JP5911723B2 - 細胞内に送達するためのジブロックコポリマーおよびそのポリヌクレオチド複合体 - Google Patents
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Description
本出願は、2008年5月13日に提出されたU.S. 仮出願第 61/052,908、2008年5月13日に提出された仮出願第 61/052,914、2008年8月22日に提出されたU.S. 仮出願第 61/091,294、2008年11月6日に提出されたU.S. 仮出願第 61/112,054、2008年11月6日に提出されたU.S. 仮出願第 61/112,048、2008年12月12日提出されたU.S. 仮出願第 61/120,769、2008年12月24日提出されたU.S. 仮出願第 61/140,779、2008年12月24日に提出されたU.S. 仮出願第 61/140,774、2009年4月21日に提出されたU.S. 仮出願第 61/171,377の優先権を主張するものであり、これらの全ての文書の内容は、引用によりそれらの全体がここに組み込まれる。
本発明は、国立保健研究所により認められ、契約番号5 R01 EB 2991-03のもとで政府の助成を受けてなされたものである。政府は、本発明において正当な権利を有する。
本発明は、有機化学、ポリマー化学、生化学、分子生物学および医学に関する。特に、生細胞にポリヌクレオチドを送達するための輸送手段として使用されるべきコポリマー(例えば、ジブロックコポリマー)およびポリヌクレオチドとのその複合体に関する。
ある場合において、生細胞に治療剤(例えば、オリゴヌクレオチド)を提供することは有益である。いくつかの場合において、そのようなポリヌクレオチドの生細胞への送達は、治療的な利益を与える。
[概要]
ある態様において、ここでは、少なくとも2つのブロックコポリマーであって、第1のブロックが(例えば、略生理学的pHで)親水性である少なくとも1つの構成ユニットを含み、第2のブロックが複数の疎水性部分を含むコポリマーが提供される。ある態様において、当該第2のブロックは、更に、荷電または非荷電状態の何れかである荷電可能な種を含み、それは生理学的pHでアニオン性である。しかしながら、pHが荷電可能な種の略pKaであるとき、両方の形態で、均衡な分布の荷電可能な種が存在し、約50%がアニオン性であり、約50%が非荷電であるだろう。更に、さらに、pHが荷電可能な種のpKaから離れると、この平衡において対応するシフトがあり、より高いpH値においてはアニオン性形態が優勢になり、より低いpHにおいては電荷を持たない形態が優勢になる。ここで開示される態様は、何れかのpH値でのコポリマーの形態を含む。エンドソームのpH値で、荷電可能な種は、主に非荷電形態である。
(a)第1のブロック、当該第1のブロックは親水性ブロックである;および
(b)第2のブロック、当該第2のブロックは、以下を含む膜不安定化疎水性ブロック(membran destabilizing hydropHobic block)である:
(i)略生理学的pHで、アニオン性である第1の荷電可能な種、
(iii)略生理学的pHで、カチオン性である第2の荷電可能な種
を含む細胞膜を不安定化する(例えば、エンドソーム溶解性またはエンドソーム膜不安定化)コポリマーが提供される。
(a)第1のブロック、当該第1のブロックは、生理学的pHでカチオン性である第1の荷電可能な種を含む親水性ブロックである;
(b)第2のブロック、当該第2のブロックは以下を含む膜不安定化疎水性ブロックである:
(i)略中性のpHでアニオン性である第2の荷電可能な種;および
(ii)略生理学的pHでカチオン性である第3の荷電可能な種;並びに、
(c)第1のブロックと結合したオリゴヌクレオチド;
を含む細胞膜不安定化(例えば、エンドソーム溶解性またはエンドソーム膜不安定化)コポリマーが提供される。
第1のブロック、当該第1のブロックは、親水性ブロックである;
第2のブロック、当該第2のブロックは、アクリル酸残基またはアルキルアクリル酸残基を含む膜不安定化疎水性ブロックである;
を含む細胞膜不安定化(例えば、エンドソーム溶解性またはエンドソーム細胞膜不安定化)コポリマーが提供される。
正常な生理学的pHで親水性である第1の構成ユニットを含む第1のブロック;
以下を含む第2のブロック:
正常な生理学的pHでカチオン性である第2の構成ユニットであり、第1の構成ユニットと同じでも異なっていてもよい第2の構成ユニット;
正常な生理学的pHでアニオン性である第3の構成ユニット;
疎水性増大部分、ここにおいて、
当該疎水性増大部分は、当該第2の構成ユニットに対して共有結合的に結合している;または
当該疎水性増大部分は、当該第3の構成ユニットに対して共有結合的に結合している;
当該疎水性増大部分は、当該第2のブロックの第4の構成ユニットに含まれる;または
上記何れかの組み合わせである;並びに
当該第2のブロックは、全体的な電荷において実質的に中性である:
を含むコポリマー(例えば、ジブロックコポリマー)に関する。
正常な生理学的pHでカチオン性の第1の構成ユニットを含む第1のブロック;
以下を含む第2のブロック:
正常な生理学的pHでカチオン性である第2の構成ユニットであり、第1の構成ユニットと同じであっても異なっていてもよい第2の構成ユニット;
正常な生理学的pHでアニオン性である第3の構成ユニット;
疎水性増大部分、ここにおいて、
当該疎水性増大部分は、第2の構成ユニットに対して共有結合的に結合している;または
当該疎水性増大部分は、第3の構成ユニットに対して共有結合的に結合している;または
当該疎水性増大部分は、第2のブロックの第4の構成ユニットに含まれる;または
上記何れかの組み合わせである;並びに、
当該第2のブロックは、全体的な電荷において、実質的に中性である;
を含むコポリマー(例えば、ジブロックコポリマー)に関する。
A0、A1、A2、A3およびA4は、-C-C-、-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-および-O(C)bO-からなる群より選択される;ここにおいて、
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y4は、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)およびアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y0、Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C) アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキル-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキルおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;
ここにおいて、R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
各R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q0は、生理学的pHで親水性である残基および生理学的pHで少なくとも部分的に正に荷電されている残基(例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイル、ピリジルなど);生理学的pHで少なくとも部分的に負に荷電されている残基であるが、低いpHではプロトン化を受ける残基(例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、ホスフェートなど);生理学的pHで実質的に中性(または非荷電)残基(例えば、ヒドロキシ、ポリオキシレート化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオールなど);生理学的pHで少なくとも部分的に両性イオン性の残基(例えば、生理学的pHでホスフェート基およびアンモニウム基を含むモノマー残基);結合可能または機能化可能な残基(例えば、反応性基、例えば、アジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、p-ニトロフェニルエステル、ピリジルジスルフィドなど);または水素;からなる群より選択される;
Q1は、生理学的pHで親水性である残基、および生理学的pHで少なくとも部分的に正に荷電されている残基(例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイル、ピリジルなど);生理学的pHで少なくとも部分的に負に荷電されている残基であるが、低いpHではプロトン化を受ける残基(例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、ホスフェートなど);生理学的pHで実質的に中性の残基(例えば、ヒドロキシ、ポリオキシレート化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオールなど);生理学的pHで少なくとも部分的に両性イオン性の残基(例えば、生理学的pHでホスフェート基およびアンモニウム基を含むモノマー残基など)である;
Q2は、生理学的pHで正に荷電されている残基であり、これらに限定するものではないが、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイルおよびピリジルを含む;
Q3は、生理学的pHで負に荷電されている残基であるが、低いpHではプロトン化を受ける残基であり、これらに限定するものではないが、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびホスフェートを含む;
mは、0〜1.0未満である(例えば、0〜約0.49);
nは、0よりも大きい値〜1.0である(例えば、約0.51〜約1.0);ここにおいて、
m + n = 1である;
pは、約0.1〜約0.9である(例えば、約0.2〜約0.5);
qは、約0.1〜約0.9である(例えば、約0.2〜約0.5);ここにおいて、
rは、0〜約0.8である(例えば、0〜約0.6);ここにおいて、
p + q + r = 1である;
vは、約1〜約25kDaである;並びに、
wは、約1〜約50kDaである。
A0、A1、A2、A3およびA4は、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-および-O(C)bO-からなる群より選択される;ここにおいて、
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)およびアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキルからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキルおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R51で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
各R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q1およびQ2は、生理学的pHで正に荷電されている残基であり、これらに限定するものではないが、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイルおよびピリジルを含む;
Q3は、生理学的pHで負に荷電されている残基であるが、低いpHではプロトン化を受ける残基であり、これらに限定するものではないが、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびホスフェートを含む;
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、
m + n = 1である;
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、
pは実質的にqと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、
p + q + r = 1である;
vは、約5〜約25kDaである;並びに、
wは、約5〜約50kDaである。
A0、A1、A2、A3およびA4は、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-および-O(C)bO-からなる群より選択される;ここにおいて、
a は、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は、独立して、水素、(1C-5C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-5C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択される;ここにおいて、
R7-R11で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
Zは、生理学的に許容される対イオンである、
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、
m + n = 1である;
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、
pは、実質的にqと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、
p + q + r = 1である;
vは、約5〜約25kDaである;並びに、
wは、約5〜約50kDaである。
A1は、-C-C-であり;
Y1は、-C(O)OCH2CH2-であり;
R6は、水素であり;
R7およびR8は、各々-CH3であり;並びに、
R2は、-CH3である。
A2は、-C-C-であり;
Y2は、-C(O)OCH2CH2-であり;
R9は、水素であり;
R10およびR11は、各々-CH3であり;並びに、
R3は、-CH3である。
A3は、-C-C-であり;
R3は、CH3CH2CH2-であり;
Y3は、共有結合であり;並びに、
Zは、生理学的に許容されるアニオン(例えば、ポリカチオン or 複数のカチオン)である。
A4は、-C-C-であり;
R5は、水素および-CH3からなる群より選択され;並びに、
Y4は、-C(O)O(CH2)3CH3である。
A0は、C-C-であり;
R1は、水素および(1C-3C)アルキルからなる群より選択され;並びに、
Y0は、-C(O)O(1C-3C)アルキルからなる群より選択される。
本明細書において言及される全ての出版物および特許出願は、そのような個々の出版物または特許出願が引用することにより組み込まれることを示しているかの如く、同じ範囲にまで言及する目的のために引用することによりここに組み込まれる。
本発明の好ましい態様はここに示され、且つ記載されていると同時に、そのような態様が例示のために提供されることは当業者には明白であるだろう。多数の変形、変更および置換が、本発明から逸脱することなく当業者により直ぐに見出されるであろう。ここに記載された本発明の態様の種々の代用物が、本発明の実施において使用されてよいことが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を明確にすること、並びにこれらの請求項の範囲内の方法および構造およびそれらの同等物がそれにより保護されることを意図する。
ある態様において提供される通り、本発明は、担体ポリマーおよびポリマー:ポリヌクレオチド構築物を提供する。ある場合において、これらのポリマーおよびポリマー:ポリヌクレオチド構築物は、治療学的なポリヌクレオチドを細胞内に送達するための安全な且つ確固とした系のための要求を満たす。
(a)第1のブロック、当該第1のブロックは親水性ブロックである;および
(b)第2のブロック、当該第2のブロックは膜不安定化疎水性ブロックであり、以下を含む:
(i)略生理学的pHでアニオン性である第1の荷電可能な種、
(ii)略生理学的pHでカチオン性である第2の荷電可能な種;
を含む細胞膜不安定化(例えば、エンドソーム溶解性またはエンドソーム細胞膜不安定化)コポリマーが提供される。
(a)第1のブロック、当該第1のブロックは、生理学的pHでカチオン性である第1の荷電可能な種を含む親水性ブロックである;
(b)第2のブロック、当該第2のブロックは、以下を含む膜不安定化疎水性ブロックである:
(i)略中性のpHでアニオン性である第2の荷電可能な種;および
(ii)略生理学的pHでカチオン性である第3の荷電可能な種;並びに
(c)第1のブロックと結合したオリゴヌクレオチド;
を含む細胞膜不安定化(例えば、エンドソーム溶解性またはエンドソーム細胞膜不安定化)コポリマーが提供される。
A0、A1、A2、A3およびA4は、-C-、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-および-O(C)bO-からなる群より選択される;ここにおいて、
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y4は、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y0、Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキル-、-(4C-10C)ヘテロアリール-および-(6C-10C)アリール-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、-(1C-10C)アルキル-、-(4C-10C)ヘテロアリール-および-(6C-10C)アリール-からなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q0は、生理学的pHで親水性である残基、および生理学的pHで少なくとも部分的に正に荷電されている残基(例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイル、ピリジルなど);生理学的pHで少なくとも部分的に負に荷電されている残基であるが、低いpHではプロトン化を受ける残基(例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、ホスフェートなど);生理学的pHで実質的に中性である(または非荷電の)残基(例えば、ヒドロキシ、ポリオキシレート化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオールなど);生理学的pHで少なくとも部分的に両性イオン性である残基(例えば、生理学的pHでホスフェート基とアンモニウム基とを含むモノマー残基);結合可能または機能化可能な残基(例えば、反応性基を含む残基、例えば、アジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、p-ニトロフェニルエステル、ピリジルジスルフィドなど);または水素からなる群より選択される残基である;
Q1は、生理学的pHで親水性である残基、および生理学的pHで少なくとも部分的に正に荷電されている残基(例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイル、ピリジルなど);生理学的pHで少なくとも部分的に負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける残基(例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、ホスフェートなど);生理学的pHで実質的に中性である残基(例えば、ヒドロキシ、ポリオキシレート化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオールなど);または生理学的pHで少なくとも部分的に両性イオン性である残基(例えば、生理学的pHでホスフェート基とアンモニウム基とを含む残基)である;
Q2は、生理学的pHで正に荷電されている残基であり、これらに限定するものではないが、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイルおよびピリジルを含む;
Q3は、生理学的pHで負に荷電されている残基であるが、低いpHではプロトン化を受ける残基であり、これらに限定するものではないが、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびホスフェートを含む;
mは、約0〜1.0未満(例えば、0〜約0.49)である;
nは、0よりも大きい値〜約1.0(例えば、約0.51〜約1.0)である;ここにおいて
m + n = 1である;
pは、約0.1〜約0.9(例えば、約0.2〜約0.5)である;
qは、約0.1〜約0.9(例えば、約0.2〜約0.5)である;ここにおいて、
rは、0〜約0.8(例えば、0〜約0.6)である;ここにおいて、
p + q + r = 1である;
vは、約1〜約25kDa、または約5〜約25kDaである;並びに、
wは、約1〜約50kDa、または約5〜約50kDaである。
A0、A1、A2、A3およびA4は、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-および-O(C)bO-からなる群より選択される;ここにおいて、
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)およびアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキルからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキルおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q1およびQ2は、生理学的pHで正に荷電されている残基であり、これらに限定するものではないが、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイルおよびピリジルを含む:
Q3は、生理学的pHで負に荷電されている残基であるが、低いpHではプロトン化を受ける残基であり、これらに限定するものではないが、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびホスフェートを含む:
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、
m + n = 1である;
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、
pは、実質的にqと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、
p + q + r = 1である;
vは、約1〜約25kDaであるか、または約5〜約25kDaである;および、
wは、約1〜約50kDaであるか、または約5〜約50kDaである。
A0、A1、A2、A3およびA4は、-C-、-C-C-、-C(O)(CR12R13)aC(O)O-、-O(CR12R13)aC(O)-およびO(CR12R13)bOからなる群より選択される;ここにおいて、
aは1 - 4である;
bは2 - 4である;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12およびR13は、独立して、水素、(1C-5C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、(5C-10C)アリール、(4C-10C)ヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-5C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択される;ここにおいて、R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
Zは、1または1以上の生理学的に許容される対イオンである、
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、
m + n = 1である;
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、
pは、 実質的にqと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、
p + q + r = 1である;
vは、約1〜約25kDaであるか、または約5〜約25kDaである;および、
wは、約1〜約50kDaであるか、または約5〜約50kDaである。
A0、A1、A2、A3およびA4は、独立して、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-および-O(C)bO-からなる群より選択される;ここにおいて、
aは、1 - 4である;
bは2 - 4である;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は、独立して、水素、(1C-5C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-5C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択される;
ここにおいて、R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
Zは、生理学的に許容される対イオンである;
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;
ここにおいて、m + n = 1である;
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、
pは、実質的にqと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、
p + q + r = 1である;
vは、約5〜約25kDaである;並びに、
wは、約5〜約25kDaである。
A1は、-C-C-である;
Y1は、-C(O)OCH2CH2-である;
R6は、水素である;
R7およびR8は、各々-CH3である;並びに、
R2は、-CH3である。
A2は、-C-C-である;
Y2は、-C(O)OCH2CH2-である;
R9は、水素である;
R10およびR11は、各々-CH3である;並びに、
R3は、-CH3である。
A3は、-C-C-である;
R4は、CH3CH2CH2-である;
Y3は、共有結合である;
並びに、Z-は、生理学的に許容されるアニオンである。
A4は、-C-C-である;
R5は、水素および-CH3からなる群より選択される;並びに、
Y4は、-C(O)O(CH2)3CH3である。
A0は、C-C-である;
R1は、水素および(1C-3C)アルキルからなる群より選択される;並びに、
Y0は、-C(O)O(1C-3C)アルキルである。
[DMAEMA]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV3
[PEGMA]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV4
[PEGMAm-/-DMAEMAn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV5
[PEGMAm-/-MAA(NHS)n]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV6
[DMAEMAm-/-MAA(NHS)n]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV7
[HPMAm-/-PDSMn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV8
[PEGMAm-/-PDSMn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV9
が提供される。
幾つかの例において、幾つかまたは全てのアニオン性残基のプロトン化または中性化が、PAA酸性基の電荷中性化を引き起こし、ある場合においては、ポリマーにおける高次構造的な電荷を疎水性膜不安定化形態にする。
本明細書に関して、単数形の使用には複数形が含まれ、特に言及しない限り逆もまた同じであると理解される。すなわち、「a」および「the」は、その文言が修飾する1または1以上のものを意味する。例えば、「the polymer」または「a nucleotide」は、1つのポリマーもしくはヌクレオチドまたは複数のポリマーもしくはヌクレオチドを意味し得る。同じように、「polymers」および「nucleotides」は、特に言及しない限り、またはそのような意味ではないことが文脈から明らかな場合を除き、1つのポリマーもしくは1つのヌクレオチドならびに複数のポリマーもしくはヌクレオチドを意味する。
ここにおいて記載されるポリマーは、何れかの適切な方法において製造される。例えば、ある態様において、本発明のポリマーは、エチレン種に限定されるものでは決してない一方で、そのようなポリマーに関して、それらが「生ポリマー化」により製造されることは現在特に好ましい。
ある態様において、ここにおいてポリマー:ポリヌクレオチド構築物または例えば、ポリマー:ペプチド構築物、ポリマー:ポリヌクレオチド構築物、または他の種類のポリマー:バイオ分子構築物を含む他の構築物が提供される。ある態様において、1または1以上のポリヌクレオチド(例えば、siRNA)がここにおいて記載される何れかのポリマーと結合される。種々の態様において、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチドまたは他のバイオ分子が、何れかの様式において(例えば、共有結合的および/または非共有結合的な相互作用などにより)ポリマーと結合し、そのような結合は何れかの適切な部位にあり、それは例えば、ポリマーのアルファ末端、ポリマーのオメガ末端、ポリマーの親水性末端、ポリマーの疎水性末端、またはポリマーのモノマー側鎖に結合しているペンダント基などを含む。
ある態様において、ポリマーまたはポリマー:ポリヌクレオチド構築物(即ち、ここにおいて記載される1または1以上のポリヌクレオチドと会合した何れかのポリマーを含む)は、細胞膜不安定化または破壊性ポリマー(即ち、細胞膜不安定化または細胞膜破壊性)である。ある態様において、細胞膜は、これらに限定するものではないが、細胞外膜、細胞内膜、小胞、オルガネラ、エンドソーム、リポソームまたは赤血球である。幾つかの態様において、細胞に投与される場合、膜破壊性ポリマーまたはポリマー:ポリヌクレオチドは、細胞内に送達される。ある態様において、siRNAは、好ましくは、本発明のポリマーと会合され、引き続き、生細胞の内部にポリマーにより飲食運動されるポリヌクレオチドである。
ある態様において、対象に対して投与され、最終的に対象の細胞内に送達される本発明のポリヌクレオチドは、好ましくはDNA、RNAまたはその合成された類似体である。標的遺伝子の発現を阻害することが可能なDNA/RNAおよびその類似体に関して、これらは、例えば、アンチセンスポリヌクレオチド、miRNAおよびsiRNAを含むが、これらに限定するものではない。
本発明の記載を通して、種々の公知の頭接語および略語が、モノマーのポリマー化に由来するモノマーまたはモノマー残基を記載するために使用される。他の記載による限定のない限り;「BMA」(または速記的な記号に相当する文字「B」)は、メタクリル酸ブチルまたはそれに由来するモノマー残基を表す;「DMAEMA」(または速記的な記号に相当する文字「D」)はN,N-ジメチルアミノエチルメタクリレートまたはそれに由来するモノマー残基を表す;「Gal」は、任意にヒドロキシル保護部分(例えば、アセチル)を含むガラクトース残基またはそのペジレート化(pegylated)された誘導体(以下に記載される通り)を表す;HPMAは、2-ヒドロキシプロピル メタクリレートまたはそれに由来するモノマー残基を表す;「MAA」はメチルアクリル酸またはそれに由来するモノマー残基を表す;「MAA(NHS)」はメタクリル酸のN-ヒドロキシル-スクシンイミドエステルまたはそれに由来するモノマー残基を表す;「PAA」(または速記的な記号に相当する文字「P」)は、2-プロピルアクリル酸またはそれに由来するモノマー残基を表す、「PEGMA」は、ペジレートされたメタクリルモノマー、CH3O(CH2O)7-8OC(O)C(CH3)CH2またはそれに由来するモノマー残基を表す。各々の場合において、何れのそのような明示は、(その全ての塩またはイオン性類似体を含む)モノマーまたはそのモノマーのポリマー化に由来するモノマー残基(その全ての塩またはイオン性類似体を含む)を示し、特異的に指示される形態は、前後関係から当業者には明白である。
以下の一般式のジブロックポリマーおよびコポリマーが製造される:
[A1x-/-A2y]n -[B1x-/-B2y-/-B3z]1-5n
ここにおいて、[A1-A2]は、第1のブロックコポリマーであり、モノマーA1およびA2の残基からなる;
[B1-B2-B3]は、第2のブロックコポリマーであり、モノマーB1、B2、B3の残基からなる;
x、y、zは、モノマー残基のモル%のポリマー組成である;
nは分子量である。
[DMAEMA]-[B-/-P-/-D]
[PEGMAw]-[B-/-P-/-D]
[PEGMAw-DMAEMA]-[B-/-P-/-D]
[PEGMAw-MAA(NHS)]-[B-/-P-/-D]
[DMAEMA-/-MAA(NHS)]-[B-/-P-/-D]
[HPMA-/-PDSM]-[B-/-P-/-D]
ここにおいて:
Bは、メタクリル酸ブチルであり、
Pは、プロピルアクリル酸であり、
Dは、DMAEMAであり、これはジメチルアミノエチルメタクリレートであり、
PEGMAは、ポリエチレングリコールメタクリレートであり、ここにおいて、例えば、w = 4〜5または7〜8のエチレンオキシドユニットであり)、
MAA(NHS)は、メチルアクリル酸-N-ヒドロキシスクシンイミドであり、
HPMAは、N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミドであり、
PDSMは、ピリジルジスルフィドメタクリレートである。
A.RAFT鎖移行剤(RAFT chain transfer agent)
以下のRAFTポリマー化のために利用できる鎖移行剤(CTA)、4-シアノ-4-(エチルスルファニルチオカルボニル)スルファニルペンタン酸(ECT)の合成は、モアドらによる手順を変更した(Moad et al., ポリマー, 2005, 46(19): 8458-68)。即ち、エタンチオール(4.72 g、76 mmol)を10分掛けて、10℃で撹拌されているジエチルエーテル(150ml)中の水素化ナトリウム(油中60%)( 3.15 g、79 mmol)の懸濁液に対して添加した。この溶液を次に、10分間撹拌し、次に二硫化炭素(6.0 g、79 mmol)を添加した。粗S-エチルトリチオカルボネートナトリウム(7.85 g、0.049 mol)を濾過により回収し、ジエチルエーテル(100mL)に懸濁し、ヨウ素(6.3 g、0.025 mol)と反応させた。1時間後、溶液を濾過し、水性溶液チオスルフェートで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。粗ビス(エチルスルファニルチオカルボニル)ジスルフィドを次に回転蒸発により単離した。ビス(エチルスルファニルチオカルボニル)ジスルフィド(1.37 g、0.005 mol)と4,4'-アザビス(4-シアノペンタン酸)( 2.10 g、0.0075 mol)とのエチルアセテート(50mL)中の溶液を還流で18時間加熱した。溶液の回転蒸発に続いて、粗4-シアノ-4(エチルスルファニルチオカルボニル)スルファニルペンタン酸(ECT)を、固定相としてシリカゲルを、50:50のエチルアセテートヘキサンを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィにより単離した。
DMAEMAのRAFTポリマー化を30℃のDMF中で、窒素雰囲気下で18時間に亘り、ECTおよび2,2'-アゾビス(4-メトキシ-2.4-ジメチルバレロニトリル)(V-70)(Wako chemicals)をラジカル開始剤として使用して行った。CTAに対する最初のモノマーの比(([CTA]0/[M]0)は、100%の変換で理論上のMnが10,000(g/mol)となるような値であった。最初のCTAの開始剤に対する比は([CTA]o/[I]o)は10対1である。生成されたポリDMAEMAマクロ鎖移行剤をv:vで50:50のジエチルエーテル/ペンタンへの沈殿により単離した。生成されたポリマーをアセトン中に再溶解し、続いてペンタン(x3)で沈殿させ、減圧で一晩乾燥した。
所望の化学量論的な量のDMAEMA、PAAおよびBMAをN,N-ジメチルホルムアミド中のポリ(DMAMEA)マクロCTA(溶媒に対して25重量%モノマーおよびマクロCTA)に対して添加した。全てのポリマー化のために、[M]o/[CTA]o and [CTA]o/[I]oをそれぞれ250:1および10:1とした。V70の添加に続いて、溶液を窒素で30分間パージし、30℃で18時間反応させた。生成されたジブロックコポリマーをv:vで50:50のジエチルエーテル/ペンタンに沈殿させて単離した。沈殿したポリマーを次にアセトンに再溶解し、続いてペンタン(x3)で沈殿させ、減圧下で一晩乾燥した。ゲル浸透クロマトグラフィHy(GPC)を使用して分子量および多分散性(PDI、Mw/Mn)をDMF中のポリ(DMAEMA) マクロCTAおよびジブロックコポリマーサンプルの両方についてポリメチルメタクリレート標準に関して測定した(一連のViscotek GPCmax VE2001および屈折計 VE3580 (Viscotek, Houston, TX)に連結されたSEC Tosoh TSK-GEL R-3000 および R-4000カラム (Tosoh Bioscience, Montgomeryville, PA)。1.0 重量% のLiBrを含むHPLC-グレードDMFを移動相として使用した。図1Aは、幾つかのRAFT合成されたポリマーの分子量および組成の概要である(PRx0729v6は本適用および種々の優先的な適用においてP7v6と交換可能に使用される)。図1Bは、幾つかのRAFT合成されたポリマーの分子量、粒子サイズおよび組成の概要である。
所望の化学量論的な量のDMAEMA、PAAおよびBMAをN,N-ジメチルホルムアミドに溶解されたポリ(DMAMEA)マクロCTA(溶媒に対して25重量%モノマーおよびマクロCTA)に対して添加した。全てのポリマー化のために、[M]o/[CTA]o and [CTA]o/[I]oをそれぞれ250:1および10:1とした。AIBN添加に続き、溶液を窒素で30分間パージし、68℃で6〜12時間反応させた(図2)得られたジブロックコポリマーをv:vで50:50のジエチルエーテル/ペンタンで沈殿させて単離した。沈殿したポリマーを次にアセトンに再溶解し、続いてペンタン(x3)で沈殿させ、減圧下で一晩乾燥した。ゲル浸透クロマトグラフィHy(GPC)を使用して分子量および多分散性(PDI、Mw/Mn)をDMF中のポリ(DMAEMA) マクロCTAおよびジブロックコポリマーサンプルの両方についてViscotek GPCmax VE2001および屈折計VE3580(Viscotek, Houston, TX)を用いて測定した。1.0 重量% のLiBrを含むHPLC-グレードDMFを移動相として使用した。CDCl3中でのNMR分光法を使用して、ポリマー構造を確認し、第2のブロックの組成を計算した。図2は、[PEGMAw]-[B-P-D] ポリマーの合成の概要であり、ここで、w = 7〜8である。図3A、3Bおよび3Cは、[PEGMAw]-[B-P-D] ポリマーの特徴決定の概要であり、ここにおいて、w = 7〜8である。
ポリマー合成は、例1.1および1.2において記載した手順と同様に行った。第1のブロックにおけるPEGMおよびDMAEMAの比は、個々のモノマーの異なる供給比を用いることにより変更して、図4に記載するコポリマーを形成した。
ポリマー合成は、所望の第1のブロックコポリマーの組成を得るためのモノマー供給比を用いて、例1.1および1.2において記載した手順と同様に行った(図5に概要を示す)。図6A、6Bおよび6Cは、[PEGMAw-MAA(NHS)]-[B-P-D] ポリマーの合成および特徴決定の概要であり、ここにおいて、第1のブロックにおけるモノマーのコポリマー比は、70:30である。ポリマーを含むNHSを水性緩衝液中(ホスフェートまたはバイカルボネート)で室温または37℃で1〜4時間7.4〜8.5のpHでインキュベートし、加水分解(酸性)型を生じた。
ポリマー合成は、所望の第1のブロックコポリマーの組成を得るためのモノマー供給比を用いて、例1.1および1.2において記載した手順と同様に行った。図7A、7Bおよび7Cは、[DMAEMA-MAA(NHS)]-[B-P-D] ポリマーの合成および特徴決定の概要であり、ここにおいて、第1のブロックにおけるモノマーのコポリマー比は70:30である。ポリマーを含むNHSを、水性緩衝液中(ホスフェートまたはバイカルボネート)で室温または37℃で1〜4時間7.4〜8.5のpHでインキュベートし、加水分解(酸性)型を生じた。
A. ピリジルジスルフィド メタクリレートモノマー(PDSMA)の合成
PDSMA のための合成スキームを図8に概要する。アルドリチオール-2(Aldrithiol-2)TM (5 g,
22.59 mmol)を40mlのメタノールおよび1.8mlのAcOH中に溶解した。その溶液を、20mlのメタノール中の2-アミノエタンチオール.HCl(1.28 g、11.30 mmol)の溶液として30分間掛けて添加した。反応物をN2下で48時間室温で撹拌した。溶液の蒸発後、残渣油を40mlのジエチルエーテルで2回洗浄した。粗化合物を10mlのメタノールに溶解し、生成物を50mlのジエチルエーテルで沈殿し、所望の化合物1を淡黄色固体として、95%の収率で得た。
N-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド (HPMA)およびピリジルジスルフィドメタクリレート(典型的には70:30 モノマー比で)のRAFTポリマー化をDMF(50重量パーセントモノマー:溶液)中で68℃で窒素雰囲気下で8時間2,2'-アゾ-ビス-イソブチリルニトリル(AIBN)をフリーラジカル開始剤として使用して行った(図 9)。CTAのAIBNに対するモル比は10:1であり、モノマーのCTAに対する比は、100%変換された場合に25,000 g/molの分子量が達成されるように設定される。ポリ(HPMA-PDS) マクロCTAを、ジエチルエーテル中へのメタノールからの繰り返しての沈殿により単離した。
チオール化したsiRNAをジスルフィド修飾された5'-センス鎖を含む2本鎖RNAとして商業的に得た(Agilent, Boulder, CO)。結合のために遊離したチオール形態を凍結乾燥した化合物を水に溶解して調製し、1時間、アガロースゲルに固定化されたジスルフィド還元剤TCEPで処理した。還元されたRNA(400μM)を次に24時間、5mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を含むホスフェート緩衝液(pH7)中のピリジルジスルフィド官能性化ポリマーと反応させた(図9)。
完全に血清安定性siRNA複合体のガロースゲル遅延を介した検査の後、siRNA/ポリマー複合体をサイズとゼータ電位についてZetaPALS 検出器 (Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY, 15 mW laser, incident beam = 676 nm)を用いて特徴決定した。即ち、ポリマーを0.1 mg/mlでホスフェート緩衝生食水 (PBS, Gibco)中に調製し、ポリマーを正に荷電されている DMAEMAに基づいてGAPDH siRNA (Ambion)に対して記載された理論上の電化比で添加することにより、複合体を形成した(pH7.4で50%プロトン化され、負に電荷されたsiRNAである)。相関関数を90°のスキャッタリング角で補正し、粒子サイズを粘度および25℃の水の屈折インデックスを用いて計算した。粒子サイズは、Log-正規分布を仮定した有効直径として示す。平均電気泳動移動性を25℃でZetaPALS ゼータ電位分析ソフトウエアを使用して測定し、ゼータ電位を水性懸濁液のためのスモルコフスキーモデルを用いて計算した。
HeLa、ヒト子宮頸癌細胞 (ATCC CCL-2)をL-グルタミン (Gibco)、1%のペニシリン-ストレプトマイシン (Gibco)および10% ウシ胎仔血清 (FBS, Invitrogen)を含むミニマムエッセンシャルメディウム (MEM)中に37℃および5%CO2で維持した。
溶血を用いて、遊離ポリマーおよびsiRNA/ポリマー結合体の両方の潜在的なエンドソーム溶解性活性をエンドソーム輸送を擬似するpH値 (細胞外 pH = 7.4、初期エンドソーム pH = 6.6、および後期エンドソーム pH = 5.8)で測定した。即ち、ヒト全血をEDTAを含むバキュテイナー(vaccutainer)に採取した。血液を遠心し、血漿を吸引し、150nMのNaCl中で3回洗浄し、赤血球(RBC)を単離した。RBCを次に、pH7.4、pH6.6またはpH5.8でホスフェート緩衝液に再懸濁した。ポリマー (10 ug/ml) またはポリマー/siRNA複合体を次にRBCと1時間、37℃でインキュベーションした。無傷なRBCを次に遠心し、上清に放出されたヘモグロビンを541nmでの吸光度により測定し、pH依存性RBC膜溶解性の指標とした。図10Aは、10 μg/mlの濃度でのポリマーの溶血を示し、図10Bは、理論上の電荷比が1:1および4:1でのポリマー5〜7のポリマー/siRNA複合体を示す。溶血性活性は、ポジティブコントロール、1体積%のTriton X-100に対して相対的に正規化し、トリプリケート±標準偏差において行われた単一の実験からのデータを示す。
siRNA/ポリマー複合体の細胞内取り込みをフローサイトメトリー(Becton Dickinson LSR benchtop analyzer)を使用して測定した。Helaを15,000cells/cm2で播種し、一晩掛けて接着させた。FAM (5-カルボキシフルオレシン(carboxyfluorescine))で標識したsiRNA(Ambion)を理論上の電荷比4:1のポリマーと30分間室温で複合させ、次に、プレートに播種されたHeLaに最終siRNA濃度25nMで添加した。4時間の複合体とのインキュベーションの後、細胞をトリプシン処理し、0.5%のBSAおよび0.01トリパンブルーを含むPBSに懸濁した。トリパンブルーを以前に記載された通りに細胞外フルオレシンのクエンチングと、細胞により飲食運動された複合体の識別のために利用した。10,000細胞をサンプル当たりについて分析し、蛍光の増大を未処理でポリマーがFAM標識siRNAと複合されていないサンプルを用いて測定した。図11は、4時間に亘り送達されたHeLa細胞のFAM標識siRNAおよびポリマー4〜7で形成したポリマー/siRNA複合体の内部移行を示す。データはトリプリケートで行った3つの独立した試験からのものであり、平均値の標準誤差を示すエラーバーを付して表す。
siRNA/ポリマー複合体の細胞傷害性を乳酸脱水素酵素(LDH)細胞毒性検出キット(Roche)を用いて測定した。HeLa細胞は、96ウェルプレートに1ウェル当たり12,000の密度で細胞を播種し、一晩接着させた。複合体は、GAPDH siRNAに対して理論上の電荷比が4:1のポリマー(0.1 mg/ml ストック溶液)を添加し、1ウェル当たり25nMのsiRNAの濃度を達成することにより形成した。複合体 (電荷比= 4:1)をトリプリケートでウェルに対して添加した。細胞を24時間、ポリマー複合体とのインキュベーションした後に、培地を除去し、細胞をPBSで2回洗浄した。細胞を次に、溶解緩衝液(100 uL/well、20 mM Tris-HCl、pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM Na2EDTA、1 mM EGTA、1% Triton、2.5 mMピロホスフェートナトリウム、1 mM β-グリセロホスフェート、1 mM オルトバナデートナトリウム)で1時間、4℃で溶解した。ピペッティングによる混合の後、20 uLの細胞溶解物をPBS中で1:5に希釈し、乳酸脱水素酵素(LDH)を100μLのLDH基質溶液と混合することにより定量した。色素形成のために10〜20分のインキュベーションした後、490nmでの吸光度を参照設定650nm内で測定した。
siRNA送達のための一連のポリマーの有効性をGAPDH活性アッセイ(Ambion)を用いてスクリーニングした。HeLa (12,000 cells/cm2) を96ウェルプレートに播種した。24時間後、複合体(電荷比= 4:1)を細胞に最終siRNA濃度が25nMとなるように10%の血清の存在下で添加した。siRNA媒介GAPDHタンパク質減少の範囲は、掲出導入後48時間に検査した。ポジティブコントロールとして、並行してノックダウンした実験をハイパーフェクト(Qiagen)を製造者の推奨する条件に従って使用して行った。GAPDH活性の維持は、製造者により記載された通りに、5分に亘る動態学的な蛍光増加法を使用して測定し、以下の方程式に従って計算した:% 発現維持= (蛍光、GAPDH)/(蛍光、未処理)、ここにおいて、蛍光=( 5分の蛍光)-(1分の蛍光)。siRNAの非ターゲティング配列を使用したとき、形質導入の手順は、GAPDH発現に有意な影響を与えなかった。図13Aは、電荷比(1:1〜8:1)で機能基としての複合体で処理した48時間後にリアルタイムRT-PCRを介して測定されたHeLaにおけるGAPDHノックダウンを示し、図13Bは担体としてポリマー7を有するsiRNA用量(1〜50nM)を機能基とする複合体で処理した48時間後のリアルタイムRT-PCRを経て測定されたHeLaにおけるGAPDHノックダウンを示す。ネガティブコントロールsiRNA#1(Ambion)と商業的に入手可能な形質導入試薬、ハイパーフェクト(Qiagen)をネガティブおよびポジティブコントロールとしてそれぞれ使用した。
図14は、ポリ[HPMA]-b-[(PAA)(BMA)(DMAEMA)]のために設計されたポリマーを示す。多機能的な特定が、ピリジルジスルフィド末端機能性化CTAを使用したRAFTポリマー合成戦略を経て組み込まれ、水可溶性およびpH依存性膜不安定化特性を有するために設計されたジブロック構造を形成した。図14において強調されているモノマー化学的機能性は、各ポリマーブロックの所望の特性を生成するために選択された。重要な点は、モジュール3が生理学的pHで電荷が中性の近くに設計されたことであり(略50%のDMAEMAプロトン化と50%のPAA脱プロトン化が予測される)、より疎水性への変化と低いpH環境において正に荷電されている状態への変化を受けている。
図15に示した通りに、4-シアノ-4-(エチルスルフィニルチオカルボニル)スルフィニルペンタン酸(ECT)前駆体を合成した。ピリジルジスルフィド機能性化されたRAFT鎖移行剤 (CTA)をNHSエステルへのECTの第1の変換と、それに続く、ピリジンジチオ-エチルアミンとの反応により合成された。ECT (1.05 g、4 mmol)およびN-ヒドロキシスクシンイミド (0.460 g、4 mmol)を100 mLのクロロホルムに溶解した。その混合物を次に0℃に冷却し、そのときにN,N' ジシクロヘキシルカルボジイミド (0.865 mg, 4.2 mmol)を添加した。その溶液を0℃で1時間維持し、次に室温で22時間反応させた。その溶液を次に、濾過して、ジシクロヘキシルウレアを除去し、その溶液を回転蒸発により濃縮した。生成された固体を次に減圧下で乾燥し、何れの更なる精製もせずに使用した。次に、NHS ECT (1.80 g、5.0 mmol)およびピリジルジチオ-エチルアミン (0.90 g、5.0 mmoL)を別々にそれぞれ200mLおよび300mLのクロロホルムに溶解した。The solution of ピリジルジチオ-エチルアミンの溶液を次に、20分毎に3つに分けて滴下により添加した。その混合物を次に、室温で2時間反応させた。溶媒を除去した後、2つの逐次的なカラムクロマトグラフィ(シリカゲル 60, Merk)を行い(エチルアセテート:ヘキサンの体積比50:50、エチルアセテート:ヘキサンの体積比70:30)、粘性の橙色固体を得た。
ペプチド伝達ドメインペプチドトランスポルチン(アンテナペディアペプチド(Antp)として公知)配列との融合が、カルボキ末端システイン残基を含むBak-BH3ペプチド(Antp-BH3)の細胞内部移行型を合成するために利用された(NH2-RQIKIWFQNRRMKWKKMGQVGRQLAIIGDDINRRYDSC-COOH)。結合体のための遊離チオールを保証するために、ペプチドを水中で再構築し、1時間、アガロースゲルに固定化されたジスルフィド還元剤TCEPで処理した。還元されたペプチド(400μM)を次に、24時間、ピリジルジスルフィド末端修飾化ポリマーと、5mMのエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を含むホスフェート緩衝液(pH7)において反応させた。
ポリマーの潜在的なエンドソーム溶解性活性を評価するために、膜破壊アッセイを利用して、図18に示すような脂質二重膜のpH依存性破壊のトリガーとなる当該ポリマーの能力を測定した。ヒト全血を吸引し、血漿を除去するために遠心した。残った赤血球を150mMのNaCl中で3回洗浄し、生理学的pH(pH7.4)、初期エンドソーム(pH6.6)および後期エンドソーム(pH5.8)環境に対応するホスフェート緩衝液に再懸濁した。ポリマー(1〜40μg/mL)または1%のTriton X-100を赤血球懸濁液に添加し、37℃で1時間インキュベーションした。無傷な赤血球を遠心によりペレットにし、上清中のヘモグロビン含有量を吸光度541nmにより測定した。溶血のパーセンテージをTriton X-100と相対して決定した。ポリマー溶血性は、1〜40μg/mLの範囲の濃度で定量し、1%のTriton X-100に相対した。この実験は、2回トリプリケートで行って完結し、同様な結果を得た。データは、トリプリケートにおいて行った単一の実験からのものであり、±標準偏差として示す。
HeLa、ヒト子宮頸癌細胞 (ATCC CCL-2)をL-グルタミン (Gibco)、1%のペニシリン-ストレプトマイシン (Gibco)および10% ウシ胎仔血清 (FBS, Invitrogen)を含むミニマムエッセンシャルメディウム (MEM)中に37℃および5%CO2で維持した。実験に先駆けて、HeLaを、顕微鏡観察のために8ウェルチャンバースライド内に(1ウェル当たり20,000細胞)、他のアッセイのために96ウェルプレートに(1ウェル当たり10,000細胞) 一晩接着させた。ポリマー-ペプチド結合体およびコントロールを1%のFBSを含むMEMに添加した。
本願発明の実施態様は、以下のとおりである。
(1)
以下を含むコポリマー:
(a)正常な生理学的pHで親水性である第1の構成ユニットを含む第1のブロック;
(b)以下を含む第2のブロック:
(i)正常な生理学的pHでカチオン性である第2の構成ユニット、これは第1の構成ユニットと同じであっても異なっていてもよい;
(ii)正常な生理学的pHでアニオン性である第3の構成ユニット;
(iii)疎水性増大部分、ここにおいて、
当該疎水性増大部分は、当該第2の構成ユニットに対して共有結合的に結合しているか;
当該疎水性増大部分は、当該第3の構成ユニットに対して共有結合的に結合しているか;
当該疎水性増大部分は、当該第2の構成ユニットの第4の構成ユニットにおいて含まれるか;
または、その何れかの組み合わせである。
(2)
(1)に記載のコポリマーであって、前記第2のブロックは、実質的に全体的な電荷において中性であるコポリマー。
(3)
(1)〜(2)の何れか1項に記載のコポリマーであって、当該コポリマーがジブロックコポリマーであるコポリマー。
(4)
(1)〜(3)の何れか1項に記載のコポリマーであって、当該第1の構成ユニットがカチオン性、アニオン性、中性、または両性イオン性であるコポリマー。
(5)
(4)に記載のコポリマーであって、当該第1の構成ユニットがカチオン性であるコポリマー。
(6)
(1)〜(5)の何れか1項に記載のコポリマーであって、当該第1のブロックが、複数の第1の構成ユニットを含むコポリマー。
(7)
(1)〜(6)の何れか1項に記載のコポリマーであって、当該第2のブロックが、複数の第2の構成ユニット、複数の第3の構成ユニットおよび複数の疎水性増大部分を含むコポリマー。
(8)
(1)〜(7)の何れか1項に記載のコポリマーであって、当該正常な生理学的pHが約7.2から約7.4でるコポリマー。
(9)
以下を含むコポリマー:
(a)正常な生理学的pHでカチオン性である第1の構成ユニットを含む第1のブロック;
(b)以下を含む第2のブロック:
(i)生理学的pHでカチオン性である第2の構成ユニット、これは第1の構成ユニットと同じであっても異なっていてもよい;
(ii)正常な生理学的pHでアニオン性である第3の構成ユニット;
(iii)疎水性増大部分、ここにおいて、
当該疎水性増大部分は、当該第2の構成ユニットに対して共有結合的に結合している;または、
当該疎水性増大部分は、当該第3の構成ユニットに対して共有結合的に結合している;または、
当該疎水性増大部分は、当該第2の構成ユニットの第4の構成ユニットにおいて含まれる;または、
上記の何れかの組み合わせである;および
前記第2のブロックは、実質的に全体的な電荷において中性である。
(10)
以下を含むエンドソーム溶解性コポリマー:
(a)第1のブロック、当該第1のブロックは親水性ブロックである;および、
第2のブロック、当該第2のブロックは、以下を含む膜不安定化疎水性ブロックである:
(i)略中性のpHでアニオン性である第1の荷電可能な種
(ii)略中性のpHでカチオン性である第2の荷電可能な種。
(11)
以下を含むエンドソーム溶解性コポリマー:
(a)第1のブロック、当該第1のブロックは、略中性のpHでカチオン性である第1の荷電可能な種を含む親水性ブロックである;
(b)第2のブロック、当該第2のブロックは、以下を含む膜不安定化疎水性ブロックである:
(i)略中性のpHでアニオン性である第2の荷電可能な種;および、
(ii)略中性のpHでカチオン性である第3の荷電可能な種;並びに、
(c)当該第1のブロックに結合されたオリゴヌクレオチド。
(12)
以下を含むエンドソーム溶解性コポリマー:
(a)第1のブロック、当該第1のブロックは親水性ブロックである;
(b)第2のブロック、当該第2のブロックは、アクリル酸残基またはアルキルアクリル酸残基を含む膜不安定化疎水性ブロックである。
(13)
(1)〜(12)の何れか1項に記載のポリマーであって、当該第1の ポリマーブロックが約10,000ダルトンであるポリマー。
(14)
(1)〜(12)の何れか1項に記載のポリマーであって、当該第1のポリマーブロックが約2,000ダルトン〜約30,000ダルトンであるポリマー。
(15)
(1)〜(12)の何れか1項に記載のポリマーであって、当該第1のポリマーブロックが約8,500ダルトン〜約13,000ダルトンであるポリマー。
(16)
(1)〜(15)の何れか1項に記載のポリマーであって、当該第2のポリマーブロックが、第1のポリマーブロックの分子量の約1〜3倍の分子量を有するポリマー。
(17)
化学式Iを含む(1)、(9)、(10)、(11)または(12)〜(16)の何れか1項に記載のコポリマー:
aは、1〜4である;
bは、2〜4である;
Y4は、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O) O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y0、Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキル-、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキル、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R5で完全には置換されてはいないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Q0は、生理学的pHで親水性である残基;結合可能または機能化可能な残基;または水素;からなる群より選択される残基である
Q1は、正常な生理学的pHで親水性である残基である;
Q2は、正常な生理学的pHで正に荷電されている残基である;
Q3は、正常な生理学的pHで負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける残基である;
mは、約0〜1.0未満である(例えば、0〜約0.49);
nは、0よりも大きい値〜約1.0までである(例えば、約0.51〜約1.0);ここで、m + n = 1である;
pは、0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、pは、実質的に、qと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;および、
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(18)
(13)に記載のコポリマーであって、Q1は、正常な生理学的pHで正に荷電されている;正常な生理学的pHで 負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける;正常な生理学的pHで中性である;または正常な生理学的pHで両性イオン性である;残基である。
(19)
化学式IIを含む(1)、(9)、(10)、(11)または(12)の何れか1項に記載のコポリマー:
aは1 - 4である;
bは2 - 4である;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C−10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキル、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキル、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R51で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の 水素原子を完備する;
各R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q1およびQ2は、正常な生理学的pHで正に荷電されている残基である;
Q3は、正常な生理学的pHで負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける残基である;
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、m + n = 1である
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、pは、実質的に、qと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;および
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(20)
化学式Iを含む(1)、(9)、(10)、(11)または(12)の何れか1項に記載のコポリマー:
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキル、(4C-10C)ヘテロアリールおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキルおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R7-R11で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q1およびQ2は、正常な生理学的pHで正に荷電されている残基であり、これらに限定するものではないが、、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイルおよびピリジルを含む;
Q3は、正常な生理学的pHで負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける残基であり、これらに限定するものではないが、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびホスフェートを含む;
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、m + n = 1である
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、pは、実質的に、qと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;および、
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(21)
化学式IIを含む(1)、(9)、(10)、(11)または(12)の何れか1項に記載のコポリマー:
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は、独立して、水素、(1C-5C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-5C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
Zは、生理学的に許容される対イオンである、
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、m + n = 1である
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、pは、実質的に、qと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;および
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(22)
化学式Iを含むコポリマー:
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y4は、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O) O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)およびアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y0、Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキルからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキルおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q0は、生理学的pHで親水性である残基;結合可能または機能化可能な残基;または水素;からなる群より選択される残基である;
Q1は、正常な生理学的pHで親水性である残基である;
Q2は、正常な生理学的pHで正に荷電されている残基である;
Q3は、正常な生理学的pHで負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける残基である;
mは、約0〜1.0未満である(例えば、0〜約0.49);
nは、0よりも大きい値〜約1.0である(例えば、約0.51〜約1.0);ここにおいて、m + n = 1である
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である:ここにおいて、pは、実質的に、qと同じである;
rは、0 〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;および
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(23)
(18)に記載のコポリマーであって、Q1は、正常な生理学的pHで正に荷電されている;正常な生理学的pHで負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける;正常な生理学的pHで中性の;または正常な生理学的pHで両性イオン性の;残基であるコポリマー。
(24)
化学式IIを有するコポリマー:
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)およびアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキルからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキルおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R51で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
各R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q1およびQ2は、正常な生理学的pHで正に荷電されている残基である;
Q3は、正常な生理学的pHで負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける残基である;
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、m + n = 1である
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、pは、実質的に、qと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;および、
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(25)
化学式IIを含むコポリマー:
aは、1 - 4である;
bは、2 - 4である;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)およびアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-、-C(O)NR6(2C-10C)アルキルからなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-10C)アルキルおよび(6C-10C)アリールからなる群より選択される;ここにおいて、
R7-R11で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Q1およびQ2は、正常な生理学的pHで正に荷電されている残基であり、これらに限定するものではないが、、、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイルおよびピリジルを含む;
Q3は、正常な生理学的pHで負に荷電されているが、低いpHではプロトン化を受ける残基であり、これらに限定するものではないが、、、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびホスフェートを含む;
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、m + n = 1である
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、pは、実質的に、qに同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;並びに、
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(26)
(17)〜(19)または(21)〜(24)の何れか1項に記載のコポリマーであって、R2-A1-Y1-Q1が、C1-6ジアルキルアミノ(C1-6)アルキルメタクリレート、C1-6アルキルアミノ(C1-6)アルキルメタクリレート、アミノ(C1-6)アルキルアクリレート、C1-6ジアルキルアミノ(C1-6)アルキルエタクリレート、C1-6アルキルアミノ(C1-6)アルキルエタクリレート、アミノ(C1-6)アルキルエタクリレート、C1-6ジアルキルアミノ(C1-6)アルキルアクリレート、C1-6アルキルアミノ(C1-6)アルキルアクリレートまたはアミノ(C1-6)アルキルアクリレートの残基であるコポリマー。
(27)
(17)〜(19)、(21)〜(24)または(26)の何れか1項に記載のコポリマーであって、R3-A2-Y2-Q2が、C1-6ジアルキルアミノ(C1-6)アルキルメタクリレート、C1-6アルキルアミノ(C1-6)アルキルメタクリレート、アミノ(C1-6)アルキルアクリレート、C1-6ジアルキルアミノ(C1-6)アルキルエタクリレート、C1-6アルキルアミノ(C1-6)アルキルエタクリレート、アミノ(C1-6)アルキルエタクリレート、C1-6ジアルキルアミノ(C1-6)アルキルアクリレート、C1-6アルキルアミノ(C1-6)アルキルアクリレートまたはアミノ (C1-6)アルキルアクリレートの残基であるコポリマー。
(28)
(17)〜(19)、(21)〜(24)または(26)〜(27)の何れか1項に記載のコポリマーであって、R4-A3-Y3-Q3が、C1-6アルキルアクリル酸の残基であるコポリマー。
(29)
(17)〜(19)、(21)〜(24)または(26)〜(28)の何れか1項に記載のコポリマーであって、R5-A4-Y4-Q4が、C1-6アルキルアクリレート、C1-C6アルキルメタクリレートまたはC1-C6アルキルエタクリレートの残基であるコポリマー。
(30)
化学式IIIを含むコポリマー:ここにおいて、
aは、1 - 4であり;
bは、2 - 4であり;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10およびR11は、独立して、水素、(1C-5C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換されてよい;
Y0およびY4は、独立して、水素、(1C-10C)アルキル、(3C-6C)シクロアルキル、O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y1およびY2は、独立して、共有結合、(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-および-S(2C-10C)アルキル-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、(1C-5C)アルキルおよびフェニルからなる群より選択される;
ここにおいて、R1-R5で完全には置換されていないA1-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
Zは、生理学的に許容される対イオンである、
mは、0〜約0.49である;
nは、約0.51〜約1.0である;ここにおいて、m + n = 1である
pは、約0.2〜約0.5である;
qは、約0.2〜約0.5である;ここにおいて、pは、実質的に、qと同じである;
rは、0〜約0.6である;ここにおいて、p + q + r = 1である
vは、約5kDa〜約25kDaである;並びに
wは、約5kDa〜約50kDaである。
(31)
(17)〜(31)の何れか1項に記載のコポリマーであって、v:wの割合が、約1:1〜約1:3であるコポリマー。
(32)
(1)〜(31)の何れか1項に記載のコポリマーであって、更に、治療薬を含むコポリマー。
(33)
(32)に記載のコポリマーであって、前記治療薬が当該コポリマーに結合しているコポリマー。
(34)
(33)に記載のコポリマーであって、前記治療薬がsiRNAであるコポリマー。
(35)
(33)に記載のコポリマーであって、前記治療薬がポリペプチドであるコポリマー。
(36)
(34)または(35)の何れか1項に記載のコポリマーであって、前記治療薬が当該コポリマーに対して共有結合的に結合しているコポリマー。
(37)
(34)または(35)の何れか1項に記載のコポリマーであって、前記治療薬が当該コポリマーとイオン結合しているコポリマー。
(38)
(1)〜(37)の何れかのコポリマーを複数含む組成物。
(39)
(38)に記載の組成物であって、当該複数のコポリマーが約1.2の多分散性インデックスを有するコポリマー。
Claims (13)
- 以下を含む細胞内薬剤送達物質;
(I)化学式Iを有するジブロックコポリマーを含むコポリマー:
aは、1〜4である;
bは、2〜4である;
Y4は、水素、-(1C-10C)アルキル、-(3C-6C)シクロアルキル、-O-(1C-10C)アルキル、-C (O) O(1C-10C)アルキル、C(O)NR6(1C-10C)およびアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素基で任意に置換される;
Y0、Y1およびY2は、独立して、共有結合、-(1C-10C)アルキレン-、-C(O)O(2C-10C)アルキレン-、-OC(O)(1C-10C)アルキレン-、-O(2C-10C)アルキレン-、-S(2C-10C)アルキレン-および-C(O)NR6(2C-10C)アルキレン-からなる群より選択される;
Y3は、共有結合、-(1C-10C)アルキレンおよび-(6C-10C)アリレンからなる群より選択される;ここにおいて、
R1-R5で完全には置換されてはいないA0-A4の四価の炭素原子およびY0-Y4は、適切な数の水素原子を完備する;
R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、独立して、水素、-CN、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらの何れかは1または1以上のフッ素原子で任意に置換される;
Q0は、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイル、ピリジル、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、ホスフェート、ヒドロキシ、ポリオキシレート化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオール、アジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、p-ニトロフェニルエステル、ピリジルジスルフィドおよび水素からなる群より選択される基である;
Q1は、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイル、ピリジル、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、ホスフェート、ヒドロキシ、ポリオキシレート化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびチオールからなる群より選択される基である;
Q2は、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾイルおよびピリジルからなる群より選択される基である;
Q3は、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびホスフェートからなる群より選択される基である;
mは、0〜1.0未満である;
nは、0よりも大きい値〜1.0までである;ここで、m + n = 1である;
pは、0.1〜0.9である;
qは、0.1〜0.9である;
rは、0〜0.8である;ここにおいて、p + q + r = 1である;
vは、1kDa〜25kDaである;および
wは、1kDa〜50kDaである;ならびに
(II)ポリヌクレオチドまたはペプチドからなる治療学的薬剤。 - 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、v:wの割合が、1:1〜1:3である細胞内薬剤送達物質。
- 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、治療薬が当該コポリマーに結合している細胞内薬剤送達物質。
- 請求項3に記載の細胞内薬剤送達物質であって、前記治療薬がメッセンジャーRNA(mRNA)、siRNA、マイクロRNA (miRNA)、短ヘアピンRNA(shRNA)、非対称干渉RNA(aiRNA)、またはダイサー基質である細胞内薬剤送達物質。
- 請求項4に記載の細胞内薬剤送達物質であって、前記治療薬が当該コポリマーに対して共有結合的に結合している細胞内薬剤送達物質。
- 請求項4に記載の細胞内薬剤送達物質であって、前記治療薬が当該コポリマーとイオン結合している細胞内薬剤送達物質。
- 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、
A4は、-C-C-であり;
R5は、水素および-CH3からなる群より選択され;並びに、
Y4は、-C(O)O(CH2)3CH3である細胞内薬剤送達物質。 - 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、vは5 kDa〜25kDaである細胞内薬剤送達物質。
- 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、mは0である細胞内薬剤送達物質。
- 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、化学式Iのコポリマーが以下の化学式IV4を有し、
[PEGMA]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV4
ここで、
Bはメタクリル酸ブチル残基である; Pはプロピルアクリル酸残基である;Dはジメチルアミノエチルメタクリレート残基である;PEGMAは、ポリエチレングリコールメタクリレート残基であって、1-20エチレンオキシドユニット、4-5エチレンオキシドユニット、または7-8エチレンオキシドユニットである;
pは、0.1〜0.9である;
qは、0.1〜0.9である;
rは、0〜0.8である;ここにおいて、p + q + r = 1である;
vは、1kDa〜25kDaである;および、
wは、1kDa〜50kDaである、細胞内薬剤送達物質。 - 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、化学式Iのコポリマーが以下の化学式IV5を有し、
[PEGMAm-/-DMAEMAn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV5
ここで、
Bはメタクリル酸ブチル残基である; Pはプロピルアクリル酸残基である;Dはジメチルアミノエチルメタクリレート残基である;PEGMAは、ポリエチレングリコールメタクリレート残基であって、1-20エチレンオキシドユニット、4-5エチレンオキシドユニット、または7-8エチレンオキシドユニットである; DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基である;
mは、0〜1.0未満である;
nは、0よりも大きい値〜1.0までである;ここで、m + n = 1である;
pは、0.1〜0.9である;
qは、0.1〜0.9である;
rは、0〜0.8である;ここにおいて、p + q + r = 1である;
vは、1kDa〜25kDaである;および、
wは、1kDa〜50kDaである、細胞内薬剤送達物質。 - 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、化学式Iのコポリマーが以下の化学式IV8を有し、
[HPMAm-/-PDSMn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV8
ここで、
Bはメタクリル酸ブチル残基である; Pはプロピルアクリル酸残基である;Dはジメチルアミノエチルメタクリレート残基である;HPMAはN-(2-ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド残基である;およびPDSMはピリジルジスルフィドメタクリレート残基である;
mは、0〜1.0未満である;
nは、0よりも大きい値〜1.0までである;ここで、m + n = 1である;
pは、0.1〜0.9である;
qは、0.1〜0.9である;
rは、0〜0.8である;ここにおいて、p + q + r = 1である;
vは、1kDa〜25kDaである;および、
wは、1kDa〜50kDaである、細胞内薬剤送達物質。 - 請求項1に記載の細胞内薬剤送達物質であって、化学式Iのコポリマーが以下の化学式IV9を有し、
[PEGMAm-/-PDSMn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]w IV9
ここで、
Bはメタクリル酸ブチル残基である; Pはプロピルアクリル酸残基である;Dはジメチルアミノエチルメタクリレート残基である;PDSMはピリジルジスルフィドメタクリレート残基である;PEGMAは、ポリエチレングリコールメタクリレート残基であって、1-20エチレンオキシドユニット、4-5エチレンオキシドユニット、または7-8エチレンオキシドユニットである;
mは、0〜1.0未満である;
nは、0よりも大きい値〜1.0までである;ここで、m + n = 1である;
pは、0.1〜0.9である;
qは、0.1〜0.9である;
rは、0〜0.8である;ここにおいて、p + q + r = 1である;
vは、1kDa〜25kDaである;および、
wは、1kDa〜50kDaである、細胞内薬剤送達物質。
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EP3079668A1 (en) * | 2013-12-09 | 2016-10-19 | Durect Corporation | Pharmaceutically active agent complexes, polymer complexes, and compositions and methods involving the same |
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US10695288B2 (en) | 2014-11-19 | 2020-06-30 | Vanderbilt University | Reactive oxygen species (ROS)-responsive compositions and methods thereof |
WO2016118697A1 (en) * | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Phaserx, Inc. | Methods, compositions, and systems for delivering therapeutic and diagnostic agents into cells |
EP3256487A4 (en) | 2015-02-09 | 2018-07-18 | Duke University | Compositions and methods for epigenome editing |
EP3288594B1 (en) | 2015-04-27 | 2022-06-29 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Dual aav vector system for crispr/cas9 mediated correction of human disease |
EP3325018A4 (en) | 2015-07-22 | 2019-04-24 | Duke University | HIGH EFFICIENCY SCREENING OF REGULATORY ELEMENT FUNCTION USING EPIGENOUS EDITING TECHNOLOGIES |
EA201890565A1 (ru) | 2015-08-25 | 2019-04-30 | Дьюк Юниверсити | Композиции и способы улучшения специфичности в геномной инженерии с применением рнк-направляемых эндонуклеаз |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4699784A (en) * | 1986-02-25 | 1987-10-13 | Center For Molecular Medicine & Immunology | Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate |
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US6359054B1 (en) * | 1994-11-18 | 2002-03-19 | Supratek Pharma Inc. | Polynucleotide compositions for intramuscular administration |
FR2767829B1 (fr) | 1997-09-01 | 1999-12-03 | Georges Sturtz | Composes phosphonates ou gem-bisphosphonates acryliques ou methacryliques |
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US6410057B1 (en) * | 1997-12-12 | 2002-06-25 | Samyang Corporation | Biodegradable mixed polymeric micelles for drug delivery |
US6383811B2 (en) * | 1997-12-30 | 2002-05-07 | Mirus Corporation | Polyampholytes for delivering polyions to a cell |
WO1999034831A1 (en) * | 1998-01-05 | 1999-07-15 | University Of Washington | Enhanced transport using membrane disruptive agents |
US6306994B1 (en) * | 1999-05-14 | 2001-10-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Inks with enhanced substrate binding characteristics |
US7098032B2 (en) * | 2001-01-02 | 2006-08-29 | Mirus Bio Corporation | Compositions and methods for drug delivery using pH sensitive molecules |
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WO2001051092A2 (en) * | 2000-01-07 | 2001-07-19 | University Of Washington | Enhanced transport of agents using membrane disruptive agents |
US20030134420A1 (en) * | 2000-02-18 | 2003-07-17 | Lollo Charles Peter | Methods and compositions for gene delivery |
WO2001087227A2 (en) | 2000-05-17 | 2001-11-22 | Labopharm, Inc. | Drug containing polymeric micelles |
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US6939564B2 (en) * | 2001-06-08 | 2005-09-06 | Labopharm, Inc. | Water-soluble stabilized self-assembled polyelectrolytes |
US7094810B2 (en) * | 2001-06-08 | 2006-08-22 | Labopharm, Inc. | pH-sensitive block copolymers for pharmaceutical compositions |
CA2472170A1 (en) * | 2001-12-28 | 2003-07-24 | Supratek Pharma Inc. | Pharmaceutical compositions comprising polyanionic polymers and amphiphilic block copolymers and methods of use thereof to improve gene expression |
US20050220880A1 (en) * | 2002-03-07 | 2005-10-06 | Lewis Andrew L | Drug carriers comprising amphiphilic block copolymers |
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JP2006505686A (ja) * | 2002-11-07 | 2006-02-16 | ロディア・シミ | 両性又は双極性イオン性部分を含む制御された構造のコポリマー |
WO2004050795A2 (en) * | 2002-11-27 | 2004-06-17 | Tufts University | Antioxidant-functionalized polymers |
AU2003300380B2 (en) * | 2002-12-30 | 2008-11-06 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polypeptide-poly(ethylene glycol) block copolymers as drug delivery vehicles |
US7871818B2 (en) * | 2003-01-31 | 2011-01-18 | Roche Madison Inc. | Membrane active polymers |
US7217776B1 (en) * | 2003-02-14 | 2007-05-15 | Iowa State University Research Foundation | pH-sensitive methacrylic copolymer gels and the production thereof |
US20040162235A1 (en) * | 2003-02-18 | 2004-08-19 | Trubetskoy Vladimir S. | Delivery of siRNA to cells using polyampholytes |
JP4535229B2 (ja) * | 2003-05-08 | 2010-09-01 | 国立大学法人 東京大学 | ポリエチレングリコール−ポリカチオンブロック共重合体 |
US7632905B2 (en) | 2004-04-09 | 2009-12-15 | L'oreal S.A. | Block copolymer, composition comprising it and cosmetic treatment process |
FR2868784B1 (fr) * | 2004-04-09 | 2006-05-26 | Oreal | Copolymere sequence, composition le comprenant et procede de traitement cosmetique |
US20080274454A1 (en) | 2004-04-07 | 2008-11-06 | Mirkin Chad A | Reversible and Chemically Programmable Micelle Assembly With Dna Block-Copolymer Amphiphiles |
US8821859B2 (en) * | 2004-05-19 | 2014-09-02 | Agency For Science, Technology And Research | Methods and articles for the delivery of therapeutic agents |
GB0418123D0 (en) * | 2004-08-13 | 2004-09-15 | Asahi Chemical Ind | Polymers useful as medical materials |
WO2006060723A2 (en) * | 2004-12-03 | 2006-06-08 | Vical Incorporated | Methods for producing block copolymer/amphiphilic particles |
WO2006071769A1 (en) * | 2004-12-28 | 2006-07-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Controlled release from block co-polymer worm micelles |
US20060171980A1 (en) * | 2005-02-01 | 2006-08-03 | Helmus Michael N | Implantable or insertable medical devices having optimal surface energy |
JP2008534747A (ja) * | 2005-03-31 | 2008-08-28 | エーピー ファーマ, インコーポレイテッド | Peg−ポリアセタールグラフトコポリマーおよびpeg−ポリアセタール−poeグラフトコポリマーならびに医薬組成物 |
US8574604B2 (en) * | 2005-04-15 | 2013-11-05 | Interface Biologics, Inc. | Methods and compositions for the delivery of biologically active agents |
US9139850B2 (en) * | 2005-05-19 | 2015-09-22 | L'oreal | Vectorization of dsRNA by cationic particles and topical use |
WO2007008300A2 (en) | 2005-05-31 | 2007-01-18 | ECOLE POLYTECHNIQUE FéDéRALE DE LAUSANNE | Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs |
FR2890859B1 (fr) * | 2005-09-21 | 2012-12-21 | Oreal | Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase |
US7718193B2 (en) * | 2006-03-16 | 2010-05-18 | University Of Washington | Temperature- and pH-responsive polymer compositions |
CA2652280C (en) * | 2006-05-15 | 2014-01-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymers for functional particles |
US8512757B2 (en) | 2006-07-05 | 2013-08-20 | Agency For Science, Techology And Research | Micelles for drug delivery |
AU2007285782B2 (en) | 2006-08-18 | 2010-06-24 | Arrowhead Research Corporation | Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides |
WO2008085556A2 (en) | 2006-09-12 | 2008-07-17 | University Of South Florida | Surfactant-free nanoparticles for drug delivery |
US20080081075A1 (en) * | 2006-10-02 | 2008-04-03 | National Tsing Hua University | Multifunctional mixed micelle of graft and block copolymers and preparation thereof |
WO2008071009A1 (en) | 2006-12-15 | 2008-06-19 | The Governors Of The University Of Alberta | Novel ligand guided block copolymers for targeted drug delivery |
JP2010516675A (ja) * | 2007-01-17 | 2010-05-20 | イミューノメディクス、インコーポレイテッド | 治療薬剤のポリマー担体および疾病部位の抗体に基づく標的化のための認識部分 |
US20080311045A1 (en) * | 2007-06-06 | 2008-12-18 | Biovaluation & Analysis, Inc. | Polymersomes for Use in Acoustically Mediated Intracellular Drug Delivery in vivo |
EP2173382A4 (en) | 2007-06-08 | 2012-11-14 | Univ Queensland | INJURY REPAIR COMPOSITION AND METHOD |
EP2173168A1 (en) | 2007-06-11 | 2010-04-14 | BioCure, Inc. | Vesicles for active macromolecule delivery |
WO2009009025A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-15 | Northeastern University | Mixed micelles including amphipathic conjugates of rna agents, and uses thereof |
US20090036625A1 (en) * | 2007-08-01 | 2009-02-05 | Chung Yuan Christian University | Amphiphilic Polymer, Method for Forming the Same and Application thereof |
EP2025348A1 (en) | 2007-08-13 | 2009-02-18 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Targeted block copolymer micelles |
US20110129921A1 (en) | 2008-05-13 | 2011-06-02 | University Of Washington | Targeted polymer bioconjugates |
EP2285853B1 (en) * | 2008-05-13 | 2013-02-27 | University of Washington | Micellic assemblies |
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US9476063B2 (en) * | 2008-05-13 | 2016-10-25 | University Of Washington | Diblock copolymers and polynucleotide complexes thereof for delivery into cells |
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