JP5910772B2 - 計測装置及び計測方法 - Google Patents
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Description
本発明の第2の局面は、本発明の第1の局面にさらなる事項を付加する。本発明の第2の局面においては、報知機構及び報知制御部がさらに設けられる。報知機構は、計測エラーを報知する。報知制御部は、送液制御部が送液機構に流路へ液体を再供給させた後に気泡検出部が流路への気泡の混入を再検出した場合に、報知機構に計測エラーを報知させる。
図1の模式図は、計測装置の望ましい実施形態を示す。図2の模式図は、計測装置に取り付けられるセンサーチップの分解断面図である。
図1及び図2に示すように、金膜1020の一方の主面1100に抗体固層膜1024が定着し、金膜1020の一方の主面1100と流路形成体1026の接合面1104とが接合され、金膜1020の他方の主面1102とプリズム1022の反射面1108とが密着する。抗体固層膜1024は流路1080の内部に設けられる。流路形成体1026の液体出入口面1112にはシール1028が貼られる。シール1028が省略されてもよい。
金膜1020は、薄膜である。金膜1020の膜厚は、望ましくは、30〜70nmである。ただし、金膜1020の膜厚がこの範囲外であってもよい。
プリズム1022は、台形柱体である。望ましくは、プリズム1022は、等脚台形柱体である。プリズム1022の一方の傾斜側面は励起光ELの入射面1106になる。プリズム1022の幅広の平行側面は励起光ELの反射面1108になる。プリズム1022の他方の傾斜面は励起光ELの出射面1110になる。入射面1106へ入射した励起光ELが反射面1108に反射され反射光RLとなって出射面1110から出射するように入射面1106、反射面1108及び出射面1110は配置される。プリズム1022の形状は、共鳴角θrで励起光ELを反射面1108へ入射させることができるように決められる。
流路形成体1026には、流路1080が形成される。流路1080は、接合面1104に露出し、金膜1020が形成されたプリズム1022により閉塞される。流路形成体1026は、接着、レーザー溶着、超音波溶着、クランプ圧着等により、金膜1020が形成されたプリズム1022に接合される。ただし、金膜1020が形成されたプリズム1022に流路形成体1026が他の方法により接合されてもよい。流路形成体1026が2個以上の形状物の複合体であってもよい。
送液機構1008は、一次抗体液、試料液、二次抗体液、バッファー液等の液体を流路1080へ供給し、一次抗体液、試料液、二次抗体液、バッファー液等の液体を流路1080から回収する。一次抗体液、試料液及び二次抗体液が流路1080へ供給された場合は、それぞれ、抗体固層膜1024に一次抗体液、試料液及び二次抗体液が接触する。送液機構1008が、一次抗体液、試料液、二次抗体液及びバッファー液以外の液体を供給及び回収してもよい。
図3及び図4の模式図は、一次抗体液が流路へ供給された状態を示す。図3は、流路へ気泡が混入しなかった場合を示す。図4は、流路へ気泡が混入した場合を示す。図5の模式図は、試料液が流路へ供給された状態を示す。図6の模式図は、二次抗体液が流路へ供給された状態を示す。
一次抗体液1120は、計測される抗原1128と結合し抗体固層膜1024に固定される一次抗体1122を含む。
抗体固層膜1024は、一次抗体1122、抗原1128及び二次抗体1132等の反応物を反応させる反応場を提供する。抗体固層膜1024は、非流動体からなる。したがって、一次抗体液1120、試料液1126又は二次抗体液1130が抗体固層膜1024に接触しても、抗体固層膜1024は移動しない。
図1に示すように、光源1040は、励起光ELを放射する。望ましくは、光源1040はレーザーダイオードであり、光源1040から放射される光は、平行光線であり、直線偏光であり、単色光である。表面プラズモン励起蛍光FL及び反射光RLの光量が測定される場合には励起光ELが放射されるが、励起光ELは連続的に放射されてもよいし、一定間隔で放射されてもよい。
直線偏光板1042は、励起光ELの光路上にあり、光源1040から放射された励起光ELを直線偏光へ変換する。励起光ELの偏光方向は、反射面1108に対して励起光ELがp偏光になるように選択される。これにより、エバネッセント波のもれだしが増加し、表面プラズモン励起蛍光FLが増加し、計測の感度が向上する。
ミラー1044は、励起光ELの光路上にあり、直線偏光板1042を通過した励起光ELを反射する。ミラー1044により反射された励起光ELは、プリズム1022に照射される。プリズム1022に照射された光は、入射面1106へ入射し、反射面1108に反射され、反射光RLとなって出射面1110から出射する。反射面1108への励起光ELの入射角θは、全反射条件θc≦θを満たす(θc:臨界角)。
ローパスフィルター1006は、表面プラズモン励起蛍光FLの光路上にある。
CCDセンサー1005は、表面プラズモン励起蛍光FLの光路上にあり、表面プラズモン励起蛍光FLの光量を測定する。CCDセンサー1005が他の形式の光量センサーに置き換えられてもよい。例えば、CCDセンサー1005が光電子増倍管等に置き換えられてもよい。
フォトダイオード1007は、反射光RLの光路上にあり、反射光RLの光量を測定する。フォトダイオード1007が他の形式の光量センサーに置き換えられてもよい。例えば、フォトダイオード1007がフォトトランジスター、フォトレジスター等に置き換えられてもよい。
図7のブロック図は、コントローラーを示す。
図8のフローチャートは、計測装置の動作を示す。
図10のフローチャートは、一次抗体液及び二次抗体液の供給中における気泡の混入の検出の手順を示す。
図11のフローチャートは、試料液の供給中における気泡の混入の検出の手順を示す。
図12のフローチャートは、測定中における気泡の混入の検出の手順を示す。
1004 照射機構
1005 CCDセンサー
1007 フォトダイオード
1008 送液機構
1020 金膜
1022 プリズム
1024 抗体固層膜
1026 流路形成体
1080 流路
EL 励起光
RL 反射光
FL 表面プラズモン励起蛍光
Claims (3)
- 表面プラズモン励起蛍光分光法による計測を行う計測装置であって、
第1の主面及び第2の主面を有する導電体膜と、
励起光の入射面、反射面及び出射面を有し、前記入射面へ入射した前記励起光が前記反射面に反射され反射光となって前記出射面から出射するように前記入射面、前記反射面及び前記出射面が配置され、前記反射面が前記第1の主面に密着する誘電体媒体と、
接合面を有し、前記接合面に露出する流路が形成され、前記接合面が前記第2の主面に接合される流路形成体と、
前記流路の内部に設けられ、前記第2の主面に定着し、反応物が反応する反応場を提供する反応場提供物と、
前記誘電体媒体に前記励起光を照射し、前記反射面へ共鳴角で前記励起光を入射させる照射機構と、
前記反応場から放射される表面プラズモン励起蛍光の光量を測定する第1の光量センサーと、
前記反射光の光量を測定する第2の光量センサーと、
前記第2の光量センサーから前記反射光の光量の測定結果を取得し、前記反射光の光量が基準を超えて増加した場合に前記流路への気泡の混入を検出する気泡検出部と、
液体を前記流路へ供給し前記流路から回収する送液機構と、
前記表面プラズモン励起蛍光の光量の測定の開始及び終了を制御する測定制御部と、
前記測定制御部が前記表面プラズモン励起蛍光の光量の測定を開始させた後に前記気泡検出部が前記流路への気泡の混入を検出した場合に、前記送液機構に前記流路から液体を回収させ前記流路へ液体を再供給させる送液制御部と、
を備え、
前記測定制御部は、
前記気泡検出部が前記流路への気泡の混入を検出した場合に前記表面プラズモン励起蛍光の光量の測定を中止させ、前記送液制御部が前記送液機構に前記流路から液体を回収させ前記送液機構に前記流路へ液体を再供給させた後に前記流路への気泡の混入を再検出しなかった場合に前記表面プラズモン励起蛍光の光量の再測定を開始させる
計測装置。 - 請求項1の計測装置において、
計測エラーを報知する報知機構と、
前記送液制御部が前記送液機構に前記流路へ液体を再供給させた後に前記気泡検出部が前記流路への気泡の混入を再検出した場合に、前記報知機構に前記計測エラーを報知させる報知制御部と、
をさらに備える計測装置。 - 表面プラズモン励起蛍光分光法による計測を行う計測方法であって、
(a) 導電体膜、誘電体媒体、流路形成体及び反応場提供物を備え、前記導電体膜が第1の主面及び第2の主面を有し、前記誘電体媒体が励起光の入射面、反射面及び出射面を有し、前記入射面へ入射した前記励起光が前記反射面に反射され反射光となって前記出射面から出射するように前記入射面、前記反射面及び前記出射面が配置され、前記第1の主面と前記反射面とが密着し、前記流路形成体が接合面を有し、前記接合面に露出する流路が前記流路形成体に形成され、前記第2の主面と前記接合面とが接合され、前記反応場提供物が前記流路の内部に設けられ前記第2の主面に定着し反応物が反応する反応場を提供する構造物を準備する工程と、
(b) 前記工程(a)の後に、前記誘電体媒体に前記励起光を照射し、前記反射面へ共鳴角で前記励起光を入射させる工程と、
(c) 前記工程(b)が実行されている間に前記反応場から放射される表面プラズモン励起蛍光の光量を測定する工程と、
(d) 液体を前記流路へ供給する工程と、
(e) 前記工程(b)が実行されている間であって前記工程(d)の後に前記反射光の光量を測定する工程と、
(f) 前記工程(e)において測定される前記反射光の光量が基準を超えて増加した場合に前記流路への気泡の混入を検出する工程と、
を備え、
前記工程(e)が前記工程(c)における前記表面プラズモン励起蛍光の光量の測定を開始させた後に実行され、前記工程(f)において気泡の混入を検出した場合に、前記工程(c)を中止させ、前記流路に供給された液体を回収させ、その後液体を前記流路へ再供給させた後に、前記工程(e)を再度実行し前記流路への気泡の混入を再検出しなかった場合に前記工程(c)を再開する
計測方法。
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