JP6167310B2 - 試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを判定する方法 - Google Patents
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Description
(a) セルロースフィルムの表側の面に、前記試験試料を配置する工程、
ここで、前記セルロースフィルムは、0.5マイクロメートル以上、3.7マイクロメートル以下の厚みを有しており、
(b) 工程(a)の後、前記試験試料を8時間を超えて12時間以下の間、静置する工程、
(c) 工程(b)の後、前記フィルムの裏面を観察する工程、および
(d) 工程(c)において前記フィルムの裏面に卵菌が見いだされた場合には、前記試験試料は前記植物病原性卵菌を含有すると判定する工程。
工程(a)では、0.5マイクロメートル以上3.7マイクロメートル以下の厚みを有するセルロースフィルムの表側の面に試験試料が配置される。セルロースフィルムの厚みの重要性は、後述される。
工程(b)では、工程(a)の後、試験試料200が所定の培養時間、静置される。培養時間は、8時間を超えてかつ12時間以下である。以下、セルロースフィルム104の厚みおよび培養時間の重要性が以下、説明される。
条件(I) セルロースフィルム104が、0.5マイクロメートル以上、3.7マイクロメートル以下の厚みを有すること。
条件(II) 培養時間が8時間を超えてかつ12時間以下であること
工程(c)では、工程(b)の後、セルロースフィルム104の裏面104bが観察される。光学顕微鏡を用いて裏面104bが観察されることが望ましい。
工程(d)では、工程(c)においてセルロースフィルム104の裏面104bに卵菌が見いだされた場合には、試験試料は植物病原性卵菌を含有すると判定される。言うまでもないが、工程(c)においてセルロースフィルム104の裏面104bに卵菌が見いだされなかった場合には、試験試料は植物病原性卵菌を含有しないと判定される。
以下の実施例を参照しながら、本発明がさらにより詳細に説明される。
(Pythium aphanidermatumの培養)
植物病原菌の一種であるPythium aphanidermatumが、乾燥芝草とともにコーンミール寒天培地に接種された。次いで、培地は摂氏25度の温度下で24時間静置された。Pythium aphanidermatumは岐阜大学流域圏科学研究センターに所属する景山教授より与えられた。乾燥芝草は、高温高圧滅菌法で滅菌された高麗芝を摂氏60度でおよそ24時間かけて乾燥することにより得られた。
第2容器300に、650マイクロリットルのポテトデキストロース培地が液体の培地302として添加された。このようにして、液体の培地302を含む第2容器300が用意された。
実験例1は、実施例1A〜実施例1C、参考例1D、比較例1E、参考例1F〜参考例1H、実施例1I、比較例1J〜比較例1Kからなる。
図1に示される第1容器100が以下のように用意された。
実施例1Bでは、セルロース溶液が3%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、3.7マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
実施例1Cでは、セルロース溶液が1%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、0.5マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
参考例1Dでは、セルロース溶液が0.5%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、0.2マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
比較例1Eでは、セルロース溶液が5%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、12.4マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
参考例1Fでは、培養時間が4時間であったこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
参考例1Gでは、培養時間が6時間であったこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
参考例1Hでは、培養時間が8時間であったこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
実施例1Iでは、培養時間が12時間であったこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
比較例1Jでは、培養時間が2時間であったこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
比較例1Iでは、培養時間が24時間であったこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
実験例2では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium catenulatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumとは異なり、Pythium catenulatumは、植物非病原菌の1種である。Pythium catenulatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例2は、比較例2A〜比較例2Kからなる。
比較例2Aでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium catenulatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例1Aと同様の実験が行われた。
比較例2Bでは、セルロース溶液が3%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、3.7マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Cでは、セルロース溶液が1%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、0.5マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Dでは、セルロース溶液が0.5%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、0.2マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Eでは、セルロース溶液が5%の濃度を有していたこと、およびセルロースフィルム104が、12.4マイクロメートルの厚みを有していたこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Fでは、培養時間が4時間であったこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Gでは、培養時間が6時間であったこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Hでは、培養時間が8時間であったこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Iでは、培養時間が12時間であったこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Jでは、培養時間が2時間であったこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
比較例2Kでは、培養時間が24時間であったこと以外は、比較例2Aと同様の実験が行われた。
実験例3では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium helicoidesの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumと同様、Pythium helicoidesもまた、植物病原菌の1種である。Pythium helicoidesの遊走子を含有する植物病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例3は、実施例3A、参考例3F〜参考例3H、実施例3I、比較例3J、および比較例3Kからなる。
実施例3Aでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium helicoidesの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例1Aと同様の実験が行われた。
参考例3Fでは、培養時間が4時間であったこと以外は、実施例3Aと同様の実験が行われた。
参考例3Gでは、培養時間が6時間であったこと以外は、実施例3Aと同様の実験が行われた。
参考例3Hでは、培養時間が8時間であったこと以外は、実施例3Aと同様の実験が行われた。
実施例3Iでは、培養時間が12時間であったこと以外は、実施例3Aと同様の実験が行われた。
比較例3Jでは、培養時間が2時間であったこと以外は、実施例3Aと同様の実験が行われた。
比較例3Kでは、培養時間が24時間であったこと以外は、実施例3Aと同様の実験が行われた。
実験例4では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium myriotylumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumと同様、Pythium myriotylumもまた、植物病原菌の1種である。Pythium myriotylumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例4は、実施例4A、参考例4F〜参考例4H、実施例4I、比較例4J、および比較例4Kからなる。
実施例4Aでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium myriotylumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例1Aと同様の実験が行われた。
参考例4Fでは、培養時間が4時間であったこと以外は、実施例4Aと同様の実験が行われた。
参考例4Gでは、培養時間が6時間であったこと以外は、実施例4Aと同様の実験が行われた。
参考例4Hでは、培養時間が8時間であったこと以外は、実施例4Aと同様の実験が行われた。
実施例4Iでは、培養時間が12時間であったこと以外は、実施例4Aと同様の実験が行われた。
比較例4Jでは、培養時間が2時間であったこと以外は、実施例4Aと同様の実験が行われた。
比較例4Kでは、培養時間が24時間であったこと以外は、実施例4Aと同様の実験が行われた。
実験例5では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Phytophthora nicotianaeの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumと同様、Phytophthora nicotianaeもまた、植物病原菌の1種である。Phytophthora nicotianaeの遊走子を含有する植物病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例5は、実施例5A、参考例5F〜参考例5H、実施例5I、比較例5J、および比較例5Kからなる。
実施例5Aでは、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium nicotianaeの遊走子を含有する植物病原菌水溶液が用いられたことを除き、実施例1Aと同様の実験が行われた。
参考例5Fでは、培養時間が4時間であったこと以外は、実施例5Aと同様の実験が行われた。
参考例5Gでは、培養時間が6時間であったこと以外は、実施例5Aと同様の実験が行われた。
参考例5Hでは、培養時間が8時間であったこと以外は、実施例5Aと同様の実験が行われた。
実施例5Iでは、培養時間が12時間であったこと以外は、実施例5Aと同様の実験が行われた。
比較例5Jでは、培養時間が2時間であったこと以外は、実施例5Aと同様の実験が行われた。
比較例5Kでは、培養時間が24時間であったこと以外は、実施例5Aと同様の実験が行われた。
実験例6では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium torulosumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumとは異なり、Pythium torulosumは、植物非病原菌の1種である。Pythium torulosumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例6は、比較例6A、および比較例6F〜比較例6Kからなる。
比較例6Aでは、水溶液が、Pythium aphanidermatumではなくPythium torulosumを含有していたこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
比較例6Fでは、培養時間が4時間であったこと以外は、比較例6Aと同様の実験が行われた。
比較例6Gでは、培養時間が6時間であったこと以外は、比較例6Aと同様の実験が行われた。
比較例6Hでは、培養時間が8時間であったこと以外は、比較例6Aと同様の実験が行われた。
比較例6Iでは、培養時間が12時間であったこと以外は、比較例6Aと同様の実験が行われた。
比較例6Jでは、培養時間が2時間であったこと以外は、比較例6Aと同様の実験が行われた。
比較例6Kでは、培養時間が24時間であったこと以外は、比較例6Aと同様の実験が行われた。
実験例7では、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液に代えて、Pythium inflatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液が用いられた。Pythium aphanidermatumとは異なり、Pythium inflatumは、植物非病原菌の1種である。Pythium inflatumの遊走子を含有する植物非病原菌水溶液は、Pythium aphanidermatumの遊走子を含有する植物病原菌水溶液と同様に調製された。実験例7は、比較例7A、および比較例7F〜比較例7Kからなる。
比較例7Aでは、水溶液が、Pythium aphanidermatumではなくPythium inflatumを含有していたこと以外は、実施例1Aと同様の実験が行われた。
比較例8Fでは、培養時間が4時間であったこと以外は、比較例7Aと同様の実験が行われた。
比較例7Gでは、培養時間が6時間であったこと以外は、比較例7Aと同様の実験が行われた。
比較例7Hでは、培養時間が8時間であったこと以外は、比較例7Aと同様の実験が行われた。
比較例7Iでは、培養時間が12時間であったこと以外は、比較例7Aと同様の実験が行われた。
比較例7Jでは、培養時間が2時間であったこと以外は、比較例7Aと同様の実験が行われた。
比較例7Kでは、培養時間が24時間であったこと以外は、比較例7Aと同様の実験が行われた。
条件(I) セルロースフィルム104が、0.5マイクロメートル以上、3.7マイクロメートル以下の厚みを有すること。
条件(II) 培養時間が8時間を超えて12時間以下であること
102 フランジ
104 セルロースフィルム
104a 表側の面
104b 裏側の面
170 基板
170a 表側の面
170b 裏側の面
200 試験試料
202 植物病原性卵菌
202a 植物病原性卵菌の一部分
300 第2容器
302 液体の培地
304 固体の培地
402 卵菌染色液
500 光源
600 顕微鏡
Claims (13)
- 試験試料が植物病原性卵菌を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する:
(a) セルロースフィルムの表側の面に、前記試験試料を配置する工程、
ここで、前記セルロースフィルムは、0.5マイクロメートル以上、3.7マイクロメートル以下の厚みを有しており、
(b) 工程(a)の後、前記試験試料を8時間を超えて12時間以下の間、静置する工程、
(c) 工程(b)の後、前記フィルムの裏面を観察する工程、および
(d) 工程(c)において前記フィルムの裏面に卵菌が見いだされた場合には、前記試験試料は前記植物病原性卵菌を含有すると判定する工程、
ここで、前記植物病原性卵菌は、Pythium helicoides、Pythium myriotylum、Phytophthora nicotianae、Pythium aphanidermatumからなる群から選択される少なくとも1つである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記植物病原性卵菌は、植物病原性フハイカビである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記工程(b)および前記工程(c)の間に、前記セルロースフィルムの裏面を卵菌染色液に接触させる工程をさらに具備する、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記工程(b)の前に、前記試験試料に培地を供給する工程をさらに具備する、
方法。 - 請求項4に記載の方法であって、
前記培地が液体培地である、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記工程(b)において、前記セルロースフィルムの裏面を培地に接触させながら、前記試験試料が静置される、
方法。 - 請求項4に記載の方法であって、
前記培地が固体培地である、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記セルロースフィルムは、前記セルロースフィルムの表側の面および裏側の面の少なくともいずれか一方に設けられた基板によって支持されており、かつ
前記基板は、5マイクロメートルを超える直径を有する貫通孔を具備している、
方法。 - 請求項8に記載の方法であって、
前記貫通孔が、8マイクロメートル以上の直径を有している、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記試験試料が固体である、
方法。 - 請求項10に記載の方法であって、
前記固体が、土壌および破砕された植物からなる群から選択される少なくとも1つである、
方法。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記試験試料が液体である、
方法。 - 請求項12に記載の方法であって、
前記液体が、農業用水、水耕栽培のために用いられた液体、植物を洗浄するために使用した後の液体、植物から抽出された液体、農業資材を洗浄するために使用した後の液体、および衣類または靴を洗浄するために使用した後の液体からなる群から選択される少なくとも1つである、
方法。
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