JP6208667B2 - 持続的hiv感染症を処置するためのhiv−1遺伝子発現の再活性化 - Google Patents
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Description
な再活性化、すなわち各薬物により個々に生じる再活性化の合計より大きな再活性化が引き起こされることを示している。更に、同じ薬物の組合せは、cART処置患者由来のCD8+枯渇PBMC培養物中、薬物を単独で用いた時に観察されるよりも大きな割合の細
胞中でHIV−1発現を再活性化する。したがって、彼らは、潜伏HIV−1リザーバーのプールを低減させる治療展望として、有効なcARTと一緒に異なる2種類の治療上有望なHIV−1誘導物質を共投与するというコンセプトの検証を示した。
ら単離したCD8+枯渇PBMC又は休止CD4+T細胞の生体外培養物中で単独の又は他のHIV−1誘導物質(IL−2及び同種異系刺激の非存在下)と組み合せたHMTIで処理した後のHIV−1復活を測定した。これにより、ケトシンが、HIV−1+cAR
T処置患者から単離したCD8+枯渇PBMC培養物の50%(表2A)及び休止CD4+T細胞培養物の86%(表2B)でHIV−1復活を誘導し、一方、BIX−01294が、同様な患者から単離した休止CD4+T細胞培養物の80%でHIV−1発現を再活
性化すること(表4)が初めて示された。更に、これらは、1つのHMTIとHDACIであるSAHA又は非腫瘍促進NF−KB誘導物質であるプロストラチンのいずれかとを含む併用処置が、これらの化合物単独での処置よりも高い再活性化能を有することを示した(図3及び4並びに表3)。結論として、本発明者らは、単独又は他のHIV−1誘導物質と組み合せて用いたHMTIが、cART処置患者由来の休止記憶CD4+T細胞中
でHIV−1復活を生じさせることを初めて示した。これらの結果は2012年7月にAIDSで公開された(BOUCHAT et al., AIDS, 26(12), 1473-1482.PMID:22555163)。ケ
トシン及びBIX−01294はヒトに安全に投与することはできないが、これらの結果は、HIV−1潜伏リザーバーのプールを低減することを目的とした戦略にHMTIを用いるというコンセプトの証明となる。HMTIは抗癌療法における有望な化合物でもあるので、他のより安全なHMTIがすぐに合成され、HIV−1+cART処置個体におけ
るそれらの再活性化能が評価されるであろう。
1.そのような処置が必要な対象においてレトロウイルスに関連する疾患又は状態を処置する方法であって、治療又は予防有効量の
a)DNAメチル化阻害剤及び
b)ヒストンデアセチラーゼ阻害剤
を前記対象に投与することを含む、方法。
、デシタビン)である、第1〜3項のいずれか一項に記載の方法。
a)PMA、プロストラチン、ブリオスタチン、及びTNF−αを含む群から選択されるNF−κ−B誘導物質、
b)TSA、SAHA、MS−275、アミノスベロイルヒドロキサム酸、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマート、LAQ−824、LBH−589、ベリノスタット(PXD−101)、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマートの桂皮ヒドロキサム酸アナログであるパノビノスタット(LBH−589)、IF2357、アリールオキシアルカノン酸ヒドロキサミド、デプシペプチド、アピシジン、分子のペプチド基を含む環状ヒドロキサム酸、FK−228、レッドFK、脂肪族鎖でヒドロキサム酸に連結された環状ペプチド模倣物、ブチラート、酪酸フェニル、酪酸ナトリウム、バルプロ酸、ピバロイルオキシメチルブチラート、5 NOX−275、及びMGCD0103を含む種々のファミリー(ヒドロキサマート、環状ペプチド、脂肪酸、及びベンズアミド)から選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害剤、及び/又は
c)5−アザシチジン(アザシチジン)、5−アザ−2’−デオキシシチジン(5−アザ−CdR、デシタビン)、1−β−Dアラビノフラノシル−5−アザシトシン(ファザ
ラビン)及びジヒドロ−5−アザシチジン(DHAC)、5−フルオロデオキシシチジン(FdC)、2−Hピリミジノンを含むオリゴデオキシヌクレオチド二本鎖、ゼブラリン、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド(ODN)、MG98、(−)−エピガロカテキン−3−ガラート、ヒドララジン、プロカイン、及びプロカインアミドを含む2つクラス(非ヌクレオシド及びヌクレオシド脱メチル化剤)から選択されるDNAメチル化阻害剤
の投与を更に含む、第8〜10項のいずれか一項に記載の方法。
a)DNAメチル化阻害剤、
b)ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、及び
c)そのような医薬組成物処置が必要な対象におけるレトロウイルスに関連する疾患又は状態の処置に有用であり得る1又は複数の更なる成分、例えば、限定されるものではないが、1若しくは複数の溶媒及び/又は1若しくは複数の薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物又は製剤。
8項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
a)ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、及び
b)あり得る1又は複数の更なる成分、例えば、限定されるものではないが、1若しくは複数の溶媒及び/又は1若しくは複数の薬学的に許容される担体
を含む、そのような処置が必要な対象におけるレトロウイルスに関連する疾患又は状態の処置のための医薬組成物又は製剤
a)PMA、プロストラチン、ブリオスタチン、及びTNF−αを含む群から選択されるNF−κ−B誘導物質、
b)TSA、SAHA、MS−275、アミノスベロイルヒドロキサム酸、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマート、LAQ−824、LBH−589、ベリノスタット(PXD−101)、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマートの桂皮ヒドロキサム酸アナログであるパノビノスタット(LBH−589)、IF2357、アリールオキシアルカノン酸ヒドロキサミド、デプシペプチド、アピシジン、分子のペプチド基を含む環状ヒドロキサム酸、FK−228、レッドFK、脂肪族鎖によってヒドロキサム酸に連結された環状ペプチド模倣物、ブチラート、酪酸フェニル、酪酸ナトリウム、バルプロ酸、ピバロイルオキシメチルブチラート、5 NOX−275、及びMGCD0103を含む種々のファミリー(ヒドロキサマート、環状ペプチド、脂肪酸、及びベンズアミド)から選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害剤、及び/又は
c)5−アザシチジン(アザシチジン)、5−アザ−2’−デオキシシチジン(5−アザ−CdR、デシタビン)、1−β−Dアラビノフラノシル−5−アザシトシン(ファザラビン)及びジヒドロ−5−アザシチジン(DHAC)、5−フルオロデオキシシチジン(FdC)、2−Hピリミジノンを含むオリゴデオキシヌクレオチド二本鎖、ゼブラリン、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド(ODN)、MG98、(−)−エピガロカテキン−3−ガラート、ヒドララジン、プロカイン、及びプロカインアミドを含む2つのクラス(非ヌクレオシド及びヌクレオシド脱メチル化剤)から選択されるDNAメチル化阻害剤
を更に含む、第21項又は第22項に記載の医薬組成物。
る。
(A)CD8+枯渇PBMCの培養物を偽処理又はケトシン処理(90nmol/l)
した。処理の6日後、培養上清中のウイルスRNA濃度を決定した。全HIV−1 DNAを細胞106個当たりのHIV−1のDNAコピー数として又は細胞106個当たりのHIV−1のDNAコピー数の対数として表す(「/」は非試験条件を表す)。(B)HLA DR- CD4+T細胞の限界希釈培養物を偽処理又はケトシン処理(45又は90nmol/l)した。培養上清中のウイルスRNA濃度を決定した。最後の陽性希釈培養物は、複製能を有し且つケトシン反応性であるウイルスを有する細胞が少なくとも1つ存在することを示している。
DNAコピー数の対数として表す。灰色で示されている培養物は、薬物単独よりも薬物
併用でより高いウイルス産生を示しており、黒色で示されている培養物は、個々の薬物では再活性化されず、併用処理でのみ再活性化された。
4+T細胞の培養物を偽処理又はBIX−01294処理した。処理の6日後、培養上清
中のウイルスRNA濃度を1ml当たりのコピー数として決定した(|は閾値未満を示す)。
Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed." (Sambrook et al., 1989), Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed., 1987), the series Methods in Enzymology (Academic Press), Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller & M. P. Calos, eds., 1987); "Current Protocols in 10 Molecular Biology and Short Protocols in Molecular Biology, 3rd Ed." (F. M. Ausubel et al., eds., 1987 & 1995); Recombinant DNA Methodology II (R. Wu ed., Academic Press 1995)を参照されたい。細胞培養及び培
地の使用における一般的技術はとりわけLarge Scale Mammalian Cell Culture (Hu et al. 1997. Curr Opin Biotechnol 8: 148); Serum-free Media (K. Kitano. 1991. Biotechnology 17: 73);又はLarge Scale Mammalian Cell Culture (Curr Opin Biotechnol 2: 375, 1991)に概説されている。
びウイルスタンパク質を産生し、これらがパッケージングされて新たなウイルス粒子として細胞から放出され、これは新たな細胞に感染することができる。HIVは主に免疫系の細胞に感染するので、感染対象の免疫応答を弱める。このため、これらは「免疫不全ウイルス」と命名されている。HIV陽性対象は、ウイルスが複製能を獲得した時にAIDS、すなわち後天性免疫不全症候群を発症し得る。基本的に、HIVはCD4+T細胞、マ
クロファージ、及び小膠細胞に付着しこれを破壊する。T細胞及びマクロファージの破壊により、対象は通常であれば簡単に回避できるあらゆる種類の感染症に罹り易くなる。CD4+T細胞数が200細胞/μLのレベルより下がると、細胞性免疫が失われ、種々の
日和見性微生物による感染症が現れ、その後、一般的な日和見感染症及び腫瘍(そのほとんどは通常強力なCD4+T細胞介在免疫により制御される)が患者に影響し始める。H
IV感染又はAIDSの対象が処置されなかった場合、対象は最終的に、免疫系の機能障害のため、そうでなければ治癒が容易であった感染症により死亡し得る。
キシヌクレオチド二本鎖を有するものが挙げられる。DNMT阻害の別の機構は、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド(ODN)の利用である。これらは、特異的mRNA配列にハイブリダイズするように設計された比較的短い合成核酸である。ハイブリダイゼーションは、mRNAの翻訳をブロックしてmRNAの分解を引き起こすことができる。そのようなアンチセンスODNはDNMT mRNAに対して向けられており、DNMTのmRNA及びタンパク質を減少させた。例えば、MG98はDNMT1 mRNA3’非翻訳領域に対するアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドである。この薬剤は、DNMT3に影響することなくDNMT1発現を阻害する能力を示した。効果はデシタビンとの組合せで相乗的になり得る。あるいは、非ヌクレオシド脱メチル化剤、例えば、限定されるものではないが、(−)−エピガロカテキン−3−ガラート、ヒドララジン、プロカイン、及びプロカインアミドを用いることができる。
ース、又はスクロース等)、糖アルコール(例えば、マンニトール等)、デキストリン、でんぷん、ゼラチン、セルロース、ポリビニルピロリジン、低融点ワックス、及びイオン交換樹脂が含まれる。医薬組成物を含む圧縮した錠剤は、活性成分を前述したような固形担体と均一且つ完全に混合して必要な圧縮特性を有する混合物を得、その後、混合物を好適な機械中で所望の形状及びサイズに圧縮することにより製造することができる。成型された錠剤は、粉末化した化合物の混合物を不活性液体希釈剤で湿らせて好適な機械中で成型することにより作製され得る。軟ゼラチンカプセル剤及び坐剤用の好適な担体としては、例えば脂肪、ワックス、半固形及び液状のポリオール、天然油又は硬化油等が挙げられる。
ル及びUSP WFI;0.01〜0.1%トリエタノールアミンを含むUSP WFI;又は0.01〜0.2%ジパルミトイルジホスファチジルコリンを含むUSP WFI;及び1〜10%スクアレン又は非経口用の水中植物油滴型エマルションが含まれる。皮下又は筋肉内使用のための担体の例としては、リン酸緩衝食塩水(PBS)溶液、5%デキストロースを含むWFI、及び0.01〜0.1%トリエタノールアミンを含む5%デキストロース、又は0.9%塩化ナトリウムを含むUSP WFI、又は10%USPエタノールと40%プロピレングリコールの1:2若しくは1:4混合物(残部は5%デキストロース又は0.9%塩化ナトリウム等の許容可能な等張液);又は0.01〜0.2%ジパルミトイルジホスファチジルコリンを含むUSP WFI、及び1〜10%スクアレン又は非経口水中植物油滴型エマルションが含まれる。
ルホスファチジルエタノールアミン(DPPE)、及びジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(DSPE)が含まれる。典型的には、水性製剤中の界面活性剤:活性物質のモル比は約10:1〜約1:10、より典型的には約5:1〜約1:5であるが、関心のある具体的目的に最も合うように水性製剤中に任意の有効量の界面活性剤を用いることができる。
ド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、侵入阻害剤、成熟阻害剤、及び広域阻害剤が含まれる。投与される1又は複数の他の活性化合物と組み合せて使用されてもよい、使用される本発明の活性物質の投与量又は量は、個々のケース応じて決まり、通例通り、最適な効果が実現されるように個々の状況に適合させる。したがって、処置される障害の性質及び重症度、並びに性別、年齢、体重、全体の健康、食事、投与の形態及び時間、並びに処置されるヒト又は動物の個々の反応性、投与経路、有効性、代謝安定性、並びに使用される化合物の作用時間、治療が急性であるか、慢性であるか、予防的であるか、あるいは本発明の薬剤に加えて他の活性化合物が投与されるかどうかに依存する。
標準的な方法でp24のELISAアッセイ、RT−qPCR、及びFACSを行った。再活性化試験は、ウイルス量が検出不能なHIV−1+ cART処置個体の血液から
単離したCD8+枯渇PBMC又はHLA DR−の培養物で行った(ロシュ社のAmp
licorキット及びアボット社のHIV−1 Realtimeを用いてHIV−1の増殖を評価した)。
cエピソームベクターレポーターコンストラクトで一過的にトランスフェクトした。トランスフェクションの24時間後、トランスフェクトした細胞に偽処理又はケトシン処理を行った。細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性についてアッセイした。ルシフェラーゼ活性はタンパク質濃度に関して標準化した。偽処理細胞で得られた結果を任意に1の値に設定した。結果を図1(A及びB)に示す。この図は、偽処理細胞と比べてケトシン処理細胞においてルシフェラーゼ活性が明確に増大していることを示している。
誘導する。
6×106個のCD8+枯渇PBMCを含む培養物を偽処理又はケトシン処理した。処理の6日後、培養上清中のウイルスRNAの濃度をAmplicor法(ロシュ・ダイアグノスティックス社)により決定した。結果を表1及び2Aに示す。再活性化された全患者について再活性化のパーセンテージを算出した。試験したPBMC培養物18個のうち9個がケトシン処理に反応してHIV−1発現を再活性化し、一方、それらのいずれも偽処理ではHIV−1発現を再活性化しなかった。その後、HLA DR- CD4+T細胞の限界希釈培養を行い、これらの培養物を偽処理又はケトシン処理した。最後の陽性希釈培養物は、複製能のあるHIV−1ウイルスを有する少なくとも1つの細胞の存在を示している。培養上清中のウイルスRNA濃度をAmplicor法(ロシュ・ダイアグノスティックス社)により決定した。値は、1ml当たりのHIV−1 RNAコピー数で表されている。結果は、ケトシンが患者の培養物7個のうち6個でHIV−1復活(再活性化)を誘導することが示している(表2B)。
清中のウイルスRNA濃度を決定した(表4)。
図2は、ケトシン+プロストラチンの併用処理が潜伏感染J−Lat 15.4細胞系におけるHIV−1転写を相乗的に増加させることを示している。J−Lat 15.4細胞系を偽処理又はケトシン、プロストラチン、若しくは両方の薬物の組合せを用いて処理した。これらの細胞から全RNAを抽出し、ランダムプライマーを用いて逆転写した。その後、cDNAを、開始された転写産物を定量化するためのTAR中でハイブリダイズするプライマー対又は伸長転写産物を定量化するためのTat中でハイブリダイズするプライマー対を用いたPCR反応に用いた。βアクチンを用いて結果を標準化し、偽処理条件と比べた誘導倍率を示すヒストグラムとして表す。更に、ケトシン及びプロストラチンを含む併用処理は、HIV−1感染cART処置患者由来の休止記憶CD4+T細胞のい
くつかの生体外培養物においてより高いウイルス産生を誘導する。休止記憶CD4+T細
胞の培養物を偽処理又は記載されているように処理した。処理の6日後、培養上清中のウイルスRNA濃度を測定した(1ml当たりのコピー数)。再活性化された患者培養物を、個々に処理した後よりも併用処理後にHIV−1復活が高いウイルス産生を示す関連するカテゴリーに分類した(図3a)。
図5は、5−アザ−CdR+HDACIの共処理が相乗的に、潜伏感染J−Lat 8.4細胞系において薬物単独よりも高い割合の細胞中でHIV−1産生を増加させ、HIV−1発現を誘導することを示している。J−Lat細胞系は、nefの代わりにGFP(緑色蛍光タンパク質)を含む全長潜伏HIV−1プロウイルスを有する。J−Lat 8.4細胞系を、偽処理又は単独の若しくはHDACIと組み合せた5−アザ−CdRで処理した。A.細胞上清中のp24産生を測定した。偽処理細胞で得られた結果を任意に1の値に設定した。B.細胞をパラホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリーで分析してGFP発現細胞の割合を定量化した。結果(GFP+細胞の%)をヒストグラム
で表す。C.5−アザ−CdR+SAHA又は5−アザ−CdR+NaButの併用処理は、HIV−1 5’LTRからの転写を相乗的に誘導する。J−Lat 8.4細胞系を、偽処理、単独又はSAHA若しくはNabutと組み合せた5−アザ−CdRで処理した。これらの細胞から全RNAを抽出し、ランダムプライマーを用いて逆転写した。その後、cDNAを、開始転写産物を定量化するためのTAR中でハイブリダイズするプライマー対又は伸長転写産物を定量化するためのTat中でハイブリダイズするプライマー対を用いたPCR反応に用いた。βアクチン遺伝子プライマーを用いて結果を標準化し、偽処理条件と比べた誘導倍率を示すヒストグラムとして表す。
Claims (11)
- 処置が必要な対象におけるHIV感染に関連する疾患又は状態を処置するためのDNAメチル化阻害剤を含む医薬であって、
治療又は予防有効量の前記DNAメチル化阻害剤が対象に投与され、前記DNAメチル化阻害剤が投与された後に、治療又は予防有効量のヒストンデアセチラーゼ阻害剤が対象に投与され、
前記DNAメチル化阻害剤が5−アザ−2’−デオキシシチジン(デシタビン)であり、
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤がヒドロキサマート、環状ペプチド、脂肪酸、及びベンズアミドからなる群より選択される、医薬。 - 前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、TSA、SAHA、エンチノスタット(MS−275)、アミノスベロイルヒドロキサム酸、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマート、LAQ−824、LBH−589、ベリノスタット(PXD−101)、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマートの桂皮ヒドロキサム酸アナログであるパノビノスタット(LBH−589)、IF2357、アリールオキシアルカノン酸ヒドロキサミド、デプシペプチド、アピシジン、分子のペプチド基を含む環状ヒドロキサム酸、ロミデプシン(FK−228)、レッドFK、ヒドロキサム酸に脂肪族鎖で連結された環状ペプチド模倣物、ブチラート、酪酸フェニル、酪酸ナトリウム(NaBut)、バルプロ酸、ピバロイルオキシメチルブチラート、5 NOX−275、及びMGCD0103から選択される、請求項1に記載の医薬。
- 前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、パノビノスタット、ベリノスタット、ロミデプシン、バルプロ酸、エンチノスタット、アピシジン、SAHA又はNaButである、請求項1または2に記載の医薬。
- 前記HIV感染が、HIV−1、HIV−2、HTLV−1、及びHTLV−2からなる群から選択されるレトロウイルスによって引き起こされる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の医薬。
- 処置が必要な対象におけるHIV感染に関連する疾患又は状態を処置するためのヒスト
ンデアセチラーゼ阻害剤を含む医薬であって、
治療又は予防有効量の前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、DNAメチル化阻害剤が投与された後に対象に投与され、
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤がヒドロキサマート、環状ペプチド、脂肪酸、及びベンズアミドからなる群より選択され、
前記DNAメチル化阻害剤が5−アザ−2’−デオキシシチジン(デシタビン)である、医薬。 - 前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、TSA、SAHA、エンチノスタット(MS−275)、アミノスベロイルヒドロキサム酸、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマート、LAQ−824、LBH−589、ベリノスタット(PXD−101)、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマートの桂皮ヒドロキサム酸アナログであるパノビノスタット(LBH−589)、IF2357、アリールオキシアルカノン酸ヒドロキサミド、デプシペプチド、アピシジン、分子のペプチド基を含む環状ヒドロキサム酸、ロミデプシン(FK−228)、レッドFK、ヒドロキサム酸に脂肪族鎖で連結された環状ペプチド模倣物、ブチラート、酪酸フェニル、酪酸ナトリウム(NaBut)、バルプロ酸、ピバロイルオキシメチルブチラート、5 NOX−275、及びMGCD0103から選択される、請求項5に記載の医薬。
- 前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、パノビノスタット、ベリノスタット、ロミデプシン、バルプロ酸、エンチノスタット、アピシジン、SAHA又はNaButである、請求項5または6に記載の医薬。
- 前記HIV感染が、HIV−1、HIV−2、HTLV−1、及びHTLV−2からなる群から選択されるレトロウイルスによって引き起こされる、請求項5〜7のいずれか一項に記載の医薬。
- a)DNAメチル化阻害剤であるデシタビン、
b)ヒドロキサマート、環状ペプチド、脂肪酸、及びベンズアミドからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害剤、並びに、
c)1若しくは複数の溶媒及び1若しくは複数の薬学的に許容される担体からなる群より選択される1又は複数の更なる成分、
を含み、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、DNAメチル化阻害剤が投与された後に投与される、処置が必要な対象におけるレトロウイルス感染に関連する疾患又は状態を処置するための製剤。 - 前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、以下から選択される、請求項9に記載の製剤。
TSA、SAHA、エンチノスタット(MS−275)、アミノスベロイルヒドロキサム酸、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマート、LAQ−824、LBH−589、ベリノスタット(PXD−101)、M−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキサマートの桂皮ヒドロキサム酸アナログであるパノビノスタット(LBH−589)、IF2357、アリールオキシアルカノン酸ヒドロキサミド、デプシペプチド、アピシジン、分子のペプチド基を含む環状ヒドロキサム酸、ロミデプシン(FK−228)、レッドFK、脂肪族鎖によってヒドロキサム酸に連結された環状ペプチド模倣物、ブチラート、酪酸フェニル、酪酸ナトリウム、バルプロ酸、ピバロイルオキシメチルブチラート、5 NOX−275、及びMGCD0103。 - 前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が、パノビノスタット、ベリノスタット、ロミデプシン、バルプロ酸、エンチノスタット、アピシジン、SAHA又はNaButである、請求項9または10に記載の製剤。
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