JP6021218B2 - コラーゲン誘導体の製造方法 - Google Patents
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Description
(1)魚介類のコラーゲン含有組織から得られた粗コラーゲンをアシル化処理した後、哺乳動物由来を除く中性またはアルカリ性プロテアーゼを用いて、可溶化したコラーゲン誘導体を得ることを特徴とするコラーゲン誘導体の製造方法。
(2)前記コラーゲン含有組織が、魚皮または魚鱗である上記(1)記載のコラーゲン誘導体の製造方法。
(3)前記プロテアーゼが、パパインまたはブロメラインである上記(1)又は(2)記載のコラーゲン誘導体の製造方法。
(4)前記アシル化が、サクシニル化またはマレイン化である上記(1)〜(3)のいずれか1項記載のコラーゲン誘導体の製造方法。
(5)上記(1)〜(4)のいずれか1項記載の製造方法によって製造されたコラーゲン誘導体。
ここで、コラーゲン誘導体とは、3重らせん構造を維持したアシル化コラーゲンを指すが、一部にアシル化されていないコラーゲンを含んだものであっても構わない。
また、魚皮から粗コラーゲンを得る方法についても公知の方法を用いることができ、例えば、特開2004-149455号公報には、魚皮から不純タンパク質、血液、色素、脂質等のコラーゲン以外の成分を塩溶液や塩基性溶液を用いて除去することが記載されている。また、必要に応じて、エタノール等による脱脂処理等を行ってもよい。
このとき、可溶化しアシル化したコラーゲンとしては、コラーゲン分子末端のテロペプタイドが除去されたコラーゲン、即ちアテロ化コラーゲンであっても、アテロ化していないものであっても、それらが混合されたものであっても良い。プロテアーゼを用いた可溶化には公知の方法を適用することができ、例えば、アシル化処理後の溶液にプロテアーゼを添加し、一定時間反応させればよい。プロテアーゼの種類により、プロテアーゼ添加時に塩酸水溶液または水酸化ナトリウム水溶液を用いてプロテアーゼの至適pHに調整することが好ましい。
・パパイン:ナガセケムテックス社製 「食品用精製パパイン」
・ブロメライン:天野エンザイム社製 「ブロメラインF」
・ペプシン:日本バイオコン社製 「Pepsibio 1:10,000」(豚由来)
テラピアの脱灰うろこ400g(含水率17.5%)を0.1MのNaOH水溶液で2時間洗浄し、表面の夾雑物を除去した。これをザルにあげ、水洗した後、粉砕処理した。粉砕物の総重量が6.4kgとなるように水を添加し、粗コラーゲン分散液を得た。この粗コラーゲン分散液を下記の実施例及び比較例に供した。
粗コラーゲン分散液800gに無水コハク酸20gを添加し、1MのNaOH水溶液でpHを9〜10に調整しながら3時間反応させた。次いで、塩酸水溶液にてパパインの至適pHであるpH6.0に調整した。次に、パパイン32gを添加し、48時間穏やかに撹拌してコラーゲン誘導体含有液を得た。プロテアーゼ添加1日後と2日後のコラーゲン誘導体含有液中のコラーゲン誘導体濃度を下記の方法で測定した。
コラーゲン誘導体含有液を9400Gで45分間遠心分離して残渣を除去した。次に、pH4.0〜4.5となるようにHCl溶液を添加し、コラーゲン誘導体を等電点沈殿させた。これを9400Gで30分間遠心分離し、沈殿物を回収した。沈殿物をpH7のりん酸緩衝液に溶解し、ケルダール法により窒素成分量を測定した。コラーゲン誘導体濃度は、医薬部外品原料規格2006に掲載されている水溶性コラーゲン液(3)の確認試験(2)に記載のコラーゲン量の算出法に則り、窒素成分量に換算係数5.6を乗じて算出した。
粗コラーゲン分散液800gに無水コハク酸20gを添加し、1MのNaOH水溶液でpHを9〜10に調整しながら3時間反応させた。次に、ブロメライン32gを添加し、48時間穏やかに撹拌してコラーゲン誘導体含有液を得、これについてコラーゲン誘導体濃度を測定した。尚、ブロメライン添加時のpHを測定したところ9.4であった。
粗コラーゲン分散液中のコラーゲンが析出しないpH領域内において、粗コラーゲン分散液のpHをパパインの活性が高い中性領域に近い範囲に調整した後、パパインを添加して、アテロ化コラーゲン含有液を得た。
即ち、粗コラーゲン分散液800gを水酸化ナトリウム水溶液でpH4.1に調整し、コラーゲンの析出が見られないことを確認した後、パパイン32gを添加し、48時間穏やかに撹拌してアテロ化コラーゲン含有液を得た。プロテアーゼ添加1日後と2日後の上記液中のコラーゲン濃度を下記の方法で測定した。
アテロ化コラーゲン含有液を9400Gで45分間遠心分離して残渣を除去した。次に、溶液中の塩化ナトリウム濃度が5.77%になるように塩化ナトリウムを添加してコラーゲンを線維化させた。これを9400Gで30分間遠心分離し、線維化した沈殿物を回収した。沈殿物をpH2の塩酸水溶液に溶解し、ケルダール法により窒素成分量を測定した。コラーゲン濃度は、医薬部外品原料規格2006に掲載されている水溶性コラーゲン液(3)の確認試験(2)に記載のコラーゲン量の算出法に則り、窒素成分量に換算係数5.6を乗じて算出した。
Claims (4)
- 魚介類のコラーゲン含有組織から得られた粗コラーゲンをアシル化処理した後、哺乳動物由来を除く中性またはアルカリ性プロテアーゼを用いて、可溶化したコラーゲン誘導体を得ることを特徴とするコラーゲン誘導体の製造方法。
- 前記コラーゲン含有組織が、魚皮または魚鱗である請求項1記載のコラーゲン誘導体の製造方法。
- 前記プロテアーゼが、パパインまたはブロメラインである請求項1又は2記載のコラーゲン誘導体の製造方法。
- 前記アシル化が、サクシニル化またはマレイン化である請求項1〜3のいずれか1項記載のコラーゲン誘導体の製造方法。
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