JP6042377B2 - 細胞懸濁液の作製方法及び細胞懸濁液 - Google Patents
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Description
に関する。この技法は、上記した以前の治療法の欠点の多くを克服する。例えば、培養上皮自家移植片は、ドナー部位に関する要件を少なくする。しかし、これらの自家移植片は増殖が遅く、移植片の培養に時間がかかり、レシピエント部位の調製時間を越えることも多い。
本発明は、独自の細胞懸濁液と、作製および適用が迅速で、効率的で、簡単であるその作製方法とに関する。本発明はまた、独自の細胞懸濁液を使用して患者を治療する方法と、その作製方法に使用するのに好適な装置とにも関する。記載されているが本発明を実施するために必須ではない装置の用途は、CEAなどの従来の移植技術の用途に関連する複雑さをかなり軽減することが見出されている。
(a)組織試料中の細胞層を解離することができる少なくとも1つの物理的および/または化学的解離手段に、患者に移植するのに好適な細胞を含む組織試料を付するステップと、
(b)ステップ(a)において使用する組織解離手段の存在から組織試料を取り出して、栄養液の存在下において組織試料から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで、細胞の生存性を維持することができ、(iii)移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適であるステップと、
(c)ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップと
を含む方法が提供される。
(a)上記方法により細胞懸濁液を作製するステップと、
(b)移植領域に比較的均一に分布するような細胞懸濁液の拡散を容易にする方法で、細胞移植を必要としている患者の領域に直接懸濁液を投与するステップとを含む方法が提供される。
(a)患者に移植するのに好適な細胞を含む組織試料を、試料中の粘着性の組織層片を解離するのに好適な酵素に付するステップと、
(b)ステップ(a)において使用する酵素液から試料を取り出して、栄養液の存在下において組織試料から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで、細胞の生存性を維持することができ、(iii)組織移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適であるステップと、
(c)ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップと
により作製される移植に好適な細胞懸濁液の、移植術を必要とする組織障害を治療するのに好適な医薬品を作製するための用途からなる。
(a)酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって望ましい温度に維持することができる加熱手段と、
(b)細胞懸濁液から大きい細胞凝集塊を分離することができるフィルター手段を備えるフィルター陥凹部分と
を備える装置が提供される。
〈一般〉
本明細書に記載されている本発明は、具体的に記載されているもの以外の変更および改良を受けることができると当業者は考えるだろう。本発明はこのような変更および改良を全て含むと理解するべきである。本発明はまた、本明細書に個別または集合的に言及されまたは示されているステップ、特徴、組成物および化合物の全て並びにステップまたは特徴の任意の2つ以上の任意および全ての組み合わせを含む。
かに、本明細書に記載されている本発明の範囲内である。
上記を考慮すると、本発明は、患者への移植に好適な生組織の移植可能な細胞懸濁液を作製に好適である独自の方法および/または装置を提供する。本発明の方法を適用する際および/または本発明の装置を使用する際には、ドナー組織を採取し、組織解離手段に付し、患者への移植に好適な細胞を回収し、レシピエントの移植部位への速やかな分散に好適である溶液に分散する。
とを提供し、損傷時から時間がたって見せられた火傷症例に特に有用である。火傷が治癒されていない患者の紹介が遅れることにより、または単に移植片の培養に必要な時間がレシピエントをベッドに寝かせる準備をする時間を越えたことにより、細胞を利用できない場合がある。本発明は、移植片調製時間に関する問題を改善する。
胞懸濁液を作製する手段を提供する。すなわち、ケラチノサイトの基底細胞、ランゲルハンス細胞、繊維芽細胞およびメラニン細胞などの細胞は、典型的には、標準的な細胞培養技法と比較して、生存率が高いが、選択細胞培養によりある種の細胞主を損失することがある。これは、皮膚移植後の皮膚の適正な再色素沈着を可能にするという利点を有する。
0分間トリプシン液に浸漬し、15〜20分がほとんどの組織試料に最適である。
試料中の細胞の生存性を維持することもできる栄養液を保持することができる容器も備える。さらに好ましくは、容器は、組織試料の操作を可能にして、組織細胞層の分離を可能にし、移植に好適な層からそのような細胞を採取するのに十分なサイズである。
(i)(a)酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって望ましい温度に維持することができる少なくとも1つの加熱手段と、
(b)細胞懸濁液から大きい細胞凝集塊を分離することができるフィルター手段を備える少なくとも1つのフィルター陥凹部分と、
(c)栄養液を貯蔵するための少なくとも1つの流体保持ウェルと
を備える第1の部材と、
(ii)前記流体保持ウェルに組織試料および栄養液を保持することができる容器を形成する第2の部材と
を備え、組織操作中に前記第2の部材を配置することができる座部を前記第1の部材が提供する。
とができるが、複数の加熱事象を容易にするために、複数の加熱装置を装置にすることができる。
おいて、加熱要素は、好ましくは、最長45分から1時間加熱モードにある。
提供される。また、混合が望ましいときに、磁気ビーズを溶液に添加することができる。
って懸濁させる。次いで、好ましくは注射筒およびカニューレを使用することによって、細胞懸濁液を回収する。
本発明のさらに別の特徴は、以下の限定するものではない実施例にさらに詳細に記載されている。しかし、この詳細な説明は、本発明を例示する目的にのみ加えられていることが理解されるべきである。上記に記載されている本発明の広範な説明を制限するものといかなる意味においても理解されるべきではない。
皮膚移植の成功率を最適にするために、創傷をきれいにし、適当な深さであることを評価する。さらに、止血を確立し、周囲の蜂巣炎または感染の徴候について創傷をチェックする。領域を調製する技法には、シャープな切開、削皮術またはレーザーリサーフェイシングが挙げられる。
ドナー部位は、レシピエント部位に適当に適合するように選択した。ドナー部位の皮膚の下部の皮下組織に局所麻酔剤およびアドレナリンを浸潤させた。これにより、ドナー部位は固定され、薄い分層植皮生検を採取する助けとなった。生検の寸法は、被覆するレシピエント部位の表面領域のサイズに決定された。
創傷の治療は、以下の実施例2にさらに詳細に説明されている、Re−Cell(商標)迅速技術による細胞採取装置を使用して実施した。装置は、創傷治療に必要な器具、溶液、酵素および包帯の全てを有した。
側を上にして容器に入れた。
が提供されており、第1の部材18内にある座部から第2の部材を持ち上げることができるサイズである。
〔請求項1〕
患者に適用する細胞懸濁液を作製する方法であって、
(a)組織試料中の細胞層を解離する少なくとも1つの物理的および/または化学的解離手段に、患者に移植する細胞を含む組織試料を付するステップと、
(b)該ステップ(a)で使用する解離手段から組織試料を取り出して、栄養液の存在下において組織試料から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、前記栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで細胞の生存性を維持することができ、(iii)移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適である、ステップと、
(c)該ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップと、
を含む細胞懸濁液の作製方法。
〔請求項2〕
試料中の粘着性の組織層片を解離するのに好適な酵素がトリプシンまたはトリプシン様酵素である請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法。
〔請求項3〕
前記酵素が、トリプシン、トリプシン−EDTA、ディスパーゼ、コラゲナーゼ、サーモリシン、プロナーゼ、ヒアルロニダーゼ、パンクレアチン、エラスターゼおよびパパインからなる群から選択される請求項2に記載の細胞懸濁液の作製方法。
〔請求項4〕
前記栄養液がハートマン液である請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法。
〔請求項5〕
請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法により作製される細胞懸濁液。
〔請求項6〕
自家細胞から作製される、請求項5に記載の細胞懸濁液。
〔請求項7〕
移植術を必要としている患者を治療する方法であって、
(a)請求項1に記載の方法により細胞懸濁液を作製するステップと、
(b)移植領域に比較的均一に分布するような細胞懸濁液の拡散を容易にするように、細胞移植を必要としている患者の領域に直接懸濁液を投与するステップと、
を含む方法。
〔請求項8〕
(a)患者に移植するのに好適な細胞を含む組織試料を、試料中の粘着性の組織層片を解離するのに好適な酵素に付するステップと、
(b)該ステップ(a)において使用する酵素液から組織試料を取り出して、栄養液の存在下において組織試料から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで、細胞の生存性を維持することができ、(iii)移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適である、ステップと、
(c)該ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップと
により作製される移植に好適な細胞懸濁液の、移植術を必要とする組織障害を治療するのに好適な治療用製剤を作製するための方法。
〔請求項9〕
前記栄養液がハートマン液である請求項8に記載の方法。
〔請求項10〕
組織再生液を形成するための装置であって、
(a)酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって望ましい温度に維持する加熱手段と、
(b)細胞懸濁液から大きい細胞凝集塊を分離するフィルター手段を有するフィルター
陥凹部分と、
を備えている組織再生液形成装置。
〔請求項11〕
組織試料および栄養液を保持する容器をさらに備えている、請求項10に記載の組織再生液形成装置。
〔請求項12〕
流体を貯蔵するための1つ以上の流体保持ウェルを備えている請求項10に記載の組織再生液形成装置。
〔請求項13〕
(i)(a)酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって望ましい温度に維持する加熱手段と、
(b)細胞懸濁液から大きい細胞凝集塊を分離するフィルター手段を有するフィルター陥凹部分と、
(c)栄養液を貯蔵するための少なくとも1つの流体保持ウェルと、
を備えている第1の部材と、
(ii)流体保持ウェルに組織試料および栄養液を保持する容器を形成する第2の部材と、
を備え、組織操作中に前記第2の部材を配置することができる座部を前記第1の部材が提供する、組織再生液形成装置。
また、以下に、分割直前の原出願(特願2010−163176号)の特許請求の範囲を示す。
[請求項1]
患者の移植部に速やかに分散させることに適した、患者の周術期に皮膚の組織再生液を形成する装置であって、
(i)(a)皮膚の組織試料内の細胞層を解離することができる、酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって必要な温度に維持する加熱手段と、
(b)インビトロにおける細胞の増殖を促進することなしに前記移植部へ速やかに分散させることに適している、前記皮膚の組織再生液とするための、前記酵素液での解離後の前記皮膚の組織試料から採取した細胞をもつ、細胞懸濁液から200μmより大きい細胞凝集塊を分離するフィルター手段を有するフィルター陥凹部分と、
(c)皮膚の組織試料から採取した細胞を懸濁することに用いる、前記移植部へ直接適用に好適である、栄養液を貯蔵するための少なくとも1つの流体保持ウェルと、
(d)貯蔵コンパート−メントと、
を備えている第1の部材と、
(ii)前記流体保持ウェルに皮膚の組織試料及び前記栄養液を保持する容器を形成する第2の部材と、
を備え、皮膚の組織試料操作中に前記第2の部材を配置することができる座部を前記第1の部材が提供する、皮膚組織再生液形成装置。
[請求項2]
前記皮膚の組織試料が分層皮膚の組織試料である、請求項1に記載の装置。
[請求項3]
前記栄養液が異種血清を含有せず、患者に適用するまで細胞の生存性を維持することが可能である、請求項1、2のいずれか一つに記載の装置。
[請求項4]
前記細胞懸濁液が真皮及び表皮の細胞を含む、請求項1〜3のいずれか一つに記載の装置。
[請求項5]
前記細胞懸濁液が真皮―表皮接合部で採取した再生可能細胞を含む、請求項1〜4のいずれか一つに記載の装置。
[請求項6]
前記細胞懸濁液がケラチノサイトの基底細胞、メラニン細胞、及び、繊維芽細胞を含む、請求項1〜5のいずれか一つに記載の装置。
[請求項7]
前記細胞がインサイチューにおいて見られるものに匹敵する互いの比である、請求項6に記載の装置。
[請求項8]
患者から得られた皮膚の組織試料から採取した細胞を含み、患者の移植部へ速やかに分散させることに適し、患者の周術期に形成する細胞懸濁液であって、前記皮膚の組織試料は真皮、表皮、及び、それらの間の真皮―表皮接合部を含み、
(a)前記患者の真皮―表皮接合部の真皮及び表皮から採取した自家移植の細胞であり、真皮、表皮を含む前記細胞と、
(b)前記患者の移植部に直接適用することに適している栄養液と
を含み、
インビトロにおける細胞の培養を促進することなしに移植部へ速やかに分散させることに適しており、前記真皮―表皮接合部で採取した真皮及び表皮の細胞を含み、200μmより大きい細胞凝集塊を含有しない細胞懸濁液。
[請求項9]
前記栄養液が前記患者の異種血清を含有せず、患者に適用するまで細胞の生存性を維持することが可能である、請求項8に記載の細胞懸濁液。
[請求項10]
前記細胞懸濁液が真皮―表皮接合部で採取した再生可能細胞を含む、請求項8、9のいずれか一つに記載の細胞懸濁液。
[請求項11]
前記細胞懸濁液がケラチノサイトの基底細胞、メラニン細胞、及び、繊維芽細胞を含む、請求項8〜10のいずれか一つに記載の細胞懸濁液。
[請求項12]
前記細胞がインサイチューにおいて見られるものに匹敵する互いの比である、請求項11に記載の細胞懸濁液。
[請求項13]
前記細胞が前記真皮―表皮接合部の真皮及び表皮の表面から細胞を擦り取ることによって採取する、請求項8〜12のいずれか一つに記載の細胞懸濁液。
[請求項14]
移植部へ速やかに分散させるための前記細胞懸濁液であって、インビトロにおける培養なしに移植部へ速やかに分散させることが可能である、請求項8〜13のいずれか一つに記載の細胞懸濁液。
[請求項15]
細胞置換治療、好ましくは尿路上皮細胞、口腔粘膜細胞、及び、気道上皮細胞の置換への使用のための、請求項8〜14のいずれか一つに記載の細胞懸濁液。
Claims (10)
- 患者の周術期に皮膚の組織試料から細胞懸濁液を形成し、患者の移植部に前記細胞懸濁液を速やかに適用する、装置であって、
(a)前記皮膚の組織試料内の細胞層を解離するように皮膚の組織試料をインキュベーションするのに用いられる酵素液と、
(b)前記酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって必要な温度に維持する加熱手段と、
(c)前記皮膚の組織試料を保持する容器であって、該容器が、前記皮膚の組織試料の操作を可能にして、細胞を採取するのに十分なサイズである、容器と、
(d)前記患者の移植部へ直接適用に好適である栄養液であって、該栄養液が前記皮膚の組織試料から採取した細胞を懸濁することに用いられる、栄養液と、
(e)インビトロにおける細胞の増殖を促進することなしに前記移植部へ速やかに分散させることに適している、前記細胞懸濁液とするための、前記酵素液での解離後かつ前記栄養液での懸濁後の前記皮膚の組織試料から採取した細胞から200μmより大きい細胞凝集塊を分離するために用いられるフィルター手段と、
(f)前記移植部に前記細胞懸濁液を適用するノズルと
を備える、装置。 - 前記皮膚の組織試料が分層皮膚の組織試料である、請求項1に記載の装置。
- 前記栄養液が異種血清を含有せず、患者に適用するまで細胞の生存性を維持することが可能である、請求項1又は2に記載の装置。
- 前記細胞懸濁液が真皮及び表皮の細胞を含む、請求項1〜3のいずれか一つに記載の装置。
- 前記細胞懸濁液が真皮―表皮接合部で採取した再生可能細胞を含む、請求項1〜4のいずれか一つに記載の装置。
- 前記細胞懸濁液がケラチノサイトの基底細胞、メラニン細胞、及び、繊維芽細胞を含む、請求項1〜5のいずれか一つに記載の装置。
- 前記細胞がインサイチューにおいて見られるものに匹敵する互いの比である、請求項6に記載の装置。
- 前記皮膚の組織試料を1:10〜1:80の拡大比で提供するために使用される、請求項1〜7のいずれか一つに記載の装置。
- 前記栄養液を貯蔵するための流体保持ウェルをさらに含む、請求項1〜8のいずれか一つに記載の装置。
- 前記ノズルを貯蔵する貯蔵コンパートメントをさらに含む、請求項1〜8のいずれか一つに記載の装置。
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