JP6018237B2 - マイクロ流路を備えるチップの製造方法及びそれにより製造されるチップ - Google Patents
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Description
に関する。
特許文献2には、マイクロ構造以外の接合面をマスキングしたうえで高分子膜を形成し、その後マスキングを外して接合する方法(方法3)が記載されている。
特許文献3には、予めマイクロ流路を形成した後に、カチオン性官能基を固定化する方法(方法4)が記載されている。
特許文献4には、架橋剤を介した共有結合により樹脂同士を接合し、マイクロ流路表面に架橋剤のカチオン性官能基を露出させる方法(方法5)が記載されている。
特許文献1に記載の方法1では、形成されたマイクロ流路の内壁は正電荷を持たない。
特許文献1に記載の方法2では、樹脂が耐えうる温度範囲ではシラノールの脱水縮合反応を短時間で完了することができず、マイクロ流路内壁の電荷状態を安定的に維持することが困難である。
特許文献2に記載の方法3では、精密なマスキングを別途実施する必要があり、かつ接合前にマスキングを除去する操作が必要であるため、製造方法が煩雑になる。
特許文献3に記載の方法4では、予め形成されたマイクロ流路に、コーティング液の通液及び乾燥を繰り返し行う必要があり操作が煩雑である。
特許文献4に記載の方法5で作製したマイクロ流路チップでは、ヘモグロビンの分析精度が十分でない。
本開示は、一又は複数の実施形態において、マイクロ流路を備えるチップの製造方法に関する。
本開示の製造方法は、一又は複数の実施形態において、一対の樹脂基板のそれぞれの少なくとも一方の表面に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマーを固定化すること、及び前記カチオン性ポリマーを固定化した面を接合面として前記樹脂基板を接合することを含む。
本開示の製造方法は、一又は複数の実施形態において、一対の樹脂基板のそれぞれの少なくとも一方の表面に、気相又は液相表面処理を行うこと、前記処理面に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマー溶液を接触させること、及び前記接触させた面を接合面として前記樹脂基板を接合することを含む。
本開示は、一又は複数の実施形態において、マイクロ流路を備えるチップに関する。本開示のマイクロ流路チップは、一又は複数の実施形態において、本開示の製造方法により製造されるチップである。本開示のチップによれば、一又は複数の実施形態において、ヘモグロビンの各分画を短時間で精度よく分離できるとの効果を奏しうる。本開示のチップによれば、一又は複数の実施形態において、分析の再現性に優れるとの効果を奏しうる。
本開示は、一又は複数の実施形態において、検体分析用のキットであって、本開示のチップと、分析用の溶液を備えたカートリッジとを含むキットに関する。分析用の溶液としては、一又は複数の実施形態として、泳動液、及び試料調製用液等が挙げられる。
本開示は、一又は複数の実施形態において、ヘモグロビンの分析方法であって、本開示のチップを用いて試料中の分析対象を測定することを含む分析方法に関する。本開示の分析方法によれば、一又は複数の実施形態において、試料中の分析対象の測定精度を向上でき、好ましくは分析対象の分離精度の向上及び又は測定時間の短縮が可能となるという効果を奏しうる。
〔1〕 マイクロ流路を備えるチップの製造方法であって、
一対の樹脂基板のそれぞれの少なくとも一方の表面に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマーを固定化すること、及び
前記カチオン性ポリマーを固定化した面を接合面として前記樹脂基板を接合することを含む、チップの製造方法。
〔2〕 マイクロ流路を備えるチップの製造方法であって、
一対の樹脂基板のそれぞれの少なくとも一方の表面に、気相又は液相表面処理を行うこと、
前記処理面に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマー溶液を接触させること、及び
前記接触させた面を接合面として樹脂基板を接合することを含む、チップの製造方法。
〔3〕 前記樹脂基板のそれぞれの少なくとも一方の表面に、アニオン性官能基を導入すること、及び
前記アニオン性官能基を導入した面に、前記カチオン性ポリマーの固定化を行うこと、を含む、〔1〕記載の製造方法。
〔4〕 前記アニオン性官能基の導入は、気相又は液相表面処理により行う、〔3〕記載の製造方法。
〔5〕 前記気相表面処理は、真空紫外線処理、プラズマ処理、コロナ放電処理、フレーム処理、及びオゾン処理からなる群から選択される、〔2〕又は〔4〕記載の製造方法。
〔6〕 前記第4級オニウム基は、第4級アンモニウム基及び第4級ホスホニウム基からなる群から選択される、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の製造方法。
〔7〕 前記カチオン性ポリマーは、ポリクオタニウム、ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、〔1〕から〔6〕のいずれかに記載の製造方法。
〔8〕 前記カチオン性ポリマーは、ポリジアリルジメチルアンモニウム塩、ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー及びこれらの組み合わせからなる群から選択される1つを含む、〔1〕から〔7〕のいずれかに記載の製造方法。
〔9〕 前記カチオン性ポリマーは、ポリジアリルジメチルアンモニウム塩、ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー及びこれらの組み合わせである、〔1〕から〔7〕のいずれかに記載の製造方法。
〔10〕 前記カチオン性ポリマーは、塩化物及び/又は硫化物である、〔1〕から〔9〕のいずれかに記載の製造方法。
〔11〕 前記樹脂基板の接合により、マイクロ流路が形成される、〔1〕から〔10〕のいずれかに記載の製造方法。
〔12〕 〔1〕から〔11〕のいずれかに記載の製造方法により製造される、マイクロ流路を備えるチップ。
〔13〕 前記流路の内壁に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマーが固定化されている、〔12〕記載のチップ。
〔14〕 樹脂基板の接合によりマイクロ流路が形成されたチップであって、
前記マイクロ流路の内壁に第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマーが固定化されている、チップ。
〔15〕 前記カチオン性ポリマーは、ポリクオタニウム、ジメチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、〔13〕又は〔14〕に記載のチップ。
〔16〕 前記チップは、検体分析用である、〔12〕から〔15〕のいずれかに記載のチップ。
〔17〕 検体分析用のキットであって、
〔12〕から〔16〕のいずれかに記載のチップと、
分析用の溶液を備えたカートリッジとを含む、キット。
〔18〕 ヘモグロビンの分析方法であって、
〔12〕から〔16〕のいずれかに記載のチップを用いて試料中の分析対象を測定することを含む、分析方法。
〔19〕 検体を希釈して試料を調製すること、
泳動液を前記チップのマイクロ流路の一端に導入して、前記泳動液でマイクロ流路を充填すること、
前記チップのマイクロ流路の一端に、前記試料を導入すること、及び
前記マイクロ流路の両端に電圧を印加すること、を含む、〔18〕記載の分析方法。
〔20〕 泳動液を前記チップのマイクロ流路に充填すること、
前記チップのマイクロ流路に、試料を導入すること、及び
前記マイクロ流路の全体又は一部に電圧を印加することを含む、〔18〕記載の分析方法。
[チップの作製]
図1に示すような部品を使用し、チップを作製した。
<樹脂部品の準備>
材料としてPMMA(ポリメタクリル酸メチル)を使用し、成形によって樹脂部品A(図1a)と、樹脂部品B(図1b)との二つの樹脂部品を準備した。流路10は0.04mm×0.04mm×30mmとし、試料保持槽11及び泳動液保持槽12の容量は10μLとした。また、検出部13は、その中心が試料保持槽11及び泳動液保持槽12からそれぞれ20mm及び10mmの位置となるようにした。
<カチオン性ポリマーの固定化>
樹脂部品A及びBの接合面に、エキシマランプによって大気圧下で紫外線を照射し、アニオン性官能基を導入した。その後、樹脂部品A及びBを下記処理液1に24時間室温にて浸漬した。
(処理液1)
ポリジアリルジメチルアンモニウムクロライド(PDADMAC,ポリクオタニウム−6,シグマアルドリッチ社製、分子量100000以下)1%w/v,水酸化ナトリウム 100mM,水溶液
浸漬後、水にて十分に洗浄し、圧縮空気を噴射して樹脂部品A及びBを風乾した。この一連の工程により、カチオン性ポリマーが、樹脂部品の接合面上のアニオン性官能基と結合し、接合面に固定化される。
<マイクロ流路チップの形成>
接合面にカチオン性ポリマーが固定化された樹脂部品A及びBを、接合面同士を接触させて加熱圧着(温度80℃、圧力16kgf/cm2(1.57MPa)、1分間)し、図1cに示すマイクロ流路チップを得た。これにより、樹脂部品A及びBが接合され、かつ、流路内壁にカチオン性ポリマーが固定化されたチップが得られた。得られたチップは、マイクロ流路にほとんど変形が見られなかった。
得られたチップについて、樹脂部品Aと樹脂部品Bとの接合を評価した。評価は、接合強度と、接合面からの液体の漏れの有無とで行った。接合強度は、得られたチップを接合面で強制的に剥離し、接合面に残る剥離痕の深さを測定することにより確認した。液体の漏れの有無は、色素溶液をキャピラリーに通液し、顕微鏡にて観察することにより行った。その結果、得られたチップは、接合深さが2μm以上であり、十分な接合強度を有し、また接合面からの液体の漏れは見られなかった。つまり、樹脂部品Aと樹脂部品Bとは十分に接合されていることが確認できた。
得られたチップを用いて、キャピラリー電気泳動によるヘモグロビンの分析を行った。電気泳動溶液は、蒸留水に下記物質を下記濃度となるように添加することにより調製した。
(電気泳動溶液1)
40mM クエン酸
1%w/vコンドロイチン硫酸Cナトリウム
500mM NDSB−201(品名、3−(1−Pyridinio)−1−propanesulfonate、Anatrave Products LLC製)
0.1%w/v エマルゲンLS−110(製品名、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、花王製)
0.1% アジ化ナトリウム
ジメチルアミノエタノール(pH調製用)
pH6.0
(電気泳動溶液2)
40mM クエン酸
1.25%w/v コンドロイチン硫酸Cナトリウム
0.1%w/v エマルゲンLS−110
0.1% アジ化ナトリウム
ジメチルアミノエタノール(pH調製用)
pH5.0
1.マイクロ流路チップを、アークレイ製の電気泳動装置にセットした。
2.電気泳動溶液2をマイクロ流路チップの泳動液保持槽に9μL添加し、毛細管現象によりマイクロ流路を電気泳動溶液2で満たした。
3.ヒト全血を電気泳動溶液1で41倍に希釈し、試料とした。
4.上記試料を、マイクロ流路チップの試料保持槽に9μL添加した。
5.試料保持槽に陽電極、泳動液保持槽に負電極を接触させ、1600Vの電圧を印加して電気泳動を開始した。
6.検出部にて415nmの吸光度を測定し、エレクトロフェログラムを得た。電気泳動は60秒間行った。
樹脂部品A及びBの材料としてポリスチレンを使用し、かつ加熱圧着の温度を90℃に変更したこと以外は、実施例1と同様にしてマイクロ流路チップを得た。得られたチップを用い、実施例1と同様に接合面の評価、及びヘモグロビンの分析を行った。得られたチップは、十分な接合強度を有しており、接合面の液体の漏れは見られなかった。また、得られたチップは、マイクロ流路にほとんど変形が見られなかった。
樹脂部品A及びBの材料としてシクロオレフィンを使用し、かつ加熱圧着の温度を90℃に変更したこと以外は、実施例1と同様にしてマイクロ流路チップを得た。得られたチップを用い、実施例1と同様に接合面の評価、及びヘモグロビンの分析を行った。得られたチップは、十分な接合強度を有しており、接合面の液体の漏れは見られなかった。また、得られたチップは、マイクロ流路にほとんど変形が見られなかった。
処理液1を、下記の処理液2に変更したこと以外は、実施例1と同様にしてマイクロ流路チップを得た。
(処理液2)
ポリ[ビス(2-クロロエチル)エーテル-alt-1,3-ビス[3-(ジメチルアミノ)プロピル]尿素]、四級化体(ポリクオタニウム−2、CAS No.68555-36-2、シグマアルドリッチ社製)1%w/v,水酸化ナトリウム 100mM,水溶液
得られたチップを用い、実施例1と同様に接合面の評価、及びヘモグロビンの分析を行った。得られたチップは、十分な接合強度を有しており、接合面の液体の漏れは見られなかった。また、得られたチップは、マイクロ流路にほとんど変形が見られなかった。
処理液1を、下記の処理液3に変更したこと以外は、実施例1と同様にしてマイクロ流路チップを得た。
(処理液3)
ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー(商品名:ユニセンスKHE105L、センカ社製)1%w/v,水酸化ナトリウム 100mM,水溶液
得られたチップを用い、実施例1と同様に接合面の評価、及びヘモグロビンの分析を行った。得られたチップは、十分な接合強度を有しており、接合面の液体の漏れは見られなかった。また、得られたチップは、マイクロ流路にほとんど変形が見られなかった。
処理液1を、下記の処理液4に変更したこと以外は、実施例1と同様にしてマイクロ流路チップを得た。
(処理液4)
ポリエチレンイミン(PEI、和光純薬工業社製)1%w/v,水溶液
得られたチップを用い、実施例1と同様に接合面の評価、及びヘモグロビンの分析を行った。得られたチップは、十分な接合強度を有しており、接合面の液体の漏れは見られなかった。得られた分析結果を図7に示す。図7に示すように、ヘモグロビンの各分画は30秒以内に検出されるものの、各ピークが不明確であり、ヘモグロビンの各分画の分離が不十分であった。
処理液1を、下記の処理液5に変更したこと以外は、実施例1と同様にしてマイクロ流路チップを得た。
(処理液5)
ポリアリルアミン塩酸塩(PAA,ニットーボーメディカル社製)1%w/v,水酸化ナトリウム 100mM,水溶液
得られたチップを用い、実施例1と同様に接合面の評価、及びヘモグロビンの分析を行った。得られたチップは、十分な接合強度を有しており、接合面の液体の漏れは見られなかった。得られた分析結果を図8に示す。図8に示すように、ヘモグロビンの各分画は30秒以内に検出されるものの、安定型HbA1c分画(図8の△)及びHbA0分画(図8の×)の検出後に吸光度が低下する異常が見られた。
実施例1で準備した樹脂部品A及びBに、以下に示すように、紫外線照射によるアニオン性官能基の導入及びアミノシランの塗布を行い、マイクロ流路チップを得た。
<アミノシランの塗布>
樹脂部品A及びBの接合面に対し、エキシマランプによって大気圧下で紫外線を照射し、アニオン性官能基を導入した。その後、樹脂部品A及びBを下記処理液6に3時間30℃にて浸漬した。
(処理液6)
アミノプロピルトリメトキシシラン(KBM−903, 信越化学社製)5%w/v,水溶液
浸漬の後、水にて十分に洗浄し、圧縮空気を噴射して樹脂部品A及びBを風乾した。
<マイクロ流路チップの形成>
接合面にアミノシランが塗布された樹脂部品A及びBを、接合面同士を接触させて加熱圧着し、図1cに示すマイクロ流路チップを得た。加熱圧着は、温度70℃、圧力18.7kgf/cm2(1.83MPa)で5分間行った。
この一連の工程により、アミノシランと樹脂部品が共有結合し、かつアミノシラン同士が共有結合することで、樹脂部品が接合され、キャピラリー内壁にアミノシラン層が形成される。
実施例1、4及び5並びに比較例1及び2で得られたマイクロ流路チップを用いて、日差再現性試験を実施した。再現性試験は、各チップを乾燥剤と共に密封し、50℃条件下にて5日間保存し、保存前、保存2日後及び5日後に、各チップ2回ずつ測定することにより行った。測定は、実施例1のヘモグロビンの分析と同様に行い、下記式にて安定型HbA1c値を算出した。その結果を下表1に示す。
HbA1c(%)=(HbA1c分画の吸光度/総ヘモグロビンの吸光度)X100
Claims (18)
- マイクロ流路を備えるチップの製造方法であって、
接合する一対の樹脂基板の接合面の両方の表面に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマーを固定化すること、及び
前記カチオン性ポリマーを固定化した面を接合面として前記樹脂基板を接合することを含む、チップの製造方法。 - マイクロ流路を備えるチップの製造方法であって、
接合する一対の樹脂基板の接合面の両方の表面に、気相又は液相表面処理を行うこと、
前記処理面に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマー溶液を接触させること、及び
前記接触させた面を接合面として前記樹脂基板を接合することを含む、チップの製造方法。 - 前記樹脂基板の接合面の両方の表面に、アニオン性官能基を導入すること、及び
前記アニオン性官能基を導入した面に、前記カチオン性ポリマーの固定化を行うこと、を含む、請求項1記載の製造方法。 - 前記アニオン性官能基の導入は、気相又は液相表面処理により行う、請求項3記載の製造方法。
- 前記気相表面処理は、真空紫外線処理、プラズマ処理、コロナ放電処理、フレーム処理、及びオゾン処理からなる群から選択される、請求項2又は4に記載の製造方法。
- 前記第4級オニウム基は、第4級アンモニウム基及び第4級ホスホニウム基からなる群から選択される、請求項1から5のいずれかに記載の製造方法。
- 前記カチオン性ポリマーは、ポリクオタニウム、ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項1から6のいずれかに記載の製造方法。
- 前記カチオン性ポリマーは、ポリジアリルジメチルアンモニウム塩、ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー及びこれらの組み合わせからなる群から選択される1つを含む、請求項1から7のいずれかに記載の製造方法。
- 前記カチオン性ポリマーは、ポリジアリルジメチルアンモニウム塩、ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー又はこれらの組み合わせである、請求項1から7のいずれかに記載の製造方法。
- 前記カチオン性ポリマーは、塩化物及び/又は硫化物である、請求項1から9のいずれかに記載の製造方法。
- 前記樹脂基板の接合により、マイクロ流路が形成される、請求項1から10のいずれかに記載の製造方法。
- 2枚の樹脂基板が接合してなるチップであって、
前記樹脂基板の少なくとも一方の接合面の凹部によって構成されるマイクロ流路を有し、
前記2枚の樹脂基板は、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマーを介して接合している、チップ。 - 前記流路の内壁に、第4級オニウム基を有するカチオン性ポリマーが固定化されている、請求項12記載のチップ。
- 前記カチオン性ポリマーは、ポリクオタニウム、ジメチルアミン−エピクロロヒドリンコポリマー及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項13記載のチップ。
- 前記チップは、検体分析用である、請求項12から14のいずれかに記載のチップ。
- 検体分析用のキットであって、
請求項12から15のいずれかに記載のチップと、
分析用の溶液を備えたカートリッジとを含む、キット。 - ヘモグロビンの分析方法であって、
請求項12から15のいずれかに記載のチップを用いて試料中の分析対象を測定することを含む、分析方法。 - 泳動液を前記チップのマイクロ流路に充填すること、
前記チップのマイクロ流路に、試料を導入すること、及び
前記マイクロ流路の全体又は一部に電圧を印加することを含む、請求項17記載の分析方法。
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