JP6224645B2 - ワクチンおよび遺伝子療法用の組換えインフルエンザウイルス - Google Patents
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Description
RNP複合体を精製されたポリメラーゼおよびNPタンパク質の存在下でインビトロvRNA合成により生成し、そして次いでそれらを使用して真核細胞を感染させる。続いてインフルエンザA型ヘルパーウイルスの感染により、クローン化cDNAから誘導された遺伝子を保有するウイルスの作成をもたらす。Neumann et al.,(1994)により開発された第2の方法は、RNAポリメラーゼI(5'キャップおよび3'ポリAテイルの両方を欠くリボゾームRNAを転写する細胞性酵素)によるvRNAのインビトロ合成に基づく。インフルエンザウイルスに感染し、そしてクローン化されたインフルエンザウイルスcDNA(マウスRNAポリメラーゼIプロモーターおよび終結配列に挟まれている)を含むプラスミドでトランスフェクトされた細胞は、トランスフェクション体ウイルスの生産を導いた。しかし両方法とも、トランスフェクション体は膨大な数のヘルパーウイルスのバックグラウンドから選択されなければならず、これは強力な選択系を必要とし、そして成長−欠損性ウイルスの作成を複雑にする。
プを含む任意のインフルエンザA型遺伝子)、BまたはC型 DNA(FieldsのVirology( et
al.,(編集)、リッピンコット−ラベン出版(Lippincott-Raven Publ.)、フィラデルフィア、ペンシルバニア州(1996)第45および46章を参照にされたい。これは引用により本明細書に編入する)を含むが、任意のウイルスの遺伝子(1つまたは複数)を本発明のベクターまたは方法に使用できると想定される。
cDNAに操作可能に連結されたRNA ポリメラーゼIプロモーターを含んで成るベクターから選択される少なくとも2つのベクター;およびb)インフルエンザ ウイルスPAをコードするベクター、インフルエンザ ウイルスPB1をコードするベクター、インフルエンザ ウイルスPB2をコードするベクター、インフルエンザ ウイルスNPをコードするベクター、イ
ンフルエンザ ウイルスHAをコードするベクター、インフルエンザ ウイルスNAをコードするベクター、インフルエンザ ウイルスM1をコードするベクター、インフルエンザ ウイルスM2をコードするベクターおよびインフルエンザ ウイルスNS2をコードするベクターから選択される少なくとも2つのベクター、を含んで成る複数のオルトミクソウイルス ベクターを含んで成る。
時間後の上清1mlあたり、1×103より高いウイルスのプラーク形成単位(pfu)を生じる。作成されたウイルスに依存して、残りのすべてのウイルス構造タンパク質を発現するプラスミドを加えることにより、ウイルス生産に実質的な増加>3×104pfu/mlを導いた。逆遺伝は、A/WSN/33を表すすべての他の遺伝子を持つA/PR/8/34ウイルスのPB1遺伝子を含む再集合(reassortant)ウイルスを作成するためにも使用した。さらに本発明の方法により生産されたウイルスは、PA遺伝子に突然変異を持つか、またはノイラミニダーゼタンパク質の頭に外来エピトープを保有した。
なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;インフルエンザウイルスNA コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;インフルエンザウイルスM1 コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;インフルエンザウイルスNS2 コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;インフルエンザウイルスM2 コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;インフルエンザウイルスPA コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;インフルエンザウイルスPB1 コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;インフルエンザウイルスPB2 コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子;またはインフルエンザウイルスNP コード領域に連結された第2lox部位に連結された転写停止または終結配列を含んで成るDNAセグメントに連結された第1lox部位に連結された、宿主細胞中で機能的なプロモーターを含んで成る組換えDNA分子、を含む。
定義
本明細書で使用する用語「単離および/または精製された」とは、インビボの物質を付随しないか、またはインビトロの物質から実質的に精製されるように、本発明のウイルスまたはプラスミドのインビトロの調製、単離および/または精製を称する。本明細書で使用する用語「組換え核酸」または「組換えDNA配列またはセグメント」とは、その配列が自然には存在しないか、または天然のゲノムに位置するようには配置されていない自然に存在する配列に相当するように、インビトロで後に化学的に改変された、供給源から誘導または単離された核酸、例えばDNAを称する。供給源から「誘導された」DNAの例は、有用なフラグメントであると確認され、そして次いで本質的に純粋な形態に化学的に合成されるDNA配列である。そのような供給源から「単離」されたDNAの例は、遺伝子工学の方法論により本発明の方法に使用するためにさらに操作、例えば増幅できるように、該供給源から化学的手段、例えば制限エンドヌクレアーゼを使用することにより切り出されるか、または取り出される有用なDNA配列である。
インフルエンザA型ウイルスは、全部で10種のタンパク質をコードする8つの1本鎖(−)−センスウイルスRNA(vRNA)のゲノムを保有する。このインフルエンザウイルスの生活環は、赤血球凝集素(HA)の宿主細胞の表面上のシアル酸を含有するレセプターへの結合から始まり、レセプターが媒介するエンドサイトーシスが続く。後期エンドソーム内の低pHがHAの構造的ずれを誘発し、これによりHA2サブユニットのN-末端が露出する(いわゆる融合ペプチド)。融合タンパク質はウイルスおよびエンドソーム膜の融合を開始し、そしてマトリックスタンパク質(M1)およびRNP複合体が細胞質に放出される。RNPはvRNAをカプシド化する核タンパク質(NP)およびウイルスポリメラーゼ複合体(PA、PB1およびPB2タンパク質により形成される)から成る。RNPは核に輸送され、ここで転写および複製が起こる。RNAポリメラーゼ複合体は3つの異なる反応を触媒する:5'キャップおよび3'ポリA構造を持つmRNAの合成、完全長の相補的RNA(cRNA)の合成および鋳型としてcDNAを使用したゲノムvRNAの合成。新たに合成されたvRNA、NPおよびポリメラーゼタンパク質は次いでRNAに集成され、核から輸出され、そして細胞質膜へ輸送され、ここで子孫ウイルス粒子の分離(budding)が起こる。ノイラミニダーゼ(NA)タンパク質は、シアリルオリゴ糖からシアル酸の除去により感染の後期に重要な役割を演じ、これにより新たに集成されたビリオンが細胞表面から放出されウイルス粒子自体の凝集を防ぐ。ウイルス集成体はタンパク質−タンパク質およびタンパク質−vRNA相互作用に関与するが、このような相互作用の性質は、大部分が未知である。
トゴソウイルス(THOV)は、オルソミクソウイルス科(Orthomyxoviridae)のファミリーの新しい属である。それらはダニにより伝播し、そしてラクダ、ヤギおよび家禽のような家畜動物で見いだされた。この結果、THOVはダニおよび脊椎動物の細胞中で複製できる。THOVのゲノムは1本鎖の(−)−センスRNAの6セグメントから成る。3つの最大セグメントによりコードされるタンパク質は、インフルエンザウイルスのポリメラーゼタンパク質PB2、PB2およびPAと有意な相同性を示す。セグメント5はインフルエンザウイルスNPに関連するタンパク質をコードする。セグメント4によりコードされるTHOVの糖タンパク質は、インフルエンザHAまたはNAとも相同的ではないが、バキュロウイルスの糖タンパク質と類似する配列を表す。最小のセグメントはマトリックスタンパク質をコードすると考えられ、そしてインフルエンザウイルスのタンパク質のいずれにも似ていない。インフルエンザウイルスのように、vRNAの3'および5'末端の両方がプロモーター活性に必要であり、そしてこの活性はvRNAの3'および5'末端の末端14および15ヌクレオチドにそれぞれ位置する。
ブンヤウイルス科(Bunyavirisae)ファミリーには、ヒトの出血性および脳炎熱(例えば、リフトバレー、ハンターン(Hantaan)、ラクロス(La Crosse)およびクリミア−コンゴ出血性熱)を引き起こす数種のウイルスが含まれる。球状で、しかもエンベロープに包まれたビリオンは、1本鎖の(−)−センスRNA(Elliot,1997を参照にされたい)の3つのセグメントを含む。最大のセグメント(L)はウイルスRNAポリメラーゼタンパク質(Lタンパク質)をコードし、Mセグメントは2つのウイルス糖タンパク質G1およびG2、および非構造タンパク質(NSm)をコードする。最小のセグメント(S)は、ヌクレオカプシドタンパク質(N)および第2非構造タンパク質(NSs)をコードする。ウイルスの複製および転写は細胞質で起こり、そして新しく集成したビリオンは、ゴルジ装置の膜を通って出芽する(bud)。
材料および方法
細胞およびウイルス 293Tヒト胚性腎細胞およびMadin-Darbyイヌ腎細胞(MDCK)は、10%ウシ胎児血清を補充したダルベッコの改良イーグル培地(DMEM)および5%ウシ新生児血清を含む改良イーグル培地でそれぞれ維持した。すべての細胞は5%CO2中にて37℃で維持した。インフルエンザウイルスA/WSN/33(H1N1)およびA/PR/8/34(H1N1)を、10日齢の卵中で増殖させた。
ウイルスRNAセグメント、3つのポリメラーゼサブユニットおよびNPタンパク質のプラスミド-駆動発現による感染性ウイルスの作成 精製したビリオンから抽出したRNPの混合物を用いた細胞のトランスフェクションは感染性のインフルエンザ粒子を生じたが、この方法はインビトロで生成された8種の異なるRNPを用いて使用した時に効率的ではないようである。cDNAから感染性インフルエンザウイルスを完全に生産するために、8つのウイルスRNPsをインビボで作成した。すなわちヒトRNAポリメラーゼIプロモーターおよびマウスRNAポリメラーゼIターミネーターにより挟まれたA/WSN/33ウイルスの完全長ウイルスRNAに関するcDNAを含むプラスミドを調製した。原理的にはこのような8つのプラスミドの真核細胞へのトランスフェクションは、8つのインフルエンザvRNAの合成をもたらすはずである。タンパク質発現プラスミドのコ−トランスフェクションにより生成したPB2、PB1、PAおよびNPタンパク質は、次いで複製し、そして転写され、最終的には感染性インフルエンザウイルスを形成する機能的vRNAに集成するはずである(図3)。1×106の293T細胞をタンパク質発現プラスミド(1μgのpcDNA762(PB2)、1μgのpcDNA774(PB1)、0.1μgのpcDNA787(PA)および1μgのpCAGGS-WSN-NP0/14)および各1μgの以下のRNAポリメラーゼIプラスミド(pPo1I-WSN-PB2、pPo1I-WSN-PB1、Po1I-WSN-PA、Po1I-WSN-HA、Po1I-WSN-NP、Po1I-WSN-NA、Po1I-WSN-MおよびPo1I-WSN-NS)を用いてトランスフェクトした。pcDNA787(PA)の量を下げて使用することの決定はこれまでの考察(Mena et al.,1996)およびウイルス−様粒子(VLPs)の作成に関する最適条件に関するデータ(データは示さず)に基づいた。293T細胞のトランスフェクションから24時間後、1mlあたり7×103pfuウイルスが上清に見いだされ(実験1、表1)、初めてインフルエンザA型ウイルスを完全にプラスミドから生産するための逆遺伝学の能力が示された。
†特に示さない限り、プラスミドはA/WSN/33ウイルスのRNAを表すcDNAを用いて構築した。
本明細書に記載した逆遺伝学系は、インフルエンザA型ウイルスを完全にクローン化cDNAから効率よく生産することを可能にする。Bridgen および Elliott(1996)も、ブンヤウエラウイルスを作成するための逆遺伝学系を使用したが(ブンヤウイルス科(Bunyaviridae)のファミリー)、それは(−)−センスRNAのわずか3セグメントを含み、その生産の効率は低かった(102pfu/107細胞)。ウイルスの収率は実験間で異なったが、一環して>103pfu/106細胞がインフルエンザウイルスについては観察され、これらは8つのセグメント含む。上記の高い効率の逆遺伝学系については、いくつかの説明がある。インビトロでRNPを生産する代わりに(Luytjes et al.,1989)、RNPはRNAポリメラーゼIを使用したvRNAの細胞内合成を通して、およびウイルスポリメラーゼタンパク質およびNPのプラスミドが駆動する発現を通してインビボで生成された。またプラスミドで容易にトランスフェクトされる293T細胞(Goto et al.,1997)の使用により、確実に大多数の細胞群がウイルス生産に必要なすべてのプラスミドを受容した。さらに成長している細胞の中でも最も豊富に発現されるRNAポリメラーゼIにより生成される多数の転写物が、系の全体的な効率に貢献しているようである。このような特徴は、対応して豊富な数のvRNA転写物およびvRNAのカプシド化に十分な量のウイルスタンパク質、核内のRNPの形成および細胞膜へのこれらの複合体の輸出(ここで新規ウイルスが集成され、そして放出される)を導いた。
インフルエンザウイルスのタンパク質PB2、PB1、PAおよびNPの発現は、人工的ウイルスRNAの複製および転写を導く インフルエンザVLPを生成するために、インフルエンザウイルスRNAのインビボの細胞内合成にRNAポリメラーゼI系を使用した(図7)。この系では、レポーター遺伝子をアンチセンス方向にコードするcDNAが、インフルエンザウイルスRNAの5'および3'非翻訳領域により挟まれている。このカセットをRNAポリメラーゼIプロモーターとターミネーターとの間に挿入する。そのような構築物の真核細胞中へのトランスフェクションは、細胞性RNAポリメラーゼIによるレポーター遺伝子の転写を導き、これによりインフルエンザウイルス−様RNAを生成する(Neumann et al.,1994)。インフルエンザウイルスの感染で、この人工的vRNAはウイルスポリメラーゼ複合体により複製し、そして転写され、レポーター遺伝子の発現を導く。
より高量のプラスミドでGFP-陽性MDCK細胞の数に10倍以上の増加をもたらした。HAおよびNAタンパク質を発現する2種類の量(1μg対2μg)のプラスミドを比較すると、VLP形成に認められる差異を表さず、1μgの各プラスミド(pEWSN-HA、pCAGGS-WNA15)を後の実験に使用する選択が導かれた。総じてこれらの実験はVLP形成の効率に100倍より多くの増加をもたらし、最終的には上清1mlあたり104より多くの感染性インフルエンザウイルス粒子の生産を導いた(図10)。
†VLP形成の相対的効率は、5つの顕微鏡視野でGFP-陽性細胞の数を計数することにより決定した。1μgの各プラスミドを含有するサンプル(これは450の感染性VLP/上清(ml)を生じた)を参照として選択した(1の値)。
Cre-loxP系を使用することにより、複製−欠損性ウイルスの生産のためのパッケッージング細胞系を作成することができる。例えば2つのloxP部位により挟まれた転写停止カセット(例えばpBS302、ライフテクノロジーズ(Life Technologies)、ベセスダ、メリーランド州;およびSauer et al.,1993;Lasko et al.,1992;Pichel et al.,1993;Bolivar et al.,1977;Stuhl et al.,1981;Stuhl et al.,1985;Fiers et al.,1978)、およびウイルス遺伝子の1つを含むタンパク質発現ベクターを調製する。プロモーター配列で開始する転写を、転写停止部位で遮断する。すなわちウイルス遺伝子は停止および翻訳されない。そのようなベクターで安定にトランスフェクトされた細胞を、loxP系にクローン化された遺伝子をコードするvRNAを欠くインフルエンザウイルスに感染させる。このウイルスもCreタンパク質をコードするさらなるvRNAを含む。このウイルスはそのvRNAの1つが欠けているので正常な細胞では生存できない。しかしパッケージング細胞中ではvRNAから発現するCreタンパク質がloxP部位で組換えを生じ、転写停止部位の欠失をもたらす。このように個々のウイルス遺伝子(1つまたは複数)は今、転写そして発現され、ウイルスのこのような細胞中での増幅が可能となる(図11)。
Claims (9)
- ワクチンを調製するためのリアソータント(reassortant)インフルエンザウイルス粒子の生産方法であって、
i)(a)複数のゲノムインフルエンザvRNA又は該ゲノムインフルエンザvRNAのアンチゲノムcRNAをコードする第一の発現ベクターセットであって、転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスPAのcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスPB1のcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスPB2のcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスHAのcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスNPのcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスMのcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスNAのcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
転写ターミネーターに連結したインフルエンザウイルスNSのcDNAと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクター
を含む第一の発現ベクターセット、並びに
(b)第二のタンパク質発現ベクターセットであって、
インフルエンザウイルスPAポリペプチドをコードするDNAセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
インフルエンザウイルスPB1ポリペプチドをコードするDNAセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
インフルエンザウイルスPB2ポリペプチドをコードするDNAセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクターと、
インフルエンザウイルスNPポリペプチドをコードするDNAセグメントと機能的に連結されたプロモーターを含有するベクター
を含む第二のタンパク質発現ベクターセット
を含んでなる組成物を宿主細胞中に導入する工程、及び
ii)該宿主細胞中で複数のゲノムインフルエンザvRNAを含有するリボ核タンパク質複合体が形成され、かつ、該宿主細胞中で該ゲノムインフルエンザvRNAを含むリアソータントインフルエンザウイルス粒子が集成されるように、該宿主細胞をヘルパーウイルスの不存在下で培養する工程、及び
iii)該宿主細胞から該リアソータントインフルエンザウイルスを回収する工程
を含んでなる、方法。 - 請求項1に記載の方法であって、該ウイルスがA型、B型又はC型のインフルエンザウイルスである、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、該リアソータントインフルエンザウイルスが一つより多くの親ウイルスに由来するvRNAセグメントを含有する、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、回収されたリアソータントインフルエンザウイルス粒子を弱毒化する工程をさらに含む、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、第一及び第二のベクターセットがすべてプラスミドである、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、該複数のゲノムインフルエンザvRNA又は該ゲノムインフルエンザvRNAのアンチゲノムcRNAの各々が別々のベクター上にコードされている、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、(a)の発現ベクターがRNAポリメラーゼI(poll)プロモーターとpoll終結配列を含む、方法。
- 請求項7に記載の方法であって、RNAポリメラーゼIプロモーターがヒトRNAポリメラーゼIプロモーターである、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、各ゲノムインフルエンザvRNA又は該ゲノムインフルエンザvRNAのアンチゲノムcRNAのコーディング配列が転写ターミネーターの上流である、方法。
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DK2478916T3 (da) | 2006-01-27 | 2020-06-15 | Seqirus Uk Ltd | Influenzavacciner indeholdende hæmagglutinin og matrixproteiner |
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EP2010557B1 (en) | 2006-03-31 | 2014-02-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation | High titer recombinant influenza viruses for vaccines |
WO2007146057A2 (en) * | 2006-06-09 | 2007-12-21 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Screening method for modulators of viral transcription or replication |
GB0614460D0 (en) | 2006-07-20 | 2006-08-30 | Novartis Ag | Vaccines |
WO2008133701A1 (en) | 2006-07-21 | 2008-11-06 | Medimmune, Llc. | Methods and compositions for increasing replication capacity of an influenza virus |
CN104278014A (zh) | 2006-08-09 | 2015-01-14 | 米迪缪尼有限公司 | 流感血凝素和神经氨酸酶变体 |
ES2536401T3 (es) | 2006-09-11 | 2015-05-25 | Novartis Ag | Fabricación de vacunas contra virus de la gripe sin usar huevos |
NZ577405A (en) | 2006-12-06 | 2012-08-31 | Novartis Ag | Vaccines including antigen from four strains of influenza virus |
US8597661B2 (en) | 2007-05-04 | 2013-12-03 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Neuraminidase-deficient live influenza vaccines |
EP2674486A1 (en) | 2007-06-18 | 2013-12-18 | MedImmune, LLC | Influenza B viruses having alterations in the hemaglutinin polypeptide |
US9474798B2 (en) | 2007-06-18 | 2016-10-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Influenza M2 protein mutant viruses as live influenza attenuated vaccines |
EP2045323A1 (en) * | 2007-10-05 | 2009-04-08 | Avir Green Hills Biotechnology Research Development Trade Ag | Linear expression constructs for production of influenza virus particles |
US20100183671A1 (en) | 2007-06-27 | 2010-07-22 | Novartis Vaccines & Diagnostics GmbH & Co., KG | Low-additive influenza vaccines |
CN101497877B (zh) * | 2008-01-28 | 2012-09-05 | 河北摩百生物科技有限公司 | 流感全病毒减活疫苗重组体、其构建方法及应用 |
NZ587798A (en) | 2008-03-18 | 2013-06-28 | Novartis Ag | Improvements in the preparation of influenza virus vaccine antigens utilising a phosphate buffer |
JP2011527581A (ja) | 2008-07-11 | 2011-11-04 | メディミューン,エルエルシー | インフルエンザ赤血球凝集素およびノイラミニダーゼ変異体 |
WO2010021289A1 (ja) | 2008-08-18 | 2010-02-25 | 学校法人北里研究所 | トリインフルエンザウイルス抗原及び経口投与で有効な粘膜アジュバントを併用したトリインフルエンザワクチンの追加免疫方法 |
EP2233568A1 (en) | 2009-03-19 | 2010-09-29 | Avir Green Hills Biotechnology Research Development Trade AG | Novel method for generation of RNA virus |
EP2396031A1 (en) | 2009-02-10 | 2011-12-21 | Novartis AG | Influenza vaccines with increased amounts of h3 antigen |
EA201171032A1 (ru) | 2009-02-10 | 2012-02-28 | Новартис Аг | Схемы лечения с помощью вакцины против гриппа, связанного с пандемическими штаммами |
CN105727281A (zh) | 2009-02-10 | 2016-07-06 | 诺华股份有限公司 | 具有减少量的角鲨烯的流感疫苗 |
BRPI1008549A2 (pt) | 2009-02-12 | 2016-03-15 | Medimmune Llc | variantes de neuraminidase e hemaglutinina de influenza |
BE1019643A3 (fr) | 2009-04-27 | 2012-09-04 | Novartis Ag | Vaccins de protection contre la grippe. |
SG178904A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-04-27 | Novartis Ag | Combination vaccines against respiratory tract diseases |
JP2013507990A (ja) | 2009-10-26 | 2013-03-07 | ダブリュエーアールエフ−ウィスコンシン アラムナイ リサーチ ファウンデーション | ベロ細胞において増強された複製を有する高力価の組換えインフルエンザウイルス |
US10130697B2 (en) | 2010-03-23 | 2018-11-20 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Vaccines comprising mutant attenuated influenza viruses |
WO2011151470A2 (en) | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Avir Green Hills Biotechnology Research Development Trade Ag | Novel method for generation of rna virus |
CN102220293B (zh) * | 2011-05-26 | 2012-12-19 | 中国农业科学院上海兽医研究所 | 犬流感重组病毒及其制备方法和应用 |
US9101653B2 (en) | 2011-08-26 | 2015-08-11 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Influenza viruses with mutant PB2 gene segment as live attenuated vaccines |
EP2751260A2 (en) | 2011-09-02 | 2014-07-09 | Westfälische Wilhelms-Universität Münster | Live attenuated influenza virus |
AU2012324398A1 (en) | 2011-10-20 | 2014-05-01 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted influenza B virus vaccines for pediatric priming |
GB201218195D0 (en) | 2012-10-10 | 2012-11-21 | Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie | Composition |
EP3022296B1 (en) | 2013-07-15 | 2022-12-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | High titer recombinant influenza viruses with enhanced replication in mdck or vero cells or eggs |
WO2015196150A2 (en) | 2014-06-20 | 2015-12-23 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses |
CN104450695B (zh) * | 2014-11-26 | 2017-08-25 | 扬州大学 | A型流感病毒基因pcr扩增引物及其快速克隆方法 |
US10633422B2 (en) | 2015-06-01 | 2020-04-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Influenza virus replication by inhibiting microRNA lec7C binding to influenza viral cRNA and mRNA |
EP3307308A2 (en) * | 2015-06-10 | 2018-04-18 | Hookipa Biotech AG | Hpv vaccines |
KR20180035807A (ko) | 2015-06-26 | 2018-04-06 | 세퀴러스 유케이 리미티드 | 항원적으로 매치된 인플루엔자 백신 |
US9890363B2 (en) | 2015-07-06 | 2018-02-13 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Influenza virus replication for vaccine development |
EP3320343B1 (en) | 2015-07-07 | 2020-09-02 | Seqirus UK Limited | Method for quantifying immunogenic hemagglutinin |
US10494613B2 (en) | 2015-08-28 | 2019-12-03 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Generation of infectious influenza viruses from virus-like particles |
JP2019510481A (ja) | 2016-02-19 | 2019-04-18 | ウィスコンシン アルムニ リサーチ ファンデイション | ワクチン開発のための改善されたb型インフルエンザウイルス複製 |
WO2019046211A1 (en) * | 2017-08-28 | 2019-03-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | NANOCAPSULES FOR THE ADMINISTRATION OF RIBONUCLEOPROTEINS |
CN107964035B (zh) * | 2017-12-06 | 2020-07-24 | 中国科学院微生物研究所 | 一种用于流感病毒的有限复制型黏膜免疫疫苗 |
CN109097341B (zh) * | 2018-08-28 | 2021-09-24 | 青岛农业大学 | 一种同时表达ha和hef的复制缺陷型重组流感病毒 |
EP3914295A2 (en) | 2019-01-23 | 2021-12-01 | Yoshihiro Kawaoka | Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses |
CN113874496A (zh) | 2019-02-08 | 2021-12-31 | 威斯康星校友研究基金会(Warf) | 人源化细胞系 |
WO2020223699A1 (en) | 2019-05-01 | 2020-11-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Improved influenza virus replication for vaccine development |
WO2021041624A2 (en) | 2019-08-27 | 2021-03-04 | Yoshihiro Kawaoka | Recombinant influenza viruses with stabilized ha for replication in eggs |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5840520A (en) * | 1989-08-28 | 1998-11-24 | Aviron | Recombinant negative strand RNA virus expression systems |
US5658772A (en) | 1989-12-22 | 1997-08-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Site-specific recombination of DNA in plant cells |
US5919676A (en) * | 1993-06-24 | 1999-07-06 | Advec, Inc. | Adenoviral vector system comprising Cre-loxP recombination |
EP0704533A1 (en) * | 1994-09-30 | 1996-04-03 | Bayer Ag | An attenuated vaccination virus, a method to make the virus and a pharmaceutical compositions comprising the virus |
AU3760495A (en) * | 1994-09-30 | 1996-04-26 | Aviron | Chimeric Influenza Virus And Electroporation Method |
CN1200675A (zh) * | 1995-10-20 | 1998-12-02 | 耶路撒冷希伯来语大学依苏姆研究开发公司 | 流感疫苗 |
US5994526A (en) * | 1996-06-21 | 1999-11-30 | Plant Genetic Systems | Gene expression in plants |
EP1035209A1 (en) * | 1999-03-06 | 2000-09-13 | ARTEMIS Pharmaceuticals GmbH | Stable recombinant influenza viruses free of helper viruses |
MXPA01010082A (es) * | 1999-04-06 | 2002-04-24 | Wisconsin Alumni Res Found | Virus recombinantes de influenza para vacunas y terapia de genes. |
-
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