JP5976719B2 - 診断法および治療法ならびにそれに有用な薬剤 - Google Patents
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Description
本発明は一般に、対象における新生物細胞死の量をスクリーニングする方法に関する。より詳細には、本発明は、対象または対象由来の生物試料中の死細胞によるテロメラーゼタンパク質および/または遺伝子の発現量を検出することによる、新生物細胞死の量をスクリーニングする方法を提供する。本発明の方法は、新生物状態の評価、そのような状態の進行のモニタリング、治療薬または治療計画の有効性の評価、および対象がより進行した疾患状態に進行するかまたは寛解状態に入る可能性の予測を含むがこれらに限定されない一連の用途に有用である。本発明はまた、テロメラーゼタンパク質および/または核酸分子を検出するのに有用な診断薬も提供する。
本明細書において本発明者らが参照する出版物の書誌的詳細は、本記載の末尾にアルファベット順に収載する。
本明細書を通して、特に断りのない限り、「含む(comprise)」という語ならびに「含む(comprises)」および「含む(comprising)」などの変化形は、記載の整数もしくは段階または整数もしくは段階の群を含むことを意味するが、任意の他の整数もしくは段階または整数もしくは段階の群を排除することを意味するものではないと理解される。
本発明は、死滅しかけているおよび死滅した新生物細胞においてテロメラーゼ発現が検出され得る、より詳細には、例えばDNA損傷試薬などの細胞毒性薬により新生物細胞死を誘導するとテロメラーゼ発現が増加するという驚くべき知見を一部前提とする。したがって、死細胞によるテロメラーゼ発現の、正常な量に対する量の増加の検出により、死滅新生物細胞量を定量的および/または半定量的に評価するための簡便でかつ正確な機構が提供される。したがってこれらの知見により、特に新生物状態の進行をモニタリングする、または治療薬もしくは治療計画の有効性を評価する状況において、哺乳動物における新生物状態を評価するための高感度でかつ正確な手段が提供される。また、新生物細胞の部位に対して治療処置を標的化し、バイスタンダー殺傷機構を介して新生物細胞の死滅を達成する高度に特異的な手段が促進される。
(a) レポーター分子の抗体との直接的な結合;
(b) レポーター分子の抗体との間接的な結合;すなわち、レポーター分子と、後に抗体に結合させる別のアッセイ試薬との結合;および
(c) 抗体のその後の反応産物との結合。
材料および方法
ヒト末梢血単核細胞およびヒトJurkat T細胞白血病細胞のインビトロ培養およびアポトーシス誘導
末梢血単核細胞(PBMC)は、南オーストラリア赤十字血液バンクから入手した廃棄単位の全血のバフィーコートから調製した。最初に、Lymphoprep(Axis-Shield、英国、ダンディー)にて密度勾配遠心分離によりPBMCを分離し、速度制御フリーザーを用いて一定分量で凍結した。続いて、一定分量の細胞を融解し、Lymphoprepで再度精製して生細胞を得た。PBMCを、10%ウシ胎仔血清(FBS)、50 U/mLペニシリン、および50μg/mL硫酸ストレプトマイシ(JRH Biosciences、米国、カンザス州、レネックサ)を添加したRPMIで72時間培養した。培養物の半量をT細胞マイトジェン、コンカナバリンA(ConA)(Sigma、米国、ミズーリ州、セントルイス)、10μg/mlで処理し、培養物の半量は未処理とした。培養後、細胞をLymphoprepで再度精製して死細胞を除去し、1μMスタウロスポリン(STS)(Sigma)と共にさらに24時間培養してアポトーシスの状態にした。Jurkat細胞は、10% FCS、50 U/mLペニシリン、および50μg/mL硫酸ストレプトマイシン、ならびに0.5μM STSを添加したRMPI中で24時間培養して、アポトーシスの状態にした。PBMCに由来する初代単球およびリンパ球細胞を試験するため、Lymphoprep(登録商標)分離手順を用いてまずPBMCを精製した。次いで、5% FCSを添加したRPMI-1640中でPBMCを一晩培養して、懸濁細胞(主にTリンパ球)から接着細胞(主に単球細胞)を分離した。懸濁細胞を回収し、5% FCSを添加したRPMI-1640中、1μM STSの存在化または非存在下においてインキュベートし、Jurkat細胞も同様に0.5μM STSの存在下または非存在下においてインキュベートした。接着単球細胞およびU937細胞(単球性リンパ腫細胞株)は、5% FCSを添加したRPMI-1640中、それぞれ1μMおよび0.5μM STSの存在下または非存在下においてインキュベートした。24時間後および48時間後に未処理(対照)およびSTS処理細胞を回収し、対照細胞は、2%パラホルムアルデヒド溶液を使用し、次いで-20℃のメタノールで1:10希釈して5分間置くことにより透過処理した。
JurkatおよびRaji細胞株は、10% FCS、50 U/mLペニシリン、および50μg/mL硫酸ストレプトマイシンを添加したRPMIで培養し、U2OSおよびHeLa細胞株は、10% FCS、50 U/mLペニシリン、および50μg/mL硫酸ストレプトマイシン(JRH Laboratories)を添加したDMEMで培養した。細胞株を以下のように種々の細胞毒性薬で24時間または48時間処理した:JurkatおよびRaji細胞はエトポシド、20μg/mLで;HeLaおよびU2OS細胞はシスプラチン、1μg/mLおよびビンクリスチン、0.1μg/mLで;Jurkat、HeLa、およびU2OS細胞は0.5μM STSで、ならびにRaji細胞は2μM STSで処理した。処理細胞をヨウ化プロピジウム(PI)(Sigma) 0.5μg/mL、ならびにFITC結合Sal5もしくは3B9 mAb、またはマウス抗TRF2 mAb(クローン36、Becton-Dickinson)および次の二次抗体、抗マウスFITC(Chemicon、米国、カリフォルニア州、テメキュラ)、またはラット抗hTERT mAb(クローン36-10、Alexis Biochemicals)および次の二次抗体、抗ラットFITC(Caltag、米国、カリフォルニア州、バーリンゲーム)で染色した。精製マウスIgGまたはラットIgG(Institute of Medical and Veterinary Science、オーストラリア、アデレード)を、それぞれTRF2およびhTERT染色の陰性対照として使用した。おそらくは赤血球細胞から放射される自己蛍光の存在によって妨害されたと考えられる全血染色において後に使用する目的で、hTERTの検出方法をさらに改良するため、抗hTERTモノクローナル抗体クローン36-10を、355 nmで励起されて420〜460 nmで最大放射するAlexaFluor350(Molecular Probes)と直接結合した。抗hTERT-Alexa350は、488 nmで励起されて560〜590 nmで放射するPEと結合したEpCAMモノクローナル抗体(BD Biosciences)、および560 nmで励起されて近赤外領域(>650 nm)で最大放射するDNA結合色素TOPRO3(Molecular Probes)と併用した。これらの分子はそれぞれ、ハイスループットLSR-IIフローサイトメーター(BD Biosciences)において異なるレーザーを用いて励起され、放射は別個のフィルターを用いて回収されるため、蛍光色素のこの併用はシグナルの補正を必要としない。
抗La(モノクローナル抗体ハイブリドーマ3B9)結合を、主にT細胞であるアポトーシス性のPBMCとヒトT細胞白血病株であるアポトーシス性のJurkat細胞とで比較した。蛍光強度はアポトーシス性PBMCよりもアポトーシス性Jurkat細胞で高いことが明らかであり(図3)、Laが死滅したおよび死滅しかけている腫瘍細胞においてより高く発現されることが示唆される。
材料および方法
インビトロにおける癌細胞株の細胞毒性薬処理
H69細胞を、5%ウシ胎仔血清(FCS)および400μg/mLエトポシドを含むRPMI-1640で培養した。24時間、48時間、および72時間の時点で一定分量を採取し、リン酸緩衝食塩水(PBS)で洗浄し、次いで細胞蛍光図式解析のために染色した。
ヘパリン処理チューブ中に回収した血液試料(2.5 mL)を、CELLection(商標) Epithelial Enrichキットを用いて製造業者の指示書通りに(Dynal(登録商標) Biotech、Invitrogen Corp.、米国)、BerEP4上皮細胞接着分子(EpCAM)の発現に関して濃縮した。簡潔に説明すると、BerEP4ビーズ250μLを血液試料と室温で30分間混合した。ビーズをDynal(登録商標)磁石に結合させ、PBSで5回洗浄した。ビーズに結合した細胞を、0.1%ウシ血清アルブミン(BSA)およびデオキシリボヌクレアーゼI(DNase I)を含むPBSを用いて製造業者によって記載されている通りに、磁石から遊離させた。遊離した細胞を新たなチューブに移し、遠心分離し、PBSで洗浄した。単離された細胞上に残存しているマウスBerEP4抗体をブロッキングするため、試料を抗マウスIgG(2μg/mL)と共に室温で30分間インキュベートし、次いでPBSで洗浄し、その後染色してフローサイトメトリーにより解析した。
赤血球細胞溶解緩衝液(8 g/L塩化アンモニウムおよび1.2 g/L Tris-HCl、pH 7.2)で血液を1:10希釈し、希釈試料を室温で15分間常に回転させて、ヘパリン処理した末梢血試料(2.5 mL)中の赤血球を溶解させた。次いで、細胞を3,000 xgで10分間ペレット化してPBSで洗浄し、その後染色してフローサイトメトリーにより解析した。
細胞を50μg/mL濃度のモノクローナル抗体(mAb):ラット抗hTERT mAb(クローン36-10;Alexis Biochemicals)であるAPOTEL(商標)、または特異性に関連のない適合アイソタイプ(IgG2aκ)対照mAbと共に室温(RT)で30分間インキュベートした。細胞をPBSで洗浄し、2μg/mL濃度のビオチン結合抗ラットIgG抗体(Fab')2断片と共に室温で30分間インキュベートした。細胞を洗浄し、2μg/mL濃度のストレプトアビジン-PEまたはストレプトアビジン-FITCと共に室温で15分間インキュベートした。最後に、細胞をPBSで洗浄し、2μg/mL 7-アミノ-アクチノマイシンD(7-ADD)と共に室温で15分間インキュベートした後に、フローサイトメトリー(FACScan、Becton-Dickinson)により解析した。
GraphPad Prism v.4.0ソフトウェアを用いて統計解析を行った。
ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)を特異的に認識するモノクローナル抗体(mAb)の能力を、細胞毒性薬を用いて細胞死を誘導した後に、インビトロおよびインビボで小細胞肺癌(SCLC)の死細胞に結合する能力に関して試験した。最初に、上皮細胞接着分子(EpCAM)のBerEP4マーカーを発現するSCLC細胞株H69について試験した。H69はインビトロで培養し、エトポシドで処理して細胞死を誘導した。癌細胞の生存能の消失は、細胞がDNA結合色素7-AADと結合したことから、細胞毒性薬処理の24時間後に明らかとなった(図12A)。hTERT特異的モノクローナル抗体(mAb)であるAPOTEL(商標)の死滅H69細胞に対する結合は、細胞毒性薬処理の24時間、48時間、および72時間後に認められたが、特異的なAPOTEL(商標)結合は処理の48時間後に有意に増加した(図1B)。
APOTEL(商標)試験は、単独での使用に加えて、CellSearch(登録商標)(Veridex、米国、ニュージャージー州、ウォレン)と称される循環腫瘍細胞(CTC)を計数する免疫磁気ビーズに基づく方法である、循環腫瘍細胞(CTC)を検出するための唯一FDAに認可されている技術と有効に統合することができる。このシステムは、最初にBerEP4特異的抗体コート磁気ビーズによって血液から分離された上皮細胞を計数するように設計されている。CTCは、二重基準DNA特異的色素4,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール(DAPI)、ならびに白血球(CD45-アロフィコシアニン)および上皮細胞(サイトケラチン8-、18-、および19-フィコエリトリン)に特異的なmAbで蛍光標識し、CellSpotter Analyzer(登録商標)(Veridex)を用いて解析した後に、単離された細胞の中から同定される。この技術は、正常個体ならびに悪性および非悪性疾患を有する個体の大規模な調査によって示されるように、CTCの特異的検出を促進する。健常であるまたは非悪性疾患を有する個体344名のうち1名(0.3%)が、≧2 CTC/7.5 mL血液を有した。転移癌患者964名に由来する2.183の血液試料では、CTCは0〜23,618 CTC/7.5 mLの範囲であり(平均、60±693 CTC/7.5 mL)、試料の36%(2,183のうち781)が≧2 CTCを有した。≧2 CTCの検出は以下の割合で起こった:前立腺癌の57%(188のうち107)、乳癌の37%(1,316のうち489)、卵巣癌の37%(53のうち20)、結腸直腸癌の30%(333のうち99)、肺癌の20%(168のうち34)、およびその他の癌の26%(125のうち32)(Allard et al. Clin Cancer Res 10:6897-6904, 2004)。
材料および方法
材料
細胞培養液、RPMI 1640、DMEM、およびトリプシンEDTAは、JRH Biosciences Inc(米国、カンザス州、レネックサ)から入手した。スタウロスポリンおよび臭化エチジウムは、Sigma-Aldrich Co.(米国、ミズーリ州、セントルイス)から入手した。TrizolおよびSuperscript IIはInvitrogen(米国、カリフォルニア州、カールズバッド)から購入し、Amplitaq GoldはApplied Biosystems(米国、カリフォルニア州、フォスターシティー)から購入した。プライマーはすべて、Geneworks(サウスオーストラリア州、アデレード)で作製された。
Jurkat細胞(ATCC #TIB-152)は、5%ウシ胎仔血清(FCS)を添加したRPMI 1640で維持した。U2OS細胞(ATCC #HTB-96)は5% FCSを添加したDMEMで維持し、48〜72時間ごとにトリプシンEDTAで剥離して継代した。Jurkat細胞はテロメラーゼを発現し、そのため内在性RNA成分hTRを有するが、U2OS細胞はテロメラーゼおよびhTRを欠いている。アポトーシスは、0.5μMスタウロスポリンを培養液に添加し、24時間、48時間、または72時間置くことにより誘導した。
細胞を回収しPBSで洗浄してから、製造業者の指示書に従ってTrizolにより5x106個細胞のRNA抽出を行った。RNAをDEPC水10 ulに再懸濁して、濃度を測定した。RNA 3μgを、製造業者の指示書に従ってSuperscript IIおよびオリゴdTを用いて逆転写した。
hTRに特異的なプライマーを用いてPCRを行った。2セットのプライマーを用いて、111 bp(Chen XQ et al. Clin Cancer Res 6:3823-3826, 2000)および153 bp(Bodnar AG et al. Exp Cell Res 228:58-64, 1996)の大きさのPCR産物を作製した:
hTR fwd
(配列番号:1)
hTR rev
(Chen et al.、前記)(配列番号:2)
hTR fwd
(Bodnar et al.、前記)(配列番号:3)およびChenリバースプライマー。
GAPDHのRT-PCR増幅は、アポトーシス誘導の72時間後まで両細胞株で検出可能なmRNAを示す。トリパンブルー染色による生存度解析から、U2OS細胞の36%、95%、および100%がそれぞれ24時間、48時間、および72時間の時点で死滅し、Jurkat細胞の40%、85%、および100%がそれぞれ24時間、48時間、および72時間の時点で死滅していたことが示された。hTRのRNAはhTR陰性U2OS細胞では検出されなかったが、hTR陽性Jurkat細胞ではアポトーシス誘導の24時間、48時間、および72時間後に検出された。
これらのデータより、インビトロの死細胞から、GAPDHおよびhTRのRNAを含め、RNAをPCR増幅できることが示される。mRNAを含むRNAが、アポトーシスの過程で生じる、ヘテロ異所性RNP由来構造(Heterogenous Ectopic RNP-Derived Structure;HERDS)と称される新たな細胞内線維顆粒構造内に隔離されることを示す証拠が存在する。HERDSは細胞質に押し出され、アポトーシス突起(bleb)の一部として細胞表面に向かって移動し、アポトーシス突起は最終的にアポトーシス小体として放出される。HERDSの形成は、熱ショックおよびその他の物理的ストレス、栄養欠乏、ならびにDNA損傷剤の使用などの過程において起こり得る転写抑止の可逆的マーカーであることが示されたが、核小体タンパク質がHERDS中に同定される場合には、HERDSの形成およびアポトーシスへの拘束は不可逆的となる(Biggiogera et al. Biol Cell 96:603-615, 2004)。今日まで、HERDS内でのLa抗原の標識の報告は存在していない。しかしながら、LaはhTRと結合し得るため、死細胞からLaを免疫アフィニティー単離することは、早期癌患者の末梢血中を循環している腫瘍細胞を含み得る生体液中など、特に腫瘍細胞数が制限される場合に、hTRのPCR増幅を促進するはずである。QZyme(商標)技術(Clontech)は、PCRに基づく定量的アッセイ系の一例であり、生物試料の複雑度によって影響を受けず、また最適化の必要がないために、免疫アフィニティー法によって単離されたLa結合hTRに有効に適用できると考えられる。
細胞透過処理
Clonetics(登録商標)馴化初代細胞およびレチノイン酸含有正常ヒト気管支上皮(NHBE)は、Combrex Corporation(米国、ニュージャージー州)から入手し、市販の培地を用いた培養で維持した。癌細胞株はATCCから入手し、推奨される培地で培養した。コンフルエントの時点でトリプシン-EDTA溶液を用いて細胞を剥離し、PBSで洗浄し、5x106個細胞/mLを2%パラホルムアルデヒドと共に室温で10分間インキュベートし、次いで-20℃の純メタノールで1:10希釈することにより透過処理した。
細胞死は、シスプラチンを20μg/mL濃度で培養液に添加し、48時間置くことによって誘導した。
細胞を回収してPBSで洗浄し、50μg/mLのAPOTEL(商標)または特異性に関連のない適合アイソタイプ対照mAbと共に室温で30分間インキュベートした。細胞をPBSで洗浄し、2μg/mLの抗ラットIgG Alexa488結合抗体と共に室温で30分間インキュベートした。細胞を洗浄し、2μg/mL 7-AADと共に室温で10分間インキュベートし、次いでB-D FACScan装置を用いてフローサイトメトリーにより解析した。
初代および悪性気管支上皮細胞におけるテロメラーゼ発現は類似していた(図18AおよびB)。シスプラチン処理後には、悪性気管支上皮細胞株A549のhTERT特異的mAb結合の蛍光細胞数測定解析により、有意により多くのhTERTが検出された(図18C)。シスプラチン処理した気管支癌細胞におけるhTERT発現の明白な増加は、アポトーシスに特有である細胞内再構成中のタンパク質合成の増加および/もしくは別の細胞内区画からのタンパク質放出、ならびに/またはhTERT特異的mAbのより高い結合を支持する抗hTERT mAbエピトープの曝露に起因する可能性がある。この結果は、インビボでのヒトにおけるhTERT特異的mAb結合の挙動を予測すると考えられることから、臨床的に関連性がある。したがって、細胞毒性薬処理のために損傷し漏出性となった初代細胞は、損傷して漏出性となった癌細胞とは異なり、多量の抗テロメラーゼ抗体と結合することはなく、癌細胞が抗癌治療の真の標的となる。
Claims (49)
- テロメラーゼのRNA、mRNA、またはタンパク質に対する相互作用分子を含む、対象中または対象由来の生物試料中の膜完全性を失っている死新生物細胞であって、透過処理工程を経ていない細胞を検出するための検出剤。
- 請求項1に記載の検出剤を含む、対象中または対象由来の生物試料中の死新生物細胞を検出するための定量的または半定量的診断キットであって、
対象中または対象由来の生物試料中の膜完全性を失っている死細胞であって、透過処理工程を経ていない細胞におけるテロメラーゼのRNA、mRNA、またはタンパク質量をスクリーニングする段階を含む、対象における死新生物細胞を検出する方法であって、死細胞におけるテロメラーゼの前記量が死非新生物細胞におけるテロメラーゼの前記量と比較して増加していることにより死新生物細胞の存在が示される、前記方法
のために使用される、前記診断キット。 - 上記相互作用分子がhTERTタンパク質に対するモノクローナル抗体である、請求項2記載の診断キット。
- エフェクター機構と連結され、結合され、またはさもなくば会合している相互作用分子であって、テロメラーゼのRNA、mRNA、またはタンパク質またはその抗原性部分に対する相互作用分子を含む、新生物の成長を減少させ、またはさもなくばダウンレギュレーションすることにより対象における新生物状態の治療において使用するための医薬であって、前記治療方法が、相互作用分子の投与前に新生物細胞の透過処理を必要としない、前記医薬。
- 新生物の成長を減少させ、またはさもなくばダウンレギュレーションすることにより対象における新生物状態を治療するための医薬の製造における、テロメラーゼのRNA、mRNA、またはタンパク質に対する相互作用分子の使用であって、該分子は、該エフェクター機構と連結され、結合され、またはさもなくば会合しており、前記治療方法が、相互作用分子の投与前に新生物細胞の透過処理を必要としない、前記使用。
- 新生物状態が転移癌である、請求項4記載の医薬。
- 上記テロメラーゼが
(i) テロメラーゼ複合体;
(ii) hTERT;および/または
(iii) hTR
より選択される、請求項4または6記載の医薬。 - 上記テロメラーゼが
(i) hTERTタンパク質;
(ii) hTERT mRNA;および/または
(iii) hTR RNA
より選択される、請求項7記載の医薬。 - 上記テロメラーゼがhTERTタンパク質もしくはmRNAまたはhTR RNAである、請求項7または8記載の医薬。
- 上記相互作用分子が免疫相互作用分子である、請求項7、8、または9に記載の医薬。
- 上記免疫相互作用分子が抗テロメラーゼモノクローナル抗体である、請求項10記載の医薬。
- 上記エフェクター機構が、バイスタンダー殺傷免疫応答を誘導または増強するように作用する可溶性因子であり、該可溶性因子が上記抗体に連結されている、請求項4、6〜11のいずれか一項記載の医薬。
- 上記可溶性因子が
(i) 走化性ペプチド;
(ii) N-ホルミル-メチオニル-ロイシル-フェニルアラニン;または
(iii) JBT2002
より選択される、請求項12記載の医薬。 - 上記エフェクター機構が毒素であり、該毒素が上記抗体に連結されている、請求項4、6〜11のいずれか一項記載の医薬。
- 上記毒素が
(i) 放射性同位体;
(ii) リシン;
(iii) カリチアマイシン;
(iv) プロドラッグ;または
(v) 触媒抗体
より選択される、請求項14記載の医薬。 - 放射性同位体が、α粒子放射放射性同位体、β粒子放射放射性同位体、もしくはγ粒子放射放射性同位体である、請求項15記載の医薬。
- 上記α粒子放射放射性同位体が
(i) Tb-149;
(ii) Bi-213;または
(iii) トリウム-229
より選択される、請求項16記載の医薬。 - 上記プロドラッグが抗体指向性プロドラッグ変換酵素である、請求項15記載の医薬。
- 上記新生物状態または癌が、中枢神経系腫瘍、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、小児腫瘍、頭頸部癌、乳癌および前立腺癌、肺癌、腎臓癌、食道胃癌、肝細胞癌、膵胆管新形成、結腸直腸癌、子宮頸癌、肛門癌、子宮癌もしくはその他の生殖管の癌、尿路癌、胚細胞腫瘍、卵巣癌、原発不明の癌腫、ヒト免疫不全関連悪性腫瘍、リンパ腫、白血病、悪性黒色腫、肉腫、内分泌腫瘍、中皮腫またはその他の胸膜もしくは腹膜の腫瘍、神経内分泌腫瘍、またはカルチノイド腫瘍である、請求項4、6〜18のいずれか一項記載の医薬。
- 上記頭頸部癌が扁平細胞癌である、請求項19記載の医薬。
- 上記腎臓癌が腎細胞腺癌である、請求項19記載の医薬。
- 上記膵胆管新形成が腺癌または島細胞腫瘍である、請求項19記載の医薬。
- 上記尿路癌が尿管もしくは膀胱の癌である、請求項19記載の医薬。
- 上記胚細胞腫瘍が、精巣胚細胞腫瘍もしくは卵巣胚細胞腫瘍である、請求項19記載の医薬。
- 上記卵巣癌が卵巣上皮癌である、請求項19記載の医薬。
- 上記ヒト免疫不全関連悪性腫瘍がカポジ肉腫である、請求項19記載の医薬。
- 上記内分泌腫瘍が甲状腺の腫瘍である、請求項19記載の医薬。
- 新生物状態が転移癌である、請求項5記載の使用。
- 上記テロメラーゼが
(i) テロメラーゼ複合体;
(ii) hTERT;および/または
(iii) hTR
より選択される、請求項5または28記載の使用。 - 上記テロメラーゼが
(i) hTERTタンパク質;
(ii) hTERT mRNA;および/または
(iii) hTR RNA
より選択される、請求項29記載の使用。 - 上記テロメラーゼがhTERTタンパク質もしくはmRNAまたはhTR RNAである、請求項29または30記載の使用。
- 上記相互作用分子が免疫相互作用分子である、請求項29、30、または31に記載の使用。
- 上記免疫相互作用分子が抗テロメラーゼモノクローナル抗体である、請求項32記載の使用。
- 上記エフェクター機構が、バイスタンダー殺傷免疫応答を誘導または増強するように作用する可溶性因子であり、該可溶性因子が上記抗体に連結されている、請求項5、28〜33のいずれか一項記載の使用。
- 上記可溶性因子が
(i) 走化性ペプチド;
(ii) N-ホルミル-メチオニル-ロイシル-フェニルアラニン;または
(iii) JBT2002
より選択される、請求項34記載の使用。 - 上記エフェクター機構が毒素であり、該毒素が上記相互作用分子に連結されている、請求項5、28〜33のいずれか一項記載の使用。
- 上記毒素が
(i) 放射性同位体;
(ii) リシン;
(iii) カリチアマイシン;
(iv) プロドラッグ;または
(v) 触媒抗体
より選択される、請求項36記載の使用。 - 上記放射性同位体が、α粒子放射放射性同位体、β粒子放射放射性同位体、もしくはγ粒子放射放射性同位体である、請求項37記載の使用。
- 上記α粒子放射放射性同位体が
(i) Tb-149;
(ii) Bi-213;または
(iii) トリウム-229
より選択される、請求項38記載の使用。 - 上記プロドラッグが抗体指向性プロドラッグ変換酵素である、請求項37記載の使用。
- 上記新生物状態または癌が、中枢神経系腫瘍、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、小児腫瘍、頭頸部癌、乳癌および前立腺癌、肺癌、腎臓癌、食道胃癌、肝細胞癌、膵胆管新形成、結腸直腸癌、子宮頸癌、肛門癌、子宮癌もしくはその他の生殖管の癌、尿路癌、胚細胞腫瘍、卵巣癌、原発不明の癌腫、ヒト免疫不全関連悪性腫瘍、リンパ腫、白血病、悪性黒色腫、肉腫、内分泌腫瘍、中皮腫またはその他の胸膜もしくは腹膜の腫瘍、神経内分泌腫瘍、またはカルチノイド腫瘍である、請求項5、28〜40のいずれか一項記載の使用。
- 上記頭頸部癌が扁平細胞癌である、請求項41記載の使用。
- 上記腎臓癌が腎細胞腺癌である、請求項41記載の使用。
- 上記膵胆管新形成が腺癌または島細胞腫瘍である、請求項41記載の使用。
- 上記尿路癌が尿管もしくは膀胱の癌である、請求項41記載の使用。
- 上記胚細胞腫瘍が、精巣胚細胞腫瘍もしくは卵巣胚細胞腫瘍である、請求項41記載の使用。
- 上記卵巣癌が卵巣上皮癌である、請求項41記載の使用。
- 上記ヒト免疫不全関連悪性腫瘍がカポジ肉腫である、請求項41記載の使用。
- 上記内分泌腫瘍が甲状腺の腫瘍である、請求項41記載の使用。
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