CN112961820A - 一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，包括S1：使包含真皮层和表皮层的供体皮肤组织样品经受解离装置，所述解离装置包含在皮肤组织样品中的真皮‑表皮连接处解离真皮层和表皮层的酶，其中供体皮肤组织样品提供1:10至1:80的膨胀率在治疗中；S2：从步骤S1中使用的解离装置中取出供体皮肤组织样品，并将供体皮肤组织样品浸入营养液储器中，其中营养液对患者不含血清异种，在施用于患者之前能够维持细胞的存活力和适于直接施用于患者的受体区域；本发明解决了移植物制备时间的问题，提高了细胞覆盖率的膨胀率；提高了小烧伤的治愈率；对小面积皮肤重建（如瘢痕）有用；并提高了瘢痕质量。

Description

一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置

技术领域

本发明涉及一种方法，特别涉及一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，属于细胞悬液制备技术领域。

背景技术

许多治疗创伤的方法是本领域技术人员已知的。例如，存在皮肤移植技术，其旨在重建覆盖身体的对皮肤有损伤或缺陷的区域的皮肤。通常，这些类型的移植物根据它们的宿主-供体关系和它们的厚度来分类。临床应用最多的移植物是自体移植物，其中组织取自身体的一个区域并应用于另一个区域。移植的组织然后形成新的血液供应，并附着在下面的组织上。目前使用的皮肤移植有几种类型，包括分离厚度、全厚度移植和微移植。这些接枝类型中的每一种都必须使用某些技术制备，并且每种都有其固有的优点和缺点。分裂厚度的嫁接往往需要相当多的技能，时间和昂贵的设备来执行。此外，供体部位疼痛，导致疤痕并限制能够覆盖的区域。虽然它们可能比全厚度移植更成功，但是它们通常不那么吸引人。全厚度移植需要较少的技术或昂贵的设备，并且它们的外观比分裂厚度移植更好。然而，全厚度的移植物不像分裂厚度的移植物那样“接受”。微型嫁接更容易完成，不需要特殊仪器。然而，它们的外观不如其他技术好，因为由此产生的疤痕是不可接受的。

上述移植技术的一个变体是网状移植物，它是一种分裂厚度或全厚度皮肤移植物，其中在被治疗的组织中切割平行行的薄条。网状移植物的一些优点包括：对受影响区域的覆盖更大，从移植物下引流血液或血清，以及增加移植物与不均匀的受体区域的顺应性。该技术非常成功，当移植物应用于健康的粒化床时，90％至100％“吸收”。皮肤劈裂移植的替代方法是在供体部位抽吸形成水泡并移植至受体部位。自上世纪60年代以来，人们就开始生产用于治疗伤口的药物。通过诸如DermavacTM的抽吸装置，在大约250-300mmHg的抽吸压力下，在1-2小时内产生所述ρ。然后把伤口切掉，放在伤口上。愈合时间约为10-14天。

上述方法有几个缺点，例如制备移植物所需的时间太长，并且移植物可能不会导致该区域的再着色；或治疗区域边缘周围的色素沉着不均匀是常见的。微移植已成为大面积覆盖的更常见方法，包括从供体部位“剪下”许多非常小的组织切片，然后应用于敷料，敷料又应用于伤口区域。体外生成组织的最先进的技术是培养表皮。培养的上皮自体移植物(CEA)是覆盖烧伤和身体大面积表面经历皮肤损失的其它情况中的重要附件，世界上有许多具有组织培养设备的中心，其目的是生产用于多种应用的自体上皮组织移植物。CEA的有用性和应用与它获得适合于移植的融合细胞片的能力有关。该技术克服了上述先前处理的许多缺点。例如，培养的上皮自体移植物减少了对供体部位的需求。然而，这些自体移植物生长缓慢并且需要时间来培养移植物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法，包括：

S1：使包含真皮层和表皮层的供体皮肤组织样品经受解离装置，所述解离装置包含在皮肤组织样品中的真皮-表皮连接处解离真皮层和表皮层的酶，其中供体皮肤组织样品提供1:10至1:80的膨胀率在治疗中；

S2：从步骤S1中使用的解离装置中取出供体皮肤组织样品，并将供体皮肤组织样品浸入营养液储器中，其中营养液对患者不含血清异种，在施用于患者之前能够维持细胞的存活力和适于直接施用于患者的受体区域；

S3：从营养液储器中面向真皮-表皮结合部的真皮表面和面向真皮-表皮结合部的表皮表面收获细胞，并通过与营养液混合来悬浮所收获的细胞，从而在营养液储器中产生真皮和表皮细胞的混合悬浮液；

S4：过滤来自步骤S3的真皮和表皮细胞的混合混悬液以除去大于200μm的细胞团，从而在直接施用于患者的营养液中产生混合细胞混悬液。

作为本发明的一种优选技术方案，所述酶是胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA。

作为本发明的一种优选技术方案，所述酶选自分散酶、胶原酶、热裂解酶、链霉蛋白酶、透明质酸酶、胰酶、弹性蛋白酶和木瓜蛋白酶。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤S3中收获的细胞适于移植到患者上，并且包括角质细胞基底细胞、朗格汉斯细胞、黑素细胞和成纤维细胞。

作为本发明的一种优选技术方案，所述皮肤组织样品经受解离装置约5分钟至约60分钟，所述皮肤组织样品的尺寸高达2cm×2cm。

作为本发明的一种优选技术方案，所述营养液是哈特曼溶液和生理盐水的一种。

作为本发明的一种优选技术方案，所述受体区域接受细胞移植和皮肤移植。

作为本发明的一种优选技术方案，一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的装置，包括：

一台处理机(带内置加热机制)；

一个可拆卸无菌托盘；

一个可拆卸细胞滤网；

一个瓶密封瓶装特制酶；

一瓶10毫升瓶装无菌水；

一瓶10毫升瓶装缓冲液；

一支锋针；

两支钝头吸取针；

三支5毫升注射器；

两支10毫升注射器；

一把一次性手术刀；

两支喷嘴。

作为本发明的一种优选技术方案，所述处理机中的加热机制的加热温度为30-37℃，优选加热温度为33和37℃之间。

作为本发明的一种优选技术方案，所述处理机、可拆卸无菌托盘、可拆卸细胞滤网、锋针、钝头吸取针、注射器、一次性手术刀和喷嘴均通过使用γ射线辐射或环氧乙烷消毒。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.本发明一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，本发明解决了移植物制备时间的问题，它有助于在损伤区域和供体部位实现快速的细胞覆盖，它提供了一种减小供区大小的方法--活组织检查供区明显小于分割皮肤移植供区，并减少或消除了分割皮肤移植供区的使用；提高了细胞覆盖率的膨胀率；提高了小烧伤的治愈率；对小面积皮肤重建(如瘢痕)有用；并提高了瘢痕质量，它解决了与使用常规组织培养过程中使用的溶液相关的问题，根据制备和处理方法，将移植物中使用的细胞悬浮在不含X基因血清的营养液中，然后将该悬浮液直接置于受体位点上，它提供了用于治疗各种皮肤病症或疾病的手段，例如，在瘢痕治疗中，如伤口愈合不正确、瘢痕方向不正确或因伤口收缩、痤疮瘢痕变形、痤疮瘢痕导致的瘢痕矫正、皮肤磨削和激光修复后，可用于表皮修复、皮肤缺损后的更换、皮肤再着色过程中的部位匹配、烧伤创面的治疗、皮肤缺损、白癜风、皮肤缺损的治疗，此外，该方法可用于细胞替代治疗，包括例如神经细胞替代治疗、上皮细胞(如尿上皮细胞、颊粘膜细胞和呼吸上皮细胞)替代治疗、内皮细胞替代治疗和成骨前体细胞替代治疗，它提供了以可与原位观察到的那些细胞相比的彼此比率产生细胞悬浮液的方法，即，由于制备细胞悬液的方式，与标准组织培养技术相比，细胞如角质细胞基底细胞、朗格汉斯细胞、成纤维细胞和黑红细胞通常具有提高的存活率，由此选择性细胞培养可导致某些细胞类型的损失，这具有允许在皮肤移植后皮肤的正确再着色的优点。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置的技术方案：

S1：使包含真皮层和表皮层的供体皮肤组织样品经受解离装置，所述解离装置包含在皮肤组织样品中的真皮-表皮连接处解离真皮层和表皮层的酶，其中供体皮肤组织样品提供1:10至1:80的膨胀率在治疗中；

S2：从步骤S1中使用的解离装置中取出供体皮肤组织样品，并将供体皮肤组织样品浸入营养液储器中，其中营养液对患者不含血清异种，在施用于患者之前能够维持细胞的存活力和适于直接施用于患者的受体区域；

S3：从营养液储器中面向真皮-表皮结合部的真皮表面和面向真皮-表皮结合部的表皮表面收获细胞，并通过与营养液混合来悬浮所收获的细胞，从而在营养液储器中产生真皮和表皮细胞的混合悬浮液；

S4：过滤来自步骤S3的真皮和表皮细胞的混合混悬液以除去大于200μm的细胞团，从而在直接施用于患者的营养液中产生混合细胞混悬液，

酶是胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA。

酶选自分散酶、胶原酶、热裂解酶、链霉蛋白酶、透明质酸酶、胰酶、弹性蛋白酶和木瓜蛋白酶。

步骤S3中收获的细胞适于移植到患者上，并且包括角质细胞基底细胞、朗格汉斯细胞、黑素细胞和成纤维细胞。

皮肤组织样品经受解离装置约5分钟至约60分钟，皮肤组织样品的尺寸高达2cm×2cm。

营养液是哈特曼溶液和生理盐水的一种。

受体区域接受细胞移植和皮肤移植。

一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的装置，包括：

一台处理机(带内置加热机制)；

一个可拆卸无菌托盘；

一个可拆卸细胞滤网；

一个瓶密封瓶装特制酶；

一瓶10毫升瓶装无菌水；

一瓶10毫升瓶装缓冲液；

一支锋针；

两支钝头吸取针；

三支5毫升注射器；

两支10毫升注射器；

一把一次性手术刀；

两支喷嘴。

处理机中的加热机制的加热温度为30-37℃，优选加热温度为33和37℃之间。

处理机、可拆卸无菌托盘、可拆卸细胞滤网、锋针、钝头吸取针、注射器、一次性手术刀和喷嘴均通过使用γ射线辐射或环氧乙烷消毒。

具体使用时，本发明一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，使包含真皮层和表皮层的供体皮肤组织样品经受解离装置，所述解离装置包含在皮肤组织样品中的真皮-表皮连接处解离真皮层和表皮层的酶，其中供体皮肤组织样品提供1:10至1:80的膨胀率在治疗中；从步骤S1中使用的解离装置中取出供体皮肤组织样品，并将供体皮肤组织样品浸入营养液储器中，其中营养液对患者不含血清异种，在施用于患者之前能够维持细胞的存活力和适于直接施用于患者的受体区域；从营养液储器中面向真皮-表皮结合部的真皮表面和面向真皮-表皮结合部的表皮表面收获细胞，并通过与营养液混合来悬浮所收获的细胞，从而在营养液储器中产生真皮和表皮细胞的混合悬浮液；过滤来自步骤S3的真皮和表皮细胞的混合混悬液以除去大于200μm的细胞团，从而在直接施用于患者的营养液中产生混合细胞混悬液，综上所述，本发明解决了移植物制备时间的问题，它有助于在损伤区域和供体部位实现快速的细胞覆盖，它提供了一种减小供区大小的方法--活组织检查供区明显小于分割皮肤移植供区，并减少或消除了分割皮肤移植供区的使用；提高了细胞覆盖率的膨胀率；提高了小烧伤的治愈率；对小面积皮肤重建(如瘢痕)有用；并提高了瘢痕质量，它解决了与使用常规组织培养过程中使用的溶液相关的问题，根据制备和处理方法，将移植物中使用的细胞悬浮在不含X基因血清的营养液中，然后将该悬浮液直接置于受体位点上，它提供了用于治疗各种皮肤病症或疾病的手段，例如，在瘢痕治疗中，如伤口愈合不正确、瘢痕方向不正确或因伤口收缩、痤疮瘢痕变形、痤疮瘢痕导致的瘢痕矫正、皮肤磨削和激光修复后，可用于表皮修复、皮肤缺损后的更换、皮肤再着色过程中的部位匹配、烧伤创面的治疗、皮肤缺损、白癜风、皮肤缺损的治疗，此外，该方法可用于细胞替代治疗，包括例如神经细胞替代治疗、上皮细胞(如尿上皮细胞、颊粘膜细胞和呼吸上皮细胞)替代治疗、内皮细胞替代治疗和成骨前体细胞替代治疗，它提供了以可与原位观察到的那些细胞相比的彼此比率产生细胞悬浮液的方法，即，由于制备细胞悬液的方式，与标准组织培养技术相比，细胞如角质细胞基底细胞、朗格汉斯细胞、成纤维细胞和黑红细胞通常具有提高的存活率，由此选择性细胞培养可导致某些细胞类型的损失，这具有允许在皮肤移植后皮肤的正确再着色的优点。

实施例一：本发明的第一方面提供了一种制备适用于受损组织的重修和再生的细胞悬液的方法，根据该方法，通过组织移植领域已知的方法从患者收获组织(优选为自体来源的组织)。优选地，这通过进行组织活组织检查来实现。随着活组织检查的收获，必须考虑活组织检查的深度和表面积大小。活组织检查的深度和大小影响可以进行手术的容易程度和患者从手术中恢复的速度。在本发明的高度优选的形式中，应当选择供体部位以适当地匹配受体部位，例如用于头和颈的事后训练，用于下肢的大腿，用于上肢的内上臂，或仅用手掌或反之亦然。一旦从患者采集活组织检查，就对组织样品进行能够解离组织样品中细胞层的物理和/或化学解离手段。用于解离组织内细胞层的方法是本领域公知的。例如，离解装置可以是物理或化学破坏装置。物理分离方法可以包括，例如，用刮刀刮除组织样品、切碎组织、物理地将各层分开或灌注组织。化学解离方法可以包括，例如，用酶如胰蛋白酶、dispase、β-genase、胰蛋白酶-EDTA、热裂解酶、链霉蛋白酶、透明质酸酶、弹性蛋白酶、Papain和β-tin消化。还可以使用用于组织解离的非酶溶液。优选地，通过将组织样品置于含有足以解离组织样品中的细胞层的量的酶的预热的酶溶液中来实现组织样品的解离。这可以例如使用胰蛋白酶溶液来实现，然而，可以使用任何其它酶，例如使细胞与其它细胞分离或与固体表面分离的dispase、Кgenase、胰蛋白酶-EDTA、热裂解酶、链霉蛋白酶、透明质酸酶、кtin、弹性蛋白酶和Papain。当使用的酶是胰蛋白酶时，该方法中使用的酶溶液优选不含钙和镁。一种这样的溶液优选是无钙和镁离子的磷酸盐缓冲盐水。当组织活组织检查源自患者皮肤(包括上皮-真皮细胞)时，该方法中可使用的胰蛋白酶的量优选为每体积溶液约5％至0.1％胰蛋白酶。理想地，溶液的胰蛋白酶浓度为约2.5至0.25％，最优选约0.5％胰蛋白酶。组织样品经受胰蛋白酶溶液的时间段可根据所取活组织检查样品的大小而变化。优选地，将组织样品在胰蛋白酶溶液的存在下放置足够的时间以削弱组织层之间的结合。例如，当组织样品取自患者皮肤时，可以将样品置于胰蛋白酶中5至60分钟。优选地，将组织样品浸泡在胰蛋白酶溶液中10至30分钟，其中15至20分钟对于大多数组织样品是最佳的。在将组织样品浸泡在胰蛋白酶溶液中适当的时间后，将样品从胰蛋白酶中取出并用营养液洗涤。洗涤组织样品可包括将处理过的样品部分或完全浸入营养液中。或者，更优选地，将洗涤溶液以足够的体积滴在组织样品上，以从样品表面除去和/或显著稀释任何过量的胰蛋白酶溶液。优选地，可能发生的任何稀释将导致营养液中的胰蛋白酶低于0.05％。该方法中使用的营养液应当能够显著降低胰蛋白酶的作用，更优选地，通过稀释或中和来去除胰蛋白酶的作用。在该方法中使用的营养液还优选具有以下特征：(i)不含至少X基因血清，(ii)在应用于患者之前能够维持细胞的生存力，和(iii)适合于直接应用于经历组织移植的患者的区域。该溶液可以是从碱性盐溶液到更复杂的营养液的任何溶液。优选地，营养溶液不含所有血清，但含有与体液中发现的物质相似的各种盐；这种类型的溶液通常被称为生理盐水。磷酸盐或其它无毒物质也可以缓冲该溶液以将pH保持在大约生理水平。特别优选的合适营养液是哈特曼(Hartmann)溶液。在将营养液应用于组织样品之后，分离样品的细胞层，允许能够繁殖的细胞从细胞材料中去除并悬浮于营养液中。在组织样品是皮肤的情况下，优选分离真皮和表皮，以允许进入两个表面的真皮-上皮连接处。然后通过本领域已知的任何方法从分离的层中除去能够繁殖的细胞。优选地，使用例如工具将生殖细胞从层的表面刮下。能够在真皮-上皮连接处内繁殖的细胞包括但不限于角质细胞基底细胞、朗格汉斯细胞、成纤维细胞和黑色素细胞。在从组织样品中释放细胞后，将它们悬浮在营养液中。优选在该收获步骤期间仅向组织样品施加小体积的营养溶液，否则悬浮液可能在其中变得太流体，从而难以向移植物施加悬浮液。为了避免细胞悬浮液中过大的细胞聚集，优选过滤悬浮液。在本发明的该优选步骤中可以使用能够从悬浮液中分离过大的细胞聚集体的任何过滤器。在本发明的高度优选形式中，过滤器尺寸在50μm和200μm之间。更优选地，其在75μm和150μm之间，其中100μm是一个具体实例。在应用于移植位点之前或过滤之后，可以立即稀释细胞悬液以产生适合于悬液使用目的的合适细胞密度。

实施例二：根据本发明的第二方面，提供了通过本发明第一方面所述的方法制备的含水细胞悬液。由该方法提供的细胞悬浮液非常适合于组织再生和移植技术。在移植技术中使用这种悬浮液的一个重要优点是，它可用于极大地扩大伤口的面积或体积，该伤口可通过原位增殖有限数量的细胞来快速治疗。通过改变悬液中细胞的浓度，或通过改变分布在移植部位的给定区域或体积上的悬液的量，可以改变接种到移植部位上的细胞的数量和浓度。通过将细胞悬浮在至少(i)不含X基因血清的营养液中，(ii)能够维持细胞的生存力直到应用于患者，以及(iii)适合于直接应用于经历组织移植的患者的区域，研究者发现患者移植的结果得到改善。对此的部分解释似乎可归因于从细胞悬浮液中除去X基因血清，更优选除去所有血清。基因血清是移植培养基中常见的添加剂，已知会引起潜在的感染和过敏问题。然而，如果所用的酶是胰蛋白酶，这种血清通常是细胞体外扩增和中和酶作用所需的。本发明中使用的营养液不需要这样的血清，因为悬浮液中的细胞群在应用于移植位点之前不扩增。相反，在患者身上而不是在体外系统中鼓励细胞增殖。当使用胰蛋白酶时，通过其它方法实现中和。根据本发明第一方面的方法制备的细胞悬浮液的另一独特特征是细胞制剂中细胞的组成与现有技术细胞制剂中原位观察到的组成相当。对此的一种可能的解释是，在现有技术中，细胞制剂的培养利用对角质形成细胞的选择性培养，因此发生细胞成分如成纤维细胞和黑色素细胞的损失，而由本发明第一方面产生的细胞悬液具有与原位细胞群相当的细胞组成。从本发明的第一方面产生的细胞悬浮液的另一个特征是，移植细胞更有活力，因为它们是在营养液中收获的，这与现有技术的细胞收获程序不同，现有技术的细胞收获程序利用了在细胞暴露于强力消化酶中过长时间的同时收获细胞的技术。当细胞暴露于这些酶过长时间时，细胞悬液的生存力降低。

实施例三：根据本发明的第三方面，提供了一种治疗需要组织移植的患者的方法。通过该方法，将根据本发明第一方面制备的细胞悬液施用于移植部位。含有细胞的液体悬浮液可以通过多种技术中的任何一种手动分配到移植部位上，所述技术包括喷涂、铺展、移液和上漆。在本发明的高度优选的形式中，将悬浮液喷涂到移植部位上。悬浮液可以通过任何类型的喷嘴喷射，该喷嘴将液体转变成小的气载液滴。该实施例受到两个约束。首先，它不能使溶液中的细胞受到会破坏或杀死大量细胞的剪切力或压力。第二，不需要将细胞悬浮液与对细胞或伤口床有毒或有害的推进剂流体混合。通常可用的各种否满足这两个约束。可以以任何常规方式将这种细胞悬液连接至含有细胞悬液的储液器。或者，可以通过移液管、常用的“滴眼器”、注射器和针头或其他类似装置输送悬液，以将少量细胞悬液置于移植部位。在将细胞悬液施加至受体移植部位后，可以用伤口敷料包扎伤口。在优选的实施方式中，敷料是SurfasoftTM编织尼龙敷料。优选地，伤口愈合之后是本领域技术人员已知的用于皮肤移植治疗的标准方案。根据本发明的第四方面，提供了一种用于开发组织再生溶液的设备，该设备具有适于将酶溶液加热到所需温度的加热装置，并且能够将该溶液在所需温度下保持适当的时间量；以及过滤器凹槽，其包括能够从细胞悬浮液中分离大细胞聚集体的过滤器装置。

实施例四：本发明第四方面的优选形式中，该设备还包括能够保持组织样品和营养液的储器，该溶液还能够保持组织样品中细胞的生存力。更优选地，储存器具有足够的尺寸以允许操作组织样品，从而允许组织细胞层的分离和从适于移植的层中收获那些细胞。该设备还可以包括一个或多个流体容纳井，用于存储诸如营养液的流体。可选地，孔可以用作容纳营养液的容器(例如塑料或玻璃瓶)的瓶塞。优选地，所述孔能够容纳至少10ml体积。这样的孔允许容易地将流体施加到组织样品。这种流体在其应用位置附近的储存还提供了减少流体意外泄漏的风险的优点，并且提供了用于接近流体以准确地将其递送到组织样品或细胞悬浮液的容易手段。在本发明的高度优选的形式中，该设备包括第一和第二构件，其中：(1)第一构件包括：至少一个加热装置，所述加热装置适于将酶溶液加热到所需温度，并且能够将所述溶液在所需温度下保持适当的时间；(b)至少一个过滤器凹部，所述过滤器凹部包括能够将大的细胞聚集体与细胞悬浮液分离的过滤器装置；(c)至少一个用于储存营养液的流体储存井；(2)所述第二构件形成能够将组织样品和营养液保留在储存流体中的储存器；并且其中第一构件提供座部，在操纵组织期间第二构件可以放置在该座部上。在本发明的另一优选形式中，第一构件提供存储隔室，在上述方法中使用的工具和溶液可以存储在该存储隔室中。当在设备中提供这样的隔室时，第二构件可以提供对该隔室的盖或封闭件。在使用中，盖优选地从隔室的顶部移除并倒置。盖的下侧优选地在其中形成贮存器，使得第二构件能够用于双重目的。在该方法中使用的工具和解决方案可以从隔室中访问。然后可将倒置的盖子放回到其中的隔室上，为设备提供储液器。设备可由金属、塑料或任何其它材料制成。此外，容器可以是任何尺寸。优选地，容器的尺寸仅受其预期用途和灭菌需要(例如通过使用γ射线辐射和/或环氧乙烷)的限制。应当理解，设备中使用的加热装置可以简单地构成第一构件顶部上的一个或多个加热垫。然而，这种布置存在伴随的问题，尤其是经受加热的容器意外溢出的可能性。因此，在一实施例中，一个或多个加热装置可容纳在第一构件中的凹部内。至少一个容器也位于该凹部内，组织可放置在该容器中以暴露于酶溶液。在可选的实施例中，一个或多个加热装置可以容纳在设备的基座中。在这种构造中，第一构件至少包含适于接收能够容纳流体的容器的开口，该开口为容器提供通向加热装置的通路。应当理解，如果装置被设计用于多于一种用途，则加热装置可以能够被反复加热和冷却。可选地，每个加热单元可以能够单次使用，但是可以为设备提供多个加热单元以促进多个加热事件。在设备的高度优选的构造中，加热套环位于其中的凹部内，从而在第一构件中形成加热凹部，用于酶的容器(例如小瓶)位于该凹部内。容器优选地通过至少一个约束装置保持在适当位置，该约束装置可张紧地张紧容器的上部的一部分，以防止容器从设备意外地释放。在装置打算用于单次使用的情况下，约束装置可以形成为第一构件的整体部分，因此意味着容器的移除可以仅通过物理地破坏第一构件来实现。在装置中使用的加热装置优选地通过在需要时允许激活加热元件的回路来控制。例如，可以通过按压位于例如第一构件的表面上的开始按钮来接通加热装置。可以通过用足够的力向下推动容器以启动位于设备底部的开关来启动加热装置。本领域普通技术人员将理解，可以使用宽范围的电子装置来激活设备中提供的加热单元。可操作地，加热单元还可操作地连接到定时器机构，该定时器机构适于将酶溶液加热预定的时间段。在装置打算用于多种用途的情况下，优选地，定时器可以被设置成在达到特定时间量时停用加热元件。在该点，警报可以被激活以通知用户时间到了。警报可以是可听的或者是光显示器的形式。在本发明的另一优选实施例中，加热装置可以设置有可调节的温度控制装置。在需要温度调节的情况下，这种变化可以通过使加热控制电路适于包括温度控制机构或与温度控制机构通信来实现，该温度控制机构允许加热单元的温度在恒定范围内恒定地变化，或者其可以呈现加热控制装置可以设置的选择温度的范围。温度控制装置将有利地包括在该装置中，其中该装置将用于不同细胞类型的收获和制备，或者其中在该装置具有独特应用的收获方法中使用不同的酶。在可选的更优选的形式中，该装置被设计用于单次使用。在这种情况下，定时器机构是控制加热装置的电路的一部分。一旦加热装置被激活，它将溶液加热一段预定的时间，然后自毁。本领域技术人员应当理解，这种装置可以装配有各种监测装置，这些监测装置能够指示如下情况：酶已达到所需温度；酶已在溶液中的时间量；和/或在电路自毁之前剩余的时间量等。仅作为示例，监控装置可由一系列LED组成，这些LED在某些事件发生时激活。在高度优选的实施例中，加热元件优选地保持在加热模式最多45分钟至1小时。加热装置可以由本领域已知的任何装置供电。优选地，电源由电池/多个电池提供。在本发明的一种形式中，电源是位于设备底部的电池或多个电池。在本发明的另一个实施例中，设备可以设置有一个或多个装置，以便于混合在本发明中使用的溶液，例如酶溶液。在这方面，并且仅作为示例，该设备可以包括用于使溶液涡旋的装置；例如适于激发磁珠的电磁系统。在设备包括电磁混合系统的情况下，磁珠优选设置在容器(例如小瓶)中，溶液储存在该容器中。或者，当需要混合时，可以将磁珠加入到溶液中。在本发明的高度优选的形式中，混合装置与加热装置组合为单个单元或单独的单元，以便于以均匀的方式恒定地加热溶液。使用这种混合装置避免了在加热溶液时最靠近加热单元的溶液可能过热。这样的系统将提供溶液的更恒定的加热。用于混合溶液的替代装置是本领域已知的，并且包括例如机械、物理、电和电磁装置。虽然在设备中可以采用任何混合装置，但是优选地，选择混合装置以使设备的振动最小化，或者以使这种振动最小化的方式将混合装置结合到设备中。在这方面，混合装置可以容纳在一个或多个振动阻尼器上，或者设备可以包括一个或多个位于基座上的振动阻尼器。在混合装置结合到设备中的情况下，该装置可以在激活加热单元时自动激活，或者可替换地可以有单独的激活系统。此外，混合的速度可以是固定的或可变的。优选地，存在用于混合装置的单独的激活系统。结合到设备中的过滤器凹部可以具有便于过滤细胞悬浮液的任何尺寸或形状。此外，凹部可以适于接收和保持至少一个管，细胞悬浮液可以被过滤到该管中。优选地，凹部具有锥形基部，其提供了在细胞悬浮液被过滤后容易接近全部体积的细胞悬浮液的手段。可选择地，第三凹部被设计为接收100μm的细胞过滤器。第三凹槽可容纳连接到锥形管的100μm单元过滤器。优选地，所述管具有标记在侧面上的面积/体积刻度。所述设备还可以包括细胞收获所需的一组工具。本领域技术人员应当理解，该装置可以包括细胞收获所需的任何工具。优选地，该组工具是无菌的。仅作为示例，这套工具可以包括分离酶的玻璃容器；用于悬浮酶的无菌溶液；无菌营养液；在高度优选的实施方式中，该组工具储存在形成于设备的第一构件中的隔室中，所述隔室在不使用时被第二构件覆盖。在高度优选的实施方式中，所述装置用于收获细胞悬液并以如下方式将细胞施加到受体部位。将无菌水的等分试样与部分溶解的分离酶混合并放置在加热凹部中。然后激活加热装置，该加热装置将容器的内容物(即酶溶液)加热到30-37℃的工作温度。C.，优选在33和37℃之间。C.和通过实施例的方式37℃。C.在2分钟内，并保持工作温度至少45分钟。一旦达到操作温度，将取自供体部位的组织样品置于酶溶液中并在工作温度下孵育。将组织样品温育5至45分钟。本领域技术人员将理解，实现组织样品层的分离所花费的时间取决于组织样品的厚度和尺寸以及温育温度。一旦实现了组织层的酶促分离，就将组织样品移到储液器中，并使用手术器械分离组织层。然后，通过抽吸到注射器中，将仔细测量的第二溶液的等分试样从流体容纳孔中取出，然后施加到各层上。组织层之间的细胞被刮掉，并通过与营养液混合而悬浮。然后收集细胞悬浮液，优选使用注射器和套管。然后将收获的细胞悬浮液通过位于过滤器凹部中的细胞过滤器，并将过滤的细胞悬浮液收集到过滤器凹部中。储液器可任选地用另一体积的第二溶液冲洗，由此产生的细胞悬浮液也被过滤并收集在过滤凹部中。然后可任选地将过滤的细胞悬浮液抽吸到注射器中并施加到受体部位，为了优化皮肤移植的成功，将伤口清洁并评估为具有适当的深度。此外，还建立了血瘀状态，检查伤口是否有周围蜂窝织炎或感染的迹象。准备该区域的技术包括锐切术、磨皮术或激光表面修复术。供体部位活检选择供体部位以与受体部位适当匹配。供体部位在皮下组织附近的皮肤下浸润有局部麻醉和肾上腺素。这使得供体部位牢固并有助于进行薄的分裂厚度活组织检查。活组织检查的尺寸由要覆盖的受体部位的表面积的大小确定。通常，活组织检查尺寸具有1:10-1:80的膨胀比。在这种情况下，从供体部位取2厘米×2厘米的活组织检查尺寸，得到1：60的扩张比。使用自体细胞提取快速技术细胞收获装置进行面向创伤快速技术治疗的细胞收获，设备包含伤口治疗所需的所有仪器、溶液、酶和试剂。通过按下“启动按钮”启动加热元件。将溶液(注射用无菌水)(10ml)从所提供的标记为SolutionA的塑料容器转移到含有分离酶(磷酸胰蛋白酶)的玻璃容器中，得到终浓度为0.5％的胰蛋白酶。然后将酶溶液混合在一起，转移到已经位于加热元件凹槽中的容器中，并加热到37℃。C.将含有溶液B(营养培养基)的容器从其供应的容器转移到流体保存井中。然后将先前获得的组织样品置于酶溶液中，并在37℃下孵育。C持续10至15分钟。此后，用一对套管从酶溶液中取出组织样本，通过浸入含有溶液B的流体容纳孔进行冲洗，并将皮肤侧朝下和表皮侧朝上放置在储液器中。然后将溶液B从孔抽吸到注射器中，并从注射器滴到活检的两层上。使用套管分离皮肤层。这允许进入两个表面的真皮-表皮结合部的区域。从表面刮下细胞以在储液器中形成细胞羽。然后将细胞在溶液B中混合。然后将细胞柱通过19号套管抽入注射器中。将所提供的过滤器(100μm细胞过滤器)安装在过滤器凹槽中，并使溶液B中的细胞柱通过过滤器。然后使用另外少量的溶液B冲洗储液器(例如陪替氏培养皿)并收集任何剩余的细胞，它们也通过过滤器。将锥形凹槽中收集的细胞悬浮液吸入注射器中，并将喷嘴连接到注射器上，用于喷射或滴到伤口区域。再次检查伤口，以确保伤口清洁、无碎屑，且没有细菌污染的迹象。此外，检查伤口以确定是否已达到止血。一旦受体部位准备好，使用喷嘴将细胞悬液施加到伤口表面。用随设备提供的编织尼龙敷料SurfasoftTM对伤口进行包扎。使用用于皮肤移植治疗的标准方案跟踪伤口的愈合。

本发明在使用过程中步骤、术后护理和故障排除：

材料准备

自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置的使用过程中需要用到以下材料和器械：

手术手套和适当的无菌手术洞巾；

护目镜和手术衣；

备皮溶液；

含肾上腺素的局部麻醉剂(不禁用时)；

适当的伤口敷料。详情请参见下文的“术后护理”部分；

精选的1或2把细尖(长嘴)钳；

取皮装置；

伤口床准备工具。

套件准备

按所示顺序执行以下准备步骤,避免准备错误。单独的自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置准备卡与装置一起提供,可在操作中参考。自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置套件包含无菌和非无菌组件。选择并准备无菌和非无菌作业区。使用标准的无菌操作准备无菌手术区。

确保所用酶的批号与自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置套件外包装上注明的酶的批号相符且在有效期内。使用无菌操作从无菌包装中取出处理机并转到无菌区。

打开处理机并注意可拆卸的内部白色塑料插片。此插片在制备和刮取皮片时可用作无菌托盘。

执行自检测

执行自检测以确认装置可正确发挥作用。

按下带有标记的按钮以检测装置,确保功能正常。自检测时所有灯均应亮起。在完成自检测(需时约30秒)时,会发出蜂鸣音,绿色的“就绪”灯将会亮起,表示处理机运转正常。如果灯未亮,或者亮红灯,请勿使用该装置。如果酶未开始加热,则装置会在1分钟后自动关闭。

如果装置在自检测后关闭,则可能需要运行多次自检测。

此时请勿按下运行按钮,

a制备酶(组件集A:特制酶)

在非无菌作业区,取下标注为酶的小瓶顶盖,会看到注射隔膜。使用消毒酒精擦拭隔膜并晾干(可选)。

将一支锋利无菌针头接到一支10毫升的注射器上并吸满无菌水。

将吸满的无菌水全部注入酶的瓶子。在这一步请勿使用缓冲液,否则可能会抑制酶的活性。

轻轻倾斜小瓶以混合溶液,直至完全溶解。请勿摇晃,并且使用时要小心避免起泡。

将溶解后的酶全部吸回注射器中。

使用无菌操作,将注射器中的酶全部注入处理机左侧孔中(孔A:特制酶)。

b制备缓冲液(组件集B:缓冲液)

取下标注为缓冲液的小瓶的盖。使用消毒酒精擦拭小瓶隔膜并晾干(可选)。

将一支锋利无菌针头接到一支新的10毫升的注射器上并吸满无菌水(约10毫升)。

将注射器中的缓冲液全部注入处理机空的中央孔中(孔B:缓冲液)。

c–制备皮肤细胞混悬液(组件集C：过滤器)

检查细胞滤网(孔C:过滤器)是否完好

d–打开其余组件(组件集d)

将其余组件转入无菌区。

2支喷嘴

2支钝头吸取针

3支5毫升注射器

1把一次性手术刀

创面制备

清洁,有血供的创面——为取得最佳疗效,细胞悬液仅可用于洁净,带血供的创面,且不应有残留的坏死组织。使用旋转钻石头锉,激光切割,锐性剥离或其他技术进行皮肤磨削术,具体视伤口的性质而定。

无感染——在存在污染或感染时不得使用细胞悬液,因为在上皮再形成初期以及从长期的存活角度考虑,都高度要求无感染情况的发生。如果患者存在污染或感染的危险,可预防性采用抗生素。建议在排定的手术前48小时将伤口拭子送检,检查最新的微生物情况。

点状出血——制备创面,露出真皮并可见点状出血。完成此步骤可用多种方法,如剥脱类激光,点阵激光,或机械磨削。应尽可能多地保留可存活真皮。如有组织缺损(如烧伤),那么精确清创直至可存活组织层就至关重要；必须去除所有坏死组织。

制备细胞悬液说明

取皮片

皮片类型

非常重要的是,采集的皮片是薄的刃厚皮片,要穿透到真皮并保留供体部位的点状出血。根据供体部位和患者的年龄,皮片的厚度会有差异,但应介于0.15至0.20毫米(0.006至0.008英寸)之间。选用取皮刀时,建议使用Silver取皮刀,辊轴刀或

刀。

皮片面积

根据施用创面选择适当的皮片面积。每个自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置套件可处理最大皮片面积为2厘米x 2厘米,最多可获得4毫升细胞悬液。针对急性部分皮层受损创面,可治疗面积约为320平方厘米。皮片面积指导原则如下:

供体部位的选择

供体部位的选择很重要,选择适当才有利于保证创面在功能和外观上尽可能与周围组织相同。特定部位的特性可包括在无毛组织形成角质细胞层(双脚脚底和双手手掌),以及上皮的黑色素细胞分布。

采集皮片

根据偏好选择器械,如使用Silver取皮刀,辊轴刀或

刀,从供体部位取下最大面积为2厘米x 2厘米,厚度为0.15至0.20毫米(0.006至0.008英寸)的刃厚皮片。使用Zimmer植皮刀采集皮片时,为获得恰当厚度建议采用以下规格。

使用消毒溶液如聚维酮碘或洗必泰溶液清洁供体部位,待消毒溶液干燥,然后使用无菌盐水擦净(消毒溶液可具有细胞毒性,残留在采样部位会影响细胞存活)。如果有必要,可以选用肿胀式麻醉溶液渗入皮下组织,以提供更坚固的表面和为采集皮片提供麻醉。确保麻醉液不是皮内注射。可使用无菌矿物油对供体部位进行润滑,便于植皮刀下刀。供体部位可按I期愈合的伤口的治疗进行。完全止血后,可立即向供体部位的伤口施加少量细胞悬液,并按下文“术后护理”部分所述进行包扎。

加热酶

确认酶已转移到孔A。如果在将酶置入孔中之前就按下运行按钮,则处理机会迅速过热。一旦装置出现任何异常,包括过热,红色指示灯会亮起。如果发生这种情况,请使用其他自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置套件,并联系当地销售代表安排装置的退换事宜。

按下运行按钮加热孔A中的酶。如果设备准备就绪,则会开始加热。如果与上一次自检测相隔已超过一分钟,则会自动运行自检测,然后立即开始对孔的加热。加热开始时橙色指示灯会亮起,酶会加热并保持在37℃左右(装置的加热设备会使温度恒定在37℃左右)。

温育皮片

如果橙色加热灯熄灭,绿灯亮起,表明酶已经达到目标温度。这一过程将需时约3分钟。橙色灯会不时闪烁,表明被加热元件已激活,开始保持温度。

将皮片置于加热的酶中温育15到20分钟,让细胞外基质分解。如果皮片较厚,则温育时间可能需要长达60分钟。

吸取缓冲液

在温育皮片的同时可以执行此步骤。根据将要治疗的创面决定需要使用的最终悬液量。自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置可单独使用,也可与网状,刃厚植皮技术一起使用。下表提供的是单独使用自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置治疗急性部分皮层受损创面时,可治疗的表面积和需要使用的缓冲液量。

将缓冲液按需要量吸入一支新的5毫升注射器并将其置于无菌区,准备在下述第7和8步中使用。

检查细胞解离

15至20分钟之后,使用无菌镊子从加热的酶溶液中取出皮片并将皮片置于无菌托盘中,真皮面朝下。使用手术刀轻刮表皮,检查细胞是否已解离,即表皮细胞是否能轻松剥落。如果细胞不易剥落,则将皮片重新放回酶中再搁置5至10分钟,然后再次试刮。当细胞可以轻松刮离,便可进行下一步。

约60分钟之后,警报声会响起。建议温育皮片的时间不要超过60分钟。

冲洗皮片

试刮成功后,在含缓冲液的中间孔(孔B)中简单冲洗皮片,洗去残留的酶并灭活。将皮片重新置于无菌托盘中。

从皮片上刮离细胞

皮片在无菌托盘中真皮朝下,将之前吸到5毫升注射器中的缓冲液滴到皮片上,数滴即可。使用医用镊子固定皮片,使用手术刀的刀刃轻刮表皮的表面。一旦表皮剥离落入悬液,便可更为用力地刮离剩余真皮。继续刮,直至真皮近于瓦解成小片。

冲洗并吸取；吸取细胞悬液

使用5毫升注射器中剩余的缓冲液冲洗手术刀和托盘,将细胞收集到托盘的一角。必要时可倾斜托盘。使用同一支5毫升注射器和钝头针将细胞悬液吸入注射器。使用吸上来的悬液冲洗托盘。吸取然后冲洗多次,将细胞收集最大化。最后将细胞悬液吸入注射器。

过滤细胞

将皮肤细胞悬液滤过孔C过滤器的细胞滤网。

吸取皮肤细胞悬液

准备一支新的无菌5毫升注射器和钝头吸取针。小心地将细胞滤网移到孔上方轻叩,以释放出残留的细胞悬液。从孔C吸取过滤的细胞悬液。孔C底部中间有一个锥形尖,有助于吸取全部细胞悬液。

将悬液施用于创面

在施用细胞悬液之前,应确保敷料已修剪准备好,可以立即施用。接触性创面敷料应在施用细胞悬液前固定或保持在创面的下方。章节C,即“术后护理”部分会提供有关敷料选择和使用的信息。

细胞悬液可使用提供的喷嘴喷洒,滴到创面上或使用钝头吸取针注入到接触性创面敷料之下。

至于选择哪种施用方法,则取决于细胞悬液的量以及创面的面积和位置(请参见下表)。可保留部分细胞悬液施用于供体部位。

采用喷洒方法时要求的最低细胞悬液量约为2毫升。

注意：提供有备用的5毫升注射器和喷嘴。

喷洒施用

从包含细胞悬液的注射器上取下针头。通过用力按压将随附的喷嘴安在注射器上。在施用前颠倒注射器数次,确保悬液均匀。检查确认所装喷嘴的孔对准了创口。拿住喷涂器,距创口最高点约10厘米,位置与悬液滴到创面的第一滴的位置一样。以适度的力量按压注射器柱塞杆。在创口最高处开始喷洒,这样有助于洒落的悬液覆盖伤口的邻近区域。必须向创面喷洒细胞悬液细雾。要覆盖更大区域,可在喷洒时小心地从伤口一侧向另一侧连贯移动喷涂器。

滴注施用

请勿从包含细胞悬液的注射器上取下钝针头。在滴注施用前颠倒注射器数次,确保悬液均匀。从伤口最高处开始,小心地将细胞滴到创面上。

在接触性创面敷料下施用

如果要将细胞悬液注入到敷料下,请勿从包含细胞悬液的注射器上取下钝针头。在滴注施用前颠倒注射器数次,确保悬液均匀。将修剪好的敷料置于伤口上并轻轻地将针插入到敷料下并注入细胞悬液。较大的伤口可能需要在多点插入针头并注入悬液以确保完全覆盖。

注意：制备好的创面上的纤维蛋白为细胞粘着提供了理想的环境。很多(但不是全部)传递的细胞将粘着在伤口上。部分细胞悬液随缓冲液从伤口处流走是正常现象。制备完善的悬液有足够的细胞可以治疗伤口,部分流失不会有影响。

术后护理

伤口接触层敷料

在施用细胞悬液后,使用类似

伤口敷料之类的非粘附,非吸收性微孔敷料覆盖伤口。在某些情况下,首先施用伤口接触层敷料并使用钝针头将细胞悬液注入敷料下可能更为实用。请始终遵循敷料生产商制定的使用说明。必要时可使用手术用胶,缝线或钉将敷料固定在伤口上。

将二级敷料覆盖在伤口接触层敷料之上,除对伤口提供保护之外还可吸收渗出物。此类敷料应该具有适度吸水性,微带粘性,低切,可随时取下。一个例子便是用石蜡纱布层罩于伤口接触层敷料之上,使用生理盐水浸润或聚维酮碘敷布和弹力绷带。应根据临床表现出来的指征采用压迫疗法和减压疗法。

后期敷料

在渗出物量大时,外部敷料和加压绷带需要更换,但是伤口接触层敷料需要保持原位6-8天,或根据临床指征决定。在更换二级敷料时务必小心保护伤口接触层敷料。伤口接触层敷料随着新表皮的形成会松动并有所提升,但不应从原粘着处取下。在不引起创伤的前提下,取下伤口接触层敷料,这一点非常重要。针对任何不易取下的敷料,应使用含水或油基溶液浸润之后再取下,以防造成外伤。一旦该敷料已取下,必须在创面覆盖适当的保护性敷料。

在点状起泡区域请勿使用干敷料,否则渗出物干燥后会导致新形成的皮肤粘着在敷料上,在取下敷料时可能会造成伤害。此时应使用(例如)油性或石蜡纱布敷料,直至起泡区域和伤口开放区域完全愈合。

如果此阶段出现任何受损愈合或感染的迹象或症状,则应进行记录并及时处理。

后期敷料

患者应采取必要的预防措施,防止治疗区域伤口未愈合前沾水。

至少5天内不要破坏伤口接触层敷料。确保无创伤取下伤口接触层敷料——请勿用力取下伤口接触层敷料。

应建议患者避免对伤口和敷料的损伤,包括适当的减压处置。治疗区初步闭合后新再生的皮肤可能需要长达两个星期才会成熟并长成健康皮肤。在此期间必须覆盖保护性敷料,特别是在四肢上。

使用自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置治疗的区域禁止使用已知具有细胞毒性的药物(例如磺胺嘧啶银)。

针对在治疗区愈合和成熟期间如何预防再次伤害,应向患者和护理者提供充分的信息和材料。

应建议患者不要从事剧烈活动。

患者在接受治疗后,至少在四周内应避免直接暴露在太阳下。

抑制疤痕

伤口已愈合时,应建议患者继续保护创面区避免受伤,至少在四周内要避免阳光直射。建议经常使用防晒乳并且每日两次使用非油性润肤露按摩。

应告知患者创面在随后数周及数月内的变化。在这段时间,色素沉着和皮肤纹理将继续成熟和改善,可能需要长达12个月才能获得最终效果。

后续程序应遵循的标准规范应视具体伤情和给予的治疗而定。

排除故障。

酶粉无法完全溶解。

多次颠倒小瓶,确保酶与无菌水充分混合。在配制好的溶液中经常会有少量颗粒物质无法溶解。这不会降低酶的活性。

请勿使用缓冲液溶解酶,否则可能干扰酶的活性。

皮片过大,过厚或过薄。

采集皮片时应特别小心。皮片应是很薄(0.15至0.20毫米)的刃厚皮片,只有极薄的真皮(参见之前真皮制备说明)。皮片厚度适当将可确保成功解离细胞。建议用于自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置装置的皮片最大面积为2厘米x 2厘米。

如果皮片过大(大于建议值),将其切小并将多余部分弃置。

如果皮片过厚,将皮片切为1厘米x 1厘米之后再置于加热的酶中。如果细胞无法解离,则可反复将皮片放回加热的酶中5到10分钟,总时间不应超过60分钟。如果细胞仍然不易剥落,则可能需要从不同的供体部位另取一片薄的分层皮片,使用新的自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置装置重复之前的过程。

如果皮片过薄,则应从不同的供体部分再取一片皮片并重复上述过程。

缓冲液加到了酶瓶中

如果误将缓冲液(而不是无菌水)加到了酶瓶中,则会抑制酶的活性。如果缓冲液与酶粉混合,则应弃置酶并使用新的自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置装置。

细胞解离困难

确保加热元件已打开。自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置装置已打开并准备就绪可以使用时,绿灯将亮起。装置正在加热时橙色灯将亮起。如果皮片过大或过厚,细胞的解离将需要较长时间。了解相关建议请见上文。

喷嘴堵塞

如果细胞悬液不易喷出或根本无法喷出,则可能是因为安装在注射器上的喷嘴堵塞。使用提供的备用喷嘴。

治疗区覆盖不足

如果在施用过程中细胞悬液损失,不足以覆盖全部治疗区,则可再采集皮片,使用新的自体皮肤组织制备细胞悬液技术及装置装置制备更多的细胞悬液并完成治疗。

在本发明的描述中，需要理解的是，指示的方位或位置关系为基于实施例所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法，

S1：使包含真皮层和表皮层的供体皮肤组织样品经受解离装置，所述解离装置包含在皮肤组织样品中的真皮-表皮连接处解离真皮层和表皮层的酶，其中供体皮肤组织样品提供1:10至1:80的膨胀率在治疗中；

S2：从步骤S1中使用的解离装置中取出供体皮肤组织样品，并将供体皮肤组织样品浸入营养液储器中，其中营养液对患者不含血清异种，在施用于患者之前能够维持细胞的存活力和适于直接施用于患者的受体区域；

S3：从营养液储器中面向真皮-表皮结合部的真皮表面和面向真皮-表皮结合部的表皮表面收获细胞，并通过与营养液混合来悬浮所收获的细胞，从而在营养液储器中产生真皮和表皮细胞的混合悬浮液；

S4：过滤来自步骤S3的真皮和表皮细胞的混合混悬液以除去大于200μm的细胞团，从而在直接施用于患者的营养液中产生混合细胞混悬液。

2.根据权利要求1所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法，其特征在于：所述酶是胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA。

3.根据权利要求1所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法，其特征在于：所述酶选自分散酶、胶原酶、热裂解酶、链霉蛋白酶、透明质酸酶、胰酶、弹性蛋白酶和木瓜蛋白酶。

4.根据权利要求1所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法，其特征在于：所述步骤S3中收获的细胞适于移植到患者上，并且包括角质细胞基底细胞、朗格汉斯细胞、黑素细胞和成纤维细胞。

5.根据权利要求1所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，其特征在于：所述皮肤组织样品经受解离装置约5分钟至约60分钟，所述皮肤组织样品的尺寸高达2cm×2cm。

6.根据权利要求1所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，其特征在于：所述营养液是哈特曼溶液和生理盐水的一种。

7.根据权利要求1所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的方法和装置，其特征在于：所述受体区域接受细胞移植和皮肤移植。

8.一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的装置，其特征在于，包括：

一台处理机（带内置加热机制）；

一个可拆卸无菌托盘；

一个可拆卸细胞滤网；

一个瓶密封瓶装特制酶；

一瓶10毫升瓶装无菌水；

一瓶10毫升瓶装缓冲液；

一支锋针；

两支钝头吸取针；

三支5毫升注射器；

两支10毫升注射器；

一把一次性手术刀；

两支喷嘴。

9.根据权利要求7所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的装置，其特征在于：所述处理机中的加热机制的加热温度为30-37℃，优选加热温度为33和37℃之间。

10.根据权利要求7所述的一种皮肤组织采集、提取并制备细胞悬液的装置，其特征在于：所述处理机、可拆卸无菌托盘、可拆卸细胞滤网、锋针、钝头吸取针、注射器、一次性手术刀和喷嘴均通过使用γ射线辐射或环氧乙烷消毒。