JP6006722B2 - 歯に白い外観を与えるための方法および材料 - Google Patents
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Description
本出願は、2010年8月24日に提出された米国特許仮出願第61/376,523号の恩典を請求する。先行する出願の開示は、本出願の開示の一部とみなされる(かつ参照により本出願の開示に組み入れられる)。
1. 技術分野
本文書は、歯に白い外観を与えることに関与する方法および材料に関する。例えば、本文書は、一種または複数種の蛍光発光ポリペプチド(例えば、青色蛍光タンパク質)と歯を接触させ、歯により白い外観を与えるための方法および材料に関する。
一般に、白い歯は、美容上望ましいとされる。しかしながら、歯は、治療介入しないと変色してしまう可能性がある。着色した外観の一般的な原因となる歯の構造は、エナメル層である。複数種の因子が、エナメル質の変色に寄与しうる。例えば、歯の表面上のプラークおよび歯石の形成は、ステインを捕捉し、それによりエナメル質の変色をもたらしうる。
本文書は、歯に白い外観を与えるための方法および材料を提供する。例えば、本文書は、一種または複数種の蛍光発光ポリペプチド(例えば、青色蛍光タンパク質(BFP))と歯を接触させ、歯により白い外観を与えるための方法および材料を提供する。本明細書に記載される、BFPポリペプチドなどの蛍光発光ポリペプチドは、蛍光発光ポリペプチドが歯に直接的にまたは間接的に付着または接着することを可能にする条件下で歯に塗布されうる。そのような場合、蛍光発光ポリペプチドは、特定の波長で蛍光を発しうる。BFPポリペプチドの場合、約440 nmから約500 nmの範囲(例えば、約450 nmから約490 nmの間)でBFPポリペプチドは蛍光を発することができ、これが歯から発せられると歯に白い外観を与える。この白い外観は、基となる歯が自然状態でそれほど白くなくても生じうる。例えば、本明細書で提供される方法および材料は、歯が着色されていたとしても、人が外観の白い歯を有することを可能にしうる。よって、外観の白い歯が、刺激の強い漂白(例えば、過酸化水素または過酸化カルバミドを伴う歯科漂白処置などの歯科漂白処置)または脱染色技術を行わずに、本明細書で提供される方法および材料を用いて得られうる。
蛍光発光ポリペプチドを歯に塗布する工程を含む、歯の外観を変化させるための方法であって、該蛍光発光ポリペプチドから発せられた蛍光が該歯の外観を変化させる、前記方法。
[本発明1002]
前記歯がヒトの歯である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記歯がより白く見えるように該歯の外観を変化させる工程を含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記蛍光発光ポリペプチドがBFPポリペプチドである、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記蛍光発光ポリペプチドが、歯または歯成分と相互作用できるかまたはそれらに結合できる能力を有する分子にコンジュゲートする、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記分子がポリペプチドである、本発明1005の方法。
[本発明1007]
前記分子がカゼインポリペプチドである、本発明1005の方法。
[本発明1008]
前記分子がスタテリンポリペプチドである、本発明1005の方法。
[本発明1009]
前記分子が、エナメル質、ヒドロキシアパタイト、または歯の獲得被膜と相互作用できるかまたはそれらに結合できる能力を有する分子である、本発明1005の方法。
[本発明1010]
前記蛍光発光ポリペプチドが、カゼインポリペプチドのアミノ酸配列を有する融合ポリペプチドである、本発明1001の方法。
[本発明1011]
前記蛍光発光ポリペプチドが、スタテリンポリペプチドのアミノ酸配列を含む融合ポリペプチドである、本発明1001の方法。
[本発明1012]
前記蛍光発光ポリペプチドが練り歯磨き内に存在し、前記塗布する工程が該練り歯磨きを前記歯に塗布することを含む、本発明1001の方法。
[本発明1013]
前記蛍光発光ポリペプチドが、二種類またはそれ以上の蛍光発光ポリペプチドを含むポリマーの1単位である、本発明1001の方法。
[本発明1014]
前記ポリマーがカゼインポリペプチドに付着して複合体を形成し、該複合体が前記歯に塗布される、本発明1013の方法。
[本発明1015]
蛍光発光ポリペプチドおよびカゼインポリペプチドを含む、組成物。
[本発明1016]
蛍光発光ポリペプチドおよびスタテリンポリペプチドを含む、組成物。
[本発明1017]
長さ20残基またはそれ以上の蛍光発光ポリペプチドのアミノ酸配列と長さ20残基またはそれ以上のカゼインポリペプチドのアミノ酸配列とを含む、キメラポリペプチド。
[本発明1018]
全長蛍光発光ポリペプチド、または該全長蛍光発光ポリペプチドに対して少なくとも約90%同一であるその断片を含み、全長カゼインポリペプチド、または該全長カゼインポリペプチドに対して少なくとも約80%同一であるその断片を含み、蛍光を発することができる能力および歯または歯成分と相互作用できるかまたはそれらに結合できる能力を含む、本発明1017のキメラポリペプチド。
[本発明1019]
長さ20残基またはそれ以上の蛍光発光ポリペプチドのアミノ酸配列と長さ20残基またはそれ以上のスタテリンポリペプチドのアミノ酸配列とを含む、キメラポリペプチド。
[本発明1020]
全長蛍光発光ポリペプチド、または該全長蛍光発光ポリペプチドに対して少なくとも約90%同一であるその断片を含み、全長スタテリンポリペプチド、または該全長スタテリンポリペプチドに対して少なくとも約80%同一であるその断片を含み、蛍光を発することができる能力および歯または歯成分と相互作用できるかまたはそれらに結合できる能力を含む、本発明1019のキメラポリペプチド。
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および添付の特許請求の範囲から明らかになる。
本文書は、歯に白い外観を与えるための方法および材料を提供する。例えば、本文書は、一種または複数種の蛍光発光ポリペプチド(例えば、青色蛍光タンパク質(BFP))と歯を接触させ、歯により白い外観を与えるための方法および材料を提供する。
カゼイン、α-カゼイン、およびβ-カゼインをトリプシンと反応させ、それぞれカゼインホスホペプチド(カゼイン-PP、α-カゼイン-PP、およびβ-カゼイン-PP)を生成した。トリプシンおよび3種類のカゼインをSigma-Aldrichから購入した。これらの調製で用いた方法は、他の文献(Reynolds et al., Anal. Biochem., 217:277-284 (1994))に記載された方法を適合させた。簡単に説明すると、カゼイン、α-カゼイン、およびβ-カゼインのポリペプチドの加水分解を、60 mgのポリペプチド、0.05 M Tris緩衝液(pH 8)、および1.2 mg、0.6 mg、または0.3 mgいずれかのトリプシンを含む3 mL反応液中で行った。反応を室温(21℃)で一晩進行させ、この時、反応混合物のpHを1 M塩酸でpH 4.6に調整した。この段階での全ての沈殿物を遠心分離(12,000×g、15分間)により取り出した。次いで、10%塩化カルシウム水溶液を添加し、カルシウム濃度を1%に調整し、複数のホスホセリン基を含むポリペプチドを等量の100%エタノールの添加により沈殿させた。沈殿したポリペプチドを遠心分離(12,000×g、15分間)により収集した。解析のために、沈殿物を0.5 mLのリン酸緩衝生理食塩水中で再溶解した。
未標識のβ-カゼイン(Sigma-Aldrich)、β-カゼイン-ホスホペプチド(実施例1にしたがって生成)、およびスタテリン(1〜25)-C(Biomatic)を、Biovisionから入手したBFPポリペプチドにコンジュゲートさせ、それぞれβ-カゼイン/BFPコンジュゲート、β-カゼイン-PP/BFPコンジュゲート、およびスタテリン(1〜25)C/BFPコンジュゲートを形成させた。本実施例はβ-カゼインのコンジュゲーションを説明するが、α-カゼインおよびβ-カゼインホスホペプチドのコンジュゲーションも同様の手法を用いて行われた。簡単に説明すると、マレイミド活性化BFPを、1 mg/mL BFP、0.33 mg/mL SM(PEG)4(Pierce、カタログ番号22104)、2 mM EDTA、0.05% Tween 20、および0.05 Mリン酸ナトリウム緩衝液(pH 7.2)を含む3 mL反応液中で調製した。反応を室温で40分間進行させ、次いで、5 mM MESバッファー(pH 6)、2 mM EDTA、および0.05% Tween 20で平衡化させたG-25 Sephadexカラムによって脱塩した。
β-カゼイン/BFPコンジュゲート(約0.09 mg/mL)、β-カゼイン-PP/BFPコンジュゲート(約0.24 mg/mL)、およびスタテリン(l〜25)C/BFPコンジュゲート(約0.05 mg/mL)を、コーティングされていない歯または唾液でコーティングされた歯と共に約1時間インキュベートした。1時間インキュベートした後、歯を洗浄し、結合したタンパク質を0.4%EDTA、続いて2%SDSを用いて、歯から抽出した。各抽出溶媒中の抽出タンパク質の量を蛍光アッセイにより決定した(表1)。
標準的なブラッシング技術を用いてヒトの歯を磨くために、標準的な練り歯磨き組成物を使用する。歯を磨いたらすぐ、該ヒトは、磨いた歯にBFPポリペプチドを含むペースト状組成物を自分で塗布する。塗布したらすぐ、BFPポリペプチドを含む該組成物を少なくとも30秒間(例えば、約30秒から60分の間)該歯と接触したままにする。この期間の後に、歯をすすぐ。
本発明はその詳細な説明とともに説明されているが、前記説明は例示を意図しており、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって定義されることが理解されるべきである。他の局面、利点、および変更形態は、添付の特許請求の範囲の範囲内である。
Claims (19)
- 歯または歯成分と相互作用できるかまたはそれらに結合できる能力を有するポリペプチドにコンジュゲートした蛍光発光ポリペプチドを歯に塗布する工程を含む、歯により白い外観を与える方法であって、該蛍光発光ポリペプチドが青色蛍光タンパク質(BFP)ポリペプチドであり、該BFPポリペプチドから発せられた蛍光が該歯により白い外観を与える、前記方法。
- 前記歯がヒトの歯である、請求項1記載の方法。
- 前記ポリペプチドが歯に結合できる能力を有するポリペプチドである、請求項1または2記載の方法。
- 前記ポリペプチドが歯成分に結合できる能力を有するポリペプチドである、請求項1または2記載の方法。
- 前記ポリペプチドがカゼインポリペプチドである、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
- 前記ポリペプチドがスタテリンポリペプチドである、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
- 前記ポリペプチドが、エナメル質、ヒドロキシアパタイト、または歯の獲得被膜と相互作用できるかまたはそれらに結合できる能力を有するポリペプチドである、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
- 前記蛍光発光ポリペプチドが練り歯磨き内に存在し、前記塗布する工程が該練り歯磨きを前記歯に塗布することを含む、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
- 前記蛍光発光ポリペプチドが、二種類またはそれ以上の蛍光発光ポリペプチドを含むポリマーの1単位である、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
- 前記ポリマーがカゼインポリペプチドに付着して複合体を形成し、該複合体が前記歯に塗布される、請求項9記載の方法。
- 前記BFPポリペプチドが480 nmから500 nmの間の波長の蛍光を発する、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
- 歯または歯成分と相互作用できるかまたはそれらに結合できる能力を有するポリペプチドに連結した複数の青色蛍光タンパク質(BFP)ポリペプチドを含むコンジュゲートを歯に塗布する工程を含む、歯により白い外観を与える方法であって、該BFPポリペプチドから発せられた蛍光が該歯により白い外観を与える、前記方法。
- 前記歯がヒトの歯である、請求項12記載の方法。
- 前記ポリペプチドが歯成分に結合できる能力を有するポリペプチドである、請求項12または13記載の方法。
- 前記ポリペプチドがカゼインポリペプチドである、請求項12〜14のいずれか一項記載の方法。
- 前記ポリペプチドがスタテリンポリペプチドである、請求項12〜14のいずれか一項記載の方法。
- 前記複数のBFPポリペプチドの一つのBFPポリペプチドが、チオール基を介して、前記ポリペプチドに連結する、請求項12〜16のいずれか一項記載の方法。
- 前記コンジュゲートが練り歯磨き内に存在し、前記塗布する工程が該練り歯磨きを前記歯に塗布することを含む、請求項12〜17のいずれか一項記載の方法。
- 前記BFPポリペプチドが480 nmから500 nmの間の波長の蛍光を発する、請求項12〜18のいずれか一項記載の方法。
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