JP6193275B2 - Ｂ細胞媒介炎症性疾患を治療するための方法 - Google Patents

Description

［ＥＦＳ−ＷＥＢを通してテキストファイルとして提出した配列表の参照］
配列表の公式コピーは、４３０５２９ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴというファイル名で、２０１３年２月２８日に作成され、４１，２８２バイトのサイズであり、本明細書とともにファイルされるＡＳＣＩＩフォーマットの配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂを通して電子的に提出する。このＡＳＣＩＩフォーマットの文書に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、全体として引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

［発明の分野］
本発明は、全般的に、炎症性疾患、特にＢ細胞媒介炎症性疾患の治療に関する。

自己抗体（自己抗原に対する抗体）生成の可能性を有するＢ細胞が作られることは、正常な生理条件下で通常のことである。しかし、このような天然自己抗体は、広範囲の反応性と、細胞表面抗原よりも可溶性自己抗原に対して強い嗜好性を示す低親和性のＩｇＭ抗体である（例えばＤｉｃｈｉｅｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４（２）：７６５〜７７１頁（１９８５）；Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ８３：２９５９〜２９６３頁（１９８６）を参照されたい）。自己反応性低親和性Ｂ細胞はアポトーシスを受け、よって、健常生物に対して危険性を示す可能性は低い。

自己抗体生成Ｂ細胞の数の増加、特定の領域への該細胞の動員、または生成される自己抗体の親和性の増加が、自己免疫疾患の発生を導くことができる場合がある。ある種の自己免疫疾患は、その疾患の病原および疾患状態の維持に寄与すると考えられる特定の自己抗体の存在を特徴とする。

シェーグレン症候群（ＳＳ）は、全人口のおよそ０．２から０．７％に影響する希な自己免疫疾患である。典型的には、シェーグレン症候群は、４０歳から６０歳の間の年齢で現れ、９：１で女性に偏向すると見積もられる。特に、この疾患は、原発性および続発性の形態で発生する。原発性の形態は、唾液腺および涙腺に主に影響するが、続発性の形態は、関節リウマチ（ＲＡ）および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）のような他の自己免疫結合組織障害に関連して生じる。原発性および続発性ＳＳ（それぞれｐＳＳおよびｓＳＳ）の患者はともに、口腔および眼の両方に疾患が現れることがある。ＳＳにより誘導される口内乾燥（口腔乾燥症）およびドライアイ（眼球乾燥症）は患者の生活の質に対して著しい負の影響を与えるが、筋骨格、肺および腎臓での顕性化、皮膚病変、白血球破壊性血管炎、レイノー現象、血液系合併症、肝臓の関与ならびにＢ細胞リンパ腫を含む、疾患のさらに衰弱的な側面について示す文献が増えてきている。よって、両方の形の疾患は、著しい罹患率および罹患した個体についての死亡率の原因となる。Ｖｏｕｌｇａｒｅｌｉｓら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ（１９９９）４２：１７６５〜１７７２頁；Ｇａｒｃｉａ−Ｃａｒｒａｓｃｏら、Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ（２００２）２９：７２６〜７３０頁；Ｒａｍｏｓ−Ｃａｓａｌｓら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）（２００２）８１：２８１〜２９２頁；Ｆｏｘ、Ｌａｎｃｅｔ（２００２）３６６：３２１〜３３１頁；Ｅｋｓｔｒｏｍら、Ｂｌｏｏｄ（２００８）１１１：４０２９〜４０３８頁；およびＤｅｌａｌａｎｄｅら、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）（２００８）８３：２８０〜２９１頁を参照されたい。よって、シェーグレン症候群のような自己免疫疾患およびその他の炎症性疾患の処置のための治療の開発に対する必要性が存在する。

ある種の自己免疫疾患および炎症性疾患を含むＣＸＣＬ１３発現と関連する疾患を処置するための方法が本発明において提供される。本明細書で記載する本発明の態様によると、ＣＸＣＬ１３の活性を妨害または阻害する有効量の薬剤を対象に投与するステップを含む、対象におけるＢ細胞媒介炎症性状態の悪化を治療、防止または低減する方法が提供される。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＸＬ１３とその受容体（例えばＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３）との間の相互作用を阻害する。ある種の実施形態では、薬剤は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離結合分子である。他の実施形態では、薬剤は、ＣＸＣＬ１３受容体（例えばＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３）に特異的に結合する単離結合分子であるか、または、可溶型のＣＸＣＬ１３受容体（例えばＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３）である。

本明細書で記載するある種の態様では、ＣＸＣＬ１３の活性を妨害または阻害する薬剤の投与により治療されるＢ細胞媒介炎症性状態は、シェーグレン症候群である。

以下の実施形態が、本発明に包含される。

１． シェーグレン症候群についての治療を必要とする対象に、有効量のＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤を投与するステップを含む、対象においてシェーグレン症候群を処置する方法。

２． 前記薬剤が、ＣＸＣＲ５に特異的に結合する結合分子である、実施形態１に記載の方法。

３． 前記薬剤が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する結合分子である、実施形態１に記載の方法。

４． 前記結合分子が、抗体またはその抗原結合断片である、実施形態２または３に記載の方法。

５． 前記抗体が、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、実施形態４に記載の方法。

６． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１０または１４に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む、実施形態４または５に記載の方法。

７． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１０または１４に示す配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む、実施形態４または５に記載の方法。

８． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１４に示す配列を有するＶＨドメインを含む、実施形態６または７に記載の方法。

９． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１５、１９または２１に示すアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む、実施形態４から８のいずれか１つに記載の方法。

１０． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１５、１９または２１に示す配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む、実施形態４から８のいずれか１つに記載の方法。

１１． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１９に示す配列を有するＶＬドメインを含む、実施形態９または１０に記載の方法。

１２． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、
ａ）それぞれ配列番号１４および配列番号１９、
ｂ）それぞれ配列番号１４および配列番号２１、
ｃ）それぞれ配列番号１０および配列番号１５
からなる群から選択されるＶＬおよびＶＬ配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む、実施形態４または５に記載の方法。

１３． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、
ａ）それぞれ配列番号１４および配列番号１９、
ｂ）それぞれ配列番号１４および配列番号２１、
ｃ）それぞれ配列番号１０および配列番号１５
からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列とそれぞれ２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む、実施形態４または５に記載の方法。

１４． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、
ａ）それぞれ配列番号１４および配列番号１９、
ｂ）それぞれ配列番号１４および配列番号２１、
ｃ）それぞれ配列番号１０および配列番号１５
からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列と同一のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む、実施形態４または５に記載の方法。

１５． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１４に示す配列を有するＶＨドメインと、配列番号１９に示す配列を有するＶＬドメインとを含む、実施形態９に記載の方法。

１６． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ａ）配列番号１１と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１、
ｂ）配列番号１２と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２、および
ｃ）配列番号１３と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３
の少なくとも１つを有するＶＨドメインを含む、実施形態４または５に記載の方法。

１７． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ａ）配列番号１１と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、
ｂ）配列番号１２と４以下のアミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、
ｃ）配列番号１３と４以下のアミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３
の少なくとも１つを有するＶＨドメインを含む、実施形態４または５に記載の方法。

１８． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１１に示す配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１２に示す配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１３に示す配列を有するＣＤＲ３とを含むＶＨドメインを含む、実施形態１６または１７に記載の方法。

１９． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ａ）配列番号１７または２０と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１、
ｂ）配列番号１７と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２、および
ｃ）配列番号１８と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３
の少なくとも１つを有するＶＬドメインを含む、実施形態４、５または１６から１８のいずれか１つに記載の方法。

２０． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ａ）配列番号１７または２０と４以下のアミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、
ｂ）配列番号１７と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、および
ｃ）配列番号１８と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３
の少なくとも１つを有するＶＬドメインを含む、実施形態４、５または１６から１８のいずれか１つに記載の方法。

２１． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号２０に示す配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１７に示す配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１８に示す配列を有するＣＤＲ３とを含むＶＬドメインを含む、実施形態１９または２０に記載の方法。

２２． 前記抗体が、ＩｇＧ１カッパ抗体である、実施形態４から２１のいずれか１つに記載の方法。

２３． 前記抗体が、ＶＨドメイン内にヒトＩｇＧ１定常領域と、ＶＬドメインの前記定常領域内にヒトカッパ領域とを含む、実施形態２２に記載の方法。

２４． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、
ａ）モノクローナル抗体５２６１、
ｂ）モノクローナル抗体５３７８、
ｃ）モノクローナル抗体５０８０、
ｄ）モノクローナル抗体１４７６、
ｅ）モノクローナル抗体３Ｄ２、
ｆ）ａ）〜ｅ）のいずれか１つの前記モノクローナル抗体のキメラまたはヒト化された形態、
ｇ）ａ）〜ｅ）からなる群から選択される参照モノクローナル抗体と同じＣＸＣＬ１３エピトープに結合する抗体または抗原結合断片、
ｈ）ａ）〜ｅ）からなる群から選択される参照モノクローナル抗体を競合阻害する抗体または抗原結合断片、および
ｉ）ａ）〜ｈ）のいずれか１つの抗原結合断片
からなる群から選択される、実施形態４に記載の方法。

２５． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体が、前記モノクローナル抗体５２６１、前記モノクローナル抗体５３７８、前記モノクローナル抗体５０８０、前記モノクローナル抗体１４７６および前記モノクローナル抗体３Ｄ２からなる群から選択される、実施形態２４に記載の方法。

２６． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体が、前記モノクローナル抗体５３７８である、実施形態２５に記載の方法。

２７． 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される、実施形態４から２４のいずれか１つに記載の方法。

２８． 前記薬剤が、可溶型のＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３である、実施形態１に記載の方法。

２９． 前記薬剤が、ＣＸＣＬ１３受容体とＣＸＣＬ１３との相互作用を阻害する、実施形態１から２８のいずれか１つに記載の方法。

３０． 前記ＣＸＣＬ１３受容体が、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３である、実施形態２９に記載の方法。

３１． 前記対象におけるシェーグレン症候群を予防する、実施形態１から３０のいずれか１つに記載の方法。

３２． 前記薬剤が、薬学的に許容される担体とともに投与される、実施形態１から３１のいずれか１つに記載の方法。

３３． シェーグレン症候群についての必要とする対象に、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する有効量の抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含む対象におけるシェーグレン症候群を治療する方法であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する、方法。

３４． ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１４に示す配列を有する可変重鎖ドメインと、配列番号１９に示す配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む、実施形態３３に記載の方法。

３５． 前記抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＲ５とＣＸＣＬ１３との相互作用を阻害する、実施形態３３に記載の方法。

３６． 前記対象が、動物である、実施形態１から３５のいずれか１つに記載の方法。

３７． 前記動物が、哺乳動物である、実施形態３６に記載の方法。

３８． 前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態３７に記載の方法。

本発明のこれらのおよびその他の態様を、以下に示す発明の記載においてより詳細に開示する。

１００μｇのアイソタイプ対照抗体（左のパネル）または抗ＣＸＣＬ１３抗体（右のパネル）のいずれかで４週齢から開始して１２週間、毎週３回処置した雌のＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪ（ＮＯＤ）マウスからのヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色唾液腺試料を示す図である。１６週齢で犠死させた後に、唾液腺組織を分析のために取り出した。 アイソタイプ対照および抗ＣＸＣＬ１３抗体処置試料について計数した、顎下組織中のリンパ球性増殖巣の数を示す図である。 上記のようなアイソタイプ対照抗体または抗ＣＸＣＬ１３抗体処置後のマウスの唾液腺組織におけるＣＸＣＲ５のｍＲＮＡの発現を示す図である。 上記のようなアイソタイプ対照抗体または抗ＣＸＣＬ１３抗体処置後のマウスの唾液腺組織におけるＣＤ１９のｍＲＮＡの発現を示す図である。 上記のようなアイソタイプ対照抗体または抗ＣＸＣＬ１３抗体処置後のマウスの唾液腺組織におけるＣＤ４のｍＲＮＡの発現を示す図である。

恒常性Ｂ細胞誘引性ケモカイン１（ＢＣＡ−１）（他にはＣＸＣＬ１３（またはＡＮＧＩＥ、ＢＬＣ、ＢＬＲ１Ｌ、ＡＮＧＩＥ２もしくはＳｃｙｂ１３）として知られる）は、二次リンパ器官（例えば脾臓、リンパ節およびパイエル板）において濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）およびマクロファージにより構成的に発現される。Ｇｕｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３９１：７９９〜８０３頁（１９９８）およびＣａｒｌｓｅｎら、Ｂｌｏｏｄ１０４（１０）：３０２１〜３０２７頁（２００４）を参照されたい。ＣＸＣＬ１３は、主に、Ｇタンパク質共役型ＣＸＣＲ５受容体（バーキットリンパ腫受容体１）を介して作用する。ＣＸＣＲ５は、例えば成熟Ｂリンパ球、ＣＤ４＋濾胞ヘルパーＴ細胞（Ｔｈｆ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞のわずかな部分集合および活性化扁桃腺Ｔｒｅｇ細胞上で発現される。それぞれ全体として引用することにより本明細書の一部をなす、Ｌｅｇｌｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：６５５〜６６０頁（１９９８）；Ｆｏｒｓｔｅｒら、Ｂｌｏｏｄ８４：８３０〜８４０頁（１９９４）；Ｆａｚｉｌｌｅａｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ３０：３２４〜３３５頁（２００９）；Ａｎｓｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０：１１２３〜１１３４頁（１９９９）；Ｌｉｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１４（１１）：１６４０〜１６４９頁（２００４）；およびＲ．Ｆｏｒｓｔｅｒ、Ｃｈａｐｔｅｒ ｉｎ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、２０００年８月、を参照されたい。ＣＸＣＬ１３は、例えば活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞および中型から大型血管の内皮細胞により発現される別のケモカイン受容体であるＣＸＣＲ３を介してシグナル伝達することもできる（Ｊｅｎｈら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ１５：１１３〜１２１頁（２００１）；Ｇａｒｃｉａ−Ｌｏｐｅｚら、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ８１：４０９〜４１８頁（２００１）（これらはそれぞれ全体として引用することにより本明細書の一部をなす））。

本明細書で用いる場合、用語「ＣＸＣＬ１３」および「ＣＸＣＬ１３ポリペプチド」は、相互に交換可能なものとして用いられる。ある種の実施形態では、ＣＸＣＬ１３は、完全サイズのＣＸＣＬ１３もしくはその断片、またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペプチドを含んでよく、ここで、ＣＸＣＬ１３の断片またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペプチドは、完全サイズのＣＸＣＬ１３のいくらかまたは全ての機能的特性を保持する。ヒトＣＸＣＬ１３ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列（それぞれ配列番号１および２）は記載されており、例えばＬｅｇｌｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７（４）：６５５〜６６０頁（１９９８）を参照されたい。マウスＣＸＣＬ１３ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列（それぞれ配列番号３および４）は記載されており、例えばＧｕｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３９１（６６６９）：７９９〜８０３頁（１９９８）を参照されたい。さらに、カニクイザルＣＸＣＬ１３ポリペプチド配列は、配列番号５に示すように、記載されている。

本明細書で用いる場合、用語「ＣＸＣＲ５」および「ＣＸＣＲ５ポリペプチド」は、相互に交換可能なものとして用いられる。ある種の実施形態では、ＣＸＣＲ５は、完全サイズのＣＸＣＲ５もしくはその断片、またはＣＸＣＲ５バリアントポリペプチドを含んでよく、ここで、ＣＸＣＲ５の断片またはＣＸＣＲ５バリアントポリペプチドは、完全サイズのＣＸＣＲ５のいくらかまたは全ての機能的特性を保持する。用語「ＣＸＣＲ５」および「ＣＸＣＲ５ポリペプチド」は、可溶型のＣＸＣＲ５も包含する。本明細書で用いる場合、用語「可溶型のＣＸＣＲ５」は、細胞膜と結合していない形態のＣＸＣＲ５である。全長ＣＸＣＲ５は、７回膜貫通型受容体である。よって、可溶型のＣＸＣＲ５の非限定的な例は、細胞外ドメイン（例えば最初の約６０アミノ酸）から本質的になるＣＸＣＲ５の断片を含む。ヒトＣＸＣＲ５ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列は、当技術分野において知られており、本明細書においてそれぞれ配列番号６および７として示す。マウスＣＸＣＲ５ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、当技術分野において知られており、本明細書においてそれぞれ配列番号８および９として示す。

本明細書で用いる場合、用語「ＣＸＣＲ３」および「ＣＸＣＲ３ポリペプチド」は、相互に交換可能なものとして用いられる。ある種の実施形態では、ＣＸＣＲ３は、完全サイズのＣＸＣＲ３もしくはその断片、またはＣＸＣＲ３バリアントポリペプチドを含むことがあり、ここで、ＣＸＣＲ３またはＣＸＣＲ３バリアントポリペプチドの断片は、完全サイズのＣＸＣＲ３のいくつかまたは全ての機能的特性を保持する。用語「ＣＸＣＲ３」および「ＣＸＣＲ３ポリペプチド」は、可溶型のＣＸＣＲ３も包含する。本明細書で用いる場合、用語「可溶型のＣＸＣＲ３」は、細胞膜と結合していない形態のＣＸＣＲ３である。全長ＣＸＣＲ３は、７回膜貫通型受容体である。よって、可溶型のＣＸＣＲ３の非限定的な例は、細胞外ドメインから本質的になるＣＸＣＲ３の断片を含む。ヒトＣＸＣＲ３配列は、当技術分野において知られており、本明細書において配列番号２２および２３として示すものは、それぞれヒトＣＸＣＲ３バリアント１およびバリアント３である。

本明細書で示すように、ＣＸＣＬ１３活性の阻害は、シェーグレン症候群のマウスモデルにおける唾液腺炎症を低減し、唾液腺に存在するＢ細胞数の減少を導く。いずれの理論または作用機序に束縛されるものではないが、ＣＸＣＬ１３は、シェーグレン症候群において唾液腺組織へのＢ細胞の移動を駆動すると考えられる。よって、必要とする対象へのＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤の投与による、シェーグレン症候群を含むがそれに限定されない炎症性疾患、特にＢ細胞媒介炎症性疾患の治療のための方法が提供される。

今回開示する方法は、炎症性疾患およびＣＸＣＬ１３発現細胞に関連する免疫系の機能不全もしくは障害の治療または防止を対象とする。「ＣＸＣＬ１３発現細胞」により、ＣＸＣＬ１３抗原を発現する正常および悪性細胞を意図する。細胞においてＣＸＣＬ１３発現を検出するための方法は当技術分野において公知であり、それらに限定されないが、ＰＣＲ技術、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡなどを含む。

炎症性疾患は、炎症および組織破壊またはその組み合わせを特徴とする。「抗炎症活性」により、炎症の低下または防止を意図する。「炎症性疾患」は、開始イベントまたは免疫応答の標的が例えば同種抗原、異種抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、未知抗原またはアレルゲンを含む（１以上の）非自己抗原に関与する任意の炎症性免疫媒介プロセスを含む。

一実施形態では、炎症性疾患は、末梢または中枢神経系の炎症性障害である。

いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、Ｂ細胞媒介炎症性疾患である。本明細書で用いる場合、用語「Ｂ細胞媒介炎症性疾患」は、本明細書で記載する炎症性疾患であり、ここで、該疾患の病原、進行または病原および進行の両方は、Ｂ細胞の活性に主に依存する。Ｂ細胞媒介炎症性疾患の非限定的な例は、自己抗体の生成を特徴とするものを含む。

「Ｂ細胞」は、骨髄中で成熟するリンパ球であり、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞またはエフェクターＢ細胞（形質細胞）を含む。Ｂ細胞は、本明細書では、正常または非悪性Ｂ細胞であってよい。

「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞表面抗原」は、該抗原と結合するアンタゴニストが標的にできるＢ細胞の表面上に発現される抗原である。例示的なＢ細胞表面マーカーは、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６ならびにＣＸＣＲ５を含む。特に対象とするＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞上で優先的に発現され、前駆Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の両方で発現されることがある。本発明で好ましいＢ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９およびＣＸＣＲ５である。本発明の目的のために、用語「炎症性疾患」は、それらに限定されないが「自己免疫疾患」を含む。本明細書で用いる場合、用語「自己免疫」は、「自己」抗原に関わる炎症性免疫媒介プロセスを包含すると一般的に理解される。自己免疫疾患において、（１以上の）自己抗原は、宿主免疫応答を引き起こす。

一実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体または抗原結合断片は、シェーグレン症候群を治療または予防するために用いられる。

本明細書で用いる場合、乾燥症候群としても知られる「シェーグレン症候群」は、免疫細胞が、涙および唾液を生成する腺を攻撃する自己免疫疾患または障害である。この障害の際立った症状は、口内乾燥およびドライアイである。さらに、シェーグレン症候群は、皮膚、鼻および膣の乾燥を引き起こすことがあり、腎臓、血管、肺、肝臓、膵臓および脳を含む体の他の器官に影響することがある。シェーグレン症候群は、原発性障害（「原発性シェーグレン症候群」）、または関節リウマチ、全身性ループス、多発性筋炎、強皮症および自己免疫性肝炎のようなリウマチ性障害、非ホジキンリンパ腫のようなリンパ腫ならびに甲状腺炎のような内分泌障害に関連し、かつ／もしくはそのような障害に対して続発性である続発性障害（「続発性シェーグレン症候群」）として存在できる。用語「シェーグレン症候群」は、本明細書で用いる場合、診断が行われていることを条件として、原発性および続発性の両方のシェーグレン症候群を含む段階が何であっても、また、いかなる症状が現れていても、シェーグレン症候群に対して適用する。症候群についての診断は、以下に述べるものを含む。これは、全身性の顕在化なしで中等度から重度の乾燥症状を示す対象および全身性の症状を示す対象も含む。

ある種の実施形態では、異所性リンパ系濾胞もしくは胚中心の存在または患部組織へのＢ細胞の動員を特徴とする炎症性疾患の治療のために、必要とする対象に薬剤が投与される。これらの実施形態のいくつかでは、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤は、異所性リンパ系濾胞または胚中心の形成を阻害する。

一実施形態では、治療は、患者へのＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の施用もしくは投与、または患者からの単離組織もしくは細胞株への薬剤の施用もしくは投与を含み、ここで、患者は、疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を有する。別の実施形態では、治療は、患者へのＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）を含む医薬組成物の施用もしくは投与、または疾患、疾患の症状もしくは疾患に対する素因を有する患者からの単離組織もしくは細胞株への薬剤を含む医薬組成物の施用もしくは投与を含むことも意図する。

本発明の方法に従って、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する少なくとも１つの薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患の治療または防止に関する正の治療応答を促進するために用いられる。自己免疫疾患および／または炎症性疾患に関する「正の治療応答」により、投与した薬剤の抗炎症活性、抗血管新生活性、抗アポトーシス活性などに関連する疾患の改善および／または疾患に関連する症状の改善を意図する。つまり、抗増殖効果、ＣＸＣＬ１３発現細胞のさらなる増殖の防止、それらに限定されないが、炎症性サイトカイン、接着分子、プロテアーゼ、免疫グロブリン（例えばＣＸＣＬ１３を有する細胞がＢ細胞である場合）、それらの組み合わせの分泌の低下などを含む炎症性応答の低減、抗炎症性タンパク質の生成の増加、自己反応性細胞の数の低下、免疫寛容の増加、自己反応性細胞生存の阻害、アポトーシスの低下、内皮細胞移動の低下、自発的単球移動の増加、異所性リンパ系濾胞数の低減、患部組織に存在するＢ細胞数の低減、患者組織へのＢ細胞の移動の低減、ＣＸＣＬ１３発現細胞の刺激により媒介される１もしくは複数の症状の低下および／または減少が観察できる。このような正の治療応答は、投与経路に限定されず、ドナー、ドナー組織（例えば臓器灌流）、ホスト、それらの任意の組み合わせなどへの投与を含み得る。臨床応答は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影イメージング、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析、組織学的検査、肉眼所見、およびそれらに限定されないがＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、クロマトグラフィーなどにより検出可能な変化を含む血液化学のようなスクリーニング技術を用いて評価できる。これらの正の治療応答に加えて、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）を用いる治療を受ける対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。

本明細書で用いる場合、用語「治療する」または「治療」は、治療的処置および予防的または防止的措置の両方のことをいい、ここで、目的は、シェーグレン症候群の進行のような望ましくない生理的変化もしくは障害を遅くする（少なくする）か、該変化もしくは障害の悪化を低減するか、または該変化もしくは障害の再発を防止することである。有益なまたは所望の臨床的結果は、それらに限定されないが、検出可能または検出不可能な、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定化（すなわち悪化しない）、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善もしくは一次的緩和および寛解（部分的または完全のいずれか）を含む。「治療」は、治療を受けない場合に予期される生存と比較して延長された生存も意味し得る。治療を必要とするものは、状態または障害を既に有するもの、および状態もしくは障害を有する傾向にあるものまたは状態もしくは障害を妨げようとするものを含む。

「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」により、それについての診断、予後または治療が所望される任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象は、ヒト、家畜、畜産動物ならびに動物園、スポーツまたはペット動物、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシなどを含む。

本明細書で用いる場合、「ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤の投与により利益を受け得る対象」および「治療を必要とする動物」のような句は、例えば治療、すなわち疾患の一次的緩和もしくは防止のために、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体）の投与から利益を受け得る哺乳動物対象のような対象を含む。本明細書でより詳細に記載するように、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体は、非コンジュゲート形態で用いることができるか、または例えば薬物、プロドラッグもしくは同位体にコンジュゲートできる。

ＣＸＣＬ１３活性の阻害のために有用な薬剤は、小分子、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、薬剤は、その受容体とのＣＸＣＬ１３の結合を遮断する。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５との間の相互作用を遮断する。他の実施形態では、薬剤は、ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ３との間の相互作用を遮断する。特定の実施形態では、薬剤は、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３と特異的に結合する特異的結合分子である。これらの実施形態のいくつかでは、薬剤は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５抗体または抗ＣＸＣＲ３抗体である。他の実施形態では、薬剤は、可溶型のＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３である。

本明細書で用いる場合、用語「ポリペプチド」は、単数の「ポリペプチド」および複数の「ポリペプチド」を包含することを意図し、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）により直鎖状に連結されたモノマー（アミノ酸）で構成される分子のことをいう。用語「ポリペプチド」は、２以上のアミノ酸の任意の１または複数の鎖のことをいい、特定の長さの生成物のことをいわない。つまり、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」または２以上のアミノ酸の１もしくは複数の鎖のことをいうために用いられる任意のその他の用語は、「ポリペプチド」の定義の中に含まれ、用語「ポリペプチド」は、これらの任意の用語の代わりにまたは相互に交換可能に用いることができる。用語「ポリペプチド」は、限定することなくグリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮蔽基による誘導体化、タンパク質分解切断または非天然アミノ酸による修飾を含むポリペプチドの発現後修飾の生成物のことをいうことも意図する。ポリペプチドは、自然の生物学的供給源に由来するか、または組換え技術により生成できるが、指定する核酸配列から翻訳される必要はない。これは、化学合成を含む任意の方法で作製してよい。

今回開示する方法において有用なポリペプチドは、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１，０００以上または２，０００以上のアミノ酸のサイズのものであってよい。ポリペプチドは、規定された三次元構造を有してよいが、そのような構造を有する必要はない。規定された三次元構造を有するポリペプチドは、折り畳まれたといい、規定された三次元構造を有さないがむしろ多数の異なる高次構造を採用できるポリペプチドは、折り畳まれていないという。本明細書で用いる場合、用語「糖タンパク質」は、少なくとも１の炭水化物部分（これは、タンパク質に、アミノ酸残基、例えばセリン残基またはアスパラギン残基の酸素含有または窒素含有側鎖により付着する）に結合したタンパク質のことをいう。

「単離」ポリペプチドまたはその断片、バリアントもしくは誘導体により、その自然環境にないポリペプチドを意図する。特定のレベルの精製は必要とされない。例えば、単離ポリペプチドは、その天然または自然の環境から取り出すことができる。宿主細胞中で発現された組換え生成ポリペプチドおよびタンパク質は、任意の適切な技術により分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製された天然または組換えポリペプチドと同様に、本発明の目的のために単離されたとみなされる。

今回開示する方法において有用なポリペプチドとして、ポリペプチドの断片、誘導体、類似体、バリアント、およびそれらの任意の組み合わせも含まれる。用語「断片」、「バリアント」、「誘導体」および「類似体」は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体または抗体ポリペプチドのことをいう場合、対応する抗体または抗体ポリペプチドの少なくともいくらかの抗原結合特性を保持する任意のポリペプチドを含む。ポリペプチドの断片は、タンパク質分解断片および欠失断片を、本明細書の他の場所で論じる特異的抗体断片に加えて含む。抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体のバリアントは、上記の断片、およびアミノ酸置換、欠失または挿入によるアミノ酸配列の変更を有するポリペプチドを含む。バリアントは、自然に存在するかまたは自然に存在しないものであってよい。自然に存在しないバリアントは、当技術分野において既知の突然変異誘発技術を用いて生成できる。バリアントポリペプチドは、保存的もしくは非保存的アミノ酸置換、欠失または付加を含んでよい。バリアントポリペプチドは、本明細書において「ポリペプチド類似体」ということもある。本明細書で用いる場合、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体または抗体ポリペプチドの「誘導体」は、官能性側基の反応により化学的に誘導体化した１または複数の残基を有する主題ポリペプチドのことをいう。「誘導体」として、２０の標準的アミノ酸の１または複数の自然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも含まれる。例えば、４−ヒドロキシプロリンは、プロリンを置換でき、５−ヒドロキシリシンは、リシンを置換でき、３−メチルヒスチジンは、ヒスチジンを置換でき、ホモセリンは、セリンを置換でき、オルニチンは、リシンを置換できる。抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５および抗ＣＸＣＲ３抗体および抗体ポリペプチドの誘導体は、参照抗体または抗体ポリペプチドにおいて見出されないさらなる特徴を示すように変更されたポリペプチドを含んでよい。

ポリペプチドの関係において、「直鎖状配列」または「配列」は、アミノ末端からカルボキシル末端方向でのポリペプチド中のアミノ酸の順序であり、ここで、配列中で互いに隣にある残基は、ポリペプチドの一次構造において連続的である。

用語「ポリヌクレオチド」は、単数の核酸および複数の核酸を包含することを意図し、単離核酸分子または構築物、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）のことをいう。ポリヌクレオチドは、通常のホスホジエステル結合または通常でない結合（例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）において見出されるようなアミド結合）を含んでよい。用語「核酸」は、ポリヌクレオチド中に存在する任意の１または複数の核酸セグメント、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ断片のことをいう。「単離」核酸またはポリヌクレオチドにより、その天然の環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを意図する。例えば、ベクターに含まれる、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片をコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明の目的のために単離されたとみなされる。単離ポリヌクレオチドのさらなる例は、異種宿主細胞において維持される組換えポリヌクレオチドまたは溶解している（部分的または実質的）精製ポリヌクレオチドを含む。単離ＲＮＡ分子は、本発明のポリヌクレオチドのインビボまたはインビトロのＲＮＡ転写産物を含む。本発明による単離ポリヌクレオチドまたは核酸は、合成的に生成されたこのような分子をさらに含む。さらに、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位または転写ターミネーターのような調節エレメントであるかまたはそれを含んでよい。

本明細書で用いる場合、「コード領域」は、アミノ酸に翻訳されるコドンからなる核酸の一部である。「停止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡまたはＴＡＡ）はアミノ酸に翻訳されないが、これは、コード領域の一部とみなすことができ、しかし、任意のフランキング配列、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどは、コード領域の一部でない。今回開示する方法において有用な２以上のコード領域は、単一のポリヌクレオチド構築物、例えば単一のベクター上または別々のポリヌクレオチド構築物、例えば別々の（異なる）ベクター上に存在できる。さらに、ベクターはいずれも単一のコード領域を含有するか、または２以上のコード領域を含んでよく、例えば単一のベクターは、免疫グロブリン重鎖可変領域および免疫グロブリン軽鎖可変領域を別々にコードしてよい。さらに、今回開示する方法において有用なベクター、ポリヌクレオチドまたは核酸は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードする核酸と融合したかまたは融合していない異種コード領域をコードできる。異種コード領域は、限定することなく、分泌シグナルペプチドまたは異種機能性ドメインのような専門のエレメントまたはモチーフを含む。

ある種の実施形態では、今回開示する方法において有用なポリヌクレオチドまたは核酸は、ＤＮＡである。ＤＮＡの場合、ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは、通常、１または複数のコード領域に作動可能に会合したプロモーターおよび／またはその他の転写もしくは翻訳制御エレメントを含んでよい。作動可能な会合は、遺伝子生成物、例えばポリペプチドのコード領域が、遺伝子生成物の発現を調節配列の影響または制御の下におくような様式で１または複数の調節配列と会合する場合である。２つのＤＮＡ断片（例えばポリペプチドコード領域とそれと会合するプロモーター）とは、プロモーター機能の誘発が所望の遺伝子生成物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらし、２つのＤＮＡ断片間の結合の性質が遺伝子生成物の発現を駆動する発現調節配列の能力に干渉しないかまたは転写されるＤＮＡ鋳型の能力に干渉しないならば、「作動可能に会合」している。つまり、プロモーター領域は、プロモーターが核酸の転写を可能にできるならば、ポリペプチドをコードする核酸と作動可能に会合している。プロモーターは、所定の細胞においてのみＤＮＡの実質的な転写を駆動する細胞特異的プロモーターであってよい。プロモーター以外のその他の転写制御エレメント、例えばエンハンサー、オペレーター、リプレッサーおよび転写終結シグナルは、ポリヌクレオチドに作動可能に会合して、細胞特異的転写を駆動できる。適切なプロモーターおよびその他の転写制御領域は、本明細書に開示する。

様々な転写制御領域が当業者に知られている。これらは、限定することなく、脊椎動物細胞において機能する転写制御領域、例えばそれらに限定されないが、サイトメガロウイルス（イントロンＡを伴う最初期プロモーター）、サルウイルス４０（初期プロモーター）およびレトロウイルス（例えばラウス肉腫ウイルス）からのプロモーターおよびエンハンサーセグメントを含む。その他の転写制御領域は、脊椎動物遺伝子に由来するもの、例えばアクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモンおよびウサギβグロビン、ならびに真核細胞における遺伝子発現を制御できるその他の配列を含む。さらなる適切な転写制御領域は、組織特異的プロモーターおよびエンハンサー、ならびにリンホカイン誘導性プロモーター（例えばインターフェロンまたはインターロイキンにより誘導できるプロモーター）を含む。

同様に、様々な翻訳制御エレメントが当業者に知られている。これらは、それらに限定されないが、リボソーム結合部位、翻訳開始および終結コドン、ならびにピコルナウイルスに由来するエレメント（特に配列内リボソーム進入部位またはＩＲＥＳ、ＣＩＴＥ配列ともよばれる）を含む。

他の実施形態では、今回開示する方法において有用なポリヌクレオチドは、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の形態のＲＮＡである。

今回開示する方法において有用なポリヌクレオチドおよび核酸コード領域は、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの分泌を駆動する分泌またはシグナルペプチドをコードするさらなるコード領域と会合してよい。シグナルの仮説によると、哺乳動物細胞により分泌されるタンパク質は、成長するタンパク質鎖が粗面小胞体を横切って一旦輸送され始めると成熟タンパク質から切断されるシグナルペプチドまたは分泌リーダー配列を有する。当業者は、脊椎動物細胞により分泌されるポリペプチドが、通常、ポリペプチドのＮ末端に融合したシグナルペプチドを有し、これは、完全または「全長」ポリペプチドから切断されて分泌または「成熟」形態のポリペプチドを生成することを理解している。ある種の実施形態では、天然シグナルペプチド、例えば免疫グロブリン重鎖もしくは軽鎖シグナルペプチド、または作動可能に会合したポリペプチドの分泌を駆動する能力を保持するその配列の機能的誘導体を用いる。代わりに、異種哺乳動物シグナルペプチドまたはその機能的誘導体を用いてよい。例えば、野生型リーダー配列は、ヒト組織プラスミノゲン活性化因子（ＴＰＡ）またはマウスβ−グルクロニダーゼのリーダー配列で置換してよい。

用語「発現」は、本明細書で用いる場合、遺伝子が生化学的物質、例えばポリペプチドを生成するプロセスのことをいう。このプロセスは、限定することなく、遺伝子ノックダウンならびに一過性発現および安定的発現の両方を含む、細胞内での遺伝子の機能的存在の任意の顕れを含む。これは、限定することなく、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への遺伝子の転写、およびポリペプチドへのそのようなｍＲＮＡの翻訳を含む。所望の最終生成物が生化学的物質であるならば、発現は、その生化学的物質と任意の前駆体の創出を含む。遺伝子の発現は「遺伝子生成物」を生成する。本明細書で用いる場合、遺伝子生成物は、核酸、例えば遺伝子の転写により生成されるメッセンジャーＲＮＡ、または転写産物から翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書で記載する遺伝子生成物は、転写後修飾、例えばポリアデニル化された核酸、または翻訳後修飾、例えばメチル化、グリコシル化、脂質付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解切断などを受けたポリペプチドをさらに含む。

「結合分子」または「抗原結合分子」は、その広い意味において、抗原決定基に特異的に結合する分子のことをいう。一実施形態では、結合分子は、ＣＸＣＬ１３（ＢＣＡ−１ともよばれる）に特異的に結合する。別の実施形態では、結合分子は、ＣＸＣＲ５に特異的に結合する。別の実施形態では、結合分子は、ＣＸＣＲ３に特異的に結合する。また別の実施形態では、今回開示する方法において有用な結合分子は、抗体またはその抗原結合断片、例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体である。別の実施形態では、結合分子は、抗体分子の少なくとも１の重鎖または軽鎖ＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくとも２つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくとも３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくとも４つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくとも５つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくとも６つのＣＤＲを含む。ある種の実施形態では、１または複数のＣＤＲは、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２からである。

いくつかの実施形態では、今回開示する方法は、ある抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体を含む。自然に存在する抗体のような完全サイズ抗体と特異的に言及しない限り、用語「抗ＣＸＣＬ１３抗体」、「抗ＣＸＣＲ５抗体」および「抗ＣＸＣＲ３抗体」は、完全サイズ抗体およびそのような抗体、例えば自然に存在する抗体もしくは免疫グロブリン分子の抗原結合断片、バリアント、類似体または誘導体、あるいは抗体分子と同様の様式で抗原に結合する遺伝子工学的に作製された抗体分子または断片を包含する。

本明細書で用いる場合、「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーからまたは１もしくは複数のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックであり、内因性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体（以下および例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されるような）を含む。「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、少なくとも重鎖の可変ドメインまたは少なくとも重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む抗体も含み、ここで、（１または複数の）可変ドメインは、（１または複数の）ヒト免疫グロブリン可変ドメインのアミノ酸配列を有する。

「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、本明細書で記載する公知の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体分子のバリアント（誘導体を含む）（例えばＶＨ領域および／またはＶＬ領域）（該抗体またはその断片は、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３ポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントに特異的に結合する）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる上記の「ヒト」または「完全ヒト」抗体も含む。それらに限定されないが、アミノ酸置換をもたらす部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発を含む当業者に知られる標準的な技術を用いて、ヒト抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体をコードするヌクレオチド配列に変異を導入できる。好ましくは、バリアント（誘導体を含む）は、参照ＶＨ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬ領域、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２またはＶＬＣＤＲ３に対して５０未満のアミノ酸置換、４０未満のアミノ酸置換、３０未満のアミノ酸置換、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換または２未満のアミノ酸置換をコードする。

ある種の実施形態では、アミノ酸置換は、以下にさらに論じる保存的アミノ酸置換である。あるいは、変異は、例えば飽和突然変異誘発によりコード配列の全体または一部にわたって無作為に導入でき、得られた変異体は、生物活性についてスクリーニングして、活性（例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３ポリペプチド、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３に結合する能力）を保持する変異を同定できる。「ヒト」または「完全ヒト」抗体のこのようなバリアント（またはその誘導体）は、「最適化」または「抗原結合について最適化」されたヒトまたは完全ヒト抗体ということもでき、抗原に対する親和性が改善された抗体を含む。

用語「抗体」および「免疫グロブリン」は、本明細書において相互に交換可能なものとして用いられる。抗体または免疫グロブリンは、少なくとも重鎖の可変ドメインを含み、通常、少なくとも重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的よく理解されている。例えばＨａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）を参照されたい。

以下により詳細に論じるように、用語「免疫グロブリン」は、生化学的に区別できる様々な広いクラスのポリペプチドを含む。当業者は、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）に、それらのうちのいくつかのサブクラス（例えばγ１〜γ４）とともに分類されることを認識する。抗体の「クラス」をＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ ＩｇＧまたはＩｇＥにそれぞれ決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１などは、十分に特徴決定され、機能的専門性を与えることが知られている。当業者は、これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの改変バージョンを本開示の観点で容易に認識でき、よって、これらの改変バージョンは本発明の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、明らかに本発明の範囲内であり、以下の議論は、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスを全般的に対象とする。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロブリン分子は、およそ２３，０００ダルトンの分子量の２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、５３，０００〜７０，０００の分子量の２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。４つの鎖は、典型的に、ジスルフィド結合により「Ｙ」形状につながれ、ここでは、軽鎖が、「Ｙ」の口から開始して可変領域全体に継続して重鎖を囲む。

軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合できる。一般的に、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合しており、２つの重鎖の「尾」部分は、共有ジスルフィド結合または免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞または遺伝子工学で作製された宿主細胞のいずれかにより作製される場合に非共有結合により互いに結合する。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ形状の分かれた端のＮ末端から、各鎖の底のＣ末端までに及ぶ。

軽鎖および重鎖はともに、構造的および機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常」および「可変」は、機能的に用いられる。この点に関して、軽鎖（ＶＬまたはＶＫ）および重鎖（ＶＨ）部分の両方の可変ドメインが抗原認識および特異性を決定することが認識される。逆に、軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などのような重要な生物学的特性を与える。慣例的に、定常領域ドメインの番号付けは、それらが抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠ざかるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域である。ＣＨ３およびＣＬドメインは、実際に、それぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を含む。

上述したように、可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識してそれに特異的に結合することを可能にする。つまり、抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメイン、またはこれらの可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）の部分集合は、組み合わされて、三次元抗原結合部分を規定する可変領域を形成する。この４つの要素からなる抗体構造は、Ｙの各腕の端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＬ各鎖上の３つのＣＤＲにより規定される。いくつかの場合、例えばラクダ種に由来するかまたはラクダ免疫グロブリンに基づいて遺伝子工学的に作製されたある免疫グロブリン分子において、完全免疫グロブリン分子は、軽鎖を有さず重鎖のみからなることがある。例えばＨａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ３６３：４４６〜４４８頁（１９９３）を参照されたい。

自然に存在する抗体において、各抗原結合ドメインに存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体が水性環境中で三次元形状をとるように抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置されているアミノ酸の短い不連続配列である。「フレームワーク」領域とよばれる抗原結合ドメイン中の残りのアミノ酸は、分子間変動性がより低い。フレームワーク領域は、大部分がβシート高次構造を採用し、ＣＤＲは、βシート構造をつなぎ、その一部を形成する場合もあるループを形成する。つまり、フレームワーク領域は、鎖間非共有相互作用によりＣＤＲを正しい向きに配置するための足場を形成するように作用する。配置されたＣＤＲにより形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに対する表面相補性を規定する。この相補的表面は、抗体のその同族エピトープへの非共有結合を促進する。当業者は、ＣＤＲおよびフレームワーク領域を含むアミノ酸をそれぞれ、任意の与えられた重鎖または軽鎖可変ドメインについて容易に同定できる。なぜなら、これらは精密に定義されているからである（以下を参照されたい）。

ある用語について当技術分野において用いられかつ／または受け入れられている２以上の定義がある場合、本明細書で用いる用語の定義は、そうでないと明示的に述べない限り、全てのそのような意味を含むことを意図する。具体例は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見出される、不連続抗原結合部位を記載するための用語「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔら（１９８３）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」ならびにＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７頁（１９８７）（これらは引用することにより本明細書の一部をなすものとする）により記載され、ここで、これらの定義は、互いに比較した場合にオーバーラップまたはアミノ酸残基の部分集合を含む。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲに言及するためのどちらの定義を用いることも、本明細書で定義され用いられる用語の範囲内であることを意図する。上記の引用した参考文献のそれぞれにより定義されるＣＤＲを包含する適当なアミノ酸残基を、比較のために以下の表１に示す。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズに依存して変動する。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列に鑑みて、どの残基が特定のＣＤＲを含むかを慣例的に決定できる。

Ｋａｂａｔらは、いずれの抗体にも用いることができる可変ドメイン配列についての番号付けシステムを定義した。当業者は、「Ｋａｂａｔ番号付け」のこのシステムを、任意の可変ドメイン配列に、配列自体を超えるいずれの実験データにも依存することなく、明確に割り当てることができる。本明細書で用いる場合、「Ｋａｂａｔ番号付け」は、Ｋａｂａｔら（１９８３）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」に示される番号付けシステムのことをいう。そうでないと明記しない限り、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体中の特定のアミノ酸残基の位置の番号付けについての言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。

今回開示する方法において有用な抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、それらに限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化またはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬもしくはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーにより生成される断片、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）を含む。ＳｃＦｖ分子は、当技術分野において知られており、例えば米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。本発明の免疫グロブリンまたは抗体分子は、任意のタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２など）またはサブクラスの免疫グロブリン分子であり得る。

本明細書で用いる場合、用語「重鎖部分」は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列を含む。重鎖部分を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば上部、中間および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはそのバリアントもしくは断片の少なくとも１つを含む。例えば、本発明で用いるための結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少なくとも一部分とＣＨ２ドメインとを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少なくとも一部分とＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖またはＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少なくとも一部分とＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖を含んでよい。別の実施形態では、今回開示する方法において有用なポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、今回開示する方法で用いるための結合ポリペプチドは、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部分（例えばＣＨ２ドメインの全てまたは一部）を欠いてよい。上述したように、当業者は、自然に存在する免疫グロブリン分子からアミノ酸配列が変動するようにこれらのドメイン（例えば重鎖部分）を改変できることを理解している。

本明細書で開示するある抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体において、マルチマーのあるポリペプチド鎖の重鎖部分は、該マルチマーの第２のポリペプチド鎖上のものと同一である。代わりに、本発明の重鎖部分含有モノマーは、同一でない。例えば、各モノマーは、例えば二重特異性抗体を形成する異なる標的結合部分を含んでよい。

本明細書で開示する治療方法において用いるための結合分子の重鎖部分は、異なる免疫グロブリン分子に由来してよい。例えば、ポリペプチドの重鎖部分は、ＩｇＧ１分子に由来するＣ_Ｈ１ドメインと、ＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域とを含んでよい。別の例では、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子と部分的にＩｇＧ３分子とに由来するヒンジ領域を含むことができる。別の例では、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子と部分的にＩｇＧ４分子とに由来するキメラヒンジを含むことができる。

本明細書で用いる場合、用語「軽鎖部分」は、免疫グロブリン軽鎖、例えばカッパまたはラムダ軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖部分は、ＶＬまたはＣＬドメインの少なくとも１つを含む。

今回開示する方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、抗原のエピトープ（複数でもよい）または一部分（複数でもよい）、例えばそれらが認識または特異的に結合する本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３）の点で記載または特定することがある。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的ポリペプチドの一部分は、「エピトープ」または「抗原決定基」である。標的ポリペプチドは、単一のエピトープを含んでよいが、典型的には、少なくとも２つのエピトープを含み、抗原のサイズ、高次構造およびタイプに依存して、任意の数のエピトープを含むことができる。さらに、標的ポリペプチド上の「エピトープ」は、非ポリペプチド要素であってよいかまたはそれを含んでよく、例えばエピトープは、炭水化物側鎖を含んでよいことに注意すべきである。

抗体についてのペプチドまたはポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４〜５アミノ酸であると考えられる。ペプチドまたはポリペプチドエピトープは、好ましくは、少なくとも７、より好ましくは少なくとも９、最も好ましくは少なくとも約１５から約３０の間のアミノ酸を含有する。ＣＤＲは、抗原性ペプチドまたはポリペプチドをその三次形状について認識できるので、エピトープを含むアミノ酸は連続的である必要はなく、同じペプチド鎖上にない場合さえある。今回開示する方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体が認識するペプチドまたはポリペプチドエピトープは、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５または約１５から約３０の間の連続または不連続アミノ酸の配列を含有してよい。

「特異的に結合する」により、全般的に、抗体がエピトープにその抗原結合ドメインを介して結合し、該結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のいくらかの相補性を必然的に伴うことを意味する。この定義に従って、抗体がエピトープに、その抗原結合ドメインを介して、抗体が無作為で無関係のエピトープに結合するよりも容易に結合する場合に、該抗体はエピトープに「特異的に結合する」という。用語「特異性」は、本明細書において、ある抗体があるエピトープに結合する相対的親和性を述べるために用いられる。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所与のエピトープについてより高い特異性を有すると考えることができるか、または抗体「Ａ」は、関係するエピトープ「Ｄ」についてそれが有するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合するということができる。

「優先的に結合する」により、抗体がエピトープに、抗体が関係する、同様の、相同のまたは類似のエピトープに結合するよりも容易に、特異的に結合することを意味する。よって、所与のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのエピトープに、関係するエピトープよりも結合する可能性が高いが、そのような抗体は、関係するエピトープと交差反応し得る。

非限定的な例として、第２のエピトープについての抗体の解離定数（Ｋ_Ｄ）未満のＫ_Ｄで抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のＫ_Ｄより少なくとも１桁小さいＫ_Ｄで抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１の抗原に優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のＫ_Ｄよりも少なくとも２桁小さいＫ_Ｄで抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。

別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））未満のｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも１桁小さいｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも２桁小さいｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。本明細書で開示する抗体または抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３）またはその断片もしくはバリアントに、５×１０^−２ｓｅｃ^−１、１０^−２ｓｅｃ^−１または５×ｌ０^−３ｓｅｃ^−１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で結合するということができる。ある種の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約３×１０^−２以下であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約３×１０^−３以下であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約４×１０^−３以下であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５３７８であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。一実施形態では、本発明の抗体は、本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３）またはその断片もしくはバリアントに、５×１０^−４ｓｅｃ^−１、１０^−４ｓｅｃ^−１、５×１０^−５ｓｅｃ^−１または１０^−５ｓｅｃ^−１、５×１０^−６ｓｅｃ^−１、１０^−６ｓｅｃ^−１、５×１０^−７ｓｅｃ^−１または１０^−７ｓｅｃ^−１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で結合するということができる。

本明細書で開示する方法において有用な抗体または抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３）またはその断片もしくはバリアントに、１０^３Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、５×１０^３Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、１０^４Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、５×１０^４Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、１０^５Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、５×１０^５Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、１０^６Ｍ^−１ｓｅｃ^−１または５×１０^６Ｍ^−１ｓｅｃ^−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で結合するということができる。ある種の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は、約５×１０^５以上であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はヒトであるか、またはｋ（ｏｎ）は、約１×１０^５以上であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は、約１×１０^６以上であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は約１×１０^６以上であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５３７８であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。一実施形態では、本発明の抗体は、本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３）またはその断片もしくはバリアントに、１０^５Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、５×１０^５Ｍ^−１ｓｅｃ^−１、１０^６Ｍ^−１ｓｅｃ^−１または５×１０^６Ｍ^−１ｓｅｃ^−１または１０^７Ｍ^−１ｓｅｃ^−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で結合するということができる。

抗体がある程度エピトープへの参照抗体の結合を遮断する程度に抗体がエピトープに優先的に結合するならば、抗体は、所与のエピトープへの参照抗体、例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体との結合を、競合的に阻害するという。競合阻害は、当技術分野において知られる任意の方法、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイにより決定できる。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％または少なくとも５０％競合的に阻害するということができる。

本明細書で用いる場合、用語「親和性」は、免疫グロブリン分子のＣＤＲとの個別のエピトープの結合の強度の尺度のことをいう。例えば、Ｈａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版）２７〜２８頁を参照されたい。本明細書で用いる場合、用語「結合活性」は、免疫グロブリンの集団と抗原との間の複合体の全体的な安定性、すなわち抗原と免疫グロブリン混合物とが機能的に組み合わさる強度のことをいう。例えば、Ｈａｒｌｏｗの２９〜３４頁を参照されたい。結合活性は、特定のエピトープとの集団中の個別の免疫グロブリン分子の親和性と、免疫グロブリンと抗原との価数との両方に関する。例えば、二価モノクローナル抗体と、高反復性エピトープ構造を有する抗原、例えばポリマーとの間の相互作用は、高い結合活性の１つである。

今回開示する方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、それらの交差反応性の点で記載または特定することもできる。本明細書で用いる場合、用語「交差反応性」は、ある抗原に特異的な抗体が第２の抗原と反応する能力のことをいい、２つの異なる抗原性物質間の関係性の尺度である。つまり、その形成を誘発したエピトープ以外のエピトープに抗体が結合するならば、抗体は交差反応性である。交差反応性エピトープは、通常、誘導エピトープと同じ相補性構造特徴の多くを含有し、いくつかの場合では、元のものよりもよりうまく適合することが実際にある。

例えば、ある抗体は、関係するが同一でないエピトープ、例えば参照エピトープと少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％および少なくとも５０％の同一性（当技術分野において知られ、本明細書で記載する方法を用いて算出される）を有するエピトープと該抗体が結合するという、ある程度の交差反応性を有する。抗体は、参照エピトープと９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満および５０％未満の同一性（当技術分野において知られ、本明細書で記載する方法を用いて算出される）を有するエピトープと抗体が結合しないならば、ほとんどまたは全く交差反応性を有さないということができる。抗体は、あるエピトープのいずれのその他の類似体、オーソログまたはホモログにも抗体が結合しないならば、抗体は該エピトープについて「高度に特異的」であると考えることができる。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば今回開示する方法において有用な抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、本発明のポリペプチド、例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３に対するそれらの結合親和性の点で記載または特定することもできる。ある種の実施形態では、本発明の結合親和性は、５×１０^−２Ｍ、１０^−２Ｍ、５×１０^−３Ｍ、１０^−３Ｍ、５×１０^−４Ｍ、１０^−４Ｍ、５×１０^−５Ｍ、１０^−５Ｍ、５×１０^−６Ｍ、１０^−６Ｍ、５×１０^−７Ｍ、１０^−７Ｍ、５×１０^−８Ｍ、１０^−８Ｍ、５×１０^−９Ｍ、１０^−９Ｍ、５×１０^−１０Ｍ、１０^−１０Ｍ、５×１０^−１１Ｍ、１０^−１１Ｍ、５×１０^−１２Ｍ、１０^−１２Ｍ、５×１０^−１３Ｍ、１０^−１３Ｍ、５×１０^−１４Ｍ、１０^−１４Ｍ、５×１０^−１５Ｍまたは１０^−１５Ｍ未満または以下の解離定数またはＫｄを有するものを含む。一実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３に、約５×１０^−９Ｍ〜約５×１０^−１０Ｍ未満のＫｄで結合し、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、Ｋｄは約５×１０^−９Ｍ以下である。別の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片は、マウスＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３に、約５×１０^−７Ｍ〜約９×１０^−９Ｍ未満のＫｄで結合し、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、Ｋｄは約８×１０^−９Ｍ以下である。

今回開示する方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、「多重特異的」、例えば二重特異的、三重特異的またはそれより多い多重特異性であってよく、これは、これが１または複数の異なる抗原（例えばタンパク質）上に存在する２以上の異なるエピトープを同時に認識してそれに結合することを意味する。つまり、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体が「単一特異的」または「多重特異的」、例えば「二重特異的」であるかは、結合ポリペプチドが反応する異なるエピトープの数のことをいう。多重特異的抗体は、本明細書で記載する標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であるか、または標的ポリペプチドおよび異種エピトープ、例えば異種ポリペプチドもしくは固体支持体材料に特異的であってよい。

本明細書で用いる場合、用語「価数」は、結合ポリペプチドまたはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体もしくはその抗原結合断片中に存在する、可能性のある結合ドメイン、例えば抗原結合ドメインの数のことをいう。各結合ドメインは、１のエピトープに特異的に結合する。結合ポリペプチドまたはＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３結合分子が１より多い結合ドメインを含む場合、各結合ドメインは、同じエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗体について「二価単一特異性」と称する）または異なるエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗体について「二価二重特異性」と称する）に特異的に結合してもよい。抗体またはその抗原結合断片は、二重特異性で、各特異性について二価であってもよい（「二重特異性四価抗体」と称する）。別の実施形態では、四価ミニボディまたはドメイン欠失抗体を作製できる。

二重特異性二価抗体およびそれらを作製する方法は、例えば米国特許第５，７３１，１６８号；第５，８０７，７０６号；第５，８２１，３３３号；ならびに米国特許出願公開第２００３／０２０７３４号および第２００２／０１５５５３７号（これら全ての開示は、引用することにより本明細書の一部をなす）に記載される。二重特異性四価抗体およびそれらを作製する方法は、例えばＷＯ０２／０９６９４８およびＷＯ００／４４７８８（これらの開示はともに、引用することにより本明細書の一部をなす）に記載される。全般的に、ＰＣＴ公報ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０〜６９頁（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３頁（１９９２）を参照されたい。

以前に示したように、様々な免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および三次元形状は、公知である。本明細書で用いる場合、用語「ＶＨドメイン」は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、用語「ＣＨ１ドメイン」は、免疫グロブリン重鎖の最初（最もアミノ末端側）の定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対してアミノ末端側である。

本明細書で用いる場合、用語「ＣＨ２ドメイン」は、従来の番号付けスキームを用いて、抗体の例えば約２４４残基〜３６０残基（残基２４４〜３６０、Ｋａｂａｔ番号付けシステム；および残基２３１〜３４０、ＥＵ番号付けシステム；Ｋａｂａｔ ＥＡらを参照されたい）にわたる重鎖分子の一部分を含む。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対形成しない点で、独特である。むしろ、２つのＮ連結分岐炭水化物鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に介在する。ＣＨ３ドメインが、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで広がり、およそ１０８残基を含むことも十分に実証されている。

本明細書で用いる場合、用語「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとをつなぐ重鎖分子の一部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５残基を含み、フレキシブルであり、よって、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。ヒンジ領域は、３つの別個のドメイン：上部、中間および下部ヒンジドメインに細分化できる（Ｒｏｕｘら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３頁（１９９８））。

本明細書で用いる場合、用語「ジスルフィド結合」は、２つの硫黄原子の間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とジスルフィド結合またはブリッジを形成できるチオール基を含む。最も多く自然に存在するＩｇＧ分子において、ＣＨ１領域とＣＬ領域とは、ジスルフィド結合により連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムを用いて２３９および２４２に相当する位置（２２６位または２２９位、ＥＵ番号付けシステム）にて２つのジスルフィド結合により連結される。

本明細書で用いる場合、用語「キメラ抗体」は、免疫反応性領域または部位が第１の種から得られるかまたはそれに由来し、定常領域（これは、インタクト、部分的または本発明に従って改変されていることがある）が第２の種から得られる任意の抗体を意味するために用いられる。ある種の実施形態では、標的結合領域または部位は、非ヒト供給源（例えばマウスまたは霊長類）からであり、定常領域はヒト（例えば本明細書で記載するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）１４７６）である。

本明細書で用いる場合、用語「遺伝子工学的に作製された抗体」は、重鎖もしくは軽鎖または両方のいずれかにおける可変ドメインが、既知の特異性の抗体からの１または複数のＣＤＲの少なくとも部分的な置き換えにより、そして必要であれば、部分的フレームワーク領域置き換えおよび配列変更により変更された抗体のことをいう。ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体とクラスまたはサブクラスでさえが同じ抗体に由来できるが、ＣＤＲは、異なるクラスの抗体、そして好ましくは異なる種の抗体に由来することが構想される。既知の特異性の非ヒト抗体からの１または複数の「ドナー」ＣＤＲが、ヒト重鎖または軽鎖フレームワーク領域中にグラフトされた遺伝子工学的に作製された抗体は、本明細書において「ヒト化抗体」という。ある可変ドメインの抗原結合能力を別のものに移すために、全てのＣＤＲをドナー可変ドメインからの完全ＣＤＲに置き換える必要はないことがある。むしろ、標的結合部位の活性を維持するために必要な残基を移すことだけが必要になり得る。ある種の実施形態では、ヒト化抗体は、ドナー可変重鎖ドメインからの１、２または３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、ヒト化抗体は、ドナー可変軽鎖ドメインからの１、２または３つのＣＤＲを含む。

ヒト化抗体の重鎖もしくは軽鎖または両方における可変ドメイン中のフレームワーク領域が、ヒト起源の残基のみを含み得ることがさらに認識され、この場合、ヒト化抗体のこれらのフレームワーク領域は、「完全ヒトフレームワーク領域」という。代わりに、ドナー可変ドメインのフレームワーク領域（複数でもよい）の１または複数の残基を、ヒト化抗体の重鎖もしくは軽鎖または両方における可変ドメインのヒトフレームワーク領域（複数でもよい）の対応する位置内で必要であれば遺伝子工学的に作製して、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３抗原との適当な結合を維持するかまたは亢進できる。この様式で遺伝子工学的に作製されたヒトフレームワーク領域は、よって、ヒトおよびドナーのフレームワーク残基が混合されており、本明細書において「部分的ヒトフレームワーク領域」という。

例えば、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体のヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３〜３２７頁（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４〜１５３６頁（１９８８））の方法に従って、げっ歯類もしくは変異げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体の対応する配列に置換することにより、本質的に行うことができる。米国特許第５，２２５，５３９号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；および第５，８５９，２０５号（引用することにより本明細書の一部をなす）も参照されたい。得られるヒト化抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体は、ヒト化抗体の重鎖および／または軽鎖の可変ドメインの完全ヒトフレームワーク領域内に、少なくとも１つのげっ歯類または変異げっ歯類ＣＤＲを含み得る。いくつかの場合では、ヒト化抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体の１または複数の可変ドメインのフレームワーク領域内の残基は、対応する非ヒト（例えばげっ歯類）残基で置き換えられ（例えば米国特許第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；および第６，１８０，３７０号を参照されたい）、この場合、得られるヒト化抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体は、重鎖および／または軽鎖の可変ドメイン内に部分的ヒトフレームワーク領域を含み得る。

さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含んでよい。これらの改変は、抗体性能をさらに改良するため（例えば所望の親和性を得るため）に作製される。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、全てまたは実質的に全てのＣＤＲは、非ヒトヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てのまたは実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、場合によって、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部分も含む。さらなる詳細について、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ３３１：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３〜３２９頁（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６頁（１９９２）（引用することにより本明細書の一部をなすものとする）を参照されたい。よって、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ないものが、非ヒト種からの対応する配列で置換された抗体を含み得る。実際上、ヒト化抗体は、典型的に、いくつかまたは全てのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのフレームワーク残基が、げっ歯類抗体の類似部位からの残基で置換されたヒト抗体である。例えば米国特許第５，２２５，５３９号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；および第５，８５９，２０５号を参照されたい。米国特許第６，１８０，３７０号および国際公報第ＷＯ０１／２７１６０号も参照されたい（ここでは、ヒト化抗体および所定の抗原に対する親和性が改善されたヒト化抗体を生成する技術が開示されている）。

ＣＸＣＬ１３に結合する市販の抗体、例えばラット抗マウスＭＡｂ４７０（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびマウス抗ヒトＭＡｂ８０１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、当技術分野において開示されている。さらに、マウス抗ＣＸＣＬ１３抗体は、米国特許出願公開第２００８ ０２２７７０４Ａ１号（これは、全体として引用することにより本明細書の一部をなすものとする）に開示されている。モノクローナル抗ＣＸＣＬ１３抗体ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６および３Ｄ２は、「抗ＣＸＣＬ１３抗体およびそれを用いる方法」との名称の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５０１７７号（これは、２０１１年９月１日に出願され、２０１１年５月２日に出願された米国特許仮出願第６１／４８１，６４５号および２０１１年９月２日に出願された米国特許仮出願第６１／３７９，６７２号（それぞれは、全体として引用することにより本明細書の一部をなすものとする）の優先権を主張する）に開示されている。

モノクローナル抗体５２６１は、配列番号１４に示す配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインと、配列番号１９に示す配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメインとを含む。ＭＡｂ５２６１は、その重鎖内にヒトＩｇガンマ１−Ｆアロタイプ定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。モノクローナル抗体５３７８は、配列番号１４に示す配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインと、配列番号１９に示す配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメインとを含む。ＭＡｂ５３７８は、その重鎖内にマウスＩｇＧ２ａ定常領域と、その軽鎖内にマウスカッパ定常領域とを含む。ＭＡｂ５０８０は、配列番号１４に示す配列を有するＶＨドメインと、配列番号２１に示す配列を有するＶＬドメインとを含む。ＭＡｂ５０８０は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。モノクローナル抗体１４７６は、配列番号１０に示す配列を有するＶＨドメインと、配列番号１５に示す配列を有するＶＬドメインとを含む。ＭＡｂ１４７６は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。モノクローナル抗体３Ｄ２は、配列番号１０に示す配列を有するＶＨドメインと、配列番号１５に示す配列を有するＶＬドメインとを含む。ＭＡｂ ３Ｄ２は、その重鎖内にマウスＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にマウスカッパ定常領域とを含む。

いくつかの実施形態では、今回開示する方法は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体を使用する。

いくつかの実施形態では、今回開示する方法において使用される抗体は、抗ＣＸＣＬ１３抗体、またはＣＸＣＬ１３に結合するその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体を含む。ある種の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３に結合する。ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ヒト化されている。他の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３抗体は、その受容体、例えばＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３へのＣＸＣＬ１３の結合を遮断する。ある種の実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２、またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体である。一実施形態では、今回開示する方法は、参照抗体、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２と同じＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３エピトープに特異的に結合する単離結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントおよび誘導体を使用する。別の実施形態では、今回開示する方法は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合し、参照抗体、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２が、ＣＸＣＬ１３、例えばヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３に特異的に結合することを競合的に阻害する単離結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片を含む。

ある種の実施形態では、今回開示する方法において有用な結合分子は、抗ＣＸＣＬ１３参照抗体分子についてのアミノ酸配列の少なくとも約８０％、約８５％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％または約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。さらなる実施形態では、結合分子は、参照抗体と少なくとも約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％の配列同一性を共有する。ある種の実施形態では、参照抗体は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２である。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１０または１４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提供し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１１、１２または１３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＨドメインは、配列番号１０または１４と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一のアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１０または１４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と１、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１１、１２または１３と１、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１５、１９または２１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１６、１７、１８または２０と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＬドメインは、配列番号１５、１９または２１と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１５、１９または２１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と１、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態では、今回開示する方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１６、１７、１８または２０と１、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。

さらなる実施形態では、今回開示する方法は、配列番号１５、１９または２１と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合断片を使用し、ここで、コードされるＶＬドメインを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣＬ１３に特異的または優先的に結合する。

ある種の実施形態では、今回開示する方法は、配列番号１４に示すアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号１９に示すアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含むか、本質的にそれらからなるかまたはそれらからなる抗体またはその抗原結合断片を利用する。これらの実施形態のいくつかでは、抗体は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。

特定の実施形態では、今回開示する方法は、配列番号１１に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１２に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１３に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ３とを含むＶＨドメインと、配列番号２０に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１７に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１８に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ３とを含むＶＬドメインとを含むか、本質的にそれらからなるかまたはそれらからなる抗体またはその抗原結合断片を利用する。これらの実施形態のいくつかでは、抗体は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３参照抗体の適切な生物活性バリアントを、本発明の方法において用いることができる。このようなバリアントは、親の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体の所望の結合特性を保持する。抗体バリアントを作製する方法は、当技術分野において一般的に利用可能である。

突然変異誘発およびヌクレオチド配列変更の方法は、当技術分野において公知である。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：４８８〜４９２頁（１９８５）；Ｋｕｎｋｅｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７〜３８２頁（１９８７）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびその中で引用される参考文献（引用することにより本明細書の一部をなすものとする）を参照されたい。対象とするポリペプチドの生物活性に影響しない適当なアミノ酸置換についての手引きは、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）、３４５〜３５２頁（全体として引用することにより本明細書の一部をなすものとする）中のＤａｙｈｏｆｆら（１９７８）のモデルで見出すことができる。Ｄａｙｈｏｆｆらのモデルは、点許容変異（ＰＡＭ）アミノ酸相似マトリクス（ＰＡＭ２５０マトリクス）を用いて、適切な保存的アミノ酸置換を決定する。あるアミノ酸を同様の特性を有する別のアミノ酸に交換するような保存的置換が好ましいことがある。ＤａｙｈｏｆｆらのモデルのＰＡＭ２５０マトリクスにより教示される保存的アミノ酸置換の例は、それらに限定されないが、Ｇｌｙ←→Ａｌａ、Ｖａｌ←→Ｉｌｅ←→Ｌｅｕ、Ａｓｐ←→Ｇｌｕ、Ｌｙｓ←→Ａｒｇ、Ａｓｎ←→ＧｌｎおよびＰｈｅ←→Ｔｒｐ←→Ｔｙｒを含む。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体もしくはその抗原結合断片、または対象とするポリペプチドのバリアントの構築において、バリアントが継続して所望の特性を有するように、例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３、例えばヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３に特異的に結合できるように改変を作製する。明らかに、バリアントポリペプチドをコードするＤＮＡ中に作製されるいずれの変異も、リーディングフレームから外れて配列を配置してはならず、好ましくは、ｍＲＮＡ二次構造を生成し得る相補領域を創出しない。例えば欧州特許第ＥＰ００７５４４４Ｂ１号を参照されたい。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片の結合特異性を測定する方法は、それらに限定されないが、標準的競合結合アッセイ、Ｔ細胞またはＢ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするアッセイ、Ｔ細胞増殖アッセイ、アポトーシスアッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイなどを含む。例えばＷＯ９３／１４１２５；Ｓｈｉら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１３：６３３〜６４２頁（２０００）；Ｋｕｍａｎｏｇｏｈら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１６９：１１７５〜１１８１頁（２００２）；Ｗａｔａｎａｂｅら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１６７：４３２１〜４３２８頁（２００１）；Ｗａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ９７：３４９８〜３５０４頁（２００１）；およびＧｉｒａｕｄｏｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１７２（２）：１２４６〜１２５５頁（２００４）（これらは全体として引用することにより本明細書の一部をなすものとする）に開示されるアッセイを参照されたい。

参照ポリペプチドの定常領域、ＣＤＲ、ＶＨドメインまたはＶＬドメインを含む任意の特定のポリペプチドが、別のポリペプチドと少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％さえ同一であるかを本明細書で論じる場合、％同一性は、それらに限定されないが、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｕｎｉｘ（登録商標）用バージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７１１）のような当技術分野において知られる方法およびコンピュータプログラム／ソフトウェアを用いて決定できる。ＢＥＳＴＦＩＴは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２〜４８９頁の局所的相同性アルゴリズムを用いて、２つの配列間の相同性の最良のセグメントを見出す。ＢＥＳＴＦＩＴまたは任意のその他の配列アラインメントプログラムを用いて特定の配列が、本発明による参照配列と例えば９５％同一であるかを決定する場合、パラメータは、もちろん、同一性のパーセンテージが参照ポリペプチド配列の全長にわたって算出され、参照配列中のアミノ酸の総数の５％までの相同性におけるギャップが許容されるように設定される。

本発明の目的のために、パーセント配列同一性は、１２のギャップ開始ペナルティ、２のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスでアフィンギャップ検索を用いるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを用いて決定してよい。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２〜４８９頁に教示されている。バリアントは、例えば、わずか１〜１５のアミノ酸残基、１〜１０、例えばわずか６〜１０のアミノ酸残基、わずか５、４、３、２またはわずか１のアミノ酸残基だけ、抗ＣＸＣＬ１３参照抗体（例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２）、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体と異なってよい。

ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３に特異的に結合でき、所望のＣＸＣＬ１３遮断活性を保持するポリペプチドの精密な化学構造は、いくつかの因子に依存する。イオン化可能なアミノおよびカルボキシル基が分子中に存在するので、特定のポリペプチドは、酸性もしくは塩基性の塩としてまたは中性の形態で得ることができる。適切な環境条件においた場合にそれらの生物活性を保持する全てのこのような調製物は、本明細書で用いる場合の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体の定義に含まれる。さらに、ポリペプチドの１次アミノ酸配列は、糖部分（グリコシル化）または脂質、リン酸塩、アセチル基などの他の補助分子を用いる誘導体化により増強してよい。これは、糖とのコンジュゲーションにより増強してもよい。このような増強のある態様は、生成宿主の翻訳後プロセシングシステムにより達成される。その他のこのような改変は、インビトロで導入してよい。いずれの場合でも、このような改変は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体の所望の特性が損なわれない限り、本明細書で用いる抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体の定義に含まれる。このような改変は、様々なアッセイにおいて、ポリペプチドの活性を亢進または減少させることにより、活性に量的または質的に影響し得ることが予期される。さらに、鎖中の個別のアミノ酸残基は、酸化、還元またはその他の誘導体化により改変されることがあり、ポリペプチドは、活性を保持する断片を得るために切断されることがある。所望の特性（例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３についての結合特異性、結合親和性および／またはＣＸＣＬ１３遮断活性）を損なわないこのような変更は、ポリペプチド配列を、本明細書で用いる対象とする抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体の定義から除去しない。

当技術分野は、ポリペプチドバリアントの調製および使用に関して実質的な手引きを提供する。抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントの調製において、当業者は、天然タンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの改変が、本発明の方法において用いる医薬組成物の治療活性成分として用いるために適切なバリアントをもたらすかを容易に決定できる。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３参照抗体の定常領域は、いくつかの様式で、エフェクター機能を変更するために変異させてよい。例えば、米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１Ａ１号（これらは、Ｆｃ受容体との抗体結合を最適化するＦｃ変異を開示する）を参照されたい。

ある抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体では、Ｆｃ部分は、当技術分野において知られる技術を用いて、エフェクター機能を減少させるために変異させてよい。例えば、定常領域ドメインの欠失または不活性化（点突然変異またはその他の手段による）は、循環改変抗体のＦｃ受容体結合を低下させ、そのことにより腫瘍局在化を増加させることがある。他の場合では、これは、本発明と一貫する定常領域改変が、補体結合を和らげ、よって血清半減期およびコンジュゲートした細胞毒の非特異的会合を低減することであり得る。定常領域のさらに別の改変を用いてジスルフィド結合またはオリゴ糖部分を改変してよく、このことは、抗原特異性または抗体フレキシビリティの増加により局在化の亢進を可能にする。改変の結果として得られる生理的プロフィール、バイオアベイラビリティーならびに腫瘍局在化、生体分布および血清半減期のようなその他の生化学的影響は、過度の実験を行うことなく、公知の免疫学的技術を用いて容易に測定および定量できる。

全般的に、今回開示する方法において有用なＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３結合分子は、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３受容体を活性化しない（すなわち該受容体のアゴニストでない）。

本発明の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体は、例えばその同族エピトープに対する抗体の特異的な結合を妨げないような、抗体への任意の型の分子の共有結合により改変された誘導体も含む。例えば、しかし限定することなく、抗体誘導体は、例えばグリコシル化、アセチル化、ｐｅｇ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／遮蔽基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞性リガンドまたはその他のタンパク質との結合などにより改変された抗体を含む。任意の多数の化学的改変を、それらに限定されないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化などを含む既知の技術により行うことができる。さらに、誘導体は、１または複数の非伝統的アミノ酸を含有してよい。

「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。代わりに、飽和突然変異誘発によるようにコード配列の全体または一部にわたって変異を無作為に導入でき、得られた変異体を生物活性についてスクリーニングして、活性（例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３についての結合特異性、結合親和性および／またはＣＸＣＬ１３遮断活性）を保持する変異体を同定できる。

例えば、抗体分子のフレームワーク領域のみまたはＣＤＲ領域のみに変異を導入することが可能である。導入された変異は、サイレントまたは中立ミスセンス変異であってよく、すなわち抗原と結合する抗体の能力に対して全くまたはほとんど影響しない。これらの型の変異は、コドン使用を最適化するためまたはハイブリドーマの抗体生成を改善するために有用であり得る。代わりに、非中立ミスセンス変異は、抗原と結合する抗体の能力を変更し得る。ほとんどのサイレントおよび中立ミスセンス変異の場所は、フレームワーク領域内であることが多いが、ほとんどの非中立ミスセンス変異の場所は、ＣＤＲ内であることが多い（しかし、これは絶対的な要件でない）。当業者は、抗原結合活性に変更がないかまたは結合活性に変更がある（例えば抗原結合活性の改善または抗体特異性の変化）ことのような所望の特性を有する変異体分子を設計して試験できる。突然変異誘発の後に、コードされるタンパク質を慣例的に発現させ、コードされたタンパク質の機能的および／または生物学的な活性（例えばＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３ポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに免疫特異的に結合する能力）を、本明細書に記載される技術を用いてまたは当技術分野において知られる技術を慣例的に改変することにより決定できる。

ある種の実施形態では、本発明の今回開示する方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３参照抗体と比較して、少なくとも１つの最適化相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。「最適化ＣＤＲ」により、ＣＤＲが改変され、最適化配列が、結合親和性および／もしくは最適化ＣＤＲを含む抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体に与えられる抗ＣＸＣＬ１３活性の持続または改善に基づいて選択されることを意図する。

様々な免疫細胞（例えばＢ細胞、濾胞ヘルパーＴ細胞および最近活性化されたＴ細胞）上で見出されるその受容体であるＣＸＣＲ５を介して、ＣＸＣＬ１３は、免疫系恒常性の維持、リンパ器官形成、白血球のやり取りおよび化学走性移動ならびに二次リンパ組織（例えば胚中心）の発達に必要な細胞内変化を誘発する。よって、「抗ＣＸＣＬ１３活性」または「ＣＸＣＬ１３遮断活性」は、ＣＸＣＬ１３と関連する以下の活性の１または複数を調節する活性を含み得る。その受容体（例えばＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３）とのＣＸＣＬ１３の相互作用の遮断、Ｂ細胞および濾胞ＢヘルパーＴ細胞が炎症性組織に移動することの阻害、胚中心形成の阻害（例えば自己免疫疾患の場合）、二次もしくは異所性リンパ系濾胞の阻害；がん細胞増殖および腫瘍学的障害へ広がる能力の阻害、またはＣＸＣＬ１３発現細胞に関連する任意のその他の活性。抗ＣＸＣＬ１３活性は、それらに限定されないが、ある型の自己免疫疾患（例えば多発性硬化症、関節炎（例えば関節リウマチ）、慢性胃炎、胃リンパ腫、移植片拒絶、シェーグレン症候群（ＳＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染における活動性混合型クリオグロブリン血症（ＭＣ）血管炎、若年性皮膚筋炎および重症筋無力症）およびある種のがん（例えばバーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫（例えば胃ＭＡＬＴリンパ腫）、癌（例えば結腸、前立腺、乳、胃、食道および膵臓）および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ））ならびにその他の炎症性疾患、例えばヘリコバクター感染誘発性炎症性疾患、例えば胃炎、潰瘍および胃粘膜病変を含むＣＸＣＬ１３発現に関連する疾患の発生率または重症度の減少に起因すると考えることもできる。本明細書の他の場所でより詳細に論じるように、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３結合分子、または可溶性ＣＸＣＲ５もしくはＣＸＣＲ３は、さらに、Ｎ末端もしくはＣ末端にて異種ポリペプチドと組換えにより融合できるか、またはポリペプチドもしくはその他の組成物と化学的にコンジュゲート（共有的および非共有的コンジュゲーションを含む）できる。例えば、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体、または可溶性ＣＸＣＲ５もしくはＣＸＣＲ３は、検出アッセイにおいて標識として有用な分子および異種ポリペプチド、薬物、放射性核種もしくは毒素のようなエフェクター分子と組換えにより融合またはコンジュゲートできる。例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ９２／０８４９５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１２６２４；米国特許第５，３１４，９９５号；およびＥＰ３９６，３８７を参照されたい。

本明細書で用いる場合、用語「連結された」、「融合された」または「融合」は、相互に交換可能なものとして用いられる。これらの用語は、２以上の要素または成分を、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含むいずれかの手段によりつなぐことをいう。「インフレーム融合」は、元のＯＲＦの正しい翻訳リーディングフレームを維持する様式で、２以上のポリヌクレオチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をつないで、連続するより長いＯＲＦを形成することをいう。つまり、組換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによりコードされるポリペプチドに対応する２以上のセグメント（これらのセグメントは、自然では、通常、そのようにつながれていない）を含有する単一タンパク質である。リーディングフレームは、このようにして、融合されたセグメント全体を通して連続的にされるが、セグメントは、例えばインフレームリンカー配列により物理的または空間的に分けられてよい。例えば、免疫グロブリン可変領域のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドは、インフレームで融合できるが、「融合された」ＣＤＲが連続的ポリペプチドの一部として同時翻訳される限り、少なくとも１つの免疫グロブリンフレームワーク領域またはさらなるＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドにより分けられてよい。

今回開示する方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体は、改変された誘導体を含むことができ、すなわちＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３に結合する抗体を共有的付着が妨げないような抗体への任意の型の分子の共有的付着による。例えば、限定されないが、抗体誘導体は、例えばグリコシル化、アセチル化、ｐｅｇ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／遮蔽基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞性リガンドまたはその他のタンパク質との結合などにより改変された抗体を含む。任意の多数の化学的改変を、それらに限定されないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化などを含む既知の技術により行うことができる。さらに、誘導体は、１または複数の非伝統的アミノ酸を含有してよい。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、ペプチド結合または改変ペプチド結合により互いにつながれたアミノ酸、すなわちペプチドアイソスターで構成でき、遺伝子によりコードされる２０のアミノ酸以外のアミノ酸を含有してよい。例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体は、翻訳後プロセシングのような自然のプロセスにより、または当技術分野において公知の化学改変技術により改変できる。このような改変は、基本的な参考書およびより詳細な研究論文ならびに多数の研究文献に十分に記載されている。改変は、ペプチド主鎖、アミノ酸側鎖およびアミノもしくはカルボキシル末端または炭水化物のような部分を含む抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子の任意の場所で生じることができる。所与の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子中のいくつかの部位にて同じまたは変動する程度の同じ型の改変が存在できることが認識される。また、所与の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子は、多くの型の改変を含有してよい。抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子は、例えばユビキチン化の結果として分岐してよく、これらは、分岐を有してまたは有さずに環状であってよい。環状、分岐状、および、分岐状かつ環状の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子は、翻訳後の自然のプロセスの結果であってよいか、または合成的方法により作製してよい。改変は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有的付着、ヘム部分の共有的付着、ヌクレオチドもしくはヌクレオチド誘導体の共有的付着、脂質もしくは脂質誘導体の共有的付着、ホスホチジルイノシトールの共有的付着、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有的架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ｐｅｇ化、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニン化のようなタンパク質へのアミノ酸のトランスファー−ＲＮＡ媒介付加ならびにユビキチン化を含む（例えばＰｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、ＮＹ；第２版（１９９３）；Ｊｏｈｎｓｏｎ編（１９８３）Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）、１〜１２頁；Ｓｅｉｆｔｅｒら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６〜６４６頁（１９９０）；Ｒａｔｔａｎら、Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８〜６２頁（１９９２）を参照されたい）。

今回開示する方法は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体と、異種ポリペプチドとを含む融合タンパク質の使用を包含する。抗体と融合する異種ポリペプチドは、機能のために有用であり得るか、または抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３ポリペプチド発現細胞を標的にするために有用である。

一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体の任意の１もしくは複数のＶＨドメインのアミノ酸配列、または抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体の任意の１もしくは複数のＶＬドメインのアミノ酸配列あるいはその断片もしくはバリアントと、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。

別の実施形態では、本明細書で開示する治療方法において用いるための融合タンパク質は、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体のＶＨドメインの任意の１、２、３のＣＤＲのアミノ酸配列またはその断片、バリアントもしくは誘導体および／あるいは抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体のＶＬドメインの任意の１、２、３のＣＤＲのアミノ酸配列またはその断片、バリアントもしくは誘導体と、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質のＶＨおよびＶＬドメインは、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する、単一供給源の抗体（またはｓｃＦｖもしくはＦａｂ断片）に相当する。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインまたはＶＬドメインの２，３、４、５、６以上のＣＤＲ（複数でもよい）は、本発明の単一供給源の抗体（またはｓｃＦｖもしくはＦａｂ断片）に相当する。

文献において報告されている例示的な融合タンパク質は、Ｔ細胞受容体（Ｇａｓｃｏｉｇｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：２９３６〜２９４０頁（１９８７））；ＣＤ４（Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３７：５２５〜５３１頁（１９８９）；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ３３９：６８〜７０頁（１９８９）；Ｚｅｔｔｍｅｉｓｓｌら、ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．ＵＳＡ９：３４７〜３５３頁（１９９０）；およびＢｙｒｎら、Ｎａｔｕｒｅ３４４：６６７〜６７０頁（１９９０））；Ｌ−セレクチン（ホーミング受容体）（Ｗａｔｓｏｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１０：２２２１〜２２２９頁（１９９０）；およびＷａｔｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３４９：１６４〜１６７頁（１９９１））；ＣＤ４４（Ａｒｕｆｆｏら、Ｃｅｌｌ６１：１３０３〜１３１３頁（１９９０））；ＣＤ２８およびＢ７（Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：７２１〜７３０頁（１９９１））；ＣＴＬＡ−４（Ｌｉｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：５６１〜５６９頁（１９９１））；ＣＤ２２（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら、Ｃｅｌｌ６６：１１３３〜１１４４頁（１９９１））；ＴＮＦ受容体（Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：１０５３５〜１０５３９頁（１９９１）；Ｌｅｓｓｌａｕｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：２８８３〜２８８６頁（１９９１）；およびＰｅｐｐｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３〜１４８９頁（１９９１））；およびＩｇＥ受容体ａ（ＲｉｄｇｗａｙおよびＧｏｒｍａｎ、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．第１１５巻、アブストラクト第１４４８号（１９９１））の融合体を含む。

本明細書の他の場所で論じるように、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、異種ポリペプチドと融合させて、ポリペプチドのインビボ半減期を増加させるか、または当技術分野において知られる方法を用いるイムノアッセイにおいて用いることができる。例えば、一実施形態では、ＰＥＧを本発明の抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３抗体にコンジュゲートして、それらの半減期をインビボにおいて増加させることができる。Ｌｅｏｎｇら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ１６：１０６頁（２００１）；Ａｄｖ．ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４：５３１頁（２００２）；またはＷｅｉｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ３０：５１２頁（２００２）を参照されたい。

さらに、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、それらの精製または検出を容易にするためのペプチドのようなマーカー配列と融合できる。ある種の実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、なかでもｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，Ｃａｌｉｆ．，９１３１１）において提供されるタグのようなヘキサヒスチジンペプチドである（これらの多くは市販で入手可能である）。Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８２１〜８２４頁（１９８９）に記載されるように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。精製に有用なその他のペプチドタグは、それらに限定されないが、「ＨＡ」タグ（これは、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに相当する（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ３７：７６７頁（１９８４）））および「フラッグ」タグを含む。

融合タンパク質は、当技術分野において公知の方法を用いて調製できる（例えば米国特許第５，１１６，９６４号および第５，２２５，５３８号を参照されたい）。融合が作製される精密な部位は、融合タンパク質の分泌または結合の特徴を最適化するために経験的に選択できる。融合タンパク質をコードするＤＮＡを、次いで、発現のために宿主細胞にトランスフェクトする。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、コンジュゲートされていない形態で用いることができるか、あるいは例えば分子の治療特性を改善するため、標的検出を容易にするためまたは患者のイメージングもしくは治療のために様々な分子の少なくとも１つとコンジュゲートできる。抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、精製の前もしくは後または精製を行うときに標識またはコンジュゲートできる。

特に、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答修飾物質、薬剤またはＰＥＧとコンジュゲートできる。

当業者は、コンジュゲートさせる選択された物質に依存して様々な技術を用いてコンジュゲートを組み立てることもできることを認識している。例えば、ビオチンとのコンジュゲートは、例えば、結合ポリペプチドをビオチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルのようなビオチンの活性化エステルと反応させることにより調製される。同様に、蛍光マーカーとのコンジュゲートは、カップリング剤、例えば本明細書で列挙するものの存在下で、またはイソチオシアネート、好ましくはフルオレセイン−イソチオシアネートとの反応により調製できる。抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体のコンジュゲートは、類似の様式で調製される。

抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、細胞毒、治療剤または放射活性金属イオンのような治療部分とコンジュゲートできる。細胞毒または細胞傷害作用物質は、細胞にとって有害な任意の物質を含む。

様々な部分を抗体、例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体にコンジュゲートするための技術は公知であり、例えばＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、２４３〜５６頁中のＡｍｏｎら（１９８５）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編（第２版；Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）、６２３〜５３頁中のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら（１９８７）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、４７５〜５０６頁中のＴｈｏｒｐｅ（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、３０３〜１６頁（１９８５）中の「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；およびＴｈｏｒｐｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９〜５８頁（１９８２）を参照されたい。

必要とする対象にＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）を調製して投与する方法は、当業者に公知であるかまたは当業者により容易に決定する。ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入によるかまたは局所的であってよい。用語「非経口」は、本明細書で用いる場合、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、筋内、皮下、直腸または膣投与を含む。これらの全ての投与の形態は本発明の範囲内であると明確に考えられるが、投与の形態の例は、注射用、特に静脈内もしくは動脈内注射または点滴用の液剤である。通常、注射用の適切な医薬組成物は、緩衝剤（例えば酢酸塩、リン酸塩またはクエン酸塩緩衝剤）、界面活性剤（例えばポリソルベート）、場合によって安定化剤（例えばヒトアルブミン）などを含み得る。しかし、本明細書における教示に適合するその他の方法において、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）は、有害な細胞集団の部位に直接送達することにより、疾患組織が治療剤により多く曝露されるようにできる。

本明細書で論じるように、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）は、シェーグレン症候群を含むＢ細胞媒介炎症性疾患のようなＣＸＣＬ１３発現細胞媒介疾患のインビボ治療のための薬学的有効量で投与できる。この点について、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤は、投与を容易にし、かつ活性作用物質の安定性を促進するように処方される。ある種の実施形態では、本発明に従う医薬組成物は、食塩水、非毒性緩衝剤、防腐剤などのような薬学的に許容される非毒性の滅菌担体を含む。本出願の目的のために、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の薬学的有効量は、標的との有効な結合を達成するため、および利益、例えば疾患もしくは障害の症状を改善するかまたは物質もしくは細胞を検出することを達成するために十分な量を意味するために用いられる。

本発明で用いる医薬組成物は、例えばイオン交換物質、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩もしくは電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛の塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースに基づく物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂を含む薬学的に許容される担体を含む。

非経口投与用の調製物は、滅菌水性または非水性の液剤、懸濁剤および乳剤を含む。非水性溶剤の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油および注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は、例えば食塩水および緩衝溶媒を含む水、アルコール性／水性溶液、乳化物、懸濁物を含む。主題の発明において、薬学的に許容される担体は、それらに限定されないが、０．０１〜０．１Ｍ、例えば０．０５Ｍのリン酸塩緩衝液または０．８％食塩水を含む。その他の一般的な非経口媒体は、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルブドウ糖、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸加リンゲルまたは不揮発性油を含む。静脈内用の媒体は、流体および栄養補充剤、電解質補充剤、例えばリンゲルブドウ糖に基づくものなどを含む。例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤および不活性ガスなどのような防腐剤およびその他の添加物も存在してよい。

より具体的には、注射用に適切な医薬組成物は、滅菌水性液剤（水溶性の場合）または分散剤、および滅菌注射用液剤または分散剤の即時調製用の滅菌散剤を含む。このような場合、組成物は滅菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定であるべきであり、好ましくは、細菌および真菌のような微生物の汚染作用に対向して保存される。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適当な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングを用いることにより、分散剤の場合に要求される特定のサイズを維持することにより、および界面活性剤を用いることにより維持できる。本明細書で開示する治療方法で用いるための適切な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．）第１６版（１９８０）に記載されている。

微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成できる。あるいくつかの場合では、等張剤、例えば糖類、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射用組成物の持続吸収性は、吸収を遅らせる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることによりもたらすことができる。

いずれの場合でも、滅菌注射用液剤は、活性化合物（例えばそれ自体またはその他の活性作用物質との組み合わせでの抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体）を必要量で、適当な溶剤中に、必要であれば本明細書で列挙する１または組み合わせでの成分とともに組み込み、その後、ろ過滅菌することにより調製できる。一般的に、分散剤は、活性化合物を、基本的な分散媒および上で列挙したものからの必要なその他の成分を含有する滅菌媒体中に組み込むことにより調製される。滅菌注射用液剤の調製のための滅菌散剤の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、予めろ過滅菌された溶液から活性成分と任意のさらなる所望の成分との粉末が得られる。注射用の調製物は、加工され、アンプル、バッグ、瓶、シリンジまたはバイアルのような容器に充填され、当技術分野において知られる方法に従って無菌的条件下で密閉される。さらに、調製物は、米国特許出願第０９／２５９，３３７号に記載されるもののようなキットの形態で包装および販売できる。このような製品は、好ましくは、関連する組成物が、疾患もしくは障害に罹患しているかまたはその素因がある対象を治療するために有用であることを示すラベルまたは包装挿入物を有する。

非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入または負荷ボーラス用量、その後に維持用量であってよい。これらの組成物は、特定の固定もしくは変動性の間隔で、例えば１日１回、または「必要に応じて」投与してよい。

本発明で用いるあるいくつかの医薬組成物は、例えばカプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤を含む許容される剤形で経口投与してよい。あるいくつかの医薬組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入により投与してもよい。このような組成物は、ベンジルアルコールもしくはその他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティーを亢進するための吸収促進剤および／またはその他の従来の可溶化もしくは分散化剤を用いる食塩水中の溶液として調製してよい。

単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができるＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の量は、治療されるホストおよび具体的な投与形態に依存して変動する。組成物は、単回用量、複数回用量または注入で確立された期間にわたって投与してよい。投与計画も、最適な所望の応答（例えば治療または予防応答）を提供するように調整してよい。

本開示の範囲と一致して、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体）は、ヒトまたはその他の動物に、上記の治療の方法に従って、治療効果をもたらすために十分な量で投与してよい。ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５もしくは抗ＣＸＣＲ３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体）は、そのようなヒトまたはその他の動物に、活性作用物質を従来の薬学的に許容される担体または希釈剤と既知の技術に従って組み合わせることにより調製される従来の剤形で投与できる。薬学的に許容される担体または希釈剤の形態および特徴は、それが組み合わされる活性成分の量、投与経路およびその他の公知の変数により指図されることが当業者により認識される。当業者は、さらに、１または複数種のＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）を含むカクテルが特に効果的であると証明され得ることを認識する。

「治療有効用量または量」または「有効量」により、投与されたときに、治療される疾患を有する患者の治療に関して正の治療応答をもたらすＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の量を意図する。

Ｂ細胞媒介炎症性疾患、例えばシェーグレン症候群のようなＣＸＣＬ１３発現細胞媒介疾患の治療についてのＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤の治療有効用量は、投与の手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトまたは動物であるか、投与されるその他の薬物療法および治療が予防的または治療的であるかを含む多くの異なる因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療できる。治療投与量は、安全性および効力を最適化するために、当業者に知られる慣例的な方法を用いて用量設定できる。

投与される少なくとも１つのＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の量は、本発明の開示に鑑みて、過度の実験を行うことなく当業者により容易に決定される。少なくとも１つのＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の投与形態およびそれぞれの量に影響する因子は、それらに限定されないが、疾患の重症度、疾患の履歴、ならびに治療を受ける個体の年齢、身長、体重、健康状態および身体状態を含む。同様に、投与されるＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の量は、投与の形態および対象がこの作用物質の単回用量または複数回用量を受けるかに依存する。

いくつかの実施形態では、投与されるＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の投与量は、それらに限定されないが約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇおよび約１０ｍｇ／ｋｇを含む約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまでの範囲である。ある種の実施形態では、投与される投与量は、約１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇまでの範囲である。特定の実施形態では、約４ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇのＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）が、それを必要とする対象に投与される。これらの実施形態のいくつかでは、薬剤は、腹腔内注射により投与される。

本発明は、シェーグレン症候群を含むＢ細胞媒介炎症性疾患を治療するための医薬品に製造における、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する薬剤（例えば抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＸＣＲ５または抗ＣＸＣＲ３結合分子）の使用も提供する。

本発明の実施は、そうでないと記載しない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来の技術を採用し、これらは当業者の熟練の範囲内である。このような技術は、文献に完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら編（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら編（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ、第ＩおよびＩＩ巻；Ｇａｉｔ編（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓら、米国特許第４，６８３，１９５号；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）；ＭｉｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ編（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕら編、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１５４および１５５巻；ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）；ＷｅｉｒおよびＢｌａｃｋｗｅｌｌ編、（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ〜ＩＶ巻；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、（１９８６）；ならびにＡｕｓｕｂｅｌら（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。

抗体工学の全般的な原理は、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（１９９５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（第２版；Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ）に示されている。タンパク質工学の全般的な原理は、Ｒｉｃｋｗｏｏｄら編（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇ．）に示されている。抗体および抗体−ハプテン結合の全般的な原理は、Ｎｉｓｏｎｏｆｆ（１９８４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第２版；Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．）；およびＳｔｅｗａｒｄ（１９８４）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｔｈｅｉｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ（Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）に示されている。さらに、当技術分野において知られ具体的に記載されない免疫学における標準的な方法は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｓｔｉｔｅｓら編（１９９４）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第８版；Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．）ならびにＭｉｓｈｅｌｌおよびＳｈｉｉｇｉ（編）（１９８０）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ＮＹ）に全般的に従う。

免疫学の全般的な原理を示す標準的な参照研究は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋｌｅｉｎ（１９８２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｓｅｌｆ−Ｎｏｎｓｅｌｆ Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ）；Ｋｅｎｎｅｔｔら編（１９８０）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）；Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｂｕｒｄｅｎら編、（Ｅｌｓｅｖｅｒｅ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）中のＣａｍｐｂｅｌｌ（１９８４）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」；Ｇｏｌｄｓｂｙら編（２０００）Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｎｏｌｏｇｙ（第４版；Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎｄ＆Ｃｏ．）；Ｒｏｉｔｔら（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第６版；Ｌｏｎｄｏｎ：Ｍｏｓｂｙ）；Ａｂｂａｓら（２００５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第５版；Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｎ）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）；Ｌｅｗｉｎ（２００３）Ｇｅｎｅｓ ＶＩＩＩ（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ２００３）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）；ＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅｒ（２００３）ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）を含む。

用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、１または複数の実体のことをいうことに注意されたい。例えば、「抗ＣＸＣＬ１３抗体」は、１または複数の抗ＣＸＣＬ１３抗体を表すと理解される。したがって、用語「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１または複数」および「少なくとも１つの」は、本明細書において相互に交換可能なものとして用いることができる。

本明細書で用いる全ての技術的および科学的用語は、同じ意味を有する。用いる数（例えば量、温度など）に関して正確を期するようにしているが、いくらかの実験誤差および偏差が許容される。

本明細書および特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、文脈がそうでないことを要求する場合以外は非排他的な意味で用いられる。

本明細書で用いる場合、数値に言及する場合の用語「約」は、いくつかの実施形態では明記する量から±５０％、いくつかの実施形態では±２０％、いくつかの実施形態では±１０％、いくつかの実施形態では±５％、いくつかの実施形態では±１％、いくつかの実施形態では±０．５％およびいくつかの実施形態では±０．１％の変動を包含することを意味する（そのような変動は、開示する方法を行うかまたは開示する組成物を採用するために適当であるので）。

数値の範囲を示す場合、該範囲の上限と下限との間の、文脈がそうでないことを明らかに指図しない限り下限の単位の１０分の１までのそれぞれの介在する値、および言及する範囲内の任意のその他の言及または介在する値は、本明細書に包含されると理解される。より小さいレーンジャー内に独立して含まれ得るこれらの小範囲の上限および下限も、言及する範囲内の任意の具体的に除外される限界次第で、本発明に包含される。言及する範囲が一方または両方の限界を含む場合、これらの含まれる限界のいずれかまたは両方を除外する範囲も、本発明に含まれる。

以下の実施例は、限定のためではなく説明のために提供される。

＜シェーグレン症候群についてのマウスモデルにおける抗ＣＸＣＬ１３抗体の評価＞
シェーグレン症候群のマウスモデル。雌性ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪ（ＮＯＤ）マウスを用いて、シェーグレン症候群における抗ＣＸＣＬ１３抗体の影響を評価した。マウスを、１００μｇのマウス抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体（ＭＡｂ）５３７８（ｎ＝９）または対照ＩｇＧ２ａ（ｎ＝８）で、４週齢から開始して１２週間、毎週３回処置した。抗体は、腹腔内注射により投与した。全てのマウスを１６週齢で犠死させた。

ＮＯＤマウスからの血清を処置の前および最初の抗ＣＸＣＬ１３または対照ＩｇＧ２ａ注射の後５０日間隔で採集した。唾液腺組織を、安楽死の後に採集した。簡単に述べると、マウスを安楽死させ、唾液腺組織を露出させた。全ての組織を外科的に取り出し、５％胎仔ウシ血清ならびに１％ペニシリンおよびストレプトマイシンを補ったＲＰＭＩ１６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ Ｃｅｌｌｇｒｏ）に細胞選別のために入れた。組織を、免疫組織化学（ＩＨＣ）およびｍＲＮＡ分析のためにそれぞれホルマリン中で固定するかまたは凍結した。

ＲＮＡを全顎下組織から、ＲＮｅａｓｙプラスＭｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて単離した。ｃＤＮＡ合成を、ｉＳｃｒｉｐｔキット（ＢｉｏＲａｄ）を用いて行った。転写物レベルを定量するために、以前に記載されるようにして（Ｌｅｅ，Ｂ．Ｐ．ら、（２００６）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１７６：５２７６〜５２８３頁；Ｚｈｏｎｇ，Ｘ．ら、（２００７）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ３７：２４０５〜２４１０頁）ＳＹＢＲグリーンを用いてマウス唾液腺組織に対してｑＰＣＲを行った。プライマーは、以下のとおりであった。
ＣＸＣＬ１３：フォワード：５’ＴＧＧ ＣＴＧ ＣＣＣ ＣＡＡ ＡＡＣ ＴＧＡ３’、リバース：ＴＧＧ ＣＡＣ ＧＡＧ ＧＡＴ ＴＣＡ ＣＡＣ ＡＴ３’、
ＣＸＣＲ５：フォワード５’ＴＧＧ ＧＣＴ ＣＣＡ ＴＣＡ ＣＡＴ ＡＣＡ ＡＴ３’、リバース：５’ＧＧＧ ＡＡＴ ＣＴＣ ＣＧＴ ＧＣＴ ＧＴＴ ＡＣ３’（Ｓｃｈｉｆｆｅｒ，Ｌ．ら、（２００８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０：１９３８〜１９４７頁）
ＣＤ１９：フォワード５’ＡＣＣ ＡＧＴ ＡＣＧ ＧＧＡ ＡＴＧ ＴＧＣ ＴＣ３’、リバース：５’ＧＡＣ ＴＴＧ ＡＡＴ ＧＣＧ ＴＧＧ ＡＴＴ Ｔ３’、および
ＣＤ４：フォワード：５’ＴＴＣ ＧＣＣ ＴＴＣ ＧＣＡ ＧＴＴ ＴＧＡ ＴＣ３’、リバース：５’ＣＡＣ ＣＣＡ ＣＡＡ ＣＴＣ ＣＡＣ ＣＴＣ ＣＴ３’。

全ての試料について二重で行い、発現は、アクチンに対して標準化した。スチューデントのＴ検定を用いて統計的有意性を決定した。

抗ＣＸＣＬ１３抗体処置は、マウスにおける唾液腺炎症を低下させる。図１Ａは、１６週齢で犠死させた３匹の代表的なアイソタイプ対照（左のパネル）処置マウスおよび３匹の代表的な抗ＣＸＣＬ１３抗体（右のパネル）処置マウスからの唾液腺組織のＨ＆Ｅ染色画像を示す。顎下組織におけるリンパ球性増殖巣の数を、アイソタイプ対照および抗ＣＸＣＬ１３抗体試料について計数した。結果を図１Ｂに示す。これらの結果は、抗ＣＸＣＬ１３抗体で処置したマウスでは、対照抗体で処置したマウスと比較した場合に、Ｈ＆Ｅ染色により示されるとおり、顎下組織におけるリンパ球性増殖巣の数の低下を示す。この差は、統計的に有意である（ｐ＜０．０５）。

マウスにおける顎下唾液腺組織中のＣＸＣＲ５発現。抗ＣＸＣＬ１３抗体およびアイソタイプ対照で処置したマウスにおけるＣＸＣＲ５のｍＲＮＡ発現を、図２に示す。抗ＣＸＣＬ１３抗体で処置したマウスは、対照を受けたマウスと比較して、顎下唾液腺組織におけるＣＸＣＲ５受容体の数の低下を示す。この差は、統計的に有意である（ｐ＜０．０５）。ＣＸＣＲ５はＢ細胞マーカーであるので、抗ＣＸＣＬ１３抗体での処置の後のＣＸＣＲ５発現の低下は、ＣＸＣＬ１３が、シェーグレン症候群においてＢ細胞を唾液腺組織に向ける役割を演じ得ることを示唆する。

マウスにおける顎下唾液腺組織中のＣＤ１９発現。抗ＣＸＣＬ１３抗体およびアイソタイプ対照で処置したマウスにおけるＣＤ１９のｍＲＮＡ発現を、図３に示す。結果は、アイソタイプ対照で処置したマウスと比較して、抗ＣＸＣＬ１３で処置したマウスにおけるＣＤ１９発現の有意な低下（ｐ＜０．０５）を示す。これらの結果は、抗ＣＸＣＬ１３抗体での処置の後の唾液腺組織においてＢ細胞浸潤が低下されることを証明する。ＣＤ１９はＢ細胞マーカーであるので、抗ＣＸＣＬ１３抗体での処置の後のＣＤ１９発現の低下は、ＣＸＣＬ１３が、シェーグレン症候群においてＢ細胞を唾液腺組織に向ける役割を演じ得ることを示唆する。

マウスにおける顎下唾液腺組織中のＣＤ４発現。抗ＣＸＣＬ１３抗体およびアイソタイプ対照で処置したマウスにおけるＣＤ４のｍＲＮＡ発現を、図４に示す。結果は、ＣＤ４の発現が、アイソタイプ対照で処置したマウスと比較して、抗ＣＸＣＬ１３抗体で処置したマウスにおいて著しく変化しないことを示す。これらの結果は、ＣＤ４転写物レベルにより決定されるように、抗ＣＸＣＬ１３抗体の存在下で顎下組織のＴ細胞浸潤が有意に低下しないことを証明する。

具体的な実施形態についての上記の記載は、本発明の全般的な性質を完全に明らかにするので、他者は、当技術分野における熟練の範囲内の知識を用いることにより、過度の実験を行うことなく、本発明の全般的な概念から逸脱することなく、このような具体的な実施形態の様々な応用について容易に改変および／または改作できる。よって、このような改作および改変は、本明細書で示す教示および手引きに基づいて、開示される実施形態の等価物の意味および範囲内であることを意図する。本明細書における言葉使いおよび術語は、説明を目的とし、限定を目的としないので、本明細書の術語または言葉使いは、教示および手引きに鑑みて当業者により解釈されると理解される。

本発明の広さおよび範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されないが、以下の特許請求の範囲およびその等価物に従ってのみ定義される。

本明細書で言及する全ての出版物および特許出願は、本発明が属する当該技術における当業者の水準を示す。全ての出版物および特許出願は、各個別の出版物または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれるように示されるのと同じ程度に、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

Claims (16)

1. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合し、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する抗体またはその抗原結合断片を含む、対象におけるシェーグレン症候群を治療または予防するための医薬組成物であって、前記抗体またはその抗原結合断片が参照抗体と同一のエピトープに対して競合または結合し、前記参照抗体が、
   ａ）配列番号１４に示す配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび配列番号１９に示す配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン、
   ｂ）配列番号１４に示す配列を有するＶＨドメインおよび配列番号２１に示す配列を有するＶＬドメイン、または、
   ｃ）配列番号１０に示す配列を有するＶＨドメインおよび配列番号１５に示す配列を有するＶＬドメイン
   を含む、医薬組成物。
2. 前記抗体が、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記抗体またはその抗原結合断片が、
   ａ）配列番号１４の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖および配列番号１９の３つのＣＤＲを含む軽鎖、
   ｂ）配列番号１４の３つのＣＤＲを含む重鎖および配列番号２１の３つのＣＤＲを含む軽鎖、ならびに、
   ｃ）配列番号１０の３つのＣＤＲを含む重鎖および配列番号１５の３つのＣＤＲを含む軽鎖
   からなる群から選択される重鎖および軽鎖を含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
4. 前記重鎖および軽鎖が、
   ａ）Ｋａｂａｔによる番号付けされた相補性決定領域（ＣＤＲ）残基で、配列番号１４の３１〜３５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５０〜６５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む重鎖、ならびに、配列番号１９の２４〜３４番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１９の５０〜５６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１９の８９〜９７番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む軽鎖、
   ｂ）Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けされたＣＤＲ残基で、配列番号１４の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５２〜６８番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む重鎖、ならびに、配列番号１９の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１９の５０〜５２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１９の９１〜９６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む軽鎖、
   ｃ）Ｋａｂａｔによる番号付けされたＣＤＲ残基で、配列番号１４の３１〜３５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５０〜６５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む重鎖、ならびに、配列番号２１の２４〜３４番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号２１の５０〜５６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号２１の８９〜９７番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む軽鎖、
   ｄ）Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けされたＣＤＲ残基で、配列番号１４の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５２〜６８番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む重鎖、ならびに、配列番号２１の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号２１の５０〜５２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号２１の９１〜９６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む軽鎖、
   ｅ）Ｋａｂａｔによる番号付けされたＣＤＲ残基で、配列番号１０の３１〜３５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１０の５０〜６５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１０の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む重鎖、ならびに、配列番号１５の２４〜３４番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１５の５０〜５６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１５の８９〜９７番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む軽鎖、ならびに、
   ｆ）Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けされたＣＤＲ残基で、配列番号１０の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１０の５２〜６８番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１０の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む重鎖、ならびに、配列番号１５の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１５の５０〜５２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１５の９１〜９６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む軽鎖
   からなる群から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
5. 前記重鎖が、配列番号１１に示す配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、配列番号１２に示す配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１３に示す配列を有するＣＤＲ３とを含み、かつ、前記軽鎖が、配列番号２０に示す配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１７に示す配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１８に示す配列を有するＣＤＲ３とを含む、請求項３に記載の医薬組成物。
6. 前記重鎖が、配列番号１１に示す配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、配列番号１２に示す配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１３に示す配列を有するＣＤＲ３とを含み、かつ、前記軽鎖が、配列番号１６に示す配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１７に示す配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１８に示す配列を有するＣＤＲ３とを含む、請求項３に記載の医薬組成物。
7. 前記抗体が、ＩｇＧ１カッパ抗体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
8. 前記抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域と、ヒトカッパ領域とを含む、請求項７に記載の医薬組成物。
9. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、
   ａ）それぞれ配列番号１４および配列番号１９、
   ｂ）それぞれ配列番号１４および配列番号２１、ならびに
   ｃ）それぞれ配列番号１０および配列番号１５
   からなる群から選択される可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）配列と同一のアミノ酸配列を有するＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
10. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、配列番号１４に示す配列を有するＶＨドメインと、配列番号１９に示す配列を有するＶＬドメインとを含む、請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦｖおよびｓｃＦｖからなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
12. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する前記抗体または抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３受容体とＣＸＣＬ１３との相互作用を阻害する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
13. 前記ＣＸＣＬ１３受容体が、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＲ３である、請求項１２に記載の医薬組成物。
14. 前記対象が、動物である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
15. 前記動物が、哺乳動物である、請求項１４に記載の医薬組成物。
16. 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１５に記載の医薬組成物。