさは、尿中排泄の腎閾値のもの（ＭＷ６００００）を超えることが好ましいが、これは、これが、血中濃度が有効な血液：腫瘍濃度勾配を提供するのに十分であるよう補助するからである。最大少なくとも８０００００、例えば、最大１６００００の分子量が、一般に適している。高分子は、好ましくは、細網内皮系によって容易に捕獲されないものである。所与の分子量は、任意の水和の水を除外する。
サブユニットとして利用可能であり、生分解性ではない高分子は、非生分解性成分が腎臓によって濾過され、尿中に排泄されるよう、生分解性連結ユニットによって連結されてもよい。
あるいは、高分子を作製するために使用されるポリマーが生分解性ではない場合には、生分解性部分の分解後に、残りの非生分解性部分が、腎臓によって排泄されるよう、コンジュゲートの任意の非生分解性部分の分子量が、腎閾値（約７００００）未満でなくてはならないようなものであることが好ましい。
好都合なことに、高分子は、デキストラン、ポリアミノ酸、ナノ粒子（例えば、コロイド状ナノ粒子）または免疫グロブリン、アルブミンまたはトランスフェリンなどの非腫瘍特異的タンパク質のいずれかであり得る。スチレンおよび無水マレイン酸の共重合体であり得るか、またはポリアスパラギン酸、ポリ−Ｌ−リシン、ポリエチレンイミンまたはポリエチレングリコールであり得ることが適している。
このような高分子は、ＷＯ１９９８／０２４４７８に記載されるようなメラニン細胞に向けられた酵素プロドラッグ療法（ＭＤＥＰＴ）において使用されるということは理解される。
望ましくない細胞を直接的にターゲッティングすることに加えて、ターゲッティング部分は、望ましくない細胞をターゲッティングできる部分と結合できることによって、望ましくない細胞を間接的にターゲッティングできるものであり得る。例えば、望ましくない細胞（上記のもののいずれかを含む）を直接的にターゲッティングできる部分は、第１の結合パートナーを含み得る。第１の結合パートナーと結合できる、第２の結合パートナーを含むターゲッティング部分は、その結果、第１の結合パートナーと結合できることによって、望ましくない細胞を間接的にターゲッティングする能力を有する。この場合には、ターゲッティング部分は、望ましくない細胞によって発現されるか、またはそれと結合している実体と直接的には結合しないが、望ましくない細胞によって発現されるか、またはそれと結合している実体と結合する部分と結合することによって間接的に結合する。本発明の分子が、このようにして望ましくない細胞を間接的にターゲッティングするターゲッティング部分ならびに望ましくない細胞を直接的にターゲッティングするターゲッティング部分を含み得るということは理解されよう。本発明者らは、第１および第２の結合パートナーによって、互いに選択的に結合する任意の２種の部分という意味を含む。最も好ましくは、第１および第２の結合パートナーは、互いとのみ結合し、任意のその他の部分とは結合しない。ビオチン／アビジンまたはストレプトアビジン間などの非共有結合または免疫学的結合が好ましい。したがって、第１の結合パートナーは、ビオチンであり得、第２の結合パートナーは、アビジンであり得、逆もまた同様である。あるいは、第１の結合パートナーは、抗原であり得、第２の結合パートナーは、その抗原に特異的な抗体であり得、逆もまた同様である。しかし、互いに選択的に結合する第１および第２の結合パートナーの任意の対が使用され得、適した対は、当業者に公知となろう。
望ましくない細胞
望ましくない細胞は、宿主中のその存在が望まれていない任意の細胞であり得る。したがって、細胞は、腫瘍細胞（良性または悪性）、腫瘍線維芽細胞または腫瘍血管などの腫瘍微小環境に由来する細胞、ウイルス感染した細胞、遺伝子療法の一部として導入された細胞または特定の理由のために破壊することを願う正常細胞であり得る。例えば、自己免疫疾患ではＴリンパ球などの、またはアレルギー性疾患ではＢリンパ球などの免疫細胞の小集団を排除することが望ましい場合もある。
好ましくは、望ましくない細胞は、その存在が患者における状態を特徴づけるものである。本発明者らは、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態によって、病態の少なくとも一部が、望ましくない細胞の存在によって媒介される任意の生物学的または医学的状態または疾患を含む。状態は、望ましくない細胞の存在によって引き起こされ得るか、あるいは、望ましくない細胞の存在は、状態の効果であり得る。特定の条件の例として、腫瘍（良性または悪性）、自己免疫状態、心血管疾患、変性性疾患、糖尿病、アレルギー性疾患（例えば、喘息）、アルツハイマー病などの神経変性性疾患、移植患者および感染性疾患が挙げられる。
自己免疫疾患については、望ましくない細胞は、適応または自然免疫応答の細胞、好ましくは、Ｔ細胞、より好ましくは、Ｂ細胞に相当し得る。心血管疾患については、望ましくない細胞は、マクロファージなどのアテローム性病変内の細胞に相当し得る。変性性疾患については、望ましくない細胞は、神経変性変化を誘導する細胞に相当し得、例えば、アルツハイマー病では、それらは、ミクログリアまたは星状細胞であり得る。その他の変性性疾患については、変性またはアポトーシスのプロセスを促進する任意の細胞が標的と考えられ得る。望ましくない組織が増大する加齢などプロセスについては、例えば、良性前立腺肥大(prostatic hyperplasis)においては、非悪性前立腺組織が好ましい標的となる。アレルギー性疾患については、組織肥満細胞などのアレルギー性反応に加わる細胞、また形質細胞またはＢ細胞などのＩｇＥ分泌細胞も、理想の標的と考えられ得る。移植では、アロ反応性リンパ球が、好ましい標的細胞に相当する。感染性疾患との関連で、ウイルス、細菌または真菌病原体を有する任意の細胞が、好ましい標的細胞、例えば、ＨＩＶ感染細胞と考えられ得る。
さらなる部分の免疫細胞結合性領域
本発明者らは、「免疫細胞結合領域」によって、免疫細胞と結合できるさらなる部分の領域という意味を含む。好ましくは、免疫細胞結合領域は、免疫細胞と選択的に結合できる。例えば、免疫細胞結合領域が免疫細胞と、任意のその他の種類の細胞と結合するよりも大きな程度に結合する場合が好ましく、免疫細胞とのみ結合する場合が最も好ましい。
一般に、免疫細胞結合領域は、免疫細胞によって発現される実体と結合し、好ましくは、その実体と選択的に結合する。したがって、さらなる部分は、免疫細胞上に発現される実体の結合パートナーであり得、免疫細胞結合領域は、結合に関与しているさらなる部分の領域である。免疫細胞結合領域が、別の細胞種によって発現される少なくとも１種のその他の実体のものよりも少なくとも５または１０倍低い、好ましくは、１００または５００倍超低い、所与の免疫細胞によって発現される実体との結合のＫｄ値を有する場合が好ましい。免疫細胞結合領域が、別の細胞種によって発現される少なくとも１種のその他の実体のものよりも少なくとも１０００または５０００倍低い所与の免疫細胞によって発現される実体との結合のＫｄ値を有することがより好ましい。
「免疫細胞」によって、本発明者らは、活性化されると、標的細胞の生存力に変化を引き起こすことができる免疫系（例えば、ヒト免疫系）中の細胞の天然レパートリー内の任意の免疫細胞という意味を含む。「標的細胞の生存力」によって、本発明者らは、生存し、増殖し、および／またはその他の細胞と相互作用する標的細胞の能力という意味を含む。このような相互作用は、例えば、標的細胞が別の細胞と接触する場合には直接または例えば、標的細胞が、別の離れた細胞の機能に対する影響を有する物質を分泌する場合には間接のいずれかであり得る。一般に、免疫細胞は、生存し、増殖し、および／またはその他の細胞と相互作用する標的細胞の能力のうち１つまたは複数を低減するものであり、好ましくは、免疫細胞は、標的細胞を死滅させるものである。したがって、免疫細胞は、好ましくは、免疫エフェクター細胞であるということは理解されよう。
一実施形態では、免疫細胞は、リンパ球細胞系統のメンバーであり、そのように、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のいずれかであり得る。有利なことに、このような細胞は、望ましくない細胞に対して細胞傷害性またはアポトーシス効果を有する。
別の実施形態では、免疫細胞は、骨髄性系統のメンバーであり、そのように、単核食細胞（例えば、単球またはマクロファージ）、好中球性顆粒球または樹状細胞のいずれかであり得る。有利なことに、このような細胞は、望ましくない細胞に対して、細胞傷害性、食作用性またはアポトーシス効果を有する。
免疫細胞が、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）である場合が特に好ましく、そのように、さらなる部分の免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞結合領域である。したがって、本発明は、（ｉ）望ましくない細胞を直接的または間接的にターゲッティングできるターゲッティング部分と、（ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を有して、さらなる部分のＴ細胞との結合を妨げるさらなる部分とを含む分子を提供し、これでは、マスクされた免疫細胞結合領域は、分子が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的にアンマスクされて、さらなる部分の免疫細胞との結合を可能にし得る。
「Ｔ細胞」によって、本発明者らは、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、γδＴ細胞およびＮＫ−Ｔ細胞を含めたすべての種類のＴ細胞を含む。Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞応答が補充されるような細胞傷害性Ｔ細胞であることが有利である。このようにして、細胞傷害性効果が、望ましくない細胞に対して発揮され得る。
Ｔ細胞の表面上で発現される実体は、ＣＤ３、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２８のうち任意のものを含み、そのため、免疫細胞結合領域が、Ｔ細胞と結合するものである場合には、さらなる部分は、これらの抗原の任意のものと結合できる可能性がある。例えば、さらなる部分は、ＣＤ３、ＴＣＲ、ＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２８のうち任意のものと特異的に結合する抗体であり得る。
その他の免疫細胞の表面で発現される実体は、当技術分野で周知であり、Ｔ細胞の表面上のものと同様、科学文献を調べることによって容易に同定され得る。例として、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＮＫ細胞受容体（例えば、ＣＤ９４：ＮＫＧ２ヘテロ二量体、Ｌｙ４９ホモ二量体、γδＴ細胞受容体、病原体認識受容体、ストレス監視受容体、キラー細胞Ｉｇ様受容体（ＫＩＲ）または白血球抑制性受容体）、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＣＤ２、ＣＤ２８およびＣＤ２５が挙げられる。
さらなる部分の免疫細胞結合領域によってターゲッティングされる実体は、好ましくは、結合されると、対応する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化につながるものである。免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化は、単離された末梢単核血液細胞を、免疫細胞結合領域を含むさらなる部分と接触させることおよび当技術分野で公知の細胞増殖のための標準アッセイを使用することによって決定され得る。免疫応答の程度を決定するための適したアッセイとして、ＥＬＩＳｐｏｔ、細胞内サイトカイン染色、ＨＬＡ−ペプチド四量体染色、増殖アッセイ、活性化アッセイ（例えば、ＣＤ６９）、ＣＤ１０７動員アッセイまたは代謝アッセイ（例えば、ＭＴＴ）が挙げられる。また、例えば、ＥＬＩＳＡまたはマルチプレックス化されたビーズ技術を使用して、活性化によって誘導される分泌サイトカインを検出するためのアッセイも適している。
例えば、好ましい実施形態では、さらなる部分の免疫細胞結合領域が、Ｔ細胞結合領域である場合に、Ｔ細胞結合領域が、Ｔ細胞を活性化することがわかっているＴ細胞上のＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合可能である場合が好ましい。ＣＤ３は、すべてのＴ細胞上に存在し、γ、δ、ε、ζおよびηと名付けられたサブユニットからなる。ＣＤ３の細胞質側末端は、ＴＣＲ受容体複合体のその他の成分の不在下で、Ｔ細胞活性化のために必要なシグナルを形質導入するのに十分である。普通、Ｔ細胞細胞毒性の活性化は、まず、ＴＣＲの、それ自体が外来抗原と結合しており、別個の細胞上に位置する、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質との結合に頼る。この最初のＴＣＲ−ＭＨＣ結合が起こった場合のみ、Ｔ細胞クローン増殖に関与しているＣＤ３依存性シグナル伝達カスケード、最終的に、Ｔ細胞細胞毒性が後に続き得る。しかし、本発明の分子のさらなる部分が、ＣＤ３および／またはＴＣＲと結合する場合には、非依存性ＴＣＲ−ＭＨＣの不在下での細胞傷害性Ｔ細胞の活性化が、免疫シナプス形成を模倣するＣＤ３および／またはＴＣＲ分子の架橋によって起こり得る。これは、Ｔ細胞が、クローン非依存性に、すなわち、Ｔ細胞によって実施される特定のＴＣＲクローンと無関係である方法で細胞傷害性に活性化され得ることを意味する。これによって、特定のクローン同一性の特定のＴ細胞のみではなく全Ｔ細胞コンパートメントの活性化が可能となる。
したがって、免疫細胞結合領域（例えば、Ｔ細胞結合領域）は、免疫細胞を活性化する、例えば、標的細胞の生存力に対するその効果、例えば、細胞毒性を発揮するとわかっている、その免疫細胞との天然抗原結合を模倣する方法で免疫細胞と結合するものであることが好都合である。
さらなる部分は、ポリペプチドまたはペプチドであり得る。好ましくは、免疫細胞結合領域を含有するさらなる部分は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）によって発現される実体と特異的に結合する抗体である。特に好ましい実施形態では、さらなる部分は、免疫細胞抗原と特異的に結合する、１以上の抗体可変ドメイン（例えば、ＶＨおよびＶＬドメイン）を含む。さらなる部分は、対を形成した場合に、免疫細胞抗原と特異的に結合する、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み得るか、または免疫細胞抗原と結合できる、単一のＶＨドメインまたは単一のＶＬドメインを含み得る。したがって、さらなる部分は、ｓｃＦｖ抗体などの一本鎖抗体構築物であり得る。さらなる部分が、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原と特異的に結合する抗体（例えば、ｓｃＦｖ抗体などの少なくとも１種の抗体可変ドメインを含むもの）である場合が特に好ましい。特定の実施例として、ムロモナブがあるが、当然のことではあるが、任意の抗ＣＤ３抗体も使用され得る。以下および図面からより明確となるであろうが、さらなる部分は、必ずしも、連続するポリヌクレオチド配列によってコードされるわけではないポリペプチドドメインなどの２以上の別個の部分を含み得る。
「マスクされた」によって、本発明者らは、さらなる部分中の免疫細胞結合領域の免疫細胞結合機能が、実質的に低減されるか、または好ましくは、完全に阻害されるという意味を含む。免疫細胞結合領域のマスキングは、望ましくない細胞の近くでの選択的アンマスキングによって逆転され得る。したがって、マスクされた状態では、免疫細胞結合領域は、免疫細胞と結合できないが、アンマスクされた状態では、免疫細胞結合領域が、免疫細胞と結合できることが好ましい。
以下にさらに記載され、図面に例示されるように、特定の好ましい実施形態では、免疫細胞結合領域のマスキングは、分子中の１以上の切断部位の選択的切断によって制御される。したがって、分子は、分子が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的に切断可能である１以上の切断部位を含有し得る。適した切断部位およびそれらを切断し得る薬剤は、以下により詳細に記載される。
免疫細胞結合領域がマスクされる場合には、さらなる部分は、通常、免疫細胞結合領域がアンマスクされる場合よりも少なくとも５倍低い、より通常は、免疫細胞結合領域がアンマスクされる場合よりも少なくとも１０、５０または１００倍低い親和性で免疫細胞と結合する。最も好ましくは、免疫細胞結合領域がマスクされる場合には、さらなる部分と免疫細胞の間に検出可能な結合はない。部分の細胞との結合を評価する方法は、当技術分野で一般的であり、例えば、放射標識アッセイ、蛍光標識技術およびフローサイトメトリーが挙げられる。さらなる部分は、標識され、アンマスクされた状態およびマスクされた状態の両方で、結合を促す条件下で免疫細胞に付加され、免疫細胞と、マスクされた状態およびアンマスクされた状態のさらなる部分との間の結合の程度が比較されることが好都合である。蛍光相関分光法、蛍光共鳴エネルギー移動および分析的超遠心分離法などの生物物理学的技術も使用され得る。
好ましくは、免疫細胞結合領域の免疫細胞との結合は、免疫細胞を活性化する。したがって、免疫細胞結合領域がマスクされている場合には、さらなる部分は、通常、免疫細胞を、免疫細胞結合領域がアンマスクされている場合よりも少なくとも５倍少なく、より通常は、免疫細胞結合領域がアンマスクされている場合よりも少なくとも１０、５０または１００倍少なく活性化する。最も好ましくは、免疫細胞結合領域がマスクされている場合には、免疫細胞の検出可能な活性化はない。免疫細胞の活性化を評価する方法は、当技術分野で標準であり、上記のような細胞増殖およびサイトカイン分泌アッセイが挙げられる。
一実施形態では、免疫細胞結合領域は、特定のコンホメーションでロックされているさらなる部分によってマスクされており、これでは、免疫細胞結合領域が、免疫細胞に到達できない。次いで、免疫細胞結合領域は、例えば、望ましくない細胞の近くにある場合に、免疫細胞結合領域をアンマスクする、さらなる部分におけるコンホメーション変化を誘導する分子中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされ得る。
この実施形態の一例は、図１に示されており、これでは、ターゲッティング部分およびさらなる部分の各々が、単一ポリペプチド鎖上に発現されたそれぞれのｓｃＦｖ抗体である。図１では、ターゲッティング部分（１）は、２つの抗体可変ドメイン（図中で楕円として表される）：第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む１つのｓｃＦｖユニットに相当し、これらのドメインは、一緒に対を形成して、望ましくない細胞上に発現される抗原に特異的な、第１の機能的エピトープ結合部位を形成し得る。ターゲッティング部分は、一緒に対を形成して、免疫細胞上に発現される抗原（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３）に特異的な第２の機能的エピトープ結合部位を形成し得る、２つの抗体可変ドメイン（図中で楕円として表される）：第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインを含む別のｓｃＦｖユニットに相当するさらなる部分（３）と結合される。したがって、図１中、さらなる部分の免疫細胞結合領域（４）は、第２のＶＨドメインが第２のＶＬドメインと対を形成する場合に形成される第２の機能的エピトープ結合部位に相当する。図１中、さらなる部分（３）の第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインが、２つのドメイン間の対合を可能にするのに不十分な長さのものであるポリペプチドリンカーによって共有結合によって連結され、これは、さらなる部分（３）を特定のコンホメーションにロックする効果を有し、これでは、免疫細胞結合領域（４）はマスクされる。しかし、分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合には、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインを連結するポリペプチドリンカー内のプロテアーゼ切断部位（５）の切断が、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメイン間の共有結合を破壊し、その結果、ドメインが対を形成し、第２の機能的エピトープ結合部位を形成し得る。言い換えれば、プロテアーゼ切断部位の切断は、免疫細胞結合領域（４）をアンマスクするさらなる部分（３）におけるコンホメーション変化につながった。
したがって、図１に例示されるように、一実施形態では、さらなる部分は、ｓｃＦｖ抗体（３）が免疫細胞と結合できないよう、ＶＨおよびＶＬドメインを連結するリンカーが、ＶＨおよびＶＬドメインの対合を可能にするのに不十分な長さのものであるｓｃＦｖ抗体（３）であり、これでは、望ましくない細胞（２）の近くにある場合に前記リンカー中の１以上の切断部位（５）の選択的切断が、ＶＨおよびＶＬドメインの対合を誘導し、その結果、ｓｃＦｖ抗体（３）が免疫細胞と結合できる。好ましくは、免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原と結合するものなどのＴ細胞結合領域である。
好ましくは、この実施形態および本明細書に記載されるその他の実施形態におけるリンカーは、ペプチドリンカーである。しかし、ポリマー、ヌクレオチド、核酸、多糖鎖、脂質有機種（例えば、ポリエチレングリコール）を含めたその他のリンカーも使用され得る。
さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインを連結するリンカーは、ＶＨおよびＶＬドメイン間の対合を可能にするのに不十分な長さのものでなくてはならないということは重要である。
「ＶＨおよびＶＬドメイン間の対合」によって、本発明者らは、対を形成しているドメインが、対応する全ＩｇＧ親抗体またはｓｃＦｖ抗体と同様の親和性で結合するよう、対応する全ＩｇＧ親抗体またはｓｃＦｖ抗体において天然に対を形成している状態と同一であるか、または近似しているコンホメーションで、対応しているＶＨおよびＶＬドメインを正しく並べるというという意味を含む。ＶＨおよびＶＬドメインの対合は、当技術分野で公知の、抗体／抗原結合をモニタリングする任意の結合アッセイによって評価され得る。適した技術として、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、フローサイトメトリー、ＦＲＥＴおよび構造研究が挙げられる。ＶＨまたはＶＬドメインの一方またはもう一方の過剰量が使用される比較アッセイも使用され得る。過剰量が結合を増加させる場合には、これは、ドメインが対を形成していないことを暗示するであろう。さらに、対応する免疫細胞と結合し、活性化するそれらの能力を調査することによって、さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインの対合を評価するために、機能的免疫細胞アッセイが使用され得る。例えば、さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインが、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原に特異的であった場合には、機能的Ｔ細胞アッセイを実施することによって正しい対合をモニタリングすることが適当であり得る。
一般に、１４個のアミノ酸またはそれより短い、ｓｃＦｖ抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを連結するペプチドリンカーは、ＶＨおよびＶＬドメイン間の対合を可能にするのに不十分な長さのものである。したがって、リンカーがペプチドである場合には、ペプチドリンカーは、通常、１４個のアミノ酸またはそれより短い、例えば、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個のアミノ酸の長さである。
好ましくは、図１中の実施形態のターゲッティング部分は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、一緒に対を形成して、望ましくない細胞上に発現された抗原に特異的な機能的エピトープ結合部位を形成し得る。この場合には、ターゲッティング部分は、分子が単一のポリペプチド鎖として発現され得るようさらなる部分と連結され得るということは理解される。
代替実施形態では、免疫細胞結合領域は、免疫細胞結合領域のＴ細胞への接近を妨げる１以上のマスキング部分を含む分子によってマスクされる。したがって、分子は、少なくとも１つまたは２つまたは３つまたは４つまたはそれ以上のマスキング部分を含み得る。
１以上のマスキング部分は、ポリペプチドまたはペプチドまたは抗体または小分子を含めた任意の化学部分であり得る。さらなる部分の免疫細胞結合領域を立体的に遮断する任意の部分が、マスキング部分として使用され得るということは理解される。適したポリペプチドの例として、アルブミンおよびヘモグロブリン(haemoglobulin)が挙げられる。このような部分は、当業者によって容易に同定され得る。例えば、免疫細胞を活性化するとわかっている抗体に対する抗体（例えば、Ｔ細胞を活性化するｓｃＦｖ断片）が、適当な抗体を用いてマウスを免疫処置することによってファージディスプレイ技術によって選択され得る。同様に、例えば、免疫細胞活性化アッセイにおいて、免疫細胞の既知アクチベーターの阻害剤を同定するために、小分子ライブラリーがスクリーニングされ得る。使用され得るその他の技術として、分子コンピュータモデリングおよびリボソームディスプレイ法が挙げられる。
一実施形態では、図１、２および４において例示されるように、１以上のマスキング部分が免疫グロブリンドメインである。免疫グロブリンドメインは、抗体に由来する重鎖または軽鎖ドメインのいずれかであり得、同様に、それらは、抗体に由来する可変または定常ドメインのいずれかであり得る。したがって、１以上のマスキング部分は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、重鎖定常ドメイン（ＣＨ）および軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）のうち任意の１種または複数であり得る。例えば、分子は、ＶＬドメインおよびＶＨドメインであるか、またはＣＬドメインおよびＣＨドメインである２つのマスキング部分を含み得る。１以上のマスキング部分が、ＶＬドメインおよびＶＨドメインである場合には、２つのドメインは、ｓｃＦｖ構築物に相当し得る。当然のことではあるが、１以上のマスキング部分が免疫グロブリンドメインである場合は、それらは、ターゲッティング部分の免疫細胞結合領域に特異的なイディオタイプを有し得る。好ましくは、しかし、マスキング部分として使用される免疫グロブリンドメインは、身体において任意のその他のタンパク質と特異的に結合せず、そのように、低い毒性を有するものがある。
別の実施形態では、図３に例示されるように、マスキング部分は、さらなる部分の免疫細胞結合領域が結合できる免疫細胞表面抗原である。例えば、さらなる部分の免疫細胞結合領域が、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原と結合する場合には、マスキング部分は、ＣＤ３抗原（またはそのサブユニットのうち１つ）であり得る。このシナリオでは、マスキング部分は、さらなる部分の免疫細胞結合領域との結合についてＴ細胞と競合する。当然のことではあるが、マスキング部分は、全免疫細胞表面抗原である必要はないが、部分が免疫細胞結合領域と結合できるという条件で、免疫細胞表面抗原の一部のみを含み得る。適した部分として、免疫細胞表面抗原の外側部分または免疫細胞結合領域と結合できるその一部が挙げられる。したがって、ＣＤ３抗原のサブユニットの１つの外側部分（例えば、ＣＤ ε）が使用され得る。免疫細胞表面抗原と免疫細胞結合領域間の結合を測定するために、例えば、当技術分野で一般的な実施であり、例えば、Ｐｌａｎｔら（１９９５年） Ａｎａｌｙｔ Ｂｉｏｃｈｅｍ、２２６（２）、３４２〜３４８頁およびＳａｍｂｒｏｏｋら（２００１年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．第３版 Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴アッセイ、チップベースのアッセイ、イムノサイトフルオレッセンス(immunocytofluorescence)、酵母ツーハイブリッド技術およびファージディスプレイを含めた種々の方法が使用され得る。このような免疫細胞表面抗原の一部は、定義、免疫細胞表面抗原中に含まれる。したがって、マスキング部分は、免疫細胞表面抗原（例えば、ＣＤ３抗原）の抗原性部分を含み得る。一般に、このような部分は、少なくとも８個のアミノ酸、一般に、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のアミノ酸、より一般には、少なくとも２５、５０、７５または１００個のアミノ酸のアミノ酸残基のストレッチを含む。
通常、１以上のマスキング部分が、１以上のリンカーによって分子と共有結合によって結合される。このようなリンカーは、以下にさらに記載されるように、分子が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的に切断可能である１以上の切断部位を含有し得る。あるいは、１以上のマスキング部分が、分子と非共有結合される場合もある。この場合には、以下に記載される１以上の切断部位が、さらなる部分中の１以上の位置に位置し得、その結果、切断されると、マスキング部分と非共有結合によって結合しているさらなる部分の一部が、分子から放出され、免疫細胞結合領域を含有するさらなる部分の一部が、分子中に保持される。そのようなものとして、１以上の切断部位の切断は、免疫細胞結合領域をアンマスクされるようにした。
１以上のマスキング部分は、免疫細胞結合領域を簡単に遮断することによって作動し得、その結果、その領域は、免疫細胞に接近できない。この場合には、アンマスキングの際に、さらなる部分におけるコンホメーション変化はなく、１以上のマスキング部分の除去によって、下部のＴ細胞結合領域が簡単に露出し、その結果、免疫細胞を結合し得る。当然のことではあるが、マスキング部分は、上記で論じられるように、免疫細胞領域を立体的に遮断する任意の適した化学部分であり得る。この実施形態の例は、図２および３に示されており、これでは、マスキング部分は、それぞれ、免疫グロブリンドメインまたは免疫細胞表面抗原のいずれかである。
図２では、図１におけるように、ターゲッティング部分およびさらなる部分の各々が、ＶＨおよびＶＬドメインのそれぞれの対を含む。図２は、２つのポリペプチド鎖を含有する分子を表すが、当然のことではあるが、ターゲッティング部分およびさらなる部分の各々は、単一のポリペプチド鎖上に発現されるそれぞれのｓｃＦｖ抗体であり得る。図では、ターゲッティング部分（１）は、第１のＶＨドメインおよび第１のＶＬドメインを含み、これらのドメインは、一緒に対を形成して、望ましくない細胞上に発現される抗原に特異的な第１の機能的エピトープ結合部位を形成できる。ターゲッティング部分（１）は、一緒に対を形成して、免疫細胞（例えば、ＣＤ３）上に発現される抗原に特異的な第２の機能的エピトープ結合部位、すなわち、免疫細胞結合領域（４）を形成し得る、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインを含むさらなる部分（３）と結合される。しかし、免疫細胞結合領域（４）は、それぞれ、免疫細胞結合領域を遮断するよう作用する、ＣＨドメインを含む第１のマスキング部分（６）およびＣＬドメインを含む第２のマスキング部分（６）と連結されている第１のさらなる部分の第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインによってマスクされる。分子が望ましくない細胞の近くにある場合には、第２のＶＨドメインを第１のマスキング部分のＣＨドメインと、第２のＶＬドメインを第２のマスキング部分のＣＬドメインと連結する、それぞれのポリペプチドリンカー内のプロテアーゼ切断部位（５）の切断は、ＣＨドメインおよびＣＬドメインマスキング部分（６）を放出するよう作用し、その結果、第２の機能的エピトープ結合部位が、免疫細胞に接近可能となる、言い換えると、プロテアーゼ切断部位の切断は、免疫細胞結合領域をアンマスクした。
したがって、図２に例示されるように、一実施形態では、本発明の分子は、
免疫細胞と特異的に結合できるＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むさらなる部分（３）と、
さらなる部分（３）のＶＨドメインを第１のマスキング部分（６）のＣＨドメインと連結する第１のリンカーと、
さらなる部分（３）のＶＬドメインを第２のマスキング部分（６）のＣＬドメインと連結する第２のリンカーと
を含み、その結果、第１および第２のマスキング部分（６）のＣＨおよびＣＬドメインが、ＶＨおよびＶＬドメインの結合領域（４）をマスクして、さらなる部分の、免疫細胞との結合を妨げ、
ここで、望ましくない細胞（２）の近くにある場合に、前記リンカー中の１以上の切断部位（５）の選択的切断によって、さらなる部分（３）から第１および第２のマスキング部分（６）を放出して、さらなる部分（３）の免疫細胞との結合を可能にする。免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原と結合するものなどのＴ細胞結合領域であることが好ましい。ターゲッティング部分は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインが、対を形成して、望ましくない細胞上に発現される抗原に特異的な機能的エピトープ結合部位を形成できることが好ましい。ターゲッティング部分は、さらなる部分を有する単一ポリペプチドとして発現される場合も、発現されない場合もある。この実施形態では、第１および第２のマスキング部分は、例えば、立体的遮断によって、免疫細胞結合領域の免疫細胞との結合を妨げることができる任意の化学部分であり得るということは理解される。したがって、誤解を避けるために、図２は、マスキング部分をＣＨおよびＣＬドメインとして表すが、免疫グロブリンドメインの任意の組合せを含めた任意の１以上の適したマスキング部分が使用され得るということは理解される。
図３では、ターゲッティング部分およびさらなる部分は各々、単一ポリペプチド鎖として発現されるそれぞれのｓｃＦｖ抗体である。しかし、当然のことではあるが、図３中に示される分子のターゲッティング部分およびさらなる部分のそれぞれのＶＨおよびＶＬドメインは、一緒に対を形成する２つのポリペプチド鎖（例えば、ｓｃＦｖ様分子またはダイアボディー）上に同等に存在し得る。図では、ターゲッティング部分（１）は、第１のＶＨドメインおよび第１のＶＬドメインを含む１つのｓｃＦｖユニットに相当し、これらのドメインは、一緒に対を形成して、望ましくない細胞上に発現される抗原に特異的な第１の機能的エピトープ結合部位を形成し得る。ターゲッティング部分は、対を形成して、免疫細胞（例えば、ＣＤ３）上で発現される抗原に特異的な第２の機能的エピトープ結合部位、すなわち、免疫細胞結合領域（４）を形成し得る、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインを含む別のｓｃＦｖユニットに相当するさらなる部分（３）と結合される。しかし、免疫細胞結合領域は、さらなる部分（３）の第２のＶＨドメインまたは第２のＶＬドメインのものを免疫細胞表面抗原、すなわち、マスキング部分（６）と連結し、その結果、免疫細胞表面抗原が免疫細胞結合領域（４）と結合し、遮断するリンカーによってマスクされる。分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合には、リンカー内の切断部位（５）の切断によって、免疫細胞表面抗原（６）が免疫細胞結合領域を離れることが可能となり、その結果、第２の機能的エピトープ結合部位（４）が免疫細胞に接近できるようになる。言い換えれば、切断部位（５）の切断は、免疫細胞結合領域（４）をアンマスクした。この実施形態は、さらなる部分（３）の免疫細胞結合領域（４）との結合に対する、免疫細胞および分子内の免疫細胞表面抗原（６）間の競合を含む。望ましくない細胞（２）の近くにない場合には、免疫細胞表面抗原（６）は、免疫細胞表面抗原（６）の局所濃度を増大し、そのようにして、免疫細胞ではなく免疫細胞表面抗原（６）の免疫細胞結合領域（４）との結合に有利に働くリンカーによって分子に連結される。分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合には、免疫細胞表面抗原（６）を分子と連結するリンカーが切断され、そのようにして、免疫細胞表面抗原（６）は、免疫細胞結合領域（４）を自由に離れ、その結果、これで免疫細胞がそれと結合できる。
したがって、本発明の分子は、
免疫細胞と特異的に結合できるＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むさらなる部分（３）と、
さらなる部分（３）を免疫細胞表面抗原（６）と連結し、その結果、免疫細胞表面抗原（６）が、ＶＨおよびＶＬドメインの免疫細胞結合領域（４）と結合し、マスクして、さらなる部分（３）の免疫細胞との結合を妨げるリンカーと
を含み得、
ここで、望ましくない細胞（２）の近くにある場合に、リンカー中の１以上の切断部位（５）の選択的切断によって、ＶＨおよびＶＬドメインの免疫細胞結合領域（４）から免疫細胞表面抗原（６）を放出して、さらなる部分（３）の免疫細胞との結合を可能にする。免疫細胞結合領域（４）は、Ｔ細胞のＣＤ３抗原と特異的に結合するものなどのＴ細胞結合領域であり、免疫細胞表面抗原は、ＣＤ３抗原またはその一部などのＴ細胞表面抗原であることが好ましい。好ましくは、図３に例示されるように、ターゲッティング部分は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは対を形成して、望ましくない細胞上に発現される抗原に特異的な機能的エピトープ結合部位を形成できる。このようにして、ターゲッティング部分およびさらなる部分は、単一のポリペプチド鎖として発現され得る２つの別個のｓｃＦｖユニットに相当し得る。
代替実施形態では、１以上のマスキング部分は、免疫細胞結合領域が免疫細胞に接近できないような、さらなる部分のコンホメーションを促進することによって作動する。この場合には、アンマスキングは、免疫細胞結合領域が、ここで、免疫細胞との結合のために接近できるようになるような、さらなる部分におけるコンホメーション変化を含む。例えば、さらなる部分が、免疫細胞上の抗原（例えば、ＣＤ３抗原）と特異的に結合する、ＶＨおよびＶＬドメインの対を含む場合には、１以上のマスキング部分が、ＶＨおよびＶＬドメインが、免疫細胞抗原と結合するための所望の３次元コンホメーションにないように、さらなる部分の成分ＶＨおよびＶＬドメインの対合を妨げるように作用し得るということは理解される。さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインの対合を妨げるために、種々の方法が使用され得る。さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインと対を形成するダミー可変ドメインを使用し、その結果、さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインが互いに対を形成できない、１つのこのような方法が、図４に例示されている。しかし、例えば、ＶＨ−ＶＬ境界面タンパク質表面と結合することによる、さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインの対合を妨げる任意の適したマスキング部分が使用され得る。すべての場合において、ＶＨおよびＶＬドメインの対合を妨げることは、分子が望ましい細胞の近くにある場合に、分子内の１以上の切断部位の切断によって解除される。
図４では、ターゲッティング部分（１）は、第１のＶＨドメインおよび第１のＶＬドメインを含むｓｃＦｖユニットに相当し、これらのドメインは、一緒に対を形成して、望ましくない細胞上に発現される抗原に特異的な、第１の機能的エピトープ結合部位を形成し得る。第１のリンカーは、ターゲッティング部分（１）の第１のＶＬドメインを、さらなる部分（３）の第２のＶＨドメインと連結し、第２のリンカーは、ターゲッティング部分（１）の第１のＶＨドメインを、ＶＨドメインを含む第１のマスキング部分（６）と連結し、第３のリンカーは、さらなる部分（３）の第２のＶＨドメインと、ＶＬドメインを含む第２のマスキング部分（６）と連結し、第４のリンカーは、第１のマスキング部分のＶＨドメインを、さらなる部分（３）の第２のＶＬドメインと連結し、ここで、さらなる部分の第２のＶＨおよび第２のＶＬドメインは、対を形成すると、免疫細胞上で発現される抗原（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原）に特異的な第２の機能的エピトープ結合部位、すなわち、免疫細胞結合領域（４）を形成し；第３および第４のリンカーは、さらなる部分（３）の第２のＶＨドメインが、第２のマスキング部分のＶドメイン（６）と対を形成され、さらなる部分（３）の第２のＶＬドメインが、第１のマスキング部分のＶＨドメイン（６）と対を形成されるよう十分な長さのものである。したがって、図４中の第１および第２のマスキング部分が、さらなる部分の第２のＶＨおよび第２のＶＬドメインを対合から妨げ、そのように、免疫細胞結合領域（４）をマスクする。このようにして、マスキング部分の可変ドメインが、さらなる部分の第２のＶＨおよびＶＬドメインと対を形成する「ダミー」ＶＨおよびＶＬドメインとして作用し、第３および第４のリンカーは、ドメイン交換を妨げることによってこの立体配置を安定化する。しかし、分子が望ましくない細胞（２）の近くにある場合には、第３および第４のリンカー中に存在する１以上の切断部位（５）の切断によって、それぞれ、第２のマスキング部分のＶＬドメイン（６）および第１のマスキング部分のＶＨドメイン（６）との対合から、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインを放出し、その結果、さらなる部分の第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインが対を形成して、免疫細胞結合領域（４）を形成し得る。言い換えれば、第３および第４のリンカー中に存在する切断部位（５）の切断が、分子のコンホメーションの再配列を可能にし、これでは、第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインが正確に対を形成しており、その結果、免疫細胞結合能が回復される。免疫細胞結合領域（４）は、アンマスクされた。
したがって、一実施形態では、本発明の分子は、
対が形成されると、免疫細胞と特異的に結合できる、第１のＶＨおよび第１のＶＬドメインを別個に含むさらなる部分（３）と、
第１のＶＨドメインを、第１のマスキング部分の第２のＶＬドメイン（６）と連結するリンカーと、
第１のＶＬドメインを、第２のマスキング部分の第２のＶＨドメイン（６）と連結するリンカーと
を含み、その結果、さらなる部分の第１のＶＨおよび第１のＶＬドメインが対を形成せず、さらなる部分が、免疫細胞と結合できず、
望ましくない細胞（２）の近くにある場合に、前記リンカー中の１以上の切断部位（５）の選択的切断によって、第１のＶＨおよび第１のＶＬドメインの対合が可能になり、その結果、さらなる部分が免疫細胞と結合できる。免疫細胞結合領域（４）は、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原と特異的に結合するものなどのＴ細胞結合領域であることが好ましい。マスキング部分が、免疫細胞結合領域をマスクすることを考えると、この実施形態では、マスキング部分の第２のＶＨドメインおよび第２のＶＬドメインがそれぞれ、さらなる部分の第１のＶＬドメインおよび第１のＶＨドメインと対合でき、免疫細胞上に発現される抗原（例えば、ＣＤ３抗原などのＴ細胞上に発現される抗原）に特異的な機能的エピトープ結合部位を形成するものではないということは当然理解されよう。いずれの事象においても、さらなる部分のＶＨおよびＶＬドメインの対合を妨げる任意の適したマスキング部分は、図４に示されるＶＨおよびＶＬマスキング部分と置換され得るということはさらに理解されよう。好ましくは、図４に例示されるように、ターゲッティング部分は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、一緒に対を形成して、望ましくない細胞上に発現される抗原に特異的な機能的エピトープ結合部位を形成し得る。この場合には、ターゲッティング部分は、さらなる部分および１以上のマスキング部分と連結され得、その結果、分子が単一ポリペプチド鎖として発現され得るということは理解される。ターゲッティング部分は、さらなる部分および／または１以上のマスキング部分によって隣接されたポリペプチド鎖の中央にあり得る。例えば、ターゲッティング部分は、ｓｃＦｖユニットであり得、その１つのドメインがさらなる部分の第１のＶＬドメインと連結され、そのその他のドメインが第１のマスキング部分の第２のＶＬドメインと連結されるか、またはターゲッティング部分は、ｓｃＦｖユニットであり得、その１つのドメインがさらなる部分の第１のＶＨドメインと連結され、そのその他のドメインが第２のマスキング部分の第２のＶＨドメインと連結される。あるいは、ターゲッティング部分は、ポリペプチド鎖のいずれかの末端であり得る。
好ましくは、図４に例示されるように、第１のＶＨドメインを、第１のマスキング部分の第２のＶＬドメインと連結するリンカーは、第１のＶＨドメインが第２のＶＬドメインと対を形成されるのを可能にするよう十分な長さのものであり、第１のＶＬドメインを、第２のマスキング部分の第２のＶＨドメインと連結するリンカーは、第１のＶＬドメインが、第２のＶＨドメインと対を形成されるのを可能にするよう十分な長さのものである。通常、リンカーは、ペプチドであり、そして、ＶＨおよびＶＬドメイン間の対合を可能にするよう十分な数のアミノ酸を有さなくてはならない。一般に、１５個のアミノ酸またはそれ以上である、ｓｃＦｖ抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを連結するペプチドリンカーは、ＶＨおよびＶＬドメイン間の対合を可能にするのに十分な長さのものである。したがって、前記リンカーがペプチドである場合には、それらは、通常、１５個のアミノ酸またはそれ以上の長さ、例えば、少なくとも１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０個のアミノ酸の長さである。ＶＨおよびＶＬドメイン間の対合は、上記のものを含めた、当技術分野で公知の日常的な方法によって評価され得る。
免疫細胞結合領域の選択的アンマスキング
「選択的アンマスキング」によって、本発明者らは、免疫細胞結合領域が、望ましくない細胞の近くに選択的にある薬剤の存在によってアンマスクされるという意味を含み、この薬剤は、免疫細胞結合領域をアンマスクするよう作用する。免疫細胞結合領域をアンマスクする薬剤は、望ましくない細胞の近くの外側の薬剤の濃度よりも少なくとも５または１０倍高く、望ましくない細胞の近くにあることが好ましく、少なくとも１００または５００または１０００倍高くがより好ましく、免疫細胞結合領域結合領域をアンマスクする薬剤が、望ましくない細胞の近くにのみ見られることが最も好ましい。
好ましい実施形態では、免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合の、分子中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされる。この場合には、薬剤は、１以上の切断部位を切断するものである。言い換えれば、免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くで選択的に切断される分子内の１以上の切断部位によってアンマスクされ得る。
したがって、本発明は、（ｉ）望ましくない細胞を直接的または間接的にターゲッティングできるターゲッティング部分と、（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を有して、さらなる部分の免疫細胞との結合を妨げるさらなる部分とを含む分子を含み、これでは、望ましくない細胞の近くにある場合の分子中の１以上の切断部位の選択的切断が、免疫細胞結合領域をアンマスクして、さらなる部分の免疫細胞との結合を可能にする。免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合するものを含めたＴ細胞結合領域であることが好ましい。したがって、本発明は、（ｉ）望ましくない細胞を直接的または間接的にターゲッティングできるターゲッティング部分と、（ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を有して、さらなる部分のＴ細胞との結合を妨げるさらなる部分とを含む分子を提供し、これでは、望ましくない細胞の近くにある場合の分子中の１以上の切断部位の選択的切断が、Ｔ細胞結合領域をアンマスクして、さらなる部分のＴ細胞との結合を可能にするということは理解される。
「望ましくない細胞の近くで選択的に切断可能である切断部位」によって、本発明者らは、望ましくない細胞の近くに選択的にある薬剤によってのみ切断されて、免疫細胞結合領域をアンマスクし得る部位という意味を含む。１以上の切断部位を切断する薬剤は、望ましくない細胞の近くの外側の薬剤の濃度よりも少なくとも５倍または１０倍高い濃度で望ましくない細胞の近くにあることが好ましく、少なくとも１００または５００または１０００倍高い濃度がより好ましく、１以上の切断部位を切断する薬剤が、望ましくない細胞の近くでのみ見られることが最も好ましい。例えば、望ましくない細胞が特定の腫瘍細胞（例えば、乳房腫瘍細胞）である場合には、１以上の切断部位は、特定の腫瘍（例えば、乳房腫瘍）中に選択的にあるが、腫瘍（例えば、乳房腫瘍）の外側にはない薬剤によって切断されるものであり得る。
「細胞の近くに」によって、本発明者らは、細胞の表面に、もしくはその近くにのいずれか、または両方、細胞を直接取り巻く環境、例えば、血液、リンパおよびその他の体液中という意味を含む。
１以上の切断部位が、望ましくない細胞の近くで選択的に切断され、その結果、さらなる部分の免疫細胞結合領域が、望ましくない細胞の近くで優先的にアンマスクされて、免疫細胞を望ましい細胞ではなく望ましくない細胞に優先的に動員する。したがって、１以上の切断部位が、選択的に切断され、その結果、免疫細胞結合領域が、望ましい細胞の近くでアンマスクされる程度よりも少なくとも５倍または１０倍多く、望ましくない細胞の近くでアンマスクされるものであることが好ましく、少なくとも１００または５００または１０００倍多くがより好ましい。免疫細胞結合領域が、望ましい細胞の近くでアンマスクされず、したがって、免疫細胞が望ましい細胞に動員されないことが最も好ましい。
所与の望ましくない細胞について、当業者ならば、当技術分野で確立された方法を使用して、望ましくない細胞の近くで選択的に切断可能である適当な１以上の切断部位を同定できるであろう。例えば、どのプロテアーゼがどのペプチドを切断するかを、ペプチドライブラリーを調べることおよび切断後のフラグメンテーションプロフィールのＭＳ分析を研究することによって評価してもよい。また、プロテアーゼ切断モチーフおよびペプチド切断データの公開された文献を、以下にさらに記載されるように検索してもよい。遺伝子発現およびプロテオミクスデータを分析して、特定の望ましくない細胞によってどのプロテアーゼが発現されるかを同定してもよい。
望ましくない細胞の近くの選択的に切断可能である１以上の切断部位によって、免疫細胞結合領域が、望ましくない細胞の近くで選択的にアンマスクされる。
１以上の切断部位が、さらなる部分の別個の部分（例えば、別個の免疫グロブリンドメイン）の間に位置し得、その結果、切断部位の切断の際に、さらなる部分の別の部分が再配列されて、免疫細胞結合領域をアンマスクするコンホメーション変化が誘導される（図１を参照のこと）。１以上の切断部位が、１以上のマスキング部分と、さらなる部分および／またはターゲッティング部分のいずれかの間に位置し得る。したがって、１以上の切断部位が、１以上のマスキング部分とさらなる部分の間に位置し得る（図２および３を参照のこと）か、またはそれらは、１以上のマスキング部分とターゲッティング部分の間に位置し得る（図４を参照のこと）か、またはそれらは、１以上のマスキング部分ならびにターゲッティング部分およびさらなる部分の各々の間に位置し得る（図４を参照のこと）。さらなる部分、ターゲッティング部分およびマスキング部分のいずれかが、１以上の免疫グロブリンドメインを含む場合には、１以上の切断部位は、免疫細胞結合領域のアンマスキングの際に、ドメインの部分のみの移動ではなく、全免疫グロブリンドメインの移動を可能にするよう、免疫グロブリンドメインの間に位置しなくてはならないということが理解される。
切断部位は、膜に結合している場合も、結合していない場合もある、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、リパーゼ、リアーゼ、ホスファターゼまたはカルボヒドラーゼのいずれかなどの酵素によって切断可能であるものであり得る。したがって、当然のことではあるが、切断部位は、膜と結合しているか、または望ましくない細胞によって分泌される酵素によって切断可能であるものであり得る。
一般に、切断部位は、プロテアーゼ切断部位である。したがって、望ましくない細胞が腫瘍細胞である場合には、１以上の切断部位は、腫瘍細胞の近くにあるプロテアーゼによって選択的に切断可能であり得る。言い換えれば、プロテアーゼ切断部位は、腫瘍関連プロテアーゼによって切断可能であるものであり得る。腫瘍発達の間に、腫瘍が、それらが局所組織に侵入し、最終的に、転移することを可能にするプロテアーゼを異常に発現するということは周知である。
プロテアーゼは、システインプロテアーゼ（カテプシンファミリーＢ、Ｌ、Ｓなどを含む）、アスパルチルプロテアーゼ（カテプシンＤおよびＥを含む）およびセリンプロテアーゼ（カテプシンＡおよびＧ、トロンビン、プラスミン、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子を含む）を含み得る。プロテアーゼは、膜結合型（ＭＭＰ１４−１７およびＭＭＰ２４−２５）および分泌型（ＭＭＰ１−１３およびＭＭＰ１８−２３およびＭＭＰ２６−２８）の両方を含むメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ１−２８）であり得る。プロテアーゼは、プロテアーゼのＡディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭ）ならびにＡディスインテグリンまたはトロンボスポンジンモチーフを有するメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ）ファミリーに属するものであり得る。その他の例として、ＣＤ１０（ＣＡＬＬＡ）および前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）が挙げられる。プロテアーゼは、膜結合である場合も、膜結合ではない場合もあるということは理解される。
プロテアーゼ切断部位は、科学文献において周知であり、このような切断部位を含むリンカー配列は、確立された遺伝子工学技術を使用して、または当技術分野で公知の合成的合成技術によって容易に構築され得る。
プロテアーゼ切断部位は、種々の腫瘍の種類における選択されたプロテアーゼの発現を示す、以下の表４に列挙されるプロテアーゼのいずれかによって切断可能なものであり得る。プロテアーゼの候補基質が提供される。したがって、特定の腫瘍の種類を治療するために、当業者ならば、通常、表からわかるような、その腫瘍の種類において高度に発現されることが知られているプロテアーゼによって選択的に切断される１以上のプロテアーゼ切断部位を選択する。例えば、乳癌を治療するためには、ｕＰＡ、ｔＰＡ、マトリプターゼ、マトリプターゼ２、カテプシンＫ、カテプシンＯ、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１７、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７、ＡＤＡＭ２８またはＡＤＡＭＴＳ１５などのいずれかによって切断可能なプロテアーゼ切断部位を使用することが好ましい。当然のことではあるが、当業者によって選択される１以上のプロテアーゼ切断部位は、本発明の分子の特異性をさらに改善するのに役立ち得る異なるプロテアーゼによって切断されるものを含む。
同様に、表５には、ＡＤＡＭプロテアーゼ過剰発現が報告されている腫瘍部位が列挙されており、そのように、一実施形態では、１以上の切断部位が、表５に列挙されるＡＤＡＭプロテアーゼの１種によって選択的に切断可能である。したがって、分子は、対応する腫瘍の種類を予防または治療するために使用され得る。
１以上の切断部位が、以下のヒトプロテアーゼのいずれかによって選択的に切断可能であり得る（括弧内に提供されるＭＥＲＯＰＳペプチダーゼデータベース番号；Ｒａｗｌｉｎｇｓ Ｎ．Ｄ．， Ｍｏｒｔｏｎ Ｆ．Ｒ．， Ｋｏｋ， Ｃ．Ｙ．， Ｋｏｎｇ， Ｊ． ＆ Ｂａｒｒｅｔｔ Ａ．Ｊ． （２００８） ＭＥＲＯＰ： ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｄａｔａｂａｓｅ． Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ３６ Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ， Ｄ３２０−３２５）：ペプシンＡ（ＭＥＲ０００８８５）、ガストリクシン(qastricsin)（ＭＥＲ０００８９４）、メマプシン−２（ＭＥＲ００５８７０）、レニン（ＭＥＲ０００９１７）、カテプシンＤ（ＭＥＲ０００９１１）、カテプシンＥ（ＭＥＲ０００９４４）、メマプシン−１（ＭＥＲ００５５３４）、ナプシン(napsin)Ａ（ＭＥＲ００４９８１）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０３４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３８）、ペプシンＡ４（ＭＥＲ０３７２９０）、ペプシンＡ５（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０３７２９１）、ｈＣＧ１７３３５７２（ヒト(Homo sapiens)）型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１０７３８６）、ナプシン（ｎａｐｓｉｎ）Ｂ偽遺伝子（ＭＥＲ００４９８２）、ＣＹＭＰ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００２９２９）、サブファミリーＡ１Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１８１５５９）、マウス乳癌ウイルスレトロペプシン（ＭＥＲ０４８０３０）、ウサギ内因性レトロウイルスエンドペプチダーゼ（ＭＥＲ０４３６５０）、Ｓ７１関連ヒト内因性レトロペプシン（ＭＥＲ００１８１２）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１１７）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１３３）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１６０）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２０６）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２５３）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２６０）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２９１）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４１８）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４４０）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４７９）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５５９）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５８３）、ＲＴＶＬ−Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４４６）、ヒト内因性レトロウイルスレトロペプシン相同体１（ＭＥＲ０１５４７９）、ヒト内因性レトロウイルスレトロペプシン相同体２（ＭＥＲ０１５４８１）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１（ヒト(Homo sapiens)染色体１４（ＭＥＲ０２９９７７）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２（ヒト(Homo sapiens)染色体８）（ＭＥＲ０２９６６５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ヒト(Homo sapiens)染色体１７）（ＭＥＲ００２６６０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ヒト(Homo sapiens)染色体１７）（ＭＥＲ０３０２８６）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ヒト(Homo sapiens)染色体１７）（ＭＥＲ０４７１４４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子５（ヒト(Homo sapiens)染色体１２）（ＭＥＲ０２９６６４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子６（ヒト(Homo sapiens)染色体７）（ＭＥＲ００２０９４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子７（ヒト(Homo sapiens)染色体６）（ＭＥＲ０２９７７６）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子８（ヒト(Homo sapiens)染色体Ｙ）（ＭＥＲ０３０２９１）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子９（ヒト(Homo sapiens)染色体１９）（ＭＥＲ０２９６８０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１０（ヒト(Homo sapiens)染色体１２）（ＭＥＲ００２８４８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１１（ヒト(Homo sapiens)染色体１７）（ＭＥＲ００４３７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１２（ヒト(Homo sapiens)染色体１１）（ＭＥＲ００３３４４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１３（ヒト(Homo sapiens)染色体２および同様のもの）（ＭＥＲ０２９７７９）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１４（ヒト(Homo sapiens)染色体２）（ＭＥＲ０２９７７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ヒト(Homo sapiens)染色体４）（ＭＥＲ０４７１５８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ヒト(Homo sapiens)染色体４）（ＭＥＲ０４７３３２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ヒト(Homo sapiens)染色体４）（ＭＥＲ００３１８２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１６５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７２００）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７３１５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７４０５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０３０２９２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１７（ヒト(Homo sapiens)染色体８）（ＭＥＲ００５３０５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１８（ヒト(Homo sapiens)染色体４）（ＭＥＲ０３０２８８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１９（ヒト(Homo sapiens)染色体１６）（ＭＥＲ００１７４０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７２２２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７４５４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７４７７）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００４４０３）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２２（ヒト(Homo sapiens)染色体Ｘ）（ＭＥＲ０３０２８７）、
サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０４６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０９２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７０９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１３５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１４１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１５６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１６１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１８６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１９８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７１９９）、
サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２２５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２３２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチ
ダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２３６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２３８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２４３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２６５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２６７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２７２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２８２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７２９８）、
サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７３９６）、
サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４２８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４３１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４４５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４５０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４５８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４７８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７４９９）、
サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７５８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４７６６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４８００４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４８０１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４８０１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４８０２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０４８０３７）、サブファミリーＡ２Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１６４）、サブファミリーＡ２Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２３１）、サブファミリーＡ２Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７３８６）、
皮膚アスパラギン酸プロテアーゼ（ＭＥＲ０５７０９７）、プレセニリン１（ＭＥＲ００５２２１）、プレセニリン２（ＭＥＲ００５２２３）、イムパス(impas)１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０１）、イムパス(impas)１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１８４７２２）、イムパス(impas)４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１５）、イムパス(impas)２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０８）、イムパス(impas)５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１２）、イムパス(impas)３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１１）、可能性あるファミリーＡ２２偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)染色体１８）（ＭＥＲ０２９９７４）、可能性あるファミリーＡ２２偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)染色体１１）（ＭＥＲ０２３１５９）、カテプシンＶ（ＭＥＲ００４４３７）、カテプシンＸ（ＭＥＲ００４５０８）、カテプシンＦ（ＭＥＲ００４９８０）、カテプシンＬ（ＭＥＲ０００６２２）、カテプシンＳ（ＭＥＲ０００６３３）、カテプシンＯ（ＭＥＲ００１６９０）、カテプシンＫ（ＭＥＲ０００６４４）、カテプシンＷ（ＭＥＲ００３７５６）、カテプシンＨ（ＭＥＲ０００６２９）、カテプシンＢ（ＭＥＲ０００６８６）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００１９３７）、ブレオマイシン加水分解酵素（動物）（ＭＥＲ００２４８１）、尿細管間質性腎炎抗原（ＭＥＲ０１６１３７）、尿細管間質性腎炎抗原関連タンパク質（ＭＥＲ０２１７９９）、カテプシンＬ様偽遺伝子１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００２７８９）、カテプ
シンＢ様偽遺伝子（染色体４、ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２９４６９）、カテプシンＢ様偽遺伝子（染色体１、ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２９４５７）、ＣＴＳＬＬ２ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００５２１０）、ＣＴＳＬＬ３ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００５２０９）、カルパイン−１（ＭＥＲ０００７７０）、カルパイン−２（ＭＥＲ０００９６４）、カルパイン−３（ＭＥＲ００１４４６）、カルパイン−９（ＭＥＲ００４０４２）、カルパイン−８（ＭＥＲ０２１４７４）、カルパイン−１５（ＭＥＲ００４７４５）、カルパイン−５（ＭＥＲ００２９３９）、カルパイン−１１（ＭＥＲ００５８４４）、カルパイン−１２（ＭＥＲ０２９８８９）、カルパイン−１０（ＭＥＲ０１３５１０）、カルパイン−１３（ＭＥＲ０２０１３９）、カルパイン−１４（ＭＥＲ０２９７４４）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２５３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３７）、カルパモジュリン(calpamodulin)（ＭＥＲ０００７１８）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ４０２５１（ＭＥＲ００３２０１）、ユビキチニル(ubiquitinyl)加水分解酵素−Ｌ１（ＭＥＲ０００８３２）、ユビキチニル（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｙｌ）加水分解酵素−Ｌ３（ＭＥＲ０００８３６）、ユビキチニル（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｙｌ）加水分解酵素−ＢＡＰ１（ＭＥＲ００３９８９）、ユビキチニル（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｙｌ）加水分解酵素−ＵＣＨ３７（ＭＥＲ００５５３９）、
ユビキチン特異的ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００２０６６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ６（ＭＥＲ０００８６３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４（ＭＥＲ００１７９５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ８（ＭＥＲ００１８８４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１３（ＭＥＲ００２６２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２（ＭＥＲ００４８３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ００２６９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ００２６６７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ７（ＭＥＲ００２８９６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｘ（ＭＥＲ００５８７７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１０（ＭＥＲ００４４３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４９７８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００５４５４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１６（ＭＥＲ００５４９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００５４２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１７（ＭＥＲ００２９００）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１９（ＭＥＲ００５４２８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２０（ＭＥＲ００５４９４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３（ＭＥＲ００５５１３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｙ（ＭＥＲ００４３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１８（ＭＥＲ００５６４１）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２１（ＭＥＲ００６２５８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２２（ＭＥＲ０１２３０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３３（ＭＥＲ０１４３３５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２９（ＭＥＲ０１２０９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２５（ＭＥＲ０１１１１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３６（ＭＥＲ０１４０３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３２（ＭＥＲ０１４２９０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２６（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０１４２９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２４（ＭＥＲ００５７０６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４２（ＭＥＲ０１１８５２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４６（ＭＥＲ０１４６２９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３７（ＭＥＲ０１４６３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２８（ＭＥＲ０１４６３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４７（ＭＥＲ０１４６３６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３８（ＭＥＲ０１４６３７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４４（ＭＥＲ０１４６３８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５０（ＭＥＲ０３０３１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３５（ＭＥＲ０１４６４６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３０（ＭＥＲ０１４６４９）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０９１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７４３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４５（ＭＥＲ０３０３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５１（ＭＥＲ０１４７６９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３４（ＭＥＲ０１４７８０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４８（ＭＥＲ０６４６２０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４０（ＭＥＲ０１５４８３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４１（ＭＥＲ０４５２６８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３１（ＭＥＲ０１５４９３）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１２９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６４８５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４９（ＭＥＲ０１６４８６）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１８７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５２５７９）、ＵＳＰ１７様ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５４（ＭＥＲ０２８７１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５３（ＭＥＲ０２７３２９）、ユビキチン特異的エンドペプチダーゼ３９［誤解を招く恐れのある］（ＭＥＲ０６４６２１）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０９０非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０１４７３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４３［誤解を招く恐れのある］（ＭＥＲ０３０１４０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５２［誤解を招く恐れのある］（ＭＥＲ０３０３１７）、
ＮＥＫ２偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７３６）、Ｃ１９偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)：染色体５）（ＭＥＲ０２９９７２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０８８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７５０）、オートファジン(autohagin)−２（ＭＥＲ０１３５６４）、オートファジン(autohagin)−１（ＭＥＲ０１３５６１）、オートファジン(autohagin)−３（ＭＥＲ０１４３１６）、オートファジン(autohagin)−４（ＭＥＲ０６４６２２）、セザンヌ(Cezanne)脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４２）、セザンヌ（Ｃｅｚａｎｎｅ）２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４４）、腫瘍壊死因子α誘導性タンパク質３（ＭＥＲ０２９０５０）、トラビド（ｔｒａｂｉｄ）ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０５２）、ＶＣＩＰ１３５脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ１５２３０４）、オツバイン(otubain)−１（ＭＥＲ０２９０５６）、オツバイン(otubain)−２（ＭＥＲ０２９０６１）、ＣｙｌＤタンパク質（ＭＥＲ０３０１０４）、ＵｆＳＰ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４２７２４）、ＵｆＳＰ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０３０６）、ＤＵＢＡ脱ユビキチン化酵素（ＭＥＲ０８６０９８）、ＫＩＡＡ０４５９（ヒト(Homo sapiens)）様タンパク質（ＭＥＲ１２２４６７）、Ｏｔｕｄ１タンパク質（ＭＥＲ１２５４５７）、グリコシルトランスフェラーゼ２８ドメイン含有１、アイソフォームＣＲＡ＿ｃ（ヒト(Homo sapiens)）様（ＭＥＲ１２３６０６）、ｈｉｎ１Ｌ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ１３９８１６）、アタキシン−３（ＭＥＲ０９９９９８）、ＡＴＸＮ３Ｌ推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１５２６１）、ジョセフィン(Josephin)ドメイン含有１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ１２５３３４）、ジョセフィン(Josephin)ドメイン含有２（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ１２４０６８）、ＹＯＤ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１６５５９）、レグマイン(lequmain)（植物α型）（ＭＥＲ０４４５９１）、レグマイン(lequmain)（ＭＥＲ００１８００）、グリコシルホスファチジルイノシトール：タンパク質トランスアミダーゼ（ＭＥＲ００２４７９）、レグマイン(lequmain)偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２９７４１）、ファミリーＣ１３割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１７５８１３）、
カスパーゼ−１（ＭＥＲ０００８５０）、カスパーゼ−３（ＭＥＲ０００８５３）、カスパーゼ−７（ＭＥＲ００２７０５）、カスパーゼ−６（ＭＥＲ００２７０８）、カスパーゼ−２（ＭＥＲ００１６４４）、カスパーゼ−４（ＭＥＲ００１９３８）、カスパーゼ−５（ＭＥＲ００２２４０）、カスパーゼ−８（ＭＥＲ００２８４９）、カスパーゼ−９（ＭＥＲ００２７０７）、カスパーゼ−１０（ＭＥＲ００２５７９）、カスパーゼ−１４（ＭＥＲ０１２０８３）、パラカスパーゼ（ＭＥＲ０１９３２５）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１４３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１３０４）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１８６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２０５１６）、推定カスパーゼ（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２１４６３）、ＦＬＩＰタンパク質（ＭＥＲ００３０２６）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１４２タンパク質（ＭＥＲ０２１３１６）、カスパーゼ−１２偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０１９６９８）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０９３カスパーゼ偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７６６）、サブファミリーＣ１４Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８５３２９）、サブファミリーＣ１４Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７９９５６）、セパラーゼ（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０１１７７５）、セパラーゼ様偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７９７）、ＳＥＮＰ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１０１２）、ＳＥＮＰ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１０１９）、ＳＥＮＰ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１１０９）、ＳＥＮＰ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２１８３）、ＳＥＮＰ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３２）、ＳＥＮＰ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０９５）、ＳＥＮＰ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６１６１）、ＳＥＮＰ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５５７）、ピログルタミル−ペプチダーゼＩ（脊索動物）（ＭＥＲ０１１０３２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０７３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９７８）、ソニックヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３９）、インディアンヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３８）、デザートヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ０１２１７０）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００４２５２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１６４タンパク質（ＭＥＲ０２０４１０）、ＬＯＣ１３８９７１ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２００７４）、Ａｔｐ２３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０６４２）、プレニルペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４２４６）、アミノペプチダーゼＮ（ＭＥＲ０００９９７）、アミノペプチダーゼＡ（ＭＥＲ００１０１２）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＭＥＲ００１０１３）、ピログルタミル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０１２２２１）、サイトゾルアラニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２７４６）、シスチニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６０）、アミノペプチダーゼＢ（ＭＥＲ００１４９４）、アミノペプチダーゼＰＩＬＳ（ＭＥＲ００５３３１）、アルギニルアミノペプチダーゼ様１（ＭＥＲ０１２２７１）、白血球由来アルギニンアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２９６８）、アミノペプチダーゼＱ（ＭＥＲ０５２５９５）、アミノペプチダーゼＯ（ＭＥＲ０１９７３０）、Ｔａｔａ結合タンパク質関連因子（ＭＥＲ０２６４９３）、アンジオテンシン変換酵素ペプチダーゼユニット１（ＭＥＲ００４９６７）、アンジオテンシン変換酵素ペプチダーゼユニット２（ＭＥＲ００１０１９）、アンジオテンシン変換酵素−２（ＭＥＲ０１１０６１）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１５３タンパク質（ＭＥＲ０２０５１４）、サイメット（ｔｈｉｍｅｔ）オリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ００１７３７）、ニューロリジン（ＭＥＲ０１０９９１）、ミトコンドリア中間体ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６６５）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１５４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１７）、リーシュマノリジン(leishmanolysin)−２（ＭＥＲ０１４４９２）、リーシュマノリジン(leishmanolysin)−３（ＭＥＲ１８００３１）、
マトリックスメタロペプチダーゼ−１（ＭＥＲ００１０６３）、マトリックスメタロペプチダーゼ−８（ＭＥＲ００１０８４）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２（ＭＥＲ００１０８０）、マトリックスメタロペプチダーゼ−９（ＭＥＲ００１０８５）、マトリックスメタロペプチダーゼ−３（ＭＥＲ００１０６８）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１０（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ００１０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１１（ＭＥＲ００１０７５）、マトリックスメタロペプチダーゼ−７（ＭＥＲ００１０９２）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１２（ＭＥＲ０００８９）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１３（ＭＥＲ００１４１１）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−１（ＭＥＲ００１０７７）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−２（ＭＥＲ００２３８３）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−３（ＭＥＲ００２３８４）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−４（ＭＥＲ００２５９５）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２０（ＭＥＲ００３０２１）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１９（ＭＥＲ００２０７６）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２３Ｂ（ＭＥＲ００４７６６）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−５（ＭＥＲ００５６３８）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−６（ＭＥＲ０１２０７１）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２１（ＭＥＲ００６１０１）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２２（ＭＥＲ０１４０９８）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２６（ＭＥＲ０１２０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２８（ＭＥＲ０１３５８７）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２３Ａ（ＭＥＲ０３７２１７）、マクロファージエラスターゼ相同体（染色体８、ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０３００３５）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１５６タンパク質（ＭＥＲ０２１３０９）、マトリックスメタロペプチダーゼ様１（ＭＥＲ０４５２８０）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７５９１２）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８７９９７）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８７９９８）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８００００）、メプリンαサブユニット（ＭＥＲ００１１１１）、メプリンβサブユニット（ＭＥＲ００５２１３）、プロコラーゲンＣ−ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１１３）、哺乳類トロイド様１タンパク質（ＭＥＲ００５１２４）、哺乳類型トロイド様２タンパク質（ＭＥＲ００５８６６）、
ＡＤＡＭＴＳ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２０９２）、ＡＤＡＭＴＳ１４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６７００）、ＡＤＡＭＴＳ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７０２９）、ＡＤＡＭＴＳ１６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６８９）、ＡＤＡＭＴＳ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３０２）、ＡＤＡＭＴＳ１８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６０９０）、ＡＤＡＭＴＳ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６６３）、ＡＤＡＭ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３９０２）、ＡＤＡＭ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１４０）、ＡＤＡＭ１０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００２３８２）、ＡＤＡＭ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０７）、ＡＤＡＭ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２２４１）、ＡＤＡＭ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００２３８６）、ＡＤＡＭ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３０９４）、ＡＤＡＭ２０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４７２５）、ＡＤＡＭＤＥＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００７４３）、ＡＤＡＭＴＳ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１００）、ＡＤＡＭＴＳ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０１）、ＡＤＡＭＴＳ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４６）、ＡＤＡＭ２８ペプチダーゼ（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ００５４９５）、ＡＤＡＭＴＳ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４８）、ＡＤＡＭＴＳ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４５）、ＡＤＡＭＴＳ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９３）、ＡＤＡＭＴＳ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９４）、ＡＤＡＭ３０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２６８）、ＡＤＡＭ２１ペプチダーゼ（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ００４７２６）、ＡＤＡＭＴＳ１０ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３１）、ＡＤＡＭＴＳ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３７）、ＡＤＡＭＴＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４５０）、ＡＤＡＭ３３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４３）、オバスタシン(ovastacin)（ＭＥＲ０２９９９６）、ＡＤＡＭＴＳ２０ペプチダーゼ（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０２６９０６）、プロコラーゲン１Ｎ−ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４９８５）、ＡＤＡＭ２タンパク質（ＭＥＲ００３０９０）、ＡＤＡＭ６タンパク質（ＭＥＲ０４７０４４）、ＡＤＡＭ７タンパク質（ＭＥＲ００５１０９）、ＡＤＡＭ１８タンパク質（ＭＥＲ０１２２３０）、ＡＤＡＭ３２タンパク質（ＭＥＲ０２６９３８）、非ペプチダーゼ相同体（ヒト(Homo sapiens)染色体４）（ＭＥＲ０２９９７３）、ファミリーＭ１２非ペプチダーゼ相同体（ヒト(Homo sapiens)染色体１６）（ＭＥＲ０４７６５４）、ファミリーＭ１２非ペプチダーゼ相同体（ヒト(Homo sapiens)染色体１５）（ＭＥＲ０４７２５０）、ＡＤＡＭ３Ｂタンパク質（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ００５１９９）、ＡＤＡＭ１１タンパク質（ＭＥＲ００１１４６）、ＡＤＡＭ２２タンパク質（ＭＥＲ００５１０２）、ＡＤＡＭ２３タンパク質（ＭＥＲ００５１０３）、ＡＤＡＭ２９タンパク質（ＭＥＲ００６２６７）、ＡＤＡＭ２１ペプチダーゼプレプロタンパク質（ヒト(Homo sapiens)）と同様のタンパク質（ＭＥＲ０２６９４４）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２２５ペプチダーゼ相同体（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７４７４）、推定ＡＤＡＭ偽遺伝子（染色体４、ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２９９７５）、ＡＤＡＭ３Ａ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００５２００）、ＡＤＡＭ１ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００３９１２）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８８２１０）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８８２１１）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８８２１２）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８８２２０）、ネプリライシン（ＭＥＲ００１０５０）、エンドセリン変換酵素１（ＭＥＲ００１０５７）、エンドセリン変換酵素２（ＭＥＲ００４７７６）、ＤＩＮＥペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１９７）、ネプリライシン−２（ＭＥＲ０１３４０６）、Ｋｅｌｌ血液型タンパク質（ＭＥＲ００１０５４）、ＰＨＥＸペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６２）、ｉ−ＡＡＡペプチダーゼ（ＭＥＲ００１２４６）、ｉ−ＡＡＡペプチダーゼ（ＭＥＲ００５７５５）、パラプレジン（ｐａｒａｐｌｅｑｉｎ）（ＭＥＲ００４４５４）、Ａｆｑ３様タンパク質２（ＭＥＲ００５４９６）、Ａｆｇ３様タンパク質１Ａ（ＭＥＲ０１４３０６）、パッパリシン(pappalysin)−１（ＭＥＲ００２２１７）、パッパリシン(pappalysin)−２（ＭＥＲ０１４５２１）、ファルネシル化タンパク質変換酵素１（ＭＥＲ００２６４６）、メタロプロテアーゼ関連タンパク質−１（ＭＥＲ０３０８７３）、アミノペプチダーゼＡＭＺ２（ＭＥＲ０１１９０７）、アミノペプチダーゼＡＭＺ１（ＭＥＲ０５８２４２）、カルボキシペプチダーゼＡ１（ＭＥＲ００１１９０）、カルボキシペプチダーゼＡ２（ＭＥＲ００１６０８）、カルボキシペプチダーゼＢ（ＭＥＲ００１１９４）、カルボキシペプチダーゼＮ（ＭＥＲ００１１９８）、カルボキシペプチダーゼＥ（ＭＥＲ００１１９９）、カルボキシペプチダーゼＭ（ＭＥＲ００１２０５）、カルボキシペプチダーゼＵ（ＭＥＲ００１１９３）、カルボキシペプチダーゼＡ３（ＭＥＲ００１１８７）、メタロカルボキシペプチダーゼＤペプチダーゼユニット１（ＭＥＲ００３７８１）、メタロカルボキシペプチダーゼＺ（ＭＥＲ００３４２８）、メタロカルボキシペプチダーゼＤペプチダーゼユニット２（ＭＥＲ００４９６３）、カルボキシペプチダーゼＡ４（ＭＥＲ０１３４２１）、カルボキシペプチダーゼＡ６（ＭＥＲ０１３４５６）、カルボキシペプチダーゼＡ５（ＭＥＲ０１７１２１）、メタロカルボキシペプチダーゼＯ（ＭＥＲ０１６０４４）、
細胞質カルボキシペプチダーゼ様タンパク質５（ＭＥＲ０３３１７４）、細胞質カルボキシペプチダーゼ３（ＭＥＲ０３３１７６）、細胞質カルボキシペプチダーゼ６（ＭＥＲ０３３１７８）、細胞質カルボキシペプチダーゼ１（ＭＥＲ０３３１７９）、細胞質カルボキシペプチダーゼ２（ＭＥＲ０３７７１３）、メタロカルボキシペプチダーゼＤ非ペプチダーゼユニット（ＭＥＲ００４９６４）、脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質１（ＭＥＲ００３８８９）、カルボキシペプチダーゼ様タンパク質Ｘ１（ＭＥＲ０１３４０４）、カルボキシペプチダーゼ様タンパク質Ｘ２（ＭＥＲ０７８７６４）、細胞質カルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６９５２）、ファミリーＭ１４非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９５３０）、インスリジン（ＭＥＲ００１２１４）、ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼβサブユニット（ＭＥＲ００４４９７）、ナーディライシン（ＭＥＲ００３８８３）、ユーピトリリジン(eupitrilysin)（ＭＥＲ００４８７７）、ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼ非ペプチダーゼαサブユニット（ＭＥＲ００１４１３）、ユビキノール−チトクロームＣレダクターゼコアタンパク質Ｉ（ＭＥＲ００３５４３）、ユビキノール−チトクロームＣレダクターゼコアタンパク質ＩＩ（ＭＥＲ００３５４４）、ユビキノール−チトクロームＣレダクターゼコアタンパク質ドメイン２（ＭＥＲ０４３９９８）、インスリジンユニット２（ＭＥＲ０４６８２１）、ナーディライシンユニット２（ＭＥＲ０４６８７４）、インスリジンユニット３（ＭＥＲ０７８７５３）、ミトコンドリアプロセシングペプチダーゼサブユニットαユニット２（ＭＥＲ１２４４８９）、ナーディライシンユニット３（ＭＥＲ１４２８５６）、ＬＯＣ１３３０８３ ｇ．ｐ．（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２１８７６）、サブファミリーＭ１６Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１８８７５７）、ロイシルアミノペプチダーゼ（動物）（ＭＥＲ００３１００）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０４０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３９１９）、ロイシルアミノペプチダーゼ−１（線虫型）（ＭＥＲ０１３４１６）、メチオニルアミノペプチダーゼ１（ＭＥＲ００１３４２）、メチオニルアミノペプチダーゼ２（ＭＥＲ００１７２８）、アミノペプチダーゼＰ２（ＭＥＲ００４４９８）、Ｘａａ−Ｐｒｏジペプチダーゼ（真核生物）（ＭＥＲ００１２４８）、アミノペプチダーゼＰ１（ＭＥＲ００４３２１）、ミトコンドリア中間体切断ペプチダーゼ５５ｋＤａ（ＭＥＲ０１３４６３）、ミトコンドリアメチオニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０５５）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０２０ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０１０９７２）、増殖関連タンパク質１（ＭＥＲ００５４９７）、クロマチン特異的転写伸長因子１４０ｋＤａサブユニット（ＭＥＲ０２６４９５）、増殖関連タンパク質１様（ヒト(Homo sapiens)染色体Ｘ）（ＭＥＲ０２９９８３）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２２６ペプチダーゼ相同体（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０５６２６２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２２７ペプチダーゼ相同体（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７２９９）、サブファミリーＭ２４Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７９８９３）、アスパルチルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３７３）、Ｇｌｙ−Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０３３１８２）、カルノシンジペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０１４５５１）、カルノシンジペプチダーゼＩ（ＭＥＲ０５１４２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１６１タンパク質（ＭＥＲ０２１８７３）、アミノアシラーゼ（ＭＥＲ００１２７１）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００２１０４）、ＮＡＡＬＡＤＡＳＥ Ｌペプチダーゼ（ＭＥＲ００５２３９）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００５２３８）、血漿グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ００５２４４）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１０３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５０９１）、Ｆｘｎａペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９６５）、トランスフェリン受容体タンパク質（ＭＥＲ００２１０５）、トランスフェリン受容体２タンパク質（ＭＥＲ００５１５２）、グルタミニルシクライズ(glutaminyl cyclise)（ＭＥＲ０１５０９５）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ヒト(Homo sapiens)）型非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０２６９７１）、ニカリン(nicalin)（ＭＥＲ０４４６２７）、膜ジペプチダーゼ（ＭＥＲ００１２６０）、膜結合型ジペプチダーゼ−２（ＭＥＲ０１３４９９）、膜結合型ジペプチダーゼ−３（ＭＥＲ０１３４９６）、ジヒドロ−オロターゼ（ＭＥＲ００５７６７）、ジヒドロピリミジナーゼ(dihydropyrimidinase)（ＭＥＲ０３３２６６）、ジヒドロピリミジナーゼ(dihydropyrimidinase)関連タンパク質−１（ＭＥＲ０３０１４３）、ジヒドロピリミジナーゼ(dihydropyrimidinase)関連タンパク質−２（ＭＥＲ０３０１５５）、ジヒドロピリミジナーゼ(dihydropyrimidinase)関連タンパク質−３（ＭＥＲ０３０１５１）、ジヒドロピリミジナーゼ(dihydropyrimidinase)関連タンパク質−４（ＭＥＲ０３０１４９）、ジヒドロピリミジナーゼ(dihydropyrimidinase)関連タンパク質−５（ＭＥＲ０３０１３６）、５７３０４５７Ｆ１１ＲＩＫ様の仮説上のタンパク質（ＭＥＲ０３３１８４）、１３０００１９ｊ０８ｒｉｋタンパク質（ＭＥＲ０３３１８６））、グアニンアミノヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３７７１４）、Ｋａｅ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１５７７）、ＯＳＧＥＰＬ１様タンパク質（ＭＥＲ０１３４９８）、Ｓ２Ｐペプチダーゼ（ＭＥＲ００４４５８）、
サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９８４５）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９８４６）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９８４７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１３７３２０）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ２０１５５７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９４１７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９４１８）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９４１９）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９４２０）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７５９３２）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９９６６５）、Ｐｏｈ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２０３８２）、Ｊａｂ１／ＭＰＮドメイン金属酵素（ＭＥＲ０２２０５７）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１６５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１８６５）、Ｂｒｃｃ３６イソペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１８９０）、ヒストンＨ２Ａ脱ユビキチン化酵素ＭＹＳＭ１（ＭＥＲ０２１８８７）、ＡＭＳＨ脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１４６）、推定ペプチダーゼ（ヒト(Homo sapiens)染色体２）（ＭＥＲ０２９９７０）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１６８タンパク質（ＭＥＲ０２１８８６）、ＣＯＰ９シグナロソームサブユニット６（ＭＥＲ０３０１３７）、２６Ｓプロテアソーム非ＡＴＰアーゼ調節サブユニット７（ＭＥＲ０３０１３４）、真核細胞の翻訳開始因子３サブユニット５（ＭＥＲ０３０１３３）、ＩＦＰ３８ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０３０１３２）、サブファミリーＭ６７Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９１１８１）、サブファミリーＭ６７Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１１４４）、グランザイムＢ（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０００１６８）、テスチシン(testisin)（ＭＥＲ００５２１２）、トリプターゼβ（ＭＥＲ０００１３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００５５４４）、コリン（ｃｏｒｉｎ）（ＭＥＲ００５８８１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００６０３８）、ＤＥＳＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２９８）、トリプターゼγ１（ＭＥＲ０１１０３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ０１１０３８）、ヒアルロナン−結合ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６１２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン４（ＭＥＲ０１１１０４）、腸セリンペプチダーゼ（げっ歯類）（ＭＥＲ０１６１３０）、副腎分泌型セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００３７３４）、トリプターゼδ１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００５９４８）、マトリプターゼ−３（ＭＥＲ０２９９０２）、マラプシン(marapsin)（ＭＥＲ００６１１９）、トリプターゼ−６（ＭＥＲ００６１１８）、オボキマーゼ−１ドメイン１（ＭＥＲ０９９１８２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン３（ＭＥＲ００５９２６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００００６４）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０３１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０５４）、ＴＭＰＲＳＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４２２６）、マーネーム(Mername)−ＡＡ０３８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６２８４８）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２０４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９８０）、カチオン性トリプシン（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ００００２０）、エラスターゼ−２（ＭＥＲ０００１１８）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ−３（ＭＥＲ０３１９６８）、カテプシンＧ（ＭＥＲ００００８２）、ミエロブラスチン（ＭＥＲ０００１７０）、グランザイムＡ（ＭＥＲ００１３７９）、グランザイムＭ（ＭＥＲ００１５４１）、キマーゼ（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０００１２３）、トリプターゼα（ＭＥＲ０００１３５）、グランザイムＫ（ＭＥＲ００１９３６）、グランザイムＨ（ＭＥＲ０００１６６）、キモトリプシンＢ（ＭＥＲ０００００１）、エラスターゼ−１（ＭＥＲ００３７３３）、膵臓エンドペプチダーゼＥ（ＭＥＲ０００１４９）、膵エラスターゼＩＩ（ＭＥＲ０００１４６）、エンテロペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６８）、キモトリプシンＣ（ＭＥＲ０００７６１）、プロスタシン（ＭＥＲ００２４６０）、カリクレイン１（ＭＥＲ００００９３）、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ＭＥＲ００００９４）、カリクレイン関連ペプチダーゼ３（ＭＥＲ０００１１５）、
メソトリプシン(mesotrypsin)（ＭＥＲ００００２２）、補体成分Ｃ１ｒ様ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３５２）、補体因子Ｄ（ＭＥＲ０００１３０）、補体成分活性化型Ｃ１ｒ（ＭＥＲ０００２３８）、補体成分活性化型Ｃ１ｓ（ＭＥＲ０００２３９）、補体成分Ｃ２ａ（ＭＥＲ０００２３１）、補体因子Ｂ（ＭＥＲ０００２２９）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ１（ＭＥＲ０００２４４）、補体因子Ｉ（ＭＥＲ０００２２８）、膵臓のエンドペプチダーゼＥ型Ｂ（ＭＥＲ０００１５０）、膵エラスターゼＭＢ（ＭＥＲ０００１４７）、血液凝固因子Ｘｌｌａ（ＭＥＲ０００１８７）、血漿カリクレイン（ＭＥＲ０００２０３）血液凝固因子Ｘｉａ（ＭＥＲ０００２１０）、血液凝固因子ＩＸａ（ＭＥＲ０００２１６）、血液凝固因子ＶＩｌａ（ＭＥＲ０００２１５）、血液凝固因子Ｘａ（ＭＥＲ０００２１２）、トロンビン（ＭＥＲ０００１８８）、タンパク質Ｃ（活性化型）（ＭＥＲ０００２２２）、アクロシン（ＭＥＲ００００７８）、ヘプシン（ＭＥＲ０００１５６）、肝細胞増殖因子アクチベーター（ＭＥＲ０００１８６）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ２（ＭＥＲ００２７５８）、ｕ−プラスミノーゲンアクチベーター（ＭＥＲ０００１９５）、ｔ−プラスミノーゲンアクチベーター（ＭＥＲ０００１９２）、プラスミン（ＭＥＲ０００１７５）、カリクレイン関連ペプチダーゼ６（ＭＥＲ００２５８０）、ニューロトリプシン（ＭＥＲ００４１７１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ８（ＭＥＲ００５４００）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１０（ＭＥＲ００３６４５）、エピセリアシン(epitheliasin)（ＭＥＲ００３７３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ４（ＭＥＲ００５２６６）、プロセミン(prosemin)（ＭＥＲ００４２１４）、キモパシン(chymopasin)（ＭＥＲ００１５０３）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ００４８６１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ２１６１４２）、トリプシン２型Ａ（ＭＥＲ００００２１）、ＨｔｒＡ１ペプチダーゼ（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ００２５７７）、ＨｔｒＡ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ２０８４１３）、ＨｔｒＡ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４０９３）、ＨｔｒＡ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７９５）、ＨｔｒＡ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３５１）、Ｔｙｓｎｄ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５０４６１）、ＴＭＰＲＳＳ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７０８５）、ＨＡＴ様推定ペプチダーゼ２（ＭＥＲ０２１８８４）、トリプシンＣ（ＭＥＲ０２１８９８）、カリクレイン関連ペプチダーゼ７（ＭＥＲ００２００１）、マトリプターゼ（ＭＥＲ００３７３５）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１３（ＭＥＲ００５２６９）、カリクレイン関連ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００５２７０）、マトリプターゼ−２（ＭＥＲ００５２７８）、アンベリカル(umbelical)静脈ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５４２１）、ＬＣＬＰペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９００）、スピンシン(spinesin)（ＭＥＲ０１４３８５）、マラプシン(marapsin)−２（ＭＥＲ０２１９２９）、補体因子Ｄ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５６１６４）、オボキマーゼ−２（ＭＥＲ０２２４１０）、ＨＡＴ様４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４４５８９）、オボキマーゼ１ドメイン１（ＭＥＲ０２２４１２）、表皮特異的ＳＰ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９００）、精巣セリンペプチダーゼ５（ＭＥＲ０２９９０１）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２５８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００２８５）、ポリセラーゼ(polyserase)−ＩＡユニット１（ＭＥＲ０３０８７９）、ポリセラーゼ−ＩＡユニット２（ＭＥＲ０３０８８０）、精巣セリンペプチダーゼ２（ヒト型）（ＭＥＲ０３３１８７）、仮説上のアクロシン様ペプチダーゼ（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０３３２５３）、ＨＡＴ様５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２８２１５）、ポリセラーゼ(polyserase)−３ユニット１（ＭＥＲ０６１７６３）、ポリセラーゼ(polyserase)−３ユニット２（ＭＥＲ０６１７４８）、トリプトファン／セリンプロテアーゼと同様のペプチダーゼ（ＭＥＲ０５６２６３）、ポリセラーゼ(polyserase)−２ユニット１（ＭＥＲ０６１７７７）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１２３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１９３０）、ＨＡＴ様２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０９９１８４）、ｈＣＧ２０４１４５２様タンパク質（ＭＥＲ０９９１７２）、ｈＣＧ２２０６７（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０９９１６９）、脳レスキュー因子１（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０９８８７３）、ｈＣＧ２０４１１０８（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０９９１７３）、ポリセラーゼ(polyserase)−２ユニット２（ＭＥＲ０６１７６０）、ポリセラーゼ(polyserase)−２ユニット３（ＭＥＲ０６５６９４）、
マーネーム（Ｍｅｒｍａｍｅ−ＡＡ２０１（ペプチダーゼ相同体）ＭＥＲ０９９１７５、分泌型トリプシン様セリンペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０３００００）、ポリセラーゼ(polyserase)−１Ａユニット３（ＭＥＲ０２９８８０）、アズロシジン（ＭＥＲ０００１１９）、ハプトグロビン−１（ＭＥＲ０００２３３）、ハプトグロビン関連タンパク質（ＭＥＲ０００２３５）、マクロファージ刺激性タンパク質（ＭＥＲ００１５４６）、肝細胞増殖因子（ＭＥＲ０００１８５）、タンパク質Ｚ（ＭＥＲ０００２２７）、ＴＥＳＰ１タンパク質（ＭＥＲ０４７２１４）、ＬＯＣ１３６２４２タンパク質（ＭＥＲ０１６１３２）、血漿カリクレイン様タンパク質４（ＭＥＲ０１６３４６）、ＰＲＳＳ３５タンパク質（ＭＥＲ０１６３５０）、ＤＫＦＺｐ５８６Ｈ２１２３様タンパク質（ＭＥＲ０６６４７４）、アポリポタンパク質（ＭＥＲ０００１８３）、ｐｓｉ−ＫＬＫ１偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０３３２８７）、トリプターゼ偽遺伝子Ｉ（ＭＥＲ０１５０７７）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩ（ＭＥＲ０１５０７８）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩＩ（ＭＥＲ０１５０７９）、サブファミリーＳ１Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６９８２）、サブファミリーＳ１Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６１４８）、アミドホスホリポシルトランスフェラーゼ前駆体（ＭＥＲ００３３１４）、グルタミン−フルクトース−６−リン酸トランスアミナーゼ１（ＭＥＲ００３３２２）、グルタミン−フルクトース−６−リン酸アミドトランスフェラーゼ（ＭＥＲ０１２１５８）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１４４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１９）、アスパラギンシンセターゼ（ＭＥＲ０３３２５４）、ファミリーＣ４４非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１５９２８６）、ファミリーＣ４４割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２５）、ファミリーＣ４４割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２６）、セセルニン(secernin)１（ＭＥＲ０４５３７６）、セセルニン(secernin)２（ＭＥＲ０６４５７３）、セセルニン(secernin)３（ＭＥＲ０６４５８２）、酸性セラミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１００７９４）、Ｎ−アシルエタノールアミン酸性アミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１４１６６７）、
プロテアソーム触媒サブユニット１（ＭＥＲ０００５５６）、プロテアソーム触媒サブユニット２（ＭＥＲ００２６２５）、プロテアソーム触媒サブユニット３（ＭＥＲ００２１４９）、プロテアソーム触媒サブユニット１ｉ（ＭＥＲ０００５５２）、プロテアソーム触媒サブユニット２ｉ（ＭＥＲ００１５１５）、プロテアソーム触媒サブユニット３ｉ（ＭＥＲ０００５５５）、プロテアソーム触媒サブユニット５ｔ（ＭＥＲ０２６２０３）、タンパク質セリンキナーゼｃ１７（ＭＥＲ０２６４９７）、プロテアソームサブユニットα６（ＭＥＲ０００５５７）、プロテアソームサブユニットα２（ＭＥＲ０００５５０）、プロテアソームサブユニットα４（ＭＥＲ０００５５４）、プロテアソームサブユニットα７（ＭＥＲ０３３２５０）、プロテアソームサブユニットα５（ＭＥＲ０００５５８）、プロテアソームサブユニットα１（ＭＥＲ０００５４９）、プロテアソームサブユニットα３（ＭＥＲ０００５５３）、プロテアソームサブユニットＸＡＰＣ７（ＭＥＲ００４３７２）、プロテアソームサブユニットβ３（ＭＥＲ００１７１０）、プロテアソームサブユニットβ２（ＭＥＲ００２６７６）、プロテアソームサブユニットβ１（ＭＥＲ０００５５１）、プロテアソームサブユニットβ４（ＭＥＲ００１７１１）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２３０ペプチダーゼ相同体（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７３２９）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２３１偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７１７２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２３２偽遺伝子（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４７３１６）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（トレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）、タスパーゼ（タスパーゼ）−１（ＭＥＲ０１６９６９）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳類型）（ＭＥＲ００１９７７）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ１（哺乳類型）（ＭＥＲ００１６２９）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ２（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００１９７６）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ヒト(Homo sapiens)）と同様のもの（ＭＥＲ０２６２０４）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ヒト(Homo sapiens)）と同様のもの（ＭＥＲ０２６２０５）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ相同体（染色体２、ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０３７２４１）、ポリシスチン−１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）、多発性嚢胞腎疾患１様３（ＭＥＲ１７２５５４）、γ−グルタミル加水分解酵素（ＭＥＲ００２９６３）、グアニン５’’−モノホスフェートシンセターゼ（ＭＥＲ０４３３８７）、カルバモイルリン酸合成酵素（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０７８６４０）、ジヒドロ−オロターゼ（Ｎ末端ユニット）（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０６０６４７）、ＤＪ−１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１０１非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０１４８０３）、ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０４２８２７）、ＦＬＪ３４２８３タンパク質（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４４５５３）、非ペプチダーゼ相同体染色体２１オープンリーディングフレーム３３（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ１６００９４）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７６６１３）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７６９１８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＭＥＲ０３７２３０）、ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様３（ＭＥＲ０３７２８８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様１（ＭＥＲ０３７２７８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様４（ＭＥＲ０３７２９４）、カドヘリンＥＧＦＬＡＧ７回貫通型Ｇ型受容体２前駆体（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（マウス(Mus musculus)）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）、ＧＰＲ５６（ヒト(Homo sapiens)）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）、
ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）、ラトロフィリン−１（ＭＥＲ１２６３８０）、ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）、プロトカドヘリンＦｌａｍｉｎｇｏ２（ＭＥＲ１２４２３９）、ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）、Ｇタンパク質共役型受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）、７回膜貫通型ヘリックス受容体（ＭＥＲ１２５４４８）、Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）、ＧＰＲ１２６血管誘導性Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１４００１５）、ＧＰＲ１２５（ヒト(Homo sapiens)）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）、ＧＰＲ１１６（ヒト(Homo sapiens)）型Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２８０）、ＧＰＲ１２８（ヒト(Homo sapiens)）型Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１６２０１５）、ＧＰＲ１３３（ヒト(Homo sapiens)）型タンパク質（ＭＥＲ１５９３３４）、ＧＰＲ１１０Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３）、ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、割り当てられていない相同体（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生阻害剤２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤオートプロセシングタンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤオートプロセシングタンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己切断型ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、ジストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質転換酵素９（ＭＥＲ０２２４１６）、部位−１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フューリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質転換酵素１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質転換酵素２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質転換酵素４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４プロタンパク質転換酵素（ＭＥＲ０００３８３）、プロタンパク質転換酵素５（ＭＥＲ００２５７８）、プロタンパク質転換酵素７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ２０１３３９）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９１６１３）、サブファミリーＳ８Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、サブファミリーＳ８Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、サブファミリーＳ８Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、トリペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシル−ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質αサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬ Ａタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジル−ペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジル−ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９４推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９５推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９６推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９７推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮説上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮説上のエステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、タンパク質ｂａｔ５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼ相同体ＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼ相同体ＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、マウス(Mus musculus)染色体２０オープンリーディングフレーム１３５と同様のタンパク質（ＭＥＲ０３７８４５）、キヌレニン型アミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、サイログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁酸塩依存性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ関連タンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリジン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリジン４、Ｘ結合型（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリジン４、Ｙ結合型（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリジン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリジン２（ＭＥＲ０３３２８３）、
ファミリーＳ９非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ２１１４９０）、サブファミリーＳ９Ｃ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ−Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシド加水分解酵素様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１６１４）、Ｌｏｃ３２８５７４様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、アブヒドロラーゼ(abhydrolase)ドメイン含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、細胞質エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０２９９９７）、細胞質エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ２１３８６６）、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２２４０８と同様のもの（ＭＥＲ０３１６０８）、ＣＧＩ−５８推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、ウィリアムズ−ビューレン症候群重大領域(critical region)タンパク質２１エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０３１６１２）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ２２４０８（エポキシド加水分解酵素）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮説上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビルヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３３２５９）、Ｃｃｇ１相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（トレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）、タスパーゼ−１（ＭＥＲ０１６９６９）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳類型）（ＭＥＲ００１９７７）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ１（哺乳類型）（ＭＥＲ００１６２９）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ２（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ００１９７６）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体と同様のもの（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２６２０４）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体と同様のもの（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０２６２０５）、マーネーム(Mername)−ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ相同体（染色体２、ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０３７２４１）、ポリシスチン−１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）、多発性嚢胞腎疾患１様３（ＭＥＲ１７２５５４）、γ−グルタミル加水分解酵素（ＭＥＲ００２９６３）、グアニン５’’−モノホスフェートシンセターゼ（ＭＥＲ０４３３８７）、
カルバモイルリン酸合成酵素（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０７８６４０）、ジヒドロ−オロターゼ（Ｎ末端ユニット）（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０６０６４７）、ＤＪ−１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１０１非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ０１４８０３）、ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（ヒト(Homo sapiens)型）（ＭＥＲ０４２８２７）、ＦＬＪ３４２８３タンパク質（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４４５５３）、非ペプチダーゼ相同体染色体２１オープンリーディングフレーム３３（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ１６００９４）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７６６１３）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１７６９１８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＭＥＲ０３７２３０）、ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様３（ＭＥＲ０３７２８８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様１（ＭＥＲ０３７２７８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様４（ＭＥＲ０３７２９４）、カドヘリンＥＧＦＬＡＧ７回貫通型Ｇ型受容体２前駆体（ヒト(Homo sapiens)）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（マウス(Mus musculus)）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）、ＧＰＲ５６（ヒト(Homo sapiens)）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）、ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）、ラトロフィリン−１（ＭＥＲ１２６３８０）、ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）、プロトカドヘリンＦｌａｍｉｎｇｏ２（ＭＥＲ１２４２３９）、ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）Ｇタンパク質共役型受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）、７回膜貫通型ヘリックス受容体（ＭＥＲ１２５４４８）、Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）、ＧＰＲ１２６血管誘導性Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１４００１５）、ＧＰＲ１２５（ヒト(Homo sapiens)）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）、ＧＰＲ１１６（ヒト(Homo sapiens)）型Ｇ−タンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２８０）、ＧＰＲ１２８（ヒト(Homo sapiens)）型Ｇ−タンパク質共役受容体（ＭＥＲ１６２０１５）、ＧＰＲ１３３（ヒト(Homo sapiens)）型タンパク質（ＭＥＲ１５９３３４）、ＧＰＲ１１０Ｇ−タンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３） ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、割り当てられていない相同体（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生阻害剤２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤオートプロセシングタンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤオートプロセシングタンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己切断型ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、ジストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質転換酵素９（ＭＥＲ０２２４１６）、部位１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フューリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質転換酵素１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質転換酵素２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質転換酵素４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４プロタンパク質転換酵素（ＭＥＲ０００３８３）、プロタンパク質転換酵素５（ＭＥＲ００２５７８）、プロタンパク質転換酵素７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ２０１３３９）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ１９１６１３）、サブファミリーＳ８Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、サブファミリーＳ８Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、サブファミリーＳ８Ａ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、
トリペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシル−ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質αサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬ Ａタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジル−ペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジル−ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９４推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９５推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９６推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、マーネーム(Mername)−ＡＡ１９７推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮説上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮説上のエステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、タンパク質ｂａｔ５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼ相同体ＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼ相同体ＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、マウス(Mus musculus)染色体２０オープンリーディングフレーム１３５と同様のタンパク質（ＭＥＲ０３７８４５）、キヌレニン型アミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、サイログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁酸塩依存性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ関連タンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリジン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリジン４、Ｘ結合型（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリジン４、Ｙ結合型（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリジン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリジン２（ＭＥＲ０３３２８３）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼ相同体（ＭＥＲ２１１４９０）、サブファミリーＳ９Ｃ割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５割り当てられていないペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ−Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシド加水分解酵素様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１６１４）、Ｌｏｃ３２８５７４様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、アブヒドロラーゼ(abhydrolase)ドメイン含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、細胞質エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０２９９９７）、細胞質エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ２１３８６６）、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２２４０８と同様のもの（ＭＥＲ０３１６０８）、ＣＧＩ−５８推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、ウィリアムズ−ビューレン症候群重大領域タンパク質２１エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０３１６１２）、仮説上のタンパク質ｆｌｊ２２４０８（エポキシド加水分解酵素）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮説上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビルヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３３２５９）、Ｃｃｑ１相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）。
当然のことではあるが、所与の望ましくない細胞種について、当業者ならば、例えば、科学文献を調べて、その細胞種によってどのプロテアーゼが過剰発現されるかを決定することによって、使用するための適当な１以上のプロテアーゼ切断部位を容易に決定できる。Ｏｎｃｏｍｉｎｅ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｏｎｃｏｍｉｎｅ．ｏｒｇ）は、オンライン癌遺伝子発現データベースであり、そのように、本発明の分子が、癌を治療するためのものである場合には、当業者は、Ｏｎｃｏｍｉｎｅデータベースを検索して、所与の癌の種類を治療するのに適当であろう特定の１以上のプロテアーゼ切断部位を同定し得る。代替データベースとして、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ）、特に、（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ）が挙げられる。プロテアーゼデータベースとして、ＰＭＡＰ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ．ｏｒｇ）、ＥｘＰＡＳｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｕｔｔｅｒ （ｈｔｔｐ：／／ｃａ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｕｔｔｅｒ）およびＰＭＡＰ．Ｃｕｔ ＤＢ（ｈｔｔｐ：／／ｃｕｔｄｂ．ｂｕｒｎｈａｍ．ｏｒｇ）が挙げられる。
複数の可能性ある切断部位を組み込むペプチドのライブラリーをスクリーニングすることおよび所与の望ましくない細胞（例えば、腫瘍）の最適切断部位を評価することが望ましい場合があるということは留意されたい。このようなペプチドは、例えば、さらなる部分を、１以上のマスキング部分と連結するための、さらなる部分の特定のコンホメーションを促進して、さらなる部分のＴ細胞結合領域をマスクするためのリンカーとして有用であり得る（図１に例示される実施形態を参照のこと）。
Figure 0006273215
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癌では、いくつかのタンパク質分解性ＡＤＡＭ（ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼ）が検出されており、ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルは、正常組織に対して上方制御されるとわかっている（Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ ８、９３２〜９４１頁（２００８年１２月）｜ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ２４５９から適応された）。
一実施形態では、プロテアーゼは、エステラーゼであり得る。
その他の切断部位として、望ましくない細胞の近くの特定の条件（例えば、腫瘍微小環境）下で不安定である結合が挙げられる。例えば、１以上の切断部位は、低酸素腫瘍微小環境において還元され得るジスルフィド結合を含み得、または酸性条件において切断するｐＨ感受性部分を含み得る。しかし、望ましくない細胞の近くで１以上の切断部位が選択的に切断可能でなくてはならず、そのため、このような連結は、より不安定でなくてはならず、望ましい細胞の近くと比較して、望ましくない細胞の近くでのみ不安定であることが好ましいということは理解されよう。
あるいは、１以上の切断部位は、望ましくない細胞の近くで選択的に切断可能である（例えば、ヌクレアーゼによって）核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を含み得る。その他の切断部位として、適当な酵素によって切断可能であり得るリン酸、脂質またはジスルフィド含有部分が挙げられる。
本発明の分子の合成
ターゲッティング部分は、１以上のリンカーによってさらなる部分と連結されることが好都合である。したがって、「リンカー」によって、本発明者らは、ターゲッティング部分をさらなる部分と接続する化学部分という意味を含む。リンカーは、ペプチドリンカーであることが好ましい。当然のことではあるが、このようなリンカーは、望ましくない細胞の近くで選択的に切断されて、さらなる部分の免疫細胞結合領域をアンマスクする１以上の切断部位を含有し得る。
上記のように、さらなる部分が２以上の別個の部分を有することが可能である。例えば、さらなる部分は、抗体（例えば、ｓｃＦｖ抗体）の免疫グロブリンドメインを含めた２以上のポリペプチドドメインを含み得る。このような部分は、１以上のリンカーによって一緒に連結され得る。したがって、「リンカー」によって、本発明らはまた、さらなる部分の別個の部分を互いに接続する任意の化学部分という意味を含む。リンカーは、ペプチドリンカーであることが好ましい。例えば、図１に例示される分子のさらなる部分は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、リンカーによって連結される。これらのリンカーは、望ましくない細胞の近くで選択的に切断されて、さらなる部分のＴ細胞結合領域をアンマスクする１以上の切断部位を含有し得る。
また、分子が、１以上のマスキング部分を含む場合には、これらは、１以上のリンカーによってターゲッティング部分および／またはさらなる部分に接続されることが好都合である。したがって、「リンカー」によって、本発明者らはまた、ターゲッティング部分をマスキング部分と接続する化学部分およびさらなる部分をマスキング部分と接続する化学部分という意味を含む。リンカーは、ペプチドリンカーであることが好ましい。例えば、図２および３は、さらなる部分とマスキング部分の間のリンカーを表し、図４は、さらなる部分とマスキング部分の間およびターゲッティング部分とマスキング部分の間のリンカーの例を表す。このようなリンカーはまた、望ましくない細胞の近くで選択的に切断されて、さらなる部分のＴ細胞結合領域をアンマスクする１以上の切断部位を含有し得る。
適したリンカーの例として、ペプチド、ポリマー、ヌクレオチド、核酸、多糖および脂質有機種（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられる。しかし、本明細書に記載されるリンカーは、ペプチドリンカーであることが最も好ましい。一般に、ペプチドリンカーは、２から１００個のアミノ酸残基、例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０および９０個超または未満などのアミノ酸を有する。特定のリンカーの好ましい長さのさらなる詳細は、以下に示される。
ターゲッティング部分は、共有結合によって、または非共有結合によってのいずれかで、さらなる部分と結合され得るということは理解されよう。同様に、ターゲッティング部分および／またはさらなる部分は、共有結合によって、または非共有結合によってのいずれかで、１以上のマスキング部分と結合され得るということは理解されよう。
通常、ターゲッティング部分は、共有結合によってさらなる部分と結合され、分子が、１以上のマスキング部分を含む場合には、１以上のマスキング部分は、共有結合によってさらなる部分および／またはターゲッティング部分と結合される。
一実施形態では、ターゲッティング部分およびさらなる部分は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）によって共有結合によって接続される。分子が１以上のマスキング部分を含む場合には、１以上のマスキング部分は、１以上のリンカー（例えば、ペプチドリンカー）によって、共有結合によってさらなる部分および／またはターゲッティング部分と接続され得る。
ターゲッティング部分、さらなる部分（その別個の部分を含む）および１以上のマスキング部分は、互いに直接的に連結される必要はなく、１以上のスペーサー部分（例えば、ペプチド）を介して接続されてもよいということは理解されよう。例えば、ターゲッティング部分は、化学部分（例えば、ペプチド）と連結され得、順に、これは、さらなる部分と連結される。同様に、さらなる部分は、１以上の化学部分（例えば、ペプチド）と連結され得、順に、これは、１以上のそれぞれのマスキング部分と連結される。一実施形態では、上記で論じたように、このようなスペーサー部分は、望ましくない細胞の近くで選択的に切断可能である切断部位を含み得る。当然のことではあるが、スペーサー部分は、立体障害を防ぎ、プロテアーゼ切断を促進するよう役立ち得る。
上記を考慮して、本発明は、（ｉ）望ましくない細胞に直接的または間接的にターゲッティングできるターゲッティング部分と、（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を有し、さらなる部分の免疫細胞との結合を妨げるさらなる部分と、（ｉｉｉ）１以上のマスキング部分が、さらなる部分の免疫細胞結合領域をマスクするよう作用する、さらなる部分および／またはターゲッティング部分に接続された１以上のマスキング部分と、（ｉｖ）１以上の切断部位が、望ましくない細胞の近くで選択的に切断されて、免疫細胞結合領域をアンマスクし得る、１以上のマスキング部分と、さらなる部分および／またはターゲッティング部分の間の１以上の切断可能な部位とを含む分子を提供するということは理解される。
好ましい実施形態では、ターゲッティング部分、さらなる部分、存在する場合には、１以上のマスキング部分が共有結合によって接続され、すべての部分がペプチドまたはポリペプチドである場合には、分子の成分部分は、それぞれの１以上の核酸分子によってコードされ得る１以上の融合ポリペプチドの一部であり得るということは理解される。本発明は、このような核酸分子およびそれらを含有する宿主免疫細胞を含む。例えば、ターゲッティング部分（例えば、抗体）は、当技術分野で十分に確立された遺伝子工学技術を使用して、さらなる部分および存在する場合には、１以上のマスキング部分を含有するよう遺伝的に操作され得る。したがって、当然のことではあるが、さらなる部分の免疫細胞結合領域が、分子が望ましくない細胞の近くある場合にアンマスクされ得、その結果、さらなる部分が免疫細胞と結合し得るという条件で、さらなる部分（その別個の部分を含む）および存在する場合には、１以上のマスキング部分は、ターゲッティング部分のポリペプチド配列内に組み込まれ得る。当然のことではあるが、ターゲッティング部分、さらなる部分および存在する場合には、１以上のマスキング部分の各々は、ポリヌクレオチドの連続セクションによってコードされる必要はない。例えば、さらなる部分は、ターゲッティング部分の末端に融合され、存在する場合には、１以上のマスキング部分は、さらなる部分の末端に融合され得るが、分子の種々の部分が、非連続ポリヌクレオチド配列によってコードされ得、これらの非連続ポリヌクレオチド配列の間に、分子のその他の部分をコードするポリヌクレオチド配列が存在し得るということも考慮される。例えば、図４から、さらなる部分の別個の部分が、ポリヌクレオチド配列の非連続セクションによってコードされ、これらのセクションの間に、ターゲッティング部分をコードするポリヌクレオチド配列があるということは明確である。
本発明の分子は、２以上のポリペプチド鎖が混合される場合には、正しいコンホメーションに折りたたまれる２以上のポリペプチド鎖を含み得るということはさらに理解される。２以上のポリペプチドの各々は、ターゲッティング部分、さらなる部分（その別個の部分を含む）および存在する場合には、１以上のマスキング部分のうち１以上を含み得る。これは、図２に表わされる分子によって例示され、ターゲッティング部分、さらなる部分および存在する場合には、１以上のマスキング部分のいずれかが、１以上の免疫グロブリンドメインを含む場合には、１つのポリペプチド鎖上のドメイン（例えば、ＶＨドメイン）が、別のポリペプチド鎖上のドメイン（例えば、ＶＬドメイン）と対を形成し得るので特に関連性がある。異なるポリペプチド鎖に由来する免疫グロブリンドメインの対合は、当技術分野で周知であり、ダイアボディーおよびトリアボディーの調製の基礎を形成する。
特定の実施形態では、ターゲッティング部分、さらなる部分および存在する場合には、１以上のマスキング部分が共有結合によって接続しており、すべての部分がペプチドまたはポリペプチドである場合には、本発明の分子は、二重特異性抗体（例えば、ＢｉＴＥ二重特異性抗体）であると考えられ得るということになる。例えば、二重特異性抗体は、（ｉ）望ましくない細胞と特異的に結合できる第１の部分と、（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を含み、第２の部分の免疫細胞との結合を妨げる第２の部分とを含み得、これでは、二重特異性抗体が、望ましくない細胞の近くにある場合には、マスクされた免疫細胞結合領域が選択的にアンマスクされ得、免疫細胞との結合が可能となる。この場合には、二重特異性抗体の第１の部分は、上記のターゲッティング部分に相当し得、二重特異性抗体の第２の部分は、上記のさらなる部分に相当し得る。抗体は、一本鎖抗体構築物であることが好ましいが、しかし、上記で論じられるように、抗体は、２以上のポリペプチド鎖を含み得るということは理解される。
二重特異性抗体の免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞結合領域であることが好ましい。したがって、二重特異性抗体は、（ｉ）望ましくない細胞と特異的に結合できる第１の部分と、（ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を含み、第２の部分のＴ細胞との結合を妨げる第２の部分とを含み得、これでは、マスクされたＴ細胞結合領域は、二重特異性抗体が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的にアンマスクされ得、Ｔ細胞との結合が可能となる。通常、Ｔ細胞結合領域は、Ｔ細胞上に存在するＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合し得るものである。
また、免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合に、分子中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされるということも好ましい。したがって、二重特異性抗体は、（ｉ）望ましくない細胞と特異的に結合できる第１の部分と、（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を含んで、第２の部分の免疫細胞との結合を妨げる第２の部分とを含み得、これでは、マスクされた免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合に、分子中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされて、免疫細胞との結合が可能となる。
したがって、本発明は、（ｉ）望ましくない細胞と特異的に結合できる第１の部分と、（ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を含んで、第２の部分のＴ細胞との結合を妨げる第２の部分とを含む二重特異性抗体を提供し、これでは、マスクされたＴ細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合に、分子中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされて、Ｔ細胞との結合が可能となる。通常、Ｔ細胞結合領域は、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合できるものである。
ターゲッティング部分、さらなる部分および存在する場合には、１以上のマスキング部分が、すべての部分がそのそれぞれの活性を保持するように連結され、その結果、分子が、望ましくない細胞にターゲッティングされ得、免疫細胞結合領域が、望ましくない細胞の近くにある場合にアンマスクされて、免疫細胞と結合し得ることが適している。
ターゲッティング部分およびさらなる部分は、通常、リンカーペプチドによって連結される。ターゲッティング部分とさらなる部分を連結するリンカーは、２から１００個のアミノ酸残基、例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０および９０個超または未満のアミノ酸を含有することが好ましい。ターゲッティング部分とさらなる部分を連結するリンカーは、２から５０個の間のアミノ酸を含有することがより好ましく、４から２０個のアミノ酸がさらにより好ましい。したがって、リンカーペプチドは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９個のアミノ酸を含み得る。
１以上のマスキング部分は、通常、それぞれ、１以上のリンカーペプチドによってさらなる部分（その別個の部分を含む）と連結される。このようなリンカーペプチドの長さは、どのように１以上のマスキング部分がＴ細胞結合領域をマスクするよう作動するかに応じて異なり得る。例えば、１以上のマスキング部分が、さらなる部分の可変ドメインと対を形成するよう意図される免疫グロブリンドメインである場合には（例えば、図４）、マスキング部分の１以上の免疫グロブリンドメインを、さらなる部分のそれぞれの可変ドメインと連結するリンカーは、１以上のマスキング部分のそれぞれの免疫グロブリンドメインと、さらなる部分のそれぞれの可変ドメインの間の対合を可能にするのに十分な長さのものでなくてはならない。したがって、一般に、リンカーは、少なくとも１５個のアミノ酸の長さ、例えば、少なくとも１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０個のアミノ酸の長さである。１以上のマスキング部分が、さらなる部分の下部のＴ細胞結合領域への接近を簡単に遮断している場合には（例えば、図２および３）、当然のことではあるが、それぞれの１以上のマスキング部分をさらなる部分と連結する１以上のリンカーは、より短いものであっても、ゼロの長さであってもよい。通常のアミノ酸の長さとして、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個のアミノ酸が挙げられる。しかし、特に、マスキング部分が免疫細胞表面抗原である場合には（例えば、図３）、長いリンカーも使用され得る。したがって、リンカーは、少なくとも１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０個のアミノ酸の長さであり得る。１以上のマスキング部分が、さらなる部分の可変ドメインの対合を妨げるよう意図される免疫グロブリンドメインであるが、１以上のマスキング部分の免疫グロブリンドメインの、さらなる部分の可変ドメインとの対合を伴わない場合には、マスキング部分の１以上の免疫グロブリンドメインを、さらなる部分のそれぞれの可変ドメインと連結するリンカーは、１以上のマスキング部分のそれぞれの免疫グロブリンドメインと、さらなる部分のそれぞれの可変ドメイン間の対合を可能にするのに不十分な長さでなくてはならない。したがって、リンカーは、一般に、１４個のアミノ酸以下、例えば、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個のアミノ酸の長さである。
いくつかの実施形態では、１以上のマスキング部分は、ターゲッティング部分と連結され得る（例えば、図４）。通常、１以上のマスキング部分は、それぞれの１以上のリンカーペプチドによってターゲッティング部分に連結される。ターゲッティング部分とさらなる部分を連結するリンカーは、２から１００個のアミノ酸残基を含有することが好ましく、２から５０個がより好ましく、４から２０個のアミノ酸（例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９個のアミノ酸）がさらにより好ましい。
適したリンカーペプチドとは、通常、ランダムコイルコンホメーションをとるものであり、例えば、ポリペプチドは、アラニンまたはプロリンまたはアラニンおよびプロリン残基の混合物を含有し得る。
適したターゲッティング部分およびさらなる部分をコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で公知であるか、または既知配列から、例えば、望ましくない細胞もしくは免疫細胞上に発現されるか、またはＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）およびｄｂＥＳＴデータベースなどのヌクレオチド配列データベースに含有される表面マーカーと相互作用するとわかっているタンパク質の配列から容易に設計できる。適した１以上のマスキング部分をコードするポリヌクレオチドはまた、当技術分野で公知であるか、上記のデータベース中の既知配列から容易に設計され、作製され得る。
適したリンカーペプチドをコードするポリヌクレオチドは、リンカーペプチド配列から容易に設計され、作製され得る。
したがって、本発明において使用される分子をコードするポリヌクレオチドは、周知の遺伝子工学技術を使用して容易に構築され得る。
次いで、本発明の分子を製造するために、適した宿主において核酸が発現される。したがって、発現ベクターを構築するために、本発明の分子をコードする核酸が、本明細書に含有される教示を考慮して適宜修飾された周知の技術に従って使用され得、次いで、発現ベクターを使用して、本発明の分子の発現および製造のために、適当な宿主細胞が形質転換される。
本発明の分子をコードする核酸は、適当な宿主への導入のために、さまざまなその他の核酸配列に連結され得るということは理解される。コンパニオン核酸は、当技術分野で公知のように、宿主の性質、宿主への核酸の導入方法およびエピソーム維持または組込みが望まれるかどうかに応じて変わる。
代替実施形態では、ターゲッティング部分、さらなる部分（その別個の部分を含む）および１以上のマスキング部分は、非共有結合によって接続され得る。非共有結合については、免疫学的結合またはそれぞれ、ビオチン／アビジンまたはストレプトアビジンによってのような結合が好ましい。例えば、ターゲッティング部分は、二重特異性抗体であり得、その１つの特異性は、望ましくない細胞によって発現される実体に向けられ、その１つの特異性は、さらなる部分またはその一部に向けられる。また、さらなる部分を別の物質と結合することが可能であり、それに対して、順に、二重特異性抗体の特異性が向けられる。例えば、さらなる部分は、二重特異性抗体によって認識されるさらなるペプチド性配列を含有し得る。別の可能性は、さらなる部分がビオチンと結合されながら、ターゲッティング部分を、例えば、ストレプトアビジンと結合することを含む、逆もまた同様。非共有結合相互作用によって形成され得るその他の手段として、ロイシンジッパー配列または親和性結合が挙げられる。いずれにしても、分子内に、分子が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的に切断可能であり、その結果、免疫細胞結合領域がアンマスクされ得る１以上の切断部位があることが好ましい。
あまり好ましくないが、ターゲッティング部分、さらなる部分（その別個の部分を含む）および１以上のマスキング部分は、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎら、Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９７９年）１００、１００〜１０８頁に一般的に記載されるものなどの分子を架橋する従来法のいずれかによって共有結合によって互いに連結され得る。例えば、ターゲッティング部分またはさらなる部分（その別個の部分を含む）またはマスキング部分またはスペーサー部分のうち１種は、チオール基が豊富であり得、連結される予定の部分は、チオール基と反応できる二機能性薬剤、例えば、ヨード酢酸（ＮＨＩＡ）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルまたはＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、コンジュゲートされる種の間にジスルフィド橋を組み込むヘテロ二機能性架橋剤と反応され得る。例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを用いて達成されるアミドおよびチオエーテル結合は、一般に、ジスルフィド結合よりもｉｎ ｖｉｖｏでより安定である。
ビス−マレイミド試薬によって、連続または同時様式での、チオール基（例えば、抗体のシステイン残基のチオール基）の、別のチオール含有部分（例えば、免疫細胞抗原またはリンカー中間体のチオール基）との結合が可能となるということはわかっている。マレイミドに加えて、チオール基と反応性であるその他の官能基として、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネートおよびイソチオシアネートが挙げられる。
さらに有用な架橋剤として、穏やかな条件下でのスルフヒドリル基の脱保護を可能にする第一級アミンのチオール化試薬であるＳ−アセチルチオグリコール酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＳＡＴＡ）（Ｊｕｌｉａｎら（１９８３年） Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １３２、６８）、ジメチルスベルイミデートジヒドロクロリドおよびＮ，Ｎ’−ｏ−フェニレンジマレイミドが挙げられる。
特に好ましい架橋剤として、スルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル６−（３’−［２−ピリジルチオ］−プロピオンアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ）およびＮ−［β−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩（ＢＭＰＨ）が挙げられる。
多数のホモ二機能性およびヘテロ二機能性架橋化学物質が、分子の種々の部分を一緒に連結するのに適当であり、任意のこのような化学物質が使用され得るということは理解されよう。例えば、シュタウジンガー（Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ）連結化学を使用するクリックケミストリー（ホスフィン−アジド化学）が使用され得る。
本明細書に記載されるアミノ酸残基は、一般に、好ましいものである、天然の「Ｌ」異性体である。しかし、特定の状況では、本発明の薬剤がその機能をさらに保持する限り、すなわち、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態を予防または治療するために、「Ｄ」異性体の残基は、Ｌ−アミノ酸残基と置換され得る。この定義はまた、具体的に示されない限り、アミノ酸類似体（例えば、ペニシラミン、３−メルカプト−Ｄ−バリン）、天然に存在する非タンパク質新生アミノ酸（例えば、ノルロイシン）、β−アミノ酸、アザペプチド、Ｎ−メチル化アミノ酸およびアミノ酸に特徴的である当技術分野で公知の特性を有する化学合成された化合物を含めた化学的に修飾されたアミノ酸を含む。用語「タンパク質新生」とは、アミノ酸が周知の代謝経路によって細胞においてタンパク質に組み込まれ得ることを示す。この定義はまた、機能的側基が化学的に誘導体化されているアミノ酸を含む。このような誘導体化された分子として、例えば、遊離アミノ基が誘導体化されて、アミンヒドロクロリドを形成した分子、ｐ−トルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基またはホルミル基が挙げられる。遊離カルボキシル基は、誘導体化されて、塩、メチルおよびエチルエステルまたはその他の種類のエステルまたはヒドラジドを形成し得る。遊離ヒドロキシル基は、誘導体化されて、Ｏ−アシルまたはＯ−アルキル誘導体を形成し得る。また、２０種の標準アミノ酸の１種以上の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチド部分が誘導体として含まれる。
したがって、本発明の分子のペプチド部分は、ペプチド「ミメティクス」、すなわち、本明細書に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはからなるペプチドの構造的特徴を模倣するペプチドミメティクスであり得るということは理解される。ペプチドミメティクスは、治療的使用において、分解に対する抵抗性において、透過性においてまたは可能性ある経口投与において、さらにより有利であり得る。
ペプチドミメティクスの設計における主要目的は、ペプチダーゼによる切断および不活性化に対するミメティクスの感受性を低下させることであった。Ｓｈｅｒｍａｎら（１９９０年）によって開示されるものなどの一アプローチでは、１以上のアミド結合が、種々の化学官能基によって本質的にイソステリック方法で置換されている。この段階的アプローチは、活性類似体が得られたという一定の成果をもたらした。いくつかの場合には、これらの類似体は、その天然に存在する対応物よりも長い生物学的半減期を有するとわかった。別のアプローチでは、Ｄ−アミノ酸およびＮ−メチルアミノ酸などの種々の非コードまたは修飾されたアミノ酸が、哺乳類ペプチドを修飾するために使用されている。あるいは、環化などの共有結合修飾によって、またはγ−ラクタムもしくはその他の種類の架橋の組み込みによって、推定される生物活性コンホメーションが安定化された（Ｖｅｂｅｒら、１９７８年）およびＴｈｏｒｓｅｔｔら、１９８３年）。Ｒｉｃｈ（１９８６年）によって開示された別のアプローチは、酵素阻害剤設計における遷移状態類似体概念の適用によってペプチドミミックを設計するためのものであった。例えば、スタチン(statine)の第２級アルコールは、ペプシン基質の固着アミド結合の四面体遷移状態を模倣することがわかっている。その他のアプローチとして、アザペプチドおよびβ−アミノ酸の使用が挙げられる。
「ペプチドミメティックス」の定義中にはまた、レトローインベルソペプチドも含まれる。レトローインベルソペプチド（すべてＤ型のレトロまたはレトロ−エナンチオペプチドとしても知られる）によって、本発明者らは、Ｌ−アミノ酸のすべてが、Ｄ−アミノ酸で置換されており、ペプチド結合が逆転しているペプチドという意味を含む。したがって、ペプチドは、親のＬ−配列のものから逆の順序で組み立てられたＤ−アミノ酸からなる。レトロ−インベルソペプチドは、当技術分野で公知の方法、例えば、Ｍｅｚｉｅｒｅら（１９９７年）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５９ ３２３０〜３２３７頁に記載されるものによって合成され得る。このアプローチは、主鎖に関する変化を含有し、側鎖の配向に関しては含有せず、親ペプチドと極めて類似したままである偽ペプチドを作製することを含む。レトロ−インバースペプチドは、タンパク質分解に対してかなりより抵抗性である。
したがって、当然のことではあるが、本明細書に記載されるような、ターゲッティング部分、さらなる部分、１以上のマスキング部分、切断部位およびスペーサー部分のいずれかが、ペプチドまたはポリペプチドである場合には、それらのペプチドまたはポリペプチドの任意の１種以上が、親ペプチドまたはポリペプチドのそれぞれの活性を保持する対応するペプチドミメティックと置換され得る。これは、本発明の薬剤にプロテアーゼ抵抗性を付与し、それによって、その安定性を改善するのに役立つ。したがって、例えば、ターゲッティング部分が、１以上のペプチドスペーサー部分を介してさらなる部分に接続される場合には、それらのスペーサー部分のうち１以上がペプチドミメティクスであることが望ましい場合があり、これでは、例えば、安定性を改善するために、例えば、スペーサー部分の天然に存在するアミノ酸のうち１個以上が置換または修飾される。
本発明の薬剤のペプチド部分の安定を増大するための別のアプローチは、一方または両方の末端に安定化基を有することである。通常の安定化基として、アミド、アセチル、ベンジル、フェニル、トシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどの末端基修飾が挙げられる。さらなる修飾として、末端の「Ｌ」アミノ酸の代わりに「Ｄ」アミノ酸およびアミノまたはカルボキシ末端ではなくアミドまたはアミノ末端ではなくアセチルを使用して、エキソペプチダーゼ活性を阻害することが挙げられる。したがって、本発明の薬剤が、露出したペプチド末端を有する場合もいつも、末端は、キャッピング部分、好ましくは、２００Ｄａ未満の分子量である部分を有し得るということは理解される。さらなるキャッピング部分は、ナフチル基またはポリエチレングリコール基を含む。レトローインベルソペプチドは、すでに比較的安定であり、そのため、さらなるキャッピング部分を必要としない可能性があるということは理解される。
本発明の分子は、３７℃で少なくとも２４時間の血漿における半減期を有することが好ましい。
より容易に検出され得るよう、例えば、ビオチン化によって、または放射標識、蛍光標識もしくは酵素標識などの当技術分野で公知の任意の検出可能な標識を組み込むことによって、本発明の分子を修飾することが望ましい場合がある。
上記で論じられるように、本発明の分子は、特異的な方法で、特定の望ましくない細胞を根絶または中和するために身体の免疫機構を再指示することにおいて有用性を有する。この方法で任意の望ましくない細胞がターゲッティングされ得るので、本発明の分子は、相当な治療可能性を提示する。
したがって、本発明の第２の態様は、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態を予防または治療する方法を提供し、この方法は、本発明の第１の態様の分子を対象に投与することを含む。
したがって、本方法は、望ましくない細胞を特徴とする状態（例えば、癌）を有するか、状態を発生するリスクにある対象を同定すること、本発明の第１の態様に従う分子を対象に投与することおよび望ましくない細胞の数を決定するために試験を実施することによってか、または対象の臨床症状をモニタリングすることのいずれかによって、対象における望ましくない細胞のレベルをモニタリングすることを含み得る。モニタリングステップの結果に応じて、より多くの薬剤を投与することが必要である場合がある。
同様に、本発明は、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防または治療において使用するための、本発明の第１の態様に従う分子を含む。
本発明はまた、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防または治療のための医薬の製造における、本発明の第１の態様に従う分子の使用を含む。
状態および望ましくない細胞の優先は、本発明の第１の態様に関して上記の通りである。特定の状態の例として、腫瘍（良性または悪性）、自己免疫状態、心血管疾患、変性性疾患、糖尿病、アレルギー性疾患（例えば、喘息）、アルツハイマー病などの神経変性性疾患、移植患者および感染性疾患が挙げられる。望ましくない細胞は、癌細胞であり、状態は、癌であることが好ましい。癌は、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎癌、黒色腫、肺癌、前立腺癌、精巣癌、甲状腺癌、脳癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、結腸直腸癌、肝臓癌、白血病、骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、リンパ増殖性疾患、骨髄異形成疾患、骨髄増殖性疾患および前悪性疾患などの任意の癌であり得る。当然のことではあるが、本発明の分子はまた、再生医学（例えば、実験室で増殖させた臓器または組織）においても有用性を有する。
状態の予防または治療によって、本発明者らは、患者において症状を低減または軽減すること（すなわち、対症的使用）、症状の悪化または進行を防ぐこと、疾患を治療すること（例えば、原因物質の阻害または排出によって）または状態もしくは疾患のない対象において状態もしくは疾患を予防することという意味を含む。
当然のことではあるが、本発明の分子は、患者に投与されるべき最も適当な分子が決定され、臨床において、選択または調製される、臨床における個人化医療に役立つ。例えば、その患者の最適ターゲッティング部分が選択され得るよう、患者における望ましくない細胞の発現プロフィールを獲得することが望ましい場合がある。望ましくない細胞の発現プロフィールを評価することは、核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ転写物）またはタンパク質レベルを測定するための日常的なアッセイを使用して生検サンプルで実施され得る。例えば、トランスクリプトームまたはプロテオミクス技術が使用され得る。このようにして、例えば、望ましくない細胞によって発現された表面マーカーと特異的に結合するテーラードターゲッティング部分を同定することが可能となる。望ましくない細胞の近くで選択的に切断され得る適当なプロテアーゼ切断部位を同定することも可能であり得る。例えば、１以上のＭＭＰ２切断部位を含有する分子は、所与の患者の癌プロテアーゼによって活性化されないが、１以上のＭＭＰ９切断部位を含有する分子は、活性化されるということがあり得る。
したがって、本発明の第２の態様の方法は、（ｉ）望ましくない細胞の存在を特徴とする状態（例えば、癌）を有するか、または状態を発生するリスクにある対象を同定するステップと、（ｉｉ）対象からサンプルを採取するステップと、（ｉｉｉ）サンプルを分析して、その対象において状態を予防または治療するための最適ターゲッティング部分および／または切断部位を同定するステップと、（ｉｉｉ）本発明の分子を調製するステップと、（ｉｖ）分子を対象に投与するステップと、（ｖ）望ましくない細胞の数を決定するための試験をじっすすることによってか、または対象の臨床症状をモニタリングすることのいずれかによって、対象における望ましくない細胞のレベルをモニタリングするステップとを含み得る。
特定の患者のために使用されるべき最も適当な分子を選択および所望により、調製するために、装置が使用され得るということは理解される。例えば、装置は、対象から得られた１種以上のサンプルの自動化分析を実施し、この分析に基づいて、その対象のためのテーラーメイド分子を選択および所望により、調製し得る。したがって、装置は、対象から（例えば、生検サンプルから）得られた望ましくない細胞の発現プロフィールを実施して、望ましくない細胞と結合する適したターゲッティング部分を決定でき、および／または望ましくない細胞の近くで選択的に切断され得る適した切断部位を決定できる。
臨床において、これらのステップのうち任意の１以上を実施することによって、特定の対象のために目的に合わせられた分子が調製され得る。例えば、分子は、望ましくない細胞によって発現された表面マーカーと選択的に結合するとわかっているターゲッティング部分および／または分子が望ましくない細胞の近くにある場合に、免疫細胞結合領域（例えば、Ｔ細胞結合領域）のアンマスキングを可能にする切断部位（例えば、プロテアーゼ切断部位）を含有し得る。
一実施形態では、対象は、本発明の第１の態様に従う分子に加えて、さらなる治療薬を投与される。例えば、特定の状態を予防または治療するために分子を投与する場合には、その状態と闘うために有用であるとわかっているさらなる治療薬が投与され得る。一例として、分子が、癌を治療するためのものである場合には、本発明の分子と一緒に、さらなる抗癌剤（例えば、抗悪性腫瘍薬化学療法）が対象に投与され得る。同様に、さらなる治療薬は、アレルギー性疾患、炎症性疾患、再生医学および神経再生(neuroregenerative)疾患において治療的適用を有するとわかっているものであり得る。
さらなる治療薬は、本発明の分子と同時に（すなわち、所望により、共製剤中での同時投与）または本発明の分子とは異なる時間で（すなわち、逐次投与）投与され得るということは理解される。
さらなる治療薬は、ワクチン、免疫賦活性薬物、抗癌剤、本発明の薬剤に対する抗体反応を阻害する薬剤および／またはプロテアーゼ阻害剤のうち任意の１種以上であり得る。
例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＦＮα、ＧＭ−ＣＳＦ、メトホルミン、レナリドミドなどの免疫賦活性薬剤を投与すること；および／またはイピリムマブなどの抗免疫調節剤を投与することが望ましい場合があり、そのすべてがさらなる治療薬と考えられ得る。
対象が、免疫抑制剤を投与されるものである場合は、これらの免疫抑制剤は、本発明の薬剤が投与される時点またはその前に、対象から取り除かれ得る（例えば、治療を一時中断することによって）ということも理解される。これは、対象が、Ｔ細胞を除去するために免疫抑制剤を投与されるものである場合は、特に当てはまる。
同様に、本発明の分子が関連し、それによってｉｎ ｖｉｖｏで有害な抗体反応が惹起される任意の免疫原性問題を回避する目的で方法を使用することが望ましい場合がある。例えば、対象はまた、リツキシマブ、シクロホスファミド、Ｓｙｋ阻害剤、抗ＢＡＦＦ抗体（例えば、ベリムマブ）、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２０抗体および抗ＣＤ１９抗体のいずれかなどのＢ細胞の活性を阻害することがわかっている１以上の薬剤を投与され得、そのすべては、さらなる治療薬として考えられ得る。この場合には、例えば、Ｂ細胞を除去するための前治療として、本発明の分子に先立って、Ｂ細胞の阻害剤が対象に投与される場合が特に好ましい。
別の実施形態では、分子が、１以上のプロテアーゼ切断部位を含む場合には、特定のプロテアーゼ阻害剤を投与して、本発明の分子の標的選択性改善することが適当であり得る。例えば、ターゲッティング部分が、心臓および乳房組織の両方において細胞と結合することがわかっているが、乳房におけるもののみがターゲッティングされる場合には、心臓における免疫細胞結合領域のアンマスキングに関与しているが、乳房においては関与していないプロテアーゼを選択的に阻害する薬剤を投与することが望ましい場合がある。言い換えれば、薬剤は、免疫細胞結合領域をアンマスキングできるプロテアーゼを阻害するために投与されるが、このプロテアーゼは、望ましい細胞の近く（例えば、その表面にまたはその表面の近くに）に存在するが、望ましくない細胞の近く（例えば、その表面にまたはその表面の近くに）には存在しない。これは、本発明の分子内のプロテアーゼ切断部位が、複数のプロテアーゼによって切断可能であり、その一部が望ましくない細胞の近くに存在し、その一部が望ましい細胞の近くに存在するという事象において特に有用である。この場合には、ターゲッティング特異性は、望ましい細胞の近くに存在するが、それにもかかわらず、切断部位を切断でき、従って、免疫細胞結合領域をアンマスキングできるプロテアーゼを阻害するプロテアーゼ阻害剤を投与することによって改善され得る。阻害剤を投与することの効果は、免疫細胞結合領域が、望ましくない細胞の近くで選択的にアンマスクされることを確実にすることである。例えば、癌を有する対象がまた、ＭＭＰ２およびその他のプロテアーゼが活性であり、本発明の分子中の１以上の切断部位が、ＭＭＰ２を含めた複数のプロテアーゼによって切断可能である活発な慢性関節リウマチも有する場合には、ＭＭＰ２を阻害して、関節炎の関節での分子の切断を妨げるが、別のプロテアーゼによる癌部位での切断を保持することがする有益であり得る。
したがって、本発明は、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防または治療において使用するための、（ｉ）本発明の第１の態様に従う分子と、（ｉｉ）さらなる治療薬とを含む組成物を含む。本発明の分子およびさらなる治療薬が、同時に、または逐次投与され得ることと考えると、当然のことではあるが、本発明は、さらなる治療薬が投与される対象において、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防および治療において使用するための本発明の第１の態様に従う分子を含む。また、本発明は、本発明の第１の態様に従う分子が投与される対象において、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防または治療において使用するための治療薬を含むということになる。
同様に、本発明は、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防または治療のための医薬の製造における、（ｉ）本発明の第１の態様に従う分子と、（ｉｉ）さらなる治療薬とを含む組成物の使用を含む。やはり、本発明の分子およびさらなる治療薬が、同時に、または逐次投与され得ることと考えると、当然のことではあるが、本発明は、さらなる治療薬が投与される対象における、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防および治療のための医薬の製造における本発明の第１の態様に従う分子を含む組成物の使用を含む。また、本発明は、本発明の第１の態様に従う分子が投与される対象における、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防または治療のための医薬の製造における治療薬の使用を含む。また、本発明は、本発明の第１の態様に従う分子が投与される対象において、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態の予防または治療のための医薬の製造における治療薬の使用を含むということになる。
本発明はまた、（ｉ）本発明の第１の態様に従う分子と、（ｉｉ）望ましくない細胞の存在を特徴とする同一状態の予防または治療に適したさらなる治療薬とを含む組成物を提供する。直前の２段落に記載された治療薬は、本発明の分子によって治療可能なような、望ましくない細胞の存在を特徴とする同一状態を治療するのに適した薬剤であり得るということは理解される。
本発明の第３の態様は、医薬において使用するための本発明の第１の態様に従う分子を提供する。
本発明の第４の態様は、本発明の第１の態様に従う分子と、医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
本発明の分子は、単独で投与されることが可能であるが、１種以上の許容される担体と一緒に医薬製剤として提示されることが好ましい。担体（複数可）は、治療薬と適合し、そのレシピエントにとって有害ではないという意味で「許容され」なければならない。通常、担体は、無菌であり、発熱物質を含まない、水または生理食塩水となる。
必要に応じて、製剤は、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかによって、単位投与形で提示され得、調製され得ることが好都合である。このような方法は、有効成分（望ましくない細胞を特徴とする状態を治療または予防するための薬剤）を、１種以上の補助成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、有効成分を、液体担体または微粉化された固体担体または両方と、均一に、密接に会合させること、次いで、必要に応じて生成物を成型することによって調製される。経口投与に適した本発明に従う製剤は、各々、散剤もしくは顆粒剤として；水性液もしくは非水性液中の溶液もしくは懸濁液として；水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして、所定の量の有効成分を含有する、カプセル剤、カシェ剤または錠剤などの個別の単位として提示され得る。有効成分はまた、ボーラス、舐剤またはペーストとして提示されてもよい。
錠剤は、所望により、１種以上の補助成分を用いて打錠または成形することによって製造され得る。圧縮錠は、所望により、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤と混合された、散剤または顆粒剤などの自由流動形の有効成分を適した機械で圧縮することによって調製され得る。成形錠は、製造され得る。湿製錠(Moulded tablets)は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化化合物の混合物を適した機械で成形することによって製造され得る。錠剤は、所望により、コーティングされても、割線が入れられてもよく、例えば、所望の放出プロフィールを提供するよう、種々の割合でヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、中の有効成分の持続放出または制御放出を提供するよう製剤されてもよい。
口への局所投与に適した製剤として、香味づけされた基剤、普通、スクロースおよびアラビアガムまたはトラガカント中に有効成分を含むロゼンジ剤；ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアガムなどの不活性基剤中に有効成分を含むトローチ剤；および適した液体担体中に有効成分を含むマウスウォッシュが挙げられる。
非経口投与に適した製剤として、抗酸化物質、バッファー、静菌剤および製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有し得る水性および非水性滅菌注射溶液；ならびに沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単位用量容器または複数用量容器、例えば、密閉さらたアンプルおよびバイアル中で提示され得、使用の直前に滅菌液体担体、例えば、注射用水の添加のみを必要とする、凍結乾燥された(freeze-dried)（凍結乾燥された(lyphilised)）状態で貯蔵され得る。即時注射溶液および懸濁液は、これまでに記載された種類の滅菌散剤、顆粒剤および錠剤から調製され得る。
本発明の分子は、坐剤またはペッサリーの形態で投与され得るか、またはそれらは、ローション、溶液、クリーム、軟膏または散布剤の形態で局所適用され得る。分子はまた、例えば、皮膚パッチの使用によって経皮投与され得る。
好ましい単位投与形製剤は、有効成分の１日用量または単位、１日部分用量(sub-dose)またはその適当な画分を含有するものである。
上記で特に記載された成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類を考慮して当技術分野で従来のその他の薬剤を含み得、例えば、経口投与に適したものは、矯味剤を含み得るということは理解されなくてはならない。
個体に投与される分子の量は、特定の個体の状態と闘うのに有効な量である。量は、医師によって決定され得る。
本明細書に記載される本発明の任意の態様との関連で、治療されるべき対象はヒトであることが好ましい。あるいは、対象は、動物、例えば、飼い慣らされた動物（例えば、イヌまたはネコ）、実験用動物（例えば、実験用げっ歯類、例えば、マウス、ラットまたはウサギ）または農業において重要な動物（すなわち、家畜）、例えば、ウマ、ウシ、ヒツジまたはヤギであり得る。
本発明は、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態を予防または治療するためのパーツのキットを提供し、キットは、
（ｉ）望ましくない細胞を直接ターゲッティングでき、第１の結合パートナーと接続されているターゲッティング部分と、
（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を有して、さらなる部分の免疫細胞との結合を妨げ、第１の結合パートナーと結合できる第２の結合パートナーと接続されているさらなる部分とを含み、
ここで、マスクされた免疫細胞結合領域は、さらなる部分が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的にアンマスクされて、さらなる部分の免疫細胞との結合を可能にする。免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞結合領域（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合するもの）であることが好ましい。免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合に、さらなる部分中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされることが好ましい。
望ましくない細胞、ターゲッティング部分、さらなる部分および切断部位についての優先は、上記に定義される通りである。パーツのキットが、癌を予防または治療するためのものである場合が特に好ましい。また、パーツのキットは、さらなる部分の免疫細胞結合領域をマスクする１以上のマスキング部分を含み得るということも理解される。マスキング部分についての優先は、上記で定義される通りであり、免疫細胞結合領域が免疫細胞に接近できない、さらなる部分のコンホメーションを促進するマスキング部分ならびにさらなる部分の下部の免疫細胞結合領域を簡単に遮断するマスキング部分の両方を含む。
第１および第２の結合パートナーによって、本発明者らは、互いに選択的に結合する任意の２つの部分という意味を含む。最も好ましくは、第１および第２の結合パートナーは、互いとのみ結合し、任意のその他の部分とは結合しない。ビオチン／アビジンまたはストレプトアビジン間などの非共有結合または免疫学的結合が好ましい。したがって、第１の結合パートナーは、ビオチンであり得、第２の結合パートナーは、アビジンであり得、逆もまた同様である。あるいは、第１の結合パートナーは、抗原であり得、第２の結合パートナーは、その抗原に特異的な抗体であり得、逆もまた同様である。しかし、互いに選択的に結合する第１および第２の結合パートナーの任意の対が使用され得、適した対は、当業者には公知であろう。
当然のことではあるが、キットによって、対象に望ましくない細胞を直接ターゲッティングするターゲッティング部分を最初に投与することおよび対象におけるターゲッティング部分の正しい局在を確立すること（例えば、検出可能に標識（例えば、放射標識）されているターゲッティング部分によって）その後さらなる部分を投与することが可能となる。次いで、さらなる部分は、第１の結合パートナーへの第２の結合パートナーの結合によって望ましくない細胞にターゲッティングされる。望ましくない細胞の近くにあると、例えば、さらなる部分内の１以上の切断部位の選択的切断によって、さらなる部分の免疫細胞結合領域がアンマスクされ、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が望ましくない細胞に補充されることが可能となる。第２の結合パートナーに接続されるさらなる部分は、本発明の第１の態様に関連して上記で記載されたように、望ましくない細胞を間接的にターゲッティングできるターゲッティング部分と考慮され得るということは理解されよう。
したがって、本発明はさらに、
（ｉ）望ましくない細胞を直接的にターゲッティングでき、第１の結合パートナーに接続されるターゲッティング部分と、
（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を有して、さらなる部分の免疫細胞との結合を妨げ、第１の結合パートナーと結合できる第２の結合パートナーに接続されるさらなる部分と
を投与することを含む、望ましくない細胞の存在を特徴とする状態を予防または治療する方法を提供し、
ここで、マスクされた免疫細胞結合領域は、さらなる部分が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的にアンマスクされて、さらなる部分の免疫細胞との結合が可能となる。免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞結合領域（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合するもの）であることが好ましい。免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合に、さらなる部分中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされることも好ましい。さらなる部分の前にターゲッティング部分が投与され、例えば、望ましくない細胞でのターゲッティング部分の正しい局在が確立されることを可能にすることが好ましい。しかし、ターゲッティング部分は、さらなる部分と同時に投与され得る。ターゲッティング部分およびさらなる部分は、第１および第２の結合パートナーの結合によって互いに接続され得るということは理解される。
同様に、本発明は、
（ｉ）望ましくない細胞を直接ターゲッティングでき、第１の結合パートナーと接続されているターゲッティング部分と、
（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を有して、さらなる部分の免疫細胞との結合を妨げ、第１の結合パートナーと結合できる第２の結合パートナーと接続されているさらなる部分と
を含み、
ここで、マスクされた免疫細胞結合領域は、さらなる部分が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的にアンマスクされて、さらなる部分の免疫細胞との結合を可能にし、
対象における望ましくない細胞を特徴とする状態の予防または治療において使用するための組成物を提供する。免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞結合領域（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合するもの）であることが好ましい。免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合に、さらなる部分中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされることも好ましい。
同様に、本発明は、
（ｉ）望ましくない細胞を直接ターゲッティングでき、第１の結合パートナーと接続されているターゲッティング部分と、
（ｉｉ）マスクされた免疫細胞結合領域を有して、さらなる部分の免疫細胞との結合を妨げ、第１の結合パートナーと結合できる第２の結合パートナーと接続されているさらなる部分と
を含み、
ここで、マスクされた免疫細胞結合領域は、さらなる部分が望ましくない細胞の近くにある場合に選択的にアンマスクされて、さらなる部分の免疫細胞との結合を可能にし、
望ましくない細胞の存在を特徴とする状態を予防または治療するための医薬の製造における、組成物の使用を提供する。免疫細胞結合領域は、Ｔ細胞結合領域（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３抗原および／またはＴＣＲと結合するもの）であることが好ましい。免疫細胞結合領域は、望ましくない細胞の近くにある場合に、さらなる部分中の１以上の切断部位の選択的切断によってアンマスクされることも好ましい。
本発明の一実施形態では、ターゲッティング部分は、抗ＭＵＣ１抗体であり、さらなる部分は、抗ＣＤ３抗体である。
本発明の一実施形態では、ターゲッティング部分は、抗ＣＤ１９抗体であり、さらなる部分は、抗ＣＤ３抗体である。
本発明の分子の使用
Ｂ細胞悪性（Ｂリンパ芽球様細胞株（Ｂ−ＬＣＬ））をモデリングする標的細胞を、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ（さらなる部分）に連結され、ＣＤ３εドメイン（マスキング部分）にさらに連結された抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ターゲッティング部分）を含む分子（例えば、図３中の分子）を用いてターゲッティングする。ターゲッティングされると、標的細胞から過剰の分子を洗浄し、標的細胞をＴ細胞（ＣＤ４＋およびＣＤ８＋）とともに、３７℃で一晩培養する。インキュベーション後、培養物から得られた上清を、標的Ｂ−ＬＣＬの表面上の分子の認識におけるＴ細胞の活性化を実証するＩＦＮ−γ放出について試験する。Ｔ細胞の活性化は、さらなる部分とＣＤ３εマスキング部分の間のリンカーのタンパク質分解による切断、従って、抗ＣＤ３結合領域の結合領域のアンマスキングが起こった場合にのみ見られる。分子を標的細胞単独とともにか、またはＴ細胞単独とともにインキュベーションした後、培養物から得られた上清は、ＩＦＮ−γ産生がないことを実証した。しかし、ターゲッティングされたＢ−ＬＣＬをＴ細胞とともにインキュベーションした後に、ＩＦＮ−γの多量の産生があり、これは、望ましくない標的細胞（Ｂ−ＬＣＬ）の存在下でのマスキング部分の放出およびＴ細胞による望ましくない細胞の認識を実証した。
本発明の分子の使用
抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ（さらなる部分）に連結され、ＣＤ３εドメイン（マスキング部分）にさらに連結された抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ターゲッティング部分）を含む分子を用いて、ヒト末梢血単核細胞（Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、マクロファージおよびＮＫ細胞を含有する）の混合集団においてＢ細胞をターゲッティングすること。分子を細胞の混合集団に添加し、それによって、Ｂ細胞を標識すると、外因性プロテアーゼ（例えば、トリプシン）を細胞に添加して、マスキング剤を放出し、その後、３７℃で一晩培養する。培養後、細胞を、蛍光標識した抗体抗ＣＤ３および抗ＣＤ１９を用いて標識し、フローサイトメトリーを使用して分析した。結果は、分子を伴わずに一晩培養した後の細胞中のＢ細胞の存在（約１０％）と、そうではない分子の存在下で一晩培養した細胞中のＢ細胞の完全な消失を実証する。この結果は、末梢血単核細胞の混合集団における望ましくないＢ細胞のターゲッティングされた細胞毒性を実証する。
本発明の分子の合成
図に示される分子の製造は、ターゲッティング部分（ＶＨおよびＶＬドメイン）のタンパク質配列およびさらなる部分（ＶＨおよびＶＬドメイン）のタンパク質配列を作製することおよび標準プロテオミクス結合（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒリピート：配列番号３３）を使用してこれらのドメインを連結することを含む。ｓｃＦｖドメインは、同様の技術を使用して１以上のマスキング部分に連結され得る。必要に応じて、１以上のプロテアーゼ切断配列が、リンカーポリペプチド配列中に挿入され得る。１以上のポリペプチド鎖のタンパク質配列が決定されると、ＤＮＡが合成され、原核生物または真核生物発現系のいずれかに適したベクター中に挿入される。原核生物の系では、大腸菌(E. coli)が１以上のポリペプチド鎖をコードする合成された遺伝子で形質転換され、一晩培養した後に、上清が回収され、標準技術（例えば、Ｈｉｓタグ精製）によってポリペプチド鎖が精製され得る。精製後、１種以上のポリペプチド鎖が、再フォールディングされ、次いで、標的細胞を標識するために使用され得る。真核細胞の発現系では、１種以上のポリペプチド鎖をコードする合成された遺伝子は、レンチウイルス発現系において適した細胞株中にトランスフェクトされる。４８時間インキュベートした後、正しく再フォールディングされ、コンホメーション的に正しい分子を含有する上清が、標準技術（例えば、Ｈｉｓタグ精製）を使用して精製され得る。
図３において表される分子の一例は、単一ポリペプチド鎖上に以下のアミノ酸配列を含有する：
抗ＣＤ１９ＶＬ
ＤＩＱＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＹＬＮＷＹＱＱＩＰＧＱＰＰＫＬ ＬＩＹＤＡＳＮＬＶＳＧＩＰＰＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＫＶＤＡＡＴＹＨＣＱＱＳＴＥＤＰＷ ＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２０）
リンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１）
抗ＣＤ１９ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＳＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＹＷＭＮＶＷ ＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＱ ＩＷＰＧＤＧＤＴＮＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＥＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＲＥ
ＴＴＴＶＧＲＹＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２２）
リンカー
ＧＧＧＧＳＳＤ（配列番号２３）
抗ＣＤ３ＶＨ
ＩＫＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２４）
リンカー
ＶＥＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＶＤＤ（配列番号２５）
抗ＣＤ３ＶＬ
ＩＱＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＶＡＳＧＶＰＹＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴ
ＫＬＥＬＫ（配列番号２６）
長いリンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１）
切断部位
ＴＩＰＶＳＬＲ（配列番号２７）
長いリンカー
ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩ（配列番号２８）
ＣＤ３ε
ＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨ
ＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＣＥＧＳ（配列番号２９）
この分子は、分子が、免疫細胞表面抗原、この場合には、ＣＤ３εである１以上のマスキング部分を含む本発明の一実施形態の例示である。
図５において表される分子の一例は、図１０に示されている。この分子は、分子が、免疫グロブリンドメイン、より詳しくは、定常ドメインである１以上のマスキング部分を含む本発明の一実施形態の例示である。実施形態はまた、図２に例示されているが、図２では、ターゲッティング部分のＶＨおよびＶＬ部分は、別個のポリペプチド鎖上にあり、図５では、ターゲッティング部分のＶＨおよびＶＬ部分は、同一ポリペプチド鎖上にある。

Claims (30)

  1. （ｉ）腫瘍細胞を直接的にターゲッティングできる、抗体または腫瘍細胞によって発現された抗原と結合する抗原結合性断片であるターゲッティング部分と、
    （ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を有して、さらなる部分のＴ細胞との結合を防ぐ、マスクされたＴ細胞結合領域が免疫細胞表面抗原および免疫グロブリンドメインから選ばれる１種以上のマスキング部分によりマスクされ、Ｔ細胞表面上のＣＤ３もしくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と結合する抗体または抗原結合性断片である、さらなる部分と、
    （iii）腫瘍細胞の近くにあるプロテアーゼによって選択的に切断可能である１以上のプロテアーゼ切断部位を含む１種以上のペプチドリンカーと
    を含む、Ｔ細胞を腫瘍細胞に再指示するための分子であって、
    分子が腫瘍細胞の近くにある場合に、マスクされたＴ細胞結合領域が１以上のプロテアーゼ切断部位の選択的切断によって選択的にアンマスクされて、さらなる部分のＴ細胞との結合を可能にし得る、分子。
  2. さらなる部分が、一本鎖抗体構築物である、請求項１に記載の分子。
  3. 一本鎖抗体が、ｓｃＦｖ抗体である、請求項２に記載の分子。
  4. 抗体が、ムロモナブ−ＣＤ３（ＯＫＴ３）である、請求項２から３のいずれかに記載の分子。
  5. 腫瘍細胞の近くにある分子が、Ｔ細胞結合領域をアンマスクするさらなる部分におけるコンホメーション変化を誘導する、請求項１から４のいずれかに記載の分子。
  6. さらなる部分が、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を連結するリンカーが、ＶＨおよびＶＬドメインの対合を可能にするのに不十分な長さのものであり、その結果、ｓｃＦｖ抗体が、Ｔ細胞と結合できないｓｃＦｖ抗体であり、腫瘍細胞の近くにある場合に、腫瘍細胞の近くにある分子が、ＶＨおよびＶＬドメインの対合を誘導し、その結果、ｓｃＦｖ抗体がＴ細胞と結合できる、請求項５に記載の分子。
  7. 腫瘍細胞の近くにある分子が、前記リンカー中の１以上の切断部位を選択的に切断することによってＶＨおよびＶＬドメインの対合を誘導する、請求項６に記載の分子。
  8. ｓｃＦｖ抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインが、１４個以下のアミノ酸のペプチドリンカーによって連結される、請求項６または７に記載の分子。
  9. １以上のマスキング部分の存在が、Ｔ細胞結合領域が露出されないようなさらなる部分のコンホメーションを促進する、請求項１に記載の分子。
  10. マスキング部分が、免疫細胞表面抗原である、請求項９に記載の分子。
  11. Ｔ細胞と特異的に結合できるＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むさらなる部分と、
    さらなる部分を、免疫細胞表面抗原と連結するペプチドリンカーと
    を含み、
    その結果、免疫細胞表面抗原が、ＶＨおよびＶＬドメインの結合領域と結合し、マスクして、さらなる部分のＴ細胞との結合を妨げ、
    ここで、腫瘍細胞の近くにある場合に、ペプチドリンカー中の１以上のプロテアーゼ切断部位の選択的切断によって、ＶＨおよびＶＬドメインから免疫細胞表面抗原が放出されて、さらなる部分のＴ細胞との結合が可能となる、
    請求項１０に記載の分子。
  12. マスキング部分が、免疫グロブリンドメインである、請求項９に記載の分子。
  13. Ｔ細胞と特異的に結合できるＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むさらなる部分と、
    さらなる部分のＶＨドメインを、第１のマスキング部分のＣＨドメインと連結するペプチドリンカーと、
    さらなる部分のＶＬドメインを、第２のマスキング部分のＣＬドメインと連結するペプチドリンカーと、を含み、
    その結果、第１および第２のマスキング部分のＣＨおよびＣＬドメインが、ＶＨおよびＶＬドメインの結合領域をマスクして、さらなる部分の、Ｔ細胞との結合を妨げ、
    ここで、腫瘍細胞の近くにある場合に、前記ペプチドリンカー中の１以上のプロテアーゼ切断部位の選択的切断によって、さらなる部分から第１および第２のマスキング部分が放出されて、さらなる部分のＴ細胞との結合が可能となる、
    請求項１２に記載の分子。
  14. 対が形成されると、Ｔ細胞と特異的に結合できる、第１のＶＨおよび第１のＶＬドメインを別個に含むさらなる部分と、
    第１のＶＨドメインを、第１のマスキング部分の第２のＶＬドメインと連結するペプチドリンカーと、
    第１のＶＬドメインを、第２のマスキング部分の第２のＶＨドメインと連結するペプチドリンカーとを含み、
    その結果、さらなる部分の第１のＶＨおよび第１のＶＬドメインが対を形成せず、さらなる部分が、Ｔ細胞と結合できず、
    ここで、腫瘍細胞の近くにある場合に、前記ペプチドリンカー中の１以上のプロテアーゼ切断部位の選択的切断によって、第１のＶＨおよび第１のＶＬドメインの対合が可能になり、その結果、さらなる部分がＴ細胞と結合できる、請求項１２に記載の分子。
  15. 第１のＶＨドメインを、第２のＶＬドメインと連結するペプチドリンカーが、第１のＶＨドメインの第２のＶＬドメインとの対合を可能にするのに十分な長さのものであり、第１のＶＬドメインを、第２のＶＨドメインと連結するペプチドリンカーが、第１のＶＬドメインの第２のＶＨドメインとの対合を可能にするのに十分な長さのものである、請求項１４に記載の分子。
  16. ターゲッティング部分が、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）、ＥＧＦＲ、ＰＭＳＡ、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ３３、膜ＩｇＥ、ＩｇＥ受容体（ＣＤ２３）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２、ＣＡ１２５、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ５６、ＣＤ４０、ＣＤ１９、ｃ−ｍｅｔ／ＨＧＦＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＤＲ５、ＰＤ−１、ＰＤ１Ｌ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＶＥＧＦ−Ｒ２、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ＭＵＣ１、ＣａｎＡｇ、メソテリン、Ｐ−カドヘリン、ミオスタチン（ＧＤＦ８）、Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ１）、ＡＣＶＲＬ１／ＡＬＫ１、ＭＵＣ５ＡＣ、ＣＥＡＣＡＭ、ＳＬＣ４４Ａ４、ＣＤ２／ＣＳ１、ＣＤ１３７、ＣＸＣＲ４、ニューロピリン１、グリピカン、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲａおよびＥｐｈＡ２のいずれかに対して特異的な抗体または抗原結合性断片である、請求項１に記載の分子。
  17. 抗体が、抗上皮成長因子受容体抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＭＵＣ１抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗Ｐ−カドヘリン抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗Ｅ−カドヘリン抗体、抗ＣＥＡ抗体および抗ＦＧＦＲ３抗体である、請求項１６に記載の分子。
  18. さらなる部分、ターゲッティング部分および１以上のマスキング部分が、単一ポリペプチド鎖の一部である、請求項１から１７のいずれかに記載の分子。
  19. 医薬において使用するための、請求項１から１８のいずれかに記載の分子。
  20. 請求項１から１８のいずれかに記載の分子と、医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物。
  21. 対象における腫瘍の予防または治療において使用するための、請求項１から１８のいずれかに記載の分子。
  22. 対象における腫瘍の予防または治療のための医薬の製造における、請求項１から１８のいずれかに記載の分子の使用。
  23. （ｉ）請求項１から１８のいずれかに記載の分子と、（ｉｉ）腫瘍を予防または治療するのに適したさらなる治療薬とを含む組成物。
  24. 請求項１から１８のいずれかに記載の分子を、腫瘍を予防または治療するのに適したさらなる治療薬と組み合わせて含む組成物。
  25. さらなる治療薬が、免疫賦活性薬物、抗癌剤および請求項１から１８のいずれかに記載の分子に対する抗体反応の阻害剤のうちの任意の１種以上である、請求項２１に記載の分子。
  26. 腫瘍を予防または治療するためのパーツのキットであって、
    （ｉ）腫瘍細胞を直接的にターゲッティングでき、第１の結合パートナーに接続されている、抗体または腫瘍細胞によって発現された抗原と結合する抗原結合性断片であるターゲッティング部分と、
    （ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を有して、さらなる部分の免疫細胞との結合を妨げ、第１の結合パートナーと結合できる第２の結合パートナーに接続されている、ＣＤ３もしくはＴＣＲと結合する抗体または抗原結合性断片であり、マスクされたＴ細胞結合領域が免疫細胞表面抗原および免疫グロブリンドメインからなる群から選ばれる１種以上のマスキング部分によりマスクされている、さらなる部分と、
    （iii）さらなる部分の中に腫瘍細胞の近くにあるプロテアーゼによって選択的に切断可能である１以上のプロテアーゼ切断部位を含む１種以上のペプチドリンカーを含み、
    ここで、マスクされたＴ細胞結合領域は、さらなる部分が腫瘍細胞の近くにある場合に１以上のプロテアーゼ切断部位の選択的切断によって選択的にアンマスクされて、さらなる部分のＴ細胞との結合を可能にし得る、キット。
  27. （ｉ）腫瘍細胞を直接的にターゲッティングでき、第１の結合パートナーに接続されている、抗体または腫瘍細胞によって発現された抗原と結合する抗原結合性断片であるターゲッティング部分と、
    （ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を有して、さらなる部分のＴ細胞との結合を妨げ、第１の結合パートナーと結合できる第２の結合パートナーに接続されている、ＣＤ３もしくはＴＣＲと結合する抗体または抗原結合性断片である、さらなる部分と、
    （iii）さらなる部分の中に、腫瘍細胞の近くにあるプロテアーゼによって選択的に切断可能である１以上のプロテアーゼ切断部位を含む１種以上のペプチドリンカーとを含む組成物であって、
    マスクされたＴ細胞結合領域が免疫細胞表面抗原および免疫グロブリンドメインから選ばれる１種以上のマスキング部分によりマスクされ、
    マスクされたＴ細胞結合領域は、さらなる部分が腫瘍細胞の近くにある場合にさらなる部分の中で１以上のプロテアーゼ切断部位の選択的切断によって選択的にアンマスクされて、さらなる部分のＴ細胞との結合を可能にし得、
    対象における腫瘍の予防または治療において使用するための、組成物。
  28. （ｉ）腫瘍細胞を直接的にターゲッティングでき、第１の結合パートナーに接続されている、抗体または腫瘍細胞によって発現された抗原と結合する抗原結合性断片であるターゲッティング部分と、
    （ｉｉ）マスクされたＴ細胞結合領域を有して、さらなる部分のＴ細胞との結合を妨げ、第１の結合パートナーと結合できる第２の結合パートナーに接続されている、ＣＤ３もしくはＴＣＲと結合する抗体または抗原結合性断片である、さらなる部分と、
    （iii）さらなる部分の中に、腫瘍細胞の近くにあるプロテアーゼによって選択的に切断可能である１以上のプロテアーゼ切断部位を含む１種以上のペプチドリンカーとを含み、
    マスクされたＴ細胞結合領域が免疫細胞表面抗原および免疫グロブリンドメインから選ばれる１種以上のマスキング部分によりマスクされ、
    ここで、マスクされたＴ細胞結合領域は、さらなる部分が腫瘍細胞の近くにある場合にさらなる部分の中で１以上のプロテアーゼ切断部位の選択的切断によって選択的にアンマスクされて、さらなる部分のＴ細胞との結合を可能にし得、
    腫瘍を予防または治療するための医薬の製造における、組成物の使用。
  29. 抗体が、セツキシマブまたはリツキシマブである、請求項１７に記載の分子。
  30. さらなる治療薬が、免疫賦活性薬物、抗癌剤および請求項１から１８のいずれかに記載の分子に対する抗体反応の阻害剤のうちの任意の１種以上である、請求項２３または２４に記載の組成物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11168139B2 (en) 2016-11-28 2021-11-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding domain, and polypeptide including conveying section

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3138581B1 (en) 2011-03-17 2019-01-02 The University of Birmingham Re-directed immunotherapy
UA118950C2 (uk) 2011-04-22 2019-04-10 Аптево Рісьорч Енд Девелопмент Ллс Поліпептид, який зв'язує специфічний мембранний антиген простати та комплекс т-клітинного рецептора
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
EP3677310A1 (en) 2012-10-08 2020-07-08 St. Jude Children's Research Hospital Therapies based on control of regulatory t cell stability and function via a neuropilin-1:semaphorin axis
CN105339389B (zh) 2013-05-02 2021-04-27 安奈普泰斯生物有限公司 针对程序性死亡-1(pd-1)的抗体
JP6545666B2 (ja) 2013-05-28 2019-07-17 ディーシービー−ユーエスエー エルエルシーＤｃｂ−Ｕｓａ Ｌｌｃ タンパク質薬物の不活性化のための抗体ロッカー
GB201312133D0 (en) * 2013-07-05 2013-08-21 Univ Birmingham Immunotherapy
HRP20220553T1 (hr) 2013-07-25 2022-06-10 Cytomx Therapeutics Inc. Polispecifična protutijela, polispecifična protutijela koja se mogu aktivirati i postupci uporabe navedenih protutijela
BR122021025085B1 (pt) 2013-12-17 2023-04-04 Genentech, Inc Anticorpo anti-cd3, célula hospedeira procariótica, método de produção do anticorpo biespecífico, imunoconjugado, composição, uso do anticorpo biespecífico e kit
WO2015138638A1 (en) 2014-03-11 2015-09-17 Theraly Pharmaceuticals, Inc. Long acting trail receptor agonists for treatment of autoimmune diseases
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
MX2016011832A (es) 2014-03-12 2017-05-12 Yeda Res & Dev Reduccion de los niveles o la actividad de las células t reguladoras sistémicas para el tratamiento de enfermedad y lesión del sistema nervioso central (snc).
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
KR20170010863A (ko) 2014-07-01 2017-02-01 화이자 인코포레이티드 이중특이성 이종이량체성 디아바디 및 이의 용도
WO2016014974A2 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-cd3 antibodies, activatable anti-cd3 antibodies, multispecific anti-cd3 antibodies, multispecific activatable anti-cd3 antibodies, and methods of using the same
JP2017529853A (ja) * 2014-09-25 2017-10-12 アムジエン・インコーポレーテツド プロテアーゼにより活性化可能な二重特異性タンパク質
CN107427590B (zh) 2015-02-02 2021-08-31 伯明翰大学 具有多个t细胞表位的靶向部分肽表位复合物
MA42971A (fr) 2015-03-13 2018-08-15 Cytomx Therapeutics Inc Anticorps anti-pdl1, anticorps anti-pld1 activables, et leurs procédés d'utilisation
US10478494B2 (en) 2015-04-03 2019-11-19 Astex Therapeutics Ltd FGFR/PD-1 combination therapy for the treatment of cancer
CN107709363A (zh) * 2015-05-01 2018-02-16 基因泰克公司 掩蔽抗cd3抗体和使用方法
JP6841754B2 (ja) * 2015-05-13 2021-03-10 中外製薬株式会社 多重抗原結合分子融合体、医薬組成物、線状エピトープの同定方法、および多重抗原結合分子融合体の製造方法
CA2986575A1 (en) 2015-05-21 2016-11-24 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific binding proteins and methods of use
EP3310811B1 (en) 2015-06-16 2021-06-16 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
EP4129327A1 (en) 2015-08-28 2023-02-08 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Chimeric polypeptide assembly and methods of making and using the same
CA2999138C (en) 2015-09-21 2024-05-21 Aptevo Research And Development Llc Cd3 binding polypeptides
EP3368077A4 (en) 2015-10-30 2019-10-16 Aleta Biotherapeutics Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF TUMOR TRANSDUCTION
MA43135A (fr) 2015-10-30 2018-09-05 Aleta Biotherapeutics Inc Compositions et méthodes pour le du traitement du cancer
EP3903818A1 (en) * 2015-11-19 2021-11-03 Revitope Limited Functional antibody fragment complementation for a two-components system for redirected killing of unwanted cells
EP3389696A4 (en) 2015-12-17 2019-08-14 The Johns Hopkins University TREATING SYSTEMIC SCLEROSIS WITH DEATH RECEPTOR AGONISTS
WO2017143094A1 (en) * 2016-02-16 2017-08-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Immunotherapy compositions and methods
WO2017156178A1 (en) * 2016-03-08 2017-09-14 Maverick Therapeutics, Inc. Inducible binding proteins and methods of use
MA43724B1 (fr) 2016-03-22 2023-06-28 Hoffmann La Roche Molécules bispécifiques de cellules t activées par une protéase
EP3439687A1 (en) 2016-04-07 2019-02-13 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treating pancreatitis and pain with death receptor agonists
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
MX2018014227A (es) 2016-05-20 2019-08-22 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas de union de cadena unica de fragmento variable cd3.
IL263102B2 (en) 2016-05-20 2023-11-01 Harpoon Therapeutics Inc A serum albumin-binding protein with a single site
EP3471753A1 (en) * 2016-06-20 2019-04-24 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
EP3666794A1 (en) 2016-11-01 2020-06-17 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against programmed death- 1 (pd-1)
MX2019005438A (es) 2016-11-15 2019-08-16 Genentech Inc Dosificacion para tratamiento con anticuerpos bispecificos anti-cd20 / anti-cd3.
WO2018098356A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 Harpoon Therapeutics, Inc. Psma targeting trispecific proteins and methods of use
MX2019006043A (es) 2016-11-23 2019-09-26 Harpoon Therapeutics Inc Proteína de unión de antígeno prostático específico de membrana.
TW202235438A (zh) 2016-11-28 2022-09-16 日商中外製藥股份有限公司 能夠調節配體結合活性的配體結合分子
MX2019006624A (es) 2016-12-09 2019-08-01 Seattle Genetics Inc Anticuerpos bivalentes enmascarados por helices superenrolladas.
JP7110206B6 (ja) 2017-01-09 2022-08-25 テサロ， インコーポレイテッド 抗ｐｄ－１抗体を用いてがんを処置する方法
CN110944651A (zh) 2017-02-08 2020-03-31 蜻蜓疗法股份有限公司 用于自然杀伤细胞激活的多特异性结合蛋白及其治疗癌症的治疗性用途
CN110944661A (zh) 2017-02-20 2020-03-31 蜻蜓疗法股份有限公司 结合her2、nkg2d和cd16的蛋白质
WO2018156802A1 (en) * 2017-02-22 2018-08-30 Aleta Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for treatment of cancer
EP3589662A4 (en) * 2017-02-28 2020-12-30 Harpoon Therapeutics, Inc. INDUCTIBLE MONOVALENT ANTIGBINDING PROTEIN
MX2019012198A (es) * 2017-04-11 2020-01-21 Inhibrx Inc Constructos de polipéptidos multiespecíficos que tienen unión limitada a cd3 y métodos de utilización de los mismos.
US20200115461A1 (en) * 2017-05-03 2020-04-16 Harpoon Therapeutics, Inc. Compositions and methods for adoptive cell therapies
CN110891974B (zh) 2017-05-12 2021-08-06 哈普恩治疗公司 间皮素结合蛋白质
CN115028727A (zh) 2017-05-12 2022-09-09 哈普恩治疗公司 靶向msln的三特异性蛋白质及使用方法
WO2018222949A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable anti-pdl1 antibodies, and methods of use thereof
MX2020002667A (es) 2017-09-08 2020-08-03 Maverick Therapeutics Inc Proteinas de unión condicionalmente activadas restringidas.
US10927180B2 (en) 2017-10-13 2021-02-23 Harpoon Therapeutics, Inc. B cell maturation antigen binding proteins
US11136403B2 (en) 2017-10-13 2021-10-05 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific proteins and methods of use
SG11202002384VA (en) 2017-10-14 2020-04-29 Cytomx Therapeutics Inc Antibodies, activatable antibodies, bispecific antibodies, and bispecific activatable antibodies and methods of use thereof
AU2018376309A1 (en) 2017-11-28 2020-06-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Ligand-binding molecule having adjustable ligand-binding activity
CA3083259A1 (en) 2017-11-28 2019-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide including antigen-binding domain and carrying section
WO2019113386A1 (en) * 2017-12-07 2019-06-13 Janux Therapeutics, Inc. Modified bispecific t cell receptors
US11891426B2 (en) 2017-12-15 2024-02-06 Aleta Biotherapeutics Inc. CD19 variants
AU2019218136A1 (en) 2018-02-08 2020-08-13 Dragonfly Therapeutics, Inc. Antibody variable domains targeting the NKG2D receptor
US11866498B2 (en) 2018-02-08 2024-01-09 Genentech, Inc. Bispecific antigen-binding molecules and methods of use
CA3115461A1 (en) * 2018-03-09 2019-09-12 AskGene Pharma, Inc. Novel cytokine prodrugs
US20210238290A1 (en) * 2018-05-07 2021-08-05 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and p-cadherin
WO2019230868A1 (ja) * 2018-05-30 2019-12-05 中外製薬株式会社 単ドメイン抗体含有リガンド結合分子
WO2019230866A1 (en) * 2018-05-30 2019-12-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide comprising il-1r1 binding domain and carrying moiety
AU2019299434A1 (en) * 2018-07-02 2021-01-07 The General Hospital Corporation Antibody tumor-targeting assembly complexes
US20220153848A1 (en) * 2018-08-08 2022-05-19 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen
MX2021003554A (es) 2018-09-25 2021-05-27 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas de union a dll3 y metodos de uso.
CN114746105A (zh) * 2018-12-14 2022-07-12 普罗维瓦疗法香港有限公司 Il-15组合物及其使用方法
JP2022524338A (ja) 2019-03-05 2022-05-02 武田薬品工業株式会社 拘束され、条件的に活性化された結合タンパク質
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
JP7137696B2 (ja) 2019-05-14 2022-09-14 プロヴェンション・バイオ・インコーポレイテッド １型糖尿病を予防するための方法および組成物
AU2020288499A1 (en) 2019-06-05 2022-01-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody cleavage site-binding molecule
EP4072584A1 (en) 2019-12-13 2022-10-19 Genentech, Inc. Anti-ly6g6d antibodies and methods of use
US20210301015A1 (en) * 2020-01-17 2021-09-30 Aetio Biotherapy, Inc. Pro-antibody that reduces off-target toxicity
CN114945597A (zh) * 2020-01-17 2022-08-26 艾提欧生物疗法有限公司 降低脱靶毒性的前抗体
WO2021168303A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Flt3 binding proteins and methods of use
EP4132656A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 CytomX Therapeutics, Inc. Compositions containing activatable antibodies
EP4146695A1 (en) 2020-05-04 2023-03-15 Immunorizon Ltd. Precursor tri-specific antibody constructs and methods of use thereof
US11767353B2 (en) 2020-06-05 2023-09-26 Theraly Fibrosis, Inc. Trail compositions with reduced immunogenicity
AU2021287998A1 (en) 2020-06-11 2023-02-02 Benaroya Research Institute At Virginia Mason Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
CR20220604A (es) 2020-06-19 2023-01-23 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos para linfocitos t activados por proteasa
JP2023531067A (ja) 2020-06-25 2023-07-20 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ３／抗ｃｄ２８二重特異性抗原結合分子
WO2022036224A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Chimeric antigen receptor t cells for treating autoimmunity
US11661459B2 (en) 2020-12-03 2023-05-30 Century Therapeutics, Inc. Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof
US11555078B2 (en) 2020-12-09 2023-01-17 Janux Therapeutics, Inc. Compositions and methods related to tumor activated antibodies targeting PSMA and effector cell antigens
AU2021401052A1 (en) 2020-12-18 2023-06-22 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity
WO2022170619A1 (en) * 2021-02-11 2022-08-18 Adagene Pte. Ltd. Anti-cd3 antibodies and methods of use thereof
CN117999096A (zh) * 2021-07-13 2024-05-07 中国抗体制药有限公司 治疗神经学疾病的方法
WO2023186760A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Improved folr1 protease-activatable t cell bispecific antibodies
WO2023196818A1 (en) 2022-04-04 2023-10-12 The Regents Of The University Of California Genetic complementation compositions and methods
WO2023201291A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of mosunetuzumab and methods of use
WO2024068572A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Improved protease-activatable t cell bispecific antibodies

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3578568A (en) 1968-11-29 1971-05-11 Atlantic Richfield Co Purification of low molecular weight epoxides by extractive distillation with a glycol or glycol ether
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0659438A1 (en) 1993-12-23 1995-06-28 Boehringer Mannheim Gmbh Conjugates consisting of peptidic T cell antigens and cell binding groups, and their use for therapy
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US20040197336A1 (en) 1995-05-03 2004-10-07 Self Colin Henry Bispecific antibodies in which the binding capability is reversibly inhibited by a photocleavable moiety
JP4212111B2 (ja) * 1995-05-03 2009-01-21 バイオエンハンスメンツ リミテッド 結合能力が光開裂性分子により可逆的に阻害される二重特異性抗体
CA2240834C (en) 1995-12-22 2013-12-03 Immunomedics, Inc. Use of immunoconjugates to enhance the efficacy of multi-stage cascade boosting vaccines
WO1998010651A1 (en) 1996-09-12 1998-03-19 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
HRP970566A2 (en) 1996-10-30 1998-08-31 Jones Deborah Defeo Conjugates useful in the treatment of prostate canser
GB9624993D0 (en) 1996-11-30 1997-01-15 Aepact Ltd Tumour therapy
JP2002501488A (ja) 1997-03-20 2002-01-15 アメリカ合衆国 Ｃｄ２２を保有する細胞および腫瘍へ標的化された、組換え抗体および免疫複合体
EP1009420B1 (en) 1997-07-10 2003-12-17 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
EP1071752B1 (en) † 1998-04-21 2003-07-09 Micromet AG CD19xCD3 SPECIFIC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
EP1100830B1 (en) 1998-07-28 2003-10-01 Micromet AG Heterominibodies
WO2000058362A1 (en) * 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
WO2002044197A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Fish Eleanor N Cytokine receptor binding peptides
WO2003027135A2 (en) 2001-09-26 2003-04-03 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of Health And Human Services Mutated anti-cd22 antibodies with increased affinity to cd22-expressing leukemia cells
WO2003046012A1 (en) 2001-11-30 2003-06-05 Crucell Holland B.V. Antigen presenting cell targeting conjugate, an antigen presenting cell contacted with such conjugate, their use for vaccination or as medicament, and methods for their production or generation
CN100522999C (zh) 2002-02-14 2009-08-05 免疫医疗公司 抗cd20抗体及其融合蛋白和使用方法
US8029803B2 (en) 2002-06-20 2011-10-04 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for eliciting an immune response
DK2357006T3 (en) 2002-07-31 2015-12-21 Seattle Genetics Inc Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
ZA200503075B (en) 2002-11-07 2006-09-27 Immunogen Inc Anti-CD33 antibodies and method for treatment of acute myeloid leukemia using the same
EP1590372A2 (en) 2003-02-06 2005-11-02 Micromet AG Trimeric polypeptide construct to induce an enduring t cell response
US8007805B2 (en) 2003-08-08 2011-08-30 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for breaking host tolerance to foreign antigens
RU2401843C2 (ru) * 2003-10-16 2010-10-20 Микромет Аг Полиспецифические деиммунизирующие cd3-связующие
EP1691833B1 (en) 2003-11-28 2010-03-03 Micromet AG Compositions comprising polypeptides
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
GB0404187D0 (en) * 2004-02-25 2004-03-31 Biotransformations Ltd Binding agents
US20060045881A1 (en) 2004-08-26 2006-03-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cancer vaccines
RU2007108716A (ru) 2004-09-10 2008-10-20 Вайет (Us) Гуманизированные антитела к антигену 5т4 и конъюгаты гуманизированного антитела к антигену 5т4 с калихеамицином
CA2597638A1 (en) 2005-02-16 2006-08-24 University Of Zuerich Methods for treating cancer using an immunotoxin comprising an exotoxin a moiety having a furin cleavage site replaced with a cancer-associated protease site cleaved by mmp-2 or mmp-9
KR20080056301A (ko) 2005-10-13 2008-06-20 바이렉스 메디칼 코포레이션 면역 반응을 유도시키기 위한, Ｃ형 간염 바이러스폴리펩티드 및 Ｆｃ 단편을 함유하는 키메라 항원
EP1957524B1 (en) 2005-11-18 2010-02-17 Dabur Pharma Limited Targeted fusion proteins for cancer therapy
GB0605702D0 (en) 2006-03-21 2006-05-03 Biotransformations Ltd Materials and methods for immune cell stimulation
US20080171059A1 (en) 2006-08-07 2008-07-17 Shanshan Wu Howland Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
US20100215670A1 (en) 2006-10-30 2010-08-26 Jeannick Cizeau Immunotoxin Fusions Comprising An Antibody Fragment and a Plant Toxin Linked by Protease Cleavable Linkers
WO2008063113A1 (en) 2006-11-20 2008-05-29 Cepep Iii Ab Cell -penetrating peptides and constructs containing them consisting 15-25 amino acids of tumor supressor protein p14arf or p19arf
JP4866467B2 (ja) 2007-01-30 2012-02-01 エピバックス インコーポレーテッド 調節性ｔ細胞エピトープ、組成物およびその使用
CN101679508B (zh) 2007-02-02 2014-11-05 贝勒研究院 基于靶向抗原至抗原呈递细胞上表达的dcir的疫苗
EP2532676B1 (en) 2007-08-15 2017-03-22 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Protease-regulated antibody
GB0716160D0 (en) 2007-08-17 2007-09-26 Biotransformations Ltd Materials and methods for treating cancers which express folate receptors
EP3492488A1 (en) 2007-08-22 2019-06-05 The Regents of The University of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
HUE027499T2 (en) 2008-10-01 2016-10-28 Amgen Res (Munich) Gmbh Bispecific single chain antibodies specific for high molecular weight target antigens
US20110178279A1 (en) * 2009-08-03 2011-07-21 Williams John C Development of masked therapeutic antibodies to limit off-target effects: application to anti-egfr antibodies
JP2012511033A (ja) † 2008-12-08 2012-05-17 テゴファーム コーポレーション 多価化合物の可逆阻害用マスキングリガンド
US8895702B2 (en) 2008-12-08 2014-11-25 City Of Hope Development of masked therapeutic antibodies to limit off-target effects; application to anti-EGFR antibodies
EP3543256A1 (en) * 2009-01-12 2019-09-25 Cytomx Therapeutics Inc. Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
CN105837691B (zh) 2009-03-10 2021-06-29 贝勒研究院 靶向抗原呈递细胞的癌症疫苗
EP2496256A4 (en) 2009-11-05 2013-07-17 Ct Molecular Med & Immunology IMMUNOCONJUGATES COMPRISING PEPTIDES FROM POXVIRUS AND ANTIBODIES DIRECTED AGAINST ANTIGEN-PRESENTING CELLS FOR SUBUNIT-BASED POXVIRUS VACCINES
US9193791B2 (en) 2010-08-03 2015-11-24 City Of Hope Development of masked therapeutic antibodies to limit off-target effects
BR112013001847A2 (pt) 2010-08-24 2016-05-31 Hoffmann La Roche anticorpo biespecífico, método de preparação do anticorpo biespecífico, do anticorpo biespecífico trivalente, métodos e composição farmacêutica
MX340556B (es) 2010-08-24 2016-07-14 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos activables.
EP3138581B1 (en) 2011-03-17 2019-01-02 The University of Birmingham Re-directed immunotherapy
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
EP2827889A1 (en) 2012-03-19 2015-01-28 Deutsches Krebsforschungszentrum B-cell receptor complex binding proteins containing t-cell epitopes
CN110078827A (zh) 2012-04-27 2019-08-02 西托姆克斯治疗公司 结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法
WO2013192550A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-jagged 1/jagged 2 cross-reactive antibodies, activatable anti-jagged antibodies and methods of use thereof
WO2013192546A1 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies having non-binding steric moieties and mehtods of using the same
US9487590B2 (en) 2012-09-25 2016-11-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies that bind interleukin-6 receptor and methods of use thereof
WO2014107599A2 (en) 2013-01-04 2014-07-10 Cytomx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for detecting protease activity in biological systems
TW201522368A (zh) 2013-03-15 2015-06-16 Bayer Healthcare Llc 抗組織因子路徑抑制劑之前藥抗體
CN116063479A (zh) 2013-06-04 2023-05-05 西托姆克斯治疗公司 用于缀合可活化抗体的组合物和方法
HRP20220553T1 (hr) 2013-07-25 2022-06-10 Cytomx Therapeutics Inc. Polispecifična protutijela, polispecifična protutijela koja se mogu aktivirati i postupci uporabe navedenih protutijela
EP3049111A2 (en) 2013-09-25 2016-08-03 Cytomx Therapeutics Inc. Matrix metalloproteinase substrates and other cleavable moieties and methods of use thereof
US9540440B2 (en) 2013-10-30 2017-01-10 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies that bind epidermal growth factor receptor and methods of use thereof
EP4176896A1 (en) 2014-01-31 2023-05-10 Cytomx Therapeutics Inc. Matriptase and u-plasminogen activator substrates and other cleavable moieties and methods of use thereof
WO2016014974A2 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-cd3 antibodies, activatable anti-cd3 antibodies, multispecific anti-cd3 antibodies, multispecific activatable anti-cd3 antibodies, and methods of using the same

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11168139B2 (en) 2016-11-28 2021-11-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding domain, and polypeptide including conveying section
US11932697B2 (en) 2016-11-28 2024-03-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding domain, and polypeptide including conveying section

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JP2015509952A (ja) 2015-04-02
CN104321081A (zh) 2015-01-28
EP2819701A1 (en) 2015-01-07
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