CN105125572A - 用于治疗hsf1相关疾病的有机组合物 - Google Patents

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Abstract

一种用于治疗HSF1相关疾病的有机组合物。本文公开内容涉及使用治疗有效量的针对HSF的RNAi活性剂来治疗热激因子1(HSF1)相关疾病(例如癌症和病毒疾病)的方法。

Description

用于治疗HSF1相关疾病的有机组合物

[0001] 本申请为2010年12月16日提交的、发明名称为"用于治疗HSFl相关疾病的有机 组合物"的PCT申请PCT/EP2010/069917的分案申请,所述PCT申请进入中国国家阶段的日 期为2012年6月18日,申请号为201080057690. 4。

[0002] 发明背景

[0003] HSFl是热激应答(其中多个基因应答于温度增加和其它应激而被诱导)的主要 调节物。在人和其它脊椎动物中,于非休克(non-shock)温度下,HSFl组成性产生,但是无 活性并且被蛋白HSP90结合。在升高的温度下,HSFl被HSP90释放,从细胞质移动到细胞 核,并三聚化。该活性HSFl结合DNA中的热激元件(HSE)并活化由RNA聚合酶II对热激 基因的转录。HSE具有三个NGAAN重复的共有序列,并且存在于HSP90、HSP70和HSP27基 因的启动子区域中。在热激应答休止期间,HSFl被促分裂原活化蛋白激酶(MPKs)和糖原 合酶激酶3 (GSK3)磷酸化,并且回到无活性状态。HSFl的生物化学情况被描述于Chu等人, 1996J. Biol. Chem. 271 :30847-30857 ;Huang 等人,1997 J. Biol. Chem. 272 :26009-26016 和 Morimoto 等人,1998 Nat. Biotech. 16 :833-838 等等中。

[0004] HSFl与另外的因子相互作用。HSFl与DNA修复所涉及的DNA依赖性蛋白激酶 (DNA-PK)结合。HSFl是促分裂原活化蛋白激酶的靶,并且其活性在RNA信号级联放大有活 性时被下调。

[0005] 人中另外的热激因子蛋白包括HSF2、HSF3和HSF4。HSF1、HSF2和HSF3是热激基 因表达的正调节物,而HSF4是负调节物。HSF1、HSF2和HSF4在对其它热激蛋白的转录控 制中具有作用。多种HSF蛋白共享大约40 %的序列同一性。

[0006] HSFl已被牵连于若干种疾病,包括癌症和病毒疾病。HSFl和其它热激蛋白(其表 达被HSFl增加的)过表达于或已另外被牵连于乳腺、子宫内膜、纤维肉瘤、胃、肾、肝、肺、淋 巴瘤、神经外胚层、成神经细胞瘤、Ewing' s肉瘤、前列腺、皮肤、鳞状细胞和睾丸的癌症,白 血病(例如早幼粒细胞白血病)和霍奇金氏病。

[0007] 不希望被特定理论束缚的情况下,人们相信,热激蛋白(HSP)尽管在转化期间触 发凋亡信号,但其可阻断凋亡途径,并且允许恶性细胞出现。HSP表达还可提供对癌细胞 的保护,以抵挡治疗例如化疗和过热疗法,这通过阻挠这些方式(modalities)的促凋亡 (pro-apoptotic)影响来实现。

[0008] 因为HSFl对HSPs正调控,因此存在对调节HSFl的疗法的需要。

[0009] 附图简述

[0010] 图1阐述了对针对HSFl的RNAi活性剂的多种5' -端修饰。

[0011] 发明简述

[0012] 本文公开内容包括针对HSFl的RNAi活性剂,其可用于对HSFl相关疾病(例如癌 症和病毒疾病)的治疗。

[0013] 本文公开内容提供了针对HSFl (热激因子1)基因的RNAi活性剂。HSFl是热激应 答(其中多个基因应答于温度增加和其它应激而被诱导)的主要调节物。

[0014] HSFl已被牵连于若干种HSF相关疾病,包括癌症和病毒疾病。HSFl和其它热激蛋 白(其表达被HSFl增加的)过表达于或已另外被牵连于乳腺、子宫内膜、纤维肉瘤、胃、肾、 肝、肺、淋巴瘤、神经外胚层、成神经细胞瘤、Ewing's肉瘤、前列腺、皮肤、鳞状细胞和睾丸的 癌症,白血病(例如早幼粒细胞白血病)和霍奇金氏病。

[0015] 因为HSFl对HSP正调控,因此存在对调节HSFl的疗法的需要。本文公开内容的 RNAi活性剂对HSFl特异性,并且可降低HSFl的表达。这些RNAi活性剂因此可用于治疗癌 症和病毒疾病。

[0016] 发明详述

[0017] 本文公开内容包括可用于治疗HSFl相关疾病(例如癌症和病毒疾病)的、针对 HSFl的RNAi活性剂。

[0018] 本文公开内容的多种实施方式包括下述。

[0019] 包含本文描述的RNAi活性剂的反义链的RNAi活性剂。

[0020] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性 剂包含反义链,其中所述反义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与选 自本文表(例如表1、表2、表3、表3A、表8、表9A、表9B等等)中提供的任何序列的针对 HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不同。在另一实施方式中,本文公开 内容涉及包含RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性剂包含正义链和反义链,其中所述反义 链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与来自本文提供的任何序列的针 对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不同。在另一实施方式中,本文公 开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性剂包含正义链和反义链,其中所述正 义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与前文刚刚列出的针对HSFl的 RNAi活性剂的正义链有0、1、2或3个核苷酸不同,并且所述反义链包含至少15个连续核苷 酸,所述至少15个连续核苷酸与前文刚刚列出的针对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、 2或3个核苷酸不同。

[0021] 特定双链体(duplexes)包括下述这些,其中每个双链体包含一组SEQ ID NOs,其 中第一SEQ ID NO对应正义链,以及第二SEQ ID NO对应反义链:AD-20403(SEQ ID N0:131 和 643;或 SEQ ID NO :1155 和 1667) ;AD-20437(SEQ ID NO :166 和 678;或 SEQ ID NO :1190 和 1702) ;AD-20438(SEQ ID NO :167 和 679 ;或 SEQ ID NO :1191 和 1703) ;AD-20439(SEQ ID NO :168 和 680 ;或 SEQ ID NO :1192 和 1704) ;AD-20487(SEQ ID NO :169 和 681 ;或 SEQ IDN0:1193和 1705);AD-20489(SEQIDN0:171和 683;或SEQIDN0:1195和 1707);AD-20490(SEQIDN0:172和 684;或SEQIDN0:1196和 1708);AD-20491(SEQIDN0:173 和685;或SEQIDN0:1197和 1709);AD-20548(SEQIDN0:234和746;或SEQIDN0 :1258 和 1770);AD-20560(SEQIDN0:269 和781;或SEQIDN0:1293 和 1805);AD-20562(SEQ ID NO :271 和 783 ;或 SEQ ID NO : 1295 和 1807) ;AD-20563 (SEQ ID NO :272 和 784 ;或 SEQ ID NO :1296 和 1808) ;AD-20564(SEQ ID NO :273 和 785 ;或 SEQ ID NO :1297 和 1809); AD-20578(SEQIDN0:285和 797;或SEQIDN0:1309和1821);AD-20626(SEQIDN0 :290 和802;或SEQIDN0:1314和 1826);AD-20627(SEQIDN0:291和803;或SEQIDN0 :1315 和 1827) ;AD-20644(SEQ ID NO :308 和 820 ;或 SEQ ID NO :1332 和 1844) ;AD-20648(SEQ ID NO :312 和 824 ;或 SEQ ID NO :1336 和 1848) ;AD-20652 (SEQ ID NO :316 和 828 ;或 SEQ ID NO :1340 和 1852) ;AD-20660(SEQ ID NO :324 和 836 ;或 SEQ ID NO :1348 和 1860); AD-20694(SEQIDN0:377和 889;或SEQIDN0:1401和1913);AD-20707(SEQIDN0 :393 和 905;或 SEQ ID NO :1417 和 1929) ;AD-20730(SEQ ID NO :415 和 927;或 SEQ ID NO :1439 和1951);AD-20437·4(SEQIDN0:3218和SEQIDN0:3219) ;AD-20487·7(SEQIDN0:3220 和SEQIDN0:3221);AD-20489·2(SEQIDN0:3222和SEQIDN0 :3223);AD-20560·4(SEQ ID NO :3224 和 SEQ ID NO :3225) ;AD-37718. 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I (SEQ ID NO :3280 和 SEQ ID N0:3281);AD-20303(SEQIDN0:30和 542;或SEQIDN0:1054和 1566);AD-20313(SEQ ID NO :40 和 552;或 SEQ ID NO :1064 和 1576) ;AD-20315 (SEQ ID NO :42 和 554;或 SEQ ID NO :1066 和 1578) ;AD-20348 (SEQ ID NO :56 和 568 ;或 SEQ ID NO :1080 和 1592); AD-20362(SEQIDN0:70和 582;或SEQIDN0:1094和 1606);AD-20364(SEQIDN0:72和 584;或 SEQ ID NO :1096 和 1608) ;AD-20365 (SEQ ID NO :73 和 585;或 SEQ ID NO :1097 和 1609);AD-20366(SEQIDN0:74和586;或SEQIDN0 :1098和1610);AD-20373(SEQIDN0:81 和 593;或 SEQ ID NO :1105 和 1617) ;AD-20376 (SEQ ID NO :84 和 596;或 SEQ ID NO: 1108和1620);AD-20378(SEQIDN0:85和597;或SEQIDN0 :1109和1621);AD-20386(SEQ ID NO :93 和 605;或 SEQ ID NO :1117 和 1629) ;AD-20389 (SEQ ID NO :117 和 629;或 SEQ ID NO :1141 和 1653) ;AD-20391 (SEQ ID NO :119 和 631;或 SEQ ID NO :1143 和 1655); AD-20392 (SEQ ID NO :120 和 632;或 SEQ ID NO :1144 和 1656) ;AD-20397 (SEQ ID NO :125 和 637;或 SEQ ID NO :1149 和 1661) ;AD-20398 (SEQ ID NO :126 和 638;或 SEQ ID NO :1150 和 1662) ;AD-20399(SEQ ID NO :127 和 639 ;或 SEQ ID NO :1151 和 1663) ;AD-20401(SEQ ID NO :129 和 641;或 SEQ ID NO :1153 和 1665) ;AD-20402 (SEQ ID NO :130 和 642;或 SEQ ID NO :1154 和 1666) ;AD-20404 (SEQ ID NO :132 和 644;或 SEQ ID NO :1156 和 1668); AD-20406 (SEQ ID NO :136 和 648;或 SEQ ID NO :1160 和 1672) ;AD-20407 (SEQ ID NO :137 和 649;或 SEQ ID NO :1161 和 1673) ;AD-20408 (SEQ ID NO :138 和 650;或 SEQ ID NO :1162 和 1674);AD-20409(SEQIDN0:139和651;或SEQIDN0 :1163和 1675);AD-20410(SEQ ID NO :140 和 652 ;或 SEQ ID NO :1164 和 1676) ;AD-20411 (SEQ ID NO :141 和 653 ;或 SEQ ID NO :1165 和 1677) ;AD-20413(SEQ ID NO :2042 和 2043;或 SEQ ID NO :2046 和 2047); AD-20422 (SEQ ID NO :151 和 663;或 SEQ ID NO :1175 和 1687) ;AD-20428 (SEQ ID NO :157 和 669;或 SEQ ID NO :1181 和 1693) ;AD-20434 (SEQ ID NO :163 和 675;或 SEQ ID NO :1187 和 1699);AD-20435(SEQIDN0:164和 676;或SEQIDN0:1188和 1700);AD-20488(SEQ ID NO :170 和 682;或 SEQ ID NO :1194 和 1706) ;AD-20493 (SEQ ID NO :175 和 687;或 SEQ ID NO :1199 和 1711) ;AD-20495(SEQ ID NO :177 和 689;或 SEQ ID NO :1201 和 1713); AD-20502 (SEQ ID NO :184 和 696;或 SEQ ID NO :1208 和 1720) ;AD-20507 (SEQ ID NO :189 和 701;或 SEQ ID NO :1213 和 1725) ;AD-20513 (SEQ ID NO :195 和 707;或 SEQ ID NO :1219 和1731);AD-20527(SEQIDN0:209 和721;或SEQIDN0:1233 和 1745);AD-20535(SEQ ID NO :217 和 729 ;或 SEQ ID NO :1241 和 1753) ;AD-20544 (SEQ ID NO :230 和 742 ;或 SEQ ID NO :1254 和 1766) ;AD-20545 (SEQ ID NO :231 和 743 ;或 SEQ ID NO :1255 和 1767); AD-20546 (SEQ ID NO :232 和 744;或 SEQ ID NO :1256 和 1768) ;AD-20547 (SEQ ID NO :233 和 745;或 SEQ ID NO :1257 和 1769) ;AD-20549 (SEQ ID NO :235 和 747;或 SEQ ID NO :1259 和 1771) ;AD-20552(SEQ ID NO :238 和 750 ;或 SEQ ID NO :1262 和 1774) ;AD-20555(SEQ ID NO :241 和 753 ;或 SEQ ID NO : 1265 和 1777) ;AD-20556 (SEQ ID NO :242 和 754 ;或 SEQ ID NO :1266 和 1778) ;AD-20557 (SEQ ID NO :243 和 755 ;或 SEQ ID NO :1267 和 1779); AD-20558 (SEQ ID NO :267 和 779 ;或 SEQ ID NO :1291 和 1803) ;AD-20561 (SEQ ID NO :270 和 782;或 SEQ ID NO :1294和 1806) ;AD-20565 (SEQ ID NO :274和 786;或 SEQ ID NO :1298 和 1810) ;AD-20566(SEQ ID NO :275 和 787 ;或 SEQ ID NO :1299 和 1811) ;AD-20572(SEQ ID NO :280 和 792;或 SEQ ID NO :1304 和 1816) ;AD-20574 (SEQ ID NO :2044 和 2045;或 SEQ ID NO :2048 和 2049) ;AD-20575 (SEQ ID NO :282 和 794;或 SEQ ID NO :1306 和 1818); AD-20577 (SEQ ID NO :284 和 796;或 SEQ ID NO :1308 和 1820) ;AD-20579 (SEQ ID NO :286 和 798;或 SEQ ID NO :1310 和 1822) ;AD-20625 (SEQ ID NO :289 和 801 ;或 SEQ ID NO :1313 和 1825) ;AD-20633(SEQ ID NO :297 和 809 ;或 SEQ ID NO :1321 和 1833) ;AD-20634(SEQ ID NO :298 和 810 ;或 SEQ ID NO :1322 和 1834) ;AD-20640 (SEQ ID NO :304 和 816 ;或 SEQ ID NO :1328 和 1840) ;AD-20646 (SEQ ID NO :310 和 822 ;或 SEQ ID NO :1334 和 1846); AD-20650 (SEQ ID NO :314 和 826;或 SEQ ID NO :1338 和 1850) ;AD-20653 (SEQ ID NO :317 和829;或SEQ ID NO :1341 和 1853) ;AD-20661 (SEQ ID NO :325和837;或SEQ ID NO :1349 和 1861) ;AD-20671(SEQ ID NO :337 和 849 ;或 SEQ ID NO :1361 和 1873) ;AD-20693(SEQ ID NO :376 和 888 ;或 SEQ ID NO :1400 和 1912) ;AD-20700 (SEQ ID NO :383 和 895 ;或 SEQ ID NO :1407 和 1919) ;AD-20702 (SEQ ID NO :385 和 897 ;或 SEQ ID NO :1409 和 1921); AD-20709 (SEQ ID NO :394 和 906;或 SEQ ID NO :1418 和 1930) ;AD-20710 (SEQ ID NO :395 和907;或SEQ ID NO :1419和 1931) ;AD-20714(SEQ ID NO :399和911 ;或SEQ ID NO :1423 和 1935) ;AD-20716(SEQ ID NO :401 和 913 ;或 SEQ ID NO :1425 和 1937) ;AD-20728(SEQ ID NO :413 和 925 ;或 SEQ ID NO :1437 和 1949) ;AD-20741 (SEQ ID NO :429 和 941 ;或 SEQ ID NO :1453 和 1965) ;AD-20764 (SEQ ID NO :452 和 964 ;或 SEQ ID NO :1476 和 1988); AD-20783(SEQIDN0:471和983;或SEQIDN0:1495和2007) ;AD-20278(SEQIDN0s:2053 和 2064 ;或 SEQ ID NOs :2075 和 2086) ;AD-20279 (SEQ ID NOs :2054 和 2065 ;或 SEQ ID NOs :2076 和 2087) ;AD-20280(SEQ ID NOs :2055 和 2066 ;或 SEQ ID NOs :2077 和 2088); AD-20281 (SEQ ID NOs :2056和2067 ;或SEQ ID NOs :2078和2089) ;AD-20282(SEQ ID NOs : 2057 和 2068 ;或 SEQ ID NOs :2079 和 2090) ;AD-20283(SEQ ID NOs :2058 和 2069 ;或 SEQ ID NOs :2080和 2091) ;AD-20377 (SEQ ID NOs :2059和 2070;或 SEQ ID NOs :2081 和 2092); AD-20570 (SEQ ID NOs :2060和 2071 ;或 SEQ ID NOs :2082和 2093) ;AD-20580 (SEQ ID NOs : 2061 和 2072 ;或 SEQ ID NOs :2083 和 2094) ;AD-20597 (SEQ ID NOs :2062 和 2073 ;或 SEQ ID NOs :2084 和 2095);和 AD-20598 (SEQ ID NOs :2063 和 2074;或 SEQ ID NOs :2085 和 2096)。这些示例双链体和针对具体正义链(SS)和反义链(AS)的SEQ ID NOs与其核苷酸 序列一起提供于本文中,例如,表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表9B中列出的。上述每 种组合物和表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表9B中列出的每种RNAi活性剂的经修饰 的序列(例如包含一个或多个经化学修饰的碱基的序列)也作为本文公开内容的部分被包 括。

[0022] 特定组合物

[0023] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性 剂包含反义链,其中所述反义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与选 自表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表9B中的任何一种或多种序列的针对HSFl的RNAi 活性剂的反义链有〇、1、2或3个核苷酸不同。在另一实施方式中,本文公开内容涉及包含 RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性剂包含正义链和反义链,其中所述反义链包含至少15 个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表9B中任 何一种或多种列出的针对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不同。在另 一实施方式中,本文公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性剂包含正义链 和反义链,其中所述正义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与前文刚 刚列出的针对HSFl的RNAi活性剂的正义链有0、1、2或3个核苷酸不同,并且所述反义链 包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与前文刚刚列出的针对HSFl的RNAi 活性剂的反义链有〇、1、2或3个核苷酸不同。特定的双链体包含上文提供的以及表1、表 2、表3、表3A、表8、表9A、表9B中任何一种或多种列出的那些具体的双链体。上述每种组 合物的额外的经修饰的序列(例如包含一个或多个经修饰的碱基的序列)也作为本文公开 内容的部分被包括。

[0024] 表Al针对本发明RNAi活性剂的正义链(SS)和反义链(AS)的SEQ ID NO

[0025] CN 105125572 A 说明书 6/154 页

Figure CN105125572AD00081

CN 105125572 A I兄明 7/154 页

Figure CN105125572AD00091
Figure CN105125572AD00101

CN 105125572 A 说明书 9/154 页

Figure CN105125572AD00111

[0029] 包含本文描述的RNAi活性剂的反义链的RNAi活性剂

[0030] 在一种特定的具体实施方式中,本文公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物,所 述RNAi活性剂包含反义链,其中所述反义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连 续核苷酸与选自上文提供的和表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表9B中列出的具体双链 体中那些反义链的针对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不同。

[0031] 下文描述了该实施方式的多个特定的具体实施方式。

[0032] 在一种实施方式中,组合物还包含针对HSFl的第二RNAi活性剂。在多种实施方 式中,第二RNAi活性剂与第一 RNAi活性剂物理上分开,或者两者物理上相连(例如共价连 接或缀合)。

[0033] 在一种实施方式中,反义链长度为大约30个或更少的核苷酸。

[0034] 在一种实施方式中,反义链与正义链形成双链体区域,其中所述双链体区域长度 为大约15至30个核苷酸对。

[0035] 在一种实施方式中,反义链大约15至大约30个核苷酸长,包括大约19至大约23 个核苷酸长。在一种实施方式中,反义链至少具有选自大约15个核苷酸、大约16个核苷酸、 大约17个核苷酸、大约18个核苷酸、大约19个核苷酸、大约20个核苷酸、大约21个核苷 酸、大约22个核苷酸、大约23个核苷酸、大约24个核苷酸、大约25个核苷酸、大约26个核 苷酸、大约27个核苷酸、大约28个核苷酸、大约29个核苷酸和大约30个核苷酸的长度。

[0036] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含导致RNAi活性剂在生物样品或环境中具有 增加的稳定性的修饰。

[0037] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含至少一种糖主链修饰(例如硫代磷酸键 (phosphorothioate linkage))或至少一个 2' -修饰的核苷酸。

[0038] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含:至少一个5'-尿苷-腺嘌呤-3'(5'-ua-3') 二核苷酸,其中尿苷是2'-修饰的核苷酸;至少一个5'-尿苷-鸟嘌呤-3'(5'-ug-3')二 核苷酸,其中5' -尿苷是2' -修饰的核苷酸;至少一个5' -胞苷-腺嘌呤-3'(5' -ca-3') 二核苷酸,其中5'-胞苷是2'-修饰的核苷酸;或至少一个5'-尿苷-尿苷-3'(5'-uu-3') 二核苷酸,其中5' -尿苷是2' -修饰的核苷酸。这些二核苷酸基序特别倾向于血清核酸酶 降解(例如RNase A)。在基序中第一个嘧啶核苷酸2'位进行的化学修饰预防或减慢此类 切割。该修饰方案也以术语"endo light"已知。

[0039] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含选自下组的2' -修饰,所述组由V -脱 氧、f -脱氧_2 ' -氣代、2 ' 甲基、2 ^ 甲氧基乙基(2 ^ -0-Μ0Ε)、2 ^ 氛基 丙基(2 ' -0~AP)、2 ' 二甲基氛基乙基(2' HMA0E)、2 ' 二甲基氛基丙基 (2' -0-DMAP)、2' -0-二甲基氨基乙氧基乙基(2' -0-DMAE0E)和2' -O-N-甲基乙酰氨 基C -0-ΝΜΑ)构成。在一种实施方式中,所有嘧啶(尿苷和胞苷)是2' 0-甲基-修饰 的核苷。

[0040] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含至少一个平端。

[0041] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含具有Int至4nt未配对的突出端。

[0042] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含位于RNAi活性剂反义链3' -端的突出端。

[0043] 在一种实施方式中,RNAi活性剂与一种或多种诊断性化合物、报道基团、交联 剂、核酸酶抗性赋予部分(moiety)、天然或非常见核苷碱基(nucleobase)、亲脂性分子、 胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、 砲、三砲、萨洒阜苷配基(sarsasapogenin)、无羁砲、无羁砲-3 β -醇-衍生的石胆酸 (epifriedelanol-derivatized lithocholic acid)、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普 鲁兰多糖(pullulan)、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体(oligo lactate 15-mer)、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋 白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子(polycationic)、肽、聚胺、肽模拟物和/或 转铁蛋白连接。

[0044] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约60%。

[0045] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约70%。

[0046] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约75%。

[0047] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约80%。

[0048] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约90%。

[0049] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约95%。

[0050] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约99%。

[0051] 在一种实施方式中,RNAi具有不超过大约0.1 nM的EC50。EC50是将基因表达降 低50 %的有效浓度。

[0052] 在一种实施方式中,RNAi具有不超过大约0.0 lnM的EC50。

[0053] 在一种实施方式中,RNAi具有不超过大约0.0 OlnM的EC50。

[0054] 包含本文描述的RNAi的正义链和反义链的RNAi活性剂。

[0055] 在一种特定的具体实施方式中,本文公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物,所 述RNAi活性剂包含正义链和反义链,其中所述正义链和反义链包含分别与选自上文提供 的和表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表9B中列出的具体双链体的针对HSFl的RNAi活 性剂的正义链和反义链有〇、1、2或3个核苷酸不同的至少15个连续核苷酸。

[0056] 下文描述了该实施方式的多个特定的具体实施方式。

[0057] 在一种实施方式中,组合物还包含针对HSFl的第二RNAi活性剂。在多种实施方 式中,第二RNAi活性剂与第一 RNAi活性剂物理上分开,或者两者物理上相连(例如化学连 接或缀合)。

[0058] 在一种实施方式中,反义链长度为大约30个或更少的核苷酸。

[0059] 在一种实施方式中,正义链与反义链形成双链体区域,其中所述双链体区域长度 为大约15至30个核苷酸对。

[0060] 在一种实施方式中,反义链和正义链均为大约19至大约23nt长。

[0061] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含导致RNAi活性剂在生物样品或环境中具有 增加的稳定性的修饰。

[0062] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含经修饰的糖主链,例如硫代磷酸键,或包含 2' -修饰的核苷酸。

[0063] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含:至少一个5'-尿苷-腺嘌呤-3'(5'-ua-3') 二核苷酸,其中尿苷是2'-修饰的核苷酸;至少一个5'-尿苷-鸟嘌呤-3'(5'-ug-3')二 核苷酸,其中5' -尿苷是2' -修饰的核苷酸;至少一个5' -胞苷-腺嘌呤-3'(5' -ca-3') 二核苷酸,其中5'-胞苷是2'-修饰的核苷酸;或至少一个5'-尿苷-尿苷-3'(5'-uu-3') 二核苷酸,其中5' -尿苷是2' -修饰的核苷酸。

[0064] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含选自下组的2' -修饰,所述组由V -脱 氧、f -脱氧_2 ' -氣代、2 ' 甲基、2 ^ 甲氧基乙基(2 ^ -0-Μ0Ε)、2 ^ 氛基 丙基(2 ' -0~AP)、2 ' 二甲基氛基乙基(2' HMA0E)、2 ' 二甲基氛基丙基 (2' -0-DMAP)、2' -0-二甲基氨基乙氧基乙基(2' -0-DMAE0E)和2' -O-N-甲基乙酰氨 基C -0-ΝΜΑ)构成。在一种实施方式中,所有嘧啶(尿苷和胞苷)是2' 0-甲基-修饰 的核苷。

[0065] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含至少一个平端。

[0066] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含具有Int至4nt未配对的突出端。

[0067] 在一种实施方式中,RNAi活性剂包含位于RNAi活性剂反义链3' -端的突出端。

[0068] 在一种实施方式中,RNAi活性剂与一种或多种诊断性化合物、报道基团、交联 剂、核酸酶抗性赋予部分、天然或非常见核苷碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、 类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基、无羁萜、无羁 萜-3 β -醇-衍生的石胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖、壳多糖、壳聚糖、 合成碳水化合物、低聚乳酸15体、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊 精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、聚胺、肽模拟 物和/或转铁蛋白连接。

[0069] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约60%。

[0070] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约70%。

[0071] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约80%。

[0072] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约90%。

[0073] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约95%。

[0074] 在一种实施方式中,RNAi活性剂能在WI-38和/或HeLa细胞中体外将HSFl的表 达抑制至少大约99%。

[0075] 在一种实施方式中,RNAi具有不超过大约0.1 nM的EC50。

[0076] 在一种实施方式中,RNAi具有不超过大约0.0 lnM的EC50。

[0077] 在一种实施方式中,RNAi具有不超过大约0.0 OlnM的EC50。

[0078] 使用包含本文所述的RNAi活性剂的RNAi活性剂的治疗方法

[0079] 在一种特定的具体实施方式中,本文公开内容涉及在个体中治疗HSFl相关疾病 的方法,所述方法包括下述步骤:向所述个体施用治疗有效量的包含RNAi活性剂的组合 物,所述RNAi活性剂包含反义链,其中所述反义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15 个连续核苷酸与选自上文提供的和表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表9B中列出的那些 具体双链体的针对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不同。在一种实施 方式中,针对HSFl的RNAi活性剂包含与正义链成双链体的反义链,其中所述正义链和反义 链选自表1、表2、表3、表3A、表8、表9A或表9提供的序列中的一种或多种。

[0080] 下文描述了该实施方式的多个特定的具体实施方式。

[0081] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是增殖性疾病(例如癌症)或自身免疫性疾病, 或是病毒疾病。

[0082] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是选自膀胱、骨、乳腺、宫颈(cervical)、结肠、 结肠直肠、子宫内膜、纤维肉瘤、胃(gastric)、造血(haematopoietic)、肠、肾、肝、肺、淋巴 瘤、神经外胚层、成神经细胞瘤、Ewing's肉瘤、骨肉瘤、卵巢、胰腺、胸膜、前列腺、皮肤、鳞状 细胞、胃部(stomach)和睾丸的癌症,白血病、早幼粒细胞白血病和霍奇金氏病的列表的癌 症。

[0083] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用额外的癌症治疗的步骤。

[0084] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用选自放线菌素 D、HSP90 (热激 蛋白90)的抑制剂、17-AAG(坦螺旋霉素(tanespimycin))、17-DMAG(阿螺旋霉素 (alvespimycin))、IPI_504(瑞他霉素(retaspimycin))、IPI-493、SNX-5422 甲横酸 盐、AUY922、BIB021CNF-2024、BIIB028、STA-9090、KW-2478、ATI3387、XL888、HSP990、 MPC-3100、ABI-010 (如 Kim 等人,2009 Curr. Topics in Med. Chem. 9 :1479-1492 中综 述的)或2-氯脱氧腺苷、5-阿扎胞苷(5-azacitidine)、5-氟-29-脱氧尿苷、5-氟尿 啼啶、6-疏基噪呤、6-硫代鸟噪呤、7-羟基星形孢菌素(7-hydroxystaurosporine)、 13-顺-视黄酸、戈瑞林(goserlin)植入物、阿伦珠单抗(alemtuzumab)、阿利维 A酸(alitretinoin)、全反式视黄酸、α干扰素、六甲蜜胺(altretamine)、氨磷汀 (amifostine)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲挫 (anastrozole)、阿糖胞喃口定(arabinosylcytosine)、三氧化二石串(arsenic trioxide)、天 冬酰胺酶、卡介苗(bacillus calmette-guerin)、苯达莫司汀(bendamustine)、贝伐单抗 (bevacizumab)、荷萨罗丁(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、博来霉素、硼替佐米 (bortezomib)、白消安(busulfan)、喜树喊(camptothecin)、卡培他滨(capecitabine)、 卡钼(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥 (chlorambucil)、顺钼(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、秋水仙酰胺(colcemid)、 环己酰亚胺(Cycloheximide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、 胞喃啶阿糖核苷(cytosine arabinoside)(Ara_C)、达卡巴嗪(dacarbazine)、更生霉素 (dactinomycin)、达沙替尼(dasatinib)、柔红霉素脂质体(daunorubicin liposomal)、柔 红霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地尼白介素 2(denileukin diftitox)、 地塞米松(dexamethazone)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、依地 福新(edelfosine)、ehlorambucil、表鬼白毒素(epipodophyllotoxin)、表柔比星 (epirubicin)、埃罗替尼(erlotinib)、雌氮芥(estramustine)、依托泊ft (etoposide)、 依维莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、芬维 A 胺(fenretinide)、非那 雄胺(finasteride)、夫拉平度(flavopiridol)、氮尿苷(floxuridine)、氟达拉滨 (f Iudarabine)、氟尿喃啶(f Iuorouraci 1)、氟甲睾酮(f Iuoxymesterone)、氟他胺 (flutamide)、氣维司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemeitabine)、 吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)、戈舍瑞林(goserelin)、六甲喃胺 (hexamethylmelamine)、氢化可的松(hydrocortisone)、羟基脈(hydroxyurea)、替伊 莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、ibtritumomab、伊达比星(idarubicin)、异环磷酉先 胺(ifosfamide)、伊马替尼(imatinib)、咪挫駿酰胺(imidazole carboxamide)、白 介素-11、白介素-2、伊立替康(irinotecan)、ixabepilone、拉帕替尼(Iapatinib)、 L-天冬酰胺酶、雷利度胺(Ienalidomide)、来曲挫(Ietrozole)、leukovorin、亮丙瑞林 (Ieuprolide)、氮芥(mechlorethamine)、甲地孕酮(megestrol)、美法仑(melphalan)、疏 基口票呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、 盐酸米托蒽醌(mitixantrone)、丝裂霉素(mitomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、 奈拉滨(nelarabine)、氮芥(nitrogen mustard)、奥曲肽(octreotide)、奥沙利钼 (oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、紫杉醇-白蛋白制剂、紫杉醇-蛋白质制剂、 帕玛二磷酸(pamidronate)、帕尼单抗(panitumumab)、培美曲塞(pemetrexed)、喷 司他丁(pentostatin)、苯丙氨酉爱氮芥(phenylalanine mustard)、pirubicin、泼尼 松龙(prednisolone)、强的松(prednisone)、丙卡巴餅(procarbazine)、卩票吟霉素 (Puromycin)、雷洛昔芬(raloxifene)、利妥昔(rituxan)、红比霉素(rubidomycin)、沙 格司亭(sargramostim)、索拉非尼(sorafenib)、星形孢菌素(staurosporine)、类固醇、 链佐星(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、他莫西芬(tamoxifen)、泰素(Taxol)、 喃氟啶(tegafur)、替莫挫胺(temozolomide)、西罗莫司脂化物(temsirolimus)、替尼泊 ft (teniposide)、沙立度胺(thalidomide)、硫代磷酰胺(thiophosphoamide)、塞替哌 (thiotepa)、托泊替坎(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、 曲妥珠单抗(trastuzumab)、维甲酸(tretinoin)、UFT、长春喊(vinblastine)、长春新 喊(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、伏立诺他(vorinostat)和/或挫来麟酸 (zoledronicacid)的列表的额外癌症治疗的步骤针对HSFl的RNAi活性剂可以适合疾病 的方式与本文公开的任何额外治疗联合,任选地,还与一种或多种针对HSFl的额外RNAi活 性剂联合。

[0085] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是病毒疾病。

[0086] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是选自整体或部分被腺病毒、单纯疱疹病毒、人 巨细胞病毒、HTLV-1、SV40、多瘤病毒、HIV和/或Epstein-Ba^病毒介导的病毒疾病的列 表的病毒疾病D

[0087] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用额外病毒疾病治疗的步骤。

[0088] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用选自阿巴卡韦(Abacavir)、阿昔洛 韦(Aciclovir)、阿昔洛韦(acyclovir)(无环鸟苷(acycloguanosine))、阿德福韦 (Adefovir)、金刚焼胺(Amantadine)、阿普林津(Ampligen)、氨普那韦(Amprenavir)、 阿比朵尔(Arbidol)、阿扎那韦(Atazanavir)、Atripla、贝韦立马(bevirimat)、博赛 泼维(Boceprevir)、广谱抑制剂、西多福韦(Cidofovir)、双汰芝(Combivir)、达芦那韦 (Darunavir)、地拉韦啶(Delavirdine)、去轻肌苷(Didanosine)、二十二醇(Docosanol)、 依度尿苷(Edoxudine)、依法韦伦(Efavirenz)、恩曲他滨(Emtricitabine)、恩夫韦地 (Enfuvirtide)、恩替卡韦(Entecavir)、进入抑制剂(Entryinhibitor)、进入或融合抑制 齐丨J (Entry or fusion inhibitor)、泛昔洛韦(Famciclovir)、福米韦生(Fomivirsen)、 咲山那韦(Fosamprenavir)、麟甲酸(Foscarnet)、麟乙酸(Fosfonet)、融合抑制剂、 更昔洛韦(Ganciclovir)、伊巴他滨(Ibacitabine)、鹏苷(Idoxuridine)、咪喹莫特 (Imiquimod)、异丙酯肌苷(Imunovir)、節地那韦(Indinavir)、肌苷(Inosine)、整合 酶抑制剂、整合酶抑制剂、干扰素、I型干扰素、II型干扰素、III型干扰素、拉米夫定 (Lamivudine)、洛匹那韦(Lopinavir)、洛韦胺(Loviride)、马拉维若(Maraviroc)、成熟抑 制剂(Maturationinhibitor)、吗卩林狐(Moroxydine)、奈非那韦(Nelfinavir)、奈韦拉平 (Nevirapine)、Nexavir、非核苷逆转录酶抑制剂、N0V-205、核苷类似物、核苷酸类似物逆转 录酶抑制剂、奥司他韦(Oseltamivir)(达菲(Tamiflu))、培干扰素 a-2a(Peginterferon alfa_2a)、喷昔洛韦(Penciclovir)、帕拉米韦(Peramivir)、普来可那立(Pleconaril)、鬼 臼毒素(Podophyllotoxin)、蛋白质酶抑制齐I」、蛋白质酶抑制齐I」、雷特格韦(Raltegravir)、 雷特格韦(Raltegravir)、逆转录酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、利巴韦林(Ribavirin)、 金刚乙胺(Rimantadine)、利托那韦(Ritonavir)、沙奎那韦(Saquinavir)、沙奎那 韦(Saquinavir)、司他夫定(Stavudine)、协同增强剂(抗逆转录病毒剂)、替诺福韦 (Tenofovir)、替诺福韦酯(Tenofovir disoproxil)、替拉那韦(Tipranavir)、曲氟尿苷 (Trifluridine)、三协唯(Trizivir)、曲金刚胺(Tromantadine)、特鲁瓦达(Truvada)、 伐昔洛韦(Valaciclovir)(维德思(Valtrex))、结I更昔洛韦(Valganciclovir)、马拉威 若(Vicriviroc)、阿糖腺苷(Vidarabine)、Viramidine、扎西他滨(Zalcitabine)、扎那米 韦(Zanamivir)(乐感清(Relenza))和齐多夫定(Zidovudine)的列表的额外病毒疾病治 疗。应当理解,提到任何额外治疗(例如病毒疾病治疗或癌症治疗或自身免疫性疾病治疗 等等)意味着还包括任何活性物质的可药用盐。如果组分(a)和/或(b)包含的活性物质 具有例如至少一个碱性中心,则它们可形成酸加成盐。还可形成具有额外存在的碱性中心 (如果想要的话)的相应的酸加成盐。具有酸性基团(例如COOH)的活性物质可与碱形成 盐。组分(a)和/或(b)中包含的活性物质或其可药用盐还可以以水合物的形式使用,或 者包括用于结晶的其它溶剂。

[0089] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是自身免疫性疾病。

[0090] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是狼疮或类风湿性关节炎。

[0091] 在一种实施方式中,组合物包含针对HSFl的第二RNAi活性剂。在多种实施方式 中,第二RNAi活性剂与第一 RNAi活性剂物理上分开,或者两者物理上相连(例如连接或缀 合)。

[0092] 使用包含本文描述的RNAi活性剂的RNAi来抑制HSFl表达的方法。

[0093] 在一种特定的具体实施方式中,本文公开内容涉及在个体中抑制HSFl表达的方 法,所述方法包括向个体施用治疗有效量的包含本文公开的RNAi活性剂的组合物的步骤。 在一种实施方式中,RNAi包含正义链和反义链,其中所述反义链包含至少15个连续核苷 酸,所述至少15个连续核苷酸与选自上文提供的和表1、表2、表3、表3A、表8、表9A和表 9B中列出的那些具体双链体的针对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不 同。

[0094] 下文描述了该实施方式的多种特定的具体实施方式。

[0095] 在一种实施方式中,个体患(afflict)HSFl相关疾病或对HSFl相关疾病易感。

[0096] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是增殖性疾病,例如癌症。

[0097] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是选自膀胱、骨、乳腺、宫颈、结肠、结肠直肠、子 宫内膜、纤维肉瘤、胃(gastric)、造血、肠、肾、肝、肺、淋巴瘤、神经外胚层、成神经细胞瘤、 Ewing's肉瘤、骨肉瘤、卵巢、胰腺、胸膜、前列腺、皮肤、鳞状细胞、胃部(stomach)和睾丸的 癌症,白血病、早幼粒细胞白血病和霍奇金氏病的列表的癌症。

[0098] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用额外癌症治疗的步骤。

[0099] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用选自本文列出的任何癌症治疗的列表的 或本领域已知的额外癌症治疗的步骤。

[0100] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是病毒疾病。

[0101] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是选自整体或部分被腺病毒、单纯疱疹病毒、人 巨细胞病毒、HTLV-1、SV40、多瘤病毒、HIV和/或Epstein-Barr病毒介导的病毒疾病的列 表的病毒疾病。

[0102] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用额外病毒疾病治疗的步骤。

[0103] 在一种实施方式中,所述方法还包括施用选自本文列出的任何病毒疾病治疗的列 表的额外病毒疾病治疗的步骤。

[0104] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是自身免疫性疾病。

[0105] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病是狼疮或类风湿性关节炎。

[0106] 在一种实施方式中,组合物还包含针对HSFl的第二RNAi活性剂。在多种实施方 式中,第二RNAi活性剂与第一 RNAi活性剂物理上区分开,或者两者物理上相连(例如连接 或缀合)。

[0107] 其它实施方式

[0108] 下文描述了本文公开内容的多种特定的具体实施方式。

[0109] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及根据上述任何实施方式的组合物,所述组 合物用于在个体中治疗HSFl相关疾病的方法,所述方法包括向个体施用治疗有效量的根 据任何权利要求的组合物的步骤。

[0110] 下文描述了该实施方式的多种特定的具体实施方式。

[0111] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及根据上述任何实施方式的组合物,所述组 合物用于在个体中抑制HSFl表达的方法,所述方法包括向个体施用治疗有效量的根据任 何上述实施方式的组合物的步骤。

[0112] 本文公开内容的一种实施方式是根据任何上述实施方式的组合物在制造用于治 疗HSFl相关疾病的药物中的用途。

[0113] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病选自癌症、病毒疾病或自身免疫性疾病。

[0114] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及任何上述实施方式的组合物,所述组合物 用于治疗HSFl相关疾病。

[0115] 在一种实施方式中,HSFl相关疾病选自癌症、病毒疾病或自身免疫性疾病。

[0116] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及在细胞中抑制HSFl表达的方法,所述方法 包括下述步骤:向细胞中引入包含下述RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性剂包含反义 链,其中所述反义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与选自本文公开 的HSFl siRNA的针对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不同。

[0117] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及在细胞中抑制HSFl表达的方法,所述方法 包括下述步骤:向细胞中引入包含下述RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性剂包含正义 链和反义链,其中所述反义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与选自 本文公开的HSFl siRNA的针对HSFl的RNAi活性剂的反义链有0、1、2或3个核苷酸不同, 并且所述正义链包含至少15个连续核苷酸,所述至少15个连续核苷酸与选自本文公开的 HSFl siRNA的针对HSFl的RNAi活性剂的正义链有0、1、2或3个核苷酸不同。

[0118] 热激因子 I(HSFl)

[0119] "HSF1"表示基因或蛋白质的热激因子1或热激转录因子I (HSTFl)。HSFl是热激 应答(其中多个基因应答于温度增加和其它应激而被诱导)的主要调节物。HSFl已被认定 为染色体8q24. 3上的HGNC ID HGNC :5224。其(包括同源体)也被识别为:GeneID :3297 ; RefSeq IDs NM_005526;AccNo.M64673;小鼠基因组数据库(Mouse Genome Database) ID MGI :96238 ;大鼠基因组数据库(Rat Genome Database) ID RGD :620913 ;Entrez 基因 ID 3297 ;CCDS IDs CCDS6419. I ;Pubmed IDs 1871105 ;Ensembl ID ENSG00000185122;0MIM ID(NCBI) 140580 ;UCSC ID(UCSC)uc003zbt. 2 ;和 / 或 UniProt ID(经图谱定位的数据由 UniProt 提供)Q00613。

[0120] 人HSFl的氨基酸序列被提供为SEQ ID NO 2050.:

[0121] MDLPVGPGAAGPSNVPAFLTKLWTLVSDPDTDALICWSPSGNSFHVFDQGQFAKEVLPKYFKHNNMASF VRQLNMYGFRKVVHIEQGGLVKPERDDTEFQHPCFLRGQEQLLENIKRKVTSVSTLKSEDIKIRQDSVTKLLTDVQL MKGKQECMDSKLLAMKHENEALWREVASLRQKHAQQQKVVNKLIQFLISLVQSNRILGVKRKIPLMLNDSGSAHSMP KYSRQFSLEHVHGSGPYSAPSPAYSSSSLYAPDAVASSGPIISDITELAPASPMASPGGSIDERPLSSSPLVRVKEE PPSPPQSPRVEEASPGRPSSVDTLLSPTALIDSILRESEPAPASVTALTDARGHTDTEGRPPSPPPTSTPEKCLSVA CLDKNELSDHLDAMDSNLDNLQTMLSSHGFSVDTSALLDLFSPSVTVPDMSLPDLDSSLASIQELLSPQEPPRPPEA ENSSPDSGKQLVHYTAQPLFLLDPGSVDTGSNDLPVLFELGEGSYFSE⑶GFAEDPTI SLLTGSEPPKAKDPTVS (SEQ ID NO :2050)

[0122] HSFl的功能结构域已通过诱变被描述。N末端附近的序列形成DNA结合结构域 (编号为大约aa 13-121;或aa 16-120, Shi等人)。与之邻近的是包含介导单体化和三聚 化的三个"亮氨酸拉链"的疏水区域(编号为大约aa 126-217 ;或137-212 ;或137-203)。 第四疏水片区或亮氨酸拉链位于大约aa 378-407;该区域参与非应激条件下的负调控。分 子的中央部分含有调控转录活化结构域应答于应激的活性的区域。调控结构域内的序列应 答于应激经历特别的磷酸化和脱磷酸化。富含丝氨酸和脯氨酸的该调控结构域位于大约 aa 221-310或201-370。HSFl的C-末端部分含有主要的转录活化区域;这包含100个最 靠 C-端的氨基酸;或者aa 395-503,或可能可在aa 401-420被降低至ADl (Newton等人)。 这些结构域被描述于 Green 等人,1995 Mol. Cell. Biol. 15 :3354-3362 ;和 Shi 等人,1995 Mol. Cell. Biol. 15 :4309-4318等等中。本文公开内容的HSFl RNAi活性剂可与HSFl的一 个或多个特别的功能结构域相互作用。

[0123] 在多种实施方式中,本文公开内容的RNAi活性剂在对应于功能结构域的序列中 与HSFl mRNA特异性结合,例如,在形成DNA结合结构域的N末端附近的序列中;在4/3疏水 重复或"亮氨酸拉链"(介导三聚化)中;在第一、第二、第三或第四亮氨酸拉链中;在含有保 持HSFl为其潜伏形式或调控转录活化结构域应答于应激的活性的数个元件的分子的中央 部分中;在应答于应激经历特别的磷酸化和脱磷酸化的调控结构域内的序列中;在含有主 要转录活化区域的HSFl C末端部分中;在相互作用以形成卷曲螺旋的HSF家族蛋白质氨基 末端结构域中的两亲性α螺旋残基的阵列中;和/或在羧基末端结构域中的两亲性α螺 旋的第四区域中。在其它一些实施方式中,本文公开内容的RNAi活性剂与5'或3'UTR[非 翻译区域]结合。

[0124] 在多种实施方式中,本文公开内容的RNAi活性剂与HSFl mRNA结合,但不在对应 于功能结构域的序列中,例如,不在形成DNA结合结构域的N末端附近的序列中;不是4/3 疏水重复或"亮氨酸拉链"(介导三聚化);不是第一、第二、第三或第四亮氨酸拉链;不是含 有保持HSFl为其潜伏形式或调控转录活化结构域应答于应激的活性的数个元件的分子的 中央部分;不在应答于应激经历特别的磷酸化和脱磷酸化的调控结构域内的序列中;不在 含有主要转录活化区域的HSFl C末端部分中;不在相互作用以形成卷曲螺旋的HSF家族蛋 白质氨基末端结构域中的两亲性α螺旋残基的阵列中;不在羧基末端结构域中的两亲性 α螺旋的第四区域中;或不在5'或3' UTRs中。在另一实施方式中,本文公开内容的RNAi 活性剂与HSFl mRNA结合,但是不在跨越Rossi等人2006 Cancer Res. 66 :7678-7685所述 的基因转录起始位点下游nt 322至340的序列中。

[0125] HSFl相关疾病

[0126] 在本文中使用时,短语"HSF1相关疾病"表示下述一种或多种:增殖性疾病,包 括例如癌症,其中癌症选自膀胱、骨、乳腺、宫颈、结肠、结肠直肠、子宫内膜、纤维肉瘤、胃 (gastric)、造血、肠、肾、肝、肺、淋巴瘤、神经外胚层、成神经细胞瘤、Ewing's肉瘤、骨肉瘤、 卵巢、胰腺、胸膜、前列腺、皮肤、鳞状细胞、胃部(stomach)和睾丸的癌症,白血病、早幼粒 细胞白血病和霍奇金氏病的一种或多种癌症;病毒疾病,其中病毒疾病选自整体或部分被 腺病毒、单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、HTLV-I、SV40、多瘤病毒、HIV和/或Epstein-Barr 病毒介导的病毒疾病中的一种或多种;以及自身免疫性疾病,其中自身免疫性疾病选自狼 疮和类风湿性关节炎中的一种或多种。

[0127] HSFl已被牵连于若干种疾病,包括癌症和病毒疾病。HSFl和其它热激蛋白(其 表达被HSFl所增加的)过表达于或已被牵连于膀胱、骨、乳腺、宫颈、结肠、结肠直肠、子 宫内膜、纤维肉瘤、胃(gastric)、造血、肠、肾、肝、肺、淋巴瘤、神经外胚层、成神经细胞瘤、 Ewing's肉瘤、骨肉瘤、卵巢、胰腺、胸膜、前列腺、皮肤、鳞状细胞、胃部(stomach)和睾丸的 癌症,白血病(例如早幼粒细胞白血病)和霍奇金氏病中。HSFl过表达于转移性前列腺癌 性细胞系PC-3M(较之非转移PC-3系)和其它前列腺癌细胞中。

[0128] HSFl的过表达与对热激蛋白HSP27的上调相关。Hoang等人,2000Am. J.Pathol. 156 :857-864。HSP27上调还与一些癌症(包括结肠、乳腺、早幼粒细胞白血病、 睾丸和前列腺)的增加的肿瘤发生能力和侵袭力相关。HSFl还在非应激条件下于癌细胞 中具有功能性的作用;显性负调控的HSFl在PC-3细胞群中改变DNA含量并且抑制非整倍 性。Wang等人,2004 J. Biol. Chem. 279 :32651-32659。很多肿瘤类型含有高浓度的HSP27、 HSp70和HSP90家族的热激蛋白,它们被HSFl上调。在不希望被任何特定理论束缚的情况 下,申请人认为,已有提示,热激蛋白(HSP)尽管在转化期间触发凋亡信号,但其可封闭凋 亡途径,并且允许恶性细胞出现。HSP表达还可提供对癌细胞的保护,以抵挡诸如化疗和过 热疗法等治疗,这通过阻烧这些方式的促凋亡影响来实现。Tang等人,2005 Cell Stress Chaperones 10 :46-58及其中的参考文献。Rossi等人还显示,减少HSFl水平增加了子宫 颈癌细胞对顺铂相关的过热疗法的敏感性。热激蛋白的过表达还与保护癌细胞抵挡多柔比 星和过热疗法以及其它抗癌治疗相关。Helmbrecht等人,2000 Cell Prolif. 33:341-365。

[0129] 热激蛋白的过表达还与病毒感染(包括被腺病毒、单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、 HTLV-1、SV40、多瘤病毒、HIV、Epstein-Barr病毒介导的那些)相关。高热激蛋白水平还 与自身免疫性疾病(包括狼疮和类风湿性关节炎)相关。对HSFl的抑制,例如通过使用 抗HSFl RNAi活性剂进行的抑制,也因此可以是针对癌症以及病毒疾病和其它疾病的有效 治疗。仅极少HSP抑制剂是已知的,但是它们包括槲皮素(quercetin)(抑制HSFl的类黄 酮)。Zanini等人,2007 J.Neurochem. 103 :1344-354及其中的参考文献。槲皮素因此可 针对在治疗病毒疾病或癌症中抑制HSFl的RNAi活性剂用作为阳性对照。

[0130] 多种物种中的HSFl基因序列

[0131] 人 HSFl 基因已被克隆,Rabindran 等人,1991 Proc. Natl. Acad. Sci USA 88 : 6906-6910。针对人HSFl可获得多种序列,包括Genbank标识符NM_005526. 2。小鼠 (Mus musculus)HSFl 基因例如是 Genbank id ΝΜ_008296· 2。另一小鼠 HSFl 序列可作为 Acc. Number ΧΜ_128055 获得(如用于 Yin 等人,2005 J. Mol. Cell. Card. 39 :681-689 中)。

[0132] 较之人的序列(SEQ ID NO :2052),食蟹猴(简写为"Cyno"或Macaca fascicularis)HSFl 序列(SEQ ID N0:2051)被显示于下表 A2 中。

[0133] 表 A2

[0134] 表 A2

[0135] CN 105125572 A 说明书 19/154 页

Figure CN105125572AD00211
Figure CN105125572AD00221

CN WbYZMrz A f儿 u W/_L!d4 贝

Figure CN105125572AD00231

[0138] 人HSFl序列的起始(ATG)和终止(TAG)以及食蟹猴HSFl序列的推定的起始和终 止以粗体下划线示出。N表示在测序实验中该位置的核苷酸未测定。

[0139] 在一种实施方式中,本文公开内容的HSFl RNAi活性剂包含在人、小鼠和食蟹猴 HSFl基因中相同的序列。这种序列同一性协助了在人测试之前进行动物测试。

[0140] 在一种实施方式中,HSFl RNAi活性剂包含不匹配任何其它基因的序列的序列。在 一种实施方式中,HSFl RNAi活性剂包含与所有其它已知非HSFl基因有至少0、1、2或3个 核苷酸不同的序列。

[0141] 在一种实施方式中,HSFl RNAi活性剂包含与HSF2、HSF3或HSF4中的序列相同的 序列。在一种实施方式中,HSFl RNAi活性剂包含与HSF2、HSF3或HSF4中任何不相同的序 列。

[0142] 用于治疗多种HSFl相关疾病的HSFl RNAi活性剂

[0143] 在一种实施方式中,本文公开内容的HSFl RNAi活性剂包含本文公开的序列,并被 施用给需要其的患者(例如,遭受癌症和/或病毒疾病和/或自身免疫性疾病和/或HSFl 相关疾病的患者)。在一种实施方式中,本文公开内容的HSFl RNAi活性剂与一种或多种适 于该疾病的额外药物活性剂一起被施用给需要其的患者。例如,遭受癌症的患者可被施用 药理有效量的一种或多种HSFl RNAi活性剂与药理有效量的一种或多种本文列出的任何癌 症治疗和/或本领域已知的任何其它癌症治疗。

[0144] 遭受病毒疾病的患者可被施用一种或多种针对HSFl的RNAi活性剂和一种或多种 额外的病毒疾病治疗。该额外治疗可选自本文列出的任何病毒疾病治疗和/或本领域已知 的任何抗病毒的列表。

[0145] 患者还可被施用不止一种的针对HSFl的RNAi活性剂。

[0146] 在癌症、自身免疫性疾病和病毒疾病的情况下,一种或多种RNAi活性剂和一种或 多种额外疾病治疗可以以任何顺序、同时或依序、或以多个剂量随时间被施用。RNAi活性剂 和额外治疗的施用可例如是同时(simultaneous)、并行(concurrent)、分开或依序的。

[0147] 同时施用可例如以两种或多种活性成分的一种固定组合的形式进行,或者可通 过同时施用独立配制的两种或多种活性成分来进行。依序使用(施用)优选表示在一个 时间点施用组合中的一种(或多种)组分,在不同的时间点施用其它组分,即,以长期交错 (chronically staggered)方式,优选使得组合显示出比单种化合物独立施用更高的效率 (尤其是显示出协同作用)。分开使用(施用)优选表示在不同时间点相互独立地施用组 合的组分,优选表示:组分(a)和(b)被这样施用,使得两者化合物可测量到的血液水平的 重叠没有以重叠方式(同时)存在。

[0148] 此外,依序、分开和同时施用中的两种或多种的组合是可能的,优选使得组合组 分-药物显示出超过组合组分-药物以时间间隔独立使用时发现的效果的联合治疗效果, 超过程度大到不能发现对它们治疗效率的相互影响,协同效果是尤其优选的。

[0149] 术语"进展的延迟"在本文中使用时表示向处于待治疗的疾病首次显现或复发的 预阶段(pre-stage)或早期的患者施用组合,其中,患者被诊断为例如相应疾病的预形式, 或者患者处于下述状况,例如医药治疗期间,或由意外导致的状况,在所述状况下有可能发 展出相应的疾病。

[0150] "联合治疗活性"或"联合治疗效果"表示化合物可以被以使得它们优选在待被治 疗的温血动物(尤其是人)中仍显示出(优选协同的)相互作用(联合治疗效果)的时间 间隔分开给予(以长期交错的方式,尤其是顺序特异性方式)。可通过监视血液水平(显示 两者化合物至少在某时间间隔期间均存在于待被治疗的人的血液中)等等,来确定是否是 这种情况。

[0151] 定义

[0152] 为方便起见,用于说明书、实施例和所附权利要求中的某些术语和短语的含义提 供于下文中。如果术语在本申请文件的其它部分的使用和本章节提供的其定义之间存在明 显不同,以本章节的定义为准。

[0153] 在本文公开内容通篇中使用时,冠词例如单数形式("a"和"an")指一个/种或 超过一个/种(至少一个/种)所述冠词的语法客体。

[0154] RNAi 活性剂

[0155] 在本文中使用时,术语"RNAi活性剂"、"针对HSFl的RNAi活性剂"、"针对HSFl的 siRNA"、"HSFl siRNA"等等表示与HSFl基因特异性结合的siRNA (短抑制性RNA)、shRNA (短 或小发夹RNA)、iRNA (干扰RNA)活性剂、RNAi (RNA干扰)活性剂、dsRNA (双链RNA)、微小 RNA等等。在本文中使用时,术语" iRNA"和"RNAi "指下述活性剂,所述活性剂含有RNA,并 且经由RNA诱导的沉默复合体(RISC)途径介导另外的RNA转录本的靶向切割。在一种实 施方式中,RNAi活性剂是活化RISC复合体/途径的寡核苷酸组合物。在另一实施方式中, RNAi活性剂包含反义链序列(反义寡核苷酸)。在一种实施方式中,RNAi包含单链。该单链 RNAi活性剂寡核苷酸或多核苷酸可包含正义链或反义链,如Sioud 2005 J. Mol. Biol. 348 : 1079-1090及其中的参考文献所述。因此,本公开内容包括具有下述单链的RNAi活性剂,所 述单链包含本文所述的RNAi活性剂正义链或反义链。

[0156] RNA干扰是转录后的靶向基因沉默技术,其使用双链RNA(dsRNA)以降解含有与 dsRNA相同的序列的信使RNA (mRNA)。RNAi的过程在核糖核酸酶III (Dicer)将较长的 dsRNA切割为被称为siRNA的较短片段时发生。siRNA(小干扰RNA)通常大约为21至23 个核苷酸长,并且包含大约19个碱基对双链体。较小的RNA区段然后介导靶mRNA的降解。 Dicer还已被牵连于从翻译控制所涉及的保守结构的前体RNA切割21和22个核苷酸的小 时序 RNA(stRNA)。Hutvagner 等人,2001,Science,293,834。RNAi 应答还可有下述特征: 内切核酸酶复合体(常被称为RNA诱导的沉默复合体(RISC)),其介导与siRNA的反义链互 补的单链mRNA的切割。对靶RNA的切割发生在与siRNA双链体的反义链互补的区域中段。

[0157] 用于RNAi合成的试剂盒可商业获得,例如从New England Biolabs和Ambion获 得。

[0158] 使用针对HSFl的RNAi活性剂导致HSFl活性、水平和/或表达的减少,例如,靶基 因或靶序列的"敲低(knock-down) "或"敲除

[0159] 可通过本领域已知的或本领域普通技术人员能想到的任何方法来选择合适的 RNAi活性剂。例如,选择标准可包括下述步骤中的一个或多个:对HSFl基因序列的初始分 析和设计RNAi活性剂;该设计可考虑到物种(人、食蟹猴、小鼠等等)间的序列相似性和 与其它(非HSFl)基因的相异性;体外筛选RNAi活性剂(例如在WI-38细胞中,以IOnM); 在HeLa细胞中测定EC50 ;测定用RNAi活性剂处理过的WI-38、HeLa和GTL16细胞的生存 力,其中希望针对HSFl的RNAi活性剂不抑制这些细胞的生存力;用人PBMC(外周血单核细 胞)进行测试,例如测试TNF-α的水平以评估免疫原性,其中,免疫刺激性序列是较不被期 望的;在人全血测定中进行测试,其中用RNAi活性剂处理试新鲜的人血,测定细胞因子/趋 化因子水平[例如TNF- α (肿瘤坏死因子-α )和/或MCPl (单核细胞趋化蛋白1)],其中 免疫刺激性序列是较不被期望的;在测试动物中使用Hep3B皮下肿瘤体内测定基因敲低; HSFl靶基因调节分析,例如使用药效动力学(PD)标志,例如HSP70或HSP27,其中HSFl敲 低导致A375细胞中HSFP70和HSP27表达的剂量依赖性降低;以及对RNAi活性剂的特定修 饰的优化。

[0160] 靶和序列

[0161] 在本文中使用时,"靶序列"或"靶基因"指在基因(例如HSFl基因)转录期间形 成的mRNA分子的核苷酸序列的连续部分,包括是对一级转录产物进行RNA加工的产物的 mRNA。序列的靶部分将至少长到足以用作为在该部分或该部分附近iRNA指导的切割的底 物。例如,靶序列将通常为大约9-36个核苷酸("nt")长,例如大约15-30个核苷酸长, 这包括其间的所有子区域。作为非限制性的例子,靶序列可大约15-30nt,大约15-26nt、 大约 15-23nt、大约 15-22nt、大约 15-21nt、大约 15-20nt、大约 15-19nt、大约 15-18nt、大 约 15-17nt、大约 18-30nt、大约 18-26nt、大约 18-23nt、大约 18-22nt、大约 18-21nt、大 约 18-20nt、大约 19-30nt、大约 19-26nt、大约 19-23nt、大约 19-22nt、大约 19-21nt、大 约 19-20nt、大约 20-30nt、大约 20-26nt、大约 20-25nt、大约 20-24nt、大约 20-23nt、大 约20-22拉、大约20-211^、大约21-301^、大约21-261^、大约21-251^、大约21-24拉、大约 21-23nt 或大约 21-22nt。

[0162] 在本文中使用时,术语"包含序列的链"指下述寡核苷酸,其包含通过使用标准核 苷酸命名法提到的序列描述的核苷酸的链。

[0163] 在本文中使用时,并且如无另外指明,术语"互补"表示包含第一核苷酸序列的寡 核苷酸或多核苷酸在某些条件下与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸杂交并形 成双链体结构的能力。此类条件可例如是严格的,例如400mM NaCl,40mM PIPES pH 6. 4, ImM EDTA,50°C或70°C进行12-16小时,接着进行洗涤。其它条件,例如在生物体内可能遇 到的生理相关条件也可应用。技术人员将能根据杂交的核苷酸的最终应用来确定最适用于 测试两条序列的互补性的条件组。

[0164] iRNA内(例如本文所述的dsRNA内)的互补序列包括包含第一核苷酸序列的寡核 苷酸或多核苷酸与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在一条或两条序列全长上 的碱基配对。在本文中此类序列可被称为互相"完全互补"。但是,当第一序列在本文中被 称为与第二序列"实质上互补"时,两条序列可完全互补,或者它们可在针对多至30个碱基 对的双链体进行杂交时形成一个或多个但通常不超过5、4、3或2个错配的碱基对,但保持 在与它们的最终应用(例如,经由RISC途径抑制基因表达)最相关的条件下杂交的能力。 但是,当两条寡核苷酸被设计来在杂交期间形成一个或多个单链突出端时,在测定互补性 时此类突出端将被不认为是错配。例如,就本发明的目的而言,包含长度为21nt的一条寡 核苷酸和长度为23nt的另一寡核苷酸的dsRNA(其中,较长的寡核苷酸包含与较短的寡核 苷酸完全互补的21nt的序列)仍可被认为是"完全互补"的。

[0165] "互补"序列在本文中使用时还可包括非Watson-Crick碱基对和/或从非天然 和经修饰的核苷酸形成的碱基对,或完全由非Watson-Crick碱基对和/或从非天然和经 修饰的核苷酸形成的碱基对形成,只要能满足关于其杂交能力的上述要求即可。此类非 Watson-Crick喊基对包括但不限于G :UWobble或Hoogstein喊基配对。

[0166] 术语"互补"、"完全互补"和"实质上互补"在本文中可在提到dsRNA的正义链和 反义链之间的碱基匹配或iRNA活性剂的反义链和靶序列之间的碱基匹配时使用,如从关 于其用途的上下文中所理解的那样。

[0167] 在本文中使用时,与信使RNA(mRNA) "的至少部分实质上互补"的多核苷酸指与目 标mRNA(例如编码HSFl的mRNA)的连续部分实质上互补的多核苷酸。例如,如果序列与编 码HSFl的mRNA的非间断部分实质上互补的话,多核苷酸就与HSFl mRNA的至少部分互补。

[0168] 双链 RNA

[0169] 术语"双链RNA"或"dsRNA"在本文中使用时指下述iRNA,所述iRNA包括具有杂交 的双链体区域(包含两条反平行的并且实质上互补的核酸链,它们将被称为相对靶RNA具 有"正义"和"反义"定向)的分子的复合体或RNA分子。相对于mRNA靶而言的反义链也被 称为"引导"链,正义链也被称为"过客"链。过客链可包括下述中的至少一种或多种:较之 另一链而言的一个或多个额外核苷酸(例如凸起或Int的环),较之另一链的切口(nick)、 空位等等。

[0170] 双链体区域可以是允许通过RISC途径对想要的靶RNA进行特异性降解的任何长 度的,但是其长度将通常在9至36个碱基对的范围内,例如长度为15-30个碱基对。关 于9至36个碱基对之间的双链体,双链体可以是该范围内任何长度的,例如9、10、11、12、 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35 或 36 个碱 基对,以及其间的任何子范围,包括但不限于15-30个碱基对("bp")、15-26bp、15-23bp、 15-22bp、15-21bp、15-20bp、15-19bp、15-18bp、15-17bp、18-30bp、18-26bp、18-23bp、 18- 22bp、18-21bp、18-20bp、19-30bp、19-26bp、19-23bp、19-22bp、19-21bp、19-20bp、 20_30bp、20_26bp、20_25bp、20_24bp、2〇-23bp、20_22bp、20_21bp、21_30bp、21_26bp、 21-25bp、21-24bp、21-23bp或21-22bp。通过用Dicer和相似的酶进行加工在细胞中产生 的dsRNA通常长度在大约19-22个碱基对的范围内。dsRNA的双链体区域的一条链包含与 靶RNA的区域实质上互补的序列。形成双链体结构的两条链可来自具有至少一个自身互补 区域的单个RNA分子,或可从两个或多个分别的RNA分子形成。当双链体区域从单个分子 的两条链形成时,分子可具有被形成双链体结构的一条链的3'端和各自另一链的5'端之 间的核苷酸的单链型链(本文称为"发夹环")分开的双链体区域。发夹环可包含至少一个 未配对的核苷酸;在一些实施方式中,发夹环可包含至少3个、至少4个、至少5个、至少6 个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少20个、至少23个或更多个未配对的核 苷酸。当dsRNA的两条实质上互补的链被分别RNA分子所包含时,这些分子无需但可以是 共价相连的。当两条链通过并非发夹环的方式共价相连时,相连结构被称为"接头"。术语 "siRNA"还在本文中用于表示上文所述的dsRNA。

[0171] 在一个方面,RNA干扰活性剂包含与靶RNA序列相互作用以指导对靶RNA的切割 的单链RNA。在不希望被理论束缚的情况下,通过已知为Dicer的III型内切核酸酶将被 引入植物和无脊椎动物细胞的长双链RNA破碎成siRNA (Sharp等人,Genes Dev. 2001,15 : 485)。Dicer,即核糖核酸酶III样的酶,将dsRNA加工为具有特征性的两碱基3'突出端的 19- 23 个碱基对的短干扰 RNA(Bernstein 等人,(2001)Nature 409:363)。siRNA 然后被并 入RNA诱导的沉默复合体(RISC),其中一个或多个蜗牛酶解开siRNA双链体,使得互补的反 义链能引导革E识别(Nykanene等人,(2001)Cell 107:309)。结合至合适的革EmRNA之后, RISC内的一个或多个内切核酸酶对靶加以切割,以诱导沉默(Elbashir等人,(2001)Genes Dev. 15 :188)。因此,在一个方面,本文公开内容涉及促进RISC复合体形成以实现靶基因沉 默的单链RNA。

[0172] 对HSFl的下调

[0173] 在本文中使用时,"下调"指HSFl生物活性和/或表达的任何统计上显著的减少, 包括完全封闭活性(即,完全抑制)和/或表达。例如,"下调"可表示HSFl活性和/或表 达至少大约 10、20、30、40、50、60、70、80、90 或 100 % 的减少。

[0174] 在本文中使用时,术语"抑制"(或各种词性形式)HSFl指HSFl生物活性和/或表 达的任何统计上显著的减少,包括完全封闭活性和/或表达。例如,"抑制"可表示HSFl活 性和/或表达至少大约10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%的减少。在本文中使用时, 在提到任何其它生物活性剂或组合物时,术语"抑制"类似地表示活性和/或表达的显著减 少。

[0175] 通过"水平",表示HSFl RNAi活性剂可干扰HSFl的可检测水平,例如,HSFl mRNA 的水平或HSFl蛋白质的水平。

[0176] 通过"活性",表示HSFl RNAi活性剂可改变HSFl的任何已知活性,如本文所述或 如文献中已知的。

[0177] "热激"(HS)和"热激应答"(HSR)表示对环境应激(例如升高的温度)的生物化 学应答。在实验室中,实验动物和细胞可被保持于"非休克"温度(37°C或更低),热激可在 升高的温度(例如,40、41、42、43、44或45摄氏度或更高)下被诱导。实验中,热激通常被 诱导于42、43或44摄氏度。

[0178] 热激特征在于多种蛋白质的错误折叠、变性和聚集;被诱导的热激蛋白(HSPS HSPs)包括伴侣蛋白质(陪伴蛋白)和修复和/或移除这些蛋白质的其它蛋白质。在热激 应答期间诱导的基因包括HSP90、HSP70和HSP27等等。热激应答还可通过额外的环境条 件来诱导(或模拟),例如氧化应激、化学应激、自由基、ATP减少、酸中毒、重金属、醇、抗生 素的存在、能量代谢抑制剂、病理性条件例如缺血和再灌注(reperfusion)、炎症、组织损 伤、感染和与遗传疾病相关的突变体蛋白质。Jolly等人,2000 J. Natl. Cancer Inst. 92: 1564-1572 ;Dai 等人,2007 Cell 130:1005-1018。

[0179] 针对HSFl的RNAi活性剂

[0180] 在一种实施方式中,本文公开内容涉及HSFl RNAi活性剂或与HSFl基因(或其部 分)互补的其它反义核酸,或编码所述反义核酸的重组表达载体。在本文中使用时,"反义" 核酸包含与编码HSFl蛋白质的"正义"核酸互补的核苷酸序列(例如,与双链DNA的编码 链互补、与mRNA互补、或与HSFl基因的编码链互补)。

[0181] 使用反义核酸在细胞中下调特定蛋白质的表达是本领域公知的。反义核酸包含与 另外的核酸(例如mRNA)的编码链互补并且能与之氢结合的序列。与mRNA互补的反义序 列可与mRNA的编码区域、5'或3'非翻译区域,和/或桥联编码区域和非翻译区域的区域, 和/或其部分互补。此外,反义核酸可与编码mRNA的基因的调控区域(例如转录或翻译起 始序列或调控元件)互补。优选地,反义核酸可与在编码链的起始密码子之前或跨越编码 链的起始密码子的区域或mRNA的3'非翻译区域中的区域互补。

[0182] 可根据Watson和Crick碱基配对规则来设计反义核酸。反义核酸分子可与HSFl mRNA的整个编码区域互补,但是在至少一个实施方式中,其是仅对HSFl mRNA的编码或非 编码区域的部分反义的寡核苷酸。例如,反义寡核苷酸可对HSFl mRNA的翻译起始位点周 围的区域互补。反义寡核苷酸长度可以是例如大约5、大约10、大约15、大约16、大约17、大 约18、大约19、大约20、大约21、大约22、大约23、大约24、大约25、大约30、大约35、大约 40、大约 45 或大约 50nt,或长度为 5、10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、 45 或 50nt。

[0183] siRNA可在内部或在一个或两个末端具有修饰。5'端的示例性修饰示于图1中。 这些包括:C6-烷基(5' -己基磷酸)、5' -甲氧基;5' -反向dT(idT)和5' -β-L-尿苷。 在末端的修饰可协助稳定siRNA,保护其抵挡血液中核酸酶的降解。siRNA可任选地被指导 至HSFl mRNA的已知或预测在基因的剪接位点或其附近的区域;例如,外显子-内含子汇合 处。siRNA还可任选地被设计为退火至mRNA的已知或预测的暴露区域和/或单链区域(例 如环)。

[0184] 可使用本领域已知的流程,使用化学合成和酶促连接反应,来构建反义核酸。例 如,可使用天然存在的寡核苷酸或经多种修饰的核苷酸(设计来减少脱靶效果,和/或增加 分子的生物稳定性,或增加反义和正义核酸之间形成的双链体的物理稳定性),来化学合成 反义核酸(例如反义寡核苷酸)。在至少一种实施方式中,可使用经修饰的糖主链,包括硫 代磷酸键或其衍生物,和经吖啶取代的核苷酸。

[0185] "G"、"C"、"A"、"T"和"U"中的每个通常代表分别含有鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸 腺嘧啶核苷和尿嘧啶作为碱基的核苷酸。但是术语"核糖核苷酸"或"核苷酸"还可表示经 修饰的核苷酸或替代置换部分(surrogate replacement moiety)。本领域技术人员熟知鸟 嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶可被其它部分替换,而不会实质上改变包含具有此类置换部 分的核苷酸的寡核苷酸的碱基配对性质。例如但不限于,包含肌苷作为其碱基的核苷酸可 与含有腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶的核苷酸碱基配对。因此,在本文公开内容所涉及的dsRNA 的核苷酸序列中,含有尿嘧啶、鸟嘌呤或腺嘌呤的核苷酸可被含有例如肌苷的核苷酸置换。 在另一实例中,在寡核苷酸中任何位置的腺嘌呤和胞嘧啶可被鸟嘌呤和尿嘧啶分别替换, 以与靶mRNA形成G-U Wobble碱基配对。含有此类置换部分的序列适用于本文公开内容所 涉及的组合物和方法。

[0186] 修饰

[0187] 技术人员将认识到,术语"RNA分子"或"核糖核酸分子"不仅包括在自然界中发现 或表达的RNA分子,其还包括包含有本文所述或本领域已知的一个或多个核糖核苷酸/核 糖核苷类似物或衍生物的RNA类似物和衍生物。严格地说,"核糖核苷"包括核苷碱基和核 糖,而"核糖核苷酸"是核糖核苷与一个、两个或三个磷酸部分。但是,术语"核糖核苷"和 "核糖核苷酸"在本文中使用时可被认为是等同的。RNA可在核苷碱基结构或在核糖-磷酸 主链结构中被修饰,例如如本文下文所述的。但是,包含核糖核苷类似物或衍生物的分子必 须保持形成双链体的能力。作为非限制性的例子,RNA分子还可包括至少一个经修饰的核 糖核苷,这包括但不限于-0-甲基修饰的核苷酸、包含5'硫代磷酸键基团的核苷、与胆 固醇基衍生物或十二烷酸二癸酰胺基团连接的末端核苷、锁定核苷、无碱基核苷、2'-脱 氧-2^ -氟修饰的核苷、2^ -氨基-修饰的核苷、2^ -烷基修饰的核苷、吗啉代核苷、解 锁核糖核苷酸(例如无环核苷酸单体,如WO 2008/147824所述)、氨基磷酸酯或包含非天 然碱基的核苷,或它们的任何组合。或者,RNA分子可包含至少两个经修饰的核糖核苷,至 少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少15 个、至少20个或更多个,多至dsRNA分子的全长。对于RNA分子中多个经修饰的核糖核苷 中的每个而言,修饰无须是相同的。在一种实施方式中,考虑用于本文所述的方法和组合物 中的经修饰的RNA是具有形成所需双链体结构的能力并且允许或介导经由RISC途径对靶 RNA的特异性降解的肽核酸(PM)。

[0188] 可用于产生反义核酸的经修饰的核苷酸的例子包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、 5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤(xantine)、4_乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟基 甲基)尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫尿苷、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧 啶、β -D-半乳糖基Q核苷(β -D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺噪呤、1-甲 基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧 啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲 基-2-硫代尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷、5'-甲氧基羧基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧 啶、2-甲基硫代-Ν6-异戊烯基腺噪呤、尿啼啶-5-轻乙酸(V)、wybutoxosine、假尿啼啶、Q 核苷(queosine)、2_硫代胞嘧啶、5-甲基-2-硫代尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、 5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-羟乙酸甲基酯、尿嘧啶-5-羟乙酸(V)、5-甲基-2-硫代尿嘧啶、 3-(3-氨基-34-2-羧基丙基)尿嘧啶、(&〇?3)«和2,6-二氨基嘌呤。

[0189] 在一个方面,经修饰的核糖核苷包括脱氧核糖核苷。在这种情况下,iRNA活性剂 可包含一个或多个脱氧核苷,包括例如,脱氧核苷突出端,或dsRNA双链部分内的一个或多 个脱氧核苷。但是,不言而喻地,术语" iRNA"在任何情况下都不包括双链DNA分子。

[0190] 用脱氧核糖核苷酸替换具有两个核苷酸的3'突出端的21体SiRNA双链体的3'末 端核苷酸突出端区段,对RNAi活性没有不利影响。用脱氧核糖核苷酸替换SiRNA每个末端 的多至四个核苷酸已被良好容许,而用脱氧核糖核苷酸进行完全取代会导致没有RNAi活 性。国际PCT公开No. W000/44914和Beach等人,国际PCT公开No. WO 01/68836初步暗示, siRNA可将修饰包括至磷酸-糖主链或核苷上,以包括至少一个氮或硫杂原子。Kreutzer 等人,加拿大专利申请No. 2, 359, 180也描述了用于dsRNA构建体的某些化学修饰,以抵消 双链RNA依赖性的蛋白质激酶PKR的活化,特别是2' -氨基或2' 0-甲基核苷酸,以及含有 2' -0或4' -C亚甲桥的核苷酸。另外的3' -末端核苷酸突出端包括dt (脱氧胸苷)、2' -0, 4' -C-乙烯胸苷(eT)和2-羟乙基磷酸酯(hp)。

[0191] Parrish 等人(2000 Molecular Cell 6 :1077-1087)使用长(> 25nt) siRNA 转 录本,在秀丽隐杆线虫(C.elegans)中测试了靶向unc-22基因的某些化学修饰。作者描述 了通过用T7和T3 RNA聚合酶并入硫代磷酸核苷酸类似物,将硫代磷酸残基引入这些siRNA 转录本,并且观察到,具有两个经硫代磷酸酯修饰的碱基的RNA与RNAi -样在有效性上也 具有相当的减少。此外,Parrish等人报道,对超过两个残基进行硫代磷酸修饰在体外使得 RNA被大大去稳定,从而干扰活性不可测定。Id. at 1081。作者还测试了长siRNA转录本中 核苷酸糖2' -位的某些修饰,并发现用脱氧核苷酸取代核糖核苷酸,使得干扰活性大为减 少,尤其是在尿苷到胸苷和/或胞苷到脱氧胞苷取代的情况下。Id。此外,作者测试了某些 碱基修饰,包括在siRNA的正义链和反义链中用4-硫代尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶 和3-(氨基烯丙基)尿嘧啶取代尿嘧啶以及用肌苷取代鸟苷。虽然4-硫代尿嘧啶和5-溴 尿嘧啶取代显示出是容许的,Parrish报道称,肌苷并入任一链时产生了干扰活性的实质性 减少。Parrish还报道称,5-碘尿嘧啶和3-(氨基烯丙基)尿嘧啶并入反义链导致RNAi活 性也实质减少。

[0192] 本领域技术人员将认识到,可使用本领域已知的任何常规方法(见Henschel等 人,2004 DEQOR :a web-based tool for the design and quality control of siRNA. Nucleic Acids Research 32 (Web Server Issue) :W113_W120),按需求合成和修饰 siRNA。 此外,本领域技术人员还显而易见,有多种调控序列(例如组成型或可诱导启动子、组织特 异性启动子或其功能片段等等)可用于反义寡核苷酸、siRNA或shRNA表达构建体/载体。

[0193] 本领域中有多个例子描述了可被引入核酸分子并且显著增强了其核酸酶稳定性 和效力的糖、碱基、磷酸和主链修饰。例如,修饰寡核苷酸以增强稳定性和/或增强生物 活性,这通过采用核酸酶抗性基团(例如,2' -氨基、2' -C-烯丙基、2' -氟代、2' -O-甲 基、2' -0-稀丙基、2' -H)的修饰,核苷酸碱基修饰来实现(综述见Usman和Cedergren 1992 TIBS. 17 :34 ;Usman 等人,1994 Nucleic Acids Symp. Ser. 31 :163 ;Burgin 等人, 1996Biochemistry 35:14090)。对核酸的糖修饰已在本领域中被广泛描述过。

[0194] 对RNAi活性剂的另外的修饰和缀合已被描述过。Soutschek等人,2004 Nature 432 :173-178展示了通过吡咯烷接头将胆固醇缀合到siRNA分子的正义链的3'端,由此产 生共价和不可逆缀合物。还可对siRNA进行化学修饰(包括与其它分子缀合),以改进体内 药物动力学驻留时间和效率。

[0195] 在多种实施方式中,针对HSFl的RNAi活性剂包含:至少一个5' -尿苷-腺嘌 呤-3'(5' -ua-3')二核苷酸,其中尿苷是2' -修饰的核苷酸;至少一个5' -尿苷-鸟嘌 呤-3'(5'-ug-3')二核苷酸,其中5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸;至少一个5'-胞苷-腺 嘌呤-3'(5' -ca-3')二核苷酸,其中5' -胞苷是2' -修饰的核苷酸;或至少一个5' -尿 苷-尿苷-3'(5' -uu-3')二核苷酸,其中5' -尿苷是2' -修饰的核苷酸。

[0196] 在多种实施方式中,RNAi活性剂包含选自下组的2'-修饰,所述组由2'-脱 氧、f -脱氧_2 ' -氣代、2 ' 甲基、2 ^ 甲氧基乙基(2 ^ -0-Μ0Ε)、2 ^ 氛基 丙基(2 ' -0~AP)、2 ' 二甲基氛基乙基(2' HMA0E)、2 ' 二甲基氛基丙基 (2' -0-DMAP)、2' -0-二甲基氨基乙氧基乙基(2' -0-DMAE0E)和2' -O-N-甲基乙酰氨 基(2' -〇-NMA)构成。

[0197] 在另一实施方式中,RNAi包含缺口或丢失的碱基。例如,磷酸-糖主链可存在,但 喊基丢失。

[0198] 在另一实施方式中,RNAi活性剂具有单链切口(例如主链中的断裂或丢失的键)。 该切口可例如在正义链中,产生小的内部片断化的干扰RNA,或sisiRNA,其可比没有切口 的相应RNAi活性剂具有更少的脱靶效果。

[0199] 反义核酸或RNAi活性剂还可具有替代性的主链,例如锁核酸(LNA)、吗啉代、肽核 酸(PNA)、苏糖核酸(TNA)或乙二醇核酸(GNA),和/或其可被标记(例如经放射性标记或 加标签的)。一条链或两条链可包含替代性的主链。

[0200] 在另一实施方式中,本文公开内容的方法所利用的反义核酸分子可包括α -异头 核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体,其中,与通常的β-单元 相反,链互相平行排列。Gaultier 等人,1987 Nucleic Acids. Res. 15:6625-6641。反义 核酸分子还可包含V -〇-甲基核糖核苷酸(Inoue等人,1987 Nucleic Acids Res. 15: 6131-6148)或嵌合 RNA-DNA 类似物(Inoue 等人,1987 FEBS Lett. 215 :327-330)〇

[0201] 在还一实施方式中,反义核酸是核酶。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化性RNA 分子,其能切割与它们具有互补区域的单链核酸,例如mRNA。因此,核酶[例如锤头核酶(被 描述于Haselhoff等人,1988,Nature 334:585-591中)]可用于催化性切割HSFl mRNA转 录本,由此抑制HSFl mRNA的翻译。

[0202] 或者,可通过靶向与HSFl的调控区域(例如启动子和/或增强子)互补的核苷 酸序列,以形成防止HSFl基因转录的三螺旋结构,来抑制基因表达。一般而言,见Helene 1991 Anticancer Drug Des. 6 (6) :569-84 ;Helene 等人,1992 Ann. N.Y. Acad. Sci. 660: 27-36;和 Maher 1992,Bioassays 14(12) :807-15〇

[0203] 或者,可使用表达载体生物产生反义核酸,所述表达载体是其中已经以反义定向 亚克隆了核酸的表达载体(即,转录自插入的核酸的RNA将是相对目标靶核酸来说反义定 向的)。

[0204] 本发明的反义核酸分子通常被施用至受试者,或者原位产生,使得它们与编码 HSFl的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交,并且通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。施 用反义核酸分子的途径的例子包括在组织位点直接注射。或者,反义核酸分子可被修饰,以 靶向选择的细胞,然后全身性施用。例如,就全身性施用而言,反义分子可被这样修饰,所述 修饰使得它们特异性结合至选择的细胞表面上表达的抗原或受体,例如通过将反义核酸分 子与结合至细胞表面受体或抗原的肽或抗体连接来实现。还可使用本领域公知的以及例 如US20070111230 (其全部内容并如本文)中描述的载体,来将这些反义核酸分子递送至细 胞。为获得足够的反义分子细胞内浓度,可使用下述载体构建体,其中反义核酸分子被放置 于强pol Π 或pol III启动子的控制下。

[0205] RNA 干扰

[0206] RNAi(RNA干扰)已在多种系统中被研究过。近来在果蝇胚裂解物(Elbashir等 人,2001 EMBO J. 20 :6877和Tuschl等人,国际PCT公开No. TO 01/75164)中的工作已揭 示了对于介导高效RNAi活性来说必要的对SiRNA长度、结构、化学组成和序列的某些要求。 这些研究已经显示,21个核苷酸的siRNA双链体在含有3'-末端二核苷酸突出端是最具活 性。用2' -脱氧核苷酸^ -H)对3' -末端siRNA突出端核苷酸进行取代是容许的。此 外,siRNA双链体与靶互补的链上的5'磷酸通常是siRNA活性所需的。

[0207] 已经描述了对较长dsRNA的使用。例如,Beach等人,国际PCT公开No. TO 01/68836描述了使用内源dsRNA来减弱基因表达。Tuschl等人,国际PCT公开No. WO 01/75164描述了果蝇体外RNAi系统和使用特别的siRNA分子用于某些功能性的基因 组应用和某些治疗性应用。Li等人,国际PCT公开No. WO 00/44914描述了用于减弱某 些靶基因的表达的、特别的长的(141bp-488bp)酶促合成的或载体表达的dsRNA的使 用。Zernicka-Goetz等人,国际PCT公开No. WO 01/36646描述了用于使用某些长的 (550bp-714bp)酶促合成的或载体表达的dsRNA分子在哺乳动物细胞中抑制特定基因表达 的某些方法。Fire等人,国际PCT公开No. W099/32619描述了用于将某些长dsRNA分子引 入细胞以用于在线虫中抑制基因表达的特定方法。Plaetinck等人,国际PCT公开No. TO 00/01846描述了使用特别的长dsRNA分子鉴定负责在细胞中赋予特定表型的特别的基因 的某些方法。Mello等人,国际PCT公开No. WO 01/29058描述了对涉及dsRNA介导的RNAi 的特别的基因的鉴定。Pachuck等人,国际PCT公开No. WO 00/63364描述了某些长的(至 少 200nt) dsRNA 构建体。Deschamps D印aillette 等人,国际 PCT 公开 No. WO 99/07409 描 述了由特定dsRNA分子组合某些抗病毒活性剂构成的特别的组合物。Waterhouse等人,国 际 PCT 公开 No. 99/53050 和 1998, PNAS,95,13959-13964 描述了使用某些 dsRNA 在植物细 胞中减少核酸表型表达的某些方法。Driscoll等人,国际PCT公开No. WO 01/49844描述了 用于协助在靶生物中进行基因沉默的特别的DNA表达构建体。

[0208] 其他人已报道了多种RNAi和基因沉默系统。例如,Parrish等人,2000,Molecular Cell 6 :1077-1087描述了靶向秀丽隐杆线虫(C.elegans)的unc-22基因的特别的经化学 修饰的dsRNA构建体。Grossniklaus,国际PCT公开No. WO 01/38551描述了使用某些dsRNA 在植物中调控果蝇Pc基因表达的某些方法。Churikov等人,国际PCT公开No. WO 01/42443 描述了使用某些dsRNA来修饰生物的遗传特征的某些方法。Cogoni等人,国际PCT公开 No. WO 01/53475描述了用于分离脉孢菌沉默基因的某些方法及其用途。Reed等人,国际 PCT公开No. WO 01/68836描述了用于在植物中进行基因沉默的某些方法。Honer等人,国 际PCT公开No. WO 01/70944描述了使用转基因线虫作为帕金森氏病模型使用某些dsRNA 进行药物筛选的某些方法。Deak等人,国际PCT公开No. WO 01/72774描述可能与果蝇中的 RNAi相关的某些源于果蝇的基因产物。Arndt等人,国际PCT公开No. WO 01/92513描述了 通过使用增强RNAi的因子来介导基因阻抑的某些方法。Tuschl等人,国际PCT公开No. WO 02/44321描述了某些合成的siRNA构建体。Pachuk等人,国际PCT公开No. W000/63364和 Satishchandran等人,国际PCT公开No. WO 01/04313描述了使用某些长的(超过250bp)、 载体表达的dsRNA来抑制某些多核苷酸序列的功能的某些方法和组合物。Echeverri等人, 国际PCT公开No. WO 02/38805描述了通过RNAi鉴定的某些秀丽隐杆线虫基因 。Kreutzer 等人,国际 PCT 公开 Nos. WO 02/055692、W0 02/055693 和 EP 1144623 Bl 描述了使用 dsRNA 来抑制基因表达的某些方法。Graham等人,国际PCT公开Nos. WO 99/49029和WO 01/70949 以及AU 4037501描述了某些由载体表达的siRNA分子。Fire等人,U. S. Pat. No. 6, 506, 559 描述了使用某些介导RNAi的长dsRNA(299bp-1033bp)构建体体外抑制基因表达的某些方 法。Martinez等人,2002, Cell,110, 563-574描述了某些单链siRNA构建体,包括在HeLa 细胞中介导RNA干扰的某些5' -磷酸化的单链siRNA。Harborth等人,2003, Antisense & Nucleic Acid Drug Development,13,83-105描述了某些经化学和结构修饰的siRNA分子。 Chiu和Rana,2003, RNA,9,1034-1048描述了某些经化学和结构修饰的siRNA分子。Woolf 等人,国际PCT公开Nos. WO 03/064626和WO 03/064625描述了某些经化学修饰的dsRNA 构建体。

[0209] 在多种实施方式中,将针对HSFl的RNAi活性剂与一种或多种诊断化合物、报道基 团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分、天然或非常见核苷碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集 素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基、无羁萜、无羁 萜-3 β -醇-衍生的石胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖、壳多糖、壳聚糖、 合成碳水化合物、低聚乳酸15体、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊 精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、聚胺、肽模拟 物和/或转铁蛋白连接。

[0210] RNAi活性剂的递送

[0211] 可通过本领域已知的任何方式来递送或引入本文公开内容的RNAi活性剂(例如, 体外递送或引入至细胞,或递送或引入至患者)。

[0212] 当提到iRNA时,"引入至细胞"表示协助或实现摄入或吸收进细胞,如本领域技术 人员所理解的。吸收或摄入iRNA可通过无协助的扩散性细胞过程或主动性细胞过程而发 生,或者通过辅助性活性剂或设备而发生。该术语的含义并不限于体外的细胞;iRNA还可 "被引入至细胞",其中所述细胞是活的生物的一部分。在此类情况下,引入至细胞将包括递 送至生物。例如,为进行体内递送,iRNA可被注射至组织位点,或全身性施用。体内递送还 可通过β-葡聚糖递送系统来进行,例如美国专利Nos. 5, 032, 401和5, 607, 677以及美国 公开No. 2005/0281781中描述的,它们都通过引用整体并入本文。体外引入至细胞包括本 领域已知的方法,例如电穿孔和脂质转染。其它手段被描述于下文中或者是本领域已知的。

[0213] 将RNAi活性剂递送至组织是一个问题,这是因为材料必须到达靶器官并且还必 须进入靶细胞的胞质。RNA不能穿透细胞膜,所以全身性递送裸RNAi活性剂不可能成功。 RNA会被血清中的RNA酶活性快速降解。就这些原因而言,递送RNAi活性剂至靶细胞的其 它机制已被提出。本领域已知的方法包括但不限于:病毒递送(逆转录病毒、腺病毒、慢病 毒、杆状病毒、AAV);脂质体(Lipofectamine、阳离子D0TAP、中性D0PC)或纳米颗粒(阳离 子聚合物,PEI),细菌递送(tkRNAi)以及对siRNA化学修饰(LNA)以增加稳定性。Xia等人, 2002 Nat. Biotechnol. 20 和 Devroe 等人,2002. BMC Biotechnol. 2 1:15 公开了将 siRNA 并入病毒载体。用于递送RNAi活性剂的其它系统被考虑,并且可通过有待被发现和/或被 FDA或其它管理机构批准的多种方法来递送本文公开内容的RNAi活性剂。

[0214] 脂质体之前已被用于药物递送(例如递送化疗剂)。脂质体(例如阳离子脂 质体)被描述于 PCT 公开 W002/100435A1、W003/015757A1 和 W004029213A2 ;美国专利 Nos. 5, 962, 016 ;5, 030, 453 和 6, 680, 068 ;以及美国专利申请 2004/0208921 中。制造脂质 体的方法还被描述于W004/002453A1中。此外,中性脂类已被加入至阳离子脂质体(例如 Farhood等人,1995)。阳离子脂质体已被用于将RNAi活性剂递送至多种细胞类型(Sioud 和 Sorensen 2003 ;美国专利申请 2004/0204377 ;Duxbury 等人,2004 ;Donze 和 Picard, 2002)。中性脂质体的使用公开于Miller等人,1998和美国公开号2003/0012812中。

[0215] 在本文中使用时,术语"SNALP"指稳定的核酸-脂类颗粒。SNALP代表脂类小 泡,其包覆降低的水性内部(包含核酸,例如iRNA或iRNA从其中转录而来的质粒)。 SNALPs被描述于例如美国专利申请公开Nos. 20060240093、20070135372和国际申请No. WO 2009082817中。这些申请通过引用整体并入本文。

[0216] 使用基于脂类的、基于胺的和基于聚合物的技术进行的化学转染被公开于来自 Ambion Inc. , Austin, Tex.和 Novagen,EMD Biosciences,Inc,Merck KgaA 的旗下企业, Darmstadt德国的产品中;Ovcharenko D(2003)"Efficient delivery of siRNAs to human primary cells. "Ambion TechNotes 10(5) :15-16)。此外,Song 等人(Nat Med.网络公 开(Fete I 0, 2003) doi :10. 1038/nm828)等等[Caplen 等人,2001 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA),98 :9742-9747 和 McCaffrey 等人,Nature 414 :34-39]公开了可通过将 siRNA 注射 进哺乳动物循环系统来高效转染肝细胞。

[0217] 已经使用了多种分子用于细胞特异性RNAi活性剂递送。例如,鱼精蛋白的核 酸凝聚(condensing)性质已与用于递送siRNA的特定抗体组合。Song等人,2005 Nat Biotch. 23 :709-717。自装配的PEG化的聚阳离子聚乙烯亚胺(PEI)也已被用于凝聚和保 护 siRNA。Schiffelers 等人,2004 Nucl.Acids Res. 32 :el49,141-1 10〇

[0218] 然后,含有siRNA的纳米颗粒可被成功递送至过表达整联蛋白的肿瘤新血管系 统。Hu-Lieskovan 等人,2005 Cancer Res. 65:8984-8992。

[0219] 本文公开内容的RNAi活性剂可经由例如脂类纳米颗粒(LNP);中性脂质体(NL); 聚合物纳米颗粒;双链RNA结合基序(dsRBMs);或者经由对RNAi活性剂的修饰(例如共价 连结至dsRNA)而被递送。

[0220] 脂类纳米颗粒(LNP)是自装配的基于阳离子脂类的系统。它们可包含例如中性 脂类(脂质体基础);阳离子脂类(用于siRNA装载);胆固醇(用于稳定脂质体);和 PEG-脂类(用于稳定制剂、电荷掩蔽和血流中的延伸的循环)。阳离子脂类可包含例如首 基(headgroup)、接头、尾部和胆固醇尾。LNP可具有例如良好的肿瘤递送、血液中延伸的循 环、小颗粒(例如小于IOOnm)和在肿瘤微环境中的稳定性(其具有低pH并且含氧量低)

[0221] 中性脂质体(NL)是基于非阳离子脂类的颗粒。

[0222] 聚合物纳米颗粒是自装配的基于聚合物的颗粒。

[0223] 双链RNA结合基序(dsRBMs)是自装配的RNA结合蛋白质,其将需要修饰。

[0224] 针对HSFl的RNAi活性剂

[0225] 特别有用于本文公开内容的SiRNA包括可与HSFl mRNA的区域特异性结合的那 些,并且具有下述品质中的一种或多种:在HSFl的编码区段中结合;在编码区段的起始和 5'非翻译区域的汇合处上或附近结合;在mRNA的翻译起始位点上或附近结合;在外显子 和内含子的汇合处上或附近结合;极少或不结合至其它基因的mRNA(极少或没有"脱靶效 果;在并非双链或茎区域的一个或多个区域中(例如在环或单链部分中)或附近结合至 HSFl mRNA ;引发极少或不引发免疫原性;在于多种动物物种(包括人、小鼠、大鼠、食蟹猴 等等)中保守的HSFl mRNA序列的区段中结合,因为保守序列的存在能协助使用多种实验 动物进行测试;结合至mRNA的一个或多个双链区域;结合至富含AT的区域(例如至少大约 50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60% AT富集的);以及缺乏已知或怀疑能减少siRNA 活性的特定序列,例如,在5'端存在GG序列,其可减少siRNA双链部分的分离。

[0226] RNAi活性剂可被设计为结合至HSFl mRNA并协助降解HSFl mRNA的HSFl RNAi活 性剂。抗HSFl RNAi活性剂可被设计为结合编码区段或非编码区段(例如,5'或3'非翻译 区域或UTRs)。优选地,RNAi活性剂结合mRNA的编码区段。RNAi活性剂可具有双链区域, 例如大约17、18、19、20、21、22、23或24bp的双链区域。优选地,RNAi活性剂包含大约19、 20或21bp。当并入适于被Dicer复合体缩短的构建体中时,RNAi活性剂可以更长(例如 可多至49bp)。RNAi还可被并入更长的构建体,用于在进一步缩短和加工之前表达。

[0227] HSFl RNAi活性剂的正义链和反义链

[0228] RNAi活性剂包含第一链和第二链。在一种实施方式中,第一链和第二链分别是正 义链和反义链。在其它一些实施方式中,第一链和第二链分别是反义链和正义链。第一链 因此可包含本文公开的任何序列的正义链或反义链,或其包含具有可多至3处错配的15个 连续核苷酸的变体序列;并且第二链可因此包含本文公开的任何序列的相应反义链或正义 链,或其包含具有可多至3处错配的15个连续核苷酸的变体序列。

[0229] 术语"反义链"指iRNA(例如dsRNA)的包括与靶序列实质上互补的区域的链。在 本文中使用时,术语"互补性区域"指反义链上与本文定义的序列(例如靶序列)实质上互 补的区域。当互补性区域与靶序列不完全互补时,错配可以在分子的内部或末端区域。通 常,最被容许的错配在末端区域,例如,在5'和/或3'末端的5、4、3或2个核苷酸内。

[0230] 术语"正义链"在本文中使用时指iRNA的、包括与反义链(如该术语在本文中被 定义的那样)的区域实质上互补的区域的链。

[0231] 突出端和平端

[0232] RNAi活性剂可具有0、1或2个突出端;在Ont突出端的情况下,两端均为平端。 RNAi活性剂可具有0、1或2个平端。在"平端RNAi活性剂"中,没有链在末端含有未配对 的核苷酸;因此平端分子缺乏3'或5'单链核苷酸突出端。

[0233] 在本文中使用时,术语"突出端"或"核苷酸突出端"指从iRNA(例如dsRNA)双链 体结构突起的至少一个未配对核苷酸。例如,当dsRNA的一条链的3'端延伸超出另一链的 5'端(或者反过来)时,即存在突出端。dsRNA可包含至少一个核苷酸的突出端,或者突出 端可包含至少2nt、至少3nt、至少4nt、至少5nt或更多。突出端可包含核苷酸/核苷类似 物,或由核苷酸/核苷类似物构成,所述核苷酸/核苷类似物包括脱氧核苷酸/核苷。突出 端可在正义链、反义链或其任何组合上。突出端的核苷酸可存在dsRNA的反义链或正义链 的5'端、3'端或两端上。

[0234] 术语"平"或"平端"在本文中关于dsRNA使用时表示在dsRNA的给定末端没有未 配对的核苷酸或核苷酸类似物,即,没有核苷酸突出端。dsRNA的一个末端或两个末端可以 是平的。当dsRNA的两个末端均是平的时,dsRNA被说成是平端的。为清楚计,"平端"dsRNA 是在两个末端均为平的的dsRNA,即在分子的任何末端都没有核苷酸突出端。最通常地,此 类分子将在其全长上为双链的。

[0235] 在一种实施方式中,通过加上3'帽对RNAi双链体的平端进行化学修饰,例如,WO 2005/021749和WO 2007/128477中描述的那些。在此类实施方式中,3'帽是非核苷酸性的, 并且因此不构成突出端。

[0236] 基因的mRNA序列可各个体之间有所变动,尤其是在编码区段内的摆动位置,或者 在非翻译区域中;各个体的编码序列也可互相不同,导致mRNA和相应的RNAi活性剂序列的 额外差异。RNAi活性剂还可在序列中被修饰,以降低免疫原性、与不想要的基因的结合(例 如"脱靶效果")或以增加在血液中的稳定性。(这些序列变体独立于对碱基化学修饰或对 RNAi活性剂的5'或3'或其它末端帽)。

[0237] 示例性的抗HSFl的RNAi活性剂包括本文提供的与HSFl基因结合的那些。示例 性的针对HSFl的siRNA提供于表1、2、3、3六、8、94和98中的任何一种或多种中。

[0238] 测量RNAi活性剂对HSFl活性、水平和/或表达的影响

[0239] 本领域已知的任何方法可用于测量被HSFl siRNA所诱导的HSFl活性、水平和/或 表达的变化。测量可在多个时间点进行,在施用siRNA之前、期间和之后进行,以测定SiRNA 的影响。

[0240] 本文公开内容的RNAi活性剂沉默、抑制HSFl的表达,下调HSFl的表达,和/或阻 抑HSFl的表达。

[0241] 术语"沉默"、"抑制......的表达"、"下调......的表达"、"阻抑......的表达" 等等在提到HSFl基因的时候在本文中是表示对HSFl基因表达的至少部分阻抑,表现为:在 HSFl基因在其中转录并且已经受到处理以抑制HSFl基因表达的第一细胞或细胞组中,可 分离或检测到的HSFl mRNA量的降低,这是较之与第一细胞或细胞组基本上相同但是未受 此类处理的第二细胞或细胞组(对照细胞)而言的。抑制的程度通常表示为:

Figure CN105125572AD00361

[0243] 或者,抑制的程度可以以与HSFl基因表达功能性关联的参数的降低来给出,所述 参数例如HSFl基因编码的蛋白质的量,或展示出某表型的细胞数目,所述表型例如对其表 达受HSFl整体或部分介导的基因(例如HSP70)的表达的调节。原则上,可在表达HSFl的任 何细胞(组成型表达或通过基因组工程而表达)中,以及通过任何合适的测定来测定HSFl 基因沉默。但是,当需要参照或对照,以确定给定的iRNA是否抑制HSFl的表达到一定程度 并且由此所述iRNA被本文公开内容所包括时,下文实施例中提供的测定将可用作为此类 参照。

[0244] 例如,在某些情况下,通过施用本文公开内容涉及的iRNA,将HSFl基因的表达阻 抑至少大约10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%。在一些实施方式中,通 过施用本文公开内容涉及的iRNA,将HSFl基因阻抑至少大约60%、70%或80%。在一些 实施方式中,通过施用本文所述的iRNA,将HSFl基因阻抑至少大约85%、90 %或95 %或更 多。

[0245] 涉及HSFl RNAi活性剂的治疗

[0246] 在本文中关于HSFl表达的上下文中使用时,术语"治疗"及其各种词性形式指缓 解或减轻HSFl表达介导的病理过程。在本文公开内容的上下文中,在涉及下文所述的任何 其它状况时(除了 HSFl表达介导的病理过程),术语"治疗"及其各种词性形式表示缓解或 减轻与此类状况相关的至少一种症状,或减慢或逆转此类状况的进展或预期进展,例如减 慢脂类病症(例如动脉粥样硬化)的进展。

[0247] 在疾病标志或症状的上下文中,"降低"表示此类水平的统计上显著的减少。这种 减少可例如为至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或更多。针对特定疾病或针对遭 受特定疾病的个体,如果HSFl的水平或表达升高,则用本文公开内容的HSFl RNAi活性剂 进行的治疗可优选地将HSFl的水平或表达降低至处于文献中认为对没有此类病症的个体 来说正常的范围内的水平。

[0248] HSFl的水平或表达可通过对mRNA(例如通过Northern印迹或PCR)或蛋白质(例 如Western印迹)的评价来测量。RNAi活性剂对HSFl表达的影响可通过测量HSFl基因 转录速率来测定(例如通过Northern印迹;或逆转录酶聚合酶链式反应或实时聚合酶链式 反应)。已用RT-PCR显示:HSFl的mRNA水平在肾、胰腺和前列腺中较高,在肝和脾中中等。 Brauner-Osborne 等人,2001. Biochim. Biophys. Acta 1518:237-248。直接测量可对(细 胞表面表达的)HSFl的水平进行,例如通过对其中表达HSFl的组织进行Western印迹来进 行。

[0249] 在本文公开内容的另一实施方式中,包含HSFl RNAi活性剂的组合物可被施用 给非人动物。例如,组合物可提供给鸡、火鸡、家畜动物(例如羊、猪、马、牛等等)、伴侣动 物(例如狗和猫),并且在对癌症和病毒疾病的治疗中具有效力。在每种情况下,将对针对 HSFl的RNAi活性剂加以选择,以匹配动物基因组的HSFl序列,以及以优选含有较之动物基 因组中所有其它基因而言的至少Int的错配。

[0250] "治疗(treatment) "表示预防、治疗(therapy)、治愈或指示生理状况改善或无退 化的患者状况的任何其它变化。"治疗"表示对HSFl相关疾病(例如癌症或病毒疾病)的 治疗,或对患者具有的任何其它不适的任何合适治疗。在本文中使用时,术语"治疗"及其 其它词性形式表示预防性(prophylactic或preventative)治疗和治愈性或疾病改善性治 疗两者,包括对处于感染疾病风险中或怀疑具有疾病的患者以及已经生病或诊断为遭受状 况(condition)的患者进行治疗。术语"治疗"及其其它词性形式还表示在未遭受疾病但 是可能对不健康状况(例如氮不平衡或肌肉损失)的发展易感的个体中保持和/或促进健 康。在一种实施方式中,"治疗"不包括预防疾病状态。因此,本文公开内容可用于在患HSFl 相关疾病的个体中或在对HSFl相关疾病易感的个体中阻抑HSFl的表达和/或治疗HSFl 相关疾病。"患"HSFl相关疾病的个体已显示出疾病特征性的可检测到的症状,或者已临床 显示出暴露给或携带HSFl相关疾病的病原体或标志。作为非限制性的例子,患HSFl相关 疾病的个体可显示出表面症状,或者可不显示表面症状但在临床测试中显示出携带与HSFl 相关疾病相关的蛋白质标志、或血液中与病原体相关的蛋白质或遗传材料。

[0251] "有效量"或"治疗有效量"是治疗个体的疾病或医学状况的量,或者更一般性地, 向个体提供营养、生理或医学益处的量。在本文中使用时,短语"治疗有效量"和"预防有效 量"表示在对HSFl表达所介导的病理过程或HSFl表达所介导的病理过程的明显症状的治 疗、预防或管理中提供治疗性益处的量。具体的治疗有效的量可容易地被普通执业医师确 定,并且可取决于本领域已知的因素而变动,所述因素例如HSFl表达所介导的病理性过程 的类型、患者的病史和年龄、HSFl表达所介导的病理性过程的阶段以及抑制HSFl介导的病 理性过程的其它活性剂的施用。

[0252] 在本文公开内容的多种实施方式中,患者年龄为至少大约1、5、10、20、30、40、50、 55、60、65、70或75岁。在多种实施方式中,患者年龄不超过大约1、5、10、20、30、40、50、55、 60、65、70、75、80、90或100岁。在多种实施方式中,患者具有至少大约20、30、40、50、60、70、 80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380 或 4001bs 的 体重。在多种实施方式中,患者具有不超过大约20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、 160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380 或 4001bs 的体重。

[0253] 在本文公开内容的多种实施方式中,剂量[仅测量活性成分]可以是至少大约1、 5、10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、 950 或 lOOOng,1、5、10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700、 750、800、850、900、950 或 1000 微克,1、5、10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、 550、600、650、700、750、800、850、900、950或lOOOrng。在多种实施方式中,剂量可以不超过 大约 10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、 950或lOOOrng。在多种实施方式中,剂量可以至少每天不止一次,每日、每周不止一次、每 周、隔周、每月和/或每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月施用,或其组合施用。

[0254] 在多种实施方式中,剂量与个体的体重或体表面积相关。实际剂量水平可有所变 动,以获得对于特定患者、组合物和施用模式有效但对患者无毒性的有活性的活性剂的量。 所选择的剂量将取决于多种药物动力学因素,包括所用的特定RNAi活性剂的活性,施用途 径,RNAi活性剂排出速率,治疗持续期,与RNAi活性剂组合使用的其它药物、化合物和/或 材料,患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康和之前医疗史,以及医学领域公知的类似因 素。具有本领域普通技术的医师或兽医可容易地确定需要的RNAi活性剂的有效量。合适 的剂量将是这样的量,其实对于产生治疗性效果来说有效的最低剂量,或者足够低到能产 生治疗性效果但是不导致副作用的剂量。

[0255] 包含HSFl RNAi活性剂的药物组合物

[0256] 在本文中使用时,"药物组合物"包含药理有效量的iRNA和可药用载体。在本文中 使用时,"药理有效量"、"治疗有效量"或简单的"有效量"表示能有效产生想要的药理、治疗 或预防结果的iRNA的量。例如,如果当与疾病或病症相关的可测量参数有至少10%的降低 时给定的临床治疗被认为有效的话,用于治疗该疾病或病症的药物的治疗有效量就是实现 该参数至少10%降低所需的量。例如,靶向HSFl的iRNA的治疗有效量可将HSFl蛋白质水 平降低至少10%。

[0257] 术语"可药用载体"指的是施用治疗活性剂的载体。此类载体包括但不限于盐水、 缓冲盐水、葡萄糖、水、丙三醇、乙醇、和它们的组合。术语明确排除细胞培养基。对于经口 施用的药物,可药用载体包括但不限于可药用赋形剂,例如惰性稀释剂、崩解剂、粘合剂、润 滑剂、甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂。适当的惰性稀释剂包括钠和钙的碳酸盐、钠和钙的 磷酸盐、以及乳糖,而玉米淀粉和褐藻酸则是适当的崩解剂。粘合剂可以包括淀粉和明胶, 而润滑剂(如果存在的话)通常为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。如果需要的话,片剂可以用 例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯的材料包衣来延迟在胃肠道的吸收。药物制剂中包 括的活性剂在本文中被描述。

[0258] 包含HSFl RNAi活性剂的药物组合物可以是固体形式的,例如粉末、颗粒、片剂、丸 剂、软胶囊(gelcaps)、胶囊(gelatin capsules)、脂质体、栓剂、阻嚼形式或贴剂。包含HSFl RNAi活性剂的药物组合物还可呈现为液体形式,例如溶液、乳液、悬浮液、酏剂或糖浆。合 适的液体支持物可以是例如水、有机溶剂(例如多元醇,例如甘油或乙二醇,包括丙二醇和 聚乙二醇)或乙醇、聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)或其混合物(以多种比例,在水中)。 组合物可包含纳米尺寸的无定型或晶体颗粒,其被铝或表面活性剂涂覆。

[0259] 合适的支持物可包括例如,抗细菌和抗真菌剂,缓冲剂,磷酸钙,纤维素,甲基纤 维素,氯丁醇(chlorobutanol),可可脂(cocoa butter),着色剂,糊精,乳化剂,肠溶衣 (enteric coatings),调味剂,明胶,等张剂,卵磷脂,硬脂酸镁,芳香剂,多元醇例如甘露 醇,可注射的有机酯类,例如油酸乙酯,对羟基苯甲酸酯(paraben),山梨酸苯酚(phenol sorbic acid),聚乙二醇,聚乙稀吡略烧(polyvinylpyrrolidine),磷酸缓冲盐溶液(PBS), 防腐剂,丙二醇,羧甲基纤维素钠,氯化钠,山梨糖醇,多种糖(包括但不限于蔗糖、果糖、 半乳糖、乳糖和海藻糖),淀粉,栓剂錯(suppository wax),滑石,植物油,例如橄榄油和 玉米油,维生素,蜡和/或润湿剂。对于HSF I RNAi活性剂,特定的支持物包含右旋糖酐 (dextran)和水,例如,水中5%右旋糖(D5W)。

[0260] 药物组合物的生物惰性部分可任选地是易蚀的,以允许RNAi活性剂随时间释放。

[0261] 包含HSFl的药物组合物可通过颊(buccal)、吸入(包括吹入或深度吸入(de印 inhalation))、鼻、口服、肠胃外、植入、注射或输注(经由硬膜外、动脉内、关节内、囊内、心 内、脑室内、颅内、皮内、肌内、眶内、腹膜内、脊柱内、胸骨内、鞘内、静脉内、蛛网膜下、被膜 下(subcapsular)、皮下、表皮下、经内皮、经气管、经血管、直肠、舌下、局部和/或阴道途 径)施用。这可通过注射、输注、皮肤贴片或本领域已知的任何其它方法来进行。制剂可以 是粉末化的、雾化的、气溶胶化的(aerosolized)、颗粒化的或者经合适制备用于递送的。如 果是液体的话,施用可以缓慢进行,或者通过推注(bolus)进行,虽然在本领域已知的一些 情况下,推注注射可能导致材料经肾脏损失。

[0262] 可用本领域已知的医学设备来施用HSFl RNAi活性剂。例如,在特定的具体实施 方式中,可用无针头皮下注射设备,例如美国专利Nos. 5, 399, 163、5, 383, 851、5, 312, 335、 5, 064, 413、4, 941,880、4, 790, 824或4, 596, 556中公开的设备,来施用RNAi活性剂。可用 于本文公开内容中的公知植入体和模块的例子包括:美国专利No. 4, 487, 603,其公开了可 植入的微输注栗,用于以受控速率来分配药剂;美国专利No. 4.,486, 194,其公开了用于经 由皮肤施用药剂的治疗设备;美国专利No. 4, 447, 233,其公开了用于以精确输注速率递送 药剂的药剂输注栗;美国专利No. 4, 447, 224,其公开了用于连续药物递送的可变流速可植 入输注装置;美国专利No. 4, 439, 196,其公开了具有多腔区室的渗透性药物递送系统;以 及美国专利No. 4, 475, 196,其公开了渗透性药物递送系统。很多其它此类植入体、递送系统 和模块是本领域技术人员已知的。

[0263] 在某些实施方式中,可对RNAi活性剂加以配制,以确保体内正确分布。例如,血脑 屏障(BBB)排除了很多高度亲水性的化合物。为确保HSFlRNAi活性剂穿过BBB (如果需要的 话),可将它们配制于例如脂质体中。就制造脂质体的方法,参见例如美国专利4, 522, 811 ; 5, 374, 548和5, 399, 331。脂质体可包含被选择性运输进特别的细胞或器官的一种或多种 部分,由此增强革巴向药物递送(见例如V. V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29 :685)。示 例性的靶向部分包括叶酸或生物素(见例如Low等人的美国专利5, 416, 016);甘露糖苷 (Umezawa 等人,(1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153 :1038);抗生素(Ρ· G. Bloeman 等 人(1995) FEBS Lett. 357 :140 ;M. Owais 等人(1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39 : 180);表面活性剂蛋白 A 受体(Briscoe 等人(1995)Am.J. Physiol. 1233 :134),其不同 种类可包含本文公开内容的制剂以及所发明的分子的组分;pl20(Schreier等人(1994) J. Biol. Chem. 269 :9090);还见 K. Keinanen ;M.L.Laukkanen(1994)FEBS Lett. 346 :123 ; J. J. Killion ;Ι· J. Fidler (1994)Immunomethods 4 :273〇

[0264] 特定的具体实施方式

[0265] 在一种特定的具体实施方式中,本文公开内容是包含一种或多种HSFl RNAi活性 剂的组合物。

[0266] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20278或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0267] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20279或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0268] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20280或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0269] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20281或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0270] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20282或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0271] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20283或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0272] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20303或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0273] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20313或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0274] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20315或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0275] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20348或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0276] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20362或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0277] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20364或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0278] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20365或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0279] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20366或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0280] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20373或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0281] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20376或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0282] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20377或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0283] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20378或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0284] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20386或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0285] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20389或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0286] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20391或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0287] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20392或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0288] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20397或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0289] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20398或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0290] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20399或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0291] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20401或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0292] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20402或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0293] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20403或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0294] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20404或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0295] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20406或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0296] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20407或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0297] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20408或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0298] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20409或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0299] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20410或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0300] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-20411或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0301] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20413或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0302] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20422或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0303] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20428或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0304] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20434或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0305] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20435或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0306] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20437. 4 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0307] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20437或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0308] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20438或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0309] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20439或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0310] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20487. 7 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0311] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20487或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0312] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20488或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0313] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20489. 2 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0314] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20489或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0315] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20490或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0316] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20491或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0317] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20493或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0318] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20495或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0319] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20502或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0320] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20507或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0321] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20513或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0322] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20527或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0323] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20535或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0324] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20544或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0325] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20545或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0326] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20546或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0327] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20547或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0328] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20548或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0329] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20549或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0330] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20552或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0331] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20555或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0332] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20556或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0333] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20557或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0334] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20558或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0335] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20560. 4 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0336] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20560或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0337] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20561或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0338] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20562或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0339] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20563或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0340] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20564或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0341] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20565或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0342] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20566或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0343] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20570或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0344] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20572或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0345] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20574或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0346] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20575或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0347] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20577或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0348] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20578或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0349] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20579或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0350] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20580或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0351] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20597或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0352] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20598或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0353] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20625或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0354] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20626或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0355] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20627或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0356] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20633或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0357] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20634或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0358] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20640或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0359] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20644或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0360] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20646或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0361] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20648或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0362] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20650或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0363] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20652或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0364] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20653或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0365] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20660或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0366] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20661或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0367] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20671或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0368] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20693或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0369] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20694或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0370] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-20700或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0371] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20702或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0372] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20707或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0373] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20709或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0374] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20710或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0375] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20714或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0376] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20716或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0377] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20728或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0378] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20730或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0379] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20741或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0380] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20764或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0381] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_20783或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0382] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_30071或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0383] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_36969或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0384] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_36970或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0385] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37718或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0386] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37719或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0387] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37720或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0388] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37721或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0389] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37722或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0390] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37723或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0391] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37724或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0392] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37725或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0393] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37726或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0394] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37727或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0395] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37728或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0396] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37729或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0397] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37730或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0398] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37731或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0399] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37732或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0400] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-37733或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0401] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-37734或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0402] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37735或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0403] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-30071. 2 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0404] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_36969. 2 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0405] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_36970. 2 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0406] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37718. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0407] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37719. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0408] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37720. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0409] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-37721. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0410] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-37722. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0411] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37723. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0412] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37724. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0413] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37725. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0414] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37726. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0415] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37727. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0416] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37728. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0417] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37729. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0418] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37730. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0419] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD-37731. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0420] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37732. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0421] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37733. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0422] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37734. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0423] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37735. 1 或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0424] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37736或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0425] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37737或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0426] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37738或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0427] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37739或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0428] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37740或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0429] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37741或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0430] 在一种实施方式中,本文公开内容包含下述物质或由下述物质构成:AD_37742或 其经修饰的或未经修饰的变体。

[0431] 另外的特定具体实施方式

[0432] 在多种实施方式中,本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第 一链和第二链,其中所述第一链包含与本文公开的任何一种或多种RNAi活性剂的第一链 有0、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与本文公开的任何一种 或多种RNAi活性剂的第二链有0、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0433] 下文进一步描述了多种实施方式。

[0434] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20278或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20278或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0435] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20279或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20279或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0436] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20280或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20280或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0437] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20281或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20281或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0438] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20282或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20282或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0439] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20283或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20283或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0440] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20303或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20303或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0441] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20313或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20313或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0442] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20315或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20315或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0443] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20348或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20348或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0444] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20362或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20362或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0445] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20364或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20364或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0446] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20365或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20365或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0447] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20366或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20366或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0448] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20373或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20373或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0449] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20376或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20376或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0450] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20377或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20377或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0451] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20378或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20378或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0452] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20386或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20386或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0453] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20389或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20389或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0454] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20391或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20391或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0455] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20392或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20392或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0456] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20397或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20397或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0457] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20398或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20398或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0458] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20399或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20399或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0459] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20401或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20401或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0460] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20402或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20402或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0461] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20403或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20403或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0462] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20404或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20404或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0463] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20406或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20406或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0464] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20407或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20407或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0465] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20408或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20408或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0466] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20409或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20409或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0467] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20410或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20410或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0468] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20411或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20411或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0469] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20413或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20413或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0470] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20422或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20422或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0471] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20428或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20428或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0472] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20434或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20434或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0473] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20435或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20435或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0474] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20437. 4或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20437. 4或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0475] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20437或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20437或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0476] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20438或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20438或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0477] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20439或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20439或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0478] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20487. 7或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20487. 7或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0479] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20487或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20487或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0480] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20488或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20488或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0481] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20489. 2或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20489. 2或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0482] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20489或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20489或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0483] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20490或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20490或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0484] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20491或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20491或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0485] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20493或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20493或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0486] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20495或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20495或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0487] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20502或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20502或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0488] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20507或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20507或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0489] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20513或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20513或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0490] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20527或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20527或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0491] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20535或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20535或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0492] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20544或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20544或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0493] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20545或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20545或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0494] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20546或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20546或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0495] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20547或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20547或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0496] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20548或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20548或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0497] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20549或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20549或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0498] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20552或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20552或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0499] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20555或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20555或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0500] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20556或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20556或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0501] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20557或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20557或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0502] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20558或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20558或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0503] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20560. 4或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20560. 4或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0504] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20560或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20560或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0505] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20561或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20561或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0506] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20562或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20562或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0507] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20563或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20563或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0508] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20564或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20564或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0509] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20565或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20565或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0510] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20566或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20566或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0511] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20570或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20570或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0512] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20572或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20572或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0513] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20574或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20574或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0514] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20575或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20575或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0515] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20577或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20577或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0516] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20578或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20578或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0517] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20579或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20579或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0518] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20580或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20580或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0519] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20597或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20597或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0520] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20598或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20598或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0521] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20625或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20625或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0522] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20626或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20626或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0523] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20627或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20627或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0524] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20633或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20633或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0525] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20634或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20634或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0526] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20640或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20640或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0527] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20644或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20644或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0528] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20646或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20646或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0529] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20648或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20648或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0530] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20650或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20650或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0531] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20652或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20652或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0532] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20653或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20653或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0533] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20660或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20660或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0534] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20661或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20661或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0535] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20671或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20671或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0536] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20693或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20693或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0537] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20694或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20694或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0538] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20700或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20700或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0539] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20702或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20702或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0540] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20707或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20707或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0541] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20709或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20709或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0542] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20710或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20710或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0543] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20714或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20714或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0544] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20716或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20716或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0545] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20728或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20728或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0546] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20730或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20730或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0547] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20741或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20741或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0548] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20764或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20764或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0549] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-20783或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-20783或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0550] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-30071或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-30071或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0551] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-36969或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-36969或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0552] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-36970或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-36970或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0553] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37718或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37718或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0554] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37719或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37719或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0555] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37720或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37720或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0556] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37721或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37721或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0557] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37722或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37722或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0558] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37723或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37723或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0559] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37724或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37724或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0560] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37725或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37725或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0561] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37726或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37726或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0562] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37727或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37727或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0563] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37728或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37728或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0564] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37729或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37729或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0565] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37730或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37730或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0566] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37731或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37731或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0567] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37732或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37732或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0568] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37733或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37733或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0569] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37734或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37734或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0570] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37735或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37735或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0571] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37736或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37736或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0572] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37737或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37737或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0573] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37738或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37738或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0574] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37739或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37739或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0575] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37740或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37740或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0576] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37741或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37741或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0577] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37742或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不同 的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37742或其经修饰或未经修饰的变体 的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0578] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-30071. 2或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-30071. 2或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0579] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-36969. 2或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-36969. 2或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0580] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-36970. 2或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-36970. 2或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0581] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37718. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37718. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0582] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37719. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37719. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0583] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37720. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37720. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0584] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37721. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37721. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0585] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37722. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37722. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0586] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37723. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37723. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0587] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37724. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37724. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0588] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37725. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37725. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0589] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37726. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37726. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0590] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37727. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37727. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0591] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37728. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37728. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0592] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37729. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37729. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0593] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37730. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37730. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0594] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37731. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37731. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0595] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37732. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37732. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0596] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37733. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37733. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0597] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37734. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37734. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0598] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37735. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37735. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0599] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37736. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37736. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0600] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37737. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37737. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0601] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37738. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37738. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0602] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37739. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37739. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0603] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37740. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37740. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0604] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37741. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37741. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0605] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其中 所述第一链包含与AD-37742. 1或其经修饰或未经修饰的变体的第一链有0、1、2或3nt不 同的至少15个连续核苷酸,以及所述第二链包含与AD-37742. 1或其经修饰或未经修饰的 变体的第二链有〇、1、2或3nt不同的至少15个连续核苷酸。

[0606] 另外的特定具体实施方式

[0607] 在多种实施方式中,本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含正 义链和反义链,其中所述反义链包含与本文公开的任何RNAi活性剂的反义链有0、1、2或 3nt不同的至少15个连续的核苷酸。

[0608] 因此,在多种实施方式中:

[0609] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含正义链和反义链,其中 所述反义链包含与任何一种或多种下述双链体或其经修饰的或未经修饰的变体的反义链 有 O、1、2 或 3nt 不同的至少 15 个连续的核苷酸:AD-20278、AD-20279、AD-20280、AD-20281、 AD-20282、AD-20283、AD-20296、AD-20300、AD-20303、AD-20312、AD-20313、AD-20315、 AD-20344、AD-20345、AD-20348、AD-20349、AD-20353、AD-20362、AD-20364、AD-20365、 AD-20366、AD-20373、AD-20374、AD-20376、AD-20377、AD-20378、AD-20379、AD-20380、 AD-20386、AD-20387、AD-20388、AD-20389、AD-20390、AD-20391、AD-20392、AD-20393、 AD-20395、AD-20396、AD-20397、AD-20398、AD-20399、AD-20401、AD-20402、AD-20403、 AD-20404、AD-20406、AD-20407、AD-20408、AD-20409、AD-20410、AD-20411、AD-20413、 AD-20421、AD-20422、AD-20424、AD-20426、AD-20426、AD-20427、AD-20428、AD-20433、 AD-20434、AD-20435、AD-20436、AD-20437、AD-20438、AD-20439、AD-20487、AD-20488、 AD-20489、AD-20490、AD-20491、AD-20492、AD-20493、AD-20494、AD-20495、AD-20501、 AD-20502、AD-20504、AD-20506、AD-20507、AD-20510、AD-20511、AD-20513、AD-20527、 AD-20530、AD-20531、AD-20534、AD-20535、AD-20538、AD-20542、AD-20543、AD-20544、 AD-20545、AD-20546、AD-20547、AD-20548、AD-20549、AD-20550、AD-20552、AD-20554、 AD-20555、AD-20556、AD-20557、AD-20558、AD-20559、AD-20560、AD-20561、AD-20562、 AD-20563、AD-20564、AD-20565、AD-20566、AD-20567、AD-20570、AD-20572、AD-20574、 AD-20575、AD-20576、AD-20577、AD-20578、AD-20579、AD-20580、AD-20581、AD-20582、 AD-20625、AD-20626、AD-20627、AD-20628、AD-20629、AD-20630、AD-20631、AD-20632、 AD-20633、AD-20635、AD-20638、AD-20639、AD-20640、AD-20642、AD-20643、AD-20644、 AD-20646、AD-20647、AD-20648、AD-20650、AD-20652、AD-20653、AD-20656、AD-20658、 AD-20659、AD-20660、AD-20661、AD-20662、AD-20670、AD-20671、AD-20672、AD-20676、 AD-20678、AD-20693、AD-20694、AD-20695、AD-20700、AD-20701、AD-20702、AD-20703、 AD-20705、AD-20706、AD-20707、AD-20708、AD-20709、AD-20710、AD-20711、AD-20713、 AD-20714、AD-20715、AD-20716、AD-20718、AD-20720、AD-20728、AD-20730、AD-20731、 AD-20741、AD-20742、AD-20743、AD-20744、AD-20748、AD-20751、AD-20752、AD-20754、 AD-20764、AD-20765、AD-20766、AD-20783、AD-20784、AD-20785、AD-20786、AD-20790、 AD-20801或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0610] 另外的特定实施方式

[0611] 在多种实施方式中,本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含正 义链和反义链,其中所述反义链包含本文公开的任何RNAi活性剂的反义链或由本文公开 的任何RNAi活性剂的反义链构成。

[0612] 因此,下述作为多种实施方式的实例提供。

[0613] 本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含正义链和反义链,其 中所述反义链包含下述物质的反义链或由下述物质的反义链构成:AD-20278、AD-20279、 AD-20280、AD-20281、AD-20282、AD-20283、AD-20296、AD-20300、AD-20303、AD-20312、 AD-20313、AD-20315、AD-20344、AD-20345、AD-20348、AD-20349、AD-20353、AD-20362、 AD-20364、AD-20365、AD-20366、AD-20373、AD-20374、AD-20376、AD-20377、AD-20378、 AD-20379、AD-20380、AD-20386、AD-20387、AD-20388、AD-20389、AD-20390、AD-20391、 AD-20392、AD-20393、AD-20395、AD-20396、AD-20397、AD-20398、AD-20399、AD-20401、 AD-20402、AD-20403、AD-20404、AD-20406、AD-20407、AD-20408、AD-20409、AD-20410、 AD-20411、AD-20413、AD-20421、AD-20422、AD-20424、AD-20426、AD-20426、AD-20427、 AD-20428、AD-20433、AD-20434、AD-20435、AD-20436、AD-20437、AD-20438、AD-20439、 AD-20487、AD-20488、AD-20489、AD-20490、AD-20491、AD-20492、AD-20493、AD-20494、 AD-20495、AD-20501、AD-20502、AD-20504、AD-20506、AD-20507、AD-20510、AD-20511、 AD-20513、AD-20527、AD-20530、AD-20531、AD-20534、AD-20535、AD-20538、AD-20542、 AD-20543、AD-20544、AD-20545、AD-20546、AD-20547、AD-20548、AD-20549、AD-20550、 AD-20552、AD-20554、AD-20555、AD-20556、AD-20557、AD-20558、AD-20559、AD-20560、 AD-20561、AD-20562、AD-20563、AD-20564、AD-20565、AD-20566、AD-20567、AD-20570、 AD-20572、AD-20574、AD-20575、AD-20576、AD-20577、AD-20578、AD-20579、AD-20580、 AD-20581、AD-20582、AD-20625、AD-20626、AD-20627、AD-20628、AD-20629、AD-20630、 AD-20631、AD-20632、AD-20633、AD-20635、AD-20638、AD-20639、AD-20640、AD-20642、 AD-20643、AD-20644、AD-20646、AD-20647、AD-20648、AD-20650、AD-20652、AD-20653、 AD-20656、AD-20658、AD-20659、AD-20660、AD-20661、AD-20662、AD-20670、AD-20671、 AD-20672、AD-20676、AD-20678、AD-20693、AD-20694、AD-20695、AD-20700、AD-20701、 AD-20702、AD-20703、AD-20705、AD-20706、AD-20707、AD-20708、AD-20709、AD-20710、 AD-20711、AD-20713、AD-20714、AD-20715、AD-20716、AD-20718、AD-20720、AD-20728、 AD-20730、AD-20731、AD-20741、AD-20742、AD-20743、AD-20744、AD-20748、AD-20751、 AD-20752、AD-20754、AD-20764、AD-20765、AD-20766、AD-20783、AD-20784、AD-20785、 AD-20786、AD-20790、AD-20801或其经修饰的或未经修饰的变体。

[0614] 在多种实施方式中,本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含正 义链和反义链,其中所述反义链包含与本文公开的任何RNAi活性剂或其经修饰的或未经 修饰的变体的反义链有0、1、2或3nt不同的至少15个连续的核苷酸,其中所述反义链任选 还包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多1^(或其任何范围,例如0-1、1-2、1-3、1-4拉等 等)。

[0615] 因此,在多种实施方式中,本文公开内容包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂 包含正义链和反义链,其中所述反义链包含与AD-20278、AD-20279、AD-20280、AD-20281、 AD-20282、AD-20283、AD-20303、AD-20313、AD-20315、AD-20348、AD-20362、AD-20364、 AD-20365、AD-20366、AD-20373、AD-20376、AD-20377、AD-20378、AD-20386、AD-20389、 AD-20391、AD-20392、AD-20397、AD-20398、AD-20399、AD-20401、AD-20402、AD-20403、 AD-20404、AD-20406、AD-20407、AD-20408、AD-20409、AD-20410、AD-20411、AD-20413、 AD-20422、AD-20428、AD-20434、AD-20435、AD-20437、AD-20437、AD-20438、AD-20439、 AD-20487、AD-20487、AD-20488、AD-20489、AD-20489、AD-20490、AD-20491、AD-20493、 AD-20495、AD-20502、AD-20507、AD-20513、AD-20527、AD-20535、AD-20544、AD-20545、 AD-20546、AD-20547、AD-20548、AD-20549、AD-20552、AD-20555、AD-20556、AD-20557、 AD-20558、AD-20560、AD-20560、AD-20561、AD-20562、AD-20563、AD-20564、AD-20565、 AD-20566、AD-20570、AD-20572、AD-20574、AD-20575、AD-20577、AD-20578、AD-20579、 AD-20580、AD-20597、AD-20598、AD-20625、AD-20626、AD-20627、AD-20633、AD-20634、 AD-20640、AD-20644、AD-20646、AD-20648、AD-20650、AD-20652、AD-20653、AD-20660、 AD-20661、AD-20671、AD-20693、AD-20694、AD-20700、AD-20702、AD-20707、AD-20709、 AD-20710、AD-20714、AD-20716、AD-20728、AD-20730、AD-20741、AD-20764、AD-20783、 AD-30071、AD-36969、AD-36970、AD-37718、AD-37719、AD-37720、AD-37721、AD-37722、 AD-37723、AD-37724、AD-37725、AD-37726、AD-37727、AD-37728、AD-37729、AD-37730、 AD-37731、AD-37732、AD-37733、AD-37734、AD-37735、AD-37736、AD-37737、AD-37738、 AD-37739、AD-37740、AD-37741、AD-37742或其经修饰的或未经修饰的变体的反义链有0、 I、 2或3nt不同的至少15个连续的核苷酸,其中所述反义链任选还包含0、1、2、3、4、5、6、7、 8、9或10或更多nt (或其任何范围,例如0-1、1-2、1-3、l-4nt等等)。

[0616] 在一种实施方式中,本文公开内容包含本文列出的任何一种或多种RNAi活性剂。

[0617] 另外的特定具体实施方式

[0618] 针对HSFl的某些RNAi活性剂公开于科学文献中,例如Rossi等人,2006 Cancer Res. 66 :7678-85 ;Dokladny 等人,2008 Am. J.Pathology72 :659-70; Jacobs 等人,2007 J. Biol. Chem. 282 :33412-20 ;Page 等人,2006 Mol. Biosystems 2 :627-39 ;Zhao 等人,2007 Diabetes 56 :1436-1444 和 Du 等人,2009 J. Cell. Phys. 218 :631-637 中。本发明的组合物 并不覆盖这些RNAi活性剂至它们在序列和修饰两方面均相同的程度。

[0619] 其它特定的具体实施方式包括包含这些RNAi活性剂中1、2、3、4种或更多种的组 合物。另一实施方式是包含任何单种RNAi活性剂和与其有重叠的任何其它RNAi活性剂的 组合物。另一实施方式包含不重叠并且因此靶向RNA分子的不同部分的两种、三种、四种或 更多种HSFl RNAi活性剂。当使用两种或多种RNAi活性剂时,它们可同时或依序施用。

[0620] 另一特定的具体实施方式包含下述RNAi活性剂,其中所述RNAi活性剂包含:包含 列出的任何RNAi活性剂的正义链(序列上相同)的至少15个连续核苷酸的正义链,和包 含同一 RNAi活性剂的反义链(序列上相同)的至少15个连续核苷酸的反义链。在另一实 施方式中,所述组合物包含一种、两种、三种、四种或更多此类RNAi活性剂。

[0621] 在一种实施方式中,组合物包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含下述反义 链,所述反义链包含与本文描述的RNAi活性剂的反义链通过0、1、2或3处错配而不同的至 少15个连续核苷酸。

[0622] 在一种实施方式中,组合物包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含下述反义 链,所述反义链包含与本文描述的RNAi活性剂的反义链通过0、1、2或3处错配而不同的至 少15个连续核苷酸。

[0623] 在另一实施方式中,组合物包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含下述正义 链和下述反义链,所述正义链包含与列出的RNAi活性剂之一的正义链通过0、1、2或3处错 配而不同的至少15个连续核苷酸,所述反义链包含与同一 RNAi活性剂的反义链通过0、1、 2或3处错配而不同的至少15个连续核苷酸。

[0624] "错配"在本文中定义为当两条序列被最大比对和比较时碱基序列或长度的差异。 作为非限制性的例子,如果在一条序列特定位置的碱基和另一序列相应位置的碱基之间 (例如在给定RNAi活性剂和本文列出的RNAi活性剂的序列之间)存在差异,则计为错配。 因此,例如如果一条序列的位置上具有特定碱基(例如A),而另一序列的相应位置上具有 不同碱基(例如G、C或U),则计为错配。此外,例如如果一条序列的某位置上具有碱基(例 如A)而另一序列的相应位置上没有碱基(例如该位置是包含磷酸-糖主链但是没有碱基 的无碱基核苷酸),也计为错配。任何序列中(或正义链或反义链中)的单链切口不计为 错配。因此,作为非限制性的例子,如果一条序列包含序列A-G,但是另一序列包含在A和 G之间具有单链切口的序列A-G,则不计错配。碱基修饰也不考虑为错配。如果一条序列包 含C,另一序列在相同位置包含经修饰的C (例如具有2' -修饰),将不计错配。因此,除了 对碱基的置换或改变之外对核苷酸的修饰将不构成错配。例如,在是A的核苷酸和是具有 5'修饰(例如图1中阐述的那些)和/或2' -修饰的A的核苷酸之间不发生错配。错配 的关键特征(碱基置换)是其将不能够与相反链上相应碱基发生碱基配对。此外,当计算 错配数目时不计末端突出端例如"UU"或"dTdT";计算" 15个连续核苷酸"时也不包括末端 "UU"和"dTdT"突出端。

[0625] 在这些实施方式中,错配被定义为一条序列的碱基与另一序列的碱基不匹配的位 置。

[0626] 在另一实施方式中,组合物包含1、2、3、4或更多种此类RNAi活性剂。

[0627] 在另一实施方式中,组合物包含下述RNAi活性剂,所述RNAi活性剂包含下述正义 链和下述反义链,所述正义链包含与列出的RNAi活性剂之一的正义链通过0、1、2或3处错 配而不同的至少15个连续核苷酸,所述反义链包含与同一 RNAi活性剂的反义链通过0、1、 2或3处错配而不同的至少15个连续核苷酸。

[0628] HSFl siRNA 的重叠组

[0629] 在多种实施方式中,本文公开内容涉及具有重叠序列的RNAi活性剂的组。因此, 本文公开内容包括下述RNAi活性剂的组,其中组中每种RNAi活性剂与相同组中每种其它 RNAi活性剂有至少5,6, 7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19个或更多个核苷酸的重 置。特别地,在一种实施方式中,重置为至少12nt。有重置的序列的组显不于表3A中。

[0630] 表3A显示了:例如,AD-20594和AD-20596共享正义链中ACGUCCCGGCCU序列和反 义链中AGGCCGGGACGU序列的共有技术特征。当然要注意:虽然仅显示了重叠的12-nt部 分,但很多RNAi活性剂的组将重叠超过12nt。基因内的位置也被示出。

[0631] 本文公开内容因此包括包含有重叠的RNAi活性剂的组的多种实施方式,例如, (1)包含 AD-20594 和 AD-20596 的序列的 RNAi 活性剂;(2)由 AD-20594 和 AD-20596 的序 列构成的RNAi活性剂;(3)包含AD-20594和AD-20596的序列的RNAi活性剂;(4)包含含 有AD-20594和AD-20596的序列的正义链和/或反义链的RNAi活性剂;(5)包含含有与 AD-20594和AD-20596的序列有0至3处错配的15个连续nt的正义链和/或反义链的 RNAi活性剂;(6)包含含有与AD-20594和AD-20596的序列有0至3处错配的15个连续nt 的正义链的RNAi活性剂;(7)包含含有与AD-20594和AD-20596的序列有0至3处错配的 15个连续nt的反义链的RNAi活性剂;等等。本文公开内容还包括反映表3A所述的所有 重叠 RNAi活性剂组的相似实施方式。

[0632] 本文公开了 RNAi活性剂的变体(例如包含不同修饰、帽等等),例如表2、3、9A和 9B中。在这些文本和表格中,例如,AD-20437与AD-20437. 4共享相同的序列,虽然RNAi活 性剂在其修饰、帽(例如5'和/或3'帽)等等的方面有所差异。但是,包含给定序列的 RNAi活性剂的任何重叠组也包含具有相同序列但是在修饰、帽等等方面具有不同变化的任 何其它RNAi活性剂。因此,包括AD-20437的任何重叠 RNAi活性剂组也包括AD-20437. 4 和所述相同序列的其它变体(例如具有不同修饰、帽等等)。更多实施方式提供于本文中, 并被包括在本文公开内容的每种RNAi活性剂的范围内。 实施例

[0633] 实施例1 :生物信息学

[0634] 转录本

[0635] 进行寡核苷酸设计,以鉴定靶向来自人(NCBI符号HSFl)的基因"热激转录 因子 I (HSFl) "、来自恒河猴(Macaca mulatta)、食蟹猴(Macaca fascicularis)和渥 猩(Pongo pygmaeus)的直向同源序列的siRNA。设计过程使用HSFl转录本:来自人的 NM_005526. 2 (NCBI GeneId 3297)、来自恒河猴的 ENSMMUT00000020648(来自 Ensembl)、最 初被克隆和测序的食蟹猴HSFl序列(例如SEQ ID NO :2051)和来自猩猩(orangutan)的 ENSPPYT00000022122 (来自Ensembl)。设计策略如下所示:以全部的完美19-体人/食蟹 猴HSFl匹配开始。接着,用全部完美19体人/猩猩/恒河猴匹配扩展该组。然后排除与 设计时可获得的部分食蟹猴序列具有错配的任何19体。最后,基于与Novartis shRNA文 库的同源性选择七条序列。然后得到的512条19体序列的组(全部与人HSFl基因完美匹 配)被进一步采样,用于合成和筛选。这些序列列于表1中。这些序列未经修饰。

[0636] 术语"位置"指寡核苷酸(例如19体)在转录本上的起始位置。这相对于转录本 的开头在核苷酸坐标中被测量。

[0637] 表1 HSFl 19 体

[0638] CN 105125572 A 说明书 70/154 页

Figure CN105125572AD00721

CN 105125572 A 祝明干ι 71/154 页

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Figure CN105125572AD00741
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CN 105125572 A I兄明 75/154 页

Figure CN105125572AD00771
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CN 105125572 A 说明书 79/154 页

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CN 105125572 A 況 明十ι 81/154 页

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CN 105125572 A 说明书 82/154 页

Figure CN105125572AD00841

[0651] 本领域技术人员可容易地构想对表1中序列的修饰。这些序列的实例和非限制性 的修饰被构想。这些列于表2和3中。还考虑了另外的修饰。

[0652] 对于表2和3中列出的经修饰的序列而言,在预计对内切核酸酶敏感的位点放置 了一些修饰。设计了一些修饰,以消除对SiRNA的免疫应答同时保持活性。通常,正义链被 重度修饰,反义链被轻度修饰。一些修饰是为超过一种目的而做出的。表2列出了用这些 经修饰的序列制备的RNAi活性剂。

[0653] 筛选之后,产生来自食蟹猴的全长HSFl基因序列(见上文),并用其评估人/食蟹 猴19体序列的身份。在针对在WI38和Hela细胞中的单剂量效力进行筛选的406个19体 中,375个是人和食蟹猴之间的完美匹配(例如,零错配)。

[0654] 表2 HSFl RNAi活性剂(具有经修饰的序列)

Figure CN105125572AD00842
Figure CN105125572AD00851

CN WbVZMiiZ A ^ 贝

Figure CN105125572AD00861
Figure CN105125572AD00871
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Figure CN105125572AD00891
Figure CN105125572AD00901
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CN 105125572 A 说明书 91/154 页

Figure CN105125572AD00931

CN 105125572 A 況 明十ι 92/154 页

Figure CN105125572AD00941

[0666] 本文中核苷酸序列的缩写如表2A所示

[0667] 表2A缩写

Figure CN105125572AD00942

CN 105125572 A 说明书 93/154 页

Figure CN105125572AD00951

[0670] 按照实施例2所述,制备表2列出的RNAi活性剂。

[0671] 针对表1列出的其它19体构想经修饰的序列。这些经修饰的序列列于表3中。如 表2-样,表3中的经修饰的序列是实例并且非限制性;本领域普通技术人员易于构想可选 修饰,本文其它地方也描述了另外的或可选的碱基修饰。

[0672] 表3针对另外的19体的经修饰的序列

[0673] CN 105125572 A 说明书 94/154 页

Figure CN105125572AD00961

L/1N 丄 UD 丄乙 DDi 乙 Λ * * 1 * ;7d/ IdiI 夕乂

Figure CN105125572AD00971

LlN 丄U01Z00/Z Λ 、"

Figure CN105125572AD00981

[0676] 实施例1Α·重叠的siRNA

[0677] 上文列出的siRNA有一些序列上互相重叠。下表展示了 RNAi活性剂的组的汇编, 其中组中每个成员与相同组的每个其它成员有至少12nt的重叠。正义链的重叠的12nt的 部分和反义链的重叠的12nt的部分被示出。因此,例如,AD-20296和AD-20300共享正义链 中CCAAGCUGUGGA的序列和反义链中UCCACAGCUUGG的序列的共有技术特征。当然要注意: 虽然仅显示了重叠的12-nt部分,但很多RNAi活性剂的组将重叠超过12nt。基因内的位置 也被示出。

[0678] 表 3A 重叠 siRNA

[0679] CN 105125572 A 祝明干ι 97/154 页

Figure CN105125572AD00991
Figure CN105125572AD01001
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Figure CN105125572AD01031
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CN 105125572 A 说明书 107/154 页

Figure CN105125572AD01091
Figure CN105125572AD01101
Figure CN105125572AD01111

LlN 丄U01Z00/Z Λ 、" 丄丄U/丄JA

Figure CN105125572AD01121
Figure CN105125572AD01131

CN 105125572 A 祝 明 干1 112/154 页

Figure CN105125572AD01141

CN 105125572 A 说 明 书 113/154 页

Figure CN105125572AD01151

[0696] 实施例2 siRNA的制备

[0697] 使用小规模合成来制备HSFl siRNA ;还可用中等规模和大规模合成以更大量制备 这些siRNA。

[0698] 用于初始筛选的小规模合成和纯化方法(1 μ mole规模)。

[0699] 小规模合成被用于产生siRNA。

[0700] 在 MerMade 192 合成仪(BioAutomation,Plano,Tex.)上以 1 μ mol 的规模合成 HSFl序列。

[0701] 对于列表中的所有序列而言,"endolight"化学按照如下详述来应用:

[0702] 正义链中所以嘧啶类(胞嘧啶和尿苷)含有2' -0-甲基碱基(2' 0-甲基C和 2' -0-甲基 U)。

[0703] 在反义链中,与核糖A核苷相邻的嘧啶(朝向5'位置)被其相应的2-0-甲基核 苷替换。

[0704] 正义和反义序列二者的3'端引入二碱基dTdT延伸。

[0705] 将序列文件转换为文本文件,使其兼容于载入MerMade 192合成软件。

[0706] 合成、切割和去保护:

[0707] HSFl序列的合成可利用使用亚磷酰胺化学的固体支持的寡核苷酸合成来进行。

[0708] 上述序列的合成按Ium规模在96孔板中进行。制备0.1 M浓度的核糖和2-0-甲 基亚磷酰胺溶液,乙基硫代四唑(乙腈中0. 6M)被用作为活化剂。按照标准工艺制备去封 闭溶液、氧化剂溶液和加帽溶液。

[0709] 在第一步中使用甲基胺溶液(水性和乙醇性溶液的3 : 1混合物),以及在第 二步中使用氟化物试剂,在96孔板中对合成的序列进行切割和去保护。使用丙酮:乙醇 (80 : 20)混合物来沉淀粗制的序列,将沉淀重悬于0.02M乙酸钠缓冲液中。分析来自每种 序列的样品,通过LC-MS验证身份,通过UV进行定量,通过IEX色谱对选择的样品的组测定 纯度。

[0710] 纯化和脱盐:

[0711] 在AKTA explorer纯化系统上使用Source 15Q柱来纯化HSFl平铺(tiled)序列。 纯化期间保持柱温65C。样品注射和收集在96孔(LSmL-深孔)板上进行。对应全长序列 的单个峰被收集于洗脱液中。在S印hadex G25柱上,使用AKTA纯化仪,对经纯化的序列脱 盐。使用260nm波长处的吸光度来计算脱盐的HSFl序列的浓度,通过离子交换色谱测量纯 度。

[0712] 退火:

[0713] 将经纯化、经脱盐的正义和反义单链以等摩尔量混合,并退火以形成HSFl双链 体。在IX PBS缓冲液中制备IOuM浓度的双链体,并通过毛细凝胶电泳针对纯度加以测试。

[0714] 中等规模合成和纯化(1-50 μ mol)

[0715] 也可用中等规模的合成来产生siRNA。

[0716] 通过固相合成来制备规模在1至50 μ mol之间的单链RNA,其中使用ABI DNA/RNA 合成仪 394(Applied Biosystems)和受控有孔玻璃(CPG,500羞,载样 80-100 μmol/g) (购自Prime Synthesis(Aston,PA))作为固体支持物。对于更大的规模,使用来自Glen Research Corp.的空合成柱(ΙΟμ mol)和大amidite(80mL)和试剂瓶(450mL)。分别利用 相应的亚磷酰胺和2' -〇-甲基亚磷酰胺(ChemGenes,Wilmington,MA),通过固相合成产生 RNA和含有2'-0-甲基核苷酸的RNA。使用标准核苷亚磷酰胺化学,例如Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry,Beaucage,S.L.等人(Edrs·),John Wiley & Sons,Inc.,New York,NY,USA中描述的,将这些构建块引入至寡核糖核苷酸链的序列内选择的位点。使用 吡啶中0.1 M DDTT(AM Chemicals,0ceanside,CA)的溶液,引入硫代磷酸键。其它辅助试剂 从 Glen Research Corp. (Sterling,VA)获得。

[0717] 按照已经建立的流程,通过阴离子交换HPLC对粗制寡核糖核苷酸进行去保护和 纯化。在260nm波长处以分光光度方式测定产率和浓度。通过在退火缓冲液(通常,磷酸 缓冲的盐溶液,PBS,Ambion,Applied Biosystems,Austin,TX)中将互补的链的等摩尔溶 液(以想要的浓度)混合起来,产生双链RNA。然后在85-90°C的水浴中对混合物加热5分 钟,在3-4小时的时间内冷却至室温。RNA双链体被贮藏于-20 °C,直至使用。

[0718] 实施例3 HSFl RNAi活性剂

[0719] HSFl SiRNA被提供于表2中,并且是按照实施例2所述制备的。这些RNAi活性剂 的活性列于表4中。

[0720] 表4显示了在用IOnM指出的siRNA处理过的大约20, 000WI38或HeLa细胞中HSFl 表达的残余水平。表达测量在转染后24小时进行。使用RT-qRT[实时定量逆转录]来测 量表达。WI38或HeLa细胞中,残余活性被归一化至经Luc siRNA转染的细胞中的HSFl表 达,并且1.000000 = 100%的基因表达,相对于对照、或没有基因敲低或0%基因敲低;以 及〇.〇〇〇〇〇〇 = 0 %基因表达,或完全或100 %基因敲低。低的数字(更接近零)表示更有 效的siRNA。例如,用于siRNA AD20303的"WI38"柱显示"0. 056232",这表示IOnM时残余 基因活性为5. 6%,或94. 4%的基因敲低。在HeLa柱中,"0. 098871432"表示IOnM时大约 9. 9 %的残余活性,或90. 1 %的基因敲低。

[0721] 进行对siRNA的系列稀释,拟合数据曲线,以计算将基因表达敲低50%所需要的 剂量(浓度)("EC50",或估计将基因表达降低50%的有效浓度)。"EC50平均值"表示预 计实现50%基因敲低时的siRNA的量(以nM表示);给出的数字是两次实验的平均值。较 低的数字表示更有效的siRNA。空白格表示在该特定测试中没有测试具有该序列的siRNA, 或者此类数据没有包括在本文中。

[0722] 在表4中,后缀"_bl"、"_b2"等等表示批号。因此"bl"表示来自批次l,"b2"来 自批次2,等等。因此,例如,"AD-20489-bl "、"AD-20489-b2"和"AD-20489"全部具有相同 的序列并且化学上相同。

[0723] 表4 HSFl RNAi活性剂的活性

[0724]

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LlN 丄U01Z00/Z Λ 、" 丄丄3/丄JA

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CN 105125572 A 祝明干ι 124/154 页

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[0739] *其中< 1E-05表示小于1x10 5

[0740] 实施例3A用于体外筛选的方法

[0741] 细胞培养和转染

[0742] 在37°C、在5% CO2的大气压下、在补充有10% FBS、链霉素和谷氨酰胺(ATCC) 的RPMI或EMEM (ATCC)中,在通过胰蛋白酶消化从板中释放之前,培养WI-38或HeLa (ATCC, Manassas,VA)至接近汇合。通过向96孔板中添加5 μ 1的0pti_MEM(至每孔5 μ I siRNA双 链体)以及每孔 lOul Opti-MEM 加0·2μ1 Lipofectamine RNAiMax(Invitrogen,Carlsbad CA. cat# 13778-150),并在室温下孵育15分钟,来进行逆转染。然后加入含有2x104WI-38 细胞或2. OxlO4Hela细胞的没有抗生素的80 μ 1完全生长培养基。在RNA纯化之前对细胞 孵育24小时。针对每种HSFl siRNA,在针对WI-38细胞而言IOnM最终双链体浓度以及对 HeLa细胞而言IOnM和0.1 nM的最终双链体浓度下,进行实验。在IOnM至0. 00005M的浓度 范围上,评估IOnM和0.1 nM筛选中显示出强沉默的siRNA的亚组,以测定它们的IC50。

[0743] 使用 MagMAX-96 总 RNA分离试剂盒(Applied Biosystem,Foster City CA,part# : AM1830)进行总RNA分离。

[0744] 在140 μ 1裂解/结合溶液中收获和裂解细胞,然后使用Eppendorf热混合仪(整 个方法中混合速度相同)以850rpm进行1分钟的混合。向细胞裂解物中加入20微升磁珠 和裂解/结合增强剂混合物。使用磁座(magnetic stand)捕获磁珠,在不扰动珠子的情况 下移出上清液。移出上清液后,用洗涤溶液1(加入了异丙醇)洗磁珠,并混合1分钟。再 次捕获珠子并移出上清液。然后用150 μ 1洗涤溶液2 (加入了乙醇)洗珠子,捕获,并移 出上清液。然后向珠子中加入50ul DNase混合物(MagMax turbo Dnase缓冲液和Turbo DNase),并对它们混合10至15分钟。混合后,加入100 μ I RNA再结合溶液,并混合3分钟。 移出上清液,再用150 μ 1洗涤溶液2洗磁珠,并混合1分钟,完全移出上清液。在用50 μ 1 水洗脱RNA之前,对磁珠混合2分钟至干。

[0745] 使用 ABI 大容量 cDNA 逆转录试剂盒(Applied Biosystems,Cat #4368813)进行 cDNA合成,这按下文所述来进行:每反应2 μ I 10X缓冲液、0. 8 μ I 25X dNTPs、2 μ 1随机 弓丨物、1 μ 1逆转录酶、1 μ I RNase抑制剂和3· 2 μ I H2O的主混合物被加入至10 μ 1总RNA 中。使用Bio-Rad C-1000或S-1000热循环仪(Hercules,CA)通过下述步骤来产生cDNA : 25°C 10 分钟,37°C 120 分钟,85°C 5 秒,4°C保持。

[0746] 实时PCR按照下文所述来进行:将2μ1 cDNA加入LightCycler 480 384孔板 (Roche cat # 0472974001)中总共 10 μ 1 的每孔含有0· 5 μ I GAPDH TaqMan探针(Applied Biosystems Cat # 4326317E)或 18S TaqMan探针(Applied Biosystems Cat M319413E)、 0·5μ I HSFl TaqMan 探针(Applied Biosystems cat # HS00232134M1)和 5μ I Roche 探 针的主混合物(Roche Cat#0472974001)中。实时 PCR 在 LightCycler 480 实时 PCR 机 (Roche)中进行。每种双链体以至少两次独立转染来测试。以两次重复来测定每种转染。

[0747] 使用Λ Δ Ct方法(Livak等人2001)来分析实时数据。每种样品被归一化至GAPDH 表达,相对于用非靶向双链体AD-1955转染的细胞,来评估敲低。使用XL拟合中的4参数拟 合模型来定义 IC50。见例如 Kenneth 和 Schmittge. Methods 25 :4, 2001 年 12 月,402-408。

[0748] 实施例 4 HSFl siRNA

[0749] 如表5所示,显示了 101种HSFl RNAi活性剂的亚组。

[0750] 在HeLa和WI-38细胞系两者中,在IOnM时,101种选择的双链体中有很多具有> 80%的基因敲低(KD)。101中还包括在单种细胞系中具有>80% KD的双链体,前提是两 种细胞系的平均KD > 75% KD。该组还包括在0.1 nM筛选中在WI-38中具有> 50% KD的 所有双链体。这些具有特定兴趣的101种HSFl siRNA被显示于表2中。该表还展示了当 使用IOnM或0.1 nM siRNA时在HeLa和WI-38细胞中的敲低(KD)。1. 000 = 100%基因表 达,或没有基因敲低或〇%基因敲低;以及〇.〇〇〇 = 〇%基因表达,或完全基因敲低或100% 基因敲低。例如,对于AD-20303,"HeLa 10nM"柱显示"0. 099",这表示在这些细胞中于该 浓度下RNAi活性剂将基因表达降低至9. 9%或展现出90. 1 %的基因敲低。在WI-38细胞 中,在IOnM的浓度下,该RNAi活性剂展现出5. 6%的残余基因活性或94. 4%的基因敲低。

[0751] 表5 HSFl RNAi活性剂-敲低数据

[0752] CN 105125572 A 说明书 132/154 页

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CN WbYZMrz A ^ u 贝

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[0755] 实施例5对HSFl RNAi活性剂的HeLa细胞筛选

[0756] 在HeLa细胞中以剂量应答筛选来筛选表2中的101种双链体。该筛选的目的是 测定EC50 (能将基因表达降低50%的RNAi活性剂最小剂量)。

[0757] 使用包含IOnM和1X10 5nM之间的12种浓度的系列稀释液。使用Lipofectamine RNAiMax (Zhao 等人,2008 Mol. Biotech. 40 :19-26)将 siRNA 双链体转染进细胞。24 小时 后,分离总RNA,并用于使用随机引物的cDNA合成。用10_20ng总cDNA进行TaqMan测定 (Applied Biosystems,Foster City,California)。每种双链体以两次重复进行测定。数 据表示为较之非靶向的对照AD-1955 (其不与HSFl结合)的平均倍数改变。AD1955是靶向 萤火虫荧光素酶的siRNA,其在筛选测定中被用作为阴性对照siRNA。结果示于表6.

[0758] 表 6 EC50 数据 *

[0759] CN 105125572 A m "P 135/154 贞

Figure CN105125572AD01371

CN 105125572 A 況 明十ι 136/154 页

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[0762] * 其中 "< 1E-05" 表示小于 1x10 5。

[0763] 实施例6对HSFl RNAi活性剂的额外筛选

[0764] 进行表4和表5中报道的测定之后,确定:某些寡核苷酸经历了浓缩假象 (concentration artifacts),现认为这是含有寡核苷酸的板不完全解冻导致的。随后对两 大数据组(与靶无关)的分析显示,任何此类浓缩假象将不会比正常实验波动更大地改变 测定结果。此外,这些浓缩假象不可能实质上影响我们关于先前选择(lead selection)的 结论。

[0765] 下表7中展示了对上文所述的HSFl siRNA的额外筛选数据。

[0766] HSFl 再筛选

[0767] 对HSFl siRNA进行再筛选,以解决当这些双链体的单条链最初退火时双链体浓度 中发现的不一致。在两种siRNA浓度(IOnM和0.1 nM)时对414种siRNA进行再退火和筛 选。在两次独立实验中,于两者剂量下,对所有双链体进行筛选。

[0768] 体外筛选:

[0769] 细胞培养和转染

[0770] 在37°C、在5% CO2的大气压下、在补充有10% FBS、链霉素和谷氨酰胺(ATCC) 的EMEM(ATCC)中,在通过胰蛋白酶消化从板中释放之前,培养HeLa (ATCC,Manassas,VA) 细胞至接近汇合。通过向96孔板中每孔添加5 μ 1的200nM或2nM SiRNA双链体以及每 孔 15μ1 Opti-ΜΕΜ 加 0·2μ1 Lipofectamine RNAiMax (Invitrogen,Carlsbad CA. cat # 13778-150),并在室温下孵育15分钟,来进行逆转染。然后加入含有2. OxlO4Hela细胞的 没有抗生素的80 μ 1完全生长培养基,导致最终双链体浓度为IOnM或0.1 nM。在RNA纯化 之前对细胞孵育24小时。

[0771] 使用 Dynobeads (Invitrogen,Carlsbad CA. cat # 610-12)进行 mRNA 分离

[0772] 在150 μ 1裂解缓冲液中收获和裂解细胞,然后使用平台摇床(整个方法中混合速 度相同)以850rpm进行5分钟的混合。向细胞裂解物中加入10微升磁珠(之前已在70ul 裂解缓冲液中洗过)并混合5分钟。使用磁座捕获磁珠,在不扰动珠子的情况下移出上清 液。通过在磁座上捕获珠子后加入150ul缓冲液、振荡1分钟以及弃置上清液,用洗涤缓冲 液A对磁珠/RNA洗两次。然后用150 μ 1洗涤缓冲液B洗珠子,摇动1分钟,捕获磁珠座, 移出上清液。然后通过振荡1分钟、在磁性环座上捕获以及弃置洗脱缓冲液,用150ul洗脱 缓冲液来洗Dynobaed/mRNA混合物。通过在70°C加入50ul洗脱缓冲液以及振荡4分钟来 洗脱mRNA。混合后,将板放在磁珠座上2分钟以重新捕获珠子,之后将含有洗脱的RNA的上 清液移至新的板。

[0773] 使用ABI大容量cDNA逆转录试剂盒进行cDNA合成

[0774] 每反应ΙμL 10X缓冲液、0. 4μ1 25X dNTPs、lyl随机引物、0. 5μ1逆转录酶、 0· 5 μ I RNase抑制剂和L 6 μ I H2O的主混合物被加入至5 μ 1总RNA中。使用Bio-Rad C-1000或S-1000热循环仪(Hercules,CA)通过下述步骤来产生cDNA :25°C 10分钟, 37°C 120 分钟,85°C 5 秒,4°C保持。

[0775] 实时 PCR :将 2 μ I cDNA 加入 LightCycler 480 384 孔板(Roche cat # 0472974001)中总共 10 μ 1 的每孔含有 0.5ul GAPDH TaqMan 探针(Applied Biosystems Cat # 4326317E)或 18S TaqMan 探针(Applied Biosystems Cat #4319413Ε)、0·5μ1 HSFl TaqMan 探针(Applied Biosystems cat # HS00232134 Ml)和 5μ I Roche 探针主混 合物(Roche Cat#04887301001)的主混合物中。实时 PCR 在 LightCycler 480 实时 PCR 机 (Roche)中进行。每种双链体以至少两次独立转染来测试(称为筛选1和筛选2)。以两次 重复来测定每种转染。对于筛选1和筛选2而言,使用GAPDH进行qPCR用于归一化。对于 筛选1,使用18S将qPCR重复第二次用于归一化。

[0776] 使用Λ Δ Ct方法(Livak等人2001)来分析实时数据。每种样品被归一化至GAPDH 或18S表达,相对于用非靶向双链体AD-1955转染的细胞,来评估敲低。较高的值代表较少 的敲低。参考文南犬:Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2-AACT Method. Kenneth J.Livak_2_Thomas D.Schmittge. Methods 25:4, 2001 年 12 月, 402-408.

[0777] 如下表7所示,使用GAPDH和18s作为对照,对某些HSFl siRNA重筛选两次(筛 选1和2)。该表还包括针对若干HSFl siRNA的筛选数据,但没有上文给出的数据。数字代 表残余HSFl基因活性,以GAPDH或18s作为对照参照基因。因此,例如,对于AD-20278-b2 而言,在" IOmM筛选I (GAPDH) "处的"0. 08 "表示8 %残余HSFl基因活性或92 %的基因敲 低。

[0778] 表 7 对 HSFl siRNA 的额外筛选(IOnM 和 0· InM)

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CN 105125572 A 況 明十ι 141/154 页

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CN 105125572 A 说明书 144/154 页

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CN WbYZMrz A ^ u 贝

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[0790] 实施例7对RNAi活性剂的体内和PBMC分析

[0791] 在PBMC(外周血单核细胞)测定中分析选择的针对HSFl的RNAi活性剂,以评估 免疫原性;以及在裸鼠中的Hep3B (原发性肝异种移植)皮下肿瘤中体内分析。在脂类纳米 颗粒中体内递送RNAi活性剂。递送5mg/kg或3mg/kg的单次剂量,在给剂量后72小时处 死动物并收集组织。结果示于下表8中。

[0792] 双链体ID表示针对RNAi活性剂的多种名称;AD-XXXXX/AD-XXXXX =示出的相 同siRNA核心序列的经dTdT/uu修饰的版本。(XXXXX)表示针对uu序列的双链体ID。靶 Seq(序列)和在人和食蟹猴(食蟹猴)HSFl基因中的位置被给出;"na"表示给定的序列 不在食蟹猴的基因中。PBMC结果(IFN-a,TNF-α )表示给出的RNAi是否引发免疫应答, 如测量的TNF-α或IFN-α的诱导所示。"安静"表示给定的RNAi活性剂并不引发免疫应 答。在标记为"体内H印3Β"的柱内,数字表示HSFl表达的百分比敲低。

[0793] 表8对RNAi活性剂的体内和PBMC分析

[0794] LlN 丄U01Z00/Z Λ 、" 丄OU/丄JA

Figure CN105125572AD01521

[0795] 因此,如上表所示,若干RNAi活性剂在PBMC测定中不引发免疫应答(表示 为"安静")。若干1?熟丨活性剂还引发至少40%的批?1表达敲低。40-20403/30070、 AD-20437/AD-36969、AD-20438、AD-20439、AD-20487/AD-30071(544)、AD-20548、AD-20560/ AD-37739 (733)、AD-20562 (735)、AD-20564/AD-36971、AD-20627 (758)、AD-20660 (825)、 AD-20707 (1330)和 AD-20730 (1372)被选用于领导优化。

[0796] 实施例8 5'-端修饰

[0797] 该实施例描述了对多种化学加以筛选,以鉴定出相对亲本保留或改进了活性并且 潜在更稳定的siRNA。

[0798] 使用两阶段手段。第一阶段涉及鉴定用于S (正义)链失活的最优5'端帽。使用 的端帽是:反向dT、L-糖和C-6-烷基。这些阐释于图1中。针对其在反义(AS)的5' -端 封闭siRNA活性但在正义链的5'-端保持活性的能力,使用4种强效的HSFl siRNA用于评 估,对每种帽加以测试。测定HeLa细胞中的IC50 (EC50)。

[0799] 在第二阶段,在第一阶段发现的最佳5' -端帽的范畴内,在更大的HSFl siRNA组 上测试多种化学基序。

[0800] S (正义)修饰包括下述这些:

[0801] Endolight,其中所有嘧啶类修饰至2' -Ome,具有2' -OMe uu突出端将,以及

[0802] 所有核糖核苷酸都具有2 ' -OMe uu突出端来被使用。

[0803] AS修饰包括:

[0804] 用2' -Ome修饰所有嘧啶类,具有2' -OMe uu突出端,

[0805] 在具有2' -OMe uu突出端的5个3' -末端碱基上,Endolight+2' -OMe

[0806] 仅在具有2'-016 1111突出端的5个3'-末端碱基的嘧啶类上411(1〇1丨81^+2'-016。

[0807] 表9A和表9B提供了本发明范围内考虑的5' -端修饰的例子。如表中所示,IC50 I和IC50 II表示对IC50(EC50)的两次测定的结果。结果指示了 nM浓度。

[0808] 表9A反义修饰

[0809]

Figure CN105125572AD01541
Figure CN105125572AD01551

[0812] 注意:在上面的表中,诸如.I、. 2、. 3、. 4等等后缀表不给定的RNAi活性剂的变 体。因此,例如AD-20437. 4和AD-20437具有相同序列,虽然它们在修饰、帽等等方面可能 不同。因此,任何提到(包括对与之相关的多种实施方式的描述)AD-20437. 4 ;AD-20487. 7 ; AD-20489. 2 ;AD-20560. 4 ;AD-37718. I ;AD-37721. I ;AD-37724. I ;AD-37727. I ; AD-37730.1 ;AD-37733. I ;AD-37736. I ;AD-37740.1 ;AD-37719. I ;AD-37722. I ; AD-37725. I ;AD-37728. I ;AD-30071. 2 ;AD-36969. 2 ;AD-36970. 2 ;AD-37718. I ; AD-37719. I ;AD-37720.1 ;AD-37721. I ;AD-37722. I ;AD-37723. I ;AD-37724. I ; AD-37725. I ;AD-37726. I ;AD-37727. I ;AD-37728. I ;AD-37729. I ;AD-37730.1 ; AD-37731. I ;AD-37732. I ;AD-37733. I ;AD-37734. I ;AD-37735. I ;AD-37736. I ; AD-37737. I ;AD-37738. I ;AD-37739. I ;AD-37740.1 ;AD-37741. I ;AD-37742. I ;也分别表 示提到:AD-20437 ;AD-20487 ;AD-20489. 2;AD-20560 ;AD-37718 ;AD-37721 ;AD-37724 ; AD-37727 ;AD-37730 ;AD-37733 ;AD-37736 ;AD-37740 ;AD-37719 ;AD-37722 ;AD-37725 ; AD-37728 ;AD-30071 ;AD-36969 ;AD-36970 ;AD-37718 ;AD-37719 ;AD-37720 ;AD-37721 ; AD-37722 ;AD-37723 ;AD-37724 ;AD-37725 ;AD-37726 ;AD-37727 ;AD-37728 ;AD-37729 ; AD-37730 ;AD-37731 ;AD-37732;AD-37733;AD-37734 ;AD-37735 ;AD-37736 ;AD-37737 ; AD-37738 ;AD-37739 ;AD-37740 ;AD-37741 和 AD-37742。因此,对包含 AD-20437 的重叠序 列的siRNA的任何分组也包含AD-20437. 4。对包含任何变体序列的其它分组也是同样;因 此,给定序列的重叠 siRNA的任何分组也包含含有该序列的变体(例如具有修饰和/或帽) 的 siRNA。

[0813] 发现:当反义链被修饰时,反向dT(idT)和L-糖将活性降低了大约10至100倍; 当这些修饰处于正义链的5'端时影响最小。

[0814] 除非另有定义,本文中使用的技术和科学术语具有与熟悉本文公开内容所属领域 的专家通常所理解的相同的含义。

[0815] 除非另有指明,没有详细地特别描述的所有方法、步骤、技术和操作可以并且已经 按照本身已知的方式进行,这将是技术人员所清楚的。再次例如,可参考本文提到的标准手 册和一般背景技术以及其中提到的进一步的参考文献。除非另有指明,本文提到的参考文 献每种都通过引用整体并入本文。

[0816] 本发明的权利要求是非限制性的,并且提供于下文中。

[0817] 虽然本文中已经详细公开了特定的实施方式和权利要求,但这仅是出于阐述的目 的以举例方式来进行的,这不意欲对所附权利要求的范围或任何相应的未来申请的权利要 求主题的范围加以限制。特别地,发明人考虑可对本文公开内容进行多种取代、变化和改 良,而不偏离权利要求所定义的本文公开内容的范围和宗旨。我们相信,对核酸起始材料、 目的克隆或文库类型的选择是本领域普通技术人员在知晓本文描述的实施方式的基础上 能常规进行的。其它方面、优点和改良被认为在下述权利要求的范围内。使用不超过常规 的实验,本领域技术人员将认识到或能够确认本文所述的本发明的特别的实施方式的很多 等同形式。此类等同形式意欲为下述权利要求所包括。在今后提交的相应申请中重写权利 要求的范围可能是由于多个国家专利法的限制,而不应当被理解为放弃权利要求保护的主 题。

Claims (10)

1. 包含针对HSFl的RNAi活性剂的组合物,所述RNAi活性剂包含第一链和第二链,其 中所述第一链的序列包含SEQ ID勵:638、639、681、781、782、783、784或785的序列,并且 其中所述第一和/或第二链是修饰的或未修饰的,并且其中所述第一链和/或第二链长度 均为大约30个核苷酸或更少核苷酸。
2. 权利要求1的组合物,其中所述组合物还包含针对HSFl的第二RNAi活性剂。
3. 权利要求1的组合物,其中所述第一链和/或第二链长度均为大约19至大约23个 核苷酸。
4. 权利要求1-3的任一项的组合物,其中所述RNAi活性剂包含修饰的糖主链、硫代磷 酸键或2' -修饰的核苷酸。
5. 权利要求1-4的任一项的组合物,其中所述RNAi活性剂包含选自下组的2' -修 饰,所述组由2' -脱氧、2' -脱氧_2' -氣代、2' -〇-甲基、2' -〇-甲氧基乙基(2' -0-M0E)、 2' _〇_氛基丙基(2' -0~AP)、2' 二甲基氛基乙基(2' UMAOE)、2' 二甲基氛基丙 基(2' -O-DMAP)、2' -O-二甲基氨基乙氧基乙基(2' -O-DMAEOE)和2' -O-N-甲基乙酰氨基 (2'-0-NMA)构成。
6. 权利要求1-5中任一项的组合物,其中所述RNAi活性剂包含平端和/或具有1至4 个未配对核苷酸的突出端。
7. 权利要求1-6中任一项的组合物,其中所述RNAi活性剂与一种或多种诊断性化合 物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分、天然或非常见核苷碱基、亲脂性分子、胆固醇、 脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基、无 羁萜、无羁萜-3P-醇-衍生的石胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖、壳多 糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、 菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、聚 胺、肽模拟物和/或转铁蛋白连接。
8. 权利要求1-7的任一项的组合物,其中第二链包含SEQ ID NO: 126、127、169、269、 270、271、272 或 273 的序列。
9. 权利要求1-8的任一项的组合物,其还包含额外的癌症治疗。
10. 前述权利要求任一项的组合物用于制备药物的用途,所述药物用于减少HSFl在个 体中的表达。
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