JP6106213B2 - ピロリ菌感染を治療するための新規の方法 - Google Patents
ピロリ菌感染を治療するための新規の方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6106213B2 JP6106213B2 JP2015120784A JP2015120784A JP6106213B2 JP 6106213 B2 JP6106213 B2 JP 6106213B2 JP 2015120784 A JP2015120784 A JP 2015120784A JP 2015120784 A JP2015120784 A JP 2015120784A JP 6106213 B2 JP6106213 B2 JP 6106213B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hpggt
- amino acid
- pylori
- acid sequence
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 26
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 59
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 56
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 53
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 50
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 48
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 43
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 35
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 30
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 29
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 22
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 claims description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 21
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 claims description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 14
- 101710107035 Gamma-glutamyltranspeptidase Proteins 0.000 claims description 12
- 101710173228 Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 claims description 12
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 11
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 claims description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 10
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 9
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 7
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 claims description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 claims description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 4
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 4
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 84
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 80
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 77
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 62
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 58
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 56
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 51
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 48
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 35
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 28
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 28
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 26
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 24
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 24
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 24
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 19
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 18
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 17
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 14
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 14
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 12
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 11
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 11
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000025020 negative regulation of T cell proliferation Effects 0.000 description 8
- 230000006213 negative regulation of lymphocyte proliferation Effects 0.000 description 8
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 8
- 230000037057 G1 phase arrest Effects 0.000 description 7
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 101710134582 Geranylgeranyl transferase type-2 subunit alpha Proteins 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 5
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 5
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 5
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 5
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 5
- QAWIHIJWNYOLBE-OKKQSCSOSA-N acivicin Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)[C@@H]1CC(Cl)=NO1 QAWIHIJWNYOLBE-OKKQSCSOSA-N 0.000 description 5
- 229950008427 acivicin Drugs 0.000 description 5
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 5
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 5
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 4
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 4
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 4
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 102000001788 Proto-Oncogene Proteins c-raf Human genes 0.000 description 4
- 108010029869 Proto-Oncogene Proteins c-raf Proteins 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 3
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 3
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 3
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 3
- 101001106322 Homo sapiens Rho GTPase-activating protein 7 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 102100021446 Rho GTPase-activating protein 7 Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108091027076 Spiegelmer Proteins 0.000 description 3
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 3
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 3
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 3
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 3
- WMZTYIRRBCGARG-VIFPVBQESA-N (2s)-2-azaniumyl-5-(4-nitroanilino)-5-oxopentanoate Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WMZTYIRRBCGARG-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 2
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 2
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 2
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000853480 Helicobacter pylori G27 Species 0.000 description 2
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108090000279 Peptidyltransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000009092 Proto-Oncogene Proteins c-myc Human genes 0.000 description 2
- 108010087705 Proto-Oncogene Proteins c-myc Proteins 0.000 description 2
- 101710150974 Regulator of chromosome condensation Proteins 0.000 description 2
- 102100039977 Regulator of chromosome condensation Human genes 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 229930193936 anticarin Natural products 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 2
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002642 gamma-glutamyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002851 polycationic polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- -1 serine amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- IVWWFWFVSWOTLP-YVZVNANGSA-N (3'as,4r,7'as)-2,2,2',2'-tetramethylspiro[1,3-dioxolane-4,6'-4,7a-dihydro-3ah-[1,3]dioxolo[4,5-c]pyran]-7'-one Chemical compound C([C@@H]1OC(O[C@@H]1C1=O)(C)C)O[C@]21COC(C)(C)O2 IVWWFWFVSWOTLP-YVZVNANGSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- IPDRTIBDOPMMIQ-VAOFZXAKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methyloxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@]1(C)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IPDRTIBDOPMMIQ-VAOFZXAKSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- DLQPMEMYCIGJIM-UHFFFAOYSA-N Adjuvant peptide Natural products CC(NC(=O)CCOC1C(O)C(CO)OC(O)C1NC(=O)C)C(=O)NC(CCC(=O)O)C(=O)N DLQPMEMYCIGJIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 101000693922 Bos taurus Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- 241000905957 Channa melasoma Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003910 Cyclin D Human genes 0.000 description 1
- 108090000259 Cyclin D Proteins 0.000 description 1
- 108010058545 Cyclin D3 Proteins 0.000 description 1
- 102000000577 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p27 Human genes 0.000 description 1
- 108010016777 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p27 Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241001596967 Escherichia coli M15 Species 0.000 description 1
- 102100037859 G1/S-specific cyclin-D3 Human genes 0.000 description 1
- 102100037858 G1/S-specific cyclin-E1 Human genes 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108091006054 His-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000738568 Homo sapiens G1/S-specific cyclin-E1 Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 206010065042 Immune reconstitution inflammatory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 125000001992 L-gamma-glutamyl group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)*)C(=O)O 0.000 description 1
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124150 Lymphocyte inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000531901 Rutilus frisii Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 101150114014 cagA gene Proteins 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001723 curing Methods 0.000 description 1
- 239000002875 cyclin dependent kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940043378 cyclin-dependent kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N ent-staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150046266 foxo gene Proteins 0.000 description 1
- 208000017215 gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 244000000075 gastric pathogen Species 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 244000000058 gram-negative pathogen Species 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010072285 growth inhibitory proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000037427 ion transport Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007762 localization of cell Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 235000020121 low-fat milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-QAQREVAFSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-QAQREVAFSA-N 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N norethisterone Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000010422 painting Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N staurosporine Chemical compound C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1[C@H]1C[C@@H](NC)[C@@H](OC)[C@]4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N 0.000 description 1
- CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(OC)O1 CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 101150080234 vacA gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 101150026801 virB11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150100815 virB7 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/105—Delta proteobacteriales, e.g. Lawsonia; Epsilon proteobacteriales, e.g. campylobacter, helicobacter
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/121—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Helicobacter (Campylobacter) (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/104—Aminoacyltransferases (2.3.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
- C12Y203/02—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12Y203/02002—Gamma-glutamyltransferase (2.3.2.2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/91045—Acyltransferases (2.3)
- G01N2333/91074—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
Description
)のフラグメントであるポリペプチド、それらを含む免疫原性組成物、不活化形態のHP
GGTを含む免疫原性組成物、そのようなポリペプチド及びHPGGTの不活性フラグメ
ントの使用、そのようなポリペプチド及び不活性形態のHPGGTに対する及びそれらに
特異的に結合する抗体、アプタマー及びスピーゲルマー、薬剤候補物質を同定するための
方法、ワクチンを開発するための方法、およびHPGGTのリガンドの使用に関する。
り、世界人口の50%以上にまん延している。感染は、ほとんどが生涯にわたって持続し
、胃及び十二指腸潰瘍、胃粘膜に関連するリンパ様組織リンパ腫及び胃癌の病因に関係づ
けられてきた。ピロリ菌感染の顕著な特徴は、好中球性顆粒球、リンパ球及び単球/マク
ロファージによる粘膜の密な浸潤を特徴とする、慢性活動性胃炎である。いくつかの試験
は、ピロリ菌に関連する胃炎においてヘルパーT細胞1型が増加し、活性化されることの
証拠を提供し、インビボでのCD25及びCD69の上方調節を示した。様々なピロリ菌
抗原に対する強い体液性応答も惹起される。この炎症性応答にもかかわらず、感染は宿主
免疫系によって除去されない。このことから、ピロリ菌は免疫系に干渉すると思われるが
、その明確な仕組みはまだ曖昧なままである。
的経路を説明した。食菌作用に対するピロリ菌の抵抗性が報告されており、これは、IV
型分泌装置の成分をコードする、virB7及びvirB11のようなビルレンス遺伝子
に依存する。Zabaleta et al.は、ピロリ菌アルギナーゼがT細胞増殖を
阻害し、T細胞受容体ζ鎖の発現を低下させることを報告した。ピロリ菌のプロ炎症性ペ
プチドは、単球を活性化して反応性酸素ラジカルを産生することによってリンパ球機能不
全を誘導することが示された。これらのデータは、細菌と非特異的免疫応答の相互作用を
強調する。しかし、T細胞又はインターフェロン−γ(IFN−γ)欠損マウスにおける
ワクチン接種試験が失敗に終わったことから、特異的T細胞応答は細菌の除去のために決
定的に重要であると思われる。
。CD4陽性T細胞は細菌の除去のために極めて重要であるが2、ピロリ菌によってそれ
らの増殖が阻害されることが示された3。これに関していくつかのグループは、ピロリ菌
からのタンパク質の免疫抑制作用を検討した。Knippとその共同研究者達は、ビルレ
ンス因子CagA(細胞毒関連遺伝子A)及びVacA(空胞化細胞毒A)とは無関係に
リンパ球及び単球の増殖を低下させる、いわゆる「増殖阻害タンパク質(PIP)」を部
分的に精製した4。
抑制されることを報告した5,6。逆説的に、しかしながら、VacA欠損のピロリ菌突
然変異体はその増殖阻害特性に欠陥を有していなかった5。加えて、VacAを発現する
ヘリコバクター株に感染した患者において胃の炎症は変化しないか、さらには上昇するこ
とが早期に認識されている7,8。
殖を阻害することが先に示された3。この作用は、VacA及びCagAタンパク質を含
む公知のビルレンス因子とは無関係であった。
かかわらず、ピロリ菌感染を特異的に治療する又は予防するための臨床手段を開発する上
で実質的な成功はまだ得られていない。
ペプチドを提供することであり、そのような免疫応答は、ピロリ菌感染及びピロリ菌に関
連する又はピロリ菌によって引き起こされる疾患に対する防護を与える。
基礎をなすさらなる問題である。
めの新規薬剤候補物質を同定するための手段並びにこの感染を治療し、予防するための方
法を提供することである。
請求項から理解され得る。
ペプチドであって、アミノ酸配列が、配列番号1に対応するアミノ酸配列を含むHPGG
Tの領域の一続きの連続アミノ酸配列と少なくとも80%同一であり、そのような領域が
、
(a)配列番号1に従ったアミノ酸配列のアミノ酸位置150〜200、又は
(b)配列番号1に従ったアミノ酸配列のアミノ酸位置410〜480
によって規定され、HPGGTの触媒活性を阻害することができる免疫応答を惹起するの
に適するポリペプチドによって解決される。
。
(a)配列番号1に従ったアミノ酸配列のアミノ酸位置150〜200、又は
(b)配列番号1に従ったアミノ酸配列のアミノ酸位置410〜480
に対応するアミノ酸配列を含み、及び約15〜約30個のアミノ酸を含むポリペプチド、
好ましくは1番目の態様に従ったポリペプチドによって解決される。
の一続きの15〜30個の切れ目のないアミノ酸に対応する。
QRQAETLKEARERFLKY(配列番号2)、
FDIKPGNPNLYGLVGGDANAI(配列番号3)、
DFSIKPGNPNLYGLVGGDANAIEANKRPL(配列番号4)及び
SSMSPTIVLKNNKVFLVVGSP(配列番号5)
を含む群から選択される配列を含む。
ペプチドの1つ又は数個を含む免疫原性組成物によって解決される。
疫原性組成物によって解決される。
免疫原性組成物であって、そのようなフラグメントが、HPGGTのアミノ酸451及び
452を含む一続きの切れ目のないアミノ酸から成る免疫原性組成物によって解決される
。
種用である。
疫応答を誘導することができる。
る、より好ましくはHPGGTの特異的活性に対する阻害作用及び/又はリンパ球増殖の
HPGGT依存性抑制を無効にする作用を有する抗体を含む。
いる又はピロリ菌による感染を発症する危険度が高い患者においてリンパ球の活性化及び
増殖を促進することを目的とする。
を含む。
数の抗原を含む。
ら選択される。
びそれらの組み合わせを含む群から選択される。
こされる又はピロリ菌に関連する疾患、より好ましくはピロリ菌感染によって引き起こさ
れる又はピロリ菌感染に関連する疾患の予防及び/又は治療を目的とする。
リ菌によって引き起こされる胃十二指腸障害、胃炎、慢性胃炎、胃又は十二指腸潰瘍、胃
癌及び(MALT)リンパ腫を含む群から選択される。
の側面に従ったポリペプチドの使用によって解決される。
、第4及び第5の側面に従った免疫原性組成物の使用によって解決される。
される又はピロリ菌に関連する疾患、より好ましくはピロリ菌感染によって引き起こされ
る又はピロリ菌感染に関連する疾患の予防及び/又は治療を目的とする。
検出するための、第1の側面に従ったポリペプチドの使用によって解決される。
パ球増殖へのHPGGTの阻害活性を阻害することができる。
特異的に結合する抗体によって解決される。
HPGGTの特異的活性に対する阻害作用及び/又はリンパ球増殖のHPGGT依存性抑
制を無効にする作用を有する。
する核酸によって解決される。
に特異的に結合するか又はHPGGTのアミノ酸451及び452を含む一続きの切れ目
のないアミノ酸から成るHPGGTのフラグメントに特異的に結合する核酸分子であって
、アプタマー及びスピーゲルマーを含む群から選択される核酸分子によって解決される。
HPGGTの特異的活性に対する阻害作用及び/又はリンパ球増殖のHPGGT依存性抑
制を無効にする作用を有する。
に従った抗体の使用によって解決される。
面に従った核酸の使用によって解決される。
れる又はピロリ菌に関連する疾患、より好ましくはピロリ菌感染によって引き起こされる
又はピロリ菌感染に関連する疾患の治療及び/又は予防を目的とする。
a.ピロリ菌のγ−グルタミルトランスペプチダーゼの特異的活性に対する阻害作用、
及び
b.リンパ球増殖のHPGGT依存性抑制を無効にする作用
を評価する工程を含む疾患の治療のための薬剤候補物質を同定するための方法によって解
決される。
ピロリ菌に関連し、より好ましくは疾患は、ピロリ菌感染、より好ましくはヒトにおける
ピロリ菌感染によって引き起こされるか又はそれに関連する。
a)HPGGT又はその少なくとも1つのフラグメントを含む免疫原性組成物を提供す
る工程と、
b)該免疫原性組成物で動物を免疫し、それによって抗体を作製する工程と、
c)該抗体を、ピロリ菌のγ−グルタミルトランスペプチダーゼの特異的活性に対する
それらの阻害作用及びリンパ球増殖のHPGGT依存性抑制を無効にするそれらの作用に
関して評価する工程と、
d)適切な免疫原性組成物を選択する工程とを含むワクチンを開発するための方法によ
って解決される。
するワクチンである。
の製造のためのHPGGTのリガンドの使用であって、リガンドが、HPGGT活性を有
意に阻害し、リンパ球増殖のHPGGT依存性抑制を無効にする、前記使用によって解決
される。
はピロリ菌に関連する、より好ましくはピロリ菌感染によって引き起こされる又はピロリ
菌感染に関連する。
1番目の態様に従った核酸である。
アッセイにおいて評価される。
HPGGTの使用によって解決される。
GGT特異的活性を可能にする培地でインキュベートした後に上清として得られる免疫抑
制剤組成物によって解決される。
ーピロリのγ−グルタミルトランスペプチダーゼ(HPGGT)に対するリガンド(E.
C.2.3.2.2.)が、ピロリ菌感染、特に胃十二指腸障害の治療及び/又は予防の
ために使用でき、前記リガンドが、HPGGTの触媒活性の阻害剤であり、この酵素の存
在下で抑制される対照と比較してリンパ球増殖を回復されることを見出した。さらに、本
発明の発明者は、HPGGTと共にインキュベートしたとき、前記リンパ球増殖が、リン
パ球においてG1細胞周期停止を導き、それによってリンパ球増殖を阻害する、HPGG
T特異的活性によってブロックされることを認めた。その結果として、HPGGT特異的
活性の阻害はリンパ球増殖の阻害を無効にし、その結果ピロリ菌が宿主の免疫系を免れる
ことを不可能にする。そこで、本発明によって示唆されるようなリガンドの使用は、宿主
/患者の体内でのピロリ菌のコロニー形成を予防する又は少なくとも実質的に低減する。
最後に、発明者は、ピロリ菌のγ−グルタミルトランスペプチダーゼ(GGT)の触媒活
性がリンパ球増殖、特に宿主の体内でのT細胞増殖の抑制のために必要であることを見出
した。これは、GGT活性を欠く突然変異型細菌がリンパ球の増殖を廃する能力を喪失し
、同時にマウスにコロニー形成することができないことを示すことによって明らかに実証
された。リンパ球への阻害作用は、組換えHPGGTに関して完全に存在した。T細胞に
おけるシグナル伝達へのその作用の分析は、G1細胞周期停止の誘導を導くRasシグナ
ル伝達経路の崩壊を示唆する。あらゆるピロリ菌株がHPGGTを有すること、及び阻害
性リガンドによるこの酵素の標的は、あらゆるピロリ菌感染に適用し得る新規治療を提供
し、それによって抗生物質療法に関連する問題(耐性、副作用、突然変異の選択等)を回
避することに留意することが重要である。本発明に従って、HPGGTの触媒活性を阻害
し、それにより、さもなければピロリ菌に対する有効な免疫応答を妨げる免疫抑制を打破
することによって、好ましくはピロリ菌感染に対する防護が与えられる。
り、1本のポリペプチド鎖として翻訳され、翻訳後、異なる分子量を有する2つのサブユ
ニットに切断される。この酵素の哺乳動物形態は膜結合タンパク質であり、主として全身
の腺及び細管の管腔表面で発現される。ヘリコバクターピロリのホモログを含む一部の細
菌GGTの細胞局在は、哺乳動物酵素のものとは異なる。HPGGTは、細胞外液中に分
泌されることが以前に示された(Bumann et al.,2002)。加えて、種
々のGGTホモログのアミノ酸配列のアラインメントは、HPGGTとヒト及び他の哺乳
動物のGGTとの間の22%という低い相同性を明らかにしたが、細菌ホモログに対して
はより高い相同性を示した。HPGGTと他の種からのホモログとの間のもう1つの重要
な相違は、HPGGTのC末端におけるGY残基の欠如である(Chevalier e
t al.,1999)。したがって、HPGGTとその哺乳動物ホモログとの間での細
胞局在及びタンパク質構造に関する実質的な相違は明白である。
グルタミルトランスペプチダーゼ;g−グルタミルペプチジルトランスフェラーゼ;g−
グルタミルトランスペプチダーゼ;g−GPT;g−GT;g−GTP;L−g−グルタ
ミルトランスペプチダーゼ;L−g−グルタミルトランスフェラーゼ;L−グルタミルト
ランスフェラーゼ;GGT;g−グルタミルトランスペプチダーゼとしても知られる。特
異的(触媒)活性は、以下で概説するようなグルタミル残基の転移である。
(5−L−グルタミル)−ペプチド+アミノ酸=ペプチド+5−L−グルタミルアミノ
酸
又はHPGGTの特異的活性とも称する。
ドを供与体基質として使用して;以下参照)評価することができる。HPGGT及び/又
はリガンドの存在下又は不在下でのリンパ球増殖アッセイは、ここで詳細に述べるように
実施できる。
ロリ菌からの因子であると述べられた11,13。しかし、この所見の根拠となる理由は
曖昧なままであった。
についての明確な証拠を提供する。これは、一方では、細菌の同質遺伝子的GGTノック
アウト突然変異体の使用によって明らかにされ、前記突然変異体は、抗原刺激した一次ヒ
トT細胞並びにPBMCの増殖を抑制することができなかった。他方で、大腸菌(E.c
oli)において発現された組換えHPGGTは、ピロリ菌によって分泌される他のタン
パク質の不在下でT細胞増殖を阻害した。興味深いことに、我々のデータは、哺乳動物G
GTがこの阻害作用を欠如していたことを示す。上述したように、哺乳動物とHPGGT
の構造及び局在性の相違が報告されている。我々の結果は、哺乳動物GGTがリンパ球の
増殖を阻害できないことの原因である、哺乳動物とHPGGTの触媒機構及び/又は基質
特異性のさらなる違いを示すものである。
めに構造試験及び突然変異誘発実験が使用された21。アミノ酸位置380(T380)
がHPGGTの触媒活性のために極めて重要であると報告されている先行技術の学術的教
示31と異なり、HPGGTのセリン451/452のアラニンへの部位指定突然変異誘
発が、リンパ球に対するその触媒活性、特にその阻害活性の完全な廃止を生じさせること
がここで示される。よって、GGT阻害剤であるアシビシン(acivicin)とのH
PGGTのインキュベーションは、酵素の触媒活性並びに阻害作用を完全に無効にする。
したがって、我々のデータは、HPGGTの触媒ドメインの構造的完全性がその免疫抑制
作用のために必要な前提条件であることを明らかにする。インビボでのコロニー形成にお
けるピロリ菌からのGGTの重要な役割と一致して11,13、我々は、この酵素が宿主
の胃粘膜中に存在する低いpH値でも触媒的に活性であることを認めた。
的なバリアを形成することは広く確立されている。加えて、このバリアの細胞間空隙を通
しての高分子の受動拡散は、タイト結合及び接着結合を含む様々な機構によって妨げられ
る。そこで、ヘリコバクターピロリによって分泌されるGGTタンパク質は、T細胞増殖
を抑制するために上皮バリアの反対側の宿主免疫系とどのようにして相互作用し得るのか
という疑問が生じる。これに関して、以前に、HPはいくつかの機構によって胃上皮のバ
リア機能を弱めることができることが明らかにされた。加えて、HPタンパク質VacA
及びCagAタンパク質による上皮結合複合体の破壊並びにピロリ菌ウレアーゼによって
誘導される上皮バリアを横断するトランスサイトーシスタンパク質輸送の上昇が、以前に
明らかにされている。これらの機構が最終的に、粘膜固有層内のHPタンパク質の存在増
加及びピロリ菌感染の結果として胃粘膜を浸潤する免疫系の細胞とのそれらの相互作用を
導く。HPGGTによる胃粘膜内のT細胞の障害の裏付けとして、我々の結果は、HP感
染患者で認められるが非感染対照患者では認められない、このビルレンス因子に対する著
明な血清抗体応答を示す。これは、GGTタンパク質成分の抗原プロセシング及び胃粘膜
内のTリンパ球を含む免疫系の成分に対するこれらの抗原の提示という概念を裏付ける。
したがって、HPGGTによる胃粘膜内のTリンパ球増殖の抑制は、ヘリコバクターピロ
リの、ヒトの胃におけるその慢性的残存を促進する免疫回避機構に寄与し得る。
及びまた組換えHPGGTとのインキュベーションの間も無傷であることを明らかにする
。これは、細胞表面抗原CD69及びCD25(IL−2受容体α鎖)の発現がピロリ菌
上清の存在下で低下しないことを示した本発明の発明者の以前の試験と一致する3。加え
て、アネキシンV−FITC染色によって測定されるホスファチジルセリンの露出がピロ
リ菌上清及び組換えHPGGTの存在下で上昇しなかったことから、リンパ球へのHPG
GTの抑制作用がアポトーシス非依存性機構によって媒介されることが明らかにされる。
HPGGTは胃上皮細胞において酸化的ストレス及びアポトーシスを誘導することが以前
に記述されている12,16。免疫系の細胞へのこの酵素の作用は、しかしながら、これ
まで測定されておらず、認められた相違は標的細胞の間の相違を反映する可能性がある。
、細胞周期のG1期で停止を生じさせることによってリンパ球の増殖を阻害することを認
めた。G1停止は、Cdk阻害剤p27の量の増加並びにサイクリンタンパク質の細胞レ
ベル低下によって特徴づけられた。Ras及びPI3K依存性経路は、その触媒パートナ
ーによるD型サイクリンの誘導、合成及び構築において中心的な重要性を持つ22,23
。Rasシグナル伝達経路の活性化は、c−Raf及び他のキナーゼを含むタンパク質カ
スケードを通してサイクリンDの転写を誘導する24。加えて、Rasシグナル伝達の誘
導は、細胞周期、細胞増殖及び形質転換において重要な役割を果たすc−Mycタンパク
質の合成増強を導くことが確立されている25。これまでの試験は、PI3Kシグナル伝
達がT細胞内でRasシグナル伝達とは独立して進行することを明らかにした17。PI
3Kシグナル伝達の重要なメディエイター(AKT、p70S6K及びFoxo3)の活
性化状態はHPGGTの存在下で不変であったが、我々は、HPGGTと共にインキュベ
ートした細胞においてc−Rafリン酸化及びc−Mycタンパク質のレベル低下を認め
た。よって、我々のデータは、ピロリ菌からのGGTによる、PI3K依存性シグナル伝
達ではなくRas依存性シグナル伝達の破壊が、細胞増殖の排除を導くT細胞における細
胞周期停止の誘導において役割を果たすことを示唆する。
く細胞内シグナル伝達事象にどのようにして影響を及ぼし得るかということである。ペプ
チド転移反応において、GGTは供与体から受容体基質へのγ−グルタミル部分の転移を
触媒する27。体系的なアミノ酸枯渇分析により、発明者は、HPGGTの阻害作用が培
地からのアミノ酸グルタミンの不在下では完全に無効化され、ピロリ菌からのGGTの阻
害作用がペプチド転移の間の転写産物の形成によって間接的に媒介されることを示唆する
ことを認めた。これは、HPGGTと培養基のプレインキュベーション及びその後の細胞
添加に先立つ酵素の不活化が、リンパ球増殖の阻害のために十分であるという我々の所見
によって裏付けられる。
くつかの因子を記述した。Wangとその共同研究者達は、300のMOI(T細胞当た
り300細菌)のピロリ菌がアポトーシスの誘導によってT細胞の増殖を阻害することを
示した。しかし、そのような高い量の細菌がヒトの胃の粘膜固有層においてT細胞と接触
するかどうかは疑わしいと考えられる。我々の以前の公表文献において((Gastro
enterology 2005 2005:128(5):1327−39)、発明者
は、300倍低い1のMOI(T細胞当たり1細菌)でさえも我々の系においてリンパ球
増殖を阻害するために十分であることを示した。リンパ球と共にインキュベートしたHP
培養上清の濃度を100μg/ml以上に上げたとき、Wang et al.と同等の
量でアポトーシスが観察された。これは、ここで述べるリンパ球に対するHPの阻害作用
が、このグループによって記述された機構よりも著明であり、その機構とは異なることを
示唆する。
ギナーゼによるT細胞増殖の阻害を述べた30。著者らは、細菌の細胞質タンパク質及び
膜結合タンパク質を含むHPからの全細胞溶解産物を使用した。これに対し本発明の発明
者は、HPの分泌タンパク質を含むHPからの培養上清を使用した。アルギナーゼはHP
によって分泌されないので、この酵素のT細胞に対する阻害作用はここで使用した系では
検出できず、インビボで起こる可能性は低い。
A(VacA)がT細胞の増殖を阻害することを示唆した。著者らは、我々が本試験にお
いて使用した(10μg/ml)よりも25倍高い濃度(250μg/ml)の細菌上清
を使用した。以前の試験で、本発明の発明者は、高濃度のHP培養上清(≧110μg/
ml)がリンパ球において有意量のアポトーシスを誘導することを明らかにした。加えて
、VacAの存在又は不在は、我々の系ではリンパ球に対するHPの阻害作用に影響を及
ぼさなかった(Gastro 2005)。
ず、細菌によって分泌されるGGTが、ここで使用した系においてT細胞増殖を阻害する
ために必要且つ十分である。
するために分泌タンパク質を利用する、ピロリ菌によって適用される免疫回避のための新
規機構を提供する。この細菌のGGT欠損突然変異体では阻害作用が完全に無効化された
ので、酵素GGTがピロリ菌によるT細胞増殖の阻害に関与することが示される。組換え
HPGGTタンパク質の酵素的に不活性な突然変異体はT細胞増殖を抑制する能力を欠如
していたので、この作用は明らかにGGTの触媒活性に依存した。加えて、T細胞のG1
期における細胞周期停止がピロリ菌からのGGTの存在下でのみ誘導されたことが示され
る。やはり特定の理論に縛られることを望むものではないが、さらなる結果は、G1停止
及びT細胞増殖抑制の原因として、HPGGTによる、PI3K依存性シグナル伝達では
なくRas依存性シグナル伝達の破壊を示唆する。リンパ球阻害因子としてのHPGGT
の同定は、ピロリ菌コロニー形成のためのHPGGTの重要な役割を示す、動物モデルで
の所見に関する生物学的根拠を形成する。HPGGT及び宿主のコロニー形成におけるそ
の役割の可能性は、WO00/01825及びWO98/17804で論じられている。
どちらの資料も、しかしながら、HPGGT活性が宿主の免疫系の抑制に関与することの
証拠を提示しておらず、宿主におけるT細胞増殖及び免疫抑制へのHPGGTの作用につ
いては記述していない。
する野生型HPGGTだけでなく、その特定フラグメントも、各々が好ましくはHPGG
Tに特異的に結合し、HPGGTの特異的活性を阻害する及び/又はリンパ球増殖のHP
GGT依存性抑制の無効化効果に適する抗体、アプタマーならびにスピーゲルマーの作製
のための抗原として使用し得ることを見出した。
プチドは、HPGGTの特定領域のアミノ酸の部分又は一続きのアミノ酸に同一である又
は対応するアミノ酸の配列を含む。好ましくは、HPGGTのアミノ酸配列は、配列番号
1に従ったアミノ酸配列を含む。
質及び互いに対する相対的位置に関して同じである場合、1つのアミノ酸配列はもう1つ
のアミノ酸配列に同一である。もう1つの実施形態では、同一である配列の一次アミノ酸
配列は同じである。
び互いに対する相対的位置に関して同じである場合、1つのアミノ酸配列はもう1つのア
ミノ酸配列に同一である。もう1つの実施形態では、互いに対応する配列の一次アミノ酸
配列は同じであり、両方の対応するアミノ酸配列の全体的状況は同じであるか又は異なる
。アミノ酸の全体的状況は、アミノ酸配列の一方又は両方の末端に隣接するアミノ酸によ
って定義される。
100%の配列相同性を有することは当業者に認識される。
酸に同一である又は対応するアミノ酸配列を含む又は前記アミノ酸配列から成る。好まし
くは、及び本発明のいずれかの実施形態及び態様に該当する場合、HPGGTは配列番号
1に従ったアミノ酸配列を有する。HPGGTの用語に包含されるHPGGTの変異体及
び突然変異体が存在し得ることは当業者に認識される。また、HPGGTの配列が配列番
号1で規定されるHPGGTのものと異なる場合、配列番号1で規定されるアミノ酸配列
を有するHPGGTに関してここで開示されるものがそのような異なる形態のHPGGT
にも適用されることは本発明の範囲内である。より詳細には、当業者は、それぞれその位
置、化学的性質及び/又は機能に関して配列番号1で規定されるアミノ酸配列を有するH
PGGTにおいて同定されるものに対応し、指定されるそのような異なる形態のアミノ酸
を同定する。
ノ酸配列に同一であるか又は対応する。1つの実施形態では、そのような領域は、配列番
号1に従ったアミノ酸配列のアミノ酸位置150〜200によって定義される領域である
。もう1つの実施形態では、そのような領域は、配列番号1に従ったアミノ酸配列のアミ
ノ酸位置410〜480によって定義される領域である。
の部分及びアミノ酸410〜480によって定義されるHPGGTの部分が、HPGGT
の触媒活性を阻害することができ、したがってピロリ菌に感染している又はピロリ菌に感
染する危険度が高い生物においてピロリ菌に対する又は少なくともHPGGTに対する免
疫応答を惹起する前提条件を提供する、抗体の作製のための抗原又はワクチンとして使用
されるために特に有益であることを見出した。
00及びアミノ酸位置410〜480によって定義される領域の両方がHPGGTの酵素
活性と特別な関係を有すると推測する。より詳細には、アミノ酸位置410〜480によ
って定義されるHPGGTの領域は、HPGGTの活性中心に関連する又は近接すると言
われている。より詳細には、HPGGTのこの領域は、直接活性中心と接するループ領域
及び活性中心自体の部分を含む。したがって、HPGGTのこの部分のブロッキングは、
おそらくHPGGTの触媒活性の基質の侵入をブロックすることによって、HPGGTの
酵素活性を阻害するための適切な手段である。同じことが、原則として、アミノ酸位置1
50〜200によって定義されるHPGGTの領域にも当てはまる。配列番号1に従った
HPGGTのアミノ酸位置150〜200のこの領域は、HPGGTの活性中心の外側の
ループに関連する又はループ(の部分)を形成するが、基質に対する結合ポケットに空間
的に近接する。これを考慮すると、これらの領域に特異的に干渉する分子は、ここでより
詳細に述べるように、この種の結合特性を有する抗体に関して使用できる作用物質である
。抗体のほかに、先行技術において記述されているペプチドアプタマー、アンチカリン、
アプタマー及びスピーゲルマーは、抗体に関してここで開示する様々な目的のために、そ
れぞれ作製され、使用され得る。
供する。
(a)(150+n)から(150+n+m)まで[式中、nは0から35までの何ら
かの整数であり、mは15から30までの何らかの整数である]。このようにして定義さ
れる位置は、nとmの何らかの組み合わせから生じるものであることが了解される。その
ような組み合わせは、好ましくは、そのように定義される上限位置が約200である範囲
に限定されることがさらに了解される。(150+n)によって定義される位置は下限位
置とも称され、及び(150+n+m)によって定義される位置は上限位置とも称される
。
(b)(410+n)から(410+n+m)まで[式中、nは0から55までの何ら
かの整数であり、mは15から30までの何らかの整数である]。このようにして定義さ
れる位置は、nとmの何らかの組み合わせから生じるものであることが了解される。その
ような組み合わせは、好ましくは、そのように定義される上限位置が約200である範囲
に限定されることがさらに了解される。(410+n)によって定義される位置は下限位
置とも称され、及び(410+n+m)によって定義される位置は上限位置とも称される
。
ましくはHPGGTの免疫原性フラグメント、より好ましくは宿主生物において免疫応答
、好ましくは抗体応答を惹起するのに適したHPGGTの免疫原性フラグメントであり、
抗体は、HPGGTに対する、より好ましくはHPGGTの特異的活性に対する阻害作用
及び/又はリンパ球増殖のHPGGT依存性抑制を無効にする作用を有する。好ましくは
、本発明による免疫原性フラグメントは、HPGGTのアミノ酸451及び/又は452
を含む。フラグメントはいかなる長さであってもよい。しかし、10〜約50アミノ酸残
基のペプチド、より好ましくは10〜40、10〜30又は最も好ましくは10〜20ア
ミノ酸残基のペプチドが使用される。ペプチドに基づくワクチンのためのエピトープ予測
アルゴリズムがここで適用される。ここで好ましく使用されるように、宿主生物は、好ま
しくは、抗原に対する免疫応答を発現することができる動物、好ましくは哺乳動物又はヒ
トである。
しく使用されるように、アミノ酸はD−又はL−アミノ酸のいずれか、好ましくはL−ア
ミノ酸である。さらに好ましくは、アミノ酸は天然に生じるアミノ酸である。
52からアラニンへの突然変異誘発が、組換えHPGGTの酵素活性を完全に排除し、そ
のT細胞増殖の阻害を無効にすることを認めた。しかし、セリン残基385(S385A
)の置換はT細胞増殖へのHPGGT依存性阻害作用を低減しなかったが、この突然変異
型HPGGTの触媒活性は有意に(すなわち約50%)低下した。したがって、ピロリ菌
感染の治療のための適切な薬剤物質は、2つの必要条件、すなわち(i)HPGGTの触
媒活性への阻害作用を示さなければならないこと、さらに、HPGGTと共にインキュベ
ートしたときT細胞増殖を回復しなければならないこと、を満たす必要がある。適切な薬
剤候補物質の同定のための本発明による有効な方法は、両方の評価を含む。
る。
欠くHPGGTである。そのような不活化形態のHPGGTを提供するために、常に酵素
的に活性なHPGGTと比較して、1又は複数のアミノ酸の欠失、1又はそれ以上のアミ
ノ酸の変化を含む、様々な方法が存在することは当業者に認識される。不活化形態のHP
GGTの1つの実施形態は、配列番号1に従ったアミノ酸配列の451位及び452位の
セリンアミノ酸を欠くものである。1つの実施形態では、不活化形態のHPGGTは、こ
こで述べる免疫応答、好ましくは野生型HPGGTへの阻害作用、より好ましくはHPG
GTの特異的活性への阻害作用及び/又はリンパ球増殖のHPGGT依存性抑制に対する
無効化作用を有する抗体を含む動物及び/又はヒトにおける抗体応答を、まだ惹起するこ
とができる。ここで好ましく使用されるように、HPGGTの特異的活性という用語は、
酵素活性、より詳細にはここで述べるHPGGTの酵素活性と同義的に使用される。不活
化形態のHPGGTのさらなる実施形態は、野生型アミノ酸配列を有するHPGGTであ
るが、その酵素作用はHPGGTの酵素活性に対する阻害剤の添加によって抑制されてい
る。そのような阻害剤は、抗体、スピーゲルマー、アプタマー、又はHPGGTの酵素活
性のために必要とされるイオンを含む因子をHPGGTから奪う何らかの分子であり得る
。
特異的に結合する抗体、アプタマー及びスピーゲルマーの作製に関連して標的分子とも称
される。
PGGT、好ましくは、典型的には配列番号1に従ったアミノ酸配列を有する野生型のH
PGGTに対する抗体に関する。
モノクローナル抗体とポリクローナル抗体の両方を含む。
Lane,D.,「Antibodies:A Laboratory Manual
」,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spr
ing Harbor,NY,(1988)に述べられている。好ましくは、Koehl
er and Milsteinのプロトコール及びそれに基づくさらなる開発に従って
製造され得るモノクローナル抗体は、本発明に関連して使用され得る。
全抗体、抗体フラグメント又は誘導体、例えばFabフラグメント、Fcフラグメント及
び一本鎖抗体、又はアンチカリンを含むが、これらに限定されない。モノクローナル抗体
のほかに、ポリクローナル抗体も使用及び/又は作製され得る。ポリクローナル抗体の作
製も当業者に公知であり、例えばHarlow,E.,and Lane,D.,「An
tibodies:A Laboratory Manual」,Cold Sprin
g Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N
Y,(1988)に述べられている。好ましくは、治療のために使用される抗体は、ヒト
化又はヒト抗体である。
そのようなマーカー又は標識は、その診断適用又はその治療適用において抗体を検出する
ために有用であり得る。好ましくは、マーカー及び標識は、アビジン、ストレプトアビジ
ン、ビオチン、金及びフルオレセインを含む群から選択され、例えばELISA法におい
て使用される。これらやさらなるマーカー並びに方法は、例えばHarlow,E.,a
nd Lane,D.,「Antibodies:A Laboratory Manu
al」,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold S
pring Harbor,NY,(1988)に述べられている。加えて又は選択的に
、ここで述べる抗体並びに他のいずれかの標的アンタゴニスト又は相互作用パートナーは
、ここでより一般的に述べるような標識アンタゴニストであり得る。
ことも本発明の範囲内である。そのような相互作用は、例えば他の化合物との特異的相互
作用であり得る。これら他の化合物は、ヒト又は動物の身体のような抗体が使用される系
、又はそれぞれの抗体を使用することによって分析される試料に固有のものであり得る。
適切なマーカーは、例えば、ビオチン又はフルオレセインと、アビジン及びストレプトア
ビジン及びそのようにマーク又は標識された抗体と相互作用するためにそれぞれの化合物
又は構造上に存在する同様のもののような、その特異的相互作用パートナーであり得る。
やはりこれも、アプタマー及びスピーゲルマーのようなここで述べるその他の標的相互作
用パートナーにも当てはまる。
含むHPGGTのエピトープに対して特異的活性を有する抗体、好ましくはモノクローナ
ル抗体である。もう1つの実施形態では、抗体は、これらのアミノ酸位置に空間的に近接
するエピトープを標的し、好ましくは前記位置に隣接するループを標的して特異的に結合
し、より好ましくはエピトープは、配列番号1のHPGGTのアミノ酸位置150〜20
0、より好ましくはアミノ酸位置174〜190によって定義される、又は配列番号1の
HPGGTのアミノ酸位置410〜480、より好ましくはアミノ酸位置423〜443
によって定義されるHPGGTの一続きの範囲、及びそれらが基本的に同一の免疫反応性
を示すことを条件とするそれらの誘導体によって定義される又はそれらに含まれる。
殖のHPGGT依存性阻害を少なくとも50%、より好ましくは少なくとも70%、最も
好ましくは少なくとも80%又は90%抑制する。同じく好ましくは、本発明による抗体
はさらに、HPGGT特異的活性への阻害作用を示し、インビトロで評価されるT細胞増
殖のHPGGT依存性抑制を無効にする。
ートナーのもう1つのクラスは、標的結合ポリペプチドの特定形態である、いわゆる「ア
ンチカリン」である。アンチカリン及びそれらの製造方法は、中でも特に、ドイツ特許出
願第DE 197 42 706号に述べられている。
いわゆるペプチドアプタマーである。標的を使用して、ペプチドアプタマーは、ここでよ
り詳細に説明するポリペプチドライブラリーを利用したスクリーニング工程を用いて作製
できる。選択基準は、選択されたポリペプチドが実際に及び特異的に標的に結合すること
である。
水準に従った方法を使用することによって作製され得る。基本的には、ファージの形態な
どの、ペプチドのライブラリーを作製し、この種のライブラリーを標的分子と接触させる
。標的分子に結合しているペプチドを、その後、好ましくは標的分子との複合体として、
それぞれの反応から取り出す。結合特性が、少なくともある程度までは、塩濃度等のよう
な個々に実施される実験設定に依存することは当業者に公知である。より高い親和性又は
より大きな力で標的分子に結合しているポリペプチドをライブラリーの非結合成員から分
離した後、また場合により標的分子とポリペプチドの複合体から標的分子を分離した後、
続いてそれぞれのポリペプチドを特性決定し得る。特性決定の前に、場合により、例えば
ポリペプチドをコードするファージを増殖させることによって、増幅工程が実施される。
特性決定は、好ましくは標的結合ポリペプチドの、及び最終的にはここで定義される標的
のアンタゴニスト又は相互作用パートナーとして働くポリペプチドの配列決定を含む。基
本的には、ポリペプチドはそれらに長さに関して限定されないが、好ましくは約8〜20
アミノ酸長を有するポリペプチドが、好ましくはそれぞれの方法で入手される。ライブラ
リーの大きさは、約102〜1018、好ましくは108〜1015の異なるポリペプチ
ドであり得るが、それらに限定されない。
T又はHPGGTに対する、好ましくは、典型的には配列番号1に従ったアミノ酸配列を
有する野生型のHPGGTに対するアプタマーに関する。
ある。アプタマーの製造と選択は、例えば欧州特許第EP 0 533 838号に述べ
られている。基本的には、以下の工程が実施される。第一に、各々の核酸が、典型的には
数個の、好ましくは少なくとも8個のその後ランダム化されるヌクレオチドのセグメント
を含む、核酸の混合物、すなわち潜在的アプタマーを提供する。この混合物を、その後、
標的分子と接触させ、それにより核酸は、候補混合物と比較して、例えば標的に対する高
い親和性に基づいて又はそれに対するより大きな力で標的分子に結合する。結合核酸を、
その後、残りの混合物から分離する。場合により、このようにして得られた核酸を、例え
ばポリメラーゼ連鎖反応を用いて増幅する。これらの工程を数回反復して、最後に、標的
に特異的に結合する核酸の高い比率を有する核酸の混合物を得、場合によりそこから最終
的な結合核酸を選択する。これらの特異的に結合する核酸をアプタマーと称する。アプタ
マーの作製又は同定のための方法のいかなる段階でも、個々の核酸の混合物の試料を、標
準手法を用いてその配列を決定するために採取し得る。アプタマーを、例えばアプタマー
を作製する技術分野の当業者に公知である定義された化学基を導入することなどにより、
安定化し得ることは本発明の範囲内である。そのような修飾は、例えばヌクレオチドの糖
部分の2’位置にアミノ基を導入することであり得る。アプタマーは現在、治療薬及び診
断薬の両方として使用されている。しかし、そのように選択又は作製されたアプタマーを
、標的の確認のため及び/又は薬剤、好ましくは低分子に基づく薬剤の開発のための先導
物質として使用し得ることも本発明の範囲内である。これは、実際には競合アッセイによ
って実施され、競合アッセイでは、標的分子とアプタマーとの間の特異的相互作用が候補
薬剤によって阻害され、標的とアプタマーの複合体からのアプタマーの置換後、それぞれ
の薬剤候補物質は標的とアプタマーとの間の相互作用の特異的阻害を可能にし、相互作用
が特異的である場合、前記候補薬剤は、少なくとも原理上、標的をブロックするのに適し
ており、したがってそのような標的を含むそれぞれの系においてその生物学的アベイラビ
リティー又は活性を低下させると推測され得る。そのようにして得られた低分子を、次に
、毒性、特異性、生分解性及びバイオアベイラビリティーのようなその物理的、化学的、
生物学的及び/又は医学的特性を最適化するためにさらなる誘導体化及び修飾に供し得る
。
PGGT、好ましくは、典型的には配列番号1に従ったアミノ酸配列を有する野生型のH
PGGTに対するスピーゲルマーに関する。
作製し得るスピーゲルマーの作製又は製造は、同様の原理に基づく。スピーゲルマーの製
造は、WO98/08856に述べられている。スピーゲルマーはL−核酸であり、これ
は、それらが、D−ヌクレオチドで構成されるアプタマーと異なり、L−ヌクレオチドか
ら成ることを意味する。スピーゲルマーは、生物系において非常に高い安定性を有し、ア
プタマーと遜色なく、それらが対象とする標的分子と特異的に相互作用するという事実に
よって特徴づけられる。スピーゲルマーを作製するには、D−核酸の不均一な集団を創製
し、この集団を標的分子の光学的対掌体と、ここでは、例えば標的の天然に生じるL−鏡
像異性体のD−鏡像異性体と接触させる。その後、標的分子の光学的対掌体と相互作用し
ないD−核酸を分離する。しかしながら、標的分子の光学的対掌体と相互作用するD−核
酸を分離して、場合により測定及び/又は配列決定し、その後、D−核酸から得られた核
酸配列情報に基づいて対応するL−核酸を合成する。標的分子の光学的対掌体と相互作用
する前記D−核酸と配列に関して同一であるこれらのL−核酸は、標的分子の光学的対掌
体ではなく天然に生じる標的分子と特異的に相互作用する。アプタマーの作製のための方
法と同様に、様々な工程を数回反復し、標的分子の光学的対掌体と特異的に相互作用する
核酸を冨化することも可能である。
るポリペプチド及び/又は不活化形態のHPGGT、特にここで述べるような不活化形態
のHPGGT、及び/又は野生型HPGGTの少なくとも1つを含む。本発明による前記
ポリペプチド及び/又は前記不活化形態のHPGGT、特にここで述べるような不活化形
態のHPGGT、及び/又は前記野生型HPGGTが、1つの実施形態では、免疫応答の
惹起を可能にする又は促進する方法で宿主の免疫系にそれぞれの抗原を提示し、高力価の
抗体を惹起するために、KLH又はキーホールリンペットヘモシアニン、BSA、オボア
ルブミン等のような担体物質に結合されることは了解される。
される。後者の場合そのような免疫原性組成物は、典型的にはワクチンであり、好ましく
はそのようなワクチンとして製剤される。免疫原性組成物、及びそれぞれ免疫原性組成物
を含有する薬剤及びワクチンは、好ましくは小児における、ピロリ菌感染の予防のため、
又は、ピロリ菌感染及びそのような生物によって引き起こされるもしくはそのような生物
に関連する何らかの疾患に罹患しているもしくは罹患する危険度が高い動物及びヒトの治
療ならびに/又は予防のために使用できる。
。好ましくは、アジュバントは、免疫系の全身性刺激を提供する物質である。アジュバン
トは当分野において公知であり、ポリカチオン性ポリマー、免疫刺激性デオキシヌクレオ
チド(ODN)、合成KLKペプチド、神経活性化合物、ミョウバン、フロイント完全又
は不完全アジュバント、コレラ毒素を含むが、これらに限定されない。好ましくは、ポリ
カチオン性ポリマーはポリカチオン性ペプチドであり及び/又は神経活性化合物はヒト成
長ホルモンである。
それらの組み合わせのような、ピロリ菌の外膜タンパク質を含む。HpaA及びOmp
18は、例えばVoland p.et al.,Infection and Imm
unity,July 2003,p.3837−3843に述べられている。Bab
A、HpaA及びOmp 18という用語が、完全長ポリペプチドだけでなく、そのいか
なる免疫原性フラグメント又はペプチドも包含することは本発明の範囲内である。Hpa
Aは、推定上のN−アセチルノイラミニルラクトース結合赤血球凝集素であり、Bab
Aは、ルイス血液型抗原に結合する接着タンパク質である。他の抗原ならびに好ましくは
タンパク質及びポリペプチド、及びそれらのそれぞれのフラグメントが、ピロリ菌に対す
る免疫応答を高めるために使用され得ることは了解される。それぞれ、本発明の1つの実
施形態において使用され得る好ましいタンパク質及びポリペプチドは、典型的にはピロリ
菌の外形質膜に組み込まれ、及び例えばイオン輸送、接着、構造的及び浸透圧安定性、及
び細菌ビルレンスのために重要である、外膜タンパク質である。
、米国特許出願公開第20070042448号に記載されているものである。
パク質、並びに動物又はヒトの身体への投与用のここで述べるいずれかの他の化合物は、
好ましくは製剤されることが認識される。そのような製剤は当業者に公知である。1つの
実施形態では、製剤は米国特許第6,838,089号に述べられているものである。こ
の米国特許に述べられている製剤は、複数のポリマー粒子を含む送達システムであって、
水不溶性タンパク質抗原がそのポリマー粒子と共に組み込まれており、ポリマー粒子は、
1又はそれ以上のホモポリマー及び/又はコポリマーを含むマトリックスポリマーであり
、その方法は以下を含む:(a)タンパク質のような水不溶性物質及びその臨界ミセル濃
度の0.1〜100倍の濃度の1又はそれ以上の親水性界面活性剤を含む水相(W)を、
タンパク質抗原を変性させない有機溶媒中にマトリックスポリマーを含む有機相(O)と
混合して、W/O乳剤を生成すること、但しOはWと不混和性であり、W又はO又はその
両方が、可溶化剤の存在下でW/O乳剤を安定化し、工程(b)の間のポリマー粒子内へ
の水不溶性タンパク質の組込みを促進するために混合の前に添加される1又はそれ以上の
安定剤をさらに含む、及び(b)乳剤を液体媒質に分散させることによって前記W/O乳
剤の液滴を形成し、W/O乳剤液滴のO相から前記溶媒を除去して、水不溶性タンパク質
抗原を組み込んだポリマー粒子を形成すること。
、米国特許第6,372,260号に述べられているようなミクロスフェアシステムであ
る。
、スピーゲルマー及びアプタマー、本発明に従ってこれらのいずれかを含む免疫原性組成
物、医薬組成物は、好ましくはピロリ菌によって引き起こされる又はピロリ菌に関連する
、より好ましくはピロリ菌感染によって引き起こされる疾患の予防及び/又は治療におい
て使用される。1つの実施形態では、疾患は、ピロリ菌感染によって引き起こされる胃十
二指腸障害である。さらなる実施形態では、疾患は、胃炎、特に慢性胃炎である。慢性胃
炎は、胃又は十二指腸潰瘍、さらには胃癌及びMALTリンパ腫の病因に関与するので、
本発明の方法及び上記作用物質はこれらの疾患を予防するために使用できる。また、例え
ば胃及び十二指腸潰瘍疾患及び(MALT)リンパ腫を治療するためにも使用できる。本
発明によれば、一般的用語「治療」は、明白に異なる定義が為されない限り、病的障害の
何らかの形態の治療・治癒(curing)、緩和、診断又は予防として使用される。
して、HPGGTは宿主において免疫抑制を引き起こし、したがって新規免疫抑制剤とし
て適用され得る。免疫抑制剤は、例えば移植後の臓器移植拒絶反応の危険性を低減するた
め、又は慢性関節リウマチ、クローン病又はアトピー性湿疹のような自己免疫疾患の治療
のために使用できる。HPGGTの触媒活性は、γ−グルタミルのための供与体/受容体
として機能するためにグルタミンの存在を必要とする。そこで、HPGGTを含有する免
疫抑制剤組成物は、好ましくはグルタミンをさらに含む。
ン、ロイシン及びヒスチジン及び活性HPGGTとのプレインキュベーションが、HPG
GTがその後不活性化されたときでも、T細胞に対する抗増殖作用を示すことを明らかに
することができた。よって、免疫抑制作用はHPGGT依存性であると結論された。しか
しながら、酵素反応のまだ同定されていない直接又は間接産物が作用の形態に関わってい
る。したがって、本発明の1つの実施形態は、好ましくは医薬的に許容されるインキュベ
ーション培地内で、HPGGTとグルタミン、ロイシン及びヒスチジンをインキュベート
し、HPGGT特異的反応を可能にすることによって得られる免疫抑制組成物に関する。
この反応の上清は、その後、適切な免疫抑制組成物として適用され得る。好ましくは、こ
の組成物は、そのような基質へのグルタミンの転移によって生成されるグルタミル−ペプ
チド、例えばポリ−グルタミル−グルタメート又はグルタミル誘導体を含む。
かのHPGGTであることは本発明の範囲内である。HPGGTという用語が野生型HP
GGT、完全長HPGGT及び何らかの誘導体、より詳細にはこの種の酵素活性を有する
何らかのフラグメントを包含する。そのような誘導体及びフラグメントは、当分野におい
て周知の方法を使用することにより、当業者によって生産され得る。
実施形態では、リンパ球の活性化及び増殖を促進することを意味する。
)を欠く又は非機能性の分泌配列を有する組換えHPGGTを生産する方法に関する。機
能的分泌配列、すなわちアミノ酸1〜26、26位と27位の間の切断部位:LSA−A
Sを欠くそのようなHPGGTは、そのようなHPGGTが宿主細胞における生産の間に
そのような宿主細胞から分泌されない限りにおいて好都合である。この態様に関して、宿
主生物は、好ましくは大腸菌のような原核生物であるが、それらに限定されない。
えばこれは、タンパク質をコードする遺伝子を分泌リーダー配列なしで発現することによ
って達成され得る。そのような改変されたHPGGTタンパク質はまだその宿主細胞内に
とどまり、それにより、そこから精製することができる。
明に従った不活性HPGGTの使用に関する。密接に関連する態様では、抗体の作製のた
めに動物を免疫化するため、及び当業者に公知であるように、ハイブリドーマ細胞系の作
製のためにそれぞれスターター細胞及び細胞系を提供するために使用される。そのような
ハイブリドーマはさらに培養され、さらに選択され得ることが当業者に認識される。した
がって、本発明によるポリペプチド及び本発明による活性及び不活性HPGGTが、本発
明によるポリペプチド及び本発明による不活性HPGGTに対する及び/又はそれらと特
異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞系を同定するためのスクリーニングア
ッセイにおいて使用されることも本発明の範囲内である。詳細には、ハイブリドーマは、
HPGGTの触媒及び阻害機能を無効にする抗体を産生するハイブリドーマを同定するた
めにHPGGT活性アッセイをスクリーニングに適用することによって選択され得る。
GGTをコードする核酸に関する。そのような核酸を発現する宿主生物における遺伝暗号
、及び場合によりコドン使用頻度を知ることにより、当業者がそのような核酸を作製し得
ることは当業者に認識される。さらなる態様では、核酸は、ベクター、好ましくは発現ベ
クター内に含まれる。1つの実施形態では、ベクターという用語は、プラスミド、コスミ
ド、ウイルス、バクテリオファージ及び遺伝子工学の分野で通常使用される他のベクター
を含む。尚さらなる態様では、本発明は、そのようなベクターを含む宿主生物に関する。
1つの実施形態では、宿主生物、特に宿主細胞は、本発明の核酸分子又はベクターを一過
性に又は安定に含む組換え宿主細胞である。宿主細胞又は宿主生物は、インビトロで組み
換えDNAを受け入れることができ、場合によっては、本発明の核酸分子によってコード
されるタンパク質を合成することができる生物であると理解される。好ましくは、これら
の細胞は、原核又は真核細胞、例えば哺乳動物細胞、細菌細胞、昆虫細胞又は酵母細胞で
ある。本発明の宿主細胞は、好ましくは本発明の導入核酸分子が形質転換細胞に対して異
種である、すなわち天然ではこれらの細胞において生じない又は対応する天然に生じる配
列とは異なるゲノム内の位置に局在するという事実によって特徴づけられる。
ているか又は非機能性であるHPGGTの生物学的性質を示し、及び本発明の核酸分子に
よってコードされる単離タンパク質、並びに、例えば本発明の宿主細胞を、前記タンパク
質の合成を可能にする条件下で培養し、その後タンパク質を培養細胞及び/又は培養基か
ら単離することによる、前記タンパク質の生産のための方法に関する。組換え生産された
タンパク質の単離と精製は、分取クロマトグラフィー、及びモノクローナル又はポリクロ
ーナル抗体によるアフィニティークロマトグラフィーを含むアフィニティー及び免疫学的
分離を包含する従来の手段によって実施される。ここで使用されるように、「単離タンパ
ク質」という用語は、それが天然に結合している他のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物
又は他の物質を実質的に含まないタンパク質を包含する。そのようなタンパク質は、しか
し、組換え生産されたタンパク質を含むのみならず、単離された天然に生じるタンパク質
、合成生産されたタンパク質又はこれらの方法の組み合わせによって生産されたタンパク
質を包含する。そのようなタンパク質を作製するための手段は当分野において広く理解さ
れている。本発明のタンパク質は、好ましくは実質的に精製された形態である。
に対して有害であるタンパク質を作製する一般的方法であって、(a)分泌シグナル配列
を欠失している又は非機能性分泌シグナル配列を有する前記タンパク質をコードする核酸
配列でトランスフェクトした宿主細胞を、前記タンパク質が発現される条件下で培養する
ことと、(b)前記タンパク質を細胞から回収することと、を含む方法に関する。これは
また、前記細胞から回収され得る、本発明によるポリペプチドをコードする核酸でトラン
スフェクトした宿主細胞にも当てはまる。
ーが、好ましくはヘリコバクターピロリのγ−グルタミルトランスペプチダーゼ(HPG
GT)に対するリガンドとみなされ得ることは了解される。
配列を欠くが触媒的に活性である、より詳細にはHPGGTに関してここで述べる酵素反
応を触媒する、野生型のHPGGTを指す。
施形態及び利点が理解され得る。
細菌培養。この試験で使用したピロリ菌野生型株G27 WT(vacA+cagA+
)はA.Covacci(IRIS,Siena,Italy)より入手した。細菌を、
先に述べられているように29Dent supplement antibiotic
mix(Oxoid,Wesel,Germany)を添加したウィルキンス‐チャル
グレン(Wilkins−Chalgren)又はブレインハートインフュージョン(B
rain−Heart−Infusion)(BHI)プレートで培養した。HPの液体
培養を、10%FCS(Sigma,Munich,Germany)及び1%Dent
supplementを添加したBHIブロにおいて実施した。HP上清の生成のため
に、細菌をプレートで48時間増殖させ、リン酸緩衝食塩水(PBS)で3回洗浄し、1
のOD600nm(約2×108細菌/mlに相当する)に調整した。細菌を、微好気的
条件下で強く振とうしながらPBS中で2時間インキュベートし、その後の、細菌と膜を
除去するための3000×g及び10000×gでの遠心分離工程によってペレット化し
た。その後、限外ろ過(Amicon Ultra MWCO 10kDa,Milli
pore,Schwalbach,Germany)を用いて上清を濃縮した。上清の総
タンパク質含量を、ウシ血清アルブミンを標準品としてBradfordアッセイ(Bi
o−Rad Laboratories,Richmond,VA)によって測定し、−
80℃で保存した。大腸菌をルリアブロス(LB)寒天プレート(USB,Clevel
and,OH)で培養し、液体培養については適切な抗生物質を添加したLBブロス(U
SB)中で培養した。
述したように調製した。サイズ排除クロマトグラフィーを以前に述べられているように3
実施した。簡単に述べると、タンパク質500μgをSuperdex 200 10/
300カラム(GE Healthcare,Munich,Germany)に負荷し
、4℃にて脱気したPBSで溶出した。標準タンパク質α−アミラーゼ(200kDa)
、アルコールデヒドロゲナーゼ(150kDa)、ウシ血清アルブミン(66kDa)及
びカルボニックアンヒドラーゼ(29kDa)を溶出タンパク質の分子量評価のために使
用した。各々の分画を増殖阻害及び以下で述べるGGT活性に関して試験した。
菌株G27に形質転換した。形質転換体を、25μg/mlカナマイシン(Sigma)
を含む寒天プレートでインキュベートした。3日後、クローンを採取し、カナマイシンを
含む新鮮寒天プレートに塗布した。プラスミドの挿入を、細菌DNAのPCR(プライマ
ー:センス5’−AAACGATTGGCTTGGGTGTGATAG−3’(配列番号
6);アンチセンス5’−GACCGGCTTAGTAACGATTTGATAG−3’
(配列番号7))及びピロリ菌△GGT上清からのタンパク質のウエスタンブロット法に
よって確認した。
た。すべての細胞を37℃、5%CO2でインキュベートした。ジャーカットT細胞及び
PBMCを、10%FCSを含むRPMI 1640(Invitrogen,Karl
sruhe,Germany)で培養した。EL−4 T細胞を、10%ウマ血清(Ca
mbrex,Verviers,Belgium)を添加したDMEM(Invitro
gen)で培養した。
on Kit II(Miltenyi Biotech,Bergisch Glad
bach,Germany)を製造者の指示に従って使用して、ピロリ菌非感染健常志願
者からのバフィーコート又はヘパリン化末梢静脈血から陰性選択によって単離した。
EL−4細胞/穴)を96穴平底プレートにて完全培地中で培養した。PBMCをPMA
(20ng/ml;Sigma)及びイオノマイシン(100ng/ml;Sigma)
で3回刺激し、すべての細胞を、指示されている総タンパク質濃度のピロリ菌上清又は組
換えタンパク質と共に又はそれらなしで増殖させた。一次ヒトT細胞を、上述したように
PMA/イオノマイシンで又は1ビーズ/T細胞の抗−CD3/CD28ビーズ(Inv
itrogen)で刺激した。細胞増殖を、48時間後にPackard Direct
Beta Counter Matrix 9600(Packard Instru
ments Co.,Downer’s Grove,IL)を使用してメチル−[3H
]−チミジン(GE Healthcare)取込みによって測定した。
iagen,Hilden,Germany)6×Hisタグタンパク質として発現させ
た。ピロリ菌からのGGTタンパク質のコード領域をPCR(プライマー センス:5’
−TGAAAGGAAAACCCATGGGACGGAG−3’(配列番号8);アンチ
センス:5’−CAAAGGTACCAAATTCTTTCCTTGG−3’(配列番号
9))によって増幅した。PCR産物をアガロースゲル電気泳動によって分離し、ゲル抽
出(Qiagen)によって精製した。それを次にNcoIとKpnI(New Eng
land Biolabs,Ipswich,MA)で制限し、続いて再精製後にpQE
−Tri Systemベクター(Qiagen)に連結した。生じたベクターを大腸菌
株M15に形質転換した。100μg/mlアンピシリン(Sigma)及び25μg/
mlカナマイシンを添加したLBブロスに形質転換細菌の一晩培養物を接種し、OD60
0が0.6に達するまで強く振とうしながら37℃で増殖させた。最終濃度1mMのイソ
プロピルβ−D−1−チオガラクトピラノシド(IPTG;Applichem,Dar
mstadt,Germany)を添加することによって組換えHPGGTの発現を誘導
し、封入体の量を最小限に抑えるために25℃で4時間実施した。その後全培養物を4℃
で10分間遠心分離した(5000×g)。非変性条件下での溶解のために、ペレットを
、プロテアーゼ阻害剤(Hisタグタンパク質のためのプロテアーゼ阻害剤カクテル、S
igma)を含む氷冷結合緩衝液(20mMトリス/HCl、500mM NaCl、2
0mMイミダゾール(Sigma)、pH7.4)に可溶化した。次に液体N2中での2
回の凍結/解凍サイクル及びその後の氷上での超音波処理(氷上で5分間の休止をはさん
で1分間の超音波処理を2回)によって細胞を溶解した。10分間の遠心分離(4℃で1
7500×g)後、上清をDNA及びRNA消化に供した。さらなる遠心分離工程(4℃
、22000×gで10分間)後、上清を精製のために調製した。最初の精製工程では、
5ml HisTrapHPカラム(GE Healthcare)を使用した。室温で
精製を実施し、全体を通じて試料を氷上に保持した。大腸菌の溶解産物を1ml/分でN
i−セファロースカラムに負荷し、フロースルーを収集した。試料負荷後、カラムを10
カラム容量(cv)の結合緩衝液、10cv洗浄緩衝液(20mMトリス/HCl、90
0mM NaCl、20mMイミダゾール、pH7.4)及びもう一度10cv結合緩衝
液で洗浄した。結合タンパク質を、段階イミダゾール勾配(100mM段階)を用いて溶
出緩衝液(20mMトリス/HCl、500mM NaCl、100〜1000mMイミ
ダゾール、pH7.4)で溶出した。溶出液を勾配の段階につき1分画で収集した。次に
各々の分画をGGT酵素活性に関して試験し、SDS−PAGE及び免疫ブロット分析に
供した。組換えHPGGTのさらなる精製のために、Ni−セファロースアフィニティー
クロマトグラフィーからの酵素的に活性な分画をプールし、4℃で20mMトリス/HC
l pH7.5に対して透析して、2回目の精製工程に供した。透析した試料をAffi
−Gel(登録商標) Blue(BioRad)カラム(cv:12.3ml)に負荷
した。カラムを2cvの結合緩衝液で洗浄し、結合タンパク質を、段階NaCl勾配(5
0mM段階)を用いて溶出緩衝液(20mMトリス/HCl、50〜1000mM Na
Cl、pH7.5)で溶出した。収集したすべての分画を、抗GGT抗体(以下参照)を
用いた免疫ブロット法によって又はGGT酵素活性アッセイ(以下参照)によって組換え
HPGGTの存在に関して分析した。活性分画をプールし、4℃で90分間、20mMト
リス/HCl pH7.5に対して透析して、アリコートに分け、さらなる使用時まで−
80℃で保存した。
に従ってQuikChange 部位指定突然変異誘発キット(Stratagene,
Amsterdam,The Netherlands)で実施した。プライマー配列は
以下の通りであった:S451/452Aセンス:5’−CCAATAAGCGCCCT
TTAGCCGCCATGTCGCCTACGATTGTG−3’(配列番号10);S
451/452Aアンチセンス:5’−CACAATCGTAGGCGACATGGCG
GCTAAAGGGCGCTTATTGG−3’(配列番号11)。突然変異誘発の成功
を配列決定によって確認した。
使用した。実験の前に、ジャーカット細胞を、0.2%FCSを含む培地で18時間血清
飢餓させた。その後、10%FCSで細胞を放出させ、記述されているように処理した。
指示されている時点で、細胞を採集し、氷冷PBSで1回洗浄して、プロテアーゼ阻害剤
(2.5mMピロリン酸ナトリウム、1mM β−グリセロリン酸、1mM Na3VO
4、1μg/mlロイペプチン、1mM PMSF;Sigma)を含む1×溶解緩衝液
(Cell Signaling Technology,Danvers,MA)に再
懸濁し、氷上で30秒間、マイクロチップソニファイアーで超音波処理した。溶解産物を
4℃で10分間、10000×gで遠心分離し、上清を免疫ブロット法のために使用した
。等量のタンパク質(Bradfordアッセイによって測定した、BioRad)をト
リシン−SDS−PAGEによって分離し、ニトロセルロース膜(BioRad)に電気
転移した。検出のために、膜を一次抗体、抗p27、抗サイクリンD3、抗サイクリンE
、抗c−Myc(Dianova,Hamburg,Germany)、抗Cdk2(S
anta−Cruz Biotechnology,Heidelberg,Germa
ny)、抗ホスホAKT(Ser 473)、抗ホスホc−Raf(Ser 338)、
抗ホスホp70S6K(Thr 389;Cell Signaling)、抗ホスホF
KHRL1/Foxo3(Thr 32;Upstate,Lake Placid,N
Y)、抗アクチン(Sigma)及び抗VacA(Austral Biologica
ls,San Ramon,CA)でプローブした。適切なペルオキシダーゼ結合二次抗
体(Dianova)及び化学発光試薬(Perbio Science,Bonn,G
ermany)を用いて一次抗体の結合を明らかにした。HPGGTタンパク質の大型サ
ブユニットの検出のために、HP 1118遺伝子産物のアミノ酸残基356〜371を
含む合成ペプチドIQPDTVTPSSQIKPGM(Charles River,K
isslegg,Germany)に対して挙げられたポリクロナールウサギ抗GGT抗
体を使用した。
HPGGTタンパク質0.1μgを上述したようにSDS−PAGEによって分離し、ニ
トロセルロース膜に移した。膜をPonceau S溶液(0.2%Ponceaus
S、H2O中3%トリクロロ酢酸)で染色し、細片に切断した。ブロッキング(1×TB
S+5%低脂肪粉乳)後、各々の細片をそれぞれピロリ菌感染患者及び非感染患者の血清
(ブロッキング緩衝液で1:20000希釈)と共に4℃で攪拌しながら一晩インキュベ
ートした。洗浄後、膜細片をHRP結合抗ウサギ二次抗体(Dianova;1:100
00希釈)と共にインキュベートし、最後に、再度の洗浄工程後、HPGGTタンパク質
への血清抗体の結合を上述したような化学発光反応によって明らかにした。患者のピロリ
菌感染の状態を従来のピロリ菌IgG ELISAを用いて評価した。
%FCSを含む培地で18時間血清飢餓させた。10%FCSで細胞を放出させ、指示さ
れているピロリ菌株の上清で24時間処理した後、FITC結合抗BrdU抗体(BD
Bioscience,Heidelberg,Germany)を使用し、製造者のプ
ロトコールに従って、BrdU−FITC/PI(Sigma)染色によって細胞周期分
析を実施した。その後の蛍光活性化セルソーター(FACS)分析において、Becto
n−Dickinson FACScanフローサイトメーターを使用して10000事
象を取得した。Cell Questソフトウエアパッケージ(BD Bioscien
ces)を用いてデータを解析した。
アッセイを、Meister et al.27の方法から適合させた。簡単に述べると
、受容体としての20mMグリシルグリシン(Sigma)、供与体基質としての2.5
mM L−γ−グルタミル−p−ニトロアニリド(Calbiochem,Schwal
bach,Germany)及び100mMトリス−HCl(pH8.0)から成る反応
緩衝液を調製した。一部の実験では、アッセイ緩衝液のpHを2〜10の間で変化させた
。種々のピロリ菌株、精製組換えHPGGT又はウマ腎GGT(Sigma)の上清を添
加し、37℃で30分間反応を進行させた。p−ニトロアニリドの放出を405nmで分
光光度法によって観測した。活性の1単位は、37℃で1分当たり及びタンパク質1mg
当たりにp−ニトロアニリド1μmolを放出する酵素の量と定義した。
指示されている時点で遠心分離によって細胞を除去し、上清を、ELISAにより製造者
の指示に従ってIL−2(eBioscience,San Diego,CA)及びI
FN−γ(Biosource,Solingen,Germany)の量に関して分析
した。検出の下限は4pg/mlであった。
た。24時間後、細胞を遠心分離によって採集し、洗浄して、アネキシンV結合緩衝液(
10mM HEPES/NaOH、pH7.4、140mM NaCl、2.5mM C
aCl2)500μlに再懸濁し、暗所にて室温で組換えアネキシンV−FITC(Ca
ltag,Burlingame,CA)5μl及び0.5μg/ml PIで各々10
分間染色した。アポトーシス細胞をFACS分析によって測定した(上記参照)。Cel
l Questソフトウエアを用いてデータを解析した。
ューデントt検定を使用した。P値<0.05を有意とみなした。
ピロリ菌から分泌される低分子量タンパク質はTリンパ球の増殖を阻害することが以前
に示された3。免疫抑制因子を同定するため、ピロリ菌株G27からの上清に関するサイ
ズ排除クロマトグラフィーを実施した。先の研究と一致して、30〜66kDaの分子量
で溶出する分画だけがリンパ球の増殖を阻害し、他のすべての分画はリンパ球の増殖を阻
害しなかった(データは示していない)。
ンパク質の体系的分析を実施した9,10。これらのデータを使用して、30〜66kD
aの分子量を有するすべての分泌ピロリ菌タンパク質を列挙した(図1A)。得られたク
ロマトグラフィー分画のタンパク質をSDS−PAGE及び銀染色によってさらに分析し
た(図1A)。分画の阻害活性プロフィールに一致する溶出プロフィールを示す、30〜
66kDaの大きさの4つの潜在的候補物質を認めた(図1B;矢印で示している)。阻
害分画中の他のすべてのタンパク質バンドは非阻害分画にも存在し、したがってT細胞増
殖の阻害の原因ではあり得なかった。4つの候補タンパク質のうち2つの分子量は(図1
B)、分泌ピロリ菌タンパク質γ−グルタミルトランスペプチダーゼ(GGT、HP11
18)のフラグメントに対応する。60kDaの1番目のバンドはGGTのプロ形態(分
子量61kDa)を示すと考えられ、38kDaの他方のバンドはGGTの大型サブユニ
ットを示すと考えられる11。これらの上清分画における触媒的に活性なHPGGTの存
在を調べるため、分光光度GGT活性アッセイを実施した。図1Cは、リンパ球増殖を阻
害する分画(b−f)だけが同時にGGT活性を示すことを明らかにする。
GGTが認められたリンパ球増殖阻害の原因であるかどうかを判定するため、ピロリ菌
の同系GGTノックアウト突然変異株を作製した。突然変異株は、他のグループによって
述べられているようにインビトロで正常に増殖し、GGTがピロリ菌の生存のために必須
ではないことを示唆した11、12、13。これらの突然変異株の上清を、対応する野生
型菌株と比較して、抗CD3/CD28又はPMA/イオノマイシンで刺激した単離ヒト
T細胞及びPBMCに対するそれらの増殖阻害活性に関して試験した(図2A、2C)。
野生型菌株と異なり、一次ヒトT細胞及びPBMCに対する△GGT細菌の阻害潜在能は
完全に廃止された。GGTの自発的組換え及び活性化を排除するため、GGT欠損細菌か
らの上清を、酵素活性を測定することによって及びHPGGTの大型サブユニットに対し
て惹起したポリクローナル抗体を使用した免疫ブロット法によって確認した。負荷対照は
、野生型及びGGT欠損細菌からの上清において分泌VacAタンパク質の存在を示す(
図2B)。したがって、GGTはヘリコバクターピロリによるT細胞増殖の阻害の原因で
ある。
認められた阻害がHPGGTによってのみ媒介されることをさらに示すため、大腸菌に
おいて組換えHisタグHPGGTタンパク質を発現させた。タンパク質を、「実験材料
及び方法」の章で述べたようにクロマトグラフィーによって精製し、均質にした。SDS
−PAGE及び銀染色並びに免疫ブロット法は、組換えHPGGTがプロ形態として合成
され、その後分子量約38及び約20kDaの分子量を有する大形及び小型サブユニット
にそれぞれプロセシングされることを指示した(図3A,B)。組換えタンパク質は強力
なGGT活性を示し(図3C)、PBMC増殖を効率的に阻害した(図3D)。加えて、
さらなる実験は、2〜10のpH範囲でHPGGTの触媒活性を示し(図3E)、感染部
位における機能的酵素の存在を裏付けた。
GGTはまた、ヒトT細胞を含む哺乳動物細胞によっても発現されるので、哺乳動物G
GTもリンパ球増殖を阻害するかどうかを判定することを試みた。ウマ腎からの精製GG
Tは触媒活性を示した(図4A)。しかし、HPGGTと比較して4倍高い量のウマGG
TはPBMC増殖を阻害することができなかった(図4B)。GGT触媒的トランスペプ
チダーゼ活性がT細胞増殖の阻害のために必要とされるかどうかを探索するため、我々は
組換えタンパク質の突然変異体を作製した。我々は、セリン残基451及び452のアラ
ニンへの突然変異誘発(S451/452A)は組換えHPGGTの酵素活性を完全に廃
止し(図4A)、同時にリンパ球増殖の阻害も無効にする(図4B)ことを認めた。
清をGGT阻害剤、アシビシンと共にプレインキュベートした。この化合物は、GGTの
不可逆性で競合的な阻害剤として働く。アシビシンによるGGTの阻害は、GGTの特定
ヒドロキシル基に結合した阻害種における酵素への結合後のその形質転換を含むことが示
された14,15。酵素GGT活性の測定及びリンパ球増殖の測定は、アシビシンによる
前処理がピロリ菌野生型上清によるGGT活性(図4C)及びPBMC増殖の阻害(図4
D)を完全に抑制することを示した。同様の結果が組換えHPGGTに関して得られた(
データは示していない)。
を誘導することなくリンパ球増殖を阻害する。
これまで、宿主の免疫応答の抑制におけるHPGGTの役割については全く知られてい
なかった。ここで報告するHPGGTによるリンパ球増殖阻害は、ヒトPBMCのサイト
カイン分泌への干渉から生じると考えられる。この仮説を調べるため、細胞をPMA及び
イオノマイシンで刺激し、種々の濃度のピロリ菌野生型及び△GGT上清又は組換えHP
GGTと共に又はそれらなしで24時間インキュベートした。刺激した対照と比較して、
これらの処理のいずれもが、リンパ球の増殖のために必須であることが知られる、IL−
2分泌の低下を導かなかった(図5A)。加えてIFN−γの分泌も低下しなかった(図
5B)。したがって我々は、HPGGTによるT細胞増殖の阻害がこれらの細胞の活性化
低下によって引き起こされるのではないことを示す。これまでの報告は、胃上皮細胞での
HPGGTによる酸化的ストレス及びアポトーシスの誘導を示唆した12,16。しかし
、ピロリ菌からのGGTのリンパ球に対する作用については不明である。
増殖の阻害についての機構として示唆した(Wang et al.,J Immuno
l 2001)。アポトーシスがここで述べるHPGGTによるリンパ球増殖の低下の原
因である可能性を検討するため、ジャーカットT細胞を使用したアネキシンV−FITC
/PI染色及びその後のFACS分析を実施した(図5C)。リンパ球増殖の強力な阻害
を引き起こす濃度で使用したピロリ菌野生型及び△GGT株又は組換えHPGGTからの
上清のいずれもが、アポトーシスの上昇を誘導しなかった。したがって、HPGGTによ
るT細胞増殖の排除はアポトーシス非依存性機構によって媒介される。
次に我々は、T細胞の増殖に関わる細胞過程へのHPGGTの作用をさらに特性決定す
ることを試みた。BrdU/PI染色を用いた分析は、野生型によってジャーカットT細
胞におけるG1細胞周期の停止が誘導されるが、ピロリ菌からのGGT欠損上清では細胞
周期の停止が誘導されないことを示した(図6A)。この停止は、ピロリ菌GGTの存在
下でのG1期の細胞の35%から46%への増加(図6A;左下象限)を特徴とした。し
たがって、野生型による処理においてはS基の細胞の量(左上及び右上象限)が対照(基
礎、55%)と比較して38%に低下したが、ピロリ菌のGGT欠損上清では低下しなか
った。これと一致して、同じ試料の免疫ブロット分析は、細胞サイクリンD3並びにE1
タンパク質レベルの顕著な低下を明らかにした。加えて、Cdk阻害剤p27Kiplの
量がGGT依存的に増加した(図6A)。10μg/mlと5μg/mlのHP野生型上
清で処理した細胞の間でのサイクリンタンパク質レベルの差は、リンパ球増殖に拮抗する
ためにはGGT活性の閾値を上回らなければならないことを指示する。これは明らかに、
上清中の総タンパク質10μg/mlの濃度に該当する。5μg/mlというより低い濃
度では、GGTがリンパ球において細胞周期進行を阻害するためにより長い時間を要する
。組換えHPGGTタンパク質を使用して、我々は2μg/mlという低濃度でサイクリ
ンレベルの完全な低下を認めた。
の濃度のピロリ菌野生型からの上清で処理したとき、同じ細胞周期調節タンパク質のさら
に強力な低下を示したが(図6B)、△GGT株で処理したときには低下を示さなかった
。我々の結果は、GGTを、ピロリ菌によるTリンパ球でのG1細胞周期停止の誘導の原
因となる因子として明らかに指し示す。
Ras及びPI3K依存性経路は、細胞周期進行の鍵となる調節因子である。これらの
経路はT細胞において互いに独立して進行することが示されているので17、我々は、両
方の経路の重要な成員の活性化状態へのピロリ菌上清並びに組換えHPGGTの影響を検
討した。ジャーカットT細胞及びPBMCからの細胞溶解産物の免疫ブロット分析は、P
I3Kシグナル伝達の重要なメディエイターであるAKT、p70S6k及びFoxo
3の細胞レベル及びリン酸化がHPGGTの存在下で低下しないことを示した(図6A)
。これに対し、Ras依存性経路の中心的メディエイターであるc−Mycの細胞レベル
並びにc−Rafタンパク質のリン酸化は、同じ細胞においてHPGGTの存在下で低下
した(図6A、B)。
ピロリ菌からのGGTは細菌によって細胞外液中に分泌されることが示されたが(Bu
mann et al.)、このタンパク質が粘膜固有層中のT細胞に達してその免疫抑
制作用を及ぼすかどうかは不明である。この問題を調べるため、14名の患者(ピロリ菌
感染患者9名と非感染患者5名)からの血清をHPGGT特異的抗体の存在に関して試験
した。結果は、ピロリ菌陽性患者でのHPGGTのプロ形態及び大型サブユニットに対す
る強い抗体応答を示した(図7、1〜9)が、非感染患者では抗体応答を示さず(図7、
10〜14)、ヒト免疫系とHPGGTの相互作用を示唆した。
動物を、アジュバントとしてのCTと組み合わせた、ヘリコバクターピロリのγ−グル
タミルトランスペプチダーゼ(HPGGT)の触媒中心から遠く離れた場所に位置するペ
プチド356 IQPDTVTPSSQIKPGM 371又は不活性組換えHPGGT
タンパク質のいずれかでワクチン摂取した。不活性形態のHPGGTでワクチン接種した
動物においてのみ、標準HPGGT活性化アッセイを用いて血清中の阻害抗体が検出可能
であった。緩衝液だけを摂取した対照動物、感染動物又はペプチド356〜371でワク
チン接種した動物では阻害性免疫応答は検出されなかった。これらの結果は、HPGGT
に対する阻害性免疫応答が達成され得、抗原の選択に高度に依存することを実証する。さ
らに、ピロリ菌による感染はそのような阻害応答を惹起しない。
またいずれかの組み合わせによっても、本発明を様々な形態で実現する材料であり得る。
Claims (13)
- ヘリコバクターピロリのγ−グルタミルトランスペプチダーゼ(HPGGT)の酵素的に不活性な形態を含む免疫原性組成物であって、
前記HPGGTが、配列番号1に示されるアミノ酸配列、配列番号1に示されるアミノ酸配列と少なくとも90%同一のアミノ酸配列又は配列番号1に示されるアミノ酸配列と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を有し、前記HPGGTの酵素的に不活性な形態において、配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸配列の451位及び452位のセリン残基が変化または欠失しており、かつ、(i)HPGGTに対する阻害作用及び/又は(ii)リンパ球増殖のHPGGT依存性抑制を無効にする作用を有する抗体を含む抗体応答を誘導する、免疫原性組成物。 - ヘリコバクターピロリのγ−グルタミルトランスペプチダーゼ(HPGGT)の酵素的に不活性かつ免疫原性のフラグメントを含む免疫原性組成物であって、
前記HPGGTが、配列番号1に示されるアミノ酸配列、配列番号1に示されるアミノ酸配列と少なくとも90%同一のアミノ酸配列又は配列番号1に示されるアミノ酸配列と少なくとも95%同一のアミノ酸配列を有し、
前記HPGGTの酵素的に不活性かつ免疫原性のフラグメントが、前記HPGGTのアミノ酸位置451及び452を含む一続きの切れ目のないアミノ酸からなり、配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸配列の451位及び452位のセリン残基が変化または欠失しており、かつ、(i)HPGGTに対する阻害作用及び/又は(ii)リンパ球増殖のHPGGT依存性抑制を無効にする作用を有する抗体を含む抗体応答を誘導する、免疫原性組成物。 - 前記HPGGTの酵素的に不活性な形態又は前記HPGGTの酵素的に不活性かつ免疫原性のフラグメントにおいて、配列番号1に示されるアミノ酸配列の451位及び452位のセリン残基がアラニンに置換されており、前記HPGGTの酵素的に不活性な形態又は前記HPGGTの酵素的に不活性かつ免疫原性のフラグメントが、機能性の分泌配列を欠失している、請求項1又は2に記載の免疫原性組成物。
- 前記HPGGTの酵素的に不活性な形態又は前記HPGGTの酵素的に不活性かつ免疫原性のフラグメントが、機能性の分泌配列を欠失している、請求項1又は2に記載の免疫原性組成物。
- 前記HPGGTの酵素的に不活性な形態又は前記HPGGTの酵素的に不活性かつ免疫原性のフラグメントが、配列番号1に示されるアミノ酸配列の1〜26位のアミノ酸を欠失している、請求項1〜4のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 1又は複数のアジュバントを含む請求項1〜5のいずれかに記載の免疫原性組成物。
- ピロリ菌からの1又は複数の抗原を含む請求項1〜6のいずれかに記載の免疫原性組成物。
- 前記抗原が、外膜タンパク質を含む群から選択される請求項7に記載の免疫原性組成物。
- 前記抗原が、HpaA、Omp18及びそれらの組み合わせを含む群から選択される請求項8に記載の免疫原性組成物。
- ワクチンとして製剤される請求項1〜9のいずれかに記載の免疫原性組成物。
- ピロリ菌によって引き起こされる若しくはピロリ菌に関連する疾患の予防及び/又は治療のための医薬の製造における請求項1〜10のいずれかに記載の免疫原性組成物の使用。
- 前記疾患が、ピロリ菌による感染、ピロリ菌によって引き起こされる胃十二指腸障害、胃炎、慢性胃炎、胃もしくは十二指腸潰瘍、胃癌ならびに(MALT)リンパ腫を含む群から選択される請求項11に記載の使用。
- 前記疾患が、ピロリ菌による感染である請求項12に記載の使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP06021936.7 | 2006-10-19 | ||
EP06021936A EP1913955A1 (en) | 2006-10-19 | 2006-10-19 | Novel method for treating H.pylori infections |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009532733A Division JP5989958B2 (ja) | 2006-10-19 | 2007-10-19 | ピロリ菌感染を治療するための新規の方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015214556A JP2015214556A (ja) | 2015-12-03 |
JP6106213B2 true JP6106213B2 (ja) | 2017-03-29 |
Family
ID=37682062
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009532733A Active JP5989958B2 (ja) | 2006-10-19 | 2007-10-19 | ピロリ菌感染を治療するための新規の方法 |
JP2015120784A Active JP6106213B2 (ja) | 2006-10-19 | 2015-06-16 | ピロリ菌感染を治療するための新規の方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009532733A Active JP5989958B2 (ja) | 2006-10-19 | 2007-10-19 | ピロリ菌感染を治療するための新規の方法 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9090676B2 (ja) |
EP (3) | EP1913955A1 (ja) |
JP (2) | JP5989958B2 (ja) |
CN (2) | CN101594880B (ja) |
AU (1) | AU2007312539A1 (ja) |
CA (1) | CA2666859C (ja) |
CY (2) | CY1116166T1 (ja) |
DK (2) | DK2902038T3 (ja) |
ES (2) | ES2682925T3 (ja) |
HK (1) | HK1212241A1 (ja) |
HU (1) | HUE039785T2 (ja) |
LT (1) | LT2902038T (ja) |
PL (2) | PL2902038T3 (ja) |
PT (2) | PT2081594E (ja) |
SI (2) | SI2902038T1 (ja) |
WO (1) | WO2008046650A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1913955A1 (en) * | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Gerhard, Markus | Novel method for treating H.pylori infections |
JP5904481B2 (ja) * | 2011-05-20 | 2016-04-13 | 学校法人関西文理総合学園 | ピロリ菌の分泌毒素に結合するペプチドおよびその用途 |
CA2909434A1 (en) * | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Methods and pharmaceutical compositions for inhibiting lymphocyte proliferation in a subject in need thereof |
EP3272354A1 (en) | 2016-07-20 | 2018-01-24 | Technische Universität München | Agents and methods for the prevention or treatment of h. pylori infections |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1493825A3 (en) | 1990-06-11 | 2005-02-09 | Gilead Sciences, Inc. | Method for producing nucleic acid ligands |
DE59708838D1 (de) | 1996-08-30 | 2003-01-09 | Jens Peter Fuerste | Spiegelselektion und spiegelevolution von nucleinsäuren |
AU5119998A (en) | 1996-10-17 | 1998-05-15 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | A (helicobacter) antigen (gamma-glutamyltransferase) and sequences encoding the same |
US20020160456A1 (en) * | 1997-06-24 | 2002-10-31 | Harold Kleanthous | Identification of polynucleotides encoding novel helicobacter polypeptides in the helicobacter genome |
DE19742706B4 (de) | 1997-09-26 | 2013-07-25 | Pieris Proteolab Ag | Lipocalinmuteine |
SE9801287D0 (sv) | 1998-04-14 | 1998-04-14 | Astra Ab | Incorporation of active substances in carrier matrixes |
SE9801288D0 (sv) | 1998-04-14 | 1998-04-14 | Astra Ab | Vaccine delivery system and metod of production |
WO2000001825A1 (en) * | 1998-07-01 | 2000-01-13 | Institut Pasteur | HELICOBACTER ANTIGEN (η-GLUTAMYLTRANSPEPTIDASE) AND SEQUENCES ENCODING THE SAME |
JP2000229997A (ja) * | 1999-02-10 | 2000-08-22 | Nissui Pharm Co Ltd | 環状ペプチド及びエイズワクチン |
US6380217B1 (en) * | 1999-03-31 | 2002-04-30 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Methods for controlling GGT-positive bacteria |
AU2001259379B2 (en) * | 2000-05-03 | 2006-08-03 | Medimmune, Llc | Combination therapy of respiratory diseases using antibodies |
US20040258699A1 (en) * | 2002-02-11 | 2004-12-23 | Bowdish Katherine S. | Immunotherapeutics for biodefense |
JP3823268B2 (ja) * | 2002-05-30 | 2006-09-20 | 独立行政法人科学技術振興機構 | ヘリコバクター・ピロリの細胞死誘導剤 |
DE10239531A1 (de) | 2002-08-23 | 2004-03-04 | Gulbins, Erich, Prof. Dr. | Prophylaxe und Therapie von Infektionserkrankungen |
JP2004307477A (ja) * | 2003-03-24 | 2004-11-04 | Kobe University | 遺伝子導入型ワクチンの中和抗体誘導能を増強する方法、ワクチンの投与方法 |
JPWO2005075652A1 (ja) * | 2004-02-03 | 2007-10-11 | 国立大学法人京都大学 | グルタリル−7−アミノセファロスポラン酸(GL−7−ACA)アシラーゼ活性が増強された改変γ−グルタミルトランスペプチダーゼ(改変GGT)の製造方法 |
US20070042448A1 (en) * | 2005-06-02 | 2007-02-22 | Institute Pasteur | Use of enzymes from Helicobacter pylori as therapeutical targets |
EP1913955A1 (en) * | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Gerhard, Markus | Novel method for treating H.pylori infections |
-
2006
- 2006-10-19 EP EP06021936A patent/EP1913955A1/en not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-10-19 SI SI200732046T patent/SI2902038T1/sl unknown
- 2007-10-19 LT LTEP14003585.8T patent/LT2902038T/lt unknown
- 2007-10-19 SI SI200731586T patent/SI2081594T1/sl unknown
- 2007-10-19 CN CN200780046762.3A patent/CN101594880B/zh active Active
- 2007-10-19 CA CA2666859A patent/CA2666859C/en active Active
- 2007-10-19 JP JP2009532733A patent/JP5989958B2/ja active Active
- 2007-10-19 EP EP14003585.8A patent/EP2902038B1/en active Active
- 2007-10-19 ES ES14003585.8T patent/ES2682925T3/es active Active
- 2007-10-19 HU HUE14003585A patent/HUE039785T2/hu unknown
- 2007-10-19 EP EP07819171.5A patent/EP2081594B1/en active Active
- 2007-10-19 AU AU2007312539A patent/AU2007312539A1/en not_active Abandoned
- 2007-10-19 DK DK14003585.8T patent/DK2902038T3/en active
- 2007-10-19 WO PCT/EP2007/009106 patent/WO2008046650A1/en active Application Filing
- 2007-10-19 US US12/446,226 patent/US9090676B2/en active Active
- 2007-10-19 CN CN201610297263.2A patent/CN105879019A/zh active Pending
- 2007-10-19 PT PT78191715T patent/PT2081594E/pt unknown
- 2007-10-19 PT PT14003585T patent/PT2902038T/pt unknown
- 2007-10-19 DK DK07819171.5T patent/DK2081594T3/en active
- 2007-10-19 PL PL14003585T patent/PL2902038T3/pl unknown
- 2007-10-19 PL PL07819171T patent/PL2081594T3/pl unknown
- 2007-10-19 ES ES07819171.5T patent/ES2527474T3/es active Active
-
2015
- 2015-01-07 CY CY20151100014T patent/CY1116166T1/el unknown
- 2015-06-16 JP JP2015120784A patent/JP6106213B2/ja active Active
- 2015-06-24 US US14/748,905 patent/US9821048B2/en active Active
-
2016
- 2016-01-13 HK HK16100336.5A patent/HK1212241A1/xx unknown
-
2018
- 2018-08-06 CY CY20181100811T patent/CY1120487T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6106213B2 (ja) | ピロリ菌感染を治療するための新規の方法 | |
JP6767396B2 (ja) | 急性移植片対宿主病の治療に使用するためのオルニトドロス・モウバタ補体阻害剤 | |
EP3969578A1 (en) | Novel gardnerella endolysins and uses thereof | |
JP2009254386A (ja) | Leishmania寄生虫ビルレンス関連遺伝子 | |
MX2012005406A (es) | Vacunas y diagnosticos contra la tripanosomosis. | |
KR20080083204A (ko) | Hsp 90 단백질의 억제제를 포함하는 치료 조성물 | |
AU2013273605B2 (en) | Novel method for treating H.pylori infections | |
US6916472B2 (en) | PON3 and uses thereof | |
BE1022553A1 (fr) | Mutants de spy0269 | |
RU2776484C1 (ru) | Рекомбинантная ДНК, обеспечивающая получение рекомбинантного белка Cov1, обладающего иммуногенными свойствами в отношении вируса SARS-CoV-2 | |
RU2820886C2 (ru) | Новые эндолизины гарднереллы и их применение | |
RU2820886C9 (ru) | Новые эндолизины гарднереллы и их применение | |
US20030180304A1 (en) | Secretory tyrosine phosphatases from mycobacteria | |
US10525126B2 (en) | Modified lipopolysaccharide glycoform and method of use | |
Von Dwingelo | The manipulation of host transcription by the ANKH effector of legionella. | |
BE1022553B1 (fr) | Mutants de spy0269 | |
CN117043341A (zh) | 用于降解胰蛋白酶或tmprss2的组合物 | |
JP2002506624A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウスspo0j2:ポリヌクレオチドおよび蛋白 | |
JP2002504321A (ja) | 新規pgsA |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160401 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160701 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160808 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160808 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A132 Effective date: 20161108 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170125 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170221 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170303 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6106213 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |