JP5981625B2 - Ｈｓｆ１関連疾患を処置するための有機組成物 - Google Patents

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Description

本発明は、ＨＳＦ１関連疾患を処置するための有機組成物に関する。
ＨＳＦ１は、多数の遺伝子が温度上昇および他のストレスに応答して誘導される熱ショック応答のマスターレギュレーターである。ヒトおよび他の脊椎動物において非ショック温度で、ＨＳＦ１は、構成的に生産されるが、不活性であり、タンパク質ＨＳＰ９０により結合される。高温時に、ＨＳＦ１はＨＳＰ９０により放出され、細胞質から核へ移動し、三量体となる。この活性なＨＳＦ１は、ＤＮＡ中の熱ショックエレメント（ＨＳＥ）に結合し、ＲＮＡポリメラーゼＩＩにより熱ショック遺伝子の転写を活性化する。ＨＳＥは、ＮＧＡＡＮの３つの繰り返しのコンセンサス配列を有し、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ７０およびＨＳＰ２７遺伝子のプロモーター領域に存在する。熱ショック応答が停止されると、ＨＳＦ１は、マイトージェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）およびグリコーゲン合成酵素キナーゼ３（ＧＳＫ３）によりリン酸化され、不活性状態に戻る。ＨＳＦ１の生化学は、とりわけ、Chuら 1996 J. Biol. Chem. 271:30847-30857（非特許文献１）；Huangら 1997 J. Biol. Chem. 272:26009-26016（非特許文献２）；およびMorimotoら 1998 Nat. Biotech. 16: 833-838（非特許文献３）において記載されている。
ＨＳＦ１は、さらなる因子と相互作用する。ＨＳＦ１は、ＤＮＡ修復に関与するＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ−ＰＫ）に結合する。ＨＳＦ１は、マイトージェン活性化タンパク質キナーゼの標的であり、その活性は、ＲＡＳシグナル伝達カスケードが活性であるとき、下方調節される。
ヒトにおけるさらなる熱ショック因子タンパク質は、ＨＳＦ２、ＨＳＦ３およびＨＳＦ４を含む。ＨＳＦ１、ＨＳＦ２およびＨＳＦ３は、熱ショック遺伝子発現の正のレギュレーターであるが、ＨＳＦ４は、負のレギュレーターである。ＨＳＦ１、ＨＳＦ２およびＨＳＦ４は、他の熱ショックタンパク質の転写調節において役割を果たす。種々のＨＳＦタンパク質は、約４０％の配列同一性を共有する。
ＨＳＦ１は、癌およびウイルス疾患を含むいくつかのＨＳＦ１関連疾患に関与している。ＨＳＦ１および他の熱ショックタンパク質（これらの発現は、ＨＳＦ１により増加する）は、乳房、子宮内膜、線維肉腫、胃腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、神経外胚葉、神経芽腫、ユーイング肉腫、前立腺、皮膚、扁平上皮、および精巣癌、白血病（例えば、前骨髄球性白血病）、ならびにホジキン病において過剰発現しているか、または、さもなければ、関与している。
何らかの特定の理論に縛られることは望まないが、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）がアポトーシス経路を阻害し、形質転換中にアポトーシスシグナルが誘発されるにもかかわらず悪性細胞が生じることを可能にすると考えられている。ＨＳＰ発現は、また、アポトーシス促進性作用を阻止することにより、処置、例えば、化学療法および温熱療法からの癌細胞の保護を提供し得る。
Chuら 1996 J. Biol. Chem. 271:30847-30857 Huangら 1997 J. Biol. Chem. 272:26009-26016 Morimotoら 1998 Nat. Biotech. 16: 833-838
ＨＳＦ１はＨＳＰを正に調節するため、治療のためにＨＳＦ１を調整することが必要である。
本願明細書は、ＨＳＦ１関連疾患、例えば、癌およびウイルス疾患の処置において有用なＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、ＨＳＦ１（熱ショック因子１）遺伝子に対するＲＮＡｉ剤を提供する。ＨＳＦ１は、多数の遺伝子が、温度上昇および他のストレスに応答して誘導される熱ショック応答のマスターレギュレーターである。
ＨＳＦ１は、癌およびウイルス疾患を含むいくつかのＨＳＦ１関連疾患に関与している。ＨＳＦ１および他の熱ショックタンパク質（これらの発現は、ＨＳＦ１により増加する）は、乳房、子宮内膜、線維肉腫、胃腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、神経外胚葉、神経芽腫、ユーイング肉腫、前立腺、皮膚、扁平上皮、および精巣癌、白血病（例えば、前骨髄球性白血病）、ならびにホジキン病において過剰発現しているか、または、さもなければ、関与している。
ＨＳＦ１はＨＳＰを正に調節するため、治療のためにＨＳＦ１を調整することが必要である。本願明細書のＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ１に特異的であり、ＨＳＦ１の発現を減少させることができる。したがって、これらのＲＮＡｉ剤は、癌およびウイルス疾患を処置することにおいて有用である。
図１は、ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤の種々の５’−末端修飾を説明する。
本願明細書は、ＨＳＦ１関連疾患、例えば、癌およびウイルス疾患の処置において有用なＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書の種々の態様は、以下のものを含む。
本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤
１つの態様において、本願明細書は、アンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載の表（例えば、表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａ、表９Ｂなど）において提供される任意の配列から選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願明細書は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される任意の配列から選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願明細書は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該センス鎖は、センス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、そして該アンチセンス鎖は、直前に記載されているＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。
特定の二本鎖は、以下のとおり、それぞれの二本鎖は配列番号のセットを含み、第１の配列番号はセンス鎖に対応し、そして第２の配列番号はアンチセンス鎖に対応する。ＡＤ−２０４０３（配列番号：１３１および６４３；または配列番号：１１５５および１６６７）；ＡＤ−２０４３７（配列番号：１６６および６７８；または配列番号：１１９０および１７０２）；ＡＤ−２０４３８（配列番号：１６７および６７９；または配列番号：１１９１および１７０３）；ＡＤ−２０４３９（配列番号：１６８および６８０；または配列番号：１１９２および１７０４）；ＡＤ−２０４８７（配列番号：１６９および６８１；または配列番号：１１９３および１７０５）；ＡＤ−２０４８９（配列番号：１７１および６８３；または配列番号：１１９５および１７０７）；ＡＤ−２０４９０（配列番号：１７２および６８４；または配列番号：１１９６および１７０８）；ＡＤ−２０４９１（配列番号：１７３および６８５；または配列番号：１１９７および１７０９）；ＡＤ−２０５４８（配列番号：２３４および７４６；または配列番号：１２５８および１７７０）；ＡＤ−２０５６０（配列番号：２６９および７８１；または配列番号：１２９３および１８０５）；ＡＤ−２０５６２（配列番号：２７１および７８３；または配列番号：１２９５および１８０７）；ＡＤ−２０５６３（配列番号：２７２および７８４；または配列番号：１２９６および１８０８）；ＡＤ−２０５６４（配列番号：２７３および７８５；または配列番号：１２９７および１８０９）；ＡＤ−２０５７８（配列番号：２８５および７９７；または配列番号：１３０９および１８２１）；ＡＤ−２０６２６（配列番号：２９０および８０２；または配列番号：１３１４および１８２６）；ＡＤ−２０６２７（配列番号：２９１および８０３；または配列番号：１３１５および１８２７）；ＡＤ−２０６４４（配列番号：３０８および８２０；または配列番号：１３３２および１８４４）；ＡＤ−２０６４８（配列番号：３１２および８２４；または配列番号：１３３６および１８４８）；ＡＤ−２０６５２（配列番号：３１６および８２８；または配列番号：１３４０および１８５２）；ＡＤ−２０６６０（配列番号：３２４および８３６；または配列番号：１３４８および１８６０）；ＡＤ−２０６９４（配列番号：３７７および８８９；または配列番号：１４０１および１９１３）；ＡＤ−２０７０７（配列番号：３９３および９０５；または配列番号：１４１７および１９２９）；ＡＤ−２０７３０（配列番号：４１５および９２７；または配列番号：１４３９および１９５１）；ＡＤ−２０４３７．４（配列番号：３２１８および配列番号：３２１９）；ＡＤ−２０４８７．７（配列番号：３２２０および配列番号：３２２１）；ＡＤ−２０４８９．２（配列番号：３２２２および配列番号：３２２３）；ＡＤ−２０５６０．４（配列番号：３２２４および配列番号：３２２５）；ＡＤ−３７７１８．１（配列番号：３２２６および配列番号：３２２７）；ＡＤ−３７７１９．１（配列番号：３２４２および配列番号：３２４３）；ＡＤ−３７７２１．１（配列番号：３２２８および配列番号：３２２９）；ＡＤ−３７７２２．１（配列番号：３２４４および配列番号：３２４５）；ＡＤ−３７７２４．１（配列番号：３２３０および配列番号：３２３１）；ＡＤ−３７７２５．１（配列番号：３２４６および配列番号：３２４７）；ＡＤ−３７７２７．１（配列番号：３２３２および配列番号：３２３３）；ＡＤ−３７７２８．１（配列番号：３２４８および配列番号：３２４９）；ＡＤ−３７７３０．１（配列番号：３２３４および配列番号：３２３５）；ＡＤ−３７７３３．１（配列番号：３２３６および配列番号：３２３７）；ＡＤ−３７７３６．１（配列番号：３２３８および配列番号：３２３９）；ＡＤ−３７７４０．１（配列番号：３２４０および配列番号：３２４１）；ＡＤ−３６９６９．２（配列番号：３２５０および配列番号：３２５１）；ＡＤ−３００７１．２（配列番号：３２５２および配列番号：３２５３）；ＡＤ−３６９７０．２（配列番号：３２５４および配列番号：３２５５）；ＡＤ−３７７３９．１（配列番号：３２５６および配列番号：３２５７）；ＡＤ−３７７３１．１（配列番号：３２５８および配列番号：３２５９）；ＡＤ−３７７３４．１（配列番号：３２６０および配列番号：３２６１）；ＡＤ−３７７３７．１（配列番号：３２６２および配列番号：３２６３）；ＡＤ−３７７４１．１（配列番号：３２６４および配列番号：３２６５）；ＡＤ−３７７２０．１（配列番号：３２６６および配列番号：３２６７）；ＡＤ−３７７２３．１（配列番号：３２６８および配列番号：３２６９）；ＡＤ−３７７２６．１（配列番号：３２７０および配列番号：３２７１）；ＡＤ−３７７２９．１（配列番号：３２７２および配列番号：３２７３）；ＡＤ−３７７３２．１（配列番号：３２７４および配列番号：３２７５）；
ＡＤ−３７７３５．１（配列番号：３２７６および配列番号：３２７７）；ＡＤ−３７７３８．１（配列番号：３２７８および配列番号：３２７９）；ＡＤ−３７７４２．１（配列番号：３２８０および配列番号：３２８１）；ＡＤ−２０３０３（配列番号：３０および５４２；または配列番号：１０５４および１５６６）；ＡＤ−２０３１３（配列番号：４０および５５２；または配列番号：１０６４および１５７６）；ＡＤ−２０３１５（配列番号：４２および５５４；または配列番号：１０６６および１５７８）；ＡＤ−２０３４８（配列番号：５６および５６８；または配列番号：１０８０および１５９２）；ＡＤ−２０３６２（配列番号：７０および５８２；または配列番号：１０９４および１６０６）；ＡＤ−２０３６４（配列番号：７２および５８４；または配列番号：１０９６および１６０８）；ＡＤ−２０３６５（配列番号：７３および５８５；または配列番号：１０９７および１６０９）；ＡＤ−２０３６６（配列番号：７４および５８６；または配列番号：１０９８および１６１０）；ＡＤ−２０３７３（配列番号：８１および５９３；または配列番号：１１０５および１６１７）；ＡＤ−２０３７６（配列番号：８４および５９６；または配列番号：１１０８および１６２０）；ＡＤ−２０３７８（配列番号：８５および５９７；または配列番号：１１０９および１６２１）；ＡＤ−２０３８６（配列番号：９３および６０５；または配列番号：１１１７および１６２９）；ＡＤ−２０３８９（配列番号：１１７および６２９；または配列番号：１１４１および１６５３）；ＡＤ−２０３９１（配列番号：１１９および６３１；または配列番号：１１４３および１６５５）；ＡＤ−２０３９２（配列番号：１２０および６３２；または配列番号：１１４４および１６５６）；ＡＤ−２０３９７（配列番号：１２５および６３７；または配列番号：１１４９および１６６１）；ＡＤ−２０３９８（配列番号：１２６および６３８；または配列番号：１１５０および１６６２）；ＡＤ−２０３９９（配列番号：１２７および６３９；または配列番号：１１５１および１６６３）；ＡＤ−２０４０１（配列番号：１２９および６４１；または配列番号：１１５３および１６６５）；ＡＤ−２０４０２（配列番号：１３０および６４２；または配列番号：１１５４および１６６６）；ＡＤ−２０４０４（配列番号：１３２および６４４；または配列番号：１１５６および１６６８）；ＡＤ−２０４０６（配列番号：１３６および６４８；または配列番号：１１６０および１６７２）；ＡＤ−２０４０７（配列番号：１３７および６４９；または配列番号：１１６１および１６７３）；ＡＤ−２０４０８（配列番号：１３８および６５０；または配列番号：１１６２および１６７４）；ＡＤ−２０４０９（配列番号：１３９および６５１；または配列番号：１１６３および１６７５）；ＡＤ−２０４１０（配列番号：１４０および６５２；または配列番号：１１６４および１６７６）；ＡＤ−２０４１１（配列番号：１４１および６５３；または配列番号：１１６５および１６７７）；ＡＤ−２０４１３（配列番号：２０４２および２０４３；または配列番号：２０４６および２０４７）；ＡＤ−２０４２２（配列番号：１５１および６６３；または配列番号：１１７５および１６８７）；ＡＤ−２０４２８（配列番号：１５７および６６９；または配列番号：１１８１および１６９３）；ＡＤ−２０４３４（配列番号：１６３および６７５；または配列番号：１１８７および１６９９）；ＡＤ−２０４３５（配列番号：１６４および６７６；または配列番号：１１８８および１７００）；ＡＤ−２０４８８（配列番号：１７０および６８２；または配列番号：１１９４および１７０６）；ＡＤ−２０４９３（配列番号：１７５および６８７；または配列番号：１１９９および１７１１）；ＡＤ−２０４９５（配列番号：１７７および６８９；または配列番号：１２０１および１７１３）；ＡＤ−２０５０２（配列番号：１８４および６９６；または配列番号：１２０８および１７２０）；ＡＤ−２０５０７（配列番号：１８９および７０１；または配列番号：１２１３および１７２５）；ＡＤ−２０５１３（配列番号：１９５および７０７；または配列番号：１２１９および１７３１）；ＡＤ−２０５２７（配列番号：２０９および７２１；または配列番号：１２３３および１７４５）；ＡＤ−２０５３５（配列番号：２１７および７２９；または配列番号：１２４１および１７５３）；ＡＤ−２０５４４（配列番号：２３０および７４２；または配列番号：１２５４および１７６６）；ＡＤ−２０５４５（配列番号：２３１および７４３；または配列番号：１２５５および１７６７）；ＡＤ−２０５４６（配列番号：２３２および７４４；または配列番号：１２５６および１７６８）；ＡＤ−２０５４７（配列番号：２３３および７４５；または配列番号：１２５７および１７６９）；ＡＤ−２０５４９（配列番号：２３５および７４７；または配列番号：１２５９および１７７１）；ＡＤ−２０５５２（配列番号：２３８および７５０；または配列番号：１２６２および１７７４）；ＡＤ−２０５５５（配列番号：２４１および７５３；または配列番号：１２６５および１７７７）；
ＡＤ−２０５５６（配列番号：２４２および７５４；または配列番号：１２６６および１７７８）；ＡＤ−２０５５７（配列番号：２４３および７５５；または配列番号：１２６７および１７７９）；ＡＤ−２０５５８（配列番号：２６７および７７９；または配列番号：１２９１および１８０３）；ＡＤ−２０５６１（配列番号：２７０および７８２；または配列番号：１２９４および１８０６）；ＡＤ−２０５６５（配列番号：２７４および７８６；または配列番号：１２９８および１８１０）；ＡＤ−２０５６６（配列番号：２７５および７８７；または配列番号：１２９９および１８１１）；ＡＤ−２０５７２（配列番号：２８０および７９２；または配列番号：１３０４および１８１６）；ＡＤ−２０５７４（配列番号：２０４４および２０４５；または配列番号：２０４８および２０４９）；ＡＤ−２０５７５（配列番号：２８２および７９４；または配列番号：１３０６および１８１８）；ＡＤ−２０５７７（配列番号：２８４および７９６；または配列番号：１３０８および１８２０）；ＡＤ−２０５７９（配列番号：２８６および７９８；または配列番号：１３１０および１８２２）；ＡＤ−２０６２５（配列番号：２８９および８０１；または配列番号：１３１３および１８２５）；ＡＤ−２０６３３（配列番号：２９７および８０９；または配列番号：１３２１および１８３３）；ＡＤ−２０６３４（配列番号：２９８および８１０；または配列番号：１３２２および１８３４）；ＡＤ−２０６４０（配列番号：３０４および８１６；または配列番号：１３２８および１８４０）；ＡＤ−２０６４６（配列番号：３１０および８２２；または配列番号：１３３４および１８４６）；ＡＤ−２０６５０（配列番号：３１４および８２６；または配列番号：１３３８および１８５０）；ＡＤ−２０６５３（配列番号：３１７および８２９；または配列番号：１３４１および１８５３）；ＡＤ−２０６６１（配列番号：３２５および８３７；または配列番号：１３４９および１８６１）；ＡＤ−２０６７１（配列番号：３３７および８４９；または配列番号：１３６１および１８７３）；ＡＤ−２０６９３（配列番号：３７６および８８８；または配列番号：１４００および１９１２）；ＡＤ−２０７００（配列番号：３８３および８９５；または配列番号：１４０７および１９１９）；ＡＤ−２０７０２（配列番号：３８５および８９７；または配列番号：１４０９および１９２１）；ＡＤ−２０７０９（配列番号：３９４および９０６；または配列番号：１４１８および１９３０）；ＡＤ−２０７１０（配列番号：３９５および９０７；または配列番号：１４１９および１９３１）；ＡＤ−２０７１４（配列番号：３９９および９１１；または配列番号：１４２３および１９３５）；ＡＤ−２０７１６（配列番号：４０１および９１３；または配列番号：１４２５および１９３７）；ＡＤ−２０７２８（配列番号：４１３および９２５；または配列番号：１４３７および１９４９）；ＡＤ−２０７４１（配列番号：４２９および９４１；または配列番号：１４５３および１９６５）；ＡＤ−２０７６４（配列番号：４５２および９６４；または配列番号：１４７６および１９８８）；ＡＤ−２０７８３（配列番号：４７１および９８３；または配列番号：１４９５および２００７）；ＡＤ−２０２７８（配列番号：２０５３および２０６４；または配列番号：２０７５および２０８６）；ＡＤ−２０２７９（配列番号：２０５４および２０６５；または配列番号：２０７６および２０８７）；ＡＤ−２０２８０（配列番号：２０５５および２０６６；または配列番号：２０７７および２０８８）；ＡＤ−２０２８１（配列番号：２０５６および２０６７；または配列番号：２０７８および２０８９）；ＡＤ−２０２８２（配列番号：２０５７および２０６８；または配列番号：２０７９および２０９０）；ＡＤ−２０２８３（配列番号：２０５８および２０６９；または配列番号：２０８０および２０９１）；ＡＤ−２０３７７（配列番号：２０５９および２０７０；または配列番号：２０８１および２０９２）；ＡＤ−２０５７０（配列番号：２０６０および２０７１；または配列番号：２０８２および２０９３）；ＡＤ−２０５８０（配列番号：２０６１および２０７２；または配列番号：２０８３および２０９４）；ＡＤ−２０５９７（配列番号：２０６２および２０７３；または配列番号：２０８４および２０９５）；およびＡＤ−２０５９８（配列番号：２０６３および２０７４；または配列番号：２０８５および２０９６）。特定のセンス鎖（ＳＳ）およびアンチセンス鎖（ＡＳ）に関するこれらの例の二本鎖および配列番号は、本明細書において、例えば、表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａおよび表９Ｂ内に記載されているヌクレオチド配列で提供される。上記それぞれの組成物および表１、２、３、３Ａ、８、９Ａおよび９ＢにおけるそれぞれのＲＮＡｉ剤の修飾された配列（例えば、１つ以上の修飾された塩基を含む配列）もまた、本願記載の一部として考慮される。
特定の組成物
１つの態様において、本願明細書は、アンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む特定の組成物であって、該アンチセンス鎖は、表１、２、３、３Ａ、８、９Ａおよび９Ｂにおける任意の１つ以上の配列から選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願明細書は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、表１、２、３、３Ａ、８、９Ａおよび９Ｂの任意の１つ以上において記載されているＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願明細書は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該センス鎖は、センス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、そして該アンチセンス鎖は、直前に記載されているＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。特定の二本鎖は、上記提供されている特定の二本鎖、ならびに表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａおよび表９Ｂの任意の１つ以上において記載されている特定の二本鎖を含む。上記それぞれの組成物のさらなる修飾された配列（例えば、１つ以上の修飾された塩基を含む配列）もまた、本願記載の一部として考慮される。
表Ａ１．本発明のＲＮＡｉ剤に関するセンス鎖（ＳＳ）およびアンチセンス鎖（ＡＳ）に対する配列番号
Figure 0005981625
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本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤
１つの特定の態様において、本願明細書は、アンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、上記で提供されている、および表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａおよび表９Ｂに記載されている特定の二本鎖におけるアンチセンス鎖から選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。
本態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、組成物は、ＨＳＦ１に対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に分離されるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、共有的に連結されるか、または、さもなければ接合される）。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、約３０以下のヌクレオチドの長さである。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、センス鎖と二本鎖領域を形成し、該二本鎖領域は、約１５から３０のヌクレオチド対の長さである。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、約１９から約２３のヌクレオチドの長さを含む約１５から約３０のヌクレオチドの長さである。１つの態様において、アンチセンス鎖は、約１５ヌクレオチド、約１６ヌクレオチド、約１７ヌクレオチド、約１８ヌクレオチド、約１９ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約２１ヌクレオチド、約２２ヌクレオチド、約２３ヌクレオチド、約２４ヌクレオチド、約２５ヌクレオチド、約２６ヌクレオチド、約２７ヌクレオチド、約２８ヌクレオチド、約２９ヌクレオチドおよび３０ヌクレオチドから選択される長さを少なくとも有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤の生物学的サンプルまたは環境における安定性を増加させる修飾を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの糖骨格修飾（例えば、ホスホロチオエート結合）または少なくとも１つの２’−修飾ヌクレオチドを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチドを含む。これらのジヌクレオチドモチーフは、特に血清ヌクレアーゼ分解（例えば、ＲＮａｓｅ Ａ）されやすい。モチーフにおける第１のピリミジンヌクレオチドの２’−位での化学修飾は、このような開裂を防止または遅延する。該修飾方法もまた、「エンドライト(endo light)」なる用語の下に知られている。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む。１つの態様において、全てのピリミジン（ウリジンおよびシチジン）は、２’Ｏ−メチル−修飾ヌクレオシドである。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの平滑末端を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、対になっていない１ｎｔから４ｎｔを有するオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の３’−末端でオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性を与える部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール(uvaol)、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン(Friedelin)、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴ乳酸エステル １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン性物質、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約６０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約７０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約７５％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約８０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約９０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約９５％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約９９％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。ＥＣ５０は、遺伝子発現を５０％減少させるために有効な濃度である。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．０１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．００１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
本明細書に記載されているＲＮＡｉのセンス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤
１つの特定の態様において、本願明細書は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該センス鎖およびアンチセンス鎖は、上記で提供されている、および表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａおよび表９Ｂに記載されている特定の二本鎖から選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれと０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。
この態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、組成物は、ＨＳＦ１に対する第２のＲＮＡｉ剤を含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に分離されるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、化学的に連結されるか、または、さもなければ接合される）。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、約３０以下のヌクレオチドの長さである。
１つの態様において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、約１５から約３０のヌクレオチド対の長さの二本鎖領域を形成する。
１つの態様において、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、両方とも約１９から約２３ｎｔの長さである。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤の生物学的サンプルまたは環境における安定性を増加させる修飾を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、修飾された糖骨格、例えば、ホスホロチオエート結合を含むか、または２’−修飾ヌクレオチドを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチドを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む。１つの態様において、全てのピリミジン（ウリジンおよびシチジン）は、２’Ｏ−メチル−修飾ヌクレオシドである。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの平滑末端を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、対になっていない１から４ｎｔを有するオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の３’−末端でオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性を与える部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴ乳酸エステル １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン性物質、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約６０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約７０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約８０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約９０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約９５％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＷＩ−３８および／またはＨｅＬａ細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約９９％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．０１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．００１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤を使用する処置方法
１つの特定の態様において、本願明細書は、治療有効量のアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物を個体に投与する工程を含む個体におけるＨＳＦ１関連疾患を処置する方法であって、該アンチセンス鎖は、上記で提供されている、および表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａおよび表９Ｂに記載されている特定の二本鎖から選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、方法に関する。１つの態様において、ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤は、センス鎖と二本鎖にされたアンチセンス鎖を含み、ここに、該センス鎖およびアンチセンス鎖は、表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａまたは表９において提供される１つ以上の配列から選択される。
この態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、増殖性疾患、例えば、癌であるか、または、自己免疫疾患であるか、またはウイルス疾患である。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、膀胱、骨、乳房、子宮頸、大腸、結腸直腸、子宮内膜、線維肉腫、胃腸、造血器、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、神経外胚葉、神経芽腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、卵巣、膵臓、胸膜、前立腺、皮膚、扁平上皮、胃、および精巣癌、白血病、前骨髄球性白血病、ならびにホジキン病のリストから選択される癌である。
１つの態様において、方法は、さらなる癌処置を施す工程をさらに含む。
１つの態様において、方法は、アクチノマイシン Ｄ、ＨＳＰ９０（熱ショックタンパク質 ９０）の阻害剤、１７−ＡＡＧ（タネスピマイシン）、１７−ＤＭＡＧ（アルベスピマイシン）、ＩＰＩ−５０４（レタスピマイシン）、ＩＰＩ−４９３、ＳＮＸ−５４２２メシル酸塩、ＡＵＹ９２２、ＢＩＢ０２１ ＣＮＦ−２０２４、ＢＩＩＢ０２８、ＳＴＡ−９０９０、ＫＷ−２４７８、ＡＴＩ３３８７、ＸＬ８８８、ＨＳＰ９９０、ＭＰＣ−３１００、ＡＢＩ−０１０（Kimら 2009 Curr. Topics in Med. Chem. 9: 1479-1492に概説されている）、または２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン、５−フルオロ−２９−デオキシウリジン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、７−ヒドロキシスタウロスポリン、１３−シス−レチノイン酸、ゴセレリン インプラント、アレムツズマブ、アリトレチノイン、オール−トランス レチノイン酸、アルファ インターフェロン、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、カルメット・ゲラン菌、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルセミド、シクロヘキシミド、シクロホスファミド、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダサチニブ、リポゾーマルダウノルビシン、ダウノルビシン、デシタビン、デニロイキンジフチトクス、デキサメサゾン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エデルホシン、クロランブシル(ehlorambucil)、エピポドフィロトキシン、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、エトポシド、エバロリムス、エキセメスタン、フェンレチニド、フィナステリド、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン(gemeitabine)、ゲムツズマブ オゾガマイシン、ゴセレリン、ヘキサメチルメラミン、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミダゾール カルボキサミド、インターロイキン−１１、インターロイキン−２、イリノテカン、イクサベピロン、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、リュープロリド、メクロレタミン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、メチルプレドニゾロン、ミトキサントロン(mitixantrone)、マイトマイシン、ミトキサントロン、ネララビン、ナイトロジェンマスタード、オクトレオチド、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセル−アルブミン製剤、パクリタキセル−タンパク質製剤、パミドロネート、パニツムマブ、ペメトレキセド、ペントスタチン、フェニルアラニンマスタード、エピルビシン(pirubicin)、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ピューロマイシン、ラロキシフェン、リツキサン、ルビドマイシン、サルグラモスチム、ソラフェニブ、スタウロスポリン、ステロイド、ストレプトゾシン、スニチニブ、タモキシフェン、タキソール、テガフール、テモゾロマイド、テムシロリムス、テニポシド、サリドマイド、チオホスホアミド、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツマブ、トレチノイン、ＵＦＴ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、および／またはゾレドロン酸のリストから選択されるさらなる癌処置を施す工程をさらに含む。ＨＳＦに対するＲＮＡｉ剤１は、本明細書に記載されている任意のさらなる処置と共に、疾患に対して適当なとき、所望により、１つ以上のさらなるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤とさらに組み合わせて使用することができる。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、ウイルス疾患である。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、全体または一部においてアデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト サイトメガロウイルス、ＨＴＬＶ−１、ＳＶ４０、ポリオーマ・ウイルス、ＨＩＶ、および／またはエプスタイン−バー(Epstein-Barr)・ウイルスが介在するウイルス疾患のリストから選択されるウイルス疾患である。
１つの態様において、方法は、さらなるウイルス疾患処置を施す工程をさらに含む。
１つの態様において、方法は、アバカビル、アシクロビル、アシクロビル（アシクログアノシン）、アデフォビル、アマンタジン、アンプリジェン、アンプレナビル、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、ベビリマット、ボセプレビル、広範囲阻害剤、シドフォビル、コンビビル、ダルナビル、デラビルジン、ディダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、侵入阻害剤、侵入もしくは融合阻害剤、ファムシクロビル、ホミビルセン、ホスアンプレナビル、ホスカルネット、ホスホネット、融合阻害剤、ガンシクロビル、イバシタビン、イドクスウリジン、イミキモド、イムノビル(Imunovir)、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、インターフェロン、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、成熟阻害剤、モロキシジン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサバール(Nexavir)、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、ＮＯＶ−２０５、ヌクレオシド類似体、ヌクレオチド類似体逆転写酵素阻害剤、オセルタミビル（タミフル）、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ラルテグラビル、ラルテグラビル、逆転写酵素阻害剤、逆転写酵素阻害剤、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、サクイナビル、サクイナビル、スタブジン、相乗的エンハンサー（アンチレトロウイルス）、テノホビル、テノホビル ジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル（バルトレックス）、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、バビリン、ザルシタビン、ザナミビル（リレンザ）、およびジドブジンのリストから選択されるさらなるウイルス疾患処置を施す工程をさらに含む。任意のさらなる処置（例えば、ウイルス疾患処置または癌処置または自己免疫疾患処置など）の言及は、また、活性な物質のいずれかの薬学的に許容される塩も含むことを意味すると理解される。成分（ａ）および／または（ｂ）からなる活性な物質が、例えば、少なくとも１つの塩基性中心を有するとき、それらは、酸付加塩を形成することができる。対応する酸付加塩は、また、所望により、さらに存在する塩基性中心を有して形成することができる。酸性基、例えば、ＣＯＯＨを有する活性な物質は、塩基と塩を形成することができる。成分（ａ）および／または（ｂ）からなる活性な物質またはその薬学的に許容される塩は、水和物の形態において使用されてもよく、または結晶化のために使用される他の溶媒を含んでもよい。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、自己免疫疾患である。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、狼瘡またはリウマチ性関節炎である。
１つの態様において、組成物は、ＨＳＦ１に対する第２のＲＮＡｉ剤を含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に別個であるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、連結されるか、または、接合される）。
本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤を含むＲＮＡｉを使用してＨＳＦ１の発現を阻害する方法
１つの特定の態様において、本願明細書は、治療有効量の本明細書に記載のＲＮＡｉ剤を含む組成物を個体に投与する工程を含む個体におけるＨＳＦ１の発現を阻害する方法に関する。１つの態様において、ＲＮＡｉは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここに、該アンチセンス鎖は、上記で提供されている、および表１、表２、表３、表３Ａ、表８、表９Ａおよび表９Ｂに記載されている特定の二本鎖から選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
この態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、個体は、ＨＳＦ１関連疾患に罹患しているか、または罹患しやすい。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、増殖性疾患、例えば、癌である。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、膀胱、骨、乳房、子宮頸、大腸、結腸直腸、子宮内膜、線維肉腫、胃腸、造血器、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、神経外胚葉、神経芽腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、卵巣、膵臓、胸膜、前立腺、皮膚、扁平上皮、胃、および精巣癌、白血病、前骨髄球性白血病、ならびにホジキン病のリストから選択される癌である。
１つの態様において、方法は、さらなる癌処置を施す工程をさらに含む。
１つの態様において、方法は、本明細書に記載されている、または当分野で知られている任意の癌処置のリストから選択されるさらなる癌処置を施与する工程をさらに含む。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、ウイルス疾患である。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、全体または一部においてアデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト サイトメガロウイルス、ＨＴＬＶ−１、ＳＶ４０、ポリオーマ・ウイルス、ＨＩＶ、および／またはエプスタイン−バー・ウイルスが介在するウイルス疾患のリストから選択されるウイルス疾患である。
１つの態様において、方法は、さらなるウイルス疾患処置を施与する工程をさらに含む。
１つの態様において、方法は、本明細書に記載されている任意のウイルス疾患処置のリストから選択されるさらなるウイルス疾患処置を施与する工程をさらに含む。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、自己免疫疾患である。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、狼瘡またはリウマチ性関節炎である。
１つの態様において、組成物は、ＨＳＦ１に対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に別個であるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、連結されるか、または、接合される）。
他の態様
本明細書の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、本明細書は、個体におけるＨＳＦ１関連疾患を処置する方法における使用のための上記態様のいずれかに記載の組成物であって、該方法は、治療有効量の請求項のいずれかに記載の組成物を個体に投与する工程を含む、組成物に関する。
この態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、本明細書は、個体におけるＨＳＦ１の発現を阻害する方法における使用のための上記態様のいずれかに記載の組成物であって、該方法は、治療有効量の上記態様のいずれかに記載の組成物を個体に投与する工程を含む、組成物に関する。
本明細書の１つの態様は、ＨＳＦ１関連疾患の処置のための医薬の製造における上記態様のいずれかに記載の組成物の使用である。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、癌、ウイルス疾患または自己免疫疾患から選択される。
１つの態様において、本明細書は、ＨＳＦ１関連疾患の処置における使用のための上記態様のいずれかの組成物に関する。
１つの態様において、ＨＳＦ１関連疾患は、癌、ウイルス疾患または自己免疫疾患から選択される。
１つの態様において、本明細書は、細胞にアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物を導入する工程を含む細胞におけるＨＳＦ１の発現を阻害する方法であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載されているＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡから選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む方法に関する。
１つの態様において、本明細書は、細胞にセンス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物を導入する工程を含む細胞におけるＨＳＦ１の発現を阻害する方法であって、該アンチセンス鎖は、アンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、そして該センス鎖は、本明細書に記載されているＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡから選択されるＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤のセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む方法に関する。
熱ショック因子１（ＨＳＦ１）
「ＨＳＦ１」は、熱ショック因子１または熱ショック転写因子１（ＨＳＴＦ１）の遺伝子またはタンパク質を意味する。ＨＳＦ１は、熱ショック応答のマスターレギュレーターであり、多数の遺伝子は、温度上昇および他のストレスに応答して誘導される。ＨＳＦ１は、染色体８ｑ２４．３上のＨＧＮＣ ＩＤ ＨＧＮＣ：５２２４で示されている。それは（相同体を含む）、また、ＧｅｎｅＩＤ： ３２９７；ＲｅｆＳｅｑ ＩＤｓ ＮＭ＿００５５２６；ＡｃｃＮｏ． Ｍ６４６７３；Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｏｍｅ Ｄａｔａｂａｓｅ ＩＤ ＭＧＩ：９６２３８；Ｒａｔ Ｇｅｎｏｍｅ Ｄａｔａｂａｓｅ ＩＤ ＲＧＤ：６２０９１３；Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ ＩＤ ３２９７；ＣＣＤＳ ＩＤｓ ＣＣＤＳ６４１９．１；Ｐｕｂｍｅｄ ＩＤｓ １８７１１０５；Ｅｎｓｅｍｂｌ ＩＤ ＥＮＳＧ０００００１８５１２２；ＯＭＩＭ ＩＤ （ＮＣＢＩ） １４０５８０；ＵＣＳＣ ＩＤ （ＵＣＳＣ） ｕｃ００３ｚｂｔ．２；および／またはＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ（ＵｎｉＰｒｏｔにより提供されるマップデータ） Ｑ００６１３として同定される。
ヒトＨＳＦ１のアミノ酸配列は、以下の配列番号２０５０として提供される：
ＭＤＬＰＶＧＰＧＡＡＧＰＳＮＶＰＡＦＬＴＫＬＷＴＬＶＳＤＰＤＴＤＡＬＩＣＷＳＰＳＧＮＳＦＨＶＦＤＱＧＱＦＡＫＥＶＬＰＫＹＦＫＨＮＮＭＡＳＦＶＲＱＬＮＭＹＧＦＲＫＶＶＨＩＥＱＧＧＬＶＫＰＥＲＤＤＴＥＦＱＨＰＣＦＬＲＧＱＥＱＬＬＥＮＩＫＲＫＶＴＳＶＳＴＬＫＳＥＤＩＫＩＲＱＤＳＶＴＫＬＬＴＤＶＱＬＭＫＧＫＱＥＣＭＤＳＫＬＬＡＭＫＨＥＮＥＡＬＷＲＥＶＡＳＬＲＱＫＨＡＱＱＱＫＶＶＮＫＬＩＱＦＬＩＳＬＶＱＳＮＲＩＬＧＶＫＲＫＩＰＬＭＬＮＤＳＧＳＡＨＳＭＰＫＹＳＲＱＦＳＬＥＨＶＨＧＳＧＰＹＳＡＰＳＰＡＹＳＳＳＳＬＹＡＰＤＡＶＡＳＳＧＰＩＩＳＤＩＴＥＬＡＰＡＳＰＭＡＳＰＧＧＳＩＤＥＲＰＬＳＳＳＰＬＶＲＶＫＥＥＰＰＳＰＰＱＳＰＲＶＥＥＡＳＰＧＲＰＳＳＶＤＴＬＬＳＰＴＡＬＩＤＳＩＬＲＥＳＥＰＡＰＡＳＶＴＡＬＴＤＡＲＧＨＴＤＴＥＧＲＰＰＳＰＰＰＴＳＴＰＥＫＣＬＳＶＡＣＬＤＫＮＥＬＳＤＨＬＤＡＭＤＳＮＬＤＮＬＱＴＭＬＳＳＨＧＦＳＶＤＴＳＡＬＬＤＬＦＳＰＳＶＴＶＰＤＭＳＬＰＤＬＤＳＳＬＡＳＩＱＥＬＬＳＰＱＥＰＰＲＰＰＥＡＥＮＳＳＰＤＳＧＫＱＬＶＨＹＴＡＱＰＬＦＬＬＤＰＧＳＶＤＴＧＳＮＤＬＰＶＬＦＥＬＧＥＧＳＹＦＳＥＧＤＧＦＡＥＤＰＴＩＳＬＬＴＧＳＥＰＰＫＡＫＤＰＴＶＳ （配列番号：２０５０）
ＨＳＦ１の機能性ドメインは、変異誘発により明らかにされている。Ｎ末端付近の配列は、ＤＮＡ結合ドメイン（番号、約ａａ１３−１２１；またはａａ１６−１２０、Ｓｈｉら）を形成する。これの隣接部は、単量体化および三量体化を介在する３つの「ロイシンジッパー」を含む疎水性領域である（番号、約ａａ１２６−２１７；または１３７−２１２；または１３７−２０３）。第４の疎水性パッチまたはロイシンジッパーは、約ａａ３７８−４０７に位置し；該領域は、非ストレス条件下で負の調節に関与する。分子の中央部は、ストレスに応答して転写活性化ドメインの活性を調節する領域を含む。レギュレータードメイン内の配列は、ストレスに応答して特定のリン酸化および脱リン酸化を受ける。セリンおよびプロリンが豊富である該レギュレータードメインは、約ａａ２２１−３１０または２０１−３７０に位置する。ＨＳＦ１のＣ−末端部分は、主な転写活性化領域を含む；これは、最大１００のＣ−末端アミノ酸もしくはａａ３９５−５０３を含むか、または、あるいはａａ４０１−４２０でＡＤ１まで減らされ得る（Ｎｅｗｔｏｎら）。これらのドメインは、とりわけ、Greenら 1995 Mol. Cell. Biol. 15: 3354-3362;およびShiら 1995 Mol. Cell. Biol. 15: 4309-4318に記載されている。本願明細書のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ１の特定の機能性ドメインまたはドメインと相互作用することができる。
種々の態様において、本願明細書のＲＮＡｉ剤は、機能性ドメインに対応する配列、例えば、ＤＮＡ結合ドメインを形成するＮ末端付近の配列；４／３疎水性リピートまたは三量体化を介在する「ロイシンジッパー」；第１、第２、第３または第４のロイシンジッパー；潜在的形態においてＨＳＦ１を維持するか、またはストレスに応答して転写活性化ドメインの活性を調節するいくつかの因子を含む分子の中央部；ストレスに応答して特定のリン酸化および脱リン酸化を受けるレギュレータードメイン内の配列；主な転写活性化領域を含むＨＳＦ１のＣ−末端部分；コイルドコイルを形成するために相互作用するＨＳＦファミリータンパク質のアミノ末端ドメインにおける両親媒性アルファヘリックス残基のアレイ；および／またはカルボキシル末端ドメインにおける両親媒性アルファヘリックスの第４の領域において、ＨＳＦ１のｍＲＮＡに特異的に結合する。他の態様において、本願明細書のＲＮＡｉ剤は、５’または３’ＵＴＲ［非翻訳領域］に結合する。
種々の態様において、本願明細書のＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ１のｍＲＮＡに結合するが、機能性ドメインに対応する配列、例えば、ＤＮＡ結合ドメインを形成するＮ末端付近の配列；４／３疎水性リピートまたは三量体化を介在する「ロイシンジッパー」；第１、第２、第３または第４のロイシンジッパー；潜在的形態においてＨＳＦ１を維持するか、またはストレスに応答して転写活性化ドメインの活性を調節するいくつかの因子を含む分子の中央部；ストレスに応答して特定のリン酸化および脱リン酸化を受けるレギュレータードメイン内の配列；主な転写活性化領域を含むＨＳＦ１のＣ−末端部分；コイルドコイルを形成するために相互作用するＨＳＦファミリータンパク質のアミノ末端ドメインにおける両親媒性アルファヘリックス残基のアレイ；カルボキシル末端ドメインにおける両親媒性アルファヘリックスの第４の領域；または、５’または３’ＵＴＲに結合しない。別の態様において、本願明細書のＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ１のｍＲＮＡに結合するが、Rossiら 2006 Cancer Res. 66:7678-7685により記載されている遺伝子転写開始部位ｎｔ３２２から３４０下流に架かる配列に結合しない。
ＨＳＦ１関連疾患
本明細書において使用される「ＨＳＦ１関連疾患」なるフレーズは、１つ以上の増殖性疾患、例えば、癌（該癌は、膀胱、骨、乳房、子宮頸、大腸、結腸直腸、子宮内膜、線維肉腫、胃腸、造血器、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、神経外胚葉、神経芽腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、卵巣、膵臓、胸膜、前立腺、皮膚、扁平上皮、胃、および精巣癌、白血病、前骨髄球性白血病、ならびにホジキン病の１つ以上の癌から選択される）；ウイルス疾患（該ウイルス疾患は、全体または一部においてアデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト サイトメガロウイルス、ＨＴＬＶ−１、ＳＶ４０、ポリオーマ・ウイルス、ＨＩＶ、および／またはエプスタイン−バー・ウイルスが介在する１つ以上のウイルス疾患から選択される）；ならびに自己免疫疾患（該自己免疫疾患は、１つ以上の狼瘡およびリウマチ性関節炎から選択される）を意味する。
ＨＳＦ１は、癌およびウイルス疾患を含むいくつかの疾患に関与している。ＨＳＦ１および他の熱ショックタンパク質（それらの発現は、ＨＳＦ１により増加する）は、膀胱、骨、乳房、子宮頸、大腸、結腸直腸、子宮内膜、線維肉腫、胃腸、造血器、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、神経外胚葉、神経芽腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、卵巣、膵臓、胸膜、前立腺、皮膚、扁平上皮、胃、および精巣癌、白血病（例えば、前骨髄球性白血病）、ならびにホジキン病において過剰発現しているか、または、さもなければ、関与している。ＨＳＦ１は、転移性前立腺癌腫細胞系ＰＣ−３Ｍ（非転移性ＰＣ−３系と比較して）、および他の前立腺癌細胞において過剰発現している。過剰発現しているか、または、さもなければ、関与している。
ＨＳＦ１の過剰発現は、熱ショックタンパク質ＨＳＰ２７の上方関係と相関している。Hoangら 2000 Am. J. Pathol. 156: 857-864。ＨＳＰ２７上方調節はまた、大腸、乳房、前骨髄球性白血病、精巣および前立腺を含むいくつかの癌の発癌性および侵襲性の増加とも関連する。ＨＳＦ１はまた、非ストレス条件下で癌細胞において機能的役割を果たす；ドミナント・ネガティブＨＳＦ１は、ＰＣ−３細胞集団中のＤＮＡ含有量を変化させ、異数性を阻害する。Wangら 2004 J. Biol. Chem. 279: 32651-32659。多数の腫瘍型は、ＨＳＦ１により上方調節されるＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０ファミリーの熱ショックタンパク質を高い濃度で含む。特定の理論に縛られることは望まないが、出願人は、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）が、形質転換中のアポトーシスシグナルの誘導にもかかわらず、アポトーシスの経路をブロックし、悪性細胞を生じることを可能にし得ることが示唆されていることに注目する。ＨＳＰ発現はまた、これらの様式のアポトーシス促進性の影響を阻止することにより、処置、例えば、化学療法および温熱療法からの癌細胞の保護を提供し得る。Tangら 2005 Cell Stress Chaperones 10: 46-58およびその中の文献。Ｒｏｓｓｉらは、また、ＨＳＦ１レベルの減少が、温熱療法と関連するシスプラチンに対する子宮頸癌腫細胞の感受性を増加させることを示した。熱ショックタンパク質の過剰発現はまた、ドキソルビシンおよび温熱療法および他の抗癌処置に対する癌細胞の保護と関連する。Helmbrechtら 2000 Cell Prolif. 33: 341-365。
熱ショックタンパク質の過剰発現はまた、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト サイトメガロウイルス、ＨＴＬＶ−１、ＳＶ４０、ポリオーマ・ウイルス、ＨＩＶ、エプスタイン−バー・ウイルスが介在するものを含むウイルス感染と関連する。熱ショックタンパク質の高いレベルはまた、狼瘡およびリウマチ性関節炎を含む自己免疫疾患と関連する。したがって、例えば、抗ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤の使用を介する、ＨＳＦ１の阻害は、癌およびウイルス疾患および他の疾患に対する有効な処置であり得る。わずかなＨＳＰ阻害剤は知られているが、それらはケルセチン、ＨＳＦ１を阻害するフラボノイドを含む。Zaniniら 2007 J. Neurochem. 103:1344-354およびその中の文献。したがって、ケルセチンは、ウイルス疾患または癌の処置においてＨＳＦ１を阻害するＲＮＡｉ剤に対する正のコントロールとして使用することができる。
種々の種におけるＨＳＦ１遺伝子配列
ヒトＨＳＦ１遺伝子は、クローニングされている、Rabindranら 1991 Proc. Natl. Acad. Sci USA 88: 6906-6910。種々の配列が、Ｇｅｎｂａｎｋ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ ＮＭ＿００５５２６．２を含むヒトＨＳＦ１に利用できる。マウス（ハツカネズミ）ＨＳＦ１遺伝子は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ ｉｄ ＮＭ＿００８２９６．２である。別のマウスＨＳＦ１配列は、Ａｃｃ． Ｎｕｍｂｅｒ ＸＭ＿１２８０５５として利用できる（Yinら 2005 J. Mol. Cell. Card. 39: 681-689において使用されるとおり）。
ヒト配列（配列番号：２０５２）と比較したカニクイザル(Cynomolgus monkey)（「カニクイザル(Cyno)」、またはカニクイザル(Macaca fascicularis)）ＨＳＦ１配列（配列番号：２０５１）は、表Ａ２において示されている。
表Ａ２
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ヒトＨＳＦ１配列の開始（ＡＴＧ）および停止（ＴＡＧ）ならびにカニクイザルＨＳＦ１配列の推定開始および停止を太字で示す。Ｎは、ヌクレオチドがシーケンシング実験においてその位置で決定されなかったことを示す。
１つの態様において、本願明細書のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、ヒト、マウスおよびカニクイザルＨＳＦ１遺伝子において同一である配列を含む。この配列同一性は、ヒト試験の前に動物試験を容易にする。
１つの態様において、ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、他の遺伝子と合わない配列を含む。１つの態様において、ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、全ての他の既知の非ＨＳＦ１遺伝子と少なくとも０、１、２または３個のヌクレオチドで異なっている配列を含む。
１つの態様において、ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ２、ＨＳＦ３またはＨＳＦ４と同一である配列を含む。１つの態様において、ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ２、ＨＳＦ３またはＨＳＦ４のいずれかと同一ではない配列を含む。
種々のＨＳＦ１関連疾患の処置における使用のためのＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤
１つの態様において、本願明細書のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に記載されている配列を含み、それが必要である患者（例えば、癌および／またはウイルス疾患および／または自己免疫疾患および／またはＨＳＦ１関連疾患に罹患している患者）に投与される。１つの態様において、本願明細書のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、疾患に適当である１つ以上のさらなる医薬と共に、それが必要である患者に投与される。例えば、癌に罹患している患者は、薬理学的に有効量の１つ以上の本明細書に記載されている任意の癌処置および／または当分野で知られている任意の他の癌処置と共に、薬理学的に有効量の１つ以上のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤を投与され得る。
ウイルス疾患に罹患している患者は、１つ以上のＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤および１つ以上のさらなるウイルス疾患処置を投与され得る。このさらなる処置は、本明細書に記載されている任意のウイルス疾患処置および／または当分野で知られている任意の抗ウイルス処置のリストから選択され得る。
患者は、また、２つ以上のＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤を投与され得る。
癌、自己免疫性およびウイルス疾患の場合、ＲＮＡｉ剤およびさらなる疾患処置は、任意の順番で、同時にもしくは連続して、または時間をかけて複数回投与で投与することができる。ＲＮＡｉ剤およびさらなる処置の施与は、例えば、同時に、併用で、別々にまたは連続してであり得る。
同時投与は、例えば、２つ以上の活性成分で１つの固定された組合せの形態で、または独立して製剤化された２つ以上の活性成分を同時に投与することにより行われ得る。好ましくは、連続使用（投与）は、好ましくは、組合せが独立して投与される単一の化合物よりもさらなる効率を示す（とりわけ相乗効果を示す）ように、ある時点で組合せの１つの（またはそれ以上の）成分、異なる時点で、すなわち、慢性的にずらされた様式において他の成分の投与を意味する。別々の使用（投与）は、好ましくは、互いに独立して、異なる時点での組合せの成分の投与を意味し、好ましくは、成分（ａ）および（ｂ）が両方の化合物の測定可能な血液レベルの重複が重複様式で（同時に）存在しないように投与されることを意味する。
また、２つ以上の連続の、別々のおよび同時の投与の組合せは、好ましくは、組合せ成分薬物が、組合せ成分薬物が治療効果における相互作用を見出すことができないほど広範な時間間隔で独立して使用されるとき、見出される効果を越える共同の治療効果、とりわけ好ましくは相乗効果を示すように行われる。
本明細書において使用される「進行の遅延」なる用語は、処置される疾患の最初の兆候または再発の前段階または早期である患者への組合せの投与を意味し、ここで、患者は、例えば対応する疾患の前形態と診断されているか、または、患者は、例えば薬物治療中の状態、または対応する疾患が発症するであろう条件下で偶発事故による状態である。
「共同で治療有効な」または「共同治療効果」は、化合物が、好ましくは、処置される温血動物、とりわけヒトにおいて、なお（好ましくは相乗作用）相互作用（共同治療効果）を示す時間間隔において、別々に（慢性的にずらされた様式、とりわけ連続特異的様式において）与えられ得ることを意味する。この場合であるか否かは、とりわけ、両方の化合物が、少なくともある時間間隔中、処置されるヒトの血中に存在することを示す血液レベルにしたがって決定することができる。
定義
便宜上、本明細書、実施例および特許請求の範囲において使用される特定の用語および句の意味を、以下に提供する。本明細書の他の部分における用語の慣習およびこのセクションにおいて提供されるその定義間で明らかな矛盾がある場合、このセクションにおける定義を優先する。
本明細書中で使用されるとき、冠詞、例えば、「ａ」および「ａｎ」は、１つ以上の（少なくとも１つの）冠詞の文法的目的語を示す。
ＲＮＡｉ剤
本明細書において使用される「ＲＮＡｉ剤」、「ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤」、「ＨＳＦ１に対するｓｉＲＮＡ」、「ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡ」などなる用語は、ＨＳＦ１遺伝子に特異的に結合する、ｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）、ｓｈＲＮＡ（短もしくは小ヘアピン型ＲＮＡ）、ｉＲＮＡ（干渉ＲＮＡ）剤、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）剤、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、ｍｉｃｒｏＲＮＡなどを示す。本明細書において使用される「ｉＲＮＡ」または「ＲＮＡｉ」なる用語は、ＲＮＡを含み、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介して別のＲＮＡ転写産物の標的化開裂を介在する薬剤を示す。１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＩＳＣ複合体／経路を活性化するオリゴヌクレオチド組成物である。別の態様において、ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖配列（アンチセンスオリゴヌクレオチド）を含む。１つの態様において、ＲＮＡｉは、単一の鎖を含む。この一本鎖ＲＮＡｉ剤のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、Sioud 2005 J. Mol. Biol. 348:1079-1090および本明細書における文献により記載されているセンスまたはアンチセンス鎖を含むことができる。したがって、本明細書は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のセンスまたはアンチセンス鎖のいずれかを含む単一の鎖を有するＲＮＡｉ剤を包含する。
ＲＮＡ干渉は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を使用して、ｄｓＲＮＡと同じ配列を含むメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を破壊する転写後標的化遺伝子サイレンシング技術である。ＲＮＡｉのプロセスは、リボヌクレアーゼＩＩＩ（Ｄｉｃｅｒ）がより長いｄｓＲＮＡをｓｉＲＮＡと呼ばれるより短いフラグメントに開裂するときに起こる。ｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）は、一般的に約２１から２３個のヌクレオチド長であり、約１９塩基対の二本鎖を含む。次に、より短いＲＮＡセグメントは、標的ｍＲＮＡの分解を介在する。Ｄｉｃｅｒは、また、翻訳調節に関与する保存された構造の前駆体ＲＮＡからの２１および２２−ヌクレオチドのスモールテンポラル(small temporal)ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）の切断に関与している。Hutvagnerら 2001, Science, 293, 834。ＲＮＡｉ応答は、または、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖に相補的な一本鎖ｍＲＮＡの開裂を介在する、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として一般的に称されるエンドヌクレアーゼ複合体を特徴とする。標的ＲＮＡの開裂は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央で起こる。
ＲＮＡｉ合成のためのキットは、例えば、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏｌａｂｓおよびＡｍｂｉｏｎから市販されている。
ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤の使用は、ＨＳＦ１活性、レベルおよび／または発現の減少、例えば、標的遺伝子または標的配列の「ノックダウン」または「ノックアウト」をもたらす。
適当なＲＮＡｉ剤は、当分野で知られているまたは当業者により考えられる何らかのプロセスにより選択することができる。例えば、選択基準は、１つ以上の以下の工程：ＨＳＦ１遺伝子配列の最初の分析およびＲＮＡｉ剤の設計；該設計は、種（ヒト、カニクイザル、マウスなど）にわたる配列類似性および他の（非ＨＳＦ１）遺伝子に対する非類似性を考慮して行うことができる；インビトロでのＲＮＡｉ剤のスクリーニング（例えば、ＷＩ−３８細胞において１０ｎＭで）；ＨｅＬａ細胞におけるＥＣ５０の決定；ＲＮＡｉ剤で処置されたＷＩ−３８、ＨｅＬａおよびＧＴＬ１６細胞の生存能力の決定、ここで、ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤がこれらの細胞の生存能力を阻害しないことが望ましい；例えば、ＴＮＦ−アルファのレベルを試験して、免疫原性を評価するための、ヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）での試験、ここで、免疫活性化配列はあまり望ましくない；ヒト全血アッセイの試験、ここで、新鮮なヒト血液をＲＮＡｉ剤で処置し、サイトカイン／ケモカインレベルを決定する［例えば、ＴＮＦ−アルファ（腫瘍壊死因子−アルファ）および／またはＭＣＰ１（単球走化性タンパク質１）］、ここで、免疫活性化配列はあまり望ましくない；試験動物におけるＨｅｐ３Ｂ皮下腫瘍を使用するインビボでの遺伝子ノックダウンの決定；例えば、薬物動力学（ＰＤ）マーカー、例えば、ＨＳＰ７０またはＨＳＰ２７を使用する、ＨＳＦ１標的遺伝子調節分析、ここで、ＨＳＦ１ノックダウンはＡ３７５細胞においてＨＳＰ７０およびＨＳＰ２７発現の用量依存的減少をもたらす；ならびにＲＮＡｉ剤の特定の修飾の最適化を含むことができる。
標的および配列
本明細書において使用される「標的配列」または「標的遺伝子」は、一次転写産物のＲＮＡプロセッシング産物であるｍＲＮＡを含む、遺伝子、例えば、ＨＳＦ１遺伝子の転写中に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の連続した部分を示す。配列の標的部分は、その位置でまたはその位置付近でｉＲＮＡ指向性開裂に関して基質として働くために少なくとも十分な長さである。例えば、標的配列は、一般的に約９−３６ヌクレオチド（「ｎｔ」）の長さ、例えば、約１５−３０ヌクレオチドの長さであり、それらの間の全ての部分的な範囲を含む。非限定的な例として、標的配列は、約１５−３０ｎｔ、約１５−２６ｎｔ、約１５−２３ｎｔ、約１５−２２ｎｔ、約１５−２１ｎｔ、約１５−２０ｎｔ、約１５−１９ｎｔ、約１５−１８ｎｔ、約１５−１７ｎｔ、約１８−３０ｎｔ、約１８−２６ｎｔ、約１８−２３ｎｔ、約１８−２２ｎｔ、約１８−２１ｎｔ、約１８−２０ｎｔ、約１９−３０ｎｔ、約１９−２６ｎｔ、約１９−２３ｎｔ、約１９−２２ｎｔ、約１９−２１ｎｔ、約１９−２０ｎｔ、約２０−３０ｎｔ、約２０−２６ｎｔ、約２０−２５ｎｔ、約２０−２４ｎｔ、約２０−２３ｎｔ、約２０−２２ｎｔ、約２０−２１ｎｔ、約２１−３０ｎｔ、約２１−２６ｎｔ、約２１−２５ｎｔ、約２１−２４ｎｔ、約２１−２３ｎｔ、または約２１−２２ｎｔであり得る。
本明細書において使用される「配列を含む鎖」は、標準ヌクレオチド命名法を使用して示される配列により記載されているヌクレオチドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを示す。
本明細書において使用され、他に記載のない限り、「相補的」なる用語は、特定の条件で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとハイブリダイズし、二本鎖構造を形成する第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの能力を示す。このような条件は、例えば、ストリンジェント、例えば、４００ｍＭのＮａＣｌ、４０ｍＭのＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０℃または７０℃ １２−１６時間、その後洗浄であり得る。他の条件、例えば、生物体内で遭遇し得る生理学的に関連した条件を、適用できる。当業者は、ハイブリダイズされたヌクレオチドの最終的な適用にしたがって、２つの配列の相補性の試験のために非常に適当な条件セットを決定することができる。
本明細書に記載されているｉＲＮＡ内、例えば、ｄｓＲＮＡ内での相補的配列は、１つまたは両方の配列の全長にわたって、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドへの塩基対合を含む。このような配列は、本明細書において互いに「完全に相補的」であると称さることができる。しかしながら、第１の配列が本明細書において第２の配列に対して「実質的に相補的」であると称されるとき、２つの配列は完全に相補的であり得、またはそれらは最大３０塩基対の二本鎖のためのハイブリダイゼーション時に１つ以上であるが、一般的に最大５、４、３または２個の不一致な塩基対を形成し得るが、それらの最終的な適用に非常に関連した条件下でハイブリダイズする能力、例えば、ＲＩＳＣ経路を介する遺伝子発現の阻害を保持している。しかしながら、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーション時に、１つ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されるとき、このようなオーバーハングは相補性の決定に関して不一致と見なしてはならない。例えば、１つの２１ｎｔ長のオリゴヌクレオチドおよび別の２３ｎｔ長のオリゴヌクレオチドを含むｄｓＲＮＡは（ここで、より長いオリゴヌクレオチドは、より短いオリゴヌクレオチドに完全に相補的である２１ｎｔの配列を含む）、本明細書における目的のために「完全に相補的」となお称され得る。
本明細書において使用される「相補的」配列は、また、ハイブリダイズする能力に対して上記必要条件を満たす限り、非ワトソンクリック塩基対および／または非天然および修飾されたヌクレオチドから形成される塩基対を含むか、またはこれらの塩基対から完全に形成され得る。このような非ワトソンクリック塩基対は、限定はしないが、Ｇ：Ｕ ＷｏｂｂｌｅまたはＨｏｏｇｓｔｅｉｎ塩基対合を含む。
本明細書において「相補的」、「完全に相補的」および「実質的に相補的」なる用語は、ｄｓＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖間、またはｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖および標的配列間の塩基マッチングに対して使用され得、これらの使用の文脈から理解される。
本明細書において使用されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）「の少なくとも一部に実質的に相補的」であるポリヌクレオチドは、興味あるｍＲＮＡ（例えば、ＨＳＦ１をコードするｍＲＮＡ）の連続した部分に実質的に相補的であるポリヌクレオチドを示す。例えば、配列がＨＳＦ１をコードするｍＲＮＡの非中断部分に実質的に相補的であるとき、ポリヌクレオチドはＨＳＦ１のｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的である。
二本鎖ＲＮＡ
本明細書において使用される「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」なる用語は、２つの逆平行のおよび実質的に相補的な核酸鎖を含むハイブリダイズされた二本鎖領域を有するＲＮＡ分子または分子の複合体を含むｉＲＮＡを示し、標的ＲＮＡに対して「センス」および「アンチセンス」方向を有すると称される。ｍＲＮＡ標的に対するアンチセンス鎖はまた、「ガイド」鎖とも呼ばれ、センス鎖はまた、「パッセンジャー」鎖とも呼ばれる。パッセンジャー鎖は、少なくとも１つ以上の以下のもの：他の鎖と比較して１つ以上の余分なヌクレオチド（例えば、バルジ(bulge)または１ｎｔのループ）、他の鎖と比較してニック、ギャップなどを含むことができる。
二本鎖領域は、ＲＩＳＣ経路を介する所望の標的ＲＮＡの特異的な分解を可能にするが、一般的に９から３６塩基対の長さ、例えば、１５−３０塩基対の長さの範囲であるあらゆる長さであり得る。９から３６塩基対の二本鎖を考慮すると、二本鎖は、この範囲のあらゆる長さ、例えば、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６および限定はしないが、１５−３０塩基対（「ｂｐ」）、１５−２６ｂｐ、１５−２３ｂｐ、１５−２２ｂｐ、１５−２１ｂｐ、１５−２０ｂｐ、１５−１９ｂｐ、１５−１８ｂｐ、１５−１７ｂｐ、１８−３０ｂｐ、１８−２６ｂｐ、１８−２３ｂｐ、１８−２２ｂｐ、１８−２１ｂｐ、１８−２０ｂｐ、１９−３０ｂｐ、１９−２６ｂｐ、１９−２３ｂｐ、１９−２２ｂｐ、１９−２１ｂｐ、１９−２０ｂｐ、２０−３０ｂｐ、２０−２６ｂｐ、２０−２５ｂｐ、２０−２４ｂｐ、２０−２３ｂｐ、２０−２２ｂｐ、２０−２１ｂｐ、２１−３０ｂｐ、２１−２６ｂｐ、２１−２５ｂｐ、２１−２４ｂｐ、２１−２３ｂｐまたは２１−２２ｂｐを含むそれらの間のあらゆる小領域であり得る。Ｄｉｃｅｒおよび同様の酵素で処理することにより細胞中で産生されるｄｓＲＮＡは、一般的に約１９−２２塩基対の範囲の長さである。ｄｓＤＮＡの二本鎖領域の一本鎖は、標的ＲＮＡの領域に実質的に相補的である配列を含む。二本鎖構造を形成する２つの鎖は、少なくとも１つの自己相補的な領域を有する単一のＲＮＡ分子から形成され得るか、または２つ以上の別々のＲＮＡ分子から形成され得る。二本鎖領域が単一の分子の２つの鎖から形成される場合、分子は、二本鎖構造を形成する一方の鎖の３’−末端およびそれぞれの他方の鎖の５’−末端間で、ヌクレオチドの一本鎖（本明細書において「ヘアピンループ」と称される）により分離される二本鎖領域を有し得る。ヘアピンループは、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含むことができ；いくつかの態様において、ヘアピンループは、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも２３またはそれ以上の不対ヌクレオチドを含むことができる。ｄｓＲＮＡの２つの実質的に相補的な鎖が別々のＲＮＡ分子からなる場合、これらの分子は、必ずしもではないが、共有的に結合され得る。２つの鎖がヘアピンループ以外の手段により共有的に結合されるとき、結合構造は「リンカー」と称される。「ｓｉＲＮＡ」からなる用語は、また、上記のｄｓＲＮＡを称するために本明細書において使用される。
１つの局面において、ＲＮＡ干渉剤は、標的ＲＮＡ配列と相互作用し、標的ＲＮＡの開裂を指向する一本鎖ＲＮＡを含む。理論に縛られることは望まないが、植物および無脊椎動物細胞に導入された長い二本鎖ＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒとして知られているＩＩＩ型エンドヌクレアーゼによりｓｉＲＮＡに破壊される（Sharpら Genes Dev. 2001, 15:485）。リボヌクレアーゼ−ＩＩＩ−様酵素であるＤｉｃｅｒは、ｄｓＲＮＡを特徴的な２つの塩基の３’オーバーハングを有する１９−２３塩基対の低分子干渉ＲＮＡに処理する（Bernsteinら (2001) Nature 409:363）。次に、ｓｉＲＮＡはＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に取り込まれ、１つ以上のヘリカーゼがｓｉＲＮＡ二本鎖をほどくと、相補的アンチセンス鎖を標的認識に導くことを可能にする（Nykanenら (2001) Cell 107:309）。適当な標的ｍＲＮＡに結合すると、ＲＩＳＣ内の１つ以上のエンドヌクレアーゼは標的を開裂し、サイレンシングを誘導する（Elbashirら (2001) Genes Dev. 15:188）。したがって、１つの局面において、本願明細書は、標的遺伝子のサイレンシングをもたらすためにＲＩＳＣ複合体の形成を促進する一本鎖ＲＮＡに関する。
ＨＳＦ１の下方調節
本明細書において使用される「下方調節する」は、ＨＳＦ１の生物学的活性および／または発現におけるあらゆる統計的に有意な減少、例えば、活性（すなわち、完全阻害）および／または発現の完全な阻止を示す。例えば、「下方調節」は、ＨＳＦ１活性および／または発現において少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％の減少を示し得る。
本明細書において使用されるＨＳＦ１において「阻害する」または「阻害」は、ＨＳＦ１の生物学的活性および／または発現におけるあらゆる統計的に有意な減少、例えば、活性および／または発現の完全な阻止を示す。例えば、「阻害」は、ＨＳＦ１活性および／または発現において少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％の減少を示し得る。本明細書において使用される「阻害する」なる用語は、同様に、他のあらゆる生物学的薬剤または組成物における活性および／または発現における有意な減少を示す。
「レベル」に関して、ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤が、ＨＳＦ１の検出可能なレベル、例えば、ＨＳＦ１のｍＲＮＡのレベルまたはＨＳＦ１のタンパク質のレベルを妨げることができるものを意味する。
「活性」に関して、ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤が、本明細書に記載されてい、または文献において知られているＨＳＦ１の何らかの既知の活性を変化させることができるものを意味する。
「熱ショック」（ＨＳ）および「熱ショック応答」（ＨＳＲ）」に関して、環境ストレス、例えば、高温に対する生化学的応答を意味する。実験室において、実験動物および細胞は「非ショック」温度（３７℃以下）で維持され得るが、熱ショックは高温（例えば、４０、４１、４２、４３、４４または４５℃以上）で誘導され得る。実験的に、熱ショックは、一般的に、４２、４３または４４℃で誘導される。
熱ショックは、種々のタンパク質の誤った折り畳み、変性および凝集により特徴付けられる；誘導された熱ショックタンパク質（ＨＳＰまたはＨＳＰ）は、これらのタンパク質を修復および／または除去するシャペロンタンパク質（シャペロニン）および他のものを含む。熱ショック応答中に誘導される遺伝子は、とりわけ、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ７０およびＨＳＰ２７を含む。熱ショック応答はまた、さらなる環境条件、例えば、酸化ストレス、化学的ストレス、遊離基、ＡＴＰ枯渇、アシドーシス、重金属、アルコール、抗生物質の存在、エネルギー代謝の阻害剤、病理学的状態、例えば、虚血および再潅流、炎症、組織損傷、感染および遺伝病と関連する変異タンパク質により誘導（または模倣）され得る。Jollyら 2000 J. Natl. Cancer Inst. 92: 1564-1572; Daiら 2007 Cell 130: 1005-1018。
ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤
１つの態様において、本明細書は、ＨＳＦ１遺伝子（またはその部分）に相補的であるＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤もしくは他のアンチセンス核酸、またはアンチセンス核酸をコードする組換え発現ベクターに関する。本明細書において使用される「アンチセンス」核酸は、ＨＳＦ１タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、ＨＳＦ１遺伝子の二本鎖ＤＮＡのコード鎖に相補的である、ｍＲＮＡに相補的である、または、コード鎖に相補的である）ヌクレオチド配列を含む。
細胞において特定のタンパク質の発現を下方調整するためのアンチセンス核酸の使用は、当分野でよく知られている。アンチセンス核酸は、別の核酸のコード鎖（例えば、ｍＲＮＡ）に相補的である配列を含み、該鎖へ水素結合することができる。ｍＲＮＡに相補的であるアンチセンス配列は、コード領域、ｍＲＮＡの５’または３’非翻訳領域、および／またはコードおよび非翻訳領域を架橋する領域、および／またはそれらの部分に相補的であり得る。さらに、アンチセンス核酸は、ｍＲＮＡをコードする遺伝子の調節領域、例えば、転写または翻訳開始配列または調節要素に相補的であり得る。好ましくは、アンチセンス核酸は、ｍＲＮＡのコード鎖における開始コドンに先立つもしくは架かる領域またはｍＲＮＡの３’非翻訳領域に相補的であり得る。
アンチセンス核酸は、ワトソンクリック塩基対の規則にしたがって設計することができる。アンチセンス核酸分子は、ＨＳＦ１のｍＲＮＡの全コード領域に相補的であり得るが、少なくとも１つの態様において、ＨＳＦ１のｍＲＮＡのコードまたは非コード領域の一部に対してアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＨＳＦ１のｍＲＮＡの翻訳開始部位の周囲の領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５、約１０、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５もしくは約５０ｎｔ長、または５、１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５もしくは５０ｎｔ長であり得る。
ｓｉＲＮＡは、内部に、または末端の一方にもしくは末端の両方に修飾を有し得る。５’末端での修飾の例は、図１において説明される。これらは、Ｃ６−アルキル（５’−ヘキシルホスフェート）、５’−メチルオキシ；５’−逆方向ｄＴ（ｉｄＴ）、および５’−ベータ−Ｌ−ウリジンを含む。末端での修飾は、ｓｉＲＮＡを安定化させる手助けをし、血液中のヌクレアーゼによる分解から保護することができる。ｓｉＲＮＡは、所望により、遺伝子のスプライス部位、例えば、エキソン−イントロン接合部付近でまたは該部位で知られているまたは予測されたＨＳＦ１のｍＲＮＡの領域に指向され得る。ｓｉＲＮＡ、また、所望により、ｍＲＮＡの知られているまたは予測された暴露および／または一本鎖領域（例えば、ループ）をアニールするように設計することができる。
アンチセンス核酸は、当分野で知られている手段を使用する化学合成および酵素ライゲーション反応を使用して構築することができる。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然ヌクレオチド、または、的外れの効果を減少させる、および／または分子の生物学的安定性を増加させるか、またはアンチセンスおよびセンス核酸間で形成される二本鎖の物理的安定性を増加させるように設計された様々に修飾されたヌクレオチドを使用して化学的に合成することができる。少なくとも１つの態様において、ホスホロチオエート結合を含む修飾された糖骨格またはその誘導体、およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用することができる。
「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」および「Ｕ」のそれぞれは、一般的に、塩基としてグアニン、シトシン、アデニン、チミジンおよびウラシルをそれぞれ含むヌクレオチドを表す。しかしながら、「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」なる用語は、また、修飾されたヌクレオチドまたは代理置換部分を示すことができる。当業者は、グアニン、シトシン、アデニンおよびウラシルが、このような置換部分を有するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対特性を実質的に変化させることなく、他の部分により置き換えられ得ることをよく知っている。例えば、限定されないが、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシンまたはウラシルを含むヌクレオチドと塩基対形成し得る。したがって、ウラシル、グアニンまたはアデニンを含むヌクレオチドは、本明細書において特徴付けられるｄｓＲＮＡのヌクレオチド配列において、例えば、イノシンを含むヌクレオチドにより置換され得る。別の例において、オリゴヌクレオチドにおいてアデニンおよびシトシンは、どこでも、それぞれグアニンおよびウラシルで置換され、標的ｍＲＮＡとＧ−Ｕゆらぎ塩基対を形成することができる。このような置換部分を含む配列は、本明細書において特徴付けられる組成物および方法に適当である。
修飾
当業者は、「ＲＮＡ分子」または「リボヌクレオチド分子」なる用語は、天然に発現される、または見いだせるＲＮＡ分子のみでなく、本明細書に記載されている、または当分野で知られている１つ以上のリボヌクレオチド／リボヌクレオシド類似体または誘導体を含むＲＮＡの類似体および誘導体も包含すると認識できる。厳密に言えば、「リボヌクレオシド」は、ヌクレオシド塩基およびリボース糖を含み、「リボヌクレオチド」は、１、２または３つのリン酸部分を有するリボヌクレオシドである。しかしながら、「リボヌクレオシド」および「リボヌクレオチド」なる用語は、本明細書において使用されるとき均等であると考えることができる。ＲＮＡは、例えば、本明細書の以下に記載されている核酸塩基構造またはリボース−リン酸骨格構造において修飾され得る。しかしながら、リボヌクレオシド類似体または誘導体を含む分子は、二本鎖を形成する能力を保持しなければならない。非限定的な例として、ＲＮＡ分子は、また、限定はしないが、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’ホスホロチオエート結合基を含むヌクレオシド、コレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結した末端ヌクレオシド、ロックヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオシド、２’−アミノ−修飾ヌクレオシド、２’−アルキル−修飾ヌクレオシド、モルホリノヌクレオシド、非ロックリボヌクレオチド（例えば、ＷＯ２００８／１４７８２４に記載されている非環状ヌクレオチドモノマー）、ヌクレオシドを含むホスホロアミダートもしくは非天然塩基、またはそれらの任意の組合せを含む、少なくとも１つ修飾されたリボヌクレオシドを含むことができる。あるいは、ＲＮＡ分子は、少なくとも２つの修飾されたリボヌクレオシド、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０またはそれ以上、最大全長のｄｓＲＮＡ分子を含むことができる。修飾は、必ずしも、ＲＮＡ分子におけるこのような複数の修飾されたリボヌクレオシドのそれぞれで同じではない。１つの態様において、本明細書に記載されている方法および組成物における使用のために考慮される修飾されたＲＮＡは、必要な二本鎖構造を形成する能力を有し、ＲＩＳＣ経路を介して標的ＲＮＡの特異的な分解を可能にするか、または介在するペプチド核酸（ＰＮＡ）である。
アンチセンス核酸を産生するために使用することができる修飾されたヌクレオチドの例は、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ−Ｄ−ガラクトシルケウオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、ベータ−Ｄ−マンノシルケウオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、ケウオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリンを含む。
１つの局面において、修飾されたリボヌクレオシドは、デオキシリボヌクレオシドを含む。このような場合、ｉＲＮＡ剤は、１つ以上のデオキシヌクレオシド、例えば、デオキシヌクレオシドオーバーハング、またはｄｓＲＮＡの二本鎖部分内の１つ以上のデオキシヌクレオシドを含むことができる。しかしながら、いかなる場合でも、二本鎖ＤＮＡ分子が「ｉＲＮＡ」なる用語により包含されないことは自明である。
２つのヌクレオチド３’−オーバーハングを有する２１−ｍｅｒ ｓｉＲＮＡ二本鎖の３’−末端ヌクレオチドオーバーハングセグメントをデオキシリボヌクレオチドで置換することは、ＲＮＡｉ活性における副作用を有さない。ｓｉＲＮＡのそれぞれの末端での最大４つのヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドで置換することは、許容されるが、デオキシリボヌクレオチドでの完全な置換は、ＲＮＡｉ活性をもたらさない。国際ＰＣＴ公開ＷＯ００／４４９１４、およびＢｅａｃｈら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／６８８３６は、ｓｉＲＮＡが、リン酸−糖骨格またはヌクレオシドのいずれかに修飾を含み、少なくとも１つの窒素または硫黄ヘテロ原子を含み得ることをあらかじめ示唆している。Ｋｒｅｕｔｚｅｒらカナダ特許出願第２，３５９，１８０号はまた、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼＰＫＲの活性化を中和するために、ｄｓＲＮＡ構築物における使用のための特定の化学修飾、具体的には、２’−アミノまたは２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、および２’−Ｏまたは４’−Ｃメチレン架橋を含むヌクレオチドを記載している。さらなる３’−末端ヌクレオチドオーバーハングは、ｄＴ（デオキシチミジン）、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレンチミジン（ｅＴ）、および２−ヒドロキシエチルホスフェート（ｈｐ）を含む。
Ｐａｒｒｉｓｈら（2000 Molecular Cell 6: 1077-1087）は、長い（＞２５ｎｔ）ｓｉＲＮＡ転写産物を使用してＣ．エレガンスにおけるｕｎｃ−２２遺伝子を標的とする特定の化学修飾を試験した。著者らは、Ｔ７およびＴ３ ＲＮＡポリメラーゼでチオリン酸エステルヌクレオチド類似体を組み込むことによって、これらのｓｉＲＮＡ転写産物へのチオリン酸エステル残基の導入を記載しており、２つのホスホロチオエート修飾塩基を有するＲＮＡもまた、ＲＮＡｉとしての有効性における実質的な減少を有したことを観察した。さらに、Ｐａｒｒｉｓｈらは、２つ以上の残基のホスホロチオエート修飾が、干渉活性がアッセイできないほどに、インビトロでＲＮＡを非常に不安定化させることを報告した。同上１０８１。著者らはまた、長いｓｉＲＮＡ転写産物におけるヌクレオチド糖の２’位での特定の修飾を試験し、リボヌクレオチドに対するデオキシヌクレオチドの置換が、とりわけウリジンのチミジンへのおよび／またはシチジンのデオキシ−シチジンへの置換の場合、干渉活性において実質的な減少を生じることを見出した。同上。加えて、著者らは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖において、ウラシルに対して４−チオウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシルおよび３−（アミノアリル）ウラシル、ならびにグアノシンに対してイノシンで置換することを含む特定の塩基修飾を試験した。４−チオウラシルおよび５−ブロモウラシル置換は許容されるようであるが、Ｐａｒｒｉｓｈは、いずれかの鎖に組み込まれるとき、イノシンが干渉活性において実質的な減少を生産することを報告した。Ｐａｒｒｉｓｈはまた、アンチセンス鎖中の５−ヨードウラシルおよび３−（アミノアリル）ウラシルの組み込みが、同様にＲＮＡｉ活性において実質的な減少をもたらすことを報告した。
当業者は、所望により、当分野で知られている任意の慣用の方法を使用して、ｓｉＲＮＡを合成および修飾することができることを理解している（Henschelら 2004 DEQOR:a web-based tool for the design and quality control of siRNAs. Nucleic Acids Research 32 (Web Server Issue）:W113-W120参照）。さらに、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ発現構築物／ベクターに対して有用である種々の調節配列（例えば、構成的または誘導プロモーター、組織−特異的プロモーターまたはそれらの機能性フラグメントなど）があることが当業者には明らかである。
ヌクレアーゼ安定性および有効性における有意な増強で核酸分子に導入することができる糖、塩基、リン酸および骨格修飾を記載している当分野でいくつかの例がある。例えば、オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性基での修飾、例えば、２’−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｈ、ヌクレオチド塩基修飾により、安定性を増加する、および／または生物学的活性を増加するように修飾される（概観のために、Usman and Cedergren 1992 TIBS. 17: 34; Usmanら 1994 Nucleic Acids Symp. Ser. 31: 163; Burginら 1996 Biochemistry 35: 14090参照）。核酸の糖修飾は、当分野で広範囲に記載されている。
ＲＮＡｉ剤のさらなる修飾および接合は、記載されている。Soutschekら2004 Nature 432: 173-178は、ピロリジンリンカーの手段によりｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖の３’−末端へのコレステロールの接合を与え、それにより共有および不可逆性複合体を産生した。ｓｉＲＮＡの化学修飾（他の分子との接合を含む）は、また、インビボで薬物動態学の保持時間および効率を改善するために作られ得る。
種々の態様において、ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチドを含む。
種々の態様において、ＲＮＡｉ剤は、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む。
別の態様において、ＲＮＡｉは、ギャップまたは塩基の欠落を含む。例えば、リン酸−糖骨格は、存在するが、塩基の欠落があり得る。
別の態様において、ＲＮＡｉ剤は、一本鎖ニックを有する（例えば、骨格において断絶または結合の欠落）。このニックは、例えば、センス鎖においてであり、ニックなしの対応するＲＮＡｉ剤よりも的外れの効果が小さくてもよい低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡまたはｓｉｓｉＲＮＡを生産することができる。
アンチセンス核酸またはＲＮＡｉ剤はまた、代替骨格、例えば、ロック核酸（ＬＮＡ）、モルホリノ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、またはグリコール核酸（ＧＮＡ）を有することができ、および／または、標識することができる（例えば、放射性標識または他の点ではタグ）。１つまたは両方の鎖は、代替骨格を含むことができる。
さらに別の態様において、本願明細書の方法により使用されるアンチセンス核酸分子は、α−アノマー核酸分子を含むことができる。α−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特定の二本鎖ハイブリッドを形成し、通常のβユニットに反して、鎖は互いに平行する。Gaultierら 1987 Nucleic Acids. Res. 15: 6625-6641。アンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（Inoueら 1987 Nucleic Acids Res. 15: 6131-6148）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ類似体（Inoueら 1987 FEBS Lett. 215: 327-330）を含むことができる。
さらに別の態様において、アンチセンス核酸はリボザイムである。リボザイムは、相補的領域を有する一本鎖核酸、例えば、ｍＲＮＡを開裂させることができるリボヌクレアーゼ活性を有する触媒ＲＮＡ分子である。したがって、リボザイム［例えば、ハンマーヘッド型リボザイム（Haselhoffら1988, Nature 334: 585-591に記載されている）］は、ＨＳＦ１のｍＲＮＡ転写産物を触媒的に開裂させるために使用して、それによりＨＳＦ１のｍＲＮＡの翻訳を阻害することができる。
あるいは、遺伝子発現は、ＨＳＦ１の調節領域（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的であるヌクレオチド配列を標的化することにより阻害され、ＨＳＦ１遺伝子の転写を防止する三重らせん構造を形成することができる。一般的に、Helene 1991 Anticancer Drug Des. 6(6): 569-84; Heleneら 1992 Ann. N.Y. Acad. Sci. 660: 27-36;およびMaher 1992, Bioassays 14(12): 807-15参照。
あるいは、アンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、興味ある標的核酸に対してアンチセンス方向となる）発現ベクターを使用して生物学的に生産することができる。
本願明細書のアンチセンス核酸分子は、一般的に、ＨＳＦ１をコードする細胞ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズし、転写および／または翻訳を阻害することによって発現を阻害するように、対象に投与されるか、またはインサイチューで生成される。アンチセンス核酸分子の投与経路の例は、組織部位への直接注射を含む。あるいは、アンチセンス核酸分子は、標的細胞を標的とするように修飾され、次に全身的に投与され得る。例えば、全身投与において、アンチセンス分子は、例えば、アンチセンス核酸分子を細胞表面受容体または抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結することにより、選択細胞表面上で発現される受容体または抗原に特異的に結合することができるように修飾することができる。アンチセンス核酸分子は、また、当分野でよく知られている、および、例えば、ＵＳ２００７０１１１２３０（この全内容を本明細書に包含させる）に記載されているベクターを使用して細胞に送達することができる。十分な細胞内濃度のアンチセンス分子をなし遂げるために、アンチセンス核酸分子が強いｐｏｌ ＩＩまたはｐｏｌ ＩＩＩプロモーターのコントロール下に置かれているベクター構築物を、使用することができる。
ＲＮＡ干渉
ＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）は、種々の系において研究されている。ショウジョウバエの胚溶解物における最近の研究は（Elbashirら 2001 EMBO J. 20: 6877およびTuschlら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／７５１６４）、ｓｉＲＮＡの長さ、構造、化学的組成、および効率的なＲＮＡｉ活性を介在するために重要である配列の特定の必要条件を示した。これらの研究は、２１−ヌクレオチドのｓｉＲＮＡ二本鎖が、３’−末端ジヌクレオチドオーバーハングを含むとき、非常に活性であることを示した。２’−デオキシヌクレオチド（２’−Ｈ）での３’−末端ｓｉＲＮＡオーバーハングヌクレオチドの置換は、許容された。加えて、ｓｉＲＮＡ二本鎖の標的相補鎖上の５’−リン酸は、通常、ｓｉＲＮＡ活性のために必要である。
より長いｄｓＲＮＡの使用は、記載されている。例えば、Ｂｅａｃｈら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／６８８３６、内因性由来のｄｓＲＮＡを使用して遺伝子発現を弱めることを記載している。Ｔｕｓｃｈｌら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／７５１６４は、ショウジョウバエのインビトロＲＮＡｉ系ならびにある機能性ゲノムおよびある治療的適用のための特異的ｓｉＲＮＡ分子の使用を記載している。Ｌｉら国際ＰＣＴ公開ＷＯ００／４４９１４は、特定の標的遺伝子の発現を弱めるための、特定の長さ（１４１ｂｐ−４８８ｂｐ）の酵素的に合成された、またはベクターで発現されたｄｓＲＮＡの使用を記載している。Ｚｅｒｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３６６４６は、特定の長さ（５５０ｂｐ−７１４ｂｐ）の酵素的に合成された、またはベクターで発現されたｄｓＲＮＡ分子を使用して哺乳動物細胞における特定の遺伝子の発現を阻害するための特定の方法を記載している。Ｆｉｒｅら国際ＰＣＴ公開ＷＯ９９／３２６１９は、線虫における遺伝子発現の阻害において使用するための、ある長さのｄｓＲＮＡ分子を細胞に導入する特定の方法を記載している。Ｐｌａｅｔｉｎｃｋら国際ＰＣＴ公開ＷＯ００／０１８４６は、特定の長いｄｓＲＮＡ分子を使用して細胞において特定の表現型を与えることに関与する特定の遺伝子を同定するための特定の方法を記載している。Ｍｅｌｌｏら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／２９０５８は、ｄｓＲＮＡ介在ＲＮＡｉに関与する特定の遺伝子の同定を記載している。Ｐａｃｈｕｃｋら国際ＰＣＴ公開ＷＯ００／６３３６４は、ある長い（少なくとも２００ｎｔ）ｄｓＲＮＡ構築物を記載している。Ｄｅｓｃｈａｍｐｓ Ｄｅｐａｉｌｌｅｔｔｅら国際ＰＣＴ公開ＷＯ９９／０７４０９は、ある抗ウイルス剤と組み合わせられた特定のｄｓＲＮＡ分子からなる特定の組成物を記載している。Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら国際ＰＣＴ公開９９／５３０５０および１９９８、ＰＮＡＳ、９５、１３９５９−１３９６４は、特定のｄｓＲＮＡを使用して植物細胞における核酸の表現型発現を減少させるための特定の方法を記載している。Ｄｒｉｓｃｏｌｌら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／４９８４４は、標的化生物体における遺伝子サイレンシングの促進における使用のための特定のＤＮＡ発現構築物を記載している。
他に種々のＲＮＡｉおよび遺伝子サイレンシング系が報告されている。例えば、Parrishら2000, Molecular Cell 6: 1077-1087は、Ｃ．エレガンスのｕｎｃ−２２遺伝子を標的化する特定の化学的に修飾されたｄｓＲＮＡ構築物を記載している。Ｇｒｏｓｓｎｉｋｌａｕｓ国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／３８５５１は、あるｄｓＲＮＡを使用して植物におけるポリコーム遺伝子発現を制御する特定の方法を記載している。Ｃｈｕｒｉｋｏｖら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／４２４４３は、あるｄｓＲＮＡを使用して生物体の遺伝的特性を修飾する特定の方法を記載している。Ｃｏｇｏｎｉら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／５３４７５は、アカパンカビ サイレンシング遺伝子を単離するための特定の方法およびそれらの使用を記載している。Ｒｅｅｄら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／６８８３６は、植物における遺伝子サイレンシングのための特定の方法を記載している。Ｈｏｎｅｒら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／７０９４４は、あるｄｓＲＮＡを使用してパーキンソン病モデルとしてトランスジェニック線虫を使用して薬物スクリーニングの特定の方法を記載している。Ｄｅａｋら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／７２７７４は、ショウジョウバエにおいてＲＮＡｉと関連し得る特定のショウジョウバエ由来遺伝子産物を記載している。Ａｒｎｄｔら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／９２５１３は、ＲＮＡｉを増強する因子を使用することにより遺伝子抑制を介在する特定の方法を記載している。Ｔｕｓｃｈｌら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０２／４４３２１は、特定の合成ｓｉＲＮＡ構築物を記載している。Ｐａｃｈｕｋら国際ＰＣＴ公開ＷＯ００／６３３６４およびＳａｔｉｓｈｃｈａｎｄｒａｎら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／０４３１３は、ある長い（２５０ｂｐを越える）ベクターで発現されたｄｓＲＮＡを使用して特定のポリヌクレオチド配列の機能を阻害する特定の方法および組成物を記載している。Ｅｃｈｅｖｅｒｒｉら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０２／３８８０５は、ＲＮＡｉを介して同定された特定のＣ．エレガンス遺伝子を記載している。Ｋｒｅｕｔｚｅｒら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０２／０５５６９２、ＷＯ０２／０５５６９３およびＥＰ１１４４６２３Ｂ１は、ｄｓＲＮＡを使用して遺伝子発現を阻害する特定の方法を記載している。Ｇｒａｈａｍら国際ＰＣＴ公開ＷＯ９９／４９０２９およびＷＯ０１／７０９４９およびＡＵ４０３７５０１は、特定のベクターで発現されたｓｉＲＮＡ分子を記載している。Ｆｉｒｅら米国特許第６，５０６，５５９号は、ＲＮＡｉを介在する特定の長いｄｓＲＮＡ（２９９ｂｐ−１０３３ｂｐ）の構築物を使用してインビトロで遺伝子発現を阻害する特定の方法を記載している。Martinezら2002, Cell, 110, 563-574は、ＨｅＬａ細胞においてＲＮＡ干渉を介在する特定の５’リン酸化一本鎖ｓｉＲＮＡを含む特定の一本鎖ｓｉＲＮＡ構築物を記載している。Harborthら2003, Antisennse & Nucleic Acis Drug Development, 13, 83-105は、特定の化学的に、および構造的に修飾されたｓｉＲＮＡ分子を記載している。Chiu and Rana, 2003, RNA, 9, 1034-1048は、特定の化学的に、および構造的に修飾されたｓｉＲＮＡ分子を記載している。Ｗｏｏｌｆら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０６４６２６およびＷＯ０３／０６４６２５は、特定の化学的に修飾されたｄｓＲＮＡ構築物を記載している。
種々の態様において、ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤は、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性を与える部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴ乳酸エステル １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン性物質、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している。
ＲＮＡｉ剤の送達
本願明細書のＲＮＡｉ剤は、当分野で知られている任意の方法により、（例えば、インビトロで細胞または患者に）送達または導入することができる。
ｉＲＮＡを言及しているとき、「細胞に導入」は、当業者により理解されるとおり、細胞への摂取または吸収を容易にするか、または生じることを意味する。ｉＲＮＡの吸収または摂取は、自発的拡散性の、もしくは活性な細胞過程により、または助剤もしくはデバイスにより起こり得る。この用語の意味は、インビトロでの細胞に限定されず；ｉＲＮＡはまた、生体の一部である「細胞に導入」され得る。このような場合、細胞への導入は、生物体への送達を含む。例えば、インビボ送達において、ｉＲＮＡは、組織部位に注射されるか、または全身的に投与され得る。インビボでの送達はまた、ベータグルカン送達系、例えば、米国特許第５，０３２，４０１および５，６０７，６７７号ならびに米国公開番号２００５／０２８１７８１（これらはそれら全体を出典明示により本明細書に包含させる）に記載されているものによってもよい。細胞へのインビトロでの導入は、当分野で知られている方法、例えば、エレクトロポレーションおよびリポフェクションを含む。さらなるアプローチは、以下に記載されているか、当分野で知られている。
組織へのＲＮＡｉ剤の送達は、物質が標的臓器に到達しなければならず、また、標的細胞の細胞質に入らなければならないという両方の問題がある。ＲＮＡは細胞膜を貫通することができず、裸のＲＮＡｉ剤の全身送達は成功しそうにない。ＲＮＡは、血清中のＲＮＡｓｅ活性により迅速に破壊される。これらの理由のため、ＲＮＡｉ剤を標的細胞に送達するための他のメカニズムが、考案されている。当分野で知られている方法は、限定はしないが：ウイルス送達（レトロウイルス、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、ＡＡＶ）；リポソーム（リポフェクタミン、陽イオン性ＤＯＴＡＰ、天然ＤＯＰＣ）またはナノ粒子（カチオン性ポリマー、ＰＥＩ）、細菌送達（ｔｋＲＮＡｉ）、および安定性を改善するためのｓｉＲＮＡの化学修飾（ＬＮＡ）を含む。Xiaら 2002 Nat. Biotechnol. 20およびDevroeら 2002. BMC Biotechnol. 2 1: 15は、ウイルスベクターへのｓｉＲＮＡの取り込みを記載している。ＲＮＡｉ剤の送達のための他の系が考えられており、本願明細書のＲＮＡｉ剤は、ＦＤＡまたは他の管轄機関によりすでに認められたおよび／または承認された種々の方法により送達することができる。
リポソームは、以前に薬物送達（例えば、化学療法の送達）のために使用されている。リポソーム（例えば、陽イオン性リポソーム）は、ＰＣＴ公開ＷＯ０２／１００４３５Ａ１、ＷＯ０３／０１５７５７Ａ１およびＷＯ０４０２９２１３Ａ２；米国特許第５，９６２，０１６；５，０３０，４５３；および６，６８０，０６８号；ならびに米国特許出願２００４／０２０８９２１に記載されている。リポソームを製造する方法はまた、ＷＯ０４／００２４５３Ａ１に記載されている。さらに、中性脂質が、陽イオン性リポソームに組み込まれている（例えば、Farhoodら1995）。陽イオン性リポソームは、ＲＮＡｉ剤を種々の細胞型へ送達するために使用されている（Sioud and Sorensen 2003；米国特許出願２００４／０２０４３７７；Duxburyら2004; Donze and Picard, 2002）。中性リポソームの使用は、Millerら1998および米国公開２００３／００１２８１２に記載されている。
本明細書において使用される「ＳＮＡＬＰ」なる用語は、安定な核酸脂質粒子を示す。ＳＮＡＬＰは、核酸、例えば、ｉＲＮＡまたはｉＲＮＡが転写されるプラスミドを含む減少した水性内部をコートしている脂質の小胞を示す。ＳＮＡＬＰは、例えば、米国特許出願公開第２００６０２４００９３、２００７０１３５３７２号および国際出願ＷＯ２００９０８２８１７に記載されている。これらの出願は、それら全体において出典明示により本明細書に包含させる。
脂質ベース、アミンベースおよびポリマーベースの技術を使用する化学的トランスフェクションは、Ambion Inc., Austin, Tex.; and Novagen, EMD Biosciences, Inc, an Affiliate of Merck KGaA, Darmstadt, Germany); Ovcharenko D (2003) “Efficient delivery of siRNAs to human primary cells” Ambion TechNotes 10 (5): 15-16)の産物において記載されている。さらに、Songら(Nat Med. published online (Fete l 0, 2003) doi: 10.1038/nm828)および他のもの[Caplenら 2001 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) , 98: 9742-9747;およびMcCaffreyら Nature 414: 34-39]は、肝臓細胞が哺乳動物の循環系へのｓｉＲＮＡの注射により効率的にトランスフェクトすることができることを記載している。
種々の分子が、細胞特異的なＲＮＡｉ剤送達のために使用されている。例えば、プロタミンの核酸を凝縮する特性は、ｓｉＲＮＡを送達するために特異的抗体と混合されている。Songら 2005 Nat Biotch. 23: 709-717。自己集合ペグ化ポリカチオンポリエチレンイミン（ＰＥＩ）はまた、ｓｉＲＮＡを凝縮および保護するために使用されている。Schiffelersら 2004 Nucl. Acids Res. 32: el49, 141-1 10。
次に、ｓｉＲＮＡ含有ナノ粒子は、インテグリンを過剰発現する腫瘍新生血管に成功裏に送達された。Hu-Lieskovanら 2005 Cancer Res. 65: 8984-8992。
本願明細書のＲＮＡｉ剤は、例えば、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）；中性リポソーム（ＮＬ）；ポリマーナノ粒子；二本鎖ＲＮＡ結合モチーフ（ｄｓＲＢＭ）を介して；またはＲＮＡｉ剤の修飾（例えば、ｄｓＲＮＡへの共有結合）を介して送達することができる。
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、自己集合性陽イオン性脂質ベース系である。これらは、例えば、中性脂質（リポソームベース）；陽イオン性脂質（ｓｉＲＮＡ負荷のため）；コレステロール（リポソームを安定化するため）；およびＰＥＧ脂質（製剤の安定化、電荷遮蔽および血流中の循環の延長のため）を含むことができる。陽イオン性脂質は、例えば、頭部基、リンカー、テイルおよびコレステロールテイルを含むことができる。ＬＮＰは、例えば、良い腫瘍送達、血液中の循環の延長、小粒子（例えば、１００ｎｍ未満）および腫瘍微小環境（低いｐＨを有し、低酸素である）中での安定性を有することができる。
中性リポソーム（ＮＬ）は、非陽イオン性脂質ベースの粒子である。
ポリマーナノ粒子は、自己集合性ポリマーベースの粒子である。
二本鎖ＲＮＡ結合モチーフ（ｄｓＲＢＭ）は、修飾が必要である自己集合性ＲＮＡ結合タンパク質である。
ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤
本明細書において特に有用であるｓｉＲＮＡは、ＨＳＦ１のｍＲＮＡの領域に特異的に結合することができ、１つ以上の以下の性質：ＨＳＦ１のコーディングセグメントに結合する；５’非翻訳領域の結合部およびコーディングセグメントの開始部またはその付近に結合する；ｍＲＮＡの翻訳開始部位またはその付近に結合する；エキソンおよびイントロンの接合部またはその付近に結合する；他の遺伝子のｍＲＮＡにほとんど結合しない（ほとんど「的外れの効果」を示さない）；二本鎖またはステム領域ではない領域またはその付近、例えば、ループまたは一本鎖部分でＨＳＦ１のｍＲＮＡに結合する；免疫原性をほとんど引き起こさない；保存された配列の存在が種々の実験動物を使用する試験を容易にするため、種々の動物種（ヒト、マウス、ラット、カニクイザルなどを含む）中で保存されているＨＳＦ１のｍＲＮＡ配列のセグメントに結合する；ｍＲＮＡの二本鎖領域に結合する；ＡＴリッチ領域（例えば、少なくとも約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０％ＡＴリッチ）に結合する；ならびに、ｓｉＲＮＡ活性を減少させることが知られているか、または疑われている特定の配列、例えば、ｓｉＲＮＡの二本鎖部分の分離を減少させ得る５’末端のＧＧ配列の存在を欠いている性質を有するものを含む。
ＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ１のｍＲＮＡに結合し、その分解を助けるＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤として設計することができる。抗ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、コーディングセグメントまたは非コーディングセグメント（例えば、５’もしくは３’非翻訳領域またはＵＴＲ）に結合するように設計することができる。好ましくは、ＲＮＡｉ剤は、ｍＲＮＡのコーディングセグメントに結合する。ＲＮＡｉ剤は、例えば、約１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４ｂｐの二本鎖領域を有し得る。好ましくは、ＲＮＡｉ剤は、約１９、２０または２１ｂｐを含む。ＲＮＡｉ剤は、Ｄｉｃｅｒ複合体による短縮に適当な構築物に組み込まれるとき、より長い可能性がある（例えば、最大４９ｂｐ）。ＲＮＡｉはまた、さらなる短縮およびプロセッシング前に発現のためのより長い構築物に組み込まれ得る。
ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖
ＲＮＡｉ剤は、第１の鎖および第２の鎖を含む。１つの態様において、第１および第２の鎖は、それぞれセンス鎖およびアンチセンス鎖である。他の態様において、第１および第２の鎖は、それぞれアンチセンスおよびセンス鎖である。したがって、第１の鎖は、本明細書に記載されている任意の配列、または最大３個の不一致を有する１５個の連続したヌクレオチドを含むその変異体配列のセンスまたはアンチセンス鎖を含むことができ；したがって、第２の鎖は、本明細書に記載されている任意の配列、または最大３個の不一致を有する１５個の連続したヌクレオチドを含むその変異体配列の対応するアンチセンスまたはセンス鎖を含むことができる。
「アンチセンス鎖」なる用語は、標的配列に実質的に相補的である領域を含むｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡの鎖を示す。本明細書において使用される「相補性の領域」なる用語は、本明細書で定義されている配列、例えば、標的配列に実質的に相補的であるアンチセンス鎖の領域を示す。相補性の領域が標的配列に完全に相補的でないとき、不一致は、分子の内部または末端領域であり得る。一般的に、最も耐用性の不一致は、末端領域、例えば、５’および／または３’末端の５、４、３または２個のヌクレオチド内である。
本明細書において使用される「センス鎖」なる用語は、本明細書において定義されているアンチセンス鎖の領域に実質的に相補的である領域を含むｉＲＮＡの鎖を示す。
オーバーハングおよび平滑末端
ＲＮＡｉ剤は０、１または２個のオーバーハングを有し得；０ｎｔのオーバーハングの場合、両方の末端が平滑末端である。ＲＮＡｉ剤は０、１または２個の平滑末端を有し得る。「平滑末端ＲＮＡｉ剤」において、鎖は末端で不対ヌクレオチドを含まず；したがって、平滑末端分子は３’または５’のいずれかの一本鎖ヌクレオチドオーバーハングを欠いている。
本明細書において使用される「オーバーハング」または「ヌクレオチドオーバーハング」なる用語は、ｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡの二本鎖構造から突き出ている少なくとも１つの不対ヌクレオチドを示す。例えば、ｄｓＲＮＡの一本鎖の３’−末端が他の鎖の５’−末端を越えて伸びているとき（または逆もまた同様）、オーバーハングがある。ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを含むことができ；あるいは、オーバーハングは、少なくとも２ｎｔ、少なくとも３ｎｔ、少なくとも４ｎｔ、少なくとも５ｎｔまたはそれ以上を含むことができる。オーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドを含むヌクレオチド／ヌクレオシド類似体を含むか、それらからなり得る。オーバーハングは、センス鎖、アンチセンス鎖またはそれらの任意の組合せ上であり得る。オーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンスまたはセンス鎖のいずれかの５’末端、３’末端または両方の末端上であり得る。
ｄｓＲＮＡに関して本明細書において使用される「平滑」または「平滑末端」なる用語は、ｄｓＲＮＡの末端で不対ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体がない、すなわち、ヌクレオチドオーバーハングがないことを意味する。ｄｓＲＮＡの１つまたは両方の末端は平滑であり得る。ｄｓＲＮＡの両方の末端が平滑であるとき、ｄｓＲＮＡは平滑末端であると称される。明らかにするために、「平滑末端」ｄｓＲＮＡは、両方の末端で平滑ある、すなわち、分子のいずれかの末端でヌクレオチドオーバーハングがないｄｓＲＮＡである。非常にしばしば、このような分子はその全長にわたって二本鎖である。
１つの態様において、ＲＮＡｉ二本鎖の平滑末端は、３’キャップの付加、例えば、ＷＯ２００５／０２１７４９およびＷＯ２００７／１２８４７７に記載されているものにより化学的に修飾される。このような態様において、３’キャップは非ヌクレオチドであり、したがって、オーバーハングを構成しない。
遺伝子のｍＲＮＡ配列は、とりわけコーディングセグメント内のゆらぎの位置または非翻訳領域で個体から個体で変化し得る；個体はまた、コード配列で互いに異なり、ｍＲＮＡおよび対応するＲＮＡｉ剤配列においてさらなる違いをもたらし得る。ＲＮＡｉ剤はまた、免疫原性を減少させる、望ましくない遺伝子（例えば、「的外れの効果」）に結合する、または、血液中の安定性を増加させるように配列を修飾することができる。（これらの配列変異体は、ＲＮＡｉ剤の塩基の化学修飾または５’もしくは３’または他の末端キャップと独立している。）
抗ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤の例は、本明細書において提供されるＨＳＦ１遺伝子に結合するものを含む。ＨＳＦ１に対するｓｉＲＮＡの例は、表１、２、３、３Ａ、８、９Ａおよび９Ｂの任意の１つまたはそれ以上において提供される。
ＨＳＦ１活性、レベルおよび／または発現に対するＲＮＡｉ剤の効果の測定
当分野で知られている任意の方法を、ｓｉＲＮＡにより誘導されるＨＳＦ１活性、レベルおよび／または発現の変化を測定するために使用することができる。測定をｓｉＲＮＡの投与前、中および後の複数の時点で行い、ｓｉＲＮＡの効果を測定することができる。
本願明細書のＲＮＡｉ剤は、ＨＳＦ１の発現をサイレンシングする、阻害する、発現を下方調節する、および／または発現を抑制する。
発現を「サイレンシング」、「阻害」、「発現を下方調節」、「発現を抑制」などなる用語は、本明細書において、それらがＨＳＦ１遺伝子を示す限りにおいて、処理されていない第１の細胞または細胞群（コントロール細胞）と実質的に同一の第２の細胞または細胞群と比較して、ＨＳＦ１遺伝子の発現が阻害されるように処理されているＨＳＦ１遺伝子を転写する第１の細胞または細胞群から単離されるか、またはそれらにおいて検出され得る、ＨＳＦ１のｍＲＮＡの量の減少により明らかにされるＨＳＦ１遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制を示す。阻害の程度は、通常
Figure 0005981625
 において示される。
あるいは、阻害の程度は、ＨＳＦ１遺伝子発現に機能的に関連したパラメーター、例えば、ＨＳＦ１遺伝子によってコードされるタンパク質の量、または特定の表現型を示す細胞の数、例えば、発現が全体または一部においてＨＳＦ１を介在する遺伝子（例えば、ＨＳＰ７０）の発現の調節の減少に関して得ることができる。原則として、ＨＳＦ１遺伝子サイレンシングは、構成的に、もしくはゲノム工学のいずれか、および任意の適当なアッセイにより、ＨＳＦ１を発現するあらゆる細胞において決定され得る。しかしながら、与えられたｉＲＮＡが特定の程度でＨＳＦ１の発現を阻害し、したがって本願発明に包含されるのか否かを決定するために、参照またはコントロールが必要であるとき、以下の実施例において提供されるアッセイは、このような参照として役に立つ。
例えば、場合によっては、ＨＳＦ１遺伝子の発現は、本明細書において特徴付けられているｉＲＮＡの投与により、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％抑制される。いくつかの態様において、ＨＳＦ１遺伝子は、本明細書において特徴付けられているｉＲＮＡの投与により、少なくとも約６０％、７０％または８０％抑制される。いくつかの態様において、ＨＳＦ１遺伝子は、本明細書に記載されているｉＲＮＡの投与により、少なくとも約８５％、９０％もしくは９５％またはそれ以上抑制される。
ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤による処置
ＨＳＦ１発現の文脈において本明細書において使用される、「処置する」、「処置」などなる用語は、ＨＳＦ１発現が介在する病理学的プロセスの軽減または緩和を示す。本願明細書の文脈において、以下の本明細書に記載されている他のいずれかの状態（ＨＳＦ１発現が介在する病理学的プロセス以外）に関する限りにおいて、「処置する」、「処置」などなる用語は、このような状態と関連する少なくとも１つの症状を軽減または緩和する、またはこのような状態の進行もしくは予測される進行の遅延または逆転、例えば、脂質障害、例えば、アテローム性動脈硬化症の進行の遅延を意味する。
疾患マーカーまたは症状の文脈において「より低い」は、このようなレベルにおける統計的に有意な減少を意味する。減少は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％またはそれ以上であり得る。特定の疾患、または特定の疾患に罹患している個体について、ＨＳＦ１のレベルまたは発現が上昇しているとき、本願明細書のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤での処置は、好ましくはＨＳＦ１のレベルまたは発現をこのような障害のない個体について通常の範囲内と文献において考えられるレベルに減少させることができる。
ＨＳＦ１のレベルまたは発現は、ｍＲＮＡ（例えば、ノーザンブロットまたはＰＣＲによる）またはタンパク質（例えば、ウェスタンブロット）の評価により測定することができる。ＨＳＦ１発現に対するＲＮＡｉ剤の効果は、ＨＳＦ１遺伝子の転写速度（例えば、ノーザンブロット；または逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応またはリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応による）を測定することにより決定することができる。ＲＴ−ＰＣＲは、ＨＳＦ１のｍＲＮＡレベルが腎臓、膵臓および前立腺において高く、肝臓および脾臓において中程度であ留ことを示すために使用された。Brauner-Osborneら 2001. Biochim. Biophys. Acta 1518: 237-248。直接測定は、例えば、ＨＳＦ１が発現される組織のウェスタンブロットにより、ＨＳＦ１（細胞表面により発現される）のレベルで行うことができる。
本明細書の別の態様において、ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤を含む組成物は非ヒト動物に投与することができる。例えば、組成物は、ニワトリ、シチメンチョウ、家畜動物（例えば、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシなど）、ペット（例えば、ネコおよびイヌ）に与えることができ、癌およびウイルス疾患の処置において有効性を有することができる。それぞれの場合において、ＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤は、動物のゲノムのＨＳＦ１の配列に合い、好ましくは、動物のゲノム中のすべての他の遺伝子から少なくとも１ｎｔの不一致を含むように選択される。
「処置」は、予防、治療、治癒、または身体状態の改善または低下の非存在を示す患者の状態における他のあらゆる変化を意味する。「処置」は、ＨＳＦ１関連疾患（例えば、癌またはウイルス疾患）の処置、または患者が有する他の何らかの病気のあらゆる適当な処置を示す。本明細書において使用される「処置」および「処置する」なる用語、疾患にかかる危険性があるか、または疾患を有する疑いがある患者、ならびにすでに病気であるか、または状態に罹患していると診断された患者の処置を含む、予防もしくは防止処置および治療の両方または疾患修飾性処置を示す。「処置」および「処置する」なる用語はまた、疾患に罹患していないが、不健康状態、例えば、窒素平衡失調または筋力低下に罹患しやすい個体における健康の保持および／または促進を示す。１つの態様において、「処置」は、疾患状態の予防を包含しない。したがって、本願明細書は、ＨＳＦ１関連疾患を患っている個体、またはＨＳＦ１関連疾患に罹患しやすい個体においてＨＳＦ１の発現を抑制する、および／またはＨＳＦ１関連疾患を処置するために有用である。ＨＳＦ１関連疾患を「患っている」個体は、疾患の検出可能な症状特性を証明するか、または、ＨＳＦ１関連疾患病原体またはマーカーに暴露されているか、またはそれらを有すると臨床的に示されている。非限定的な例として、ＨＳＦ１関連疾患を患っている個体は、外面的症状を示すか、または、外面的症状を示さないが、ＨＳＦ１関連疾患と関連するタンパク質マーカー、または血液中の病原体と関連するタンパク質もしくは遺伝物質を有することを臨床試験で示され得る。
「有効量」または「治療有効量」は、個体の疾患または医学的状態を処置するか、または、さらに一般的に、個体に栄養学的、生理学的または薬学的利点を提供する量である。本明細書において使用される、「治療有効量」および「予防有効量」なるフレーズは、ＨＳＦ１発現が介在する病理学的プロセスまたはＨＳＦ１発現が介在する病理学的プロセスの明白な症状の処置、予防または管理における治療的利点を提供する量を示す。治療的に有効である特定の量は、通常の開業医により容易に決定することができ、当分野で知られている因子、例えば、ＨＳＦ１発現が介在する病理学的プロセスの型、患者の病歴および年齢、ＨＳＦ１発現が介在する病理学的プロセスの段階、ならびにＨＳＦ１が介在する病理学的プロセスを阻害する他の薬剤の投与に依存して変化し得る。
本発明の種々の態様において、患者は、少なくとも約１、５、１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０または７５歳である。種々の態様において、患者は、約１、５、１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０または１００歳以下である。種々の態様において、患者は、少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０または４００ｌｂの体重を有する。種々の態様において、患者は、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０または４００ｌｂ以下の体重を有する。
本発明の種々の態様において、用量は［活性成分のみで測定する］、少なくとも約１、５、１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００ｎｇ、１、５、１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００マイクログラム、１、５、１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００ｍｇであり得る。種々の態様において、用量は、約１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００ｍｇ以下であり得る。種々の態様において、用量は、少なくとも１日に１回以上、１日ごと、１週間に１回以上、１週間ごと、２週間ごと、１月ごと、および／または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２月ごと、またはそれらの組合せで投与することができる。
種々の態様において、用量は、個体の体重または体表面積と相関がある。実際の用量レベルは、患者に毒性がなく、特定の患者、組成物および投与経路について有効である活性剤の量を得るように変化することができる。選択される用量は、使用される特定のＲＮＡｉ剤の活性、投与経路、ＲＮＡｉ剤の排出速度、処置の期間、ＲＮＡｉ剤と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態および以前の病歴、ならびに医療分野でよく知られている同様の因子を含む種々の薬物動態学因子に依存する。当分野で通常の技術を有する医師または獣医は、必要とされるＲＮＡｉ剤の有効量を容易に決定することができる。適当な用量は、治療効果を生じるために有効である最も低い用量、または副作用を引き起こすことなく治療効果を生じるために十分低い用量である量であり得る。
ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物
本明細書において使用される「医薬組成物」は、薬理学的に有効量のｉＲＮＡおよび薬学的に許容される担体を含む。本明細書において使用される「薬理学的に有効量」、「治療有効量」または単に「有効量」は、意図される薬理学的、治療的または予防的結果を生じるために有効なｉＲＮＡの量を示す。例えば、与えられた臨床的処置が、疾患または障害と関連する測定可能なパラメーターにおいて少なくとも１０％の減少があるとき、有効であると考慮されるとき、治療有効量の疾患または障害の処置のための薬物は、該パラメーターにおいて少なくとも１０％減少をもたらすために必要な量である。例えば、治療有効量のＨＳＦ１を標的とするｉＲＮＡは、少なくとも１０％のＨＳＦ１タンパク質レベルを減少させることができる。
「薬学的に許容される担体」なる用語は、治療剤の投与のための担体を示す。このような担体は、限定はしないが、塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの組合せを含む。該用語は、細胞培養培地を明確に排除する。経口的に投与される薬物において、薬学的に許容される担体は、薬学的に許容される賦形剤、例えば、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤および防腐剤を含むが、これらに限定されない。適当な不活性希釈剤は、炭酸ナトリウムおよびカルシウム、リン酸ナトリウムおよびカルシウム、ならびにラクトースを含み、コーンデンプンおよびアルギン酸は、適当な崩壊剤である。結合剤は、デンプンおよびゼラチンを含み得、滑剤は、存在するとき、一般的に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。所望により、錠剤は、胃腸管における吸収を遅延するために、物質、例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルでコーティングされ得る。薬物製剤に含まれる薬剤は、本明細書に記載されている。
ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、固体形態、例えば、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、ジェルキャップ、ゼラチンカプセル、リポソーム、坐薬、チュアブル形態またはパッチであり得る。ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物はまた、液体形態、例えば、溶液、エマルジョン、懸濁液、エリキシル剤またはシロップ中で存在することができる。適当な液体支持体は、水中で様々な比率で、例えば、水、有機溶媒、例えば、ポリオール、例えば、グリセロールまたはグリコール、例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール、またはエタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、またはそれらの混合物であり得る。組成物は、アルブミンまたは界面活性剤でコーティングされたナノサイズの非結晶もしくは結晶顆粒を含むことができる。
適当な支持体は、例えば、抗菌および抗真菌剤、緩衝剤、リン酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、クロロブタノール、ココアバター、着色剤、デキストリン、乳化剤、腸溶コーティング剤、香味剤、ゼラチン、等張剤、レシチン、ステアリン酸マグネシウム、芳香剤、ポリアルコール、例えば、マンニトール、注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチル、パラベン、フェノールソルビン酸、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリジン、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、保存剤、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、塩化ナトリウム、ソルビトール、種々の糖（スクロース、フルクトース、ガラクトース、ラクトースおよびトレハロースを含むが、これらに限定されない）、デンプン、坐薬ロウ、タルク、植物油、例えば、オリーブ油およびコーンオイル、ビタミン、ロウ、および／または湿潤剤を含むことができる。ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤について、特定の支持体は、デキストランおよび水、例えば、水中で５％のデキストロース（Ｄ５Ｗ）を含む。
医薬組成物の生物学的に不活性な部分は、所望により侵食され、ＲＮＡｉ剤の持続放出を可能にする。
ＨＳＦ１を含む医薬組成物は、口腔、吸入（吸入および深い吸入を含む）、経鼻、経口、非経口、インプラント、硬膜外、動脈内、関節内、嚢内、心臓内、脳室内、頭蓋内、皮内、筋肉内、眼窩内、腹腔内、髄腔内、胸骨内、髄腔内、静脈内、くも膜下、被膜下、皮下、表皮下、経内皮、経気管、経血管、経直腸、舌下、局所および／または膣経路を介する注射または注入により投与することができる。これは、注射、注入、皮膚パッチ、または当分野で知られている他のいずれかの方法によるものであってもよい。製剤は、粉末、噴霧型、エアロゾル、粒状、または、そうでなければ送達用に適当に製造された形態であり得る。投与は、液体のとき、ゆっくり、またはボーラスによるものであり得るが、当分野で知られているある環境下では、ボーラス注射は、腎臓を介して物質の喪失をもたらし得る。
ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤は、当分野で知られている医薬デバイスで投与することができる。例えば、特定の態様において、ＲＮＡｉ剤は、無針皮下注射デバイス、例えば、米国特許第５，３９９，１６３、５，３８３，８５１、５，３１２，３３５、５，０６４，４１３、４，９４１，８８０、４，７９０，８２４または４，５９６，５５６号に記載されているデバイスで投与することができる。本願明細書において有用なよく知られているインプラントおよびモジュールの例は、制御された速度で医薬を供給するためのインプラント可能な微小注入ポンプを記載する米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して医薬を投与するための治療用デバイスを記載する米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で医薬を送達するための医薬注入ポンプを記載する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のためのインプラント可能な流速可変型注入装置を記載する米国特許第４，４４７，２２４号；複数のチャンバー区画を有する浸透圧薬送達系を記載する米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧薬送達系を記載する米国特許第４，４７５，１９６号を含む。多様な他のこのようなインプラント、送達系およびモジュールは、当業者に知られている。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビボで適切な分配を確保するように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は多くの高親水性化合物を排除する。ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤がＢＢＢ（所望により）通過することを確実にするために、それらは、例えば、リポソーム中で製剤化することができる。リポソームを製造する方法について、例えば、米国特許４，５２２，８１１；５，３７４，５４８；および５，３９９，３３１参照。リポソームは、特定の細胞または臓器に選択的に輸送される１つ以上の部分を含み、したがって標的薬物送達を増強することができる（例えば、V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29: 685参照）。標的化部分の例は、葉酸またはビオチン（例えば、Lowらの米国特許第５，４１６，０１６号参照）；マンノシド（Umezawaら(1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038）；抗体（P.G. Bloemanら (1995) FEBS Lett. 357: 140; M. Owaisら (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180）；界面活性剤タンパク質Ａ受容体（Briscoeら (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134）、本発明の製剤ならびに本発明の分子の成分を含み得る異なる種；ｐ１２０（Schreierら (1994) J. Biol. Chem. 269: 9090）を含む；また、K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346: 123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4: 273参照。
特定の態様
特定の態様において、本願明細書は、１つ以上のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤を含む組成物である。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０２７８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０２７９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０２８０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０２８１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０２８２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０２８３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３０３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３１３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３１５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３４８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３６２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３６４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３６５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３６６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３７３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３７６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３７７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３７８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３８６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３８９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３９１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３９２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３９７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３９８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０３９９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４０９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４１０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４１１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４１３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４２２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４２８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４３４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４３５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４３７．４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４３７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４３８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４３９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４８７．７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４８７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４８８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４８９．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４８９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４９０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４９１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４９３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０４９５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５０２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５０７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５１３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５２７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５３５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５４４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５４５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５４６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５４７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５４８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５４９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５５２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５５５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５５６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５５７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５５８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６０．４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５６６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５７０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５７２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５７４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５７５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５７７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５７８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５７９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５８０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５９７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０５９８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６２５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６２６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６２７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６３３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６３４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６４０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６４４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６４６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６４８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６５０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６５２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６５３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６６０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６６１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６７１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６９３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０６９４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７００、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７０２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７０７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７０９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７１０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７１４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７１６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７２８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７３０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７４１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７６４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−２０７８３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３００７１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３６９６９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３６９７０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７１８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７１９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３００７１．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３６９６９．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３６９７０．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７１８．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７１９．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２０．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２１．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２２．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２３．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２４．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２５．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２６．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２７．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２８．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７２９．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３０．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３１．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３２．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３３．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３４．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３５．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７３９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７４０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７４１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
１つの態様において、本願明細書は、ＡＤ−３７７４２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体を含むか、またはそれらからなる。
さらなる特定の態様
種々の態様において、本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は本明細書に記載されている任意の１つ以上のＲＮＡｉ剤の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
種々の態様が、さらに以下に記載されている。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０２７８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０２７９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０２８０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０２８１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０２８２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０２８３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３０３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３１３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３１５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３４８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３６２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３６４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３６５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３６６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３７３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３７６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３７７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３７８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３８６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３８９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３９１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３９２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３９７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３９８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０３９９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４０９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４１０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４１１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４１３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４２２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４２８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４３４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４３５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４３７．４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４３７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４３８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４３９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４８７．７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４８７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４８８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４８９．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４８９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４９０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４９１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４９３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０４９５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５０２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５０７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５１３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５２７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５３５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５４４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５４５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５４６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５４７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５４８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５４９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５５２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５５５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５５６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５５７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５５８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６０．４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５６６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５７０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５７２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５７４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５７５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５７７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５７８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５７９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５８０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５９７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０５９８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６２５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６２６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６２７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６３３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６３４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６４０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６４４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６４６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６４８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６５０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６５２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６５３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６６０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６６１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６７１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６９３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０６９４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７００、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７０２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７０７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７０９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７１０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７１４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７１６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７２８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７３０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７４１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７６４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−２０７８３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３００７１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３６９６９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３６９７０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７１８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７１９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３３、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３４、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３５、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３６、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３７、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３８、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３９、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７４０、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７４１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７４２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３００７１．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３６９６９．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３６９７０．２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７１８．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７１９．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２０．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２１．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２２．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２３．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２４．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２５．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２６．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２７．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２８．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７２９．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３０．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３１．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３２．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３３．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３４．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３５．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３６．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３７．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３８．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７３９．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７４０．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７４１．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願明細書は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１の鎖は第１の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、ＡＤ−３７７４２．１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体の第２の鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
さらなる特定の態様
種々の態様において、本願明細書は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載されている任意のＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、種々の態様において、本願明細書は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、１つ以上の以下のいずれかの二本鎖、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。ＡＤ２０２７８、ＡＤ２０２７９、ＡＤ２０２８０、ＡＤ２０２８１、ＡＤ２０２８２、ＡＤ２０２８３、ＡＤ２０２９６、ＡＤ２０３００、ＡＤ２０３０３、ＡＤ２０３１２、ＡＤ２０３１３、ＡＤ２０３１５、ＡＤ２０３４４、ＡＤ２０３４５、ＡＤ２０３４８、ＡＤ２０３４９、ＡＤ２０３５３、ＡＤ２０３６２、ＡＤ２０３６４、ＡＤ２０３６５、ＡＤ２０３６６、ＡＤ２０３７３、ＡＤ２０３７４、ＡＤ２０３７６、ＡＤ２０３７７、ＡＤ２０３７８、ＡＤ２０３７９、ＡＤ２０３８０、ＡＤ２０３８６、ＡＤ２０３８７、ＡＤ２０３８８、ＡＤ２０３８９、ＡＤ２０３９０、ＡＤ２０３９１、ＡＤ２０３９２、ＡＤ２０３９３、ＡＤ２０３９５、ＡＤ２０３９６、ＡＤ２０３９７、ＡＤ２０３９８、ＡＤ２０３９９、ＡＤ２０４０１ＡＤ２０４０２、ＡＤ２０４０３、ＡＤ２０４０４、ＡＤ２０４０６、ＡＤ２０４０７、ＡＤ２０４０８、ＡＤ２０４０９、ＡＤ２０４１０、ＡＤ２０４１１、ＡＤ２０４１３、ＡＤ２０４２１、ＡＤ２０４２２、ＡＤ２０４２４、ＡＤ２０４２６、ＡＤ２０４２６、ＡＤ２０４２７、ＡＤ２０４２８、ＡＤ２０４３３、ＡＤ２０４３４、ＡＤ２０４３５、ＡＤ２０４３６、ＡＤ２０４３７、ＡＤ２０４３８、ＡＤ２０４３９、ＡＤ２０４８７、ＡＤ２０４８８、ＡＤ２０４８９、ＡＤ２０４９０、ＡＤ２０４９１、ＡＤ２０４９２、ＡＤ２０４９３、ＡＤ２０４９４、ＡＤ２０４９５、ＡＤ２０５０１、ＡＤ２０５０２、ＡＤ２０５０４、ＡＤ２０５０６、ＡＤ２０５０７、ＡＤ２０５１０、ＡＤ２０５１１、ＡＤ２０５１３、ＡＤ２０５２７、ＡＤ２０５３０ＡＤ２０５３１、ＡＤ２０５３４、ＡＤ２０５３５、ＡＤ２０５３８、ＡＤ２０５４２、ＡＤ２０５４３、ＡＤ２０５４４、ＡＤ２０５４５、ＡＤ２０５４６、ＡＤ２０５４７、ＡＤ２０５４８、ＡＤ２０５４９、ＡＤ２０５５０、ＡＤ２０５５２、ＡＤ２０５５４、ＡＤ２０５５５、ＡＤ２０５５６、ＡＤ２０５５７、ＡＤ２０５５８、ＡＤ２０５５９、ＡＤ２０５６０、ＡＤ２０５６１、ＡＤ２０５６２、ＡＤ２０５６３、ＡＤ２０５６４、ＡＤ２０５６５、ＡＤ２０５６６、ＡＤ２０５６７、ＡＤ２０５７０、ＡＤ２０５７２、ＡＤ２０５７４、ＡＤ２０５７５、ＡＤ２０５７６、ＡＤ２０５７７、ＡＤ２０５７８、ＡＤ２０５７９、ＡＤ２０５８０、ＡＤ２０５８１、ＡＤ２０５８２、ＡＤ２０６２５、ＡＤ２０６２６、ＡＤ２０６２７、ＡＤ２０６２８、ＡＤ２０６２９、ＡＤ２０６３０、ＡＤ２０６３１、ＡＤ２０６３２、ＡＤ２０６３３、ＡＤ２０６３５、ＡＤ２０６３８、ＡＤ２０６３９、ＡＤ２０６４０、ＡＤ２０６４２、ＡＤ２０６４３、ＡＤ２０６４４、ＡＤ２０６４６、ＡＤ２０６４７、ＡＤ２０６４８、ＡＤ２０６５０、ＡＤ２０６５２、ＡＤ２０６５３、ＡＤ２０６５６、ＡＤ２０６５８、ＡＤ２０６５９、ＡＤ２０６６０、ＡＤ２０６６１、ＡＤ２０６６２、ＡＤ２０６７０、ＡＤ２０６７１、ＡＤ２０６７２、ＡＤ２０６７６、ＡＤ２０６７８、ＡＤ２０６９３、ＡＤ２０６９４、ＡＤ２０６９５、ＡＤ２０７００、ＡＤ２０７０１、ＡＤ２０７０２、ＡＤ２０７０３、ＡＤ２０７０５、ＡＤ２０７０６、ＡＤ２０７０７、ＡＤ２０７０８、ＡＤ２０７０９、ＡＤ２０７１０、ＡＤ２０７１１、ＡＤ２０７１３、ＡＤ２０７１４、ＡＤ２０７１５、ＡＤ２０７１６、ＡＤ２０７１８、ＡＤ２０７２０、ＡＤ２０７２８、ＡＤ２０７３０、ＡＤ２０７３１、ＡＤ２０７４１、ＡＤ２０７４２、ＡＤ２０７４３、ＡＤ２０７４４、ＡＤ２０７４８、ＡＤ２０７５１、ＡＤ２０７５２、ＡＤ２０７５４、ＡＤ２０７６４、ＡＤ２０７６５、ＡＤ２０７６６、ＡＤ２０７８３、ＡＤ２０７８４、ＡＤ２０７８５、ＡＤ２０７８６、ＡＤ２０７９０、ＡＤ２０８０１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体。
さらなる特定の態様
種々の態様において、本願明細書は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載されている任意のＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖を含むか、またはそれらからなるＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、以下のものは、種々の態様の例として提供される。
本願明細書は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、ＡＤ２０２７８、ＡＤ２０２７９、ＡＤ２０２８０、ＡＤ２０２８１、ＡＤ２０２８２、ＡＤ２０２８３、ＡＤ２０２９６、ＡＤ２０３００、ＡＤ２０３０３、ＡＤ２０３１２、ＡＤ２０３１３、ＡＤ２０３１５、ＡＤ２０３４４、ＡＤ２０３４５、ＡＤ２０３４８、ＡＤ２０３４９、ＡＤ２０３５３、ＡＤ２０３６２、ＡＤ２０３６４、ＡＤ２０３６５、ＡＤ２０３６６、ＡＤ２０３７３、ＡＤ２０３７４、ＡＤ２０３７６、ＡＤ２０３７７、ＡＤ２０３７８、ＡＤ２０３７９、ＡＤ２０３８０、ＡＤ２０３８６、ＡＤ２０３８７、ＡＤ２０３８８、ＡＤ２０３８９、ＡＤ２０３９０、ＡＤ２０３９１、ＡＤ２０３９２、ＡＤ２０３９３、ＡＤ２０３９５、ＡＤ２０３９６、ＡＤ２０３９７、ＡＤ２０３９８、ＡＤ２０３９９、ＡＤ２０４０１ＡＤ２０４０２、ＡＤ２０４０３、ＡＤ２０４０４、ＡＤ２０４０６、ＡＤ２０４０７、ＡＤ２０４０８、ＡＤ２０４０９、ＡＤ２０４１０、ＡＤ２０４１１、ＡＤ２０４１３、ＡＤ２０４２１、ＡＤ２０４２２、ＡＤ２０４２４、ＡＤ２０４２６、ＡＤ２０４２６、ＡＤ２０４２７、ＡＤ２０４２８、ＡＤ２０４３３、ＡＤ２０４３４、ＡＤ２０４３５、ＡＤ２０４３６、ＡＤ２０４３７、ＡＤ２０４３８、ＡＤ２０４３９、ＡＤ２０４８７、ＡＤ２０４８８、ＡＤ２０４８９、ＡＤ２０４９０、ＡＤ２０４９１、ＡＤ２０４９２、ＡＤ２０４９３、ＡＤ２０４９４、ＡＤ２０４９５、ＡＤ２０５０１、ＡＤ２０５０２、ＡＤ２０５０４、ＡＤ２０５０６、ＡＤ２０５０７、ＡＤ２０５１０、ＡＤ２０５１１、ＡＤ２０５１３、ＡＤ２０５２７、ＡＤ２０５３０ＡＤ２０５３１、ＡＤ２０５３４、ＡＤ２０５３５、ＡＤ２０５３８、ＡＤ２０５４２、ＡＤ２０５４３、ＡＤ２０５４４、ＡＤ２０５４５、ＡＤ２０５４６、ＡＤ２０５４７、ＡＤ２０５４８、ＡＤ２０５４９、ＡＤ２０５５０、ＡＤ２０５５２、ＡＤ２０５５４、ＡＤ２０５５５、ＡＤ２０５５６、ＡＤ２０５５７、ＡＤ２０５５８、ＡＤ２０５５９、ＡＤ２０５６０、ＡＤ２０５６１、ＡＤ２０５６２、ＡＤ２０５６３、ＡＤ２０５６４、ＡＤ２０５６５、ＡＤ２０５６６、ＡＤ２０５６７、ＡＤ２０５７０、ＡＤ２０５７２、ＡＤ２０５７４、ＡＤ２０５７５、ＡＤ２０５７６、ＡＤ２０５７７、ＡＤ２０５７８、ＡＤ２０５７９、ＡＤ２０５８０、ＡＤ２０５８１、ＡＤ２０５８２、ＡＤ２０６２５、ＡＤ２０６２６、ＡＤ２０６２７、ＡＤ２０６２８、ＡＤ２０６２９、ＡＤ２０６３０、ＡＤ２０６３１、ＡＤ２０６３２、ＡＤ２０６３３、ＡＤ２０６３５、ＡＤ２０６３８、ＡＤ２０６３９、ＡＤ２０６４０、ＡＤ２０６４２、ＡＤ２０６４３、ＡＤ２０６４４、ＡＤ２０６４６、ＡＤ２０６４７、ＡＤ２０６４８、ＡＤ２０６５０、ＡＤ２０６５２、ＡＤ２０６５３、ＡＤ２０６５６、ＡＤ２０６５８、ＡＤ２０６５９、ＡＤ２０６６０、ＡＤ２０６６１、ＡＤ２０６６２、ＡＤ２０６７０、ＡＤ２０６７１、ＡＤ２０６７２、ＡＤ２０６７６、ＡＤ２０６７８、ＡＤ２０６９３、ＡＤ２０６９４、ＡＤ２０６９５、ＡＤ２０７００、ＡＤ２０７０１、ＡＤ２０７０２、ＡＤ２０７０３、ＡＤ２０７０５、ＡＤ２０７０６、ＡＤ２０７０７、ＡＤ２０７０８、ＡＤ２０７０９、ＡＤ２０７１０、ＡＤ２０７１１、ＡＤ２０７１３、ＡＤ２０７１４、ＡＤ２０７１５、ＡＤ２０７１６、ＡＤ２０７１８、ＡＤ２０７２０、ＡＤ２０７２８、ＡＤ２０７３０、ＡＤ２０７３１、ＡＤ２０７４１、ＡＤ２０７４２、ＡＤ２０７４３、ＡＤ２０７４４、ＡＤ２０７４８、ＡＤ２０７５１、ＡＤ２０７５２、ＡＤ２０７５４、ＡＤ２０７６４、ＡＤ２０７６５、ＡＤ２０７６６、ＡＤ２０７８３、ＡＤ２０７８４、ＡＤ２０７８５、ＡＤ２０７８６、ＡＤ２０７９０、ＡＤ２０８０１、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体のアンチセンス鎖を含むか、またはそれらからなるＲＮＡｉ剤を含む。
種々の態様において、本願明細書は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載されている任意のＲＮＡｉ剤、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０またはそれ以上のｎｔ（またはそれらのあらゆる範囲、例えば、０−１、１−２、１−３、１−４ｎｔなど）をさらに含むＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、種々の態様において、本願明細書は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、ＡＤ２０２７８、ＡＤ２０２７９、ＡＤ２０２８０、ＡＤ２０２８１、ＡＤ２０２８２、ＡＤ２０２８３、ＡＤ２０３０３、ＡＤ２０３１３、ＡＤ２０３１５、ＡＤ２０３４８、ＡＤ２０３６２、ＡＤ２０３６４、ＡＤ２０３６５、ＡＤ２０３６６、ＡＤ２０３７３、ＡＤ２０３７６、ＡＤ２０３７７、ＡＤ２０３７８、ＡＤ２０３８６、ＡＤ２０３８９、ＡＤ２０３９１、ＡＤ２０３９２、ＡＤ２０３９７、ＡＤ２０３９８、ＡＤ２０３９９、ＡＤ２０４０１、ＡＤ２０４０２、ＡＤ２０４０３、ＡＤ２０４０４、ＡＤ２０４０６、ＡＤ２０４０７、ＡＤ２０４０８、ＡＤ２０４０９、ＡＤ２０４１０、ＡＤ２０４１１、ＡＤ２０４１３、ＡＤ２０４２２、ＡＤ２０４２８、ＡＤ２０４３４、ＡＤ２０４３５、ＡＤ２０４３７、ＡＤ２０４３７、ＡＤ２０４３８、ＡＤ２０４３９、ＡＤ２０４８７、ＡＤ２０４８７、ＡＤ２０４８８、ＡＤ２０４８９、ＡＤ２０４８９、ＡＤ２０４９０、ＡＤ２０４９１、ＡＤ２０４９３、ＡＤ２０４９５、ＡＤ２０５０２、ＡＤ２０５０７、ＡＤ２０５１３、ＡＤ２０５２７、ＡＤ２０５３５、ＡＤ２０５４４、ＡＤ２０５４５、ＡＤ２０５４６、ＡＤ２０５４７、ＡＤ２０５４８、ＡＤ２０５４９、ＡＤ２０５５２、ＡＤ２０５５５、ＡＤ２０５５６、ＡＤ２０５５７、ＡＤ２０５５８、ＡＤ２０５６０、ＡＤ２０５６０、ＡＤ２０５６１、ＡＤ２０５６２、ＡＤ２０５６３、ＡＤ２０５６４、ＡＤ２０５６５、ＡＤ２０５６６、ＡＤ２０５７０、ＡＤ２０５７２、ＡＤ２０５７４、ＡＤ２０５７５、ＡＤ２０５７７、ＡＤ２０５７８、ＡＤ２０５７９、ＡＤ２０５８０、ＡＤ２０５９７、ＡＤ２０５９８、ＡＤ２０６２５、ＡＤ２０６２６、ＡＤ２０６２７、ＡＤ２０６３３、ＡＤ２０６３４、ＡＤ２０６４０、ＡＤ２０６４４、ＡＤ２０６４６、ＡＤ２０６４８、ＡＤ２０６５０、ＡＤ２０６５２、ＡＤ２０６５３、ＡＤ２０６６０、ＡＤ２０６６１、ＡＤ２０６７１、ＡＤ２０６９３、ＡＤ２０６９４、ＡＤ２０７００、ＡＤ２０７０２、ＡＤ２０７０７、ＡＤ２０７０９、ＡＤ２０７１０、ＡＤ２０７１４、ＡＤ２０７１６、ＡＤ２０７２８、ＡＤ２０７３０、ＡＤ２０７４１、ＡＤ２０７６４、ＡＤ２０７８３、ＡＤ３００７１、ＡＤ３６９６９、ＡＤ３６９７０、ＡＤ３７７１８、ＡＤ３７７１９、ＡＤ３７７２０、ＡＤ３７７２１、ＡＤ３７７２２、ＡＤ３７７２３、ＡＤ３７７２４、ＡＤ３７７２５、ＡＤ３７７２６、ＡＤ３７７２７、ＡＤ３７７２８、ＡＤ３７７２９、ＡＤ３７７３０、ＡＤ３７７３１、ＡＤ３７７３２、ＡＤ３７７３３、ＡＤ３７７３４、ＡＤ３７７３５、ＡＤ３７７３６、ＡＤ３７７３７、ＡＤ３７７３８、ＡＤ３７７３９、ＡＤ３７７４０、ＡＤ３７７４１、ＡＤ３７７４２、または修飾された、もしくは修飾されていないその変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔが異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０またはそれ以上のｎｔ（またはそれらのあらゆる範囲、例えば、０−１、１−２、１−３、１−４ｎｔなど）をさらに含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願明細書は、本明細書に記載されている任意の１つ以上のＲＮＡｉ剤を含む。
さらなる特定の態様
ＨＳＦ１に対する特定のＲＮＡｉ剤は、科学文献、例えば、Rossiら 2006 Cancer Res. 66:7678-85; Dokladnyら 2008 Am. J. Pathology 72:659-70; Jacobsら 2007 J. Biol. Chem. 282: 33412-20; Pageら 2006 Mol. Biosystems 2:627-39; Zhaoら 2007 Diabetes 56: 1436-1444;およびDuら 2009 J. Cell. Phys. 218:631-637において記載されている。配列および修飾の両方において同一でない限り、本発明の組成物は、これらのＲＮＡｉ剤を含まない。
他の特定の態様は、１、２、３、４個またはそれ以上のこれらのＲＮＡｉ剤を含む組成物を含む。別の態様は、任意の単一のＲＮＡｉ剤を、それと重複する他の任意のＲＮＡｉ剤と共に含む組成物である。別の態様は、２、３、４個またはそれ以上の重複しないＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤を含み、したがって、ＲＮＡ分子の異なる部分を標的とする。２つ以上のＲＮＡｉ剤が使用されるとき、それらは同時に、または連続して投与することができる。
別の特定の態様は、挙げられている任意のＲＮＡｉ剤のセンス鎖に対する少なくとも１５個の連続したヌクレオチド（順番に同一）を含むセンス鎖、および同じＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖に対する少なくとも１５個の連続したヌクレオチド（順番に同一）を含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。別の態様において、組成物は、１、２、３、４個またはそれ以上のこのようなＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、組成物は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個の不一致で異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、組成物は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個の不一致で異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の態様において、組成物は、挙げられている１つのＲＮＡｉ剤のセンス鎖と０、１、２または３個の不一致で異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖、および同じＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個の不一致で異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
「不一致」は、本明細書において、２つの配列が最大にアラインされ、比較されているとき、塩基配列または長さの間の違いとして定義される。非限定的な例として、不一致は、違いが、一方の配列における特定の位置での塩基および他方の配列における対応する位置での塩基間（例えば、与えられたＲＮＡｉ剤および本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤の配列間）で存在するとき数える。したがって、不一致は、例えば、一方の配列における位置が特定の塩基（例えば、Ａ）を有し、他方の配列における対応する位置が異なる塩基（例えば、Ｇ、ＣまたはＵ）を有するとき数える。不一致はまた、例えば、一方の配列における位置が塩基（例えば、Ａ）を有し、他方の配列における対応する位置が塩基を有さない（例えば、リン酸−糖骨格を有するが塩基を有さない脱塩基ヌクレオチドである位置）とき数える。いずれかの配列（またはセンスまたはアンチセンス鎖）における一本鎖ニックは、不一致として数えない。したがって、非限定的な例として、一方の配列が配列Ａ−Ｇを含むが、他方の配列がＡおよびＧ間で一本鎖ニックを有する配列Ａ−Ｇを含むとき不一致とは数えない。塩基修飾はまた、不一致とは考えない。一方の配列がＣを含み、他方の配列が同じ位置で修飾されたＣ（例えば、２’−修飾を有する）を含むとき、不一致は数えない。したがって、塩基の置換または変化以外のヌクレオチドの修飾は、不一致を構成しない。例えば、不一致は、Ａであるヌクレオチドおよび５’修飾（例えば、図１に説明されているもの）および／または２’−修飾を有するＡであるヌクレオチド間で起こらない。不一致（塩基置換）の重要な特徴は、反対の鎖上の対応する塩基と塩基対ができないことである。加えて、不一致の数を数えるとき、末端オーバーハング、例えば、「ＵＵ」または「ｄＴｄＴ」は数えず；「１５個の連続したヌクレオチド」を計算するとき、末端「ＵＵ」または「ｄＴｄＴ」オーバーハングはまた含まない。
これらの態様において、不一致は、一方の配列の塩基が他方の配列の塩基と合わない位置として定義される。
別の態様において、組成物は、１、２、３、４個またはそれ以上のこのようなＲＮＡｉ剤を含む。
別の態様において、組成物は、挙げられている１つのＲＮＡｉ剤のセンス鎖と０、１、２または３個の不一致で異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖、および同じＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個の不一致で異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡの重複グループ
種々の態様において、本明細書は、重複配列を有するＲＮＡｉ剤のグループに関する。したがって、本明細書は、ＲＮＡｉ剤のグループを含み、ここで、グループ中のそれぞれのＲＮＡｉ剤は、同じグループ中のＲＮＡｉ剤と互いに少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９個またはそれ以上のヌクレオチドで重複している。特に、１つの態様において、重複は少なくとも１２ｎｔである。重複している配列のグループは、表３Ａに示されている。
表３Ａは、例えば、ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６が、センス鎖においてＡＣＧＵＣＣＣＧＧＣＣＵの配列およびアンチセンス鎖においてＡＧＧＣＣＧＧＧＡＣＧＵの配列の共通の技術的特徴を共有することを示す。もちろん、重複の１２ｎｔ部分のみが示されていることに注意するべきである；ＲＮＡｉ剤の多数のグループは、１２ｎｔを越えて重複している。遺伝子内の位置も示されている。
したがって、本明細書は、重複ＲＮＡｉ剤、例えば、（１）ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６の配列を含むＲＮＡｉ剤；（２）ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６の配列からなるＲＮＡｉ剤；（３）ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６の配列を含むＲＮＡｉ剤；（４）ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６の配列を含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤；（５）ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６の配列と０から３個の不一致で１５個の連続したｎｔを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤；（６）ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６の配列と０から３個の不一致で１５個の連続したｎｔを含むセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤；（７）ＡＤ−２０５９４およびＡＤ−２０５９６の配列と０から３個の不一致で１５個の連続したｎｔを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤などのグループを含む種々の態様を含む。本明細書はまた、表３Ａに記載されているＲＮＡｉ剤の全ての重複グループを反映する同様の態様を含む。
ＲＮＡｉ剤の変異体（例えば、種々の修飾、キャップなどを含む）は、本明細書、例えば、表２、３、９Ａおよび９Ｂに記載されている。これらの文章および表において、例えば、ＡＤ−２０４３７は、ＡＤ−２０４３７．４と同じ配列を共有するが、ＲＮＡｉ剤は修飾、キャップ（例えば、５’および／または３’キャップ）などで異なっている。しかしながら、与えられた配列のＲＮＡｉ剤を含むすべての重複グループはまた、同じ配列を有する他のすべてのＲＮＡｉ剤を含むが、修飾、キャップなどによる種々の変異体も含む。したがって、ＡＤ−２０４３７を含む重複ＲＮＡｉ剤のすべてのグループはまた、ＡＤ−２０４３７．４および同じ配列の他の変異体（例えば、種々の修飾、キャップなどを有する）を含む。さらなる態様は、本明細書において提供され、本明細書のそれぞれのＲＮＡｉ剤の範囲に含まれる。
実施例
実施例１．バイオインフォマティクス
転写産物
オリゴヌクレオチド設計を、ヒト由来の遺伝子「熱ショック転写因子１（ＨＳＦ１）」（ＮＣＢＩ ｓｙｍｂｏｌ ＨＳＦ１）、アカゲザル(rhesus monkey)（アカゲザル(Macaca mulatta)）、カニクイザル(cynomolgus monkey)（カニクイザル(Macaca fascicularis)）およびオランウータン(orangutan)（オランウータン(Pongo pygmaeus)）由来のオルソログ配列を標的とするｓｉＲＮＡを同定するために実施した。設計工程は、ヒト由来のＨＳＦ１転写産物ＮＭ＿００５５２６．２（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩｄ ３２９７）、アカゲザル由来のＥＮＳＭＭＵＴ００００００２０６４８（ｆｒｏｍ Ｅｎｓｅｍｂｌ）、内部でクローニングされ、配列決定されたカニクイザルＨＳＦ１配列（例えば、配列番号：２０５１）、およびオランウータン由来のＥＮＳＰＰＹＴ００００００２２１２２（Ｅｎｓｅｍｂｌ）を使用した。設計戦略は以下のとおりである：全て完全に１９−ｍｅｒ ヒト／カニクイザルＨＳＦ１がマッチすることで開始する。次に、全て完全に１９−ｍｅｒ ヒト／オランウータン／アカゲザルがマッチするこのセットを拡張する。次に、設計時に利用できる部分的なカニクイザル配列と不一致を有するあらゆる１９−ｍｅｒを排除した。最後に、７つの配列を、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ｓｈＲＮＡライブラリーで相同性に基づいて選択した。ヒトＨＳＦ１遺伝子と全て完全にマッチした５１２個の１９−ｍｅｒ配列の得られたセットを、次に、さらに合成のためにサンプリングし、スクリーニングした。これらの配列は、表１に記載されている。これらの配列は修飾されていなかった。
フレーズ「位置」は、転写産物におけるオリゴヌクレオチド（例えば、１９−ｍｅｒ）の開始位置を示す。これは、転写産物の開始に関連してヌクレオチド座標において測定される。
表１．ＨＳＦ１ １９−ｍｅｒ
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表１中の配列の修飾は、当業者により容易に考えられる。これらの配列の例および非限定的な修飾を考えた。これらは、表２および３に記載されている。さらなる修飾が考えられる。
表２および３に記載されている修飾された配列において、いくつかの修飾は、エンドヌクレアーゼに感受性であると予測される部位で置換された。いくつかの修飾は、ｓｉＲＮＡに対する免疫応答を除去するが活性をほぞンしているように設計した。一般的に、センス鎖は多く修飾され、アンチセンス鎖は少し修飾された。いくつかの修飾は、２つ以上の目的にかなう。表２は、これらの修飾された配列で製造されたＲＮＡｉ剤を記載している。
スクリーニング後、カニクイザル由来の全長ＨＳＦ１遺伝子配列を生産し（上記参照）、ヒト／カニクイザル１９−ｍｅｒ配列の同一性を評価するために使用した。ＷＩ３８およびＨｅＬａ細胞における単回投与での有効性に関してスクリーニングされた４０６個の１９−ｍｅｒのうち、３７５個は、ヒトおよびカニクイザル間で完全にマッチする（例えば、不一致がゼロ）。
表２．ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤（修飾された配列を有する）
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本明細書におけるヌクレオチド配列の略語は、表２Ａに記載されている。
表２Ａ．略語
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表２に記載されているＲＮＡｉ剤は、実施例２に記載されているとおりに製造された。
修飾された配列は、表１に記載されている他の１９−ｍｅｒについて考えた。これらの修飾された配列は、表３に記載されている。表２と同様に、表３における修飾された配列は、例であり、非限定的である；別の修飾は当業者により容易に考えられ、さらなる、および別の塩基修飾は、本明細書の他の場所に記載されている。
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実施例１Ａ．重複ｓｉＲＮＡ
上記のいくつかのｓｉＲＮＡは、互いに配列において重複している。以下の表は、グループのそれぞれのメンバーは、少なくとも１２ｎｔで同じグループのメンバーと互いに重複しているＲＮＡｉ剤のグループの編集を示す。センス鎖の重複の１２−ｎｔ部分およびアンチセンス鎖の重複の１２−ｎｔ部分を示す。したがって、例えば、ＡＤ−２０２９６およびＡＤ−２０３００は、センス鎖においてＣＣＡＡＧＣＵＧＵＧＧＡの配列およびアンチセンス鎖においてＵＣＣＡＣＡＧＣＵＵＧＧの配列の共通の技術的特徴を共有する。もちろん、重複の１２−ｎｔ部分のみを示すことに注意すること；ＲＮＡｉ剤の多数のグループは、１２ｎｔ以上で重複する。遺伝子内の位置も示されている。
表３Ａ．重複ｓｉＲＮＡ
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実施例２．ｓｉＲＮＡの製造
小規模合成を、ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡを製造するために使用する；中および大規模合成をまた、大量にこれらのｓｉＲＮＡを製造するために使用することができる。
最初のスクリーニングのための小規模合成および精製方法（１μｍｏｌｅ規模）
小規模合成を使用して、ｓｉＲＮＡを産生する。
ＨＳＦ１配列を、１μｍｏｌ規模でＭｅｒＭａｄｅ １９２ シンセサイザー（BioAutomation, Plano, Tex.）にて合成する。
リスト中の全ての配列に関して、「エンドライト」化学を、以下に記載されているとおりに適用する：
センス鎖中の全てのピリミジン（シトシンおよびウリジン）は、２’−Ｏ−メチル塩基（２’Ｏ−メチル Ｃおよび２’−Ｏ−メチル Ｕ）を含む。
アンチセンス鎖において、リボＡヌクレオシドに隣接したピリミジン（５’位置方向）を、それらの対応する２−Ｏ−メチルヌクレオシドで置換する。
センスおよびアンチセンス配列の両方の３’末端で、２つの塩基ｄＴｄＴ伸長を導入する。
配列ファイルを、ＭｅｒＭａｄｅ １９２ 合成 ソフトウェアにおけるローディングに適合させるためにテキストファイルに変換する。
合成、開裂および脱保護：
ＨＳＦ１配列の合成は、ホスホラミダイト(phosphoramidite)化学を使用して固体支持オリゴヌクレオチド合成を使用することができる。
上記配列の合成は、９６ウェルプレートにおいて１ｕｍ規模で行う。リボおよび２−Ｏ−メチルホスホラミダイト溶液を０．１Ｍの濃度で製造し、エチルチオテトラゾール（アセトニトリル中で０．６Ｍ）を、アクチベーターとして使用する。Ｄｅｂｌｏｃｋ溶液、酸化剤溶液およびキャッピング(capping)溶液を、標準プロセスにしたがって製造する。
合成された配列を、第１工程においてメチルアミン溶液（水溶液およびエタノール溶液の３：１混合物）および第２工程においてフッ化物試薬を使用して、９６ウェルプレート中で開裂させ、脱保護させる。粗配列をアセトン：エタノール（８０：２０）混合物を使用して沈澱させ、ペレットを０．０２Ｍの酢酸ナトリウムバッファーに再懸濁する。それぞれの配列からのサンプルを、同一性を確認するためにＬＣ−ＭＳ、定量化のためにＵＶにより分析し、選択されたサンプルセットを、純度を決定するためにＩＥＸクロマトグラフィーにより分析する。
精製および脱塩化：
ＨＳＦ１表題(tiled)配列を、供給源１５Ｑカラムを使用するＡＫＴＡ ｅｘｐｌｏｒｅｒ精製系にて精製する。６５Ｃのカラム温度を精製中、維持する。サンプル注射および回収を９６ウェル（１．８ｍＬ−ディープウェル）プレートにおいて行う。全長配列に対応する単一のピークを、溶離剤中で回収する。精製された配列を、ＡＫＴＡ ｐｕｒｉｆｉｅｒを使用してＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ カラムで脱塩する。脱塩されたＨＳＦ１配列の濃度を、２６０ｎｍ波長での吸光度を使用して計算し、純度をイオン交換クロマトグラフィーにより測定した。
アニーリング：
精製された脱塩されたセンスおよびアンチセンス単一の鎖を等モル量で混合し、アニーリングし、ＨＳＦ１二本鎖を形成する。該二本鎖は、１×ＰＢＳバッファー中で１０ｕＭ濃度で製造され、純度についてキャピラリーゲル電気泳動により試験する。
中規模合成および精製（１−５０μｍｏｌ）
また、中規模合成を使用して、ｓｉＲＮＡを産生することができる。
１から５０μｍｏｌ間の規模における一本鎖ＲＮＡを、ＡＢＩ ＤＮＡ／ＲＮＡシンセサイザー３９４（Applied Biosystems）および固体支持体としてＰｒｉｍｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ａｓｔｏｎ、ＰＡ）から購入される制御された細孔ガラス（CPG、５００Å、負荷８０−１００μｍｏｌ／ｇ）を使用する固相合成により製造する。大規模について、Glen Research Corpからの空の合成カラム（１０μｍｏｌ）および大型アミダイト（８０ｍＬ）および試薬ボトル（４５０ｍＬ）を使用する。ＲＮＡおよび２’−Ｏ−メチルヌクレオチドを含むＲＮＡを、それぞれ、対応するホスホラミダイトおよび２’−Ｏ−メチルホスホラミダイトを使用する固相合成により産生する（ChemGenes, Wilmington, MA）。これらの構成要素は、例えば、Nucleic Acid Chemistry, Beaucage, S.Lら (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA中のCurrent Protocolsに記載されている、標準ヌクレオシドホスホラミダイト化学を使用して、オリゴリボヌクレオチド鎖の配列内で選択された部位で組み込まれる。ホスホロチオエート結合は、ピリジン中の０．１ＭのＤＤＴＴ（AM Chemicals, Oceanside, CA）の溶液を使用して導入される。さらなる補助的試薬は、Glen Research Corp. (Sterling, VA)から得られる。
陰イオン交換ＨＰＬＣによる粗オリゴリボヌクレオチドの脱保護および精製は、確立された手段にしたがって行う。収率および濃度は、２６０ｎｍの波長で分光学的に決定する。二本鎖ＲＮＡは、アニーリングバッファー（一般的に、リン酸バッファー溶液、ＰＢＳ、Ambion, Applied Biosystems, Austin, TX)中で所望の濃度で相補鎖の等モル溶液を混合することにより産生する。次に、混合物を水浴中で８５−９０℃で５分間加熱し、３−４時間にわたって室温に冷やす。ＲＮＡ二本鎖を、使用まで−２０℃で保存する。
実施例３．ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤
ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡは、表２において提供され、実施例２に記載されているとおりに製造する。これらのＲＮＡｉ剤の活性は、表４に記載されている。
表４は、１０ｎＭの示されているｓｉＲＮＡで処理された約２０，０００個のＷ１３８またはＨｅＬａ細胞中のＨＳＦ１発現の残りのレベルを示す。発現測定は、トランスフェクション２４時間後に行う。発現は、ＲＴ−ｑＲＴ［リアルタイム定量逆転写］を使用して測定する。残りの活性をＬｕｃ ｓｉＲＮＡトランスフェクト細胞中のＨＳＦ１発現を標準化する、コントロールと比較して１．００００００＝１００％の遺伝子発現、または全くない、もしくは０％の遺伝子ノックダウン；およびＷ１３８またはＨｅＬａ細胞中の０．００００００＝０％の遺伝子発現、または完全な、もしくは１００％の遺伝子ノックダウン。低い数（ゼロに近い）は、より強力なｓｉＲＮＡを示す。例えば、ｓｉＲＮＡ ＡＤ−２０３０３における「ＷＩ３８」の欄は、残りの遺伝子活性が１０ｎＭで５．６％であり、または９４．４％の遺伝子ノックダウンであることを意味する「０．０５６２３２」を示す。ＨｅＬａの欄において、「０．０９８８７１４３２」は、１０ｎＭで約９．９％の残りの活性であり、または９０．１％の遺伝子ノックダウンを示す。
ｓｉＲＮＡの連続希釈を行い、データ曲線を合わせ、遺伝子発現の５０％をノックダウンするために必要とされる用量（濃度）（「ＥＣ５０」または遺伝子発現を５０％減少させるために概算される有効な濃度）を計算した。「ＥＣ５０平均」は、５０％の遺伝子ノックダウンをなし遂げるために予期されるｓｉＲＮＡの量をｎＭにおいて示す；挙げられている数は２つの実験の平均である。より低い数は、より強力なｓｉＲＮＡを示す。空白の欄は、かかる配列を有するｓｉＲＮＡを特定の試験において試験しなかったか、またはかかるデータが本明細書に含まれないことを示す。
表４において、接尾辞「−ｂ１」、「−ｂ２」などは、バッチ数を示す。したがって、例えば、「ｂ１」はバッチ１であり、「ｂ２」はバッチ２である。したがって、例えば、「ＡＤ−２０４８９−ｂ１」、「ＡＤ−２０４８９−ｂ２」および「ＡＤ−２０４８９」は全て、同じ配列を有し、化学的に同一である。
表４．ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤の活性
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 ＊ ＜１Ｅ−０５は、１×１０−５未満を意味する。
実施例３Ａ．インビトロでのスクリーニングのための方法論
細胞培養およびトランスフェクション
ＷＩ−３８またはＨｅＬａ(ATCC, Manassas, VA)細胞を、１０％のＦＢＳ、ストレプトマイシンおよびグルタミン（ＡＴＣＣ）を補ったＲＰＭＩまたはＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ）中で５％のＣＯ２雰囲気下で３７℃でほぼコンフルエンスにまで増殖させ、トリプシン処理によりプレートから単離する。逆トランスフェクションを、ウェルあたり５μｌのｓｉＲＮＡ二本鎖に対して５μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭを９６−ウェルプレートに、ウェルあたり１０μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭプラス０．２μｌのリポフェクタミン ＲＮＡｉＭａｘ(Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 13778-150)と共に加えることにより実施し、室温で１５分間インキュベートする。次に、２×１０４個のＷＩ−３８細胞または２．０×１０４個のＨｅＬａ細胞を含み抗生物質を含まない８０μｌの完全増殖培地を加える。細胞を２４時間インキュベートし、ＲＮＡ精製する。それぞれのＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡについて、ＷＩ−３８細胞に対して１０ｎＭの最終二本鎖濃度およびＨｅＬａ細胞に対して１０ｎＭおよび０．１ｎＭの最終二本鎖濃度で実験を行う。１０ｎＭおよび０．１ｎＭスクリーンにおいて強力なサイレンシングを示したｓｉＲＮＡのサブセットを、１０ｎＭから０．００００５Ｍの濃度範囲にわたってアッセイし、それらのＩＣ５０を決定する。
ＭａｇＭＡＸ−９６ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ(Applied Biosystem, Foster City CA, part #: AM1830)を使用する全ＲＮＡ単離
細胞を回収し、１４０μｌの溶解／結合溶液に溶解させ、次にエッペンドルフサーモミキサー(Eppendorf Thermomixer)（混合速度はプロセスにわたって同じである）を使用して８５０ｒｐｍで１分間混合する。２０マイクロリットルの電磁ビーズおよび溶解／結合エンハンサー混合物を細胞溶解物に加え、５分間混合する。電磁ビーズを、磁気台を使用して捕獲し、ビーズを邪魔することなく上清を除去する。上清の除去後、電磁ビーズを洗浄溶液１（イソプロパノール付加）で洗浄し、１分間混合する。ビーズを再び捕獲し、上清を除去する。次に、ビーズを１５０μｌの洗浄溶液２（エタノール付加）で洗浄し、捕獲し、上清を除去する。次に、５０ｕｌのＤＮａｓｅ混合物（MagMax turbo DNase Buffer and Turbo DNase）をビーズに加え、それらを１０から１５分間混合する。混合後、１００μｌのＲＮＡ Ｒｅｂｉｎｄｉｎｇ溶液を加え、３分間混合する。上清を除去し、電磁ビーズを再び１５０μｌの洗浄溶液２で洗浄し、１分間混合し、上清を完全に除去する。電磁ビーズを２分間混合し、乾燥させ、ＲＮＡを５０μｌの水で溶離する。
ｃＤＮＡ合成を、以下のとおりＡＢＩ大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Applied Biosystems, Cat #4368813）を使用して行う：反応あたり２μｌの１０×バッファー、０．８μｌの２５×ｄＮＴＰ、２μｌのランダムプライマー、１μｌの逆転写酵素、１μｌのＲＮａｓｅ阻害剤および３．２μｌのＨ２Ｏのマスター混合物を、１０μｌの全ＲＮＡに加える。ｃＤＮＡを、以下の工程：２５℃ １０分、３７℃ １２０分、８５℃ ５秒、４℃ 維持を介してＢｉｏ−Ｒａｄ Ｃ−１０００またはＳ−１０００サーマルサイクラー(Hercules, CA)を使用して産生する。
リアルタイムＰＣＲを以下のとおりに行う：２μｌのｃＤＮＡを、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ ３８４ウェルプレート（Roche cat # 0472974001）において、ウェルあたり全１０μｌでの０．５ｕｌのＧＡＰＤＨ ＴａｑＭａｎプローブ（Applied Biosystems Cat # 4326317E）または１８Ｓ ＴａｑＭａｎ プローブ（Applied Biosystems Cat #4319413E）、０．５μｌのＨＳＦ１ ＴａｑＭａｎプローブ（Applied Biosystems cat # HS00232134 M1）および５μｌのＲｏｃｈｅプローブマスター混合物（Roche Cat # 04887301001）を含むマスター混合物に加える。リアルタイムＰＣＲをＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ リアルタイムＰＣＲ機（Roche）にて行う。それぞれの二本鎖を、少なくとも２つの独立したトランスフェクションにおいて試験する。それぞれのトランスフェクションをデュプリケートでアッセイする。
リアルタイムデータは、ΔΔＣｔ方法（Livakら 2001）を使用して分析する。それぞれのサンプルをＧＡＰＤＨ発現に対して標準化し、ノックダウンを非標的二本鎖ＡＤ−１９５５でトランスフェクトされた細胞と比較して評価する。ＩＣ５０は、ＸＬｆｉｔにおいて４つのパラメーターフィットモデルを使用して定義される。例えば、Kenneth and Schmittge. Methods 25:4, December 2001, 402-408参照。
実施例４．ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡ
表５において示されているとおり、１０１個のＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤のサブセットを示す。
１０１個の選択された二本鎖中の多くは、ＨｅＬａおよびＷＩ−３８細胞系の両方において１０ｎＭで＞８０％の遺伝子ノックダウン（ＫＤ）を有した。また、１０１個に含まれるものは、単一の細胞系において＞８０％のＫＤを有するが、２つの系の平均ＫＤは＞７５％のＫＤである二本鎖である。このセットはまた、０．１ｎＭのスクリーンでＷＩ−３８において＞５０％のＫＤを有する全ての二本鎖を含む。特定の興味のある、これらの１０１個のＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡを、表２に示す。この表はまた、１０ｎＭまたは０．１ｎＭのｓｉＲＮＡを使用したときの、ＨｅＬａおよびＷＩ−３８細胞におけるノックダウン（ＫＤ）を示す。１．０００＝１００％の遺伝子発現、または全くない、もしくは０％の遺伝子ノックダウン；および０．０００＝０％の遺伝子発現、または完全な、もしくは１００％の遺伝子ノックダウン。例えば、ＡＤ−２０３０３において、「ＨｅＬａ １０ｎＭ」の欄は、これらの細胞においてこの濃度で、ＲＮＡｉ剤が遺伝子発現を９．９％減少させる、または９０．１％の遺伝子ノックダウンを示すことを意味する「０．０９９」を示す。１０ｎＭの濃度でのＷＩ−３８細胞において、このＲＮＡｉ剤は、５．６％の残りの遺伝子活性、または９４．４％の遺伝子ノックダウンを示す。
表５．ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤−ノックダウンデータ
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実施例５．ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤のＨｅＬａ細胞スクリーン
表２における１０１個の二本鎖を、用量依存スクリーンにおいてＨｅＬａ細胞においてスクリーニングした。このスクリーンの目的は、ＥＣ５０（遺伝子発現を５０％減少させることができる最小用量のＲＮＡｉ剤）を決定するためであった。
１０ｎＭから１×１０−５ｎＭ間の１２個の濃度を含む連続希釈を使用した。ｓｉＲＮＡ二本鎖をリポフェクタミン ＲＮＡｉＭａｘを使用して細胞にトランスフェクトした（Zhaoら 2008 Mol. Biotech. 40: 19-26）。２４時間後、全ＲＮＡを単離し、ランダムプライマーを使用するｃＤＮＡ合成を使用する。１０−２０ｎｇの全ｃＤＮＡを、ＴａｑＭａｎアッセイ（Applied Biosystems, Foster City, California）のために使用する。それぞれの二本鎖をデュプリケートでアッセイした。データは、ＨＳＦ１に結合しない非標的コントロールＡＤ−１９５５と比較して平均倍変化として示す。ＡＤ１９５５は、ホタルルシフェラーゼを標的とするｓｉＲＮＡであり、スクリーニングアッセイにおいてネガティブコントロールｓｉＲＮＡとして使用する。結果は表６に示す。
表６−ＥＣ５０データ＊
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 ＊ 「＜１Ｅ−０５」は、１×１０−５未満を意味する。
実施例６．ＨＳＦ１ ＲＮＡｉ剤のさらなるスクリーニング
表４および５において報告されている決定後、特定のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含むプレートの不完全な解凍から生じると現在考えられる濃縮人工産物に付されたことを決定した。２つの大型データセット（標的と関連しない）のその後の分析は、あらゆるこのような濃縮人工産物が通常の実験の変動で説明することができるもの以上に、アッセイ結果を変化させないことを示した。さらに、これらの濃縮人工産物は、導かれる選択について我々の結論に実質的に影響する可能性がない。
上記ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡのさらなるスクリーニングデータは、以下の表７に示す。
ＨＳＦ１再スクリーン
ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡを、これらの二本鎖における単一の鎖が本来アニーリングされるときの二本鎖濃度において見られる不一致に対処するために再スクリーニングする。２つのｓｉＲＮＡ濃度１０ｎＭおよび０．１ｎＭで、４１４個のｓｉＲＮＡを再アニーリングし、スクリーニングする。全ての二本鎖を、２つの独立した実験にて両方の用量でスクリーニングする。
インビトロでのスクリーニング：
細胞培養およびトランスフェクション
ＨｅＬａ(ATCC, Manassas, VA)細胞を、１０％のＦＢＳ、ストレプトマイシンおよびグルタミン（ＡＴＣＣ）を補ったＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ）中で５％のＣＯ２雰囲気下で３７℃でほぼコンフルエンスにまで増殖させ、トリプシン処理によりプレートから単離する。逆トランスフェクションを、ウェルあたり５μｌの２００ｎＭまたは２ｎＭのｓｉＲＮＡ二本鎖に対して９６−ウェルプレートに、ウェルあたり１５μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭプラス０．２μｌのリポフェクタミン ＲＮＡｉＭａｘ（Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 13778-150）と共に加えることにより実施し、室温で１５分間インキュベートする。次に、２×１０４個のＨｅＬａ細胞を含み抗生物質を含まない８０μｌの完全増殖培地を加え、１０ｎＭまたは０．１ｎＭの最終二本鎖濃度とする。細胞を２４時間インキュベートし、ＲＮＡ精製する。
Ｄｙｎｏｂｅａｄ（Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 610-12）を使用するｍＲＮＡ単離：
細胞を回収し、１５０μｌの溶解バッファーに溶解させ、次にプラットホームシェーカー(platform shaker)（混合速度はプロセスにわたって同じである）を使用して８５０ｒｐｍで５分間混合する。７０ｕｌの溶解バッファーで以前に洗浄された１０マイクロリットルの電磁ビーズを細胞溶解物に加え、５分間混合する。電磁ビーズを、磁気台を使用して捕獲し、ビーズを邪魔することなく上清を除去する。電磁ビーズ／ＲＮＡを、１５０ｕｌのバッファーを加え、１分間撹拌し、磁気台上にビーズの捕獲の後に上清を捨てることにより洗浄バッファーＡで２回洗浄する。次に、ビーズを１５０μｌの洗浄バッファーＢで洗浄し、１分間撹拌し、電磁ビーズ台に捕獲し、上清を除去する。次に、Ｄｙｎｏｂｅａｄ／ｍＲＮＡ混合物を、１分間撹拌し、磁気環台に捕獲し、溶離バッファーを捨てることにより１５０ｕｌの溶離バッファーで洗浄する。ｍＲＮＡを、５０ｕｌの溶離バッファーを加えて、７０℃で４分間撹拌することにより溶離する。混合後、ビーズを再捕獲するために、プレートを２分間、電磁ビーズ台に置き、溶離されたＲＮＡを含む上清を新たなプレートに取り出す。
ＡＢＩ大容量ｃＤＮＡ逆転写キットを使用するｃＤＮＡ合成
反応あたり１μｌの１０×バッファー、０．４μｌの２５×ｄＮＴＰ、１μｌのランダムプライマー、０．５μｌの逆転写酵素、０．５μｌのＲＮａｓｅ阻害剤および１．６μｌのＨ２Ｏのマスター混合物を、５μｌの全ＲＮＡに加える。ｃＤＮＡを、以下の工程：２５℃ １０分、３７℃ １２０分、８５℃ ５秒、４℃ 維持を介してＢｉｏ−Ｒａｄ Ｃ−１０００またはＳ−１０００サーマルサイクラー(Hercules, CA)を使用して産生する。
リアルタイムＰＣＲ：２μｌのｃＤＮＡを、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ ３８４ウェルプレート（Roche cat # 0472974001）において、ウェルあたり全１０μｌでの０．５ｕｌのＧＡＰＤＨ ＴａｑＭａｎプローブ（Applied Biosystems Cat # 4326317E）または１８Ｓ ＴａｑＭａｎ プローブ（Applied Biosystems Cat #4319413E）、０．５μｌのＨＳＦ１ ＴａｑＭａｎプローブ（Applied Biosystems cat # HS00232134 M1）および５μｌのＲｏｃｈｅプローブマスター混合物（Roche Cat # 04887301001）を含むマスター混合物に加える。リアルタイムＰＣＲをＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ リアルタイムＰＣＲ機（Roche）にて行う。それぞれの二本鎖を、少なくとも２つの独立したトランスフェクション（スクリーン１およびスクリーン２と称される）において試験する。それぞれのトランスフェクションをデュプリケートでアッセイする。スクリーン１およびスクリーン２において、ｑＰＣＲは、標準化のためにＧＡＰＤＨを使用して行う。スクリーン１において、ｑＰＣＲは、標準化のために１８Ｓを使用して２回繰り返す。
リアルタイムデータは、ΔΔＣｔ方法（Livakら 2001）を使用して分析する。それぞれのサンプルをＧＡＰＤＨまたは１８Ｓ発現に対して標準化し、ノックダウンを非標的二本鎖ＡＤ−１９５５でトランスフェクトされた細胞と比較して評価する。より高い値は、ノックダウンが小さいことを示す。参照：Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2-ΔΔCT Method。Kenneth J. Livak, Thomas D. Schmittge. Methods 25:4, December 2001, 402-408。
表７において示されているとおり、以下の特定のＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡを、コントロールとしてＧＡＰＤＨおよび１８ｓを使用して、２回（スクリーン１および２）再スクリーニングする。この表はまた、上記データがないいくつかのＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡについてのスクリーニングデータを含む。数は、コントロール参照遺伝子としてＧＡＰＤＨまたは１８ｓを用いて、残りのＨＳＦ１遺伝子活性を示す。したがって、例えば、ＡＤ−２０２７８−ｂ２において、「１０ｎＭのスクリーン１（ＧＡＰＤＨ）」での「０．０８」は、８％の残りのＨＳＦ１遺伝子活性、または９２％の遺伝子ノックダウンを示す。
表７．ＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡ（１０ｎＭおよび０．１ｎＭ）のさらなるスクリーニング
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実施例７．ＲＮＡｉ剤のインビボおよびＰＢＭＣ分析
ＨＳＦ１に対する選択されたＲＮＡｉ剤を、ＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）アッセイにおいて分析し、免疫原性を概算する；および、インビボでヌードマウスにおけるＨｅｐ３Ｂ（原発性肝臓異種移植片）皮下腫瘍。ＲＮＡｉ剤は脂質ナノ粒子においてインビボに送達される。５ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの単回用量を送達し、動物を殺し、組織を投与から７２時間後に回収した。結果を以下の表８に示す。
二本鎖ＩＤは、ＲＮＡｉ剤に対する種々の名前を示す；示される同じｓｉＲＮＡコア配列のＡＤ−ＸＸＸＸＸ／ＡＤ−ＸＸＸＸＸ＝ｄＴｄＴ／ｕｕ修飾版。（ＸＸＸＸＸ）は、ｕｕ配列における二本鎖ＩＤを示す。ヒトおよびカニクイザルＨＳＦ１遺伝子における標的配列（配列）および位置が挙げられている；「ｎａ」は、与えられた配列がカニクイザル遺伝子ではないことを示す。ＰＢＭＣ結果（ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α）は、挙げられたＲＮＡｉがＴＮＦ−αまたはＩＦＮ−αの測定される誘導により示される免疫応答を誘導するか否かを示す。「クワイアット(quiet)」は、与えられたＲＮＡｉ剤が免疫応答を誘導しないことを示す。「インビボＨｅｐ３Ｂ」の欄において、数はＨＳＦ１発現のノックダウンパーセントを示す。
表８．ＲＮＡｉ剤のインビボでのＰＢＭＣ分析
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したがって、上記表において示されているとおり、いくつかのＲＮＡｉ剤は、ＰＢＭＣアッセイにおいて免疫応答を誘導しない（「クワイアット」により示されている）。いくつかのＲＮＡｉ剤はまた、少なくとも４０％のＨＳＦ１発現のノックダウンを誘導した。ＡＤ−２０４０３／３００７０、ＡＤ−２０４３７／ＡＤ−３６９６９、ＡＤ−２０４３８、ＡＤ−２０４３９、ＡＤ−２０４８７／ＡＤ−３００７１（５４４）、ＡＤ−２０５４８、ＡＤ−２０５６０／ＡＤ−３７７３９（７３３）、ＡＤ−２０５６２（７３５）、ＡＤ−２０５６４／ＡＤ−３６９７１、ＡＤ−２０６２７（７５８）、ＡＤ−２０６６０（８２５）、ＡＤ−２０７０７（１３３０）およびＡＤ−２０７３０（１３７２）を、主な最適化のために選択する。
実施例８．５’−末端修飾
この実施例は、親と比較して活性を保持しているか、または改善されており、そして潜在的により安定であるｓｉＲＮＡを同定するために、多種の化学的性質のスクリーニングを記載する。
２相アプローチを使用する。第１の相は、Ｓ（センス）鎖不活性化のための最適の５’末端キャップを同定することを含む。使用される末端キャップは、逆方向ｄＴ、Ｌ−糖およびＣ−６−アルキルである。これらは、図１において説明される。評価のために４つの強力なＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡを使用して、それぞれのキャップが、アンチセンス（ＡＳ）の５’−末端上のときｓｉＲＮＡ活性をブロックするがセンス鎖の５’−末端上のとき活性を維持する能力について試験する。ＨｅＬａ細胞におけるＩＣ５０（ＥＣ５０）を決定する。
第２の相において、多種の化学的性質のモチーフを、第１の相において見られる最も良い５’−末端キャップの中でＨＳＦ１ ｓｉＲＮＡのより大きなセットについて試験する。
Ｓ（センス）修飾は、以下のものを含む：
エンドライト、ここで、全てのピリミジンは、２’−ＯＭｅ ｕｕ オーバーハングを有する２’−ＯＭｅで修飾されており、そして
全てのリボヌクレオチドは、２’−ＯＭｅ ｕｕ オーバーハングで使用される
ＡＳ修飾は、以下のものを含む：
全てのピリミジンは、２’−ＯＭｅ ｕｕ オーバーハングを有する２’−ＯＭｅで修飾されており
２’−ＯＭｅ ｕｕ オーバーハングを有する５ ３’−末端塩基上のエンドライト＋２’−ＯＭｅ
２’−ＯＭｅ ｕｕ オーバーハングを有する５ ３’−末端塩基のピリミジンのみでエンドライト＋２’−ＯＭｅ
表９Ａおよび表９Ｂは、本発明の範囲内で考えられる５’−末端修飾の例を提供する。表に記載されているとおり、ＩＣ５０ ＩおよびＩＣ５０ ＩＩは、ＩＣ５０（ＥＣ５０）の２つの決定の結果を示す。該結果は、ｎＭ濃度で示す。
表９Ａ．アンチセンス修飾
Figure 0005981625
 表９Ｂ．センス修飾
Figure 0005981625
上記表において、接尾辞、例えば、１、２、３、４などは、与えられたＲＮＡｉ剤の変異体を示すことに注意すること。したがって、例えば、ＡＤ−２０４３７．４およびＡＤ−２０４３７は、同じ配列を有するが、それらは、修飾、キャップなどにおいて変化し得る。したがって、ＡＤ−２０４３７．４；ＡＤ−２０４８７．７；ＡＤ−２０４８９．２；ＡＤ−２０５６０．４；ＡＤ−３７７１８．１；ＡＤ−３７７２１．１；ＡＤ−３７７２４．１；ＡＤ−３７７２７．１；ＡＤ−３７７３０．１；ＡＤ−３７７３３．１；ＡＤ−３７７３６．１；ＡＤ−３７７４０．１；ＡＤ−３７７１９．１；ＡＤ−３７７２２．１；ＡＤ−３７７２５．１；ＡＤ−３７７２８．１；ＡＤ−３００７１．２；ＡＤ−３６９６９．２；ＡＤ−３６９７０．２；ＡＤ−３７７１８．１；ＡＤ−３７７１９．１；ＡＤ−３７７２０．１；ＡＤ−３７７２１．１；ＡＤ−３７７２２．１；ＡＤ−３７７２３．１；ＡＤ−３７７２４．１；ＡＤ−３７７２５．１；ＡＤ−３７７２６．１；ＡＤ−３７７２７．１；ＡＤ−３７７２８．１；ＡＤ−３７７２９．１；ＡＤ−３７７３０．１；ＡＤ−３７７３１．１；ＡＤ−３７７３２．１；ＡＤ−３７７３３．１；ＡＤ−３７７３４．１；ＡＤ−３７７３５．１；ＡＤ−３７７３６．１；ＡＤ−３７７３７．１；ＡＤ−３７７３８．１；ＡＤ−３７７３９．１；ＡＤ−３７７４０．１；ＡＤ−３７７４１．１；ＡＤ−３７７４２．１に対するあらゆる言及（に関連する種々の態様の記載を含む）は、また、それぞれＡＤ−２０４３７；ＡＤ−２０４８７；ＡＤ−２０４８９．２；ＡＤ−２０５６０；ＡＤ−３７７１８；ＡＤ−３７７２１；ＡＤ−３７７２４；ＡＤ−３７７２７；ＡＤ−３７７３０；ＡＤ−３７７３３；ＡＤ−３７７３６；ＡＤ−３７７４０；ＡＤ−３７７１９；ＡＤ−３７７２２；ＡＤ−３７７２５；ＡＤ−３７７２８；ＡＤ−３００７１；ＡＤ−３６９６９；ＡＤ−３６９７０；ＡＤ−３７７１８；ＡＤ−３７７１９；ＡＤ−３７７２０；ＡＤ−３７７２１；ＡＤ−３７７２２；ＡＤ−３７７２３；ＡＤ−３７７２４；ＡＤ−３７７２５；ＡＤ−３７７２６；ＡＤ−３７７２７；ＡＤ−３７７２８；ＡＤ−３７７２９；ＡＤ−３７７３０；ＡＤ−３７７３１；ＡＤ−３７７３２；ＡＤ−３７７３３；ＡＤ−３７７３４；ＡＤ−３７７３５；ＡＤ−３７７３６；ＡＤ−３７７３７；ＡＤ−３７７３８；ＡＤ−３７７３９；ＡＤ−３７７４０；ＡＤ−３７７４１；およびＡＤ−３７７４２に言及する。したがって、ＡＤ−２０４３７を含む重複配列のｓｉＲＮＡの任意のグループは、また、ＡＤ−２０４３７．４を含む。これは、任意の変異体配列を含む他のグループに当てはまる；したがって、与えられた配列の重複ｓｉＲＮＡの任意のグループはまた、例えば、修飾および／またはキャップを有する配列の変異体を含むｓｉＲＮＡを含む。
逆方向ｄＴ（ｉｄＴ）およびＬ−糖は、アンチセンス鎖を修飾しているとき、活性を約１０から１００倍減少させることが見出される；これらの修飾がセンス鎖の５’−末端上に置かれているとき、最小の影響がある。
他に定義がない限り、本明細書において使用されている技術的および科学的用語は、本記載は属する分野でよく知っている専門家により通常理解されるのと同じ意味を有する。
他に示されていない限り、具体的に詳細に記載されていないすべての方法、工程、技術および操作は、当業者に明らかであるため、それ自体既知の方法で行うことができるか、または行われている。例えば、標準ハンドブックおよび本明細書に記載されている一般的な背景技術および本明細書で引用されているさらなる文献も参照されたい。他に示されていない限り、本明細書で引用されているそれぞれの文献は、出典明示によりその全体を本明細書に包含させる。
特許請求の範囲は、非限定的であり、以下で提供される。
特定の態様および特許請求の範囲は、本明細書に詳細に記載されているが、これは、説明の目的のためのほんの一例としてであり、特許請求の範囲、または、あらゆる対応するさらなる出願の特許請求の範囲の対象の範囲に対して限定することを意図しない。特に、種々の置換、変化および修飾が、特許請求の範囲により定義されている記載の精神および範囲から逸脱することなく、本記載から作られ得ると本発明者らは考える。核酸出発物質、興味あるクローンまたはライブラリー型の選択は、本明細書に記載されている態様の知識を有する当業者に対して日常的な事柄であると考えられる。他の局面、有利なものおよび修飾は、特許請求の範囲内であると考える。当業者は、本明細書に記載されている本発明の特定の態様における多数の均等物を認識しているか、またはわずかな日常の実験を使用して確かめることができる。このような均等は、特許請求の範囲に包含されることが意図される。後に出願された対応する出願における特許請求の範囲の補正は、種々の国の特許法による限定のためであって、特許請求の範囲の対象を放棄すると解釈されるべきではない。

Claims (20)

  1. 個体におけるＨＳＦ１の発現を阻害するための医薬組成物であって、当該医薬組成物は第１の鎖および第２の鎖を含むＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤を含み、第１の鎖の配列は、配列番号：６３５、６３６、６７９、６８０、６８２、６８３または７８５の配列を含み、第１の鎖および／または第２の鎖は修飾されており、第１の鎖は約３０以下のヌクレオチドの長さである、医薬組成物。
  2. ＨＳＦ１に対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 第１の鎖および第２の鎖が、両方とも約１９から約２３のヌクレオチドの長さである、請求項１に記載の医薬組成物。
  4. ＲＮＡｉ剤が、修飾された糖骨格、ホスホロチオエート結合または２’−修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
  5. ＲＮＡｉ剤が、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
  6. ＲＮＡｉ剤が、平滑末端または１から４個の不対ヌクレオチドを有するオーバーハングを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
  7. ＲＮＡｉ剤が、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性を与える部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール（ｕｖａｏｌ）、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン（Ｆｒｉｅｄｅｌｉｎ）、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴ乳酸エステル １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン性物質、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している、請求項１に記載の医薬組成物。
  8. 個体におけるＨＳＦ１の発現を阻害するための医薬組成物であって、当該医薬組成物は第１の鎖および第２の鎖を含むＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤を含み、第１の鎖の配列は、配列番号：６３５、６３６、６７９、６８０、６８２、６８３または７８５の配列である、医薬組成物。
  9. 医薬組成物が、ＨＳＦ１に対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、請求項８に記載の医薬組成物。
  10. 第１の鎖および第２の鎖が、両方とも１９から２３のヌクレオチドの長さである、請求項８に記載の医薬組成物。
  11. ＲＮＡｉ剤が、修飾された糖骨格、ホスホロチオエート結合または２’−修飾ヌクレオチドを含む、請求項８に記載の医薬組成物。
  12. ＲＮＡｉ剤が、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
  13. ＲＮＡｉ剤が、平滑末端または１から４個の不対ヌクレオチドを有するオーバーハングを含む、請求項８に記載の医薬組成物。
  14. ＲＮＡｉ剤が、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性を与える部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴ乳酸エステル １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン性物質、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している、請求項８に記載の医薬組成物。
  15. 癌に罹患している個体におけるＨＳＦ１の発現を阻害するための医薬組成物であって、当該医薬組成物は薬学的に許容される担体ならびに治療有効量の第１の鎖および第２の鎖を含むＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤を含み、第１の鎖の配列は、配列番号：６３５、６３６、６７９、６８０、６８２、６８３または７８５の配列を含み、そして／または第２の鎖の配列は、配列番号：１２３、１２４、１６７、１６８、１７０、１７１または２７３の配列を含み、第１の鎖および／または第２の鎖は修飾されているか、または修飾されておらず、第１の鎖および／または第２の鎖は約３０以下のヌクレオチドの長さであり、当該医薬組成物は所望により、ＨＳＦ１に対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含んでいてもよい、医薬組成物。
  16. 膀胱、骨、乳房、子宮頸、大腸、結腸直腸、子宮内膜、線維肉腫、胃腸、造血器、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、神経外胚葉、神経芽腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、卵巣、膵臓、胸膜、前立腺、皮膚、扁平上皮、胃、および精巣癌、白血病、前骨髄球性白血病、ならびにホジキン病のリストから選択される癌である、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. さらなる癌処置と組み合わせて使用される、請求項１５に記載の医薬組成物。
  18. 第１の鎖および第２の鎖を含むＨＳＦ１に対するＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、第１の鎖の配列は、配列番号：６３５、６３６、６７９、６８０、６８２、６８３または７８５の配列であり、そして／または第２の鎖の配列は、配列番号：１２３、１２４、１６７、１６８、１７０、１７１または２７３の配列であり、第１の鎖および／または第２の鎖は修飾されている、医薬組成物。
  19. ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨｅＬａ細胞および／またはＷＩ−３８細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約８０％阻害することができる、請求項１８に記載の医薬組成物。
  20. ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＷＩ−３８細胞におけるＨＳＦ１の発現を少なくとも約９０％阻害することができる、請求項１８に記載の医薬組成物。
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