JP6255343B2

JP6255343B2 - Ｄ−アロイソロイシンの製造方法

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Inventors: 上原　久俊; 久俊上原; 夕紀阿須間
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Description

本発明は、安価なＬ−イソロイシンからＤ−アロイソロイシンを製造する工業的方法に関する。

Ｄ−アロイソロイシンは、医薬品（特許文献１参照）の中間体として有用な化合物である。しかし、Ｄ−アロイソロイシンは非天然アミノ酸であるため化学合成によって製造する必要があり、その工業的に安価な製造方法は限られていた。

従来、Ｄ−アロイソロイシンの実用的な合成法としては、安価なＬ−イソロイシンから誘導する方法が知られている。例えば、Ｌ−イソロイシンをヒダントインに変換した後、容易にエピメリ化するヒダントインのＤ体のみを酵素的に加水分解し、Ｄ−アロイソロイシンを得る方法（特許文献２、３参照）が知られている。これらの方法はエピメリ化を伴いながら加水分解反応が進行するため、５０％を超える収率でＤ−アロイソロイシンを得ることができるが、酵素反応の前にＬ−イソロイシンをヒダントインに誘導する必要があるため、直接的かつ効率的な方法であるとはいえない。また、酵素反応は水中で実施されるため、水溶性のＤ−アロイソロイシンを単離、精製することは容易ではない。

一方、Ｌ−イソロイシンのα位をエピメリ化して、Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンのエピマー混合物を得ることができる（特許文献４参照）。また、このエピマー混合物を、溶媒中で（２Ｓ，３Ｓ）−ジベンゾイル酒石酸等を用いて分割する方法が報告されている（特許文献５、非特許文献１参照）。この方法は、Ｌ−イソロイシンからの誘導化工程を必要とせずにＤ−アロイソロイシンを得ることができ、有用である。しかしながら、Ｌ−イソロイシンのエピメリ化工程、分割剤との錯体形成工程、錯体の分解工程の３工程を要する。さらに、１：１のエピマー混合物からの分割であるため、収率が５０％を超えることはできない。

また、非天然型アミノ酸の効率的な合成法として、不斉転換反応が知られている（非特許文献２、３参照）。これは、アミノ酸のラセミ化（またはエピメリ化）と分割剤による光学分割を同一条件下で行い、目的とするアミノ酸と分割剤の塩を結晶として取り出すことで、目的とするアミノ酸の塩を５０％以上の収率で得る方法である。しかしながら、不斉転換反応による無保護天然アミノ酸からの非天然アミノ酸合成はごくわずかしか報告されておらず、Ｄ−アロイソロイシンの合成例はない。これは、通常８０℃以上のラセミ化（またはエピメリ化）条件と、効率的な分割条件を両立させる反応条件を見つけることが非常に困難であることによると考えられる。

国際公開公報第１９９４／０２８９０１号ＵＳ２００３／０２１９８７９ＵＳ２００５／０２０２５４２ＥＰ５７０９２Ｂ１特開平１１−２２８５１２号

ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＡｓｙｍ．，２００２，１３，２６４９．Ｔｏｐ．Ｃｕｒｒ．Ｃｈｅｍ．，２００７，２６９，８３．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３，９４１７．

本発明は、安価なＬ−イソロイシンから、医薬中間体として有用なＤ−アロイソロイシンを、誘導化工程なく、短工程かつ高収率で製造する実用上適した工業的方法を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、Ｌ−イソロイシンの不斉転換反応により、Ｄ−アロイソロイシンを短工程かつ高収率で製造できることを見出した。
本発明の不斉転換反応は、Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンのエピメリ化反応条件に、Ｄ−アロイソロイシンの晶析を組み合わせることで達成された。このＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンのエピメリ化は、以下の反応機構で進行していると考えられる（非特許文献２参照）。すなわち、Ｌ−イソロイシンとアルデヒド類からイミンが生成し、酸性度の高まったα位の脱プロトン、プロトン化、イミンの加水分解によりＤ−アロイソロイシンが生成、エピメリ化が進行する。ここで、Ｌ−イソロイシンは２つの不斉中心を持つため、この過程で得られるＤ−アロイソロイシンは、Ｌ−イソロイシンのエナンチオマーではなくジアステレオマーであり、この過程はラセミ化ではなくエピメリ化となる。Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンは熱力学的にほぼ等しいため、このエピメリ化はほぼ１：１の比率で平衡に達する。
不斉転換反応の原理に基づいて、この反応条件下に、Ｄ−アロイソロイシンと溶解度の低い塩を作る化合物（Ｘ）を共存させ、Ｄ−アロイソロイシン塩を結晶として系外に除去できれば、平衡によりさらにＤ−アロイソロイシンが供給され、Ｄ−アロイソロイシン塩を５０％以上の収率で得ることができると考えられる。

しかしながら、前述したように、これまで不斉転換反応により無保護天然アミノ酸からの非天然アミノ酸合成はごくわずかしか報告されておらず、Ｄ−アロイソロイシンを合成する方法は報告されていない。これは、通常８０℃以上の高温が必要なエピメリ化条件と、通常冷却して結晶を取り出す分割条件を両立させる反応条件を見つけることが非常に困難であることによると考えられる。実際、（２Ｓ，３Ｓ）−ジベンソイル酒石酸は、Ｄ−アロイソロイシンと錯体を形成することが知られているが（特許文献５、非特許文献１参照）、これらの文献において錯体形成は水やメタノールを含む水中で行われ、２５℃において晶析を行っている。このような錯体形成条件ではエピメリ化は起こり得ず、文献中でも不斉転換反応の可能性は論じられていない。
本発明者らは、分割剤や反応条件を種々検討した結果、Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンとが相互にエピメリ化している反応系において、具体的には、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンのエピマー混合物を、有機溶媒中、アルデヒド類の存在下、加熱条件下で特定の酒石酸誘導体と反応させて、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体を析出させ、それを系外に除去することによって、平衡によりさらにＤ−アロイソロイシンが供給され、その結果、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体を高い収率で得ることができることを見出し、発明を完成するに至った。

即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
［１］Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンのエピマー混合物と、下記一般式（１）：

（式中、ｎ個のＲは、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、塩素原子、臭素原子またはニトロ基を示し、ｎは０、１または２である。）
で表される酒石酸誘導体を、有機溶媒中、アルデヒド類の存在下、６０℃〜１５０℃の温度で反応させることにより、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体を晶析させる工程
を包含することを特徴とするＤ−アロイソロイシンの製造方法。
［２］有機溶媒が、沸点が７０℃以上であって、炭化水素系溶媒、エステル系溶媒および脂肪酸系溶媒から選択される沸点が７０℃以上の少なくとも１種の溶媒であることを特徴とする、上記［１］に記載のＤ−アロイソロイシンの製造方法。
［３］Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体を晶析させる工程において、さらに有機酸を存在させることを特徴とする上記［１］または［２］に記載のＤ−アロイソロイシンの製造方法。

本発明によれば、安価なＬ−イソロイシンから、医薬品の中間体として有用なＤ−アロイソロイシンを、（２Ｓ，３Ｓ）−酒石酸誘導体を用いた不斉転換反応により簡便な操作で収率良く製造できる。

本発明のＤ−アロイソロイシンの製造方法は、不斉転換反応（エピメリ化反応条件下での不溶性錯体形成）により行われる。
具体的には、有機溶媒中、アルデヒド類の存在下、６０℃〜１５０℃の温度で、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物（エピマー混合物）と下記一般式（１）：

（式中、ｎ個のＲは、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、塩素原子、臭素原子またはニトロ基を示し、ｎは０、１または２である。）
で表される酒石酸誘導体を反応させることにより、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体を析出させる工程を包含する。この工程においては、Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンとが相互にエピメリ化している。即ち、この工程は、エピメリ化と、錯体形成および晶析を、同一反応系で、しかも同一条件で行うことを特徴としている。

Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンとが相互にエピメリ化している状態は、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物に、有機溶媒中、６０℃〜１５０℃の温度で、アルデヒド類を存在させることにより実現できる。
Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物は、その混合比は任意の割合であってよく、Ｌ−イソロイシンの十分なエピメリ化によって得られるほぼ１：１の混合物でもよい。本発明では、工業的に入手可能なＬ−イソロイシンを原料として用いることが、工程短縮の観点から好ましい。

上記アルデヒド類としては、エピメリ化を触媒するものであれば特に限定されず、例えば、ベンズアルデヒド、サリチルアルデヒド、４−ヒドロキシベンズアルデヒド、ｐ−アニスアルデヒド、２−ニトロベンズアルデヒド、５−ニトロサリチルアルデヒド、フルフラール等の芳香族アルデヒド；ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ｎ−ブチルアルデヒド、ｎ−ヘプチルアルデヒド、クロチルアルデヒド等の脂肪族アルデヒドが挙げられる。中でも、副反応が少ない点から、芳香族アルデヒドが好ましく、エピメリ化の触媒作用の高い点から、サリチルアルデヒド、２−ニトロベンズアルデヒド、５−ニトロサリチルアルデヒド、フルフラールがより好ましく、工業的に安価かつ安定な点から、サリチルアルデヒドが特に好ましい。

アルデヒド類の使用量は、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物に対して、通常０．００１〜１０当量、好ましくは０．０５〜１当量であり、さらに好ましくは、十分なエピメリ化速度を保ちつつ、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体の結晶化を妨げない点から、０．１〜０．５当量である。

また、有機酸を共存させることにより、上記エピメリ化は円滑に進行する。有機酸としては、特に限定されないが、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、ヘキサン酸等の脂肪酸；安息香酸、サリチル酸、テレフタル酸等の芳香族カルボン酸が挙げられる。中でも、一般に常温で液体のため、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体に混入しにくい点から、脂肪酸が好ましく、安価で毒性の低い点から、酢酸がより好ましい。

有機酸、特に脂肪酸は、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体の溶解度が高く、過剰使用は収率の低下を招くが、逆に少ないと十分なエピメリ化速度を保つことができないため、その使用量は、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物１ｇに対して、通常０．１〜５０ｍｌ、好ましくは０．５〜１０ｍｌ、より好ましくは１〜５ｍｌである。また、有機酸を有機溶媒として用いてもよい。
なお、本明細書において「倍体積量」とは、基準物質が常温常圧液体の場合は液体体積に対する使用液体の体積倍率、基準物質が常温常圧固体の場合は固体の重量（ｇ）値に対する使用液体の体積（ｍｌ）値の比（ｍｌ／ｇ）とする。

上述のように、Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンとは、相互にエピメリ化しており、このうち、Ｄ−アロイソロイシンは、反応系中に存在する上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体との錯体を形成する。当該錯体は、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体が１：１の比率で混合していること、また、後述するように、アルコール中で容易に分離できることから、通常のジアステレオマー塩ではなく、より弱い相互作用によって結びついた錯体であると考えられる（特許文献５、非特許文献１参照）。

上記一般式（１）中、Ｒで示される「Ｃ_１−６アルキル基」としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル等が挙げられる。また、Ｒで示される「Ｃ_１−６アルコキシ基」としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、へキシルオキシ等が挙げられる。
Ｒは、好ましくは、水素原子またはＣ_１−６アルキル基であり、より好ましくは水素原子またはメチルであり、特に好ましくは水素原子である。
なお、上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体は２つの不斉中心を持ち、その立体配置は（２Ｓ，３Ｓ）である。

上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体の具体例としては、（２Ｓ，３Ｓ）−ジベンゾイル酒石酸、（２Ｓ，３Ｓ）−ジ（ｐ−トルオイル）酒石酸、（２Ｓ，３Ｓ）−ジ（３，４−ジメチルベンゾイル）酒石酸、（２Ｓ，３Ｓ）−ジ（２−クロロベンゾイル）酒石酸などが挙げられる。中でも、工業的に安価に入手可能な点から、（２Ｓ，３Ｓ）−ジベンゾイル酒石酸（Ｒ＝Ｈ、以下「ＤＢＴＡ」と略称する。）および（２Ｓ，３Ｓ）−ジ（ｐ−トルオイル）酒石酸（Ｒ＝ｐ−Ｍｅ、ｎ＝１、以下「ＤＴＴＡ」と略称する。）が好ましく、高収率で上記錯体を得ることができる点から、ＤＢＴＡが特に好ましい。また、上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体は、水和物等の溶媒和物やアミンやアルカリ金属等の塩であってもよい。
上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体の使用量は、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物に対して、通常０．５〜２当量である。上記酒石酸誘導体はＤ−アロイソロイシンと１：１の比率で錯体を形成するため、経済性の点から、好ましくは０．８〜１．２当量、さらに好ましくは０．９〜１．１当量である。

上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体は、Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンとが相互にエピメリ化している反応系において存在しさえすれば、その添加時期は限定されない。Ｌ−イソロイシンを出発原料として用いる際には、Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンとが相互にエピメリ化している反応系に添加してもよく（即ち、原料のＬ−イソロイシンがＤ−アロイソロイシンへと十分にエピメリ化した後に添加する）、あるいは、Ｌ−イソロイシンがＤ−アロイソロイシンへとエピメリ化する前に添加してもよい（即ち、原料のＬ−イソロイシンと酒石酸誘導体を同時に添加する）。
これらのうち、Ｌ−イソロイシンを原料に用いる場合には、十分にエピメリ化した後に添加するのが好ましい。これは、酒石酸誘導体は高温の反応条件下で徐々に分解するため、反応系にＤ−アロイソロイシンが存在しないと収率の低下を招くためである。十分エピメリ化が進行した時点で酒石酸誘導体を添加すると、Ｄ−アロイソロイシンの存在量に応じた酒石酸誘導体が錯体を形成して系外に除去されるため、分解反応を抑制することができる。

Ｌ−イソロイシンを出発原料として用い、十分にエピメリ化した後に上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体を添加する場合に、不斉転換反応に用いる有機溶媒共存下にＬ−イソロイシンとアルデヒド類を加熱してもよいが、有機酸（例えば酢酸）のみを有機溶媒として加熱することが、速やかに十分にエピメリ化したＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物を得られるため好ましい。錯体を析出させる必要がないため、反応温度は高温で良く、通常８０℃〜１５０℃であり、好ましくは８０℃〜１３０℃であり、より好ましくは８０℃〜１２０℃である。

上記不斉転換反応で用いられる有機溶媒は、エピメリ化が十分に進行し、かつＤ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体が十分に晶析するような溶媒を選択することが重要である。エピメリ化の進行の点からは、沸点がエピメリ化に必要な温度以上であることが必要である。有機溶媒の沸点としては、好ましくは６０℃以上、より好ましくは６５℃以上、さらに好ましくは７０℃以上、特に好ましくは８０℃以上である。具体的には、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、トルエン、キシレン等の炭化水素系溶媒；ｎ−プロピルエーテル、イソプロピルエーテル、ｎ−ブチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒；クロロホルム、ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒；メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン系溶媒；アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル系溶媒；２−プロパノール、ｔ−ブタノール、２−エチルヘキサノール等のアルコール系溶媒；ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、ヘキサン酸等の脂肪酸系溶媒等が挙げられ、これらは単独でも複数の有機溶媒を任意の割合に混合して用いてもよい。当該錯体を収率良く得るためには、不斉転換反応の温度において、当該錯体の溶解度が十分に低く、大部分の成分が当該錯体として析出すること、かつＬ−イソロイシンが十分量溶解して反応系に供給されることが望ましい。従って、好ましい有機溶媒は、炭化水素系溶媒、エーテル系溶媒、エステル系溶媒、ケトン系溶媒および脂肪酸系溶媒から選択される沸点が７０℃以上の溶媒であり、より好ましい有機溶媒は、炭化水素系溶媒、エステル系溶媒および脂肪酸系溶媒から選択される沸点が７０℃以上の溶媒であり、更に好ましくはヘプタン、トルエン、キシレン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸、プロピオン酸、ブタン酸、ヘキサン酸であり、特に好ましくは沸点が８０℃以上のヘプタン、トルエン、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸である。

有機溶媒の使用量は、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物１ｇに対して、通常１〜５０ｍｌである。溶媒が少なすぎると晶析したＤ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体の析出により、反応系の攪拌が困難になるため、好ましくは１ｍｌ以上、更に好ましくは２ｍｌ以上、特に好ましくは３ｍｌ以上である。一方、有機溶媒の過剰使用は当該錯体の溶解量が増加し、溶液中のＤ−アロイソロイシン量が増加し、エピメリ化の平衡が移動しないため、好ましくは２０ｍｌ以下、更に好ましくは１０ｍｌ以下、特に好ましくは５ｍｌ以下である。
また、段階的に冷却しながら溶媒を添加する方法が特に好ましい。即ち、反応中の溶媒量を、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物１ｇに対して、２〜５ｍｌとして十分に不斉転換反応を進行させた後、エピメリ化速度が遅くなる温度まで冷却したところで溶媒を追加してから、エピメリ化の平衡が移動しないように、速やかに更に冷却する。エピメリ化速度が遅くなる温度は、種々の条件によって異なるが、例えば、０℃〜６０℃であり、好ましくは、４０℃〜６０℃である。この手法により、反応時の溶媒量を少なくして当該錯体の析出量を増加させ、冷却によって錯体が析出しても十分攪拌できる量の溶媒を共存させることができる。
また、有機溶媒には、若干の量の有機溶媒以外の溶媒（特に、水）が混合されていてもよい。有機溶媒以外の溶媒（特に、水）はエピメリ化を阻害するため極力少ないことが好ましく、その使用量は、有機溶媒の使用量の１倍体積量以下であることが好ましく、０．２倍体積量以下であることが更に好ましく、０．１倍体積量以下であることが特に好ましい。しかしながら、エピメリ化の反応機構の第１段階に示したイミン形成において水が生成することから、反応系中には少量の水が存在していると考えられ、極少量の水は反応に悪影響を与えない。

上記不斉転換反応の反応温度は、エピメリ化が十分に進行し、かつＤ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体が十分に析出するような温度を選択することが重要であり、通常、６０℃〜１５０℃である。エピメリ化が進行するためには十分な加熱が必要であるため、反応温度は好ましくは６５℃以上であり、更に好ましくは７０℃以上であり、特に好ましくは８０℃以上である。その一方、必要以上の高温は、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体の溶解度を高め、溶液中のＤ−アロイソロイシン量が増加し、エピメリ化の平衡が移動せず、収率が低下する。そのため、反応温度は好ましくは１２０℃以下であり、更に好ましくは１００℃以下であり、特に好ましくは９０℃以下である。

上記不斉転換反応では、酸性の添加剤を加えることで、反応後に残存するＬ−イソロイシンを溶解度の高い塩へ変換でき、錯体中のジアステレオ選択性の向上が期待できる。酸性の添加剤は、Ｌ−イソロイシンを溶解度の高い塩へ変換できる限り、特に限定されないが、塩酸、硫酸、リン酸等の鉱酸；メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のスルホン酸；トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、シュウ酸等の有機酸が挙げられる。なお、ここでジアステレオ選択性とは、以下の式で表されるジアステレオマー純度を示す。
ジアステレオマー純度（％ｄｅ）＝（Ｄ−アロイソロイシン定量値−Ｌ−イソロイシン定量値）／（Ｄ−アロイソロイシン定量値＋Ｌ−イソロイシン定量値）
ここでＤ−アロイソロイシン及びＬ−イソロイシンの定量値は、反応により得られた結晶等を実施例記載の方法で定量した値であり、酒石酸誘導体との錯体を形成しているかどうかは問わない。すなわち、酒石酸誘導体との錯体を形成するＤ−アロイソロイシンの定量値は、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体と錯体を形成していないＤ−アロイソロイシン及びその塩の総量であり、酒石酸誘導体との錯体を形成しないＬ−イソロイシンの定量値は、Ｌ−イソロイシン及びその塩の量である。
酸性の添加剤の使用量は、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物に対して、通常０．０１〜０．２当量である。過剰に使用するとＤ−アロイソロイシンとも塩を形成して溶解するため、好ましくは０．０１〜０．１当量、さらに好ましくは０．０１〜０．０５当量である。
酸性の添加剤の添加時期は、反応の開始前でも反応中でも反応後でもよいが、強酸性成分は反応速度を低下させるため、また、完全に冷却した後ではＬ−イソロイシンの再溶解の効率が低下するため、反応終了前後〜冷却中に添加することが好ましい。

上記不斉転換反応の反応時間は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定されないが、製造コストの点から、１〜２４時間の範囲で行うことが好ましく、更に好ましくは２〜１０時間である。

Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体の析出は、溶媒や酒石酸誘導体の種類にもよるが、不斉転換反応開始直後から始まるが、反応系を冷却する、および／または、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体の溶解度が低い溶媒を添加する、等の手段により、析出を促進させることができる。

不斉転換反応の終了後は、冷却により上記錯体を十分に析出させた後、ろ過することが収率向上につながるが、冷却しすぎるとＬ−イソロイシンも析出し、ジアステレオ選択性が低下する。冷却温度は通常−２０℃〜５０℃であり、好ましくは０℃〜３０℃である。
特に残存するＬ−イソロイシンの量が多い場合は、ジアステレオ選択性が顕著に低下する。Ｌ−イソロイシンの残存量を減らすためには、エピメリ化条件でＤ−アロイソロイシン錯体が十分に析出する条件を選ぶことが好ましい。具体的には、反応温度を徐々に下げて錯体の析出を促進しながらエピメリ化を行う、反応の途中でヘプタン等の貧溶媒を添加して錯体をより析出させる、等の方法がある。

特に、水の添加は、水への溶解度が低い上記錯体は溶解させずにＬ−イソロイシンを溶解させることで、ジアステレオ選択性を向上させることができる。多量の水を添加することでエピメリ化が停止するため、十分に不斉転換反応が進行した後に添加することが好ましい。添加する水の量は上記の効果が得られれば特に限定されないが、Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの混合物１ｇに対して、通常０．１〜５０ｍｌである。過剰使用は錯体の溶解量が増えるため、好ましくは０．２〜２０ｍｌ、更に好ましくは０．５〜１０ｍｌである。添加する温度は特に限定されないが、高温での添加は酒石酸誘導体の分解を招く恐れがあり通常０℃〜１００℃、好ましくは２０℃〜８０℃、低温での添加は析出したＬ−イソロイシンの再溶解に時間がかかることから、更に好ましくは４０℃〜７０℃である。

上記不斉転換反応で得られるＤ−アロイソロイシンと上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体との錯体は、イソプロピルアルコールと水の混合溶媒中、加熱する公知の方法（特許文献５、非特許文献１参照）を用いて分解することができる。この時、純粋なＤ−アロイソロイシンは結晶として残るため、ろ過等の方法でＤ−アロイソロイシンを単離する。さらに、この処理により、不純物として残留していたＬ−イソロイシンが溶媒に溶解し、Ｄ−アロイソロイシンが選択的に結晶として残るため錯体時に比べてジアステレオマー純度を大幅に向上させることができる。
一方、ろ液には、上記酒石酸誘導体と少量のＤ−アロイソロイシン及びＬ−イソロイシンが回収され、再利用することができる。ろ液を濃縮し、Ｄ−アロイソロイシン及びＬ−イソロイシンを含む、上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体として再利用しても良く、また、ろ液の濃縮液を上記不斉転換反応で用いられる溶媒に溶かし、水または酸性の水溶液で洗浄してＤ−アロイソロイシンやＬ−イソロイシンを除去した後、上記酒石酸誘導体溶液として使用してもよい。

このようにして、ジアステレオ選択性が良好でかつ高い収率でＤ−アロイソロイシンを得ることができる。
具体的には、ジアステレオマー純度が５０％ｄｅ以上、更に７０％ｄｅ以上、更に８０％ｄｅ以上、特に９０％ｄｅ以上で、かつ収率が５５％以上、更に６０％以上、更に７０％、特に８０％以上で、Ｄ−アロイソロイシンと上記一般式（１）で表される酒石酸誘導体との錯体を得ることができる。
また、当該錯体を処理することにより、ジアステレオマー純度が９５％ｄｅ以上、更に９９％ｄｅ以上、特に９９．８％ｄｅ以上で、かつ収率が６０％以上、特に７０％以上という高効率でＤ−アロイソロイシンを得ることができる。

以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。なお、以下の実施例におけるＤ−アロイソロイシンのジアステレオマー純度は、ＨＰＬＣを用いて下記の条件で行った。
カラム：ダイセルＣｈｉｒａｌｐａｋＭＡ（＋）４．６ｍｍ×５０ｍｍ、移動相：２ｍｍｏｌＣｕＳＯ_４水溶液／ＭｅＯＨ＝８５／１５、流量：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：３０℃、検出波長：２５４ｎｍ
また、ジアステレオマー純度は以下の式で計算した。
ジアステレオマー純度（％ｄｅ）＝（Ｄ−アロイソロイシン定量値−Ｌ−イソロイシン定量値）／（Ｄ−アロイソロイシン定量値＋Ｌ−イソロイシン定量値）

［参考例］
Ｌ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの１：１エピマー混合物の合成は、特開平１１−２２８５１２号の方法により行った。フラスコにＬ−イソロイシン１．００ｇ（７．５０ｍｍｏｌ）、トルエン５ｍｌ、酢酸１．７２ｍｌ、サリチルアルデヒド１８３．２ｍｇ（１．５０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で３時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後、結晶をろ過、トルエン４ｍｌで洗浄し、白色結晶としてＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンの１：１エピマー混合物８３７．３ｍｇ（６．２８ｍｍｏｌ、収率８４％）を得た。

［実施例１］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４．５時間攪拌した。反応液を２０℃まで冷却した後結晶をろ過、酢酸で洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２３４ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ、収率６３％）を得た。ジアステレオマー純度は９７．８％ｄｅであった。

［実施例２］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．２ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で水０．４ｍｌを加えて反応を停止させた後、１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、水と含水酢酸で洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２６９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ、収率７２％）を得た。ジアステレオマー純度は９５．８％ｄｅであった。

［実施例３］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、トルエン０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃でトルエン０．４ｍｌを加えて１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、トルエンで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２８９ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ、収率７８％）を得た。ジアステレオマー純度は８５．２％ｄｅであった。

［実施例４］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３０６ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ、収率８２％）を得た。ジアステレオマー純度は９１．３％ｄｅであった。

［実施例５］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で２時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３２４ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ、収率８７％）を得た。ジアステレオマー純度は８０．３％ｄｅであった。

［実施例６］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で６時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３０６ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ、収率８２％）を得た。ジアステレオマー純度は９１．９％ｄｅであった。

［実施例７］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．８ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３０７ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ、収率８２％）を得た。ジアステレオマー純度は７７．２％ｄｅであった。

［実施例８］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．０８７ｍｌ（１．５ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．８ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３０６ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ、収率８２％）を得た。ジアステレオマー純度は６９．２％ｄｅであった。

［実施例９］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で２時間攪拌後、さらにヘプタン０．８ｍｌを加えて８０℃で２時間、６０℃で１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３３６ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ、収率９０％）を得た。ジアステレオマー純度は８５．１％ｄｅであった。

［実施例１０］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で２時間攪拌後、さらにヘプタン０．８ｍｌを加えて８０℃で２時間、６０℃で１時間攪拌した。反応液を２５℃に冷却後、水１．２ｍｌを添加して攪拌、さらに氷冷した後結晶をろ過、水と酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２６５ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ、収率７１％）を得た。ジアステレオマー純度は９４．６％ｄｅであった。

［実施例１１］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、トルエン０．４ｍｌを仕込み、８０℃で８時間攪拌、さらに６０℃でトルエン０．４ｍｌを加えて２０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２３１ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ、収率６２％）を得た。ジアステレオマー純度は８３．７％ｄｅであった。

［実施例１２］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で８時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて２０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２６４ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ、収率７１％）を得た。ジアステレオマー純度は９３．９％ｄｅであった。

［実施例１３］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃でヘプタン０．４ｍｌを加えて１５分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２５７ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ、収率６９％）を得た。ジアステレオマー純度は８８．７％ｄｅであった。

［実施例１４］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で２時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１５分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２９５ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ、収率７９％）を得た。ジアステレオマー純度は９２．０％ｄｅであった。

［実施例１５］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３１２ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ、収率８４％）を得た。ジアステレオマー純度は８８．２％ｄｅであった。

［実施例１６］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、ヘプタン０．１ｍｌを添加して８０℃で２時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１５分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体３１７ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ、収率８５％）を得た。ジアステレオマー純度は９４．２％ｄｅであった。

［実施例１７］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、トルエン０．４ｍｌ、酢酸０．０９ｍｌを仕込み、８０℃で９時間攪拌、さらに６０℃でトルエン０．４ｍｌを加えて１５分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、トルエン−酢酸（２０：１）で洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２９５ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ、収率７９％）を得た。ジアステレオマー純度は８０．９％ｄｅであった。

［実施例１８］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、キシレン０．４ｍｌ、酢酸０．０９ｍｌを仕込み、８０℃で９時間攪拌、さらに６０℃でキシレン０．４ｍｌを加えて１５分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、キシレン−酢酸（２０：１）で洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２９６ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ、収率７９％）を得た。ジアステレオマー純度は８３．３％ｄｅであった。

［実施例１９］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸イソプロピル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で酢酸イソプロピル０．４ｍｌを加えて３０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸イソプロピルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２８７ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ、収率７７％）を得た。ジアステレオマー純度は８８．２％ｄｅであった。

［実施例２０］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、ジブチルエーテル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて３０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２９７ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ、収率８０％）を得た。ジアステレオマー純度は８２．０％ｄｅであった。

［実施例２１］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、メチルイソブチルケトン０．４ｍｌを仕込み、８０℃で６時間攪拌、さらに６０℃でメチルイソブチルケトン０．２ｍｌを加えた。反応液を氷冷した後結晶をろ過、メチルイソブチルケトンで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体２４９ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ、収率６７％）を得た。ジアステレオマー純度は７３．７％ｄｅであった。

［実施例２２］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン５００ｍｇ（３．８１ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド８１μｌ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸０．４４ｍｌ（７．６ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＴＴＡ１．４７ｇ（３．８１ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル１ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で１０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＴＴＡの１：１錯体１．１６ｇ（２．２５ｍｍｏｌ、無水物として、収率５９％）を得た。ジアステレオマー純度は５０．９％ｄｅであった。また、ろ液にはＤ−アロイソロイシン３６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ：ＨＰＬＣ定量）が含まれており、結晶中のＤ−アロイソロイシン（１．７９ｍｍｏｌ：ＨＰＬＣ定量）とろ液中のＤ−アロイソロイシンをあわせた収率は５４％であった。

［実施例２３］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン５００ｍｇ（３．８１ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド８１μｌ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸０．８７ｍｌ（１５．２ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ１．３７ｇ（３．８１ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル２ｍｌを仕込み、８０℃で６時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル２ｍｌを加えて３０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体１．５４ｇ（３．１５ｍｍｏｌ、収率８３％）を得た。ジアステレオマー純度は９４．６％ｄｅであった。
フラスコに、上記反応で得られた錯体１．５２ｇ（３．１０ｍｍｏｌ）、イソプロピルアルコール１３．６ｍｌ、水１．５ｍｌを仕込み、１時間加熱還流させた。室温に冷却後結晶をろ過、イソプロピルアルコールで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシン３５５ｍｇ（２．６７ｍｍｏｌ、収率８６％）を得た。ジアステレオマー純度は９９．８５％ｄｅであった。

［実施例２４］
実施例２３と同様にして、錯体１．５１ｇ（３．０７ｍｍｏｌ）からＤ−アロイソロイシンを取得し、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡを含むろ液を得た。このろ液を濃縮、１Ｎ塩酸０．７５ｍｌ、水３ｍｌを添加した後さらに濃縮し、残存するイソプロピルアルコールを留去した。得られた２層分離した油状物を酢酸ブチル３ｍｌで抽出、水層を酢酸ブチル１ｍｌで再抽出した。有機層を合わせて濃縮し、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの酢酸ブチル溶液を得た。ＨＰＬＣで定量したところ、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの純分は１．１２ｇ、回収率は定量的であった。

［実施例２５］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン５００ｍｇ（３．８１ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド８１μｌ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸０．８７ｍｌ（１５．２ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、実施例２４で回収した（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ酢酸ブチル溶液２．２７ｇ（純度４８％、３．０１ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ０．２９ｇ（０．８０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．６５ｍｌを仕込み、８０℃で攪拌した。４時間後、ヘプタン０．５ｍｌを加え２時間攪拌し、さらに６０℃で酢酸ブチル２ｍｌを加えて１０分攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体１．５６ｇ（３．１９ｍｍｏｌ、収率８４％）を得た。ジアステレオマー純度は９０．２％ｄｅであった。

［比較例１］
フラスコに、Ｌ−イソロイシン１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、サリチルアルデヒド１６μｌ（０．１５ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を仕込み、１００℃で１時間攪拌した。８０℃に冷却後、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、水０．４ｍｌを仕込み、８０℃で６時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルと水で洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体１０８ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ、収率２９％）を得た。ジアステレオマー純度は９１．０％ｄｅであった。収率が５０％を大きく下回っており、反応溶媒として水を用いた場合には異性化が進行しない。

［比較例２］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、８０℃で４時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶２１８ｍｇを得た。ＨＰＬＣ定量分析の結果、ジアステレオマー純度は１５．２％ｄｅであり、Ｄ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体０．３８ｍｍｏｌ（収率５０％）とＬ−イソロイシン０．２８ｍｍｏｌからなる混合物であった。アルデヒドが存在しない条件では不斉転換反応は進行しなかった。

［比較例３］
フラスコに、参考例の方法により得たエピマー混合物１００ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡ２７３ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）、酢酸０．１７ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）、酢酸ブチル０．４ｍｌを仕込み、１００℃で４時間攪拌、さらに６０℃で酢酸ブチル０．４ｍｌを加えて１時間攪拌した。反応液を氷冷した後結晶をろ過、酢酸ブチルで洗浄し、白色結晶としてＤ−アロイソロイシンと（２Ｓ，３Ｓ）−ＤＢＴＡの１：１錯体５１ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ、収率１４％）を得た。ジアステレオマー純度は８４．９％ｄｅであった。アルデヒドが存在しない条件で１００℃に加熱したところ、回収率が著しく低下した。

Claims

Ｌ−イソロイシン、またはＬ−イソロイシンとＤ−アロイソロイシンのエピマー混合物と、下記一般式（１）：
（式中、ｎ個のＲは、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、塩素原子、臭素原子またはニトロ基を示し、ｎは０、１または２である。）
で表される酒石酸誘導体を、炭化水素系溶媒、エステル系溶媒および脂肪酸系溶媒から選択される沸点が７０℃以上の少なくとも１種の有機溶媒中、アルデヒド類の存在下、６０℃〜１５０℃の温度で反応させることにより、Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体を晶析させる工程
を包含することを特徴とするＤ−アロイソロイシンの製造方法。
有機溶媒が、ヘプタン、トルエン、酢酸イソプロピル、酢酸ブチルおよび酢酸から選択される少なくとも１種であることを特徴とする、請求項１に記載のＤ−アロイソロイシンの製造方法。
Ｄ−アロイソロイシンと酒石酸誘導体との錯体を晶析させる工程において、さらに有機酸を存在させることを特徴とする請求項１または２に記載のＤ−アロイソロイシンの製造方法。