JP5952309B2 - Exosome検出用モノクローナル抗体 - Google Patents
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<1> 受託番号FERM BP−11519として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD9−12A12抗体)もしくはその断片であって配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号113〜195を認識し、CD9に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
受託番号FERM BP−11520として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−8A12抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、及び
受託番号FERM BP−11521として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−13C8抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片
からなる群より選ばれる、Exosome検出又は捕捉用モノクローナル抗体。
<2> 受託番号FERM BP−11519として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD9−12A12抗体)もしくはその断片であって配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号113〜195を認識し、CD9に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
受託番号FERM BP−11520として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−8A12抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、及び
受託番号FERM BP−11521として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−13C8抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
からなる群より選ばれる同一又は二種の、抗体もしくはその抗体断片を組み合わせてなる、Exosome検出又は捕捉に用いるための、モノクローナル抗体もしくはその抗体断片のセット。
<3> 固相抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片であるセット、
固相抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD63−13C8抗体又はその抗体断片であるセット、
固相抗体がCD63−8A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片であるセット、及び
固相抗体がCD63−8A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD63−13C8抗体又はその抗体断片であるセット、
からなる群より選ばれる、前記<2>記載のセット。
<4> Exosome検出用である、前記<2>又は<3>記載のセット。
<5> 受託番号FERM BP−11519として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD9−12A12抗体)もしくはその断片であって配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号113〜195を認識し、CD9に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
受託番号FERM BP−11520として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−8A12抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、及び
受託番号FERM BP−11521として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−13C8抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片
からなる群より選ばれる抗体又はその抗体断片と、疾患特異的膜タンパク質抗体又はその抗体断片とを組み合わせてなる、疾患特異的なExosome検出用モノクローナル抗体のセット。
<6> 前記<2>〜<4>いずれか記載のセットのモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む、癌又は免疫系疾患の診断キット。
<7> 前記<5>記載のセットのモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む、癌又は免疫系疾患の診断キット。
<8> 前記<5>記載のセットを含有する、癌又は免疫系疾患の診断キット。
<9> 被検者由来の生体試料と、前記<1>記載のモノクローナル抗体とを接触させてExosomeを捕捉して、該ExosomeのmiRNAを検出する方法。
<10> 被検者由来の生体試料と、前記<2>〜<4>いずれか記載のセットのモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する方法。
<11> 被検者が癌又は免疫系疾患を発症しているか否かを判定するための方法であって、
工程(I):被検者由来の生体試料と、前記<2>〜<4>いずれか記載のセットのモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する工程、及び;
工程(II):前記工程(I)で測定されたシグナル強度と、対照者におけるシグナル強度とを対比して、前記被検者におけるシグナル強度が対照者におけるシグナル強度より強いと認められる場合に、前記被検者が癌又は免疫系疾患を発症していると判定する工程
を含む、癌又は免疫系疾患の判定方法。
<12> 抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の薬効評価方法であって、
工程(A):抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与前及び投与後の被検者由来の生体試料と、前記<2>〜<4>いずれか記載のセットのモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する工程、及び;
工程(B):前記抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与後の被検者由来の生体試料における該複合体由来のシグナル強度が、前記抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与前の被検者由来の生体試料における該複合体由来のシグナル強度より弱いと認められる場合に、抗癌剤又は抗免疫系疾患薬が薬効を示している可能性が高いと判定する工程
を含む、抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の薬効評価方法。
(抗原の調製)
本発明のモノクローナル抗体は、抗原を下記のように設計して調製したものであることから、抗原に対する感度及び特異性に優れる。
本発明のExosome検出用モノクローナル抗体(以下、単に、本発明のモノクローナル抗体ともいう)は、特に限定されるものではなく、公知の方法、例えば、K.Watanabe et al.,Vasohibin as an endothelium−derived negative feedback regulator of angiogenesis,J.Clin.Invest.114(2004),898−907に記載した方法に従って調製することができる。
FERM BP−11519(産生されるモノクローナル抗体がCD9−12A12抗体、表示CD9:12A12、受託日2011年11月8日)
FERM BP−11520(産生されるモノクローナル抗体がCD63−8A12抗体、表示CD63:8A12、受託日2011年11月8日)
FERM BP−11521(産生されるモノクローナル抗体がCD63−13C8抗体、表示CD63:13C8、受託日2011年11月8日)。
NITE BP−1480(産生されるモノクローナル抗体がCD81−4G6抗体、表示CD81−4G6、受託日2012年12月12日)
NITE BP−1481(産生されるモノクローナル抗体がCD81−6D12抗体、表示CD81−6D12、受託日2012年12月12日)
NITE BP−1482(産生されるモノクローナル抗体がCD81−12C4抗体、表示CD81−12C4、受託日2012年12月12日)
また、本発明は、前記本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を少なくとも1種含むモノクローナル抗体のセットを提供する。かかるセットを用いることにより、試料中のExosomeの捕捉が感度良く行なえるため、例えば、サンドイッチELISA法による定量精度が向上する。
態様1:本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を2種以上含むセット
態様2:本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片と疾患特異的膜タンパク質抗体又はその抗体断片を含むセット
(抗体の2次評価法)
CD9又はCD63を強制発現させたVLPs(Virus−Like Particles)に任意の試験抗体を作用させて、試験抗体のCD9又はCD63への結合性を評価することができる。
Exosomeを捕捉する際に、本発明のモノクローナル抗体が好適に用いられる。例えば、本発明のモノクローナル抗体をビオチン化してExosomeと反応させた後、ストレプトアビジン固相磁性ビーズを用いることにより単離が可能となる。
Exosomeは、種々の細胞、例えば免疫系の細胞や各種癌細胞から分泌されることから、Exosome由来のmiRNAを検出することができれば、それを解析することにより生理現象や各種疾患の判定が可能になる。
本発明のモノクローナル抗体のセットを用いて免疫測定を行う。免疫測定法としては、酵素免疫測定法(EIA)、酵素イムノメトリックアッセイ法(ELISA)、蛍光免疫測定法(FIA)、放射線免疫測定法(RIA)、発光免疫測定法、イムノブロット法、ウェスタンブロット法等が挙げられ、簡便に感度よく抗体を検出し得ることから、ELISA法が好ましい。
また、本発明は、癌又は免疫系疾患の診断方法(発症予測方法)を提供する。本発明の態様1のセットは、生体内に分布するExosomeを良好な感度及び特異性で検出することが可能である。態様2のセットは、疾患特異的なExosomeを良好な感度で検出することが可能である。Exosomeは、種々の細胞、例えば免疫系の細胞や各種癌細胞から分泌されることから、癌又は免疫系疾患を発症している場合には、生体内のExosome量が多くなっていると考えられる。また、癌細胞などは、正常細胞と比べ細胞表面に変化が起き、CD9やCD63などの膜タンパク質の発現量が亢進する可能性もある。従って、前記Exosomeに由来するシグナル量を指標とすることにより癌又は免疫系疾患の診断(発症予測)が可能となり、さらに、態様2の場合は癌又は免疫系疾患の特定を行うことも可能であり、前記方法は、診断方法(発症関連因子の測定方法又は判定方法)としても使用可能である。
工程(I):被検者由来の生体試料と、前記本発明のセットのモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する工程、及び;
工程(II):前記工程(I)で測定されたシグナル強度と、対照者におけるシグナル強度とを対比して、前記被検者におけるシグナル強度が対照者におけるシグナル強度より強いと認められる場合に、前記被検者が癌又は免疫系疾患を発症していると判定する工程を含む、癌又は免疫系疾患の判定方法を含む。
本発明の別の態様では、癌又は免疫系疾患の診断を行うためのキットが提供される。
また、本発明の別の態様では、抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の薬効評価方法が提供される。
工程(A):抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与前及び投与後の被検者由来の生体試料と、本発明のモノクローナル抗体のセットに含まれるモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する工程
工程(B):前記抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与後の被検者由来の生体試料における該複合体由来のシグナル強度が、前記抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与前の被検者由来の生体試料における該複合体由来のシグナル強度より弱いと認められる場合に、抗癌剤又は抗免疫系疾患薬が薬効を示している可能性が高いと判定する工程
を含む。
本発明の別の態様では、抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の薬効評価を行うためのキットが提供される。
(抗原の調製)
CD9及びCD63タンパクの部分ペプチド、即ち、CD9ポリペプチドのArg36−Asn50、CD63ポリペプチドのVal38−Pro54の各アミノ末端にシステイン残基を付加した2種類のペプチドをシグマアルドリッチ社にて合成した。これらをマレイミド化したKLH〔Keyhole Limpet Hemocyanin、Imject(登録商標)Maleimide Activated mcKLH、サーモサイエンティフィック社製〕を用いて、ペプチドのSH基を介してハプテン抗原を調製した。図2Aにテトラスパニンファミリー(CD9、CD63)の構造、図2Bに抗原を模式的に示した。また、図3Aにペプチドの配列を示した。
CD9及びCD63のハプテン抗原、Fc融合タンパク質を、初回免疫には完全アジュバントと、2回目以降は不完全アジュバントと等量混和することにより、免疫原としての乳剤を調製した。
抗血清とハイブリドーマ上清の抗体価の評価(1次評価)は下記に記述するELISA法にて行った。即ち、ヤギ抗マウスIgG抗体を固相した96穴マイクロプレートに、抗血清又はハイブリドーマ上清を添加し、さらにビオチン化CD9、CD63タンパク質とHRP標識ストレプトアビジンを混合攪拌後、室温で2時間あるいは4℃で終夜反応させた。反応後、洗浄液(0.01% Tween20と0.1% ProClin 150を含む生理食塩水)にて3回洗浄を行い、100μL TMB試薬を加え、攪拌後15〜20分間静置し、1N 硫酸溶液50μLを添加して反応を停止させた。450nmにおける吸光度をARVO MX(Perkin Elmer社製)にて測定し、抗血清やハイブリドーマを未添加の場合に得られるシグナルの3倍を超えるシグナル強度を示す場合を陽性と判断した。
インビトロジェン社のMembranePro機能性タンパク質発現キットを用い、CD9又はCD63とI型膜タンパク質TEM7とを共発現させたVLPs(virus−like particles)を調製した。具体的には、CD9又はCD63とTEM7遺伝子をpEF V5−His TA Vector Kitに組み込んだプラスミドベクターを、293FT細胞(インビトロジェン社製)にLipofectamine 2000にてトランスフェクトした。トランスフェクト後の培養上清にPrecipitation Mix試薬を添加し、VLPsを沈殿させた。VLPsにおけるTEM7及び各CD抗原の発現はWestern blotting(WB)により確認した(結果示さず)。
血中Exosomeの測定が可能となるサンドイッチELISA法における抗体の組合せを探索するため、前記実施例1で得られた全てのモノクローナル抗体に関して固相抗体及び標識抗体を調製して、血中Exosome測定用のサンドイッチELISAを行った。
固相抗体:CD9−12A12抗体、標識抗体:CD9−12A12抗体
固相抗体:CD63−8A12抗体、標識抗体:CD63−13C8抗体
したがって、上記の実験結果から、以下の組み合わせも、同様に良い組み合わせであることが十分に予測される。
固相抗体:CD9−12A12抗体、標識抗体:CD63−13C8抗体、
固相抗体:CD63−8A12抗体、標識抗体:CD9−12A12抗体
実施例3で選択した最も良い抗体の組合せについて、さらに感度を上げるため、抗体に直接標識を行うことにより調製した標識抗体を用いてELISA法を構築した。
健常者、乳癌患者、及び大腸癌患者各10名の血清中Exosome量を、固相抗体:CD9−12A12抗体、標識抗体:CD9−12A12抗体の組合せ、固相抗体:CD63−8A12抗体、標識抗体:CD63−13C8抗体の組合せを用いて、実施例4と同様にしてExosome ELISAにて測定した。結果を図9に示す。なお、群間比較はt検定により行なった。
上記抗CD9、抗CD63抗体と疾患特異的膜タンパク質に対する抗体を組み合わせ、癌に関連したExosomeの定量の可能性を調べた。具体的には、癌に関連した膜タンパク質抗体としてEpCAM抗体を選択し、AbCAM社製の抗体(クローンAUA1)を用いた。
(抗原の調製)
さらに抗CD81抗体を作製するため、CD81の小ループペプチド、即ち、CD81ポリペプチドのArg36−Ala54のアミノ末端にシステイン残基を付加したペプチドをシグマアルドリッチ社にて合成した。これをマレイミド化したKLH〔Keyhole Limpet Hemocyanin、Imject(登録商標)Maleimide Activated mcKLH、サーモサイエンティフィック社製〕を用いて、ペプチドのSH基を介してハプテン抗原を調製した。図2Aにテトラスパニンファミリー(CD9、CD63及びCD81)の構造、図2Bに抗原を模式的に示した。また、図12Aにペプチドの配列を示した。
CD81のハプテン抗原、Fc融合タンパク質を、初回免疫には完全アジュバントと、2回目以降は不完全アジュバントと等量混和することにより、免疫原としての乳剤を調製した。
抗血清とハイブリドーマ上清の抗体価の評価(1次評価)は下記に記述するELISA法にて行った。即ち、ヤギ抗マウスIgG抗体を固相した96穴マイクロプレートに、抗血清又はハイブリドーマ上清を添加し、さらにビオチン化CD81タンパク質とHRP標識ストレプトアビジンを混合攪拌後、室温で2時間あるいは4℃で終夜反応させた。反応後、洗浄液(0.01% Tween20と0.1% ProClin 150を含む生理食塩水)にて3回洗浄を行い、100μL TMB試薬を加え、攪拌後15〜20分間静置し、1N 硫酸溶液50μLを添加して反応を停止させた。450nmにおける吸光度をARVO MX(Perkin Elmer社製)にて測定し、抗血清やハイブリドーマを未添加の場合に得られるシグナルの3倍を超えるシグナル強度を示す場合を陽性と判断した。
実施例1及び7で得られた抗CD9、抗CD63及び抗CD81モノクローナル抗体を使用したExosomeの免疫沈降による精製の可能性を調べた。なお、比較に用いた市販抗体としては、それぞれ任意の3つの市販抗体より免疫沈降能が良い抗体を予め選択して用いた。具体的には、抗CD9抗体はAbnova社の抗体(IVA50)、抗CD63抗体はExoBio社の抗体(MEM−259)及びBD社の抗体(H5C6)、抗CD81抗体はGENETEX社の抗体(1D6)を用いた。
抗CD63あるいは抗CD81抗体の場合は、1%BSAを含むPBS溶液に溶解した1μgのExosome溶液に、抗体1μgを加え、終夜4℃にて反応させた。20μLのProteinGアガロース(50% slurry)を添加した後、4℃にて2時間攪拌しながら反応させた。反応後、1%BSAを含むPBSにて2回遠心洗浄を行った後、ビーズに捕捉されたExosome上のCD63あるいはCD81量をHRP標識抗FLAG抗体用いたウエスタンブロッティング(WB)にて評価を行った。抗CD9抗体に関しては、血清100μLに1%BSAを含むPBSを100μL添加し、抗CD9抗体を固相したM280磁性ビーズを抗体1μg分となる量を添加し、4℃にて終夜反応させた。反応後、1%BSAを含むPBSにて、磁石を用いて洗浄を行い、ビーズに捕捉されたExosome上のCD9量を抗CD9抗体とHRP標識抗マウスIgG抗体を用いたWBにて評価を行った。各巧CD抗体のExosomeの免疫沈降の性能を比較した図を図13、14、15に示す。
実施例8の方法を参照にして捕捉されたExosomeから、miRNA又はタンパク質を公知の方法に従って検出する。検出したmiRNA又はタンパク質については、公知の方法に従って解析することが可能であり、それにより、生理現象の解析や特定の疾患に罹患していると判定することができる。
配列表の配列番号2は、Exosome膜タンパク質CD63ポリペプチドである。
配列表の配列番号3は、Exosome膜タンパク質CD81ポリペプチドである。
Claims (12)
- 受託番号FERM BP−11519として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD9−12A12抗体)もしくはその断片であって配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号113〜195を認識し、CD9に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
受託番号FERM BP−11520として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−8A12抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、及び
受託番号FERM BP−11521として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−13C8抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片
からなる群より選ばれる、Exosome検出又は捕捉用モノクローナル抗体。 - 受託番号FERM BP−11519として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD9−12A12抗体)もしくはその断片であって配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号113〜195を認識し、CD9に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
受託番号FERM BP−11520として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−8A12抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、及び
受託番号FERM BP−11521として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−13C8抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
からなる群より選ばれる同一又は二種の、抗体もしくはその抗体断片を組み合わせてなる、Exosome検出又は捕捉に用いるための、モノクローナル抗体もしくはその抗体断片のセット。 - 固相抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片であるセット、
固相抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD63−13C8抗体又はその抗体断片であるセット、
固相抗体がCD63−8A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD9−12A12抗体又はその抗体断片であるセット、及び
固相抗体がCD63−8A12抗体又はその抗体断片、標識抗体がCD63−13C8抗体又はその抗体断片であるセット、
からなる群より選ばれる、請求項2記載のセット。 - Exosome検出用である、請求項2又は3記載のセット。
- 受託番号FERM BP−11519として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD9−12A12抗体)もしくはその断片であって配列番号1に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号113〜195を認識し、CD9に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、
受託番号FERM BP−11520として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−8A12抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片、及び
受託番号FERM BP−11521として寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体(CD63−13C8抗体)もしくはその断片であって配列番号2に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号104〜202を認識し、CD63に特異的な結合性を有するモノクローナル抗体断片
からなる群より選ばれる抗体又はその抗体断片と、疾患特異的膜タンパク質抗体又はその抗体断片とを組み合わせてなる、疾患特異的なExosome検出用モノクローナル抗体のセット。 - 請求項2〜4いずれか記載のセットのモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む、癌又は免疫系疾患の診断キット。
- 請求項5記載のセットのモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む、癌又は免疫系疾患の診断キット。
- 請求項5記載のセットを含有する、癌又は免疫系疾患の診断キット。
- 被検者由来の生体試料と、請求項1記載のモノクローナル抗体とを接触させてExosomeを捕捉して、該ExosomeのmiRNAを検出する方法。
- 被検者由来の生体試料と、請求項2〜4いずれか記載のセットのモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する方法。
- 被検者が癌又は免疫系疾患を発症しているか否かを判定するための方法であって、
工程(I):被検者由来の生体試料と、請求項2〜4いずれか記載のセットのモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する工程、及び;
工程(II):前記工程(I)で測定されたシグナル強度と、対照者におけるシグナル強度とを対比して、前記被検者におけるシグナル強度が対照者におけるシグナル強度より強いと認められる場合に、前記被検者が癌又は免疫系疾患を発症していると判定する工程
を含む、癌又は免疫系疾患の判定方法。 - 抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の薬効評価方法であって、
工程(A):抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与前及び投与後の被検者由来の生体試料と、請求項2〜4いずれか記載のセットのモノクローナル抗体とを接触させてExosome複合体を形成させて、該複合体由来のシグナル強度を測定する工程、及び;
工程(B):前記抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与後の被検者由来の生体試料における該複合体由来のシグナル強度が、前記抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の投与前の被検者由来の生体試料における該複合体由来のシグナル強度より弱いと認められる場合に、抗癌剤又は抗免疫系疾患薬が薬効を示している可能性が高いと判定する工程
を含む、抗癌剤又は抗免疫系疾患薬の薬効評価方法。
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