JP5923984B2 - 癌の治療及び/又は予防のための医薬品 - Google Patents
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Description
本発明で用いられるCAPRIN−1に対する抗体を取得するための感作抗原として使用されるタンパク質又はその断片は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、マウス、ラット、ニワトリなど、その由来となる動物種に制限されない。しかし細胞融合に使用する親細胞との適合性を考慮して選択することが好ましく、一般的には、哺乳動物由来のタンパク質が好ましく、特にヒト由来のタンパク質が好ましい。例えば、CAPRIN−1がヒトCAPRIN−1の場合、ヒトCAPRIN−1タンパク質やその部分ペプチド、ヒトCAPRIN−1を発現する細胞などを用いることができる。
抗体は通常少なくとも2本の重鎖及び2本の軽鎖を含むヘテロ多量体糖タンパク質である。IgMは別として、2本の同一の軽(L)鎖及び2本の同一の重(H)鎖で構成される約150kDaのヘテロ四量体糖タンパク質である。典型的には、それぞれの軽鎖は1つのジスルフィド共有結合により重鎖に連結されているが、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間のジスルフィド結合の数は変動する。それぞれの重鎖及び軽鎖はまた鎖内ジスルフィド結合も有する。それぞれの重鎖は一方の端に可変ドメイン(VH領域)を有し、それにいくつかの定常領域が続く。それぞれ軽鎖は可変ドメイン(VL領域)を有し、その反対の端に1つの定常領域を有する。軽鎖の定常領域は重鎖の最初の定常領域と整列しており、かつ軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。抗体の可変ドメインは特定の領域が相補性決定領域(CDR)と呼ばれる特定の可変性を示して抗体に結合特異性を付与する。可変領域の相対的に保存されている部分はフレームワーク領域(FR)と呼ばれている。完全な重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ3つのCDRにより連結された4つのFRを含む。3つのCDRは重鎖ではそのN末から順にCDRH1,CDRH2,CDRH3、同様に軽鎖ではCDRL1,CDRL2,CDRL3と呼ばれている。抗体の抗原への結合特異性には、CDRH3が最も重要である。また、各鎖のCDRはFR領域によって近接した状態で一緒に保持され、他方の鎖からのCDRと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常領域は抗体が抗原に結合することに直接寄与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞性細胞障害活性(ADCC)への関与、Fcγ受容体への結合を介した食作用、新生児Fc受容体(FcRn)を介した半減期/クリアランス速度、補体カスケードのC1q構成要素を介した補体依存性細胞障害(CDC)を示す。
本発明における抗CAPRIN−1抗体とは、CAPRIN−1タンパク質の全長又はその断片と免疫学的反応性を有する抗体を意味する。
(j)配列番号110,111及び112を含む重鎖可変領域CDR1〜CDR3と配列番号114,115及び116を含む軽鎖可変領域CDR1〜CDR3とを含む抗体(例えば、配列番号113の重鎖可変領域及び配列番号117の軽鎖可変領域で構成される抗体)。
抗体がCAPRIN−1タンパク質に結合する能力は、実施例で述べられるようなたとえばELISA、ウエスタンブロット法、免疫蛍光及びフローサイトメトリー分析などを用いた結合アッセイを利用して特定することができる。
CAPRIN−1タンパク質を認識する抗体は、当業者に周知の方法での免疫組織化学により、外科手術の間に患者から得た組織や、自然にまたはトランスフェクション後にCAPRIN−1を発現する細胞系を接種した異種移植組織を担持する動物から得た組織から、パラホルムアルデヒドまたはアセトン固定した凍結切片またはパラホルムアルデヒドで固定したパラフィン包埋した組織切片を使用して、CAPRIN−1との反応性に関して試験することができる。
本発明は、抗CAPRIN−1抗体と、上で例示したような抗腫瘍剤とを組み合わせることを特徴とする。抗CAPRIN−1抗体と抗腫瘍剤は、それぞれ抗腫瘍活性を有するが、これらを組み合わせて癌患者に投与することによって、実施例で示される通り相乗的に顕著な抗腫瘍効果、すなわち担癌動物モデルにおいて腫瘍をほぼ完全に退縮させる効果、が得られる。このような格別な抗腫瘍効果は、腫瘍の増殖が経時的に漸増するような、抗CAPRIN−1抗体及び抗腫瘍剤であっても、それらを併用するときに認められることから、まったく驚くべきことである。
本発明の癌の治療及び/又は予防用医薬品の標的は、CAPRIN−1遺伝子を発現する癌(細胞)であれば特に限定されない。
本発明の癌の治療及び/又は予防用医薬品を構成する有効成分、すなわち上記抗体もしくはそのフラグメント及び上記抗腫瘍剤は、それらを一緒に混合した医薬組成物或いはそれらの別個の医薬組成物として、当業者に公知の方法で製剤化することが可能である。
本発明の癌の治療及び/又は予防剤による癌の治療及び/又は予防は、上記の医薬組成物として投与することの他に様々な形式を含む。例えば、本発明の癌の治療及び/又は予防剤の各有効成分は、同時に、または順序に従って個別に投与することができる。具体例として、約3週間までの時間間隔内で、すなわち1番目の有効成分を投与した直後から約3週間までに2番目の有効成分を投与することができる。その際、外科的処置に引き続いて実施しても、1番目の薬剤と2番目の薬剤の投与間に外科的処置を実施してもよい。また、本発明の癌の治療及び/又は予防剤を、複数の投与サイクルに従って投与してもよい。例えば、本発明の癌の治療及び/又は予防剤の各有効成分の同時投与を実施した場合、両方の有効成分を含む医薬組成物を約2日から約3週間を1サイクルとして投与する。その後は該治療サイクルを担当する医師の判断に従って、必要に応じて繰り返すことも可能である。同様に順序に従った処方を計画する場合、それぞれの個々の薬剤の投与期間が同じ期間に及ぶように調節する。サイクル間の間隔は0〜2ヶ月まで変えることができる。本発明の癌の治療及び/又は予防剤の各有効成分の投与量は、医薬組成物での各有効成分の投与量と同様に設定することができる。
本発明の癌の治療及び/又は予防用の医薬品は、製薬キットの形態であってもよい。製薬キットとは、癌を治療または予防する方法において、有効成分である上記抗CAPRIN−1抗体もしくはそのフラグメント及び上記抗腫瘍剤を別個の医薬組成物の形態で使用するためのパッケージであり、該パッケージには各有効成分を投与するための指示書が含まれる。製薬キットに含まれる癌の治療及び/又は予防用の上記医薬組成物の各有効成分は、各有効成分を一緒に又は別々に投与できるようにそれぞれが上記の通り製剤化された医薬組成物の形態でありうる。また、製薬キットには、各有効成分を上記投与方法に従って投与できるよう、1つまたは複数回の用量に十分な量の有効成分が含まれる。
(1)cDNAライブラリーの作製
健常な犬の精巣組織から酸グアニジウム−フェノール−クロロホルム法(Acid guanidium−Phenol−Chloroform法)により全RNAを抽出し、Oligotex−dT30 mRNA purification Kit(宝酒造社製)を用いてキット添付のプロトコルに従ってポリA RNAを精製した。
上記作製したイヌ精巣cDNAファージライブラリーを用いて、イムノスクリーニングを行った。具体的にはΦ90×15mmのNZYアガロースプレートに2210クローンとなるように宿主大腸菌(XL1−Blue MRF’)に感染させ、42℃、3〜4時間培養し、溶菌斑(プラーク)を作らせ、IPTG(イソプロピル−β−D−チオガラクトシド)を浸透させたニトロセルロースメンブレン(Hybond C Extra: GE Healthcare Bio−Scinece社製)でプレートを37℃で4時間覆うことによりタンパク質を誘導・発現させ、メンブレンにタンパク質を転写した。その後メンブレンを回収し0.5%脱脂粉乳を含むTBS(10mM Tris−HCl, 150mM NaCl pH7.5)に浸し4℃で一晩振盪することによって非特異反応を抑制した。このフィルターを500倍希釈した患犬血清と室温で2〜3時間反応させた。
上記方法により単離した5個の陽性クローンを塩基配列解析に供するため、ファージベクターからプラスミドベクターに転換する操作を行った。具体的には宿主大腸菌(XL1−Blue MRF’)を吸光度OD600が1.0となるよう調製した溶液200μlと、精製したファージ溶液250μlさらにExAssist helper phage(STRATAGENE社製)1μlを混合した後37℃で15分間反応後、LB培地を3ml添加し37℃で2.5〜3時間培養を行い、直ちに70℃の水浴にて20分間保温した後、4℃、1000×g、15分間遠心分離を行い上清をファージミド溶液として回収した。次いでファージミド宿主大腸菌(SOLR)を吸光度OD600が1.0となるよう調製した溶液200μlと、精製したファージ溶液10μlを混合した後37℃で15分間反応させ、50μlをアンピシリン(終濃度50μg/ml)含有LB寒天培地に播き37℃一晩培養した。トランスフォームしたSOLRのシングルコロニーを採取し、アンピシリン(終濃度50μg/ml)含有LB培地37℃にて培養後、QIAGEN plasmid Miniprep Kit(キアゲン社製)を使って目的のインサートを持つプラスミドDNAを精製した。
上記方法により得られた遺伝子に対しイヌ及びヒトの正常組織及び各種細胞株における発現をRT−PCR法により調べた。逆転写反応は以下の通り行なった。すなわち、各組織5mg及び各細胞株5〜10×106個の細胞からTRIZOL試薬(invitrogen社製)を用いて添付のプロトコルに従い全RNAを抽出した。この全RNAを用いてSuperscript First−Strand Synthesis System for RT−PCR(invitrogen社製)により添付のプロトコルに従いcDNAを合成した。PCR反応は、取得した遺伝子特異的なプライマー(配列番号33及び34に記載)を用いて以下の通り行った。すなわち、逆転写反応により調製したサンプル0.25μl、上記プライマーを各2μM、0.2mM各dNTP、0.65UのExTaqポリメラーゼ(宝酒造社製)となるように各試薬と添付バッファーを加え全量を25μlとし、Thermal Cycler(BIO RAD社製)を用いて、94℃−30秒、60℃−30秒、72℃−30秒のサイクルを30回繰り返して行った。なお、上記遺伝子特異的プライマーは、配列番号5の塩基配列(イヌCAPRIN−1遺伝子)中の206番〜632番及び配列番号1の塩基配列(ヒトCAPRIN−1遺伝子)中の698番〜1124番塩基の領域を増幅するものであった。比較対照のため、GAPDH特異的なプライマー(配列番号35及び36に記載)も同時に用いた。その結果、図1に示すように、健常なイヌ組織では精巣に強い発現が見られ、一方イヌ乳癌及び腺癌組織で発現が見られた。さらに、取得した遺伝子のヒト相同因子の発現を併せて確認したところ、イヌCAPRIN−1遺伝子と同様、正常組織で発現が確認できたのは精巣のみだったが、癌細胞では乳癌、脳腫瘍、白血病、肺癌、食道癌細胞株など、多種類の癌細胞株で発現が検出され、特に多くの乳癌細胞株で発現が確認された。この結果から、CAPRIN−1は精巣以外の正常組織では発現が見られず、一方、多くの癌細胞で発現しており、特に乳癌細胞株に発現していることが確認された。
(5)−1 マウス及びイヌ正常組織におけるCAPRIN−1の発現
マウス(Balb/c、雌)及びイヌ(ビーグル犬、雌)をエーテル麻酔下及びケタミン/イソフルラン麻酔下で放血させ、開腹後、各臓器(胃、肝臓、眼球、胸腺、筋肉、骨髄、子宮、小腸、食道、心臓、腎臓、唾液腺、大腸、乳腺、脳、肺、皮膚、副腎、卵巣、膵臓、脾臓、膀胱)をそれぞれPBSの入った10cmディッシュに移した。PBS中で各臓器を切り開き、4%paraformaldehyde(PFA)を含む0.1M リン酸緩衝液(pH7.4)で一晩還流固定した。還流液を捨て、PBSで各臓器の組織表面をすすぎ、10% ショ糖を含むPBS溶液を50ml容の遠心チューブに入れ、その中に各組織を入れて4℃で2時間ローターを用いて振とうした。20% ショ糖を含むPBS溶液に入れ替え、4℃で組織が沈むまで静置後、30% ショ糖を含むPBS溶液に入れ替え、4℃で組織が沈むまで静置した。組織を取り出し、必要な部分を手術用メスで切りだした。次に、OCTコンパウンド(Tissue Tek社製)をかけて組織表面になじませた後、クライオモルドに組織を配置した。ドライアイスの上にクライオモルドをおいて急速凍結させた後、クライオスタット(LEICA社製)を用いて10〜20μmに薄切し、スライドガラスごとヘアードライアーで30分間風乾し、薄切組織がのったスライドガラス作製した。次にPBS−T(0.05% Tween20を含む生理食塩水)を満たした染色瓶に入れて5分ごとにPBS−Tを入れ替える操作を3回行った。切片周囲の余分な水分をキムワイプでふき取り、DAKOPEN(DAKO社製)で囲んだ後、ブロッキング液として、マウス組織はMOMマウスIgブロッキング試薬(VECTASTAIN社製)を、イヌ組織は10% FBSを含むPBS−T溶液をそれぞれのせ、モイストチャンバー上で室温で1時間静置した。次に、実施例3で作製した癌細胞表面に反応する、配列番号:73の重鎖可変領域と配列番号:77の軽鎖可変領域を有するCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体(モノクローナル抗体#6)をブロッキング液で10μg/mlに調製した溶液をのせ、モイストチャンバー内で4℃下で一晩静置した。PBS−Tで10分間3回洗浄を行った後、ブロッキング液で250倍に希釈したMOMビオチン標識抗IgG抗体(VECTASTAIN社製)をのせ、モイストチャンバー内で室温で1時間静置した。PBS−Tで10分間3回洗浄を行った後、アビジンービオチンABC試薬(VECTASTAIN社製)をのせ、モイストチャンバー内で室温で5分間静置した。PBS−Tで10分間3回洗浄を行った後、DAB発色液(DAB 10mg+30% H2O2 10μl/0.05M Tris−HCl(pH7.6)50ml)をのせ、モイストチャンバー内で室温で30分間静置した。蒸留水でリンスし、ヘマトキシリン試薬(DAKO社製)を載せて室温で1分間静置後、蒸留水でリンスした。70%、80%、90%、95%、100%の各エタノール溶液に順番に1分間ずつ入れた後、キシレン中で一晩静置した。スライドガラスを取り出し、Glycergel Mounting Medium(DAKO社製)で封入後、観察を行った。その結果、CAPRIN−1は、唾液腺、腎臓、結腸、胃の各組織において細胞内で僅かに発現が認められたが、細胞表面での発現は認められず、また、その他の臓器由来の組織では全く発現が認められなかった。なお、本結果は、配列番号103の重鎖可変領域と配列番号107の軽鎖可変領域を有するCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体(モノクローナル抗体#9)を用いた場合も同様であった。
病理診断で悪性乳癌と診断されたイヌの凍結された乳癌組織108検体を用いて、上述と同様の方法で凍結切片スライド作製及び実施例3で作製したモノクローナル抗体#6を用いた免疫組織化学染色を行った。その結果、CAPRIN−1は108検体中100検体(92.5%)で発現が確認され、特に異型度の高い癌細胞表面に強く発現していた。なお、本結果は、実施例3で作製したモノクローナル抗体#9を用いた場合も同様であった。
パラフィン包埋されたヒト乳癌組織アレイ(BIOMAX社製)の乳癌組織188検体を用いて、免疫組織化学染色を行った。ヒト乳癌組織アレイを60℃で3時間処理後、キシレンを満たした染色瓶に入れて5分ごとにキシレンを入れ替える操作を3回行った。次にキシレンの代わりにエタノール及びPBS−Tで同様の操作を行った。0.05% Tween20を含む10mM クエン酸緩衝液(pH6.0)を満たした染色瓶にヒト乳癌組織アレイを入れ、125℃で5分間処理後、室温で40分以上静置した。切片周囲の余分な水分をキムワイプでふき取り、DAKOPENで囲み、Peroxidase Block(DAKO社製)を適量滴下した。室温で5分間静置後、PBS−Tを満たした染色瓶に入れて5分ごとにPBS−Tを入れ替える操作を3回行った。ブロッキング液として、10% FBSを含むPBS−T溶液をのせ、モイストチャンバー内で室温で1時間静置した。次に実施例4で作製した癌細胞表面に反応するモノクローナル抗体#6を5% FBSを含むPBS−T溶液で10μg/mlに調製した溶液をのせ、モイストチャンバー内で4℃で一晩静置し、PBS−Tで10分間3回洗浄を行った後、Peroxidase Labelled Polymer Conjugated(DAKO社製)適量滴下し、モイストチャンバー内で室温で30分間静置した。PBS−Tで10分間3回洗浄を行った後、DAB発色液(DAKO社製)をのせ、室温で10分程度静置した後、発色液を捨て、PBS−Tで10分間3回洗浄を行った後、蒸留水でリンスし、70%、80%、90%、95%、100%の各エタノール溶液に順番に1分間ずつ入れた後、キシレン中で一晩静置した。スライドガラスを取り出し、Glycergel Mounting Medium(DAKO社製)で封入後、観察を行った。その結果、CAPRIN−1は全乳癌組織188検体の内、138検体(73%)で強い発現が認められた。なお、本結果は、実施例3で作製したモノクローナル抗体#2または#9を用いた場合も同様であった。
パラフィン包埋されたヒト悪性脳腫瘍組織アレイ(BIOMAX社製)の悪性脳腫瘍組織247検体を用いて、上述(5)−3と同様の方法で実施例3で作製したモノクローナル抗体#6を用いた免疫組織化学染色を行った。その結果、CAPRIN−1は全悪性脳腫瘍組織247検体の内、227検体(92%)で強い発現が認められた。なお、本結果は、実施例3で作製したモノクローナル抗体#2または#9を用いた場合も同様であった。
パラフィン包埋されたヒト乳癌転移リンパ節組織アレイ(BIOMAX社製)の乳癌転移リンパ節組織150検体を用いて、上述(5)−3と同様の方法で実施例3で作製したモノクローナル抗体#6を用いた免疫組織化学染色を行った。その結果、CAPRIN−1は全乳癌転移リンパ節組織150検体の内、136検体(90%)で強い発現が認められた。すなわち、乳癌から転移した癌組織においてもCAPRIN−1は強く発現することが判った。なお、本結果は、実施例3で作製したモノクローナル抗体#2または#9を用いた場合も同様であった。
パラフィン包埋されたヒト各種癌組織アレイ(BIOMAX社製)の検体を用いて、上述と同様の方法によって、実施例3で作製したモノクローナル抗体#6を用いた免疫組織化学染色を行った。その結果、CAPRIN−1は食道癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、腎癌、膀胱癌及び子宮頸癌で強い発現が認められた。なお、本結果は、モノクローナル抗体#2または#9を用いた場合も同様であった。
(1)組換えタンパク質の作製
配列番号1の遺伝子を基に、以下の方法にてヒト相同遺伝子の組換えタンパク質を作製した。PCRは、乳癌組織・細胞cDNAよりRT−PCR法による発現が確認できたcDNAを1μl、SacI及びXhoI制限酵素切断配列を含む2種類のプライマー(配列番号38及び及び39に記載)を各0.4μM, 0.2mM dNTP, 1.25UのPrimeSTAR HSポリメラーゼ(宝酒造社製)となるように各試薬と添付バッファーを加え全量を50μlとし、Thermal Cycler(BIO RAD社製)を用いて、98℃−10秒、68℃−2.5分のサイクルを30回繰り返すことにより行った。なお、上記2種類のプライマーは、配列番号2のアミノ酸配列全長をコードする領域を増幅するものであった。PCR後、増幅されたDNAを1% アガロースゲルにて電気泳動し、QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN社製)を用いて約2.1kbpのDNA断片を精製した。
(2)組換えタンパク質の精製
上記で得られた、配列番号1の遺伝子を発現するそれぞれの組換え大腸菌を30μg/ml カナマイシン含有LB培地にて600nmでの吸光度が0.7付近になるまで37℃で培養後、イソプロピル−β−D−1−チオガラクトピラノシド終濃度が1mMとなるよう添加し、37℃で4時間培養した。その後4800rpmで10分間遠心し集菌した。この菌体ペレットをリン酸緩衝化生理食塩水に懸濁し、さらに4800rpmで10分間遠心し菌体の洗浄を行った。
実施例2で調製した配列番号2に示される、抗原タンパク質(ヒトCAPRIN−1)100μgを等量のMPL+TDMアジュバント(シグマ社製)と混合し、これをマウス1匹当たりの抗原溶液とした。抗原溶液を6週齢のBalb/cマウス(日本SLC社製)の腹腔内に投与後、1週間毎にさらに3回すなわち24回投与を行い免疫を完了した。最後の免疫から3日後に摘出したそれぞれの脾臓を滅菌した2枚のスライドガラスに挟んで擦り潰し、PBS(−)(日水社製)を用いて洗浄し1500rpmで10分間遠心して上清を除去する操作を3回繰り返して脾臓細胞を得た。得られた脾臓細胞とマウスミエローマ細胞SP2/0(ATCCから購入)とを10:1の比率にて混和し、そこに37℃に加温した10%FBSを含むRPMI1640培地200μlとPEG1500(ベーリンガー社製)800μlを混和して調製したPEG溶液を加えて5分間静置して細胞融合を行った。1700rpmで5分間遠心し、上清を除去後、Gibco社製のHAT溶液を2%当量加えた15% FBSを含むRPMI1640培地(HAT選択培地)150mlで細胞を懸濁し、96穴プレート(ヌンク社製)の1ウェル当たり100μlずつ、プレート15枚に播種した。7日間、37℃、5% CO2の条件で培養することで、脾臓細胞とミエローマ細胞が融合したハイブリドーマを得た。
(1)抗CAPRIN−1モノクローナル抗体の可変領域遺伝子のクローニング
実施例3で選抜した11個のマウスモノクローナル抗体をそれぞれ産生する各ハイブリドーマ株から、mRNAを抽出し、マウスFR1由来配列及びマウスFR4由来の配列に特異的なプライマーを使用したRT−PCR法により、全ての抗CAPRIN−1モノクローナル抗体の重鎖可変(VH)領域及び軽鎖可変(VL)領域の遺伝子を取得した。配列決定のために、それら遺伝子をpCR2.1ベクター(インビトロジェン社製)にクローニングした。及びまた、CAPRIN−1を発現する乳癌細胞の細胞表面に反応するモノクローナル抗体を産生するマウス由来ハイブリドーマ株2株から、mRNAを抽出し、マウスFR1由来配列及びマウスFR4由来の配列に特異的なプライマーを使用したRT−PCR法により、各抗体の重鎖可変(VH)領域及び軽鎖可変(VL)領域の遺伝子を取得した。配列決定のために、それら遺伝子をpCR2.1ベクター(Invitrogen社製)にクローニングした。
106個の各ハイブリドーマ株から、High Pure RNA Isolation Kit(Roche社製)を用いて全RNAを抽出した後、PrimeScriptII 1st strand cDNA Synthesis Kit(Takara社製)を用いてcDNAを合成した。これら操作は各キットの添付プロトコルに従って行った。
上記で得られた各プラスミド中のVH領域及びVL領域の遺伝子配列解析は、M13フォワードプライマー(配列番号134)及びM13リバースプライマー(配列番号135)を用いて、蛍光シーケンサー(ABI社製DNAシーケンサー3130XL)により、ABI社製のビッグダイターミネーターVer3.1サイクルシーケンシングキットを用いて、その添付プロトコルに従い行った。その結果、各々の遺伝子配列が決定された(各々10クローンで一致)。
(2)抗CAPRIN−1抗体#2及び#9を用いた各種癌細胞表面でのCAPRIN−1の発現
次にCAPRIN−1遺伝子の発現が確認された乳癌細胞株7種(MDA−MB−157,T47D,MRK−nu−1,MDA−MB−231V,BT20,SK−BR−3,MDA−MB−231T)及びその他の乳癌細胞株3種(MDA−MB−231C,MCF−7,ZR75−1)、グリオーマ細胞株5種(T98G,SNB19,U251,U87MG,U373)、腎臓癌細胞株4種(Caki−1,Caki−2,A498,ACHN)、胃癌細胞株2種(MNK28,MKN45)、大腸癌細胞株5種(HT29,LoVo,Caco2,SW480,HCT116)、肺癌細胞株3種(A549、QG56、PC8)、白血病細胞株4種(AML5,Namalwa、BDCM、RPI1788)、リンパ腫細胞株1種(Ramos)、子宮頸癌細胞株1種(SW756)、膀胱癌細胞株1種(T24)及び食道癌細胞株1種(KYSE180)について、実施例3で得られた#2及び#9を産生するハイブリドーマの培養上清を用いて、各細胞の細胞表面上でのCAPRIN−1タンパク質の発現を調べた。各細胞株それぞれ106細胞を1.5ml容のミクロ遠心チューブにて遠心分離した。実施例3で得られた#2及び#9を産生するハイブリドーマの培養上清(100μl)を添加し、氷上で1時間静置した。PBSで洗浄した後、0.1%FBSを含むPBSで500倍希釈したFITC標識ヤギ抗ヒトIgG(H+L)抗体(SouthernBiotech社製)及びFITC標識抗マウスIgG(H+L)抗体(Invitrogen社製)を添加し、氷上で1時間静置した。PBSで洗浄後、ベクトンディッキンソン株式会社のFACSキャリバーにて蛍光強度を測定した。一方、上記と同様の操作を、ハイブリドーマ培養用の培地を用いて行い、陰性コントロールとした。その結果、#2及び#9の抗体を添加した細胞は、コントロールに比べて、いずれも蛍光強度が20%以上強かった。このことから、上記ヒト癌細胞株の細胞膜表面上にCAPRIN−1タンパクが発現していることが確認された。なお、上記蛍光強度の増強率は、各細胞における平均蛍光強度(MFI値)の増加率にて表され、以下の計算式により算出した。
上記で選抜した#1〜#11のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体の癌細胞に対する細胞障害活性(ADCC活性)を評価した。#1〜#11のモノクローナル抗体を産生する各ハイブリドーマをハイブリドーマSFM(インビトロジェン社製)培地を用いて培養し、得られた上清をHitrap ProteinA SepharoseFF(GEヘルスケア社製)を用いて精製し、PBS(−)に置換して0.22μmのフィルター(ミリポア社製)で濾過したものを活性測定用の抗体として用いた。106個のヒト乳癌細胞株MDA−MB−157を50ml容の遠心チューブに集め、100μCiのクロミウム(Cr)51を加え37℃で2時間インキュベートした。その後10%FBSを含むRPMI1640培地で3回洗浄し、96穴V底プレート1穴あたり103個ずつ添加して標的細胞とした。これに、上記精製抗体をそれぞれ1μg添加し、さらにマウス脾臓から分離したマウスリンパ球を2×105個添加して、37℃、5%CO2の条件下で4時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム(Cr)51の量を測定し、抗CAPRIN−1抗体による癌細胞に対するADCC活性を算出した。その結果、#1〜#11の全てのモノクローナル抗体が、MDA−MB−157に対して、20%以上のADCC活性を示した。具体的には、例えば、#1は22.1%、#2は29.1%、#6は30.2%、#9は32.4%の細胞障害活性が得られた(図1参照)。一方、実施例2で作製した、CAPRIN−1タンパク自体には反応するが、癌細胞の細胞表面に反応しないモノクローナル抗体を用いて同様の操作を行った場合、細胞障害活性は認められなかった(図1参照)。以上の結果より、取得した抗CAPRIN−1モノクローナル抗体(#1〜#11は、ADCC活性によってCAPRIN−1を発現する癌細胞を障害することが示された。同様にして、他のヒト癌細胞である、グリオーマ細胞株T98G、U373、肺癌細胞株A549、QG56、腎臓癌細胞株Caki−1、ACHN、子宮頸癌細胞株SW756、膀胱癌細胞株T24、食道癌細胞株KYSE180、胃癌細胞株MNK28、MNK45、大腸癌細胞株SW480、白血病細胞株AML5及びリンパ腫細胞株Ramosに対する抗CAPRIN−1抗体による癌細胞に対するADCC活性を算出した。その結果、#1〜#11の全てのモノクローナル抗体が、アイソタイプコントロールに比べて高いADCC活性を示した。具体的には、例えばT98Gに対して、#9は12%以上(アイソタイプコントロールは1.3%)、U373に対して、#9は16%以上(アイソタイプコントロールは3%)、A549に対して、#9は24%以上(アイソタイプコントロールは2.6%)、QG56に対して、#9は20%以上(アイソタイプコントロールは0.2%)、Caki−1に対して、#9は23%以上(アイソタイプコントロールは3.0%)、ACHNに対して、#9は14%以上(アイソタイプコントロールは1.5%)、SW756に対して、#9は16%以上(アイソタイプコントロールは2.5%)、T24に対して、#9は18%以上(アイソタイプコントロールは2.1%)、KYSE180に対して、#9は22%以上(アイソタイプコントロールは3.0%)、MNK28に対して、#9は15%以上(アイソタイプコントロールは1.7%)、MNK45に対して、#9は10%以上(アイソタイプコントロールは2.3%)、SW480に対して、#9は17%以上(アイソタイプコントロールは1.3%)、AML5に対して、#9は10%以上(アイソタイプコントロールは3.0%)及びRamosに対して、#9は10%以上の活性を示した(アイソタイプコントロールは4.1%)。以上の結果より、取得した抗CAPRIN−1抗体(#1〜#11)は、CAPRIN−1を発現する各種ヒト癌細胞を障害することが示された。
上記で選抜した#1〜#11のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体の癌細胞に対する細胞障害活性(CDC活性)を評価した。ウサギから採血した血液をエッペンドルフチューブに入れ、室温で60分間、静置した後3000rpmで5分間、遠心分離することで、CDC活性測定用の血清を調製した。ヒト乳癌細胞であるMDA−MB−231Vを105個を50ml容の遠心チューブに集め、100μCiのクロミウム51を加え37℃で2時間インキュベートした後、10% FBSを含むRPMI培地で3回洗浄した。その後上記で調製したウサギ血清を50%含むRPMI培地で懸濁し、96穴V底プレート1穴あたり103個ずつ添加した。これに実施例3で得た#1〜#13のモノクローナル抗体をそれぞれ1μgずつ添加して、37℃、5% CO2の条件下で4時間培養した。培養後、障害を受けた腫瘍細胞から放出される培養上清中のクロミウム51の量を測定し、ハイブリドーマ上清中の抗CAPRIN−1モノクローナル抗体によるMDA−MB−231Vに対するCDC活性を算出した。その結果、#1〜#11の全てのモノクローナル抗体が、30%以上のCDC活性を示した。一方、実施例2で作製した、CAPRIN−1タンパク自体には反応するが、癌細胞の細胞表面に反応しないモノクローナル抗体を用いて同様の操作を行った場合、細胞障害活性は認められなかった。従って、CAPRIN−1に対するモノクローナル抗体(#1〜#11)は、CDC活性によっても、CAPRIN−1を発現する腫瘍細胞を障害することができることが明らかになった。
上記で取得した、癌細胞の細胞表面に反応する#1〜#11のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体を用いて、それらが認識するCAPRIN−1タンパク質中の部分配列の同定を行った。
(1)癌細胞に対する抗腫瘍剤の50%阻害濃度の算出
抗腫瘍剤による癌細胞表面上のCAPRIN−1発現の影響を評価するため、癌細胞(MCF−7)を用いて、抗腫瘍剤の50%阻害濃度の算出を行った。ヒト乳癌細胞株MCF−7について、現在乳癌治療薬として用いられている抗腫瘍剤4種(シクロホスファミド:“エンドキサン”(登録商標、塩野義製薬株式会社製)、パクリタキセル:“タキソール”(登録商標、ブリストル・マイヤーズ社製)、ドセタキセル:“タキソテール”(登録商標、サノファ・アバンティス社製)、ビノレルビン:“ナベルビン”(登録商標、協和発酵キリン株式会社製)の50%阻害濃度を調べた。細胞を1×105cells/mlになるように調製し、6穴プレートにて37℃、5%CO2条件下1日培養を行った。次に、各抗腫瘍剤を最終濃度0.001μM,0.01μM,0.1μM,1.0μM,10μMそれぞれ処理し、37℃、5%CO2条件下で2日培養を行った。培養液を除去した後、PBS(−)で2回洗浄を行い、0.25%Trypsin−EDTAを添加して細胞を剥がし、PBS(−)で100μlに調製した後、0.4%トリパンブルーストック溶液を10μl加えて混合し、血球計算盤を用いて生細胞数を測定した。各抗腫瘍剤未処理の生細胞数を100%としたときの各化学療法剤処理時の生細胞の割合を算出し、本検討の結果から50%阻害濃度を概算して、さらにその濃度付近の抗腫瘍剤を調製し、上述と同様の操作を行うことにより詳細な50%阻害濃度を算出することとした。
(1)で算出した50%阻害濃度の各抗腫瘍剤を癌細胞株(MCF−7)に処理して、その細胞表面上のCAPRIN−1タンパク質の発現挙動について調べた。
(抗CAPRIN−1抗体のみ投与する群)
5匹の担癌マウスに対して#2のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0,4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、シクロホスファミドを1匹あたり80mg/kg/shotずつ、試験開始0、4日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈投与した。
5匹の担癌マウスに対して、パクリタキセルを1匹あたり15mg/kg/shotずつ、試験開始0、3日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、ドセタキセルを1匹あたり10mg/kg/shotずつ、試験開始0、3日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、ビノレルビンを1匹あたり1mg/kg/shotずつ、試験開始0日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、シクロホスファミドを1匹あたり80mg/kg/shotずつ、試験開始0、4日に腹腔内投与し、同時に抗Her2抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、パクリタキセルを1匹あたり15mg/kg/shotずつ、試験開始0、3日に腹腔内投与し、同時に抗Her2抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、ドセタキセルを1匹あたり10mg/kg/shotずつ、試験開始0、3日に腹腔内投与し、同時に抗Her2抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、ビノレルビンを1匹あたり1mg/kg/shotずつ、試験開始0日に腹腔内投与し、同時に抗Her2抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、シクロホスファミドを1匹あたり80mg/kg/shotずつ、試験開始0、4日に腹腔内投与し、同時に#2のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、パクリタキセルを1匹あたり15mg/kg/shotずつ、試験開始0、3日に腹腔内投与し、同時に#2のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
5匹の担癌マウスに対して、ドセタキセルを1匹あたり10mg/kg/shotずつ、試験開始0、3日に腹腔内投与し、同時に#2のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
ビノレルビンと抗CAPRIN−1抗体の5匹の担癌マウスに対して、ビノレルビンを1匹あたり1mg/kg/shotずつ、試験開始0日に腹腔内投与し、同時に#2のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体を1匹あたり5mg/kg/shotずつ、試験開始0、4,8,11,15,17日に腹腔内投与し、Balb/cマウス脾臓から分離したPBMCを1匹あたり1×107cells/0.2mL(RPMI1640)ずつ、試験開始0,8,15日に静脈内投与した。
抗CAPRIN−1抗体のみ投与する群、シクロホスファミドと抗CAPRIN−1抗体の投与群、パクリタキセルと抗CAPRIN−1抗体の投与群、ドセタキセルと抗CAPRIN−1抗体の投与群及びビノレルビンと抗CAPRIN−1抗体の投与群については、抗CAPRIN−1抗体として#9のCAPRIN−1に対するモノクローナル抗体を投与する以外は、実験区1と同様に設定した。
また、実験区2では、PBS(−)を投与したコントロール群の試験開始から26日目の腫瘍体積を100%とした場合に、各抗腫瘍剤投与群では約68%程度、抗CAPRIN−1抗体のみ投与する群では約45%程度、各抗腫瘍剤と抗Her2抗体の投与群では約55%にまで退縮した。一方、各抗腫瘍剤と抗CAPRIN−1抗体の投与群では、14日目には数10%にまで腫瘍が退縮し、22日目以降には腫瘍はほぼ完全に退縮した。(図7〜図10参照)
配列番号32: T7プライマー
配列番号33、34: プライマー
配列番号35、36: GAPDHプライマー
配列番号38、39: プライマー
配列番号130〜135: プライマー
Claims (7)
- CAPRIN−1タンパク質と免疫学的反応性を有する、かつ癌細胞表面上に存在するCAPRIN−1タンパク質の細胞外領域と特異的に結合する、及び抗腫瘍作用を有する抗体又はそのフラグメントと、1種類又は2種類以上の抗腫瘍剤とを、一緒に又は別々に、組み合わせて含むことを特徴とする、CAPRIN−1を発現する癌の治療及び/又は予防のための医薬品。
- 前記抗体又はそのフラグメントが、癌細胞表面上に存在するCAPRIN−1タンパク質の細胞外領域の内、配列番号37で表されるアミノ酸配列に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントであることを特徴とする、請求項1に記載の医薬品。
- 前記CAPRIN−1タンパク質がヒト由来である、請求項1又は2に記載の医薬品。
- 前記抗腫瘍剤が、シクロホスファミド、パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン並びにそれらの薬学的に許容可能な塩及び誘導体からなる群から選択される、請求項3に記載の医薬品。
- 前記癌が乳癌、脳腫瘍、白血病、リンパ腫、肺癌、肥満細胞腫、腎癌、子宮頸癌、膀胱癌、食道癌、胃癌もしくは大腸癌である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の医薬品。
- 前記抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は組換え抗体である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の医薬品。
- 前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は二重特異性抗体である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の医薬品。
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MX357965B (es) * | 2012-03-30 | 2018-08-01 | Toray Industries | Composicion farmaceutica para el tratamiento y/o prevencion de cancer de vesicula biliar. |
WO2014014082A1 (ja) | 2012-07-19 | 2014-01-23 | 東レ株式会社 | 癌の検出方法 |
CN104471404B (zh) | 2012-07-19 | 2017-03-01 | 东丽株式会社 | 癌的检测方法 |
WO2015020212A1 (ja) | 2013-08-09 | 2015-02-12 | 東レ株式会社 | 癌の治療及び/又は予防用医薬組成物 |
CN109890417A (zh) | 2016-10-28 | 2019-06-14 | 东丽株式会社 | 癌的治疗和/或预防用药物组合物 |
CA3095719A1 (en) * | 2018-03-30 | 2019-10-03 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer |
BR112022018171A2 (pt) | 2020-03-12 | 2022-10-25 | Toray Industries | Medicamento para o tratamento e/ou a prevenção de câncer, agentes aumentando a eficácia de droga de uma composição farmacêutica e método para tratar e/ou prevenir câncer |
WO2021182574A1 (ja) | 2020-03-12 | 2021-09-16 | 東レ株式会社 | 癌の治療及び/又は予防のための医薬品 |
EP4119158A1 (en) | 2020-03-12 | 2023-01-18 | Toray Industries, Inc. | Medicament for treatment and/or prevention of cancer |
US20230139178A1 (en) | 2020-03-12 | 2023-05-04 | Toray Industries, Inc. | Medicament for treatment and/or prevention of cancer |
US20230129035A1 (en) | 2020-03-12 | 2023-04-27 | Toray Industries, Inc. | Medicament for treatment and/or prevention of cancer |
JPWO2022270524A1 (ja) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | ||
CN117545508A (zh) | 2021-06-23 | 2024-02-09 | 东丽株式会社 | 用于癌的治疗和/或预防的药品 |
AU2022319362A1 (en) | 2021-07-27 | 2024-02-29 | Toray Industries, Inc. | Medicament for treatment and/or prevention of cancer |
CN117677398A (zh) | 2021-07-27 | 2024-03-08 | 东丽株式会社 | 用于癌的治疗和/或预防的药品 |
WO2023008461A1 (ja) | 2021-07-27 | 2023-02-02 | 東レ株式会社 | 癌の治療及び/又は予防のための医薬品 |
CA3230737A1 (en) | 2021-09-03 | 2023-03-09 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention |
WO2024048541A1 (ja) * | 2022-08-30 | 2024-03-07 | 東レ株式会社 | 癌の治療及び/又は予防のための医薬品 |
WO2024048542A1 (ja) * | 2022-08-30 | 2024-03-07 | 東レ株式会社 | 癌の治療及び/又は予防のための医薬品 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002083070A2 (en) * | 2001-04-10 | 2002-10-24 | Corixa Corporation | Compounds for immunotherapy and diagnosis of colon cancer and methods for their use |
Family Cites Families (63)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE449342T1 (de) * | 1994-09-19 | 2009-12-15 | Ricardo J Moro | Nachweis von krebs |
US5698396A (en) | 1995-06-07 | 1997-12-16 | Ludwig Institute For Cancer Research | Method for identifying auto-immunoreactive substances from a subject |
US20030118599A1 (en) | 1999-04-02 | 2003-06-26 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer |
HUP0203035A3 (en) | 1998-07-14 | 2007-12-28 | Corixa Corp | Compositions and methods for therapy and diagnosis of prostate cancer |
RU2234942C2 (ru) | 1998-07-14 | 2004-08-27 | Корикса Корпорейшн | Выделенный опухолевый полипептид предстательной железы и кодирующий его полинуклеотид |
US6969518B2 (en) | 1998-12-28 | 2005-11-29 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of breast cancer |
WO2000052204A2 (en) | 1999-02-22 | 2000-09-08 | Orntoft Torben F | Gene expression in bladder tumors |
WO2000060077A2 (en) | 1999-04-02 | 2000-10-12 | Corixa Corporation | Compounds for therapy and diagnosis of lung cancer and methods for their use |
US6444425B1 (en) | 1999-04-02 | 2002-09-03 | Corixa Corporation | Compounds for therapy and diagnosis of lung cancer and methods for their use |
US6949245B1 (en) | 1999-06-25 | 2005-09-27 | Genentech, Inc. | Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies |
JP2003528587A (ja) | 1999-10-29 | 2003-09-30 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ, インコーポレイテッド | 27個のヒト分泌タンパク質 |
US20020006404A1 (en) | 1999-11-08 | 2002-01-17 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications |
WO2001072295A2 (en) | 2000-03-29 | 2001-10-04 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer |
US7919467B2 (en) | 2000-12-04 | 2011-04-05 | Immunotope, Inc. | Cytotoxic T-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer |
US7408041B2 (en) * | 2000-12-08 | 2008-08-05 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Polypeptides and antibodies derived from chronic lymphocytic leukemia cells and uses thereof |
US20040029114A1 (en) | 2001-01-24 | 2004-02-12 | Eos Technology, Inc. | Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer |
RU2306952C2 (ru) | 2001-01-31 | 2007-09-27 | Байоджен Айдек Инк. | Лечение в-клеточных злокачественных опухолей с использованием комбинации применений, связанных с антителами, уменьшающими количество b-клеток, и с иммуномодулирующими антителами |
AU2002311787A1 (en) | 2001-03-28 | 2002-10-15 | Zycos Inc. | Translational profiling |
WO2002092001A2 (en) | 2001-05-11 | 2002-11-21 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer |
US20030190640A1 (en) | 2001-05-31 | 2003-10-09 | Mary Faris | Genes expressed in prostate cancer |
US20040142325A1 (en) | 2001-09-14 | 2004-07-22 | Liat Mintz | Methods and systems for annotating biomolecular sequences |
CA2476518A1 (en) | 2002-02-22 | 2003-09-04 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
US20050003390A1 (en) | 2002-05-17 | 2005-01-06 | Axenovich Sergey A. | Targets for controlling cellular growth and for diagnostic methods |
US20040126379A1 (en) * | 2002-08-21 | 2004-07-01 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Compositions and methods for treating cancer using cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
US20060121029A1 (en) | 2002-08-30 | 2006-06-08 | Hiroshi Shiku | Method and composition for regulating the activity of regulatory t cells |
EP2179742A1 (en) | 2002-11-26 | 2010-04-28 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
WO2004076682A2 (en) | 2003-02-26 | 2004-09-10 | Surromed, Inc. | Targets for controlling cellular growth and for diagnostic methods |
WO2004097051A2 (en) | 2003-04-29 | 2004-11-11 | Wyeth | Methods for diagnosing aml and mds differential gene expression |
EP2481814A3 (en) | 2003-06-09 | 2012-10-10 | The Regents of the University of Michigan | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
WO2005007830A2 (en) | 2003-07-14 | 2005-01-27 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and compositions for diagnosis, staging and prognosis of prostate cancer |
US20050032113A1 (en) | 2003-07-17 | 2005-02-10 | Mitsubishi Pharma Corporation | Membrane protein library for proteome analysis and method for preparing same |
JP2008506352A (ja) | 2004-01-26 | 2008-03-06 | デビオビジョン・インコーポレーテッド | 新生物特異的ポリペプチド及びその使用 |
DK1735348T3 (da) | 2004-03-19 | 2012-07-16 | Imclone Llc | Humant anti-epidermalt vækstfaktorreceptorantistof |
WO2005100998A2 (en) * | 2004-04-16 | 2005-10-27 | Europroteome Ag | Membrane markers for use in cancer diagnosis and therapy |
DE102004026135A1 (de) | 2004-05-25 | 2006-01-05 | Immatics Biotechnologies Gmbh | An MHC-Moleküle bindende Tumor-assoziierte Peptide |
WO2006002378A2 (en) | 2004-06-23 | 2006-01-05 | Avalon Pharmaceuticals | Determining cancer-linked genes and therapeutic targets using molecular cytogenetic methods |
CN101141981A (zh) | 2005-01-21 | 2008-03-12 | 健泰科生物技术公司 | Her抗体的固定剂量给药 |
CA2598217A1 (en) | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Marsha A. Moses | Cyr61 as a biomarker for diagnosis and prognosis of cancers of epithelial origin |
CA2602088C (en) | 2005-03-11 | 2021-07-27 | Ciphergen Biosystems, Inc. | Biomarkers for ovarian cancer and endometrial cancer |
JP2006316040A (ja) | 2005-05-13 | 2006-11-24 | Genentech Inc | Herceptin(登録商標)補助療法 |
US8014957B2 (en) | 2005-12-15 | 2011-09-06 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Genes associated with progression and response in chronic myeloid leukemia and uses thereof |
EP1991701A4 (en) * | 2006-02-14 | 2010-03-17 | Dana Farber Cancer Inst Inc | COMPOSITIONS, KITS, AND METHODS FOR IDENTIFYING, EVALUATING, PREVENTING, AND TREATING CANCER |
US20100015724A1 (en) | 2006-08-17 | 2010-01-21 | Peter Hornbeck | Lysine acetylation sites |
US20080107668A1 (en) | 2006-08-30 | 2008-05-08 | Immunotope, Inc. | Cytotoxic t-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer |
US7615349B2 (en) | 2006-09-07 | 2009-11-10 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Melanoma gene signature |
WO2008059252A2 (en) | 2006-11-15 | 2008-05-22 | Oxford Biomedica (Uk) Limited | Methods and composition fro t cell receptors which recognize 5t4 antigen |
JP5663834B2 (ja) | 2008-03-14 | 2015-02-04 | 東ソー株式会社 | 遺伝子組換え抗体の製造方法 |
KR101667319B1 (ko) * | 2008-08-05 | 2016-10-18 | 도레이 카부시키가이샤 | 암의 치료 및 예방용 의약 조성물 |
ES2570731T3 (es) | 2008-08-05 | 2016-05-20 | Toray Industries | Método de detección de cáncer |
PL2837383T3 (pl) | 2008-08-05 | 2017-07-31 | Toray Industries, Inc. | Środek indukujący odporność |
JP5734978B2 (ja) | 2009-08-19 | 2015-06-17 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングMerck Patent Gesellschaft mit beschraenkter Haftung | Ffpe材料におけるインテグリン複合体検出のための抗体 |
PL2480671T3 (pl) | 2009-09-22 | 2015-12-31 | Probiogen Ag | Proces produkcji cząsteczek zawierających specjalne struktury glikanowe |
AU2011211682B2 (en) * | 2010-02-04 | 2015-08-13 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer |
AU2011211699B2 (en) | 2010-02-04 | 2015-01-22 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer |
CA2788720C (en) | 2010-02-04 | 2019-08-20 | Takayoshi Ido | Medicament for treating and/or preventing cancer |
PL2532365T3 (pl) | 2010-02-04 | 2016-12-30 | Kompozycja farmaceutyczna do leczenia i/lub zapobiegania nowotworowi | |
US8709418B2 (en) * | 2010-02-04 | 2014-04-29 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for treating CAPRIN-1 expressing cancer |
PT2532366T (pt) | 2010-02-04 | 2016-12-20 | Toray Industries | Composição farmacêutica para o tratamento e/ou prevenção de cancro |
MX349907B (es) | 2011-08-04 | 2017-08-18 | Toray Industries | Metodo para detectar cancer pancreatico. |
EP2740796B1 (en) | 2011-08-04 | 2017-05-17 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer |
ES2609846T3 (es) | 2011-08-04 | 2017-04-24 | Toray Industries, Inc. | Composición farmacéutica para el tratamiento y/o prevención del cáncer pancreático |
KR102155531B1 (ko) | 2012-03-30 | 2020-09-15 | 도레이 카부시키가이샤 | 간암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물 |
MX357965B (es) | 2012-03-30 | 2018-08-01 | Toray Industries | Composicion farmaceutica para el tratamiento y/o prevencion de cancer de vesicula biliar. |
-
2011
- 2011-02-04 CA CA2788720A patent/CA2788720C/en active Active
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- 2011-02-04 KR KR1020127022763A patent/KR101843807B1/ko active IP Right Grant
- 2011-02-04 US US13/576,950 patent/US9180187B2/en active Active
- 2011-02-04 HU HUE11739883A patent/HUE040012T2/hu unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002083070A2 (en) * | 2001-04-10 | 2002-10-24 | Corixa Corporation | Compounds for immunotherapy and diagnosis of colon cancer and methods for their use |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6013053990; Journal of Biological Chemistry Vol.270,No.35, 1995, p20717-20723 * |
JPN6015002521; British Journal of Cancer Vol.37,No.5, 1978, p833-840 * |
JPN6015002524; Oncologist Vol.6,No.2, 2001, p133-146 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109925511A (zh) | 2019-06-25 |
EP2532367A1 (en) | 2012-12-12 |
HUE040012T2 (hu) | 2019-02-28 |
DK2532367T3 (en) | 2018-11-19 |
RU2012137503A (ru) | 2014-03-10 |
US9180187B2 (en) | 2015-11-10 |
CA2788720C (en) | 2019-08-20 |
RU2624029C2 (ru) | 2017-06-30 |
AU2011211700B2 (en) | 2015-06-11 |
WO2011096535A1 (ja) | 2011-08-11 |
CN102844048A (zh) | 2012-12-26 |
JPWO2011096535A1 (ja) | 2013-06-13 |
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KR101843807B1 (ko) | 2018-03-30 |
KR20120139720A (ko) | 2012-12-27 |
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MX2012008991A (es) | 2012-09-07 |
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US20120294860A1 (en) | 2012-11-22 |
EP2532367B1 (en) | 2018-08-29 |
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