JP5920725B2 - 生体外で自己複製可能な誘導前がん幹細胞又は誘導悪性幹細胞、これらの製造方法、及び、これらの細胞の応用 - Google Patents
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Description
(1)POU5F1遺伝子、NANOG遺伝子、SOX2遺伝子、ZFP42遺伝子、LIN28遺伝子及びTERT遺伝子の6遺伝子(自己複製関連遺伝子)を発現すること;そして
(2)(a)内在性のがん抑制遺伝子の変異、または(b)内在性のがん関連遺伝子の発現上昇のいずれかの異常を有すること;
を具備することを特徴とする、in vitroで増殖可能な誘導がん幹細胞を提供する。
本発明の第1の態様において、下記(1)および(2)の要件:
(1)POU5F1遺伝子、NANOG遺伝子、SOX2遺伝子、ZFP42遺伝子、LIN28遺伝子及びTERT遺伝子の6遺伝子(自己複製関連遺伝子)を発現すること;そして
(2)(a)内在性がん抑制遺伝子の変異、または(b)内在性がん関連遺伝子の発現上昇のいずれかの異常を有していること;
を具備することを特徴とする誘導がん幹細胞を提供する。この様な特徴を有する細胞は、in vitroで自己複製可能な誘導がん幹細胞であることが明らかになった。
本発明における前記(1)の遺伝子(自己複製関連遺伝子)は、胚性幹細胞のマーカー遺伝子として知られている遺伝子である。これらの遺伝子は、本発明の誘導がん幹細胞が、理論的には無限に自己複製し、事実上in vitroで自己複製可能な誘導がん幹細胞のまま長期継代培養可能な性質を有する細胞であることを特定する遺伝子(自己複製関連遺伝子)である。これらの遺伝子の具体的な例としては、以下の表1の遺伝子を挙げることができる。
本発明の誘導がん幹細胞は、(2)(a)内在性がん抑制遺伝子の変異、または(b)内在性がん関連遺伝子の発現上昇のいずれかの異常を有している。本発明の誘導がん幹細胞が有するこれらの異常は、誘導がん幹細胞の由来となる原料体細胞が本来有していた異常をそのまま承継するものである。
更に、本発明の誘導がん幹細胞においては、(b)前記内在性がん関連遺伝子に加え、ストレス及び毒性関連遺伝子群、エピジェネティクスクロマチン修飾酵素遺伝子群、幹細胞転写因子遺伝子群からなる群に含まれる遺伝子の群の中から選択される少なくとも1種の内在性の遺伝子に、遺伝子の発現上昇が生じていることが好ましい。
本発明の誘導がん幹細胞を増殖培養又は継代培養する培地としては、胚性幹細胞、多能性幹細胞等を増殖培養又は継代培養することが可能な培地であれば、特に制限されることはないが、胚性幹細胞、多能性幹細胞等の培養に適した培地が好ましく用いられる。このような培地としては、例えば、ES培地〔40%のダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、40%のF12培地(シグマ社製)、2 mM L-グルタミン又はGlutaMAX(シグマ社製)、1%の非必須アミノ酸(シグマ社製)、0.1 mMのβ-メルカプトエタノール(シグマ社製)、15〜20%のノックアウト血清リプレースメント(インビトロジェン社製)、10μg/mlのゲンタマイシン(インビトロジェン社製)、4〜10 ng/mlのFGF2因子〕、0.1 mMのβ-メルカプトエタノールを除いたES培地で、マウス胚性繊維芽細胞(以下MEF)を24時間培養した上清である馴化培地に、0.1 mMのβ-メルカプトエタノール及び10 ng/mlのFGF2を加えた培地(以下MEF馴化ES培地)、iPS細胞用最適培地(イプセロン社製)、フィーダー細胞用最適培地(イプセロン社製)、StemPro〔登録商標〕hESC SFM(インビトロジェン社製)、mTeSR1(ステムセルテクノロジー・ベリタス社製)、アニマルプロテインフリーのヒトES/iPS細胞維持用無血清培地TeSR2〔ST-05860〕(ステムセルテクノロジー・ベリタス社製)、霊長類ES/iPS細胞用培地(リプロセル社)、ReproStem(リプロセル社)、ReproFF(リプロセル社)、ReproFF2(リプロセル社)などを例示することができるが、これらの培地に制限されることはない。ヒトの細胞を用いる場合には、ヒト胚性幹細胞の培養に適した培地を用いてもよい。培養皿をコートする細胞外マトリックスとしては、ゼラチン、コラーゲン、マトリゲル、ラミニン、Synthemaxなどが用いられる。
本発明の第2の態様において、(a)がん抑制遺伝子の変異を有する哺乳動物から採取した体細胞、並びに、発がんした哺乳動物から採取した、(a)がん抑制遺伝子の変異、または(b)がん関連遺伝子の発現上昇のいずれかの異常を有する体細胞からなる群の中から選択された非胚性の原料体細胞から、in vitroで自己複製可能な誘導がん幹細胞を製造する、本発明の誘導がん幹細胞の製造方法を提供する。
本発明の誘導がん幹細胞は、本発明の誘導がん幹細胞の由来となる原料体細胞が本来有していた、(a)がん抑制遺伝子の変異、または(b)がん関連遺伝子の発現上昇等の異常をそのまま継承するため、原料となる体細胞、すなわち原料体細胞は、(a)がん抑制遺伝子の変異を有する哺乳動物から採取した体細胞、並びに、発がんした哺乳動物から採取した、(a)がん抑制遺伝子の変異、または(b)がん関連遺伝子の発現上昇のいずれかの異常を有する体細胞からなる群の中から選択された体細胞であることが必要である。
POU5F1遺伝子、KLF4遺伝子、及びSOX2遺伝子の各遺伝子シンボルに対するGenBankアクセッション番号は表31の通りである。
本発明の製造方法は、前記工程に加え、更に、1ウェルに1細胞をソーティングして増殖させる工程を含むことができる。この工程は、抗ALB抗体、抗FABP1抗体、抗IGF-II抗体、抗DLK1抗体、抗PDGFRα抗体、抗VEGFR2抗体、抗E-カドヘリン抗体、抗CXCR4抗体、抗PDGFRβ抗体、抗カドヘリン11抗体、抗CD34抗体、抗IGF−R1抗体から選択される何れか1つの抗体を使用した特異抗体染色を施した細胞、又は、未染色の細胞を、1ウェルに1細胞をソーティングする方法によって増殖させる工程である。
本発明の第3の態様において、本発明の誘導がん幹細胞を用いることを特徴とするスクリーニング方法であり、がん創薬標的のスクリーニング方法、がん治療薬のスクリーニング方法及びがん診断薬のスクリーニング方法として好適である。
本発明の第4の態様において、本発明の誘導がん幹細胞を用いた、がんワクチンの作製方法である。
本発明の第5の態様において、本発明の誘導がん幹細胞を用いた、がんモデル動物の作製方法である。
POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsの3遺伝子のレトロウイルスベクタープラスミドを、Fugene HD(ロシュ社製;Cat no.4709691)を用いて、パントロピックレトロウイルスベクター調製用パッケージング細胞であるPlat-GP細胞に導入し、レトロウイルスベクター液を調製した。遺伝子POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsは順に4:2:1の比率で使用し、POU5F1>SOX2の関係になるようにした。詳細は、以下の通りである。
POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsは構築したベクターである(後記表33)。
遺伝子POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsは構築したベクターである(後記表33)。
遺伝子POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsは構築したベクターである(後記表33)。
保存液に数時間保存・運搬したヒト胃がん(進行がん)患者の新鮮がん組織から体細胞を単離した。得られた胃がん患者がん組織由来の細胞に、実施例1において調製したPOU5F1>KLF4>SOX2の関係を満たす3遺伝子(POU5F1、KLF4、SOX2の比率が順に4:2:1)レトロウイルスベクター液を添加し、遺伝子導入することで、ヒト誘導悪性幹細胞を作製した。詳細は以下の通りである。
MEF
マイトマイシンC処理初代マウス胚性繊維芽細胞(DSファーマバイオメディカル社製;Cat no.R-PMEF-CF)
MEF馴化用ES培地
ノックアウトD-MEM(インビトロジェン社製;Cat no.10829-018)500 ml
2 mM GlutaMAX
10%ノックアウト血清リプレースメント(インビトロジェン社製;Cat no.10828-028)
50μg/mlゲンタマイシン(インビトロジェン社製;Cat no.15750-060)
MEM非必須アミノ酸液(インビトロジェン社製;Cat no.11140-050)
10 ng/ml bFGF(ぺプロテック社製;Cat no.100-18B)
<MEF馴化ES培地の調製>
マイトマイシン処理を行ったマウス胚性繊維芽細胞(DSファーマバイオメディカル社製;Cat no.R-PMEF-CF)5×106 cellを、1×抗生物質-抗真菌剤及びFBSを10%含むD-MEM(高グルコース)培地40 mlに懸濁後、ゼラチンコートディッシュ100 mm(イワキ社製;Cat no.11-020-006)4枚に播種した。24時間後に培地を除き、MEF馴化用のES培地を10 ml加えた。
3遺伝子導入から25日後に、誘導悪性幹細胞のコロニーを1クローン(GC1-1)、3遺伝子導入から32日後に、誘導悪性幹細胞のコロニーを1クローン(GC1-3)、3遺伝子導入から33日後に、誘導悪性幹細胞のコロニーを3クローン(GC1-5、7、8)ピックアップし、ゼラチンコート24ウェルプレート中のマイトマイシン処理を行ったフィーダー細胞上へ移した。なお、フィーダー細胞はマイトマイシン処理を行ったマウス胚性繊維芽細胞であり、誘導悪性幹細胞のピックアップ前日に5.0×104cell/cm2でゼラチンコート24ウェルプレートに播種した。
(i)0.25%トリプシン-1 mM EDTA溶液(インビトロジェン社製;Cat no.25200-056)
(ii)調製剥離液〔10 mg/mlタイプIVコラゲナーゼ(インビトロジェン社製;Cat no.17104-019)10 ml、100 mM塩化カルシウム溶液(シグマ)1 ml、PBS59 ml、2.5%トリプシン溶液(インビトロジェン社製;Cat no.15090-046)10 ml、ノックアウト血清リプレースメント(KSR, インビトロジェン社Catno.10828-028)20 ml;これらを溶解後、0.22μmのフィルターで濾過滅菌したもの〕。
(i)セルバンカー3(日本全薬工業Cat no.BLC-3S)
(ii)50%mTeSR1、40%KSR、10%DMSOの混液。
遺伝子導入後日数32: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数43: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm(第3継代)
遺伝子導入後日数50: 継代と保存(第4継代)
遺伝子導入後日数55: 継代と保存(第5継代)
遺伝子導入後日数58: バッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)処理。
遺伝子導入後日数44: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数48: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm(第3継代)
遺伝子導入後日数53: 継代と保存(第4継代)
遺伝子導入後日数58: バッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)処理。
遺伝子導入後日数44: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数52: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm(第3継代)
遺伝子導入後日数61: 継代と保存(第4継代)
遺伝子導入後日数63: 保存とバッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)処理。
遺伝子導入後日数44: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数52: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm(第3継代)
遺伝子導入後日数61: 継代と保存(第4継代)
遺伝子導入後日数62: 保存とバッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)処理。
遺伝子導入後日数44: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数48: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm(第3継代)
遺伝子導入後日数53: 継代と保存(第4継代)
遺伝子導入後日数55: 継代と保存(第5継代)
遺伝子導入後日数58: バッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)処理。
保存液に数時間保存・運搬したヒト胃がん(進行がん)患者の新鮮非がん組織から細胞を単離し、初代培養した。得られた胃がん患者非がん組織由来の細胞に、実施例1において調製した3遺伝子(POU5F1、KLF4、SOX2の比率が順に4:2:1)レトロウイルスベクター液を添加し、遺伝子を導入することによって、ヒト誘導悪性幹細胞を作製した。詳細は以下の通りである。
それ以降、3日毎にMEF馴化ES培地の交換を続け、3遺伝子導入から31日後、mTeSR1で毎日培地交換を行った。遺伝子導入から41日後にコロニーを1クローン(NGC1-1)、ピックアップし、ゼラチンコート24ウェルプレート中のマイトマイシン処理を行ったマウス胚性繊維芽細胞上に継代した。なお、フィーダー細胞はマイトマイシン処理を行ったマウス胚性繊維芽細胞であり、誘導悪性幹細胞のピックアップ前日に5.0×104cell/cm2でゼラチンコート24ウェルプレートに播種した。
遺伝子導入後日数52: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数58: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm(第3継代)
遺伝子導入後日数65: 継代、保存、バッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)処理。
保存液に数時間保存・運搬したヒト結腸がん患者の新鮮がん組織から細胞を単離した。得られたヒト結腸がん患者の新鮮がん組織由来の細胞に、実施例1において調製した3遺伝子(POU5F1、KLF4、SOX2の比率が順に4:2:1)レトロウイルスベクター液を添加し、遺伝子導入することで、ヒト誘導悪性幹細胞を作製した。詳細は以下の通りである。
その後、3日毎にMEF馴化ES培地の交換を続け、遺伝子導入22日後から、mTeSR1で毎日培地交換を行った。遺伝子導入から31日後に、コロニーの1クローン(CC1-10)をピックアップし、ゼラチンコート24ウェルプレート中のマイトマイシン処理を行ったマウス胚性繊維芽細胞に継代した。なお、フィーダー細胞はマイトマイシン処理を行ったマウス胚性繊維芽細胞であり、誘導悪性幹細胞のピックアップ前日に5.0×104cell/cm2でゼラチンコート24ウェルプレートに播種した。
CC1-10
遺伝子導入後日数49: 24ウェル(第1継代)→6ウェル(第2継代)
遺伝子導入後日数54: 6ウェル(第2継代)→10 cm(第3継代)
遺伝子導入後日数59: 継代と保存(第4継代)
遺伝子導入後日数63: 継代と保存(第5継代)
遺伝子導入後日数68: 一部をバッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)処理
遺伝子導入後日数71: 一部をQiazol(RNA精製前の細胞溶解液)処理
遺伝子導入後日数75: 一部をNOD-SCIDマウスへ移植。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)により、ゲノムワイドな遺伝子発現(mRNAのトランスクリプトーム)を解析した。3種類のヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)、hES_BG03(GSM194391)及びhES_ES01(GSM194392)と、誘導多能性幹細胞hiPS-201B7(GSM241846)のマイクロアレイデーターは、GEOからダウンロードして使用した。
実施例2〜4のヒト誘導悪性幹細胞(GC1-1、GC1-3、GC1-5、GC1-7、GC1-8、NGC1-1、CC1-10)のトータルRNAとゲノムDNAを、事前にバッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)で処理した溶液から、AllPrep DNA/RNA Mini Kit(50)(キアゲン社製;Cat no.80204)を用いて抽出した。
(i)ゲノムDNAのクオリティーチェック
NanoDrop ND-1000(NanoDrop Technologies)で、DNA濃度及びDNAの純度の評価を行ったところ、何れのサンプルにおいても十分な濃度があり、純度も高いことが確認された。
RNA用LabChip(アジレント社製の登録商標)キットを用いて、Agilent 2100 Bioanalyzer(アジレント社製)でtotal RNAの品質のチェックを行ったところ、全てのRNAサンプルのクオリティーは良好であった。また、NanoDrop ND-1000(NanoDrop Technologies)で、RNA濃度及びRNAの純度の評価を行ったところ、何れのサンプルにおいてもcRNA合成に必要なtotalRNA量があることが確認され、純度も高いことが確認された。
各サンプルのtotalRNA(500 ng)から、Quick Amp Labeling kit(アジレント社製)を用いて、アジレント社のプロトコールに従って、2本鎖cRNAを合成した。作製したcDNAから、in vitro transcriptionによりcRNAを合成した。この際、Cyanine色素で標識されたCTP(Cyanine 3-CTP)を取り込ませ、蛍光標識を行った。
Gene Expression Hybridization Kit(アジレント社製)を使用して、ハイブリダイゼーション標識cRNAをハイブリダイゼーションバッファーに加え、アジレント製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)上で17時間ハイブリダイズし、洗浄後、アジレントマイクロアレイスキャナで、DNAマイクロアレイのイメージを読み取り、Feature Extraction Software(v.9.5.3.1)を用いて、各スポットの蛍光シグナルを数値化した。
解析ソフトとしては、GeneSpring GX10.0(アジレント・テクノロジー株式会社)を使用し、ノーマライゼーションは、50th percentileで行った。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された血管新生関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表34〔hES_BG03 vs GC1-5〕に記載した。更に、2倍以上発現上昇している血管新生関連遺伝子のプローブをプロットした図を示す(図1)。GC1-5はがん患者の新鮮がん組織(胃がん組織)から調製した初代培養体(非胚性)細胞由来のヒト誘導悪性幹細胞であり、内在性のがん関連遺伝子である血管新生関連遺伝子(MDK遺伝子、TIMP2遺伝子、FGFR3遺伝子、PLAU遺伝子、ID3遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたがん関連パスウェイ遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)及びヒト誘導多能性幹細胞hiPS-201B7と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表35〔hES_H9 vs NGC1-1〕及び表36〔hiPS-201B7 vs NGC1-1〕にそれぞれ記載した。NGC1-1はがん患者の新鮮非がん組織(胃の非がん組織)から調製した初代培養体(非胚性)細胞由来のヒト誘導悪性幹細胞であり、内在性のがん関連パスウェイ遺伝子(MMP2遺伝子、TIMP1遺伝子、TIMP3遺伝子、MMP1遺伝子、CDKN1A遺伝子、S100A4遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された間質バリア関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表37〔hES_BG03 vs GC1-5〕に記載した。GC1-5はがん患者の新鮮がん組織(胃がん組織)から調製した初代培養体(非胚性)細胞由来のヒト誘導悪性幹細胞であり、内在性の間質バリア関連遺伝子(COL4A2遺伝子、FN1遺伝子、COL1A1遺伝子、TGFB1遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された上皮-間葉転換関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、プローブ及びGenBankアクセッションナンバーを、下記表38〔hES_BG03 vs GC1-5〕に記載した。更に、2倍以上発現上昇している上皮-間葉転換関連遺伝子のプローブをプロットした図を示す(図2)。GC1-5はがん患者の新鮮がん組織(胃がん組織)から調製した初代培養体(非胚性)細胞由来のヒト誘導悪性幹細胞であり、内在性の上皮-間葉転換関連遺伝子(VIM遺伝子、COL3A1遺伝子、COL1A2遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された胃がん関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表42〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。NGC1-1はがん患者の新鮮非がん組織(胃の非がん組織)から調製した初代培養体(非胚性)細胞由来のヒト誘導悪性幹細胞であり、内在性の胃がん関連遺伝子(CCND2遺伝子、TIMP3遺伝子、LOX遺伝子、RASSF1遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された自律増殖関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表43〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。NGC1-1はがん患者の新鮮非がん組織(胃の非がん組織)から調製した初代培養体(非胚性)細胞由来のヒト誘導悪性幹細胞であり、内在性の自律増殖関連遺伝子(IGF2遺伝子、INHBA遺伝子、MDK遺伝子、INHBB遺伝子、BMP1遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたTGFβ/BMPシグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_ES01(GSM194392)及びヒト誘導多能性幹細胞hiPS-201B7と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、それぞれ下記表44〔hES_ES01 vs GC1-5〕及び表45〔hiPS-201B7 vs GC1-5〕に記載した。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された組織侵潤・転移関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト誘導多能性幹細胞hiPS-201B7と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表50〔hiPS-201B7 vs GC1-5〕に記載した。GC1-5はがん患者の新鮮がん組織(胃がん組織)から調製した初代培養体(非胚性)細胞由来のヒト誘導悪性幹細胞であり、内在性の組織侵潤・転移関連遺伝子(FST遺伝子、BMP7遺伝子、TGFB1遺伝子、COL3A1遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたWntシグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表52〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。更に、2倍以上発現上昇しているWntシグナル関連遺伝子のプローブをプロットした図を示す(図5)。誘導悪性幹細胞は内在性のWntシグナル関連遺伝子(CCND2遺伝子、SLC9A3R1遺伝子、LEF1遺伝子、CTNNB1遺伝子、FRZB遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたシグナル伝達関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表53〔hES_H9 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のシグナル伝達関連遺伝子(CCL2遺伝子、CDKN1A遺伝子、HSPB1遺伝子、RBP1遺伝子、CCND1遺伝子、LEF1遺伝子、GADD45A遺伝子、BAX遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたNotchシグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表54〔hES_H9 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のNotchシグナル関連遺伝子(CD44遺伝子、FZD2遺伝子、CCND1遺伝子、HES1遺伝子、CDKN1A遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された乳がん及びエストロジェン受容体シグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表55〔hES_H9 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の乳がん及びエストロジェン受容体シグナル関連遺伝子(KRT18遺伝子、KRT19遺伝子、GSN遺伝子、TFF1遺伝子、CTSB遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された結腸がん関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表56〔hES_H9 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の結腸がん関連遺伝子(DKK3遺伝子、SPARC遺伝子、IGF2遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された低酸素シグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表57〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の低酸素シグナル関連遺伝子(EPAS1遺伝子、TUBA4遺伝子、EEF1A1遺伝子、CDC42遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたGPCRシグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表58〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のGPCRシグナル関連遺伝子(GNAS遺伝子、RGS2遺伝子、JUNB遺伝子、AGT遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された薬剤耐性関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表59〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の薬剤耐性関連遺伝子(AQP1遺伝子、SLC16A3遺伝子、ATP6V0C遺伝子、MVP遺伝子、ABCG2遺伝子、ATP7B遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたHedgehogシグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表60〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のHedgehogシグナル関連遺伝子(CTNNB1遺伝子、FGFR3遺伝子、ERBB4遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたPI3K-AKTシグナル関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表61〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のPI3K-AKTシグナル関連遺伝子(HSPB1遺伝子、ITGB1遺伝子、CTNNB1遺伝子、PDGFRA遺伝子、FKBP1A遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された薬物代謝遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表62〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の薬物代謝遺伝子(PKM2遺伝子、GSTM3遺伝子、COMT遺伝子、ALDH1A1遺伝子、BLVRB遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたがん分子メカニズム遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト誘導多能性幹細胞hiPS-201B7と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表63〔hiPS-201B7 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のがん分子メカニズム遺伝子(BAX遺伝子、NFKBIA遺伝子、BCL2遺伝子、CASP8遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたSMADシグナルネットワーク関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_ES01(GSM194392)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表64〔hES_ES01 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のSMADシグナルネットワーク関連遺伝子(PSMC3遺伝子、HDAC5遺伝子、UBB遺伝子、ACTA2遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された膵がん関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト誘導多能性幹細胞hiPS-201B7と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表65〔hiPS-201B7 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の膵がん関連遺伝子を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された前立腺がん関連遺伝子のプローブの内、本発明の本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表66〔hES_BG03 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の前立腺がん関連遺伝子(SFRP1遺伝子、TIMP2遺伝子、DKK3遺伝子、DLC1遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された肝がん関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表67〔hES_BG03 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の肝がん関連遺伝子(CCND2遺伝子、DLC1遺伝子、CDKN1A遺伝子、DAB2IP遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された肺がん関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表68〔hES_BG03 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性の肺がん関連遺伝子(CDKN1C遺伝子、MGMT遺伝子、RASSF2遺伝子、CADM1遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたストレス及び毒性関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表69〔hES_H9 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は内在性のストレス及び毒性関連遺伝子(GDF15遺伝子、GSTM3遺伝子、HMOX1遺伝子、HSPA5遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたエピジェネティクスクロマチン修飾酵素遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表70〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞はエピジェネティクスクロマチン修飾酵素遺伝子(HDAC5遺伝子、SMYD3遺伝子、HDAC10遺伝子、PRMT5遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された幹細胞転写因子遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表71〔hES_H9 vs NGC1-1〕に記載した。誘導悪性幹細胞は幹細胞転写因子遺伝子(NR2F2遺伝子、PITX2遺伝子、HAND1遺伝子、ZIC1遺伝子)を相対的に高発現していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された肝細胞関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表72〔hES_BG03 vs GC1-5〕に記載した。誘導悪性幹細胞は1)〜31)の何れかに加えて肝細胞関連遺伝子(TTR遺伝子、DLK1遺伝子、AFP遺伝子、TF遺伝子)がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較して相対的に高発現上昇していることが明らかとなった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された自己複製関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5がヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較してほぼ同程度(1/2から2倍)発現している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表73〔hES_H9 = GC1-5〕に記載した。更に、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞NGC1-1とヒト胚性幹細胞hES_BG03(GSM194391)を比較して、ほぼ同程度(1/2から2倍)発現している自己複製関連遺伝子のプローブをプロットしたグラフを(図6)示す。なお、表1の自己複製関連遺伝子の全てが、本発明のヒト誘導内胚葉系悪性幹細胞GC1-5とヒト胚性幹細胞hES_H9(GSM194390)と比較してほぼ同程度(1/8から8倍)発現していた。
実施例3の誘導悪性幹細胞(NGC1-1)について、Gバンド分染法によって20細胞/株、モード分析により50細胞/株について、核型、染色体の本数を検査した。その結果、これら誘導悪性幹細胞は全て46XYの核型であり、正常であった。誘導悪性幹細胞(NGC1-1:遺伝子導入後日数76)は、MEFの上でmTeSR1などを用いて培養した細胞を解析した。誘導悪性幹細胞は核型が正常な細胞であった。
実施例3の誘導悪性幹細胞(NGC1-1)について、マルチカラーFISHによって10細胞/株について、染色体の欠失、転座を検査した。その結果、これら誘導悪性幹細胞は全て染色体が正常であった(異常が検出されなかった)。誘導悪性幹細胞(NGC1-1:遺伝子導入後日数76)は、MEFの上でmTeSR1を用いて培養した細胞を解析した。誘導悪性幹細胞は染色体異常(染色体の転座、欠失)がない細胞であった。
誘導悪性幹細胞(NGC1-1)の培養上清を臨床検査会社SRLに解析依頼した結果、誘導悪性幹細胞はTGFβ1、AFP、プロコラ−ゲンIIIペプチド(P-III-P)、IV型コラーゲン、アポリポタンパクC-II、プレアルブミン(TTR)、IGF-Iタンパク質を産生していることが判明した。この結果から、誘導悪性幹細胞は、腫瘍マーカーを産生する細胞であることが判明した。
実施例3の誘導悪性幹細胞(NGC1-1)をマウスに移植して、悪性細胞から誘導されたがん細胞の組織像の観察と担がんモデルの作製のため以下の実験を行った。
実施例3の誘導悪性幹細胞(GC1-2、NGC1-1)を古河電気工業製のPERFLOWTM Sortにより、1細胞/ウェルで96ウェルプレートにシングルソーテイングした。その結果、モノクローナルな誘導悪性幹細胞(GC1-2-1、GC1-2-2、GC1-2-3、GC1-2-4、NGC1-1-1、NGC1-1-2、NGC1-1-3、NGC1-1-4)が樹立された。
CD34(Alexa fluor 488-conjugatedマウスモノクローナル抗体 anti-human CD34;Biolegend社製;clone:581;mouseIgG1))、VEGFR2(Alexa fluor 647-conjugatedマウスモノクローナル抗体 anti-human CD309;Biolegend社製;clone:HKDR-1;mouseIgG1))、PDGFRα(PE-conjugated anti-human CD140a;Biolegend社製;clone:16A1;mouseIgG1)、DLK-1(マウスモノクローナル抗体 anti-human Pref-1/DLK-1/FA1;R&D社製;clone#:MAB1144;mouseIgG2B)、CXCR4(Carboxyfluorescein(CFS)-conjugatedマウスモノクローナル抗体 anti-human CXCR4;R&D社製;clone#:12G5;mouseIgG2A)、E-カドヘリン(APC-conjugated anti-human CD324;Biolegend社製;clone:67A4;mouseIgG1)、IGF-R1(マウスモノクローナル抗体 anti-human IGF-IR;R&D社製;clone#:MAB391;mouseIgG1)、FABP1(マウスモノクローナル抗体 anti-human FABP1;R&D社製;clone#:MAB2964;mouseIgG2a)、ALB(マウスモノクローナル抗体 anti-human serum albumin;SIGMA社製;clone:HAS-11;mouseIgG2a)で染色し、実施例3の誘導悪性幹細胞(NGC1-1)を古河電気工業のPERFLOWTMSortにより、染色陽性率を計測した。陽性率が高い場合は、陽性画分を1細胞/ウェルで96ウェルプレートにシングルソーテイングした。
実施例1と同様に、POU5F1>SOX2の関係になるようレトロウイルスベクター液を調整した。詳細は、以下の通りである
<家族性大腸ポリポーシス(APC)患者皮膚組織由来の細胞へ遺伝子導入するレトロウイルスベクター液の調製>
遺伝子POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsは、構築したベクターである(前記表33)。
遺伝子POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsは、構築したベクターである(前記表33)。
遺伝子POU5F1-pMXs、KLF4-pMXs、SOX2-pMXsは、構築したベクターである(前記表33)。
POU5F1-KLF4-SOX2-pMXs 8.4 kbは、pCX-OKS-2A(8478 bp)のEcoRI-EcoRIインサート部分(3700 bp)を切り出し、pMXs(5871 bp)のEcoRI-EcoRI部分(1122 bp)と組み換えて構築したベクターである。さらに、5'末端から3'末端方向へ順向きであること確認した。(下記表76)。
APC患者(APC3223、25才、男性、白人、541番目のグルタミン[541 Gln、Q:CAA or CAG]のC塩基がT塩基に置換して終止コドンになる)の皮膚組織(凍結した継代数:2)の体細胞から、内在性がん抑制遺伝子であるAPCの変異を有するヒト誘導内胚葉系前がん幹細胞を以下のように樹立した。凍結保存された家族性大腸腺腫症患者の、皮膚組織に由来する細胞のバイアル1本(米国NPO Coriell Institute for Medical Research;Cat no.GM03223)を、37℃の恒温槽中で解凍し、1×抗生物質-抗真菌剤及びFBSを10%含むD-MEM(高グルコース)培地に懸濁し、10 mlの細胞懸濁液を得た。家族性大腸腺腫症(APC)患者の皮膚組織由来の細胞は、生殖系列(遺伝的)に片側アリルのAPCに変異(541 Gln→ter:C→T)をもつ、前がん細胞である。
APC(3223)1-1
遺伝子導入後日数54: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数60: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数67: 継代(第4継代)と保存
遺伝子導入後日数72: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存(第5継代)。
遺伝子導入後日数59: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数75: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数79: 保存。
遺伝子導入後日数59: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数75: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数79: 保存。
遺伝子導入後日数59: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数75: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数79: 保存。
APC患者(APC3946、22才、女性、白人、541番目のグルタミン[541 Gln、Q:CAA or CAG]のC塩基がT塩基に置換して終止コドンになる。前述のAPC3223とは兄弟関係である。)の皮膚組織(凍結した継代数:2)から、ヒト誘導内胚葉系前がん幹細胞を以下のように樹立した。凍結保存された家族性大腸腺腫症患者の皮膚組織由来の細胞のバイアル1本(CORIELL;Cat no.GM03946)を、37℃の恒温槽中で解凍し、1×抗生物質-抗真菌剤及びFBSを10%含むD-MEM(高グルコース)培地に懸濁し、10 mlの細胞懸濁液を得た。
APC(3946)1-1
遺伝子導入後日数54: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数61: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数72: 継代(第4継代)と保存
遺伝子導入後日数77: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存(第5継代)。
遺伝子導入後日数59: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数61: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数72: 継代(第4継代)と保存
遺伝子導入後日数77: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存(第5継代)。
RB患者(1才、男性、日本人、RB1の706番目のコドン[706:TGT]のG塩基がA塩基に置換している)の皮膚組織(継代数3)から、内在性がん抑制遺伝子の変異を有するヒト誘導前がん幹細胞を以下のように樹立した。凍結保存された網膜芽腫患者の皮膚組織由来の細胞1本(医薬基盤研究所;資源番号:KURB2358ロット番号:080786)を、37℃の恒温槽中で解凍し、1×抗生物質-抗真菌剤及びFBSを10%含むD-MEM(高グルコース)培地に懸濁し、10 mlの細胞懸濁液を得た。
RB(203)1-2
遺伝子導入後日数49: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数77: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数82: 保存。
遺伝子導入後日数49: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数77: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数82: 保存。
遺伝子導入後日数53: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数60: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数66: 継代(第4継代)と保存
遺伝子導入後日数69: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存。
遺伝子導入後日数53: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数59: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数63: 継代(第4継代)と保存
遺伝子導入後日数66: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存。
遺伝子導入後日数56: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数77: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数82: 保存。
遺伝子導入後日数56: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数77: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数82:保存。
遺伝子導入後日数56: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数59: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数82: 保存。
家族性腫瘍患者であるRB患者(1歳、男性、日本人、RB1遺伝子の706番目のコドン(706:TGT)のG塩基がA塩基に置換している)のがん組織(網膜芽細胞腫)から、内在性がん抑制遺伝子の変異を有するヒト誘導悪性幹細胞を以下のように樹立した。凍結保存された網膜芽腫患者の網膜芽細胞腫の凍結バイアル1本(医薬基盤研究所;資源番号:KURB2359ロット番号:091285)を、37℃の恒温槽中で解凍し、1×抗生物質-抗真菌剤及びFBSを10%含むD-MEM(高グルコース)培地に懸濁し、10 mlの細胞懸濁液を得た。
RBT203(1-1)
遺伝子導入後日数28: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数33: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数38: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存。
遺伝子導入後日数32: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数56: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数61: 保存。
遺伝子導入後日数32: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数56: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数61: 保存。
遺伝子導入後日数32: ウェルプレート(第1継代)→ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数39: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数45: 継代と保存
遺伝子導入後日数48: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存。
遺伝子導入後日数32: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数39: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数45: 継代と保存
遺伝子導入後日数48: バッファーRLT(RNA精製前の細胞の溶解液)処理と保存。
RB患者(2才、女性、日本人)の皮膚組織(継代数1)から、ヒト誘導前がん幹細胞を以下のように樹立した。凍結保存された網膜芽腫患者の皮膚組織由来の体細胞1本(医薬基盤研究所;資源番号:KURB2435ロット番号:080687)を、37℃の恒温槽中で解凍し、1×抗生物質-抗真菌剤及びFBSを10%含むD-MEM(高グルコース)培地に懸濁し、20 mlの細胞懸濁液を得た。
RB(243)1-1
遺伝子導入後日数61: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数65: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数74: 保存。
遺伝子導入後日数61: 24ウェルプレート(第1継代)→6ウェルプレート(第2継代)
遺伝子導入後日数65: 6ウェルプレート(第2継代)→10 cm培養皿(第3継代)
遺伝子導入後日数74: 保存。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)を用いて、ヒト誘導悪性幹細胞(RBT203(1-1))の解析を行った。解析ソフトは、GeneSpring GX 10.0を使用し、ノーマライゼーションは、50th percentileで行った。実験手法は実施例5と同様である。
実施例16のヒト誘導悪性幹細胞(RBT203(1-1))のトータルRNAとゲノムDNAを、事前にバッファーRLT(RNA精製前の細胞溶解液)で処理した溶液から、AllPrep DNA/RNA Mini Kit(50)(キアゲン社製;Cat no.80204)を用いて抽出した。
NanoDrop ND-1000(NanoDrop Technologies)で、DNA濃度及びDNAの純度の評価を行ったところ、何れのサンプルにおいても十分な濃度があり、純度も高いことが確認された。
RNA用LabChip(アジレント社製の登録商標)キットを用いて、Agilent 2100 Bioanalyzer(アジレント社製)でtotal RNAの品質のチェックを行ったところ、全てのRNAサンプルのクオリティーは良好であった。また、NanoDrop ND-1000(NanoDrop Technologies)で、RNA濃度及びRNAの純度の評価を行ったところ、何れのサンプルにおいてもcRNA合成に必要なtotal RNA量があることが確認され、純度も高いことが確認された。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された血管新生関連遺伝子のプローブの内、本発明のヒト誘導悪性幹細胞RBT203(1-1)がヒト胚性幹細胞hES_ES01(GSM194392)と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表77〔hES_ES01 vs RBT203(1-1)〕に記載した。更に、2倍以上発現上昇している血管新生関連遺伝子のプローブをプロットした図を示す(図9)。以上から、ヒト誘導悪性幹細胞は血管新生関連遺伝子を2倍以上発現上昇している細胞であることが明らかになった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載されたシグナル伝達関連遺伝子のプローブの内、ヒト誘導悪性幹細胞RBT203(1-1)がヒト誘導多能性幹細胞hiPS-201B7と比較して2倍以上発現上昇している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表78〔hiPS-201B7 vs RBT203-1-1〕に記載した。更に、2倍以上発現上昇しているシグナル伝達関連遺伝子のプローブをプロットした図を示す(図10)。以上から、ヒト誘導悪性幹細胞はシグナル伝達関連遺伝子を2倍以上発現上昇している細胞であることが明らかになった。
アジレント社製Whole Human GenomeオリゴDNAマイクロアレイ(4X44K)に搭載された自己複製関連遺伝子のプローブの内、ヒト誘導悪性幹細胞RBT203(1-1)がヒト胚性幹細胞hES_ES01(GSM194392)と比較してほぼ同程度(1/2から2倍)発現している遺伝子の遺伝子シンボル、GenBankアクセッションナンバー及びプローブを、下記表79〔hES_ES01=RBT203-1-1〕に記載した。更に、ほぼ同程度(1/2から2倍)発現している自己複製関連遺伝子のプローブをプロットしたグラフを(図11)示す。
Claims (27)
- 少なくとも、下記(1)および(2)の要件:
(1)POU5F1遺伝子、NANOG遺伝子、SOX2遺伝子、ZFP42遺伝子、LIN28遺伝子及びTERT遺伝子の6遺伝子を発現すること;
(2)(a)内在性がん抑制遺伝子の変異、および/または(b)内在性がん関連遺伝子の発現上昇の異常を有すること;
を具備することを特徴とし、
原料体細胞が、内在性がん抑制遺伝子の変異を有する哺乳動物から採取した体細胞(ただし、がん細胞株を除く)、あるいは発がんした哺乳動物の新鮮ながん組織または非がん組織から採取した非胚性の体細胞(ただし、がん細胞株を除く)であり、
前記(1)の自己複製関連遺伝子の発現量が、胚性幹細胞で発現している遺伝子の発現量と比較して1/8から8倍である、誘導前がん幹細胞又は誘導悪性幹細胞である誘導がん幹細胞。 - NANOG遺伝子、POU5F1遺伝子、SOX2遺伝子、TDGF1遺伝子、DNMT3B遺伝子、ZFP42遺伝子、TERT遺伝子、GDF3遺伝子、SALL4遺伝子、GABRB3遺伝子、およびLIN28遺伝子を発現している、請求項1に記載された誘導がん幹細胞。
- ACVR2B遺伝子、CD24遺伝子、CDH1遺伝子、CYP26A1遺伝子、DNMT3B遺伝子、DPPA4遺伝子、EDNRB遺伝子、FLT1遺伝子、GABRB3遺伝子、GATA6遺伝子、GDF3遺伝子、GRB7遺伝子、LIN28遺伝子、NANOG遺伝子、NODAL遺伝子、PODXL遺伝子、POU5F1遺伝子、SALL4遺伝子、SOX2遺伝子、TDGF1遺伝子、TERT遺伝子、ZFP42遺伝子、およびZIC3遺伝子を発現している、請求項2に記載された誘導がん幹細胞。
- 前記誘導がん幹細胞で発現している前記(1)自己複製関連遺伝子の発現量が、胚性幹細胞で発現している遺伝子の発現量と比較して1/4から4倍である、請求項1に記載された誘導がん幹細胞。
- 前記誘導がん幹細胞で発現している前記(1)自己複製関連遺伝子の発現量が、胚性幹細胞で発現している遺伝子の発現量と比較して1/2から2倍である、請求項4に記載された誘導がん幹細胞。
- (a)前記がん抑制遺伝子が、APC遺伝子、またはRB1遺伝子である、請求項1〜5の何れかに記載された誘導がん幹細胞。
- (b)前記がん関連遺伝子が、血管新生関連遺伝子群、がん関連パスウェイ遺伝子群、間質バリア関連遺伝子群、上皮-間葉転換関連遺伝子群、胃がん関連遺伝子群、自律増殖関連遺伝子群、TGFβ/BMPシグナル関連遺伝子群、組織侵潤・転移関連遺伝子群、Wntシグナル関連遺伝子群、シグナル伝達関連遺伝子群、Notchシグナル関連遺伝子群、乳がん及びエストロジェン受容体シグナル関連遺伝子群、結腸がん関連遺伝子群、低酸素シグナル関連遺伝子群、GPCRシグナル関連遺伝子群、薬剤耐性関連遺伝子群、Hedgehogシグナル関連遺伝子群、PI3K-AKTシグナル関連遺伝子群、薬物代謝遺伝子群、がん分子メカニズム遺伝子群、SMADシグナルネットワーク関連遺伝子群、膵がん関連遺伝子群、前立腺がん関連遺伝子群、肝がん関連遺伝子群、肺がん関連遺伝子群からなる群に含まれる遺伝子の群の中から選択される少なくとも1種の遺伝子群である、請求項1〜6の何れかに記載された誘導がん幹細胞。
- (b)前記内在性がん関連遺伝子に加え、ストレス及び毒性関連遺伝子群、エピジェネティクスクロマチン修飾酵素遺伝子群、幹細胞転写因子遺伝子群からなる群に含まれる遺伝子の群の中から選択される少なくとも1種の内在性の遺伝子に、遺伝子の発現上昇が生じている、請求項1〜7の何れかに記載された誘導がん幹細胞。
- 更に、中内胚葉系幹細胞、または内胚葉系幹細胞に特徴的な遺伝子を発現している、請求項1〜8の何れかに記載された誘導がん幹細胞。
- 前記中内胚葉系幹細胞に特徴的な遺伝子がGSC遺伝子であり、前記内胚葉系幹細胞に特徴的な遺伝子が、GSC遺伝子、GATA4遺伝子、FOXA2遺伝子、SOX17遺伝子から選択された少なくとも1種である、請求項9に記載された誘導がん幹細胞。
- (b)前記内在性がん関連遺伝子に加え、肝細胞特異的遺伝子群に含まれる遺伝子の群の中から選択される少なくとも1種の遺伝子に、遺伝子の発現上昇が生じている、請求項1〜10の何れかに記載された誘導がん幹細胞。
- 内在性がん抑制遺伝子の変異を有する哺乳動物から採取した体細胞(ただし、がん細胞株を除く)、あるいは発がんした哺乳動物の新鮮ながん組織または非がん組織から採取した非胚性の原料体細胞(ただし、がん細胞株を除く)から、請求項1の(1)および(2)の特徴を有する誘導がん幹細胞を製造する方法であって、該方法が、前記原料体細胞を、POU5F1遺伝子、KLF4遺伝子及びSOX2遺伝子の遺伝子産物が前記原料体細胞内に存在する状態におく誘導工程を行うことを特徴とする、誘導前がん幹細胞又は誘導悪性幹細胞である誘導がん幹細胞の製造方法。
- POU5F1遺伝子、KLF4遺伝子及びSOX2遺伝子の遺伝子産物の前記原料体細胞内における存在比率が、POU5F1遺伝子>SOX2遺伝子の関係を満たす、請求項12に記載された誘導がん幹細胞の製造方法。
- POU5F1遺伝子、KLF4遺伝子及びSOX2遺伝子又はこれらの遺伝子産物を使用する、請求項12または13に記載された製造方法。
- 前記誘導工程が、原料体細胞を、bFGF、ALK阻害剤、TGF-beta RI阻害剤、およびTGF-beta RIキナーゼ阻害剤からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を添加した培地中で培養することを含む、請求項12〜14の何れかに記載された製造方法。
- 前記誘導工程が、原料体細胞に、NANOG遺伝子、LIN28遺伝子、TBX3遺伝子、PRDM14遺伝子、L-MYC遺伝子、c-MYC遺伝子、N-MYC遺伝子、SALL1遺伝子、SALL4遺伝子、UTF1遺伝子、ESRRB遺伝子、NR5A2遺伝子、REM2 GTPase遺伝子、TCL-1A遺伝子、Yes-associated protein(YAP)遺伝子、E-カドヘリン遺伝子、p53ドミナントネガティブ変異体遺伝子、およびp53shRNA遺伝子からなる群から選択される少なくとも1つの遺伝子またはこれらの遺伝子産物を導入することを含む、請求項12〜15の何れかに記載された製造方法。
- 前記誘導工程が、原料体細胞を、誘導多能性幹細胞を誘導することが知られている化合物を添加した培地中で培養することを含む、請求項12〜16の何れかに記載された製造方法。
- 誘導多能性幹細胞を誘導することが知られている化合物が、FGF receptor tyrosine kinase、MEK(mitogen activated protein kinase)/ERK(extracellular signal regulated kinases 1 and 2)経路、およびGSK(Glycogen Synthase Kinase)3の三つの低分子阻害剤、MEK/ERK経路及びGSK3の二つの低分子阻害剤、ヒストンメチル化酵素G9aの阻害剤である低分子化合物、アザシチジン、トリコスタチンA(TSA)、7-hydroxyflavone、lysergic acid ethylamide、kenpaullone、TGFβ receptorI kinase/activin-like kinase 5 (ALK5)の阻害剤、TGF-βreceptor 1(TGFBR1)kinaseの阻害剤、Src-family kinaseの阻害剤、thiazovivin、PD0325901、CHIR99021、SU5402、PD184352、SB431542、抗TGF-β中和抗体、A-83-01、Nr5a2、p53阻害化合物、p53に対するsiRNA、ならびにp53経路の阻害剤からなる群から選択される少なくとも1つの化合物である、請求項17に記載の製造方法。
- 前記誘導工程が、原料体細胞を、低酸素下で培養することを含む、請求項12〜18の何れかに記載された製造方法。
- 更に、1ウェルに1細胞をソーティングして増殖させる工程を含む、請求項12〜19の何れかに記載された製造方法。
- 更に、in vitroで自己複製可能な誘導がん幹細胞の悪性の性質又は特異マーカーを同定して選別する選別工程を含む、請求項12〜20の何れかに記載された製造方法。
- 前記選別工程が、(a)内在性がん抑制遺伝子の変異を有する哺乳動物から採取した体細胞(ただし、がん細胞株を除く)、あるいは発がんした哺乳動物から採取した非胚性の原料体細胞(ただし、がん細胞株を除く)を誘導処理した細胞と、比較対象となる哺乳動物から採取した体細胞から誘導した、誘導中内胚葉系幹細胞、誘導内胚葉系幹細胞又は誘導多能性幹細胞、若しくは、胚性幹細胞と比較し、悪性の性質又は特異マーカーを同定して選別する選別工程である、請求項21に記載された製造方法。
- 前記選別工程が、血管新生関連遺伝子群、がん関連パスウェイ遺伝子群、間質バリア関連遺伝子群、上皮-間葉転換関連遺伝子群、胃がん関連遺伝子群、自律増殖関連遺伝子群、TGFβ/BMPシグナル関連遺伝子群、組織侵潤・転移関連遺伝子群、Wntシグナル関連遺伝子群、シグナル伝達関連遺伝子群、Notchシグナル関連遺伝子群、乳がん及びエストロジェン受容体シグナル関連遺伝子群、結腸がん関連遺伝子群、低酸素シグナル関連遺伝子群、GPCRシグナル関連遺伝子群、薬剤耐性関連遺伝子群、Hedgehogシグナル関連遺伝子群、PI3K-AKTシグナル関連遺伝子群、薬物代謝遺伝子群、がん分子メカニズム遺伝子群、SMADシグナルネットワーク関連遺伝子群、膵がん関連遺伝子群、前立腺がん関連遺伝子群、肝がん関連遺伝子群、肺がん関連遺伝子群からなる群に含まれる遺伝子の群の中から選択される、少なくとも1種の遺伝子に係るがん関連遺伝子の発現上昇から同定し選別する選別工程である、請求項21または22に記載された製造方法。
- がん創薬標的のスクリーニング方法、がん治療薬のスクリーニング方法及びがん診断薬のスクリーニング方法の中から選択された1種のスクリーニング方法であって、該方法が、請求項1〜11の何れかに記載された誘導がん幹細胞を用いることを特徴とする、スクリーニング方法。
- 請求項1〜11の何れかに記載された誘導がん幹細胞を用いることを特徴とする、がんワクチンの作製方法。
- がんワクチンが、CTL療法、樹状細胞療法、またはがんペプチドワクチン療法に有用ながんワクチンである、請求項25に記載された作製方法。
- 請求項1〜11の何れかに記載された誘導がん幹細胞を実験動物に移植することを特徴とする、がんモデル動物の作製方法。
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---|---|---|---|---|
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JP6090735B2 (ja) * | 2012-03-02 | 2017-03-08 | 国立大学法人山口大学 | 消化器系がん幹細胞を培養するための無血清培地、及びそれを用いた消化器系がん幹細胞の増殖方法 |
US20150118681A1 (en) * | 2012-05-11 | 2015-04-30 | National Cancer Center | Method for predicting prognosis of renal cell carcinoma |
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WO2015175500A2 (en) * | 2014-05-12 | 2015-11-19 | The Scripps Research Institute | Methods for modulating cancer cells and stem cells |
US20170191034A1 (en) * | 2014-09-04 | 2017-07-06 | Agency For Science Technology And Research | A method to up-regulate cancer stem cell markers for the generation of antigen specific cytotoxic effector t cells |
WO2016120495A1 (en) * | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Delta133p53beta and delta133p53gamma isoforms are biomarkers of cancer stem cells |
JP6710211B2 (ja) * | 2015-08-03 | 2020-06-17 | 富士フイルム株式会社 | 細胞構造体、非ヒトモデル動物、非ヒトモデル動物の製造方法、及び被験物質の評価方法 |
EP3135768A1 (en) * | 2015-08-26 | 2017-03-01 | Self-screen B.V. | Zic1 and ghsr, molecular diagnostic markers for hpv-induced invasive cancers, nonhpv-induced gynaecological and anogenital cancers and their high-grade precursor lesions |
GB201520550D0 (en) * | 2015-11-23 | 2016-01-06 | Immunocore Ltd & Adaptimmune Ltd | Peptides |
GB201520568D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | Immunocore Ltd | Peptides |
CN106676073A (zh) * | 2017-01-19 | 2017-05-17 | 大连医科大学附属第医院 | 一种乳腺癌mcf‑7细胞干细胞悬浮球的培养方法 |
US11679148B2 (en) | 2017-11-24 | 2023-06-20 | Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) | Methods and compositions for treating cancers |
PT3794148T (pt) * | 2018-05-17 | 2022-09-27 | Twobull Meditherapy P C | Métodos de diagnóstico de aneurisma ou cancro |
CN111073889B (zh) * | 2019-12-20 | 2023-07-28 | 中国人民解放军第四军医大学 | 人cspg5基因的用途及相关产品 |
CN111635912A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-09-08 | 深圳市体内生物医药科技有限公司 | 一种将肝细胞诱导为肝癌细胞的基因组合及其应用 |
CN112266932B (zh) * | 2020-10-19 | 2023-06-02 | 天津科技大学 | 一种人rnf20基因过表达质粒载体的构建及其抑制癌细胞的作用 |
CN114276999A (zh) * | 2022-03-03 | 2022-04-05 | 中日友好医院(中日友好临床医学研究所) | 黑素瘤细胞株及其制备方法 |
CN115840045B (zh) * | 2023-02-23 | 2023-04-28 | 中国农业大学 | 一种猪胚胎期毛囊基板前体细胞的鉴定方法及其应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008307007A (ja) * | 2007-06-15 | 2008-12-25 | Bayer Schering Pharma Ag | 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞 |
WO2011049099A1 (ja) * | 2009-10-20 | 2011-04-28 | 国立大学法人大阪大学 | 癌幹細胞の製造方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2879303B2 (ja) | 1993-01-14 | 1999-04-05 | 佑 本庶 | cDNAライブラリーの作製方法、および新規なポリペプチドとそれをコードするDNA |
US6866998B1 (en) | 1997-11-26 | 2005-03-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cellular assays for identifying signaling peptides |
EP4223769A3 (en) | 2005-12-13 | 2023-11-01 | Kyoto University | Nuclear reprogramming factor |
EP2096169B1 (en) * | 2007-10-31 | 2020-11-18 | Kyoto University | Nuclear reprogramming method |
GB0801215D0 (en) * | 2008-01-23 | 2008-02-27 | Univ Sheffield | Cell re-programming |
CN101550406B (zh) * | 2008-04-03 | 2016-02-10 | 北京大学 | 制备多潜能干细胞的方法,试剂盒及用途 |
US9127256B2 (en) * | 2008-07-16 | 2015-09-08 | Dnavec Corporation | Method for production of reprogrammed cell using chromosomally unintegrated virus vector |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008307007A (ja) * | 2007-06-15 | 2008-12-25 | Bayer Schering Pharma Ag | 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞 |
WO2009007852A2 (en) * | 2007-06-15 | 2009-01-15 | Izumi Bio, Inc | Multipotent/pluripotent cells and methods |
WO2011049099A1 (ja) * | 2009-10-20 | 2011-04-28 | 国立大学法人大阪大学 | 癌幹細胞の製造方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6015024232; Proc. Natl. Acad. Sci. USA vol.107, no.1, 201001, pp.40-45, Supporting Information * |
JPN6015024234; Blood vol.115, no.20, 20100520, pp.4039-4042 * |
JPN6015024237; BECKMAN COULTER Application Information , 2009, pp.1-12 * |
JPN6015024239; Nature vol.460, no.7259, 2009, pp.1132-1135 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2013081188A1 (ja) * | 2011-11-30 | 2015-04-27 | 独立行政法人国立がん研究センター | 誘導悪性幹細胞 |
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