JP5958658B2 - 培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤 - Google Patents
培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5958658B2 JP5958658B2 JP2015548089A JP2015548089A JP5958658B2 JP 5958658 B2 JP5958658 B2 JP 5958658B2 JP 2015548089 A JP2015548089 A JP 2015548089A JP 2015548089 A JP2015548089 A JP 2015548089A JP 5958658 B2 JP5958658 B2 JP 5958658B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- phosphorylation
- erk
- container
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 title claims description 71
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 title claims description 71
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 title claims description 22
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 58
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title description 6
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 title description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 77
- JFNLZVQOOSMTJK-KNVOCYPGSA-N norbornene Chemical compound C1[C@@H]2CC[C@H]1C=C2 JFNLZVQOOSMTJK-KNVOCYPGSA-N 0.000 claims description 29
- 238000000465 moulding Methods 0.000 claims description 17
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 claims description 13
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 99
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 description 48
- 102000007665 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Human genes 0.000 description 48
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 description 42
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 39
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 29
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 21
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 18
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 14
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 14
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 14
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 11
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 7
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 7
- 108700027649 Mitogen-Activated Protein Kinase 3 Proteins 0.000 description 6
- 102100024192 Mitogen-activated protein kinase 3 Human genes 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N cyclohexene Chemical compound C1CCC=CC1 HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 6
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 5
- 108700015928 Mitogen-activated protein kinase 13 Proteins 0.000 description 5
- 238000012644 addition polymerization Methods 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 4
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 4
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 4
- 102100034741 Cyclin-dependent kinase 20 Human genes 0.000 description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710199302 Girdin Proteins 0.000 description 4
- 102100036769 Girdin Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001925 cycloalkenes Chemical class 0.000 description 4
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 4
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 4
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 102100038608 Cathelicidin antimicrobial peptide Human genes 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 3
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 101000741320 Homo sapiens Cathelicidin antimicrobial peptide Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Natural products CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N cathelicidin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C1=CC=CC=C1 POIUWJQBRNEFGX-XAMSXPGMSA-N 0.000 description 3
- 150000001924 cycloalkanes Chemical group 0.000 description 3
- URYYVOIYTNXXBN-UPHRSURJSA-N cyclooctene Chemical compound C1CCC\C=C/CC1 URYYVOIYTNXXBN-UPHRSURJSA-N 0.000 description 3
- 239000004913 cyclooctene Substances 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000004388 gamma ray sterilization Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 3
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 3
- 239000002685 polymerization catalyst Substances 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- XWJBRBSPAODJER-UHFFFAOYSA-N 1,7-octadiene Chemical compound C=CCCCCC=C XWJBRBSPAODJER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LIKMAJRDDDTEIG-UHFFFAOYSA-N 1-hexene Chemical compound CCCCC=C LIKMAJRDDDTEIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000876610 Dictyostelium discoideum Extracellular signal-regulated kinase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001052493 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 1 Proteins 0.000 description 2
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N Zirconium Chemical compound [Zr] QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001118 alkylidene group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- ZXIJMRYMVAMXQP-UHFFFAOYSA-N cycloheptene Chemical compound C1CCC=CCC1 ZXIJMRYMVAMXQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MGNZXYYWBUKAII-UHFFFAOYSA-N cyclohexa-1,3-diene Chemical compound C1CC=CC=C1 MGNZXYYWBUKAII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZSWFCLXCOIISFI-UHFFFAOYSA-N cyclopentadiene Chemical compound C1C=CC=C1 ZSWFCLXCOIISFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LPIQUOYDBNQMRZ-UHFFFAOYSA-N cyclopentene Chemical compound C1CC=CC1 LPIQUOYDBNQMRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 238000004898 kneading Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229910001507 metal halide Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000005309 metal halides Chemical class 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- YWAKXRMUMFPDSH-UHFFFAOYSA-N pentene Chemical compound CCCC=C YWAKXRMUMFPDSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 2
- 239000005297 pyrex Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 2
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 229910052726 zirconium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004711 α-olefin Substances 0.000 description 2
- HSXHQSIOZSTGKP-BXFWGDTBSA-N (1Z,5Z,9Z,13Z)-cyclohexadeca-1,5,9,13-tetraene Chemical compound C1C\C=C/CC\C=C/CC\C=C/CC\C=C/1 HSXHQSIOZSTGKP-BXFWGDTBSA-N 0.000 description 1
- RDAFFINKUCJOJK-UYIJSCIWSA-N (1z,5e)-cyclodeca-1,5-diene Chemical compound C1CC\C=C/CC\C=C\C1 RDAFFINKUCJOJK-UYIJSCIWSA-N 0.000 description 1
- LCSLWNXVIDKVGD-KQQUZDAGSA-N (3e,7e)-deca-3,7-diene Chemical compound CC\C=C\CC\C=C\CC LCSLWNXVIDKVGD-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 1
- JBVMSEMQJGGOFR-FNORWQNLSA-N (4e)-4-methylhexa-1,4-diene Chemical compound C\C=C(/C)CC=C JBVMSEMQJGGOFR-FNORWQNLSA-N 0.000 description 1
- VYXHVRARDIDEHS-UHFFFAOYSA-N 1,5-cyclooctadiene Chemical compound C1CC=CCCC=C1 VYXHVRARDIDEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004912 1,5-cyclooctadiene Substances 0.000 description 1
- SDRZFSPCVYEJTP-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylcyclohexene Chemical compound C=CC1=CCCCC1 SDRZFSPCVYEJTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HECLRDQVFMWTQS-RGOKHQFPSA-N 1755-01-7 Chemical compound C1[C@H]2[C@@H]3CC=C[C@@H]3[C@@H]1C=C2 HECLRDQVFMWTQS-RGOKHQFPSA-N 0.000 description 1
- AAILEWXSEQLMNI-UHFFFAOYSA-N 1h-pyridazin-6-one Chemical group OC1=CC=CN=N1 AAILEWXSEQLMNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYPKRALMXUUNKS-UHFFFAOYSA-N 2-Hexene Natural products CCCC=CC RYPKRALMXUUNKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUFPYLQWLKKGDQ-UHFFFAOYSA-N 4,4a,9,9a-tetrahydro-1,4-methano-1h-fluorene Chemical compound C12CC3=CC=CC=C3C1C1C=CC2C1 XUFPYLQWLKKGDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRIYXMAKROEVBQ-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethylbicyclo[2.2.1]hept-2-ene Chemical compound C1C2C(C)(C)CC1C=C2 YRIYXMAKROEVBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDSFXRZGEOCNOU-UHFFFAOYSA-N 5-ethenylbicyclo[2.2.1]hept-2-ene 5-ethylidenebicyclo[2.2.1]hept-2-ene Chemical compound C(C)=C1C2C=CC(C1)C2.C(=C)C2C1C=CC(C2)C1 BDSFXRZGEOCNOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QHJIJNGGGLNBNJ-UHFFFAOYSA-N 5-ethylbicyclo[2.2.1]hept-2-ene Chemical compound C1C2C(CC)CC1C=C2 QHJIJNGGGLNBNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCBPVYHMZBWMAZ-UHFFFAOYSA-N 5-methylbicyclo[2.2.1]hept-2-ene Chemical compound C1C2C(C)CC1C=C2 PCBPVYHMZBWMAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSQLAQKFRFTMNS-UHFFFAOYSA-N 5-methylhexa-1,4-diene Chemical compound CC(C)=CCC=C VSQLAQKFRFTMNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJQNJRMLJAAXOS-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-enylbicyclo[2.2.1]hept-2-ene Chemical compound C1C2C(C=CC)CC1C=C2 CJQNJRMLJAAXOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGQJJJQFRYERLA-UHFFFAOYSA-N 7-chlorotetracyclo[9.2.1.02,10.03,8]tetradeca-3(8),4,6,12-tetraene Chemical compound ClC1=CC=CC2=C1CC1C(C=C3)CC3C12 OGQJJJQFRYERLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 1
- RBHNHHBFHGYUIV-UHFFFAOYSA-N BrC1C=CCC2C3=CC=CC=C3CC12 Chemical compound BrC1C=CCC2C3=CC=CC=C3CC12 RBHNHHBFHGYUIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017079 CCR6 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004288 CCR6 Receptors Human genes 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLNFUUDOQNVGMU-UHFFFAOYSA-N Cc1cccc2C3C4CC(C=C4)C3Cc12 Chemical compound Cc1cccc2C3C4CC(C=C4)C3Cc12 DLNFUUDOQNVGMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000818546 Homo sapiens N-formyl peptide receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000014429 Insulin-like growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007399 Nuclear hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- XYLMUPLGERFSHI-UHFFFAOYSA-N alpha-Methylstyrene Chemical compound CC(=C)C1=CC=CC=C1 XYLMUPLGERFSHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000002216 antistatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- BMAXQTDMWYDIJX-UHFFFAOYSA-N bicyclo[2.2.1]hept-2-ene-5-carbonitrile Chemical compound C1C2C(C#N)CC1C=C2 BMAXQTDMWYDIJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000071 blow moulding Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000003763 carbonization Methods 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000000748 compression moulding Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003851 corona treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- CFBGXYDUODCMNS-UHFFFAOYSA-N cyclobutene Chemical compound C1CC=C1 CFBGXYDUODCMNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOLLIQAKMYWTBR-RYMQXAEESA-N cyclododecatriene Chemical compound C/1C\C=C\CC\C=C/CC\C=C\1 ZOLLIQAKMYWTBR-RYMQXAEESA-N 0.000 description 1
- UVJHQYIOXKWHFD-UHFFFAOYSA-N cyclohexa-1,4-diene Chemical compound C1C=CCC=C1 UVJHQYIOXKWHFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVRWIAHBVAYKIZ-UHFFFAOYSA-N dec-3-ene Chemical compound CCCCCCC=CCC GVRWIAHBVAYKIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- HANKSFAYJLDDKP-UHFFFAOYSA-N dihydrodicyclopentadiene Chemical compound C12CC=CC2C2CCC1C2 HANKSFAYJLDDKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001599 direct drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- LDLDYFCCDKENPD-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclohexane Chemical compound C=CC1CCCCC1 LDLDYFCCDKENPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- DPUXQWOMYBMHRN-UHFFFAOYSA-N hexa-2,3-diene Chemical compound CCC=C=CC DPUXQWOMYBMHRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000057492 human FPR2 Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000004611 light stabiliser Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- AEBDJCUTXUYLDC-UHFFFAOYSA-N methyl 5-methylbicyclo[2.2.1]hept-2-ene-5-carboxylate Chemical compound C1C2C(C(=O)OC)(C)CC1C=C2 AEBDJCUTXUYLDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003518 norbornenyl group Chemical group C12(C=CC(CC1)C2)* 0.000 description 1
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052762 osmium Inorganic materials 0.000 description 1
- SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N osmium atom Chemical compound [Os] SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N pentamethylene Natural products C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000019525 primary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 238000001175 rotational moulding Methods 0.000 description 1
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024053 secondary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000002893 slag Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- XBFJAVXCNXDMBH-UHFFFAOYSA-N tetracyclo[6.2.1.1(3,6).0(2,7)]dodec-4-ene Chemical compound C1C(C23)C=CC1C3C1CC2CC1 XBFJAVXCNXDMBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVJHFVMRMWVWAX-UHFFFAOYSA-N tetradeca-2,7,9,11-tetraene Chemical compound CCC=CC=CC=CCCCC=CC PVJHFVMRMWVWAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005992 thermoplastic resin Polymers 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 239000006097 ultraviolet radiation absorber Substances 0.000 description 1
- 150000003682 vanadium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
アポトーシスを起こした細胞から漏洩した内容物(漏洩夾雑物)は、細胞を用いたアッセイに対して影響を与えるおそれがある。また、細胞を用いて医薬品等の物質を生産する場合においては、漏洩夾雑物が生産物の分解を引き起こしたり、その除去のために作業工程数が増えたりするという問題がある。
このため、細胞培養において、アポトーシスを効率よく抑制することが求められていた。
非特許文献1には、接着型細胞が細胞外基質に接着している状態であれば、インテグリンと呼ばれる細胞表面の接着に関係するタンパク質経由の情報伝達作用により、ミトコンドリアからの内容物の漏洩を防止する作用があること、結果として、アポトーシスが防止されることが記載されている。
接着状態の細胞におけるアポトーシス抑制の作用メカニズムに関しては、インテグリンを経由した細胞内のERK又はAKTと称される細胞内シグナル伝達系タンパク質のリン酸化が亢進され、そのリン酸化が亢進したERK又はAKTの作用により、ミトコンドリアを破壊する因子を破壊作用のない状態にする効果を引き出すことが知られている。
さらに、特許文献2には、ピリダジノン構造を有する化合物が、血液細胞の中のT細胞由来のジャーカット細胞などの浮遊細胞に対して、生体内でのカスパーゼ阻害活性を有することが開示されている。
これらの培養器具は、通常、γ線照射などの処理で滅菌処理される。また、接着型細胞が剥離して死滅しないように、プラズマ処理や紫外線照射処理により、培養容器の表面に親水化処理が施されることがある。
本発明は、かかる従来技術の実情に鑑みてなされたものであり、培養細胞内のERKまたはAKTのリン酸化亢進方法、このリン酸化亢進方法を利用する細胞の培養方法、およびこれらの方法に好適に用いられるリン酸化亢進剤、を提供することを目的とする。
(1)培養されている細胞に、脂環構造含有重合体成形体を接触させることを特徴とする培養細胞内のERK(Extracellular signal−Regulated Kinase)のリン酸化亢進方法。
(2)培養されている細胞に、脂環構造含有重合体成形体を接触させることを特徴とする培養細胞内のAKTのリン酸化亢進方法。
(3)培養されている細胞が接着型細胞である(1)又は(2)に記載のリン酸化亢進方法。
(4)培養されている細胞に、脂環構造含有重合体成形体を接触させ、培養細胞内のERK(Extracellular signal−Regulated Kinase)のリン酸化及び/又はAKTのリン酸化を亢進することを特徴とする、細胞の培養方法。
(5)脂環構造含有重合体成形体からなる、培養細胞中の細胞内ERKのリン酸化亢進剤。
(6)脂環構造含有重合体成形体からなる、培養細胞中の細胞内AKTのリン酸化亢進剤。
液体培地としては、通常、pH緩衝作用があり、浸透圧が細胞に好適なものであり、細胞の栄養成分を含み、かつ、細胞に対して毒性がないものが用いられる。
pH緩衝作用を示す成分としては、トリス塩酸塩、各種リン酸塩、各種炭酸塩等が挙げられる。
液体培地の浸透圧調整は、通常、細胞の浸透圧とほぼ同じになるように、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース等の濃度を調整した水溶液を用いて行われる。かかる水溶液としては、具体的には、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水、HEPES緩衝生理食塩水等の生理食塩水;乳酸リンゲル液、酢酸リンゲル液、重炭酸リンゲル液等のリンゲル液;等が挙げられる。
細胞の栄養成分としては、アミノ酸、核酸、ビタミン類、ミネラル類等が挙げられる。
液体培地としては、RPMI−1640、HAM、α−MEM、DMEM、EMEM、F−12、F−10、M−199等の各種市販品を利用することができる。
分化誘導因子としては、細胞表面の受容体に作用するリガンド、アゴニスト、及びアンタゴニスト;核内受容体のリガンド、アゴニスト、及びアンタゴニスト;コラーゲン及びファイブネクチンなどの細胞外マトリックス;細胞外マトリックスの一部分、又は細胞外マトリックスを模擬した化合物;細胞内の情報伝達経路に関わるタンパク質に作用する成分;細胞内の1次代謝または2次代謝の酵素に作用する成分;細胞内の核内またはミトコンドリア内の遺伝子の発現に影響を与える成分;インシュリン様増殖因子などの細胞増殖因子の遺伝子をコードしたDNAや、カスパターゼなど細胞内制御因子に対する干渉RNA作用があるように設計したマイクロRNAなどのRNAであって、マイクロインジェクション法、ハイドロダイナミクス法、エレクトロポレーション法、リポフェクチン法等の方法によりウィルスベクターなどと組み合わせて細胞内に導入することができるDNAやRNA;等が挙げられる。
これらの添加剤は、一種単独で、あるいは二種以上を組み合わせて用いることができる。
例えば、二酸化炭素濃度が5%程度で、温度が20℃〜37℃の範囲で一定に維持された、加湿された恒温器を用いて細胞を培養することができる。
脂環構造含有重合体は、主鎖及び/又は側鎖に脂環構造を有する樹脂であり、機械的強度、耐熱性などの観点から、主鎖に脂環構造を含有するものが好ましい。
ノルボルネン系重合体は、ノルボルネン骨格を有する単量体であるノルボルネン系単量体を重合してなるものであり、開環重合によって得られるものと、付加重合によって得られるものに大別される。
トリシクロ[4.3.01,6.12,5]デカ−3,7−ジエン(慣用名ジシクロペンタジエン)、2−メチルジシクロペンタジエン、2,3−ジメチルジシクロペンタジエン、2,3−ジヒドロキシジシクロペンタジエン等の3環式単量体;
テトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン(テトラシクロドデセン)、テトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、8−メチルテトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、8−エチルテトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、8−エチリデンテトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、8,9−ジメチルテトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、8−エチル−9−メチルテトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、8−エチリデン−9−メチルテトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、8−メチル−8−カルボキシメチルテトラシクロ[4.4.0.12,5.17,10]−3−ドデセン、
7,8−ベンゾトリシクロ[4.3.0.12,5]デカ−3−エン(慣用名メタノテトラヒドロフルオレン:1,4−メタノ−1,4,4a,9a−テトラヒドロフルオレンともいう)、1,4−メタノ−8−メチル−1,4,4a,9a−テトラヒドロフルオレン、1,4−メタノ−8−クロロ−1,4,4a,9a−テトラヒドロフルオレン、1,4−メタノ−8−ブロモ−1,4,4a,9a−テトラヒドロフルオレン等の4環式単量体;等が挙げられる。
これらの単量体は、置換基を1種又は2種以上有していてもよい。置換基としては、アルキル基、アルキレン基、アリール基、シリル基、アルコキシカルボニル基、アルキリデン基等が挙げられる。
これらの中でも、ノルボルネン系単量体と付加共重合可能なその他の単量体としては、α−オレフィン系単量体が好ましく、エチレンがより好ましい。
これらの単量体は、置換基を1種又は2種以上有していてもよい。置換基としては、アルキル基、アルキレン基、アリール基、シリル基、アルコキシカルボニル基、アルキリデン基等が挙げられる。
ノルボルネン系単量体の開環重合体水素化物は、通常、上記開環重合体の重合溶液に、ニッケル、パラジウムなどの遷移金属を含む公知の水素化触媒を添加し、炭素−炭素不飽和結合を水素化することにより得ることができる。
単環の環状オレフィン系重合体としては、例えば、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテンなどの、単環の環状オレフィン系単量体の付加重合体を用いることができる。
(3)環状共役ジエン系重合体
環状共役ジエン系重合体としては、例えば、シクロペンタジエン、シクロヘキサジエンなどの環状共役ジエン系単量体を1,2−又は1,4−付加重合した重合体及びその水素化物などを用いることができる。
(4)ビニル脂環式炭化水素重合体
ビニル脂環式炭化水素重合体としては、例えば、ビニルシクロヘキセン、ビニルシクロヘキサンなどのビニル脂環式炭化水素系単量体の重合体及びその水素化物;スチレン、α−メチルスチレンなどのビニル芳香族系単量体の重合体の芳香環部分の水素化物;などが挙げられる。ビニル脂環式炭化水素重合体は、これらの単量体と共重合可能な他の単量体との共重合体であってもよい。
本発明においてガラス転移温度は、JIS K 7121に基づいて測定されたものである。
また、脂環構造含有重合体には、熱可塑性樹脂材料で通常用いられている配合剤、例えば、軟質重合体、酸化防止剤、紫外線吸収剤、光安定剤、近赤外線吸収剤、離型剤、染料や顔料などの着色剤、可塑剤、帯電防止剤、蛍光増白剤などの配合剤を、通常採用される量、添加することができる。
また、脂環構造含有重合体には、軟質重合体以外のその他の重合体(以下、単に「その他の重合体」という)を混合しても良い。脂環構造含有重合体に混合されるその他の重合体の量は、脂環構造含有重合体100重量部に対して、通常200重量部以下、好ましくは150重量部以下、より好ましくは100重量部以下である。
脂環構造含有重合体に対して配合する各種配合剤やその他の重合体の割合が多すぎると、細胞内シグナル伝達系タンパク質のリン酸化亢進能が低下するため、いずれも脂環構造含有重合体の性質を損なわない範囲で配合することが好ましい。
配合剤やその他の重合体との混合方法は、ポリマー中に配合剤が十分に分散する方法であれば、特に限定されない。また、配合の順番に格別な制限はない。配合方法としては、例えば、ミキサー、一軸混練機、二軸混練機、ロール、ブラベンダー、押出機などを用いて樹脂を溶融状態で混練する方法、適当な溶剤に溶解して分散させた後、凝固法、キャスト法、又は直接乾燥法により溶剤を除去する方法などが挙げられる。
二軸混練機を用いる場合、混練後は、通常は溶融状態で棒状に押出し、ストランドカッターで適当な長さに切り、ペレット化して用いられることが多い。
こうして得られる成形体が、本発明のERK又はAKTのリン酸化亢進剤である。
また、細胞と接触することができる限りにおいて、ディッシュ、プレート、バッグ、チューブ、スキャホールド、カップ、ジャー・ファーメンターなどの培養容器;攪拌翼、攪拌子、バッフル、連結チューブなど培養装置の部品;ピペット、攪拌素子、フィルタ、セルスクレイパーなどの培養操作に用いる培養器具;等の一部又は全部を構成する部材であってもよい。
また、これらの成形体表面は、プラズマ処理、コロナ放電処理、オゾン処理、紫外線照射処理など培養容器に対して一般的に施す滅菌目的以外の処理を行うこともできるが、ERKやAKTのリン酸化亢進速度の観点から、これらの処理を行わずに用いることが好ましい。
尚、細胞には、情報伝達能があるため、培養中の全ての培養細胞が脂環構造含有重合体成形体に接触する必要はなく、また、培養期間全体に渡って両者が接触している必要もない。但し、接触による効果は経時的に低下するため、接触時間は長い方が好ましい。
培養細胞と、脂環構造含有重合体成形体との接触温度は細胞が増殖できる温度であれば特に制限されない。
〔製造例1〕
脂環構造含有重合体として、ゼオネックス(登録商標)790R(日本ゼオン社製、ノルボルネン系開環重合体水素化物;以下、単に「790R」という)を用いて、射出形成法により、直径35mmのシャーレ状の培養容器を得、次いで、エチレンオキサイド滅菌処理を行った。以下、この培養容器を「790R製容器」という。
製造例1において、790Rに代えて、ゼオノア(登録商標)1430R(日本ゼオン社製、ノルボルネン系開環重合体水素化物;以下、単に「1430R」という)を使用したことを除き、製造例1と同様にして培養容器を得た。以下、この培養容器を「1430R製容器」という。
製造例1において、790Rに代えて、ゼオノア(登録商標)1060R(日本ゼオン社製、ノルボルネン系開環重合体水素化物;以下、単に「1060R」という)を使用したことを除き、製造例1と同様にして培養容器を得た。以下、この培養容器を「1060R製容器」という。
接着型細胞の接着が容易になるように、以下のように、プラズマ照射を行い、表面の親水化処理を施した培養容器を作製した。
まず、790Rを用いて、射出形成法により、直径35mmのシャーレ状の培養容器を得た後、プラズマ照射を行い、容器表面に親水化処理を施した。次いで、このものにエチレンオキサイド滅菌処理を行った。以下、この培養容器を「表面親水化790R製容器」という。
製造例4において、790Rに代えて、1430Rを使用したことを除き、製造例4と同様にして培養容器を得た。以下、この培養容器を「表面親水化1430R製容器」という。
培地2mlを入れた790R製容器に、CHO細胞を細胞密度1.25×104cells/cm2で播種し、温度37℃、CO2濃度5%に設定したCO2インキュベータに入れ、5日間培養を行った後、後述する方法によりERKのリン酸化の分析を行った。
実施例1において、790R製容器に代えて、1430R製容器を使用したことを除き、実施例1と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
実施例1において、790R製容器に代えて、表面親水化790R製容器を使用したことを除き、実施例1と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
実施例1において、790R製容器に代えて、表面親水化1430R製容器を使用したことを除き、実施例1と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
実施例1において、790R製容器に代えて、市販の親水化処理済みポリスチレン製ディッシュ〔ファルコン(登録商標)ディッシュ(ベクトンデッキンソン社製、型番353001)〕(以下、「ポリスチレン製容器」と称する)を使用したことを除き、実施例1と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
790R製容器から回収した細胞試料に、タンパク質変性作用のあるSDS(ドデシル硫酸ナトリウム)を含む電気泳動用緩衝液を添加して、100℃で5分間加温処理して、細胞試料を溶解させた。これを4℃で5分間静置し、続いて、遠心処理を行い、不溶物を沈殿除去して、電気泳動用試料を調製した。
同様に、1430R製容器、表面親水化790R製容器、表面親水化1430R製容器、及びポリスチレン製容器で培養した細胞を用いて、それぞれ電気泳動用試料を調製した。
電気泳動用試料は、いずれも2つずつ用意した。
得られた各電気泳動用試料を、プレキャストゲル(ナカライテスク社製)の泳動サンプルコームにアプライして電圧印加し、SDS−ポリアクリルアミド電気泳動を行った。
転写後のニトロセルロース膜に対して、最終濃度0.05%のTween(登録商標)20を含有するTrisリン酸緩衝液(以下、「緩衝液TBS−T」という)にスキムミルクを含有させたブロッキング溶液に浸し、室温で1時間振とうすることで、ニトロセルロース膜面のブロッキング処理を行った。続いて、緩衝液TBS−Tに5分間浸漬してニトロセルロース膜を洗浄し、この洗浄操作を3回繰り返した。
5%BSAを含む緩衝液TBS−Tに、1次抗体として、リン酸化の有無にかかわらずERK1及びERK2を特異的に検出する抗体である抗ERK抗体(CST社製)を添加した溶液を調製し、この溶液に、ニトロセルロース膜を16時間浸漬した。
同様に、5%BSAを含む緩衝液TBS−Tに、1次抗体として、リン酸化ERK1及びリン酸化ERK2を特異的に検出する抗体である抗リン酸化ERK抗体(CST社製)を添加した溶液を調製し、この溶液に、ニトロセルロース膜を16時間浸漬した。
振とう処理後、緩衝液TBS−Tに5分間浸漬して洗浄し、この洗浄操作を3回繰り返した。
上記の膜を検出呈色試薬1−Step−Ultra TMB Blotting Solution(Pierce社製)に浸漬し、膜上で呈色反応を行わせることにより、ERK又はリン酸化ERKの免疫反応シグナルを検出した。
ERKのリン酸化効果を比較するために、抗リン酸化ERK抗体の反応シグナル値を、抗ERK抗体の反応シグナル値(全ERK)で除して得られた値を、各容器について求めたうえで、比較対照のポリスチレン製容器での数値を基準(すなわち1)とした場合の、790R製容器、表面親水化790R製容器、1430R製容器、表面親水化1430R製容器での、それぞれの数値を求めた。
790R製表面を親水化した表面親水化790R製容器と1430R製容器を親水化した表面親水化1430R製容器を用いた培養においても、ポリスチレン製容器を用いた培養に対して2倍のリン酸化亢進が見られた。
また、表面親水化790R製容器、及び表面親水化1430R製容器を用いたときにおいても、ポリスチレン製容器を用いたときに対して2倍のERK−2のリン酸化亢進が見られた。
実施例1において、CHO細胞の代わりにVERO細胞を用いたことを除き、実施例1と同様にして790R製容器を用いて培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
実施例5において、790R製容器に代えて1430R製容器を用いたことを除き、実施例5と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
実施例5において、790R製容器に代えてポリスチレン製容器を用いたことを除き、実施例5と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
図4に示されているように、ERK−2のリン酸化に関しては、790R製容器又は1430R製容器を用いたときは、いずれも、ポリスチレン製容器を用いたときに対して1.5倍程度の亢進が見られた。
このように、CHO細胞と同様に、VERO細胞も脂環構造含有重合体と接触することによるERKのリン酸化の亢進効果が示された。
実施例1と同様の条件で細胞を培養した後、後述する方法によりAKTのリン酸化の分析を行った。
実施例7において、790R製容器に代えて1060R製容器を用いたことを除き、実施例7と同様にして培養を行い、AKTのリン酸化の分析を行った。
実施例7において、790R製容器に代えてポリスチレン製容器を用いたことを除き、実施例7と同様にして培養を行い、AKTのリン酸化の分析を行った。
先に示したERKのリン酸化の分析方法において、抗ERK抗体の代わりに、抗AKT抗体を、また、抗リン酸化ERK抗体の代わりに、抗リン酸化AKT抗体を用いたこと以外は、ERKのリン酸化の分析方法と同様の方法により、細胞内のAKTのリン酸化を分析した。
図5に示されているように、CHO細胞におけるAKTのリン酸化に関しては、790R製容器又は1060R製容器を用いたときは、いずれも、ポリスチレン製容器を用いたときに対して1.5倍程度の亢進が見られた。
内径20mm、厚み1mm、長さ18mmのパイレックス(登録商標)製ガラス筒の底面に、1430R製フィルムを加熱接着させ、このものにγ線滅菌処理を施し、培養カップを得た。このカップを「1430R製カップ」という。
〔製造例7〕
製造例6において、1430Rフィルムにあらかじめプラズマ処理を施したこと以外は、製造例6と同様にして表面親水化したカップを得た。このカップを、「表面親水化1430R製カップ」という。
1430R製カップに、培地〔Ham培地(ナカライ社製)に終濃度10%の牛胎児血清(Fetal Bovine Serum(FBS))を加えたもの〕を添加して、CHO細胞を細胞密度1.25×104cells/cm2で播種し、温度37℃、CO2濃度5%に設定したCO2インキュベータに入れ、3週間培養した(繰り返し試料数N=3)。
3週間の培養後に、トリプシン処理により細胞を回収し、トリパンブルー(DSファーマ社製)を添加して死細胞を染色して、Thoma型血球計算板(エルマ社製、届出番号13B1X90004000005)を用いて、生細胞数を計数した。
実施例9において、培養容器として、ポリスチレン製の12ウェルプレートの各ウェル内に、内径20mm、厚み1mm、長さ18mmのパイレックス(登録商標)製ガラス筒(1430R製カップと同じサイズのガラス筒)を入れたもの(「ポリスチレン製プレート」という)を使用したことを除き、実施例9と同様にして培養し、生細胞数を計数した。
図6に示すように、ポリスチレン製プレートに比較して、1430R製カップは、約1.7倍の生細胞を維持する効果を有することが分かる。
実施例9において、CHO細胞に代えてVERO細胞を使用したことと、培地としてMEM培地(ナカライ社製)に終濃度10%の牛血清(Calf Serum(CS))を加えたものを用いたことを除き、実施例9と同様にして1430R製カップを用いて培養し、生細胞数を計数した。
実施例10において、1430R製カップに代えてポリスチレン製プレートを用いたことを除き、実施例10と同様にして培養し、生細胞数を計数した。
図7に示すように、CHO細胞と同様にVERO細胞に対しても、ポリスチレン製プレートに比較して、1430R製カップは、約1.7倍の生細胞を維持する効果を有することが分かる。
実施例9と同様にして1430R製カップを用いてCHO細胞を3週間培養した後、LDH測定キット(タカラバイオ社製)を用いて培養液中の乳酸デヒロドゲナーゼの酵素活性(LDH活性)を測定することにより、細胞内からの漏洩を調べた。
実施例11において、1430R製カップに代えて、表面親水化1430R製カップを用いたこと以外は、実施例11と同様にして細胞を培養し、LDH活性を測定した。
実施例11において、1430R製カップに代えて、ポリスチレン製プレートを用いたこと以外は、実施例11と同様にして細胞を培養し、LDH活性を測定した。
図8に示すように、表面親水化1430R製カップを用いたときは、ポリスチレン製プレートを用いたときよりも40%程度漏洩物が少なく、1430R製カップを用いたときは、ポリスチレン製プレートを用いたときよりも60%程度漏洩物が少なかった。
実施例10と同様にして1430R製カップを用いてVERO細胞を3週間培養した後、LDH測定キット(タカラバイオ社製)を用いて、培養液中のLDHの酵素活性を測定することにより、細胞内からの漏洩を調べた。
〔実施例14〕
実施例13において、1430R製カップに代えて、表面親水化1430R製カップを用いたこと以外は、実施例13と同様にして細胞を培養し、LDH活性を測定した。
実施例13において、1430R製カップに代えて、ポリスチレン製プレートを用いたこと以外は、実施例13と同様にして細胞を培養し、LDH活性を測定した。
図9に示すように、VERO細胞においては、表面親水化1430R製カップを用いたときは、ポリスチレン製プレートを用いたときよりも20%程度漏洩物が少なく、1430R製カップを用いたときは、ポリスチレン製プレートを用いたときよりも50%程度漏洩物が少なかった。
上記のように、細胞の種類によらず、脂環構造含有重合体成形体の細胞内容物の漏洩の抑制効果が確認された。
実施例2において、培養期間を2週間としたこと以外は、実施例2と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
製造例2において、EOG滅菌処理に代えて、γ線滅菌処理を施したこと以外は、製造例2と同様にして培養容器を得た。
この培養容器を用いたこと以外は、実施例15と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
製造例2において、EOG滅菌処理に代えて、蒸気滅菌処理を施したこと以外は、製造例2と同様にして培養容器を得た。
この培養容器を用いたこと以外は、実施例15と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
実施例15において、ベクトンデッキンソン製のFALCON容器(γ線滅菌済み)を用いたこと以外は、実施例15と同様にして培養を行い、ERKのリン酸化の分析を行った。
比較対照のFALCON容器を用いたときのp44 ERK、及びp42 ERKの値を100とした相対値として、EOG滅菌処理容器、γ線滅菌処理容器、及び蒸気滅菌処理容器を用いたときの値をそれぞれ求め、p44の活性化の比較を図10に、p42の活性化の比較を図11に示した。
p44 ERKの活性化は、FALCON容器に比較して、1430製容器の方が高い。また、滅菌方法を比較すると、EOG滅菌処理が最も活性が高い結果であることが分かる(図10)。
p42 ERKの活性化においても、FALCON容器に比較して、1430製容器の方が高い。また、滅菌方法を比較すると、EOG滅菌処理が最も活性が高い結果であることが分かる(図11)。
本発明を利用することで、組換え医薬品生産などで細胞培養を利用する際に、細胞を長期間維持できて生産を持続させることができると考えられる。さらに、細胞内成分の漏洩が少ないので、組換え医薬品を精製する工程負荷を少なくすることができ、結果として、生産効率が良くなり、経済性改善に貢献できる。
組換え医薬品製造において、細胞内からの漏洩物がより少なくできるので、医薬品製品から未知の成分の混入リスクを低減でき、副作用リスクも低減することが期待される。
ERKなどの活性化により、細胞の分化が効率よくなることも期待できるので、再生医療などに対して、効率よく、短期間に、目的の細胞を分化誘導することができる。
Claims (2)
- ノルボルネン系重合体成形体又はノルボルネン系重合体の水素化物成形体からなる、培養細胞中の細胞内ERKのリン酸化亢進剤。
- ノルボルネン系重合体成形体又はノルボルネン系重合体の水素化物成形体からなる、培養細胞中の細胞内AKTのリン酸化亢進剤。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014130943 | 2014-06-26 | ||
JP2014130943 | 2014-06-26 | ||
JP2015023741 | 2015-02-10 | ||
JP2015023741 | 2015-02-10 | ||
PCT/JP2015/068154 WO2015199118A1 (ja) | 2014-06-26 | 2015-06-24 | 培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016005123A Division JP2016146819A (ja) | 2014-06-26 | 2016-01-14 | 培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、および細胞の培養方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP5958658B2 true JP5958658B2 (ja) | 2016-08-02 |
JPWO2015199118A1 JPWO2015199118A1 (ja) | 2017-04-20 |
Family
ID=54938197
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015548089A Active JP5958658B2 (ja) | 2014-06-26 | 2015-06-24 | 培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤 |
JP2016005123A Pending JP2016146819A (ja) | 2014-06-26 | 2016-01-14 | 培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、および細胞の培養方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016005123A Pending JP2016146819A (ja) | 2014-06-26 | 2016-01-14 | 培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、および細胞の培養方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JP5958658B2 (ja) |
TW (1) | TW201604279A (ja) |
WO (1) | WO2015199118A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6806058B2 (ja) * | 2015-07-16 | 2021-01-06 | 日本ゼオン株式会社 | 細胞外マトリックス産生促進方法、細胞の培養方法、及び細胞外マトリックス産生促進剤 |
EP3399023A4 (en) * | 2015-12-28 | 2019-06-05 | Zeon Corporation | METHOD FOR PROMOTING THE DIFFERENTIATION OF CULTURED CELLS AND CULTURED CELL DIFFERENTIATION PROMOTING THE MEDIUM |
JP6299816B2 (ja) * | 2016-07-26 | 2018-03-28 | サミー株式会社 | 遊技機 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3191179B2 (ja) * | 1992-09-01 | 2001-07-23 | コニカ株式会社 | 画像記録媒体及び画像記録方法 |
JP2008017839A (ja) * | 2006-06-16 | 2008-01-31 | Nipro Corp | 細胞培養容器、その製造方法、及び細胞培養方法 |
WO2008023771A1 (fr) * | 2006-08-23 | 2008-02-28 | Takara Bio Inc. | RÉcipient DE CULTURE, ET PROCÉDÉ D'INTRODUCTION DE GÈNE ET PROCÉDÉ DE CULTURE CELLULairE UTILISANT LE RÉcipient |
JP2008048651A (ja) * | 2006-08-23 | 2008-03-06 | Takara Bio Inc | 遠心用袋状容器及び同袋状容器を使用した遺伝子導入方法 |
JP2009027944A (ja) * | 2007-07-25 | 2009-02-12 | Fukoku Co Ltd | 接着性細胞培養用袋状容器 |
JP2009106160A (ja) * | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Nipro Corp | 細胞培養容器及び細胞培養方法 |
WO2011105568A1 (ja) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | 小太郎漢方製薬株式会社 | 学習・記憶障害および運動障害などを伴う中枢神経変性疾患を改善する乾燥植物組織および植物組織抽出物ならびにこれらを含有する医薬品および食品 |
WO2011162317A1 (ja) * | 2010-06-25 | 2011-12-29 | 日本臓器製薬株式会社 | 被検物質の判定又は評価方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3191179U (ja) * | 2014-03-25 | 2014-06-12 | 株式会社精工技研 | 培養容器 |
-
2015
- 2015-06-24 WO PCT/JP2015/068154 patent/WO2015199118A1/ja active Application Filing
- 2015-06-24 JP JP2015548089A patent/JP5958658B2/ja active Active
- 2015-06-25 TW TW104120468A patent/TW201604279A/zh unknown
-
2016
- 2016-01-14 JP JP2016005123A patent/JP2016146819A/ja active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3191179B2 (ja) * | 1992-09-01 | 2001-07-23 | コニカ株式会社 | 画像記録媒体及び画像記録方法 |
JP2008017839A (ja) * | 2006-06-16 | 2008-01-31 | Nipro Corp | 細胞培養容器、その製造方法、及び細胞培養方法 |
WO2008023771A1 (fr) * | 2006-08-23 | 2008-02-28 | Takara Bio Inc. | RÉcipient DE CULTURE, ET PROCÉDÉ D'INTRODUCTION DE GÈNE ET PROCÉDÉ DE CULTURE CELLULairE UTILISANT LE RÉcipient |
JP2008048651A (ja) * | 2006-08-23 | 2008-03-06 | Takara Bio Inc | 遠心用袋状容器及び同袋状容器を使用した遺伝子導入方法 |
JP2009027944A (ja) * | 2007-07-25 | 2009-02-12 | Fukoku Co Ltd | 接着性細胞培養用袋状容器 |
JP2009106160A (ja) * | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Nipro Corp | 細胞培養容器及び細胞培養方法 |
WO2011105568A1 (ja) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | 小太郎漢方製薬株式会社 | 学習・記憶障害および運動障害などを伴う中枢神経変性疾患を改善する乾燥植物組織および植物組織抽出物ならびにこれらを含有する医薬品および食品 |
WO2011162317A1 (ja) * | 2010-06-25 | 2011-12-29 | 日本臓器製薬株式会社 | 被検物質の判定又は評価方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6015046394; ALDO F.et al.: 'The effect of alternative neuronal differentiation pathways on PC12 cell adhesion and neurite alignm' Biomaterials Vol. 31, No. 9, 201003, pp. 2565-73. * |
JPN6015046395; BAI B.,et al.: 'Activation of the ERK1/2 Signaling Pathway during the Osteogenic Differentiation of Mesenchymal Stem' BioMed Res Int (Web) Vol.2013 No.Tissue Engineering, 2013, Page.361906 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2016146819A (ja) | 2016-08-18 |
TW201604279A (zh) | 2016-02-01 |
JPWO2015199118A1 (ja) | 2017-04-20 |
WO2015199118A1 (ja) | 2015-12-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102412034B1 (ko) | 배양 세포의 분화 촉진 방법 및 배양 세포 분화 촉진제 | |
KR102470046B1 (ko) | 접착형 세포의 배양 방법, 배양 용기 및 단백질의 생산 방법 | |
JP5958658B2 (ja) | 培養細胞内のerkまたはaktのリン酸化亢進方法、細胞の培養方法、およびリン酸化亢進剤 | |
JP2018201403A (ja) | 幹細胞の培養方法 | |
JP2019129748A (ja) | 培養容器 | |
WO2018066512A1 (ja) | 幹細胞の分離方法、分化誘導方法及び細胞培養容器の使用 | |
JP2018201394A (ja) | 細胞シートの製造方法 | |
WO2017115706A1 (ja) | 培養細胞の分化促進方法及び培養細胞分化促進剤 | |
JP7035616B2 (ja) | 人工多能性幹細胞の分化誘導方法 | |
JP6716887B2 (ja) | 接着型細胞の培養方法、及びタンパク質の産生方法 | |
JP6806058B2 (ja) | 細胞外マトリックス産生促進方法、細胞の培養方法、及び細胞外マトリックス産生促進剤 | |
JP6973082B2 (ja) | 接着型細胞の培養方法 | |
JP7268439B2 (ja) | 多能性幹細胞の分化誘導方法 | |
JP6988480B2 (ja) | 浮遊培養馴化接着型細胞の調製方法、接着型上皮細胞の上皮間葉転換誘導方法、及びそれらの利用 | |
TWI727925B (zh) | 貼附型細胞的培養方法、培養容器及蛋白質的產生方法 | |
CN111989405A (zh) | 心脏毒性评价方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160524 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160606 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5958658 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |