JP5860808B2 - 放射性ヨウ素化方法 - Google Patents

Description

本発明は、検査対象の生物学的標的化分子（ＢＴＭ）を放射性ヨウ素で標識するための新規な方法を提供する。また、本方法を用いて製造される新規な放射性ヨウ素化ＢＴＭ並びにかかる放射性ヨウ素化ＢＴＭを含む放射性医薬組成物も提供される。本発明はまた、本方法で有用な放射性ヨウ素化中間体並びにかかる放射性ヨウ素化ＢＴＭを用いるインビボイメージング方法も提供する。

有機分子に放射性ハロゲンを導入する方法は公知である［Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］。¹²³Ｉ標識放射性医薬品の場合に関し、Ｅｅｒｓｅｌｓ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４８，２４１−２５７（２００５）］は以下の４つの主要な合成経路を比較している。
（Ｉ）酸化的放射性ヨウ素化
（ｉｉ）求核性同位体交換
（ｉｉｉ）求核性非同位体交換
（ｉｖ）求電子性標識
経路（ｉｖ）は、通例、トリアルキルスズ、トリアルキルシリル或いは有機水銀又は有機タリウム誘導体のような有機金属前駆体の使用を必要とする。これらのうち、室温での領域特異的放射性ヨウ素化が可能である点で、放射性ヨード脱スタンニル化経路が好ましい求電子性標識方法として認識されている。Ｅｅｒｓｅｌｓ ｅｔ ａｌは、特に優れた放射性ヨウ素化方法は存在しないと結論づけた。

放射性医薬品合成における有機スズ中間体の使用は、Ａｌｉ ｅｔ ａｌ［Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４２３−４４５（１９９６）］の総説に記載されている。Ｋａｂａｌｋａ ｅｔ ａｌは、放射性同位体及び放射性ハロゲン標識を可能にするための有機ボラン前駆体の使用に関して広範な発表を行った［例えば、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５０，４４６−４４７及び８８８−８９４（２００７）参照］。

放射化学を含む生物医学研究における「クリック化学」の応用がＮｗｅ ｅｔ ａｌ［Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］の総説に記載されている。そこに記載されている通り、主たる関心は、ＰＥＴ用放射性同位体である¹⁸Ｆ（及びそれよりは少ないものの¹¹Ｃ）、並びに^99mＴｃ又は¹¹¹ＩｎのようなＳＰＥＣＴイメージングに適した放射性金属に関する「クリック・トゥ・キレート（ｃｌｉｃｋ ｔｏ ｃｈｅｌａｔｅ）」アプローチに向けられていた。¹⁸Ｆ−フルオロアルキル置換トリアゾールを組み込んだ生成物を与える標的化ペプチドの¹⁸Ｆクリック標識が、Ｌｉ ｅｔ ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（６），１９８７−１９９４（２００７）］及びＨａｕｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（１９），５９０１−５９０４（２００８）］によって報告されている。

国際公開第２００６／０６７３７６号には、ベクターを標識する方法であって、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下で次の式（Ｉ）の化合物を次の式（ＩＩ）の化合物と反応させるか、或いは次の式（ＩＩＩ）の化合物を次の式（ＩＶ）の化合物と反応させることで、それぞれ次の式（Ｖ）又は式（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含む方法が開示されている。

式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は各々ンカー基であり、Ｒ^*は放射性核種を含むレポーター部分である。

式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４及びＲ^*は上記で定義した通りである。

国際公開第２００６／０６７３７６号のＲ^*は、放射性核種（例えば、陽電子放出放射性核種）を含むレポーター部分である。この目的に適した陽電子放出放射性核種には、¹¹Ｃ、¹⁸Ｆ、⁷⁵Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒ、¹²⁴Ｉ、⁸²Ｒｂ、⁶⁸Ｇａ、⁶⁴Ｃｕ及び⁶²Ｃｕがあると記載されており、¹¹Ｃ及び¹⁸Ｆが好ましい。他の有用な放射性核種として、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、²¹¹Ａｔ、^99mＴｃ及び¹¹¹Ｉｎが記載されている。

国際公開第２００７／１４８０８９号には、ベクターを放射性標識する方法であって、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下で次の式（Ｉ）の化合物を次の式（ＩＩ）の化合物と反応させるか、或いは次の式（ＩＩＩ）の化合物を次の式（ＩＶ）の化合物と反応させることで、それぞれ次の式（Ｖ）又は式（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含む方法が開示されている。

式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は各々ンカー基であり、Ｒ^*は放射性核種を含むレポーター部分である。

国際公開第２００６／０６７３７６号及び国際公開第２００７／１４８０８９号のいずれにおいても、金属放射性核種は、例えば当業者にとって公知の方法による直接組込みにより、キレート化剤に好適に導入されると記載されている。国際公開第２００６／０６７３７６号及び国際公開第２００７／１４８０８９号のいずれにも、クリック放射性ヨウ素化のために特有の方法論は開示されていない。詳しくは、式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物のいかなる組合せが適当であるか、リンカー基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４のいかなる組合せが適当であるか、及びいかなるタイプのＲ^*基が適当であるかは開示されていない。加えて、国際公開第２００６／０６７３７６号は¹⁸Ｆに焦点を合わせており、しかもフルオロアセチレンは放射性標識のために魅力的な中間体ではなかろう。なぜなら、これは−８０℃で沸騰し、液体状態では爆発的に不安定であると報告されているからである［Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８１，８０３−８０４（１９５９）］。

国際公開第２００６／１１６６２９号（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．）には、標的生体高分子に対して親和性を有する放射性標識リガンド又は基質の製造方法であって、
（ａ）（ｉ）第１の分子構造、（ｉｉ）脱離基、（ｉｉｉ）クリック化学反応に関与し得る第１の官能基、及び任意には（ｉｖ）第１の官能基と分子構造との間のリンカーを含む第１の化合物を、放射性試薬の放射性成分で脱離基を置換するのに十分な条件下で放射性試薬と反応させて第１の放射性化合物を生成する段階、
（ｂ）（ｉ）第２の分子構造、及び（ｉｉ）第１の官能基とのクリック化学反応に関与し得る第２の相補的官能基を含む第２の化合物であって、任意には第２の化合物と第２の官能基との間にリンカーを含む第２の化合物を用意する段階、
（ｃ）第１の放射性化合物の第１の官能基をクリック化学反応によって第２の化合物の相補的官能基と反応させて放射性リガンド又は基質を生成する段階、並びに
（ｄ）放射性リガンド又は基質を単離する段階
を含む方法が開示されている。

国際公開第２００６／１１６６２９号は、その方法が放射性同位体¹²⁴Ｉ、¹⁸Ｆ、¹¹Ｃ、¹³Ｎ及び¹⁵Ｏと共に使用するのに適しており、好ましい放射性同位体は¹⁸Ｆ、¹¹Ｃ、¹²³Ｉ、¹²⁴Ｉ、¹²⁷Ｉ、¹³¹Ｉ、⁷⁶Ｂｒ、⁶⁴Ｃｕ、^99mＴｃ、９０Ｙ、⁶⁷Ｇａ、⁵¹Ｃｒ、¹⁹²Ｉｒ、⁹⁹Ｍｏ、¹⁵³Ｓｍ及び²⁰¹Ｔｌであることを教示している。国際公開第２００６／１１６６２９号はまた、使用し得る他の放射性同位体には、⁷²Ａｓ、⁷⁴Ａｓ、⁷⁵Ｂｒ、⁵⁵Ｃｏ、⁶¹Ｃｕ、⁶⁷Ｃｕ、⁶⁸Ｇａ、⁶⁸Ｇｅ、¹²⁵Ｉ、¹³²Ｉ、¹¹¹Ｉｎ、⁵²Ｍｎ、²⁰³Ｐｂ及び⁹⁷Ｒｕがあることを教示している。しかし、国際公開第２００６／１１６６２９号は、その方法を生物学的分子の放射性ヨウ素化にどのように適用すべきかについての詳しい教示を示していない。

したがって、代わりの放射性ヨウ素化方法に対するニーズが今なお存在している。

国際公開第２００６／０６７３７６号パンフレット

本発明は、クリック放射性ヨウ素化を用いて生物学的標的化分子（ＢＴＭ）を放射性ヨウ素化する方法を提供する。本方法は、温和な条件下で実施できるという利点を有しており、したがって一定範囲の分子（潜在的には、放射性ヨウ素化反応条件下におけるＢＴＭの不安定性のために通常の直接放射性ヨウ素化方法が実行できない分子を含む）に対する適合性を有している。かかる感受性の例には、通常の放射性ヨウ素化のために必要な酸化条件に対する不適合性又は不安定性がある。本方法は、非酸化条件下で実施でき、したがって酸化を受けやすいＢＴＭを標識するために特に有利である放射性ヨウ素化方法を提供する。

本方法は、放射性ヨウ素がトリアゾール又はイソキサゾールヘテロアリール環に直接結合した生成物を与える。したがって、かかる放射性ヨウ素化生成物は、インビボでの代謝性脱ヨウ素化並びにその結果としての放射性ヨウ素の望ましくない胃及び／又は甲状腺取込みに対して良好な安全性を示すと予想される。したがって、かかる生成物はインビボイメージング用の放射性医薬品として使用するのに適しており、これは重要な利点である。

クリック放射性ヨウ素化方法は、自動合成装置で使用するために容易に適合させることができる。それに関しては、使用されるヨードアセチレン（Ｈ−≡−Ｉ）の揮発性（約１気圧で３２℃と予測されるが、６０〜８０℃と報告されている）は、放射性標識に先立って反応性の放射性ヨウ素化学種を容易に蒸留するため有利に使用でき、その結果として生成物の放射化学純度（ＲＣＰ）は最大になる。これは、例えばクロマトグラフィーによる追加の生成物精製プロセスの必要性を最小限に抑える。これはまた、放射能及び／又は放射線量の損失リスクが増大するため、揮発性の放射性ヨウ素含有化学種（例えば、分子状ヨウ素Ｉ₂）が望ましくないものと見なされる通常の放射性ヨウ素化方法とは対照的である。

図１は、過酢酸を用いて製造された［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレンのＲＰ−ＨＰＬＣ分析結果である。 図２は、［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレンを蒸留するために使用した装置を示している。 図３は、蒸留から約１０分後におけるＨＰＬＣ分析結果であって、９４％のＲＣＰを有する［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレンを示している。

第１の態様では、本発明は、生物学的標的化部分の放射性ヨウ素化方法であって、
（ｉ）次の式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）の化合物を用意する段階、及び

（ｉｉ）クリック環付加触媒の存在下で前記式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）の化合物を次の式（ＩＩ）の化合物と反応させることで、クリック環付加によってそれぞれ次の式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）のコンジュゲートを得る段階
を含む方法を提供する。

式中、
Ｉ^*はヨウ素の放射性同位体であり、
Ｌ¹は存在しても存在しなくてもよいリンカー基であり、
ＢＴＭは生物学的標的化部分である。

「放射性ヨウ素化」という用語はその通常の意味を有し、即ち、放射性標識のために使用されるせ放射性同位体がヨウ素の放射性同位体である放射性標識プロセスをいう。

リンカー基が存在しない場合、それは式（Ｉａ）のアジド基又は式（Ｉｂ）のニトリルオキシド官能基がＢＴＭに直接結合していることを意味する。

「生物学的標的化部分」（ＢＴＭ）という用語は、投与後、インビボで哺乳動物体の特定部位に選択的に取り込まれるか又は特定部位に局在する化合物を意味する。かかる部位は、例えば、特定の疾患状態に関係するものであるか、或いは器官又は代謝過程がいかに機能しているかを表すものであり得る。

ヨウ素の放射性同位体という用語はその通常の意味を有し、即ち、放射性であるヨウ素元素の同位体をいう。好適なかかる放射性同位体には、¹²³Ｉ、¹²⁴Ｉ、¹²⁵Ｉ及び¹³¹Ｉがある。ＢＴＭが¹³¹Ｉで標識された場合、生成物はインビボでの治療用途（例えば、ＢＴＭが抗体又は抗体フラグメントである場合の放射性免疫療法）のための放射性医薬品として有用であり得る。

「クリック環付加触媒」という用語は、第１の態様のクリック（アルキン＋アジド）又はクリック（アルキン＋イソニトリルオキシド）環付加反応を触媒することが知られている触媒を意味する。クリック環付加反応で使用するための好適なかかる触媒は、当技術分野で公知である。好ましいかかる触媒はＣｕ（Ｉ）を含むと共に、以下で説明する。好適な触媒のさらなる詳細は、Ｗｕ ａｎｄ Ｆｏｋｉｎ［Ａｌｄｒｉｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，４０（１），７−１７（２００７）］及びＭｅｌｄａｌ ａｎｄ Ｔｏｒｎｏｅ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１０８，２９５２−３０１５（２００８）］によって記載されている。

好ましい態様
第１の態様の方法で使用するための好ましい前駆体は式（Ｉａ）のアジドであり、したがって好ましい生成物は式（ＩＩＩａ）のトリアゾールである。

本発明で使用するための好ましいヨウ素の放射性同位体は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いるインビボでの医学イメージングに適するものである。かかる放射性同位体は、好ましくは¹²³Ｉ、¹²⁴Ｉ又は¹³¹Ｉであり、さらに好ましくは¹²³Ｉ又は¹²⁴Ｉであり、最も好ましくは¹²³Ｉである。

ＢＴＭは合成品又は天然品であり得るが、好ましくは合成品である。「合成品」という用語はその通常の意味を有し、即ち、天然の供給源（例えば、哺乳動物体）から単離されるものではなく人造のものをいう。かかる化合物は、その製造及び不純物プロファイルを完全に制御できるという利点を有している。したがって、天然由来のモノクローナル抗体及びそのフラグメントは、本明細書中で使用する「合成品」という用語の範囲外にある。

ＢＴＭの分子量は、好ましくは３００００ダルトン以下である。さらに好ましくは、分子量は２００〜２００００ダルトンの範囲内にあり、最も好ましくは３００〜１８０００ダルトンの範囲内にあり、４００〜１６０００ダルトンが特に好ましい。ＢＴＭが非ペプチドである場合、ＢＴＭの分子量は好ましくは３０００ダルトン以下であり、さらに好ましくは２００〜２５００ダルトンであり、最も好ましくは３００〜２０００ダルトンであり、４００〜１５００ダルトンが特に好ましい。

生物学的標的化部分は、好ましくは、線状ペプチド、環状ペプチド又はこれらの組合せであり得る３〜１００量体ペプチド、ペプチド類似体、ペプトイド又はペプチド模倣体、単一のアミノ酸、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト（部分アゴニストを含む）又は酵素阻害剤、レセプター結合化合物（レセプター基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は基質を含む）、オリゴヌクレオチド、或いはオリゴＤＮＡフラグメント又はオリゴＲＮＡフラグメントからなる。

「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（即ち、１つのアミノ酸のアミンを別のアミノ酸のカルボキシルに連結するアミド結合）によって連結された（以下で定義するような）２以上のアミノ酸を含む化合物を意味する。「ペプチド模倣体」又は「模倣体」という用語は、ペプチド又はタンパク質の生物学的活性を模倣するが、化学的性質がペプチド的でない（即ち、いかなるペプチド結合（つまり、アミノ酸間のアミド結合）も含まない）生物学的活性化合物をいう。ここでは、ペプチド模倣体という用語は広い意味で使用され、性質が完全にはペプチド的でない分子（例えば、プソイドペプチド、セミペプチド及びペプトイド）を包含する。「ペプチド類似体」という用語は、以下で説明するような１種以上のアミノ酸類似体を含むペプチドをいう。“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ”，Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ Ｅ２２ｃ，Ｔｈｉｅｍｅも参照されたい。

「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）或いはアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のもの又は純粋に合成由来のものであってよく、光学的に純粋なもの（即ち、単一の鏡像異性体）、したがってキラルなものであるか、或いは鏡像異性体の混合物であってよい。本明細書中では、アミノ酸に関する通常の三文字略語又は一文字略語が使用される。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。「アミノ酸模倣体」という用語は、アイソスター（即ち、天然化合物の立体構造及び電子構造を模倣するように設計されたもの）である天然アミノ酸の合成類似体を意味する。かかるアイソスターは当業者にとって公知であり、特に限定されないが、デプシペプチド、レトロ−インベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールを包含する［Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７（１９８５）参照］。放射性標識されたアミノ酸（例えば、チロシン、ヒスチジン又はプロリン）は、インビボイメージング剤において有用であることが知られている。

ＢＴＭが酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又はレセプター結合化合物である場合、それは好ましくは非ペプチドであり、さらに好ましくは合成品である。「非ペプチド」という用語は、いかなるペプチド結合（即ち、２つのアミノ酸残基間のアミド結合）も含まない化合物を意味する。好適な酵素の基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は阻害剤には、グルコース及びグルコース類似体、脂肪酸、或いはエラスターゼ、アンギオテンシンＩＩ又はメタロプロテイナーゼ阻害剤がある。好適な合成レセプター結合化合物には、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲステロン及び他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１又はＤ−２レセプター用リガンド及びトロパンのようなドーパミン輸送体用リガンド、並びにセロトニンレセプター用リガンドがある。

ＢＴＭは、最も好ましくは３〜１００量体ペプチド又はペプチド類似体である。ＢＴＭがペプチドである場合、それは好ましくは４〜３０量体ペプチドであり、最も好ましくは５〜２８量体ペプチドである。

ＢＴＭが酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト又は酵素阻害剤である場合、本発明の好ましいかかる生物学的標的化分子は合成の薬物様小分子（即ち、医薬品分子）である。好ましいＢＴＭは、トロパンのようなドーパミン輸送体リガンド、脂肪酸、ドーパミンＤ−２レセプターリガンド、ベンズアミド類、アンフェタミン類、ベンジルグアニジン類、イオマゼニル、ベンゾフラン（ＩＢＦ）及び馬尿酸である。好ましいトロパン誘導体は、¹²³Ｉ−ＣＩＴ（Ｄｏｐａｓｃａｎ（商標））、¹²³Ｉ−ＣＩＴ−ＦＰ（ＤａＴＳＣＡＮ（商標））、及び¹²³Ｉ−２β−カルボメトキシ−３β−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−（１−ヨードプロプ−１−エン−３−イル）ノルトロパンのＥ異性体（Ａｌｔｒｏｐａｎｅ（商標））である。Ｄｏｐａｓｃａｎ（商標）及びＤａＴＳＣＡＮ（商標）は特に好ましい。上記その他のトロパン剤は、Ｍｏｒｇａｎ ａｎｄ Ｎｏｗｏｔｎｉｋ［Ｄｒｕｇ Ｎｅｗｓ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．，１２（３），１３７−１４５（１９９９）］によって記載されている。好ましい脂肪酸は¹²³Ｉ−ＢＭＩＰＰ及び¹²³Ｉ−ＩＰＰＡである。好ましいアンフェタミン誘導体は¹²³Ｉ−ＩＭＰである。好ましいベンジルグアニジンは、ｍ−ヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）、即ち¹²³Ｉ−ＭＩＢＧである。

ＢＴＭがペプチドである場合、好ましいかかるペプチドには以下のものがある。
−ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体。
−ＳＴレセプターに結合するペプチド（ここで、ＳＴとは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び他の微生物によって産生される耐熱性毒素をいう。）。
−ボンベシン。
−血管作用性小腸ペプチド。
−ニューロテンシン。
−ラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ。
−白血球集積部位を標的化するためのＮ−ホルミル走化性ペプチド。
−血小板第４因子（ＰＦ４）及びそのフラグメント。
−例えば血管形成を標的化し得るＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）含有ペプチド［Ｒ．Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ Ｊｕｎ；１５（６）：５４２−６］、［Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．１９９７ Ｍａｙ；５１（５）：１４１３−７］。
−α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのペプチドフラグメント。α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン及びトロンボスポンジンのアミノ酸配列は、以下の参考文献に見出すことができる。α₂−抗プラスミン前駆体［Ｍ．Ｔｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３（１９８７）］、β−カゼイン［Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ，１３９，１９３（１９９４）］、フィブロネクチン［Ａ．Ｇｕｔｍａｎ ｅｔ ａｌ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５（１９９６）］、トロンボスポンジン１前駆体［Ｖ．Ｄｉｘｉｔ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９（１９８６）］、Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５（１９８４）。
−アンギオテンシンＩＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ ２２，９，１０３８−１０４４）及び［Ｓａｒ，Ｉｌｅ］アンギオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンギオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド。
−アンギオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。

好ましいＢＴＭペプチドはＲＧＤペプチドである。さらに好ましいかかるＲＧＤペプチドは、次式のフラグメントを含む。

最も好ましいかかるＲＧＤペプチドは、ＢＴＭが次の式（Ａ）のペプチドである場合である。

式中、Ｘ¹は−ＮＨ₂又は次式の基である。

式中、ａは１〜１０の整数である。
式Ａ中、ａは好ましくは１である。

ＢＴＭがペプチドである場合、ペプチドの一方又は両方の末端（好ましくは両方の末端）に代謝抑制基（Ｍ^IG）がコンジュゲートされる。このようにして両方のペプチド末端を保護することは、インビボイメージング用途のために重要である。さもないと、急速な代謝の結果としてＢＴＭペプチドに対する選択的結合親和性が失われると予想されるからである。「代謝抑制基」（Ｍ^IG）という用語は、アミノ末端又はカルボキシ末端におけるＢＴＭペプチドの酵素（特にカルボキシペプチダーゼのようなペプチダーゼ）代謝を阻止又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基はインビボ用途のために特に重要であって、これらは当業者にとって公知であり、好適にはペプチドアミン末端に関してはＮ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^G（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^GはＣ_1-6アルキル基及びＣ_3-10アリール基から選択されるＲ^Gを有するか、或いはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位を含む。）から選択される。好適なＰＥＧ基は、リンカー基（Ｌ¹）に関して以下で説明する。好ましいかかるＰＥＧ基は、式Ｂｉｏ１又はＢｉｏ２（下記）のバイオモディファイアーである。好ましいかかるアミノ末端Ｍ^IG基はアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。

ペプチドカルボキシル末端に関して好適な代謝抑制基には、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位がある。ＢＴＭペプチドのカルボキシ末端アミノ酸残基にとって好適なＭ^IG基は、アミノ酸残基の末端アミンをＣ_1-4アルキル基（好ましくはメチル基）でＮ−アルキル化したものである。好ましいかかるＭ^IG基はカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましいかかる基はカルボキサミドである。

第１の態様の方法では、リンカー基（Ｌ¹）は好ましくは存在している。好ましいリンカー基（Ｌ¹）は合成品であり、式−（Ａ）_m−の基（式中、各Ａは独立に−ＣＲ₂−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ₂ＣＯ₂−、−ＣＯ₂ＣＲ₂−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ₂ＮＲ−、−ＮＲＳＯ₂−、−ＣＲ₂ＯＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＳＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＮＲＣＲ₂−、Ｃ_4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_4-8シクロアルキレン基、Ｃ_5-12アリーレン基又はＣ_3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖或いは単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニル、Ｃ_1-4アルコキシアルキル及びＣ_1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）を含む。

Ｌ¹が１〜１０のアミノ酸残基を有するペプチド鎖からなる場合、アミノ酸残基は好ましくはグリシン、リシン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸及びセリンから選択される。Ｌ¹がＰＥＧ部分からなる場合、それは好ましくは次の式Ｂｉｏ１又はＢｉｏ２の単分散ＰＥＧ様構造のオリゴマー化で導かれる単位からなる。

かかるＰＥＧ様構造は、式Ｂｉｏ１（式中、ｐは１〜１０の整数である。）の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸であり得る。
別法として、式Ｂｉｏ２のプロピオン酸誘導体に基づくＰＥＧ様構造も使用できる。

式中、ｐは式Ｂｉｏ１に関して定義した通りであり、ｑは３〜１５の整数である。式Ｂｉｏ２中、ｐは好ましくは１又は２であり、ｑは好ましくは５〜１２である。

リンカー基がＰＥＧ又はペプチド鎖からなっていない場合、好ましいＬ¹基は、２〜１０の原子、最も好ましくは２〜５の原子、特に好ましくは２又は３の原子を含む−（Ａ）_m−部分を構成する結合原子の主鎖を有している。

商業的に入手できないＢＴＭペプチドは、Ｐ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ ａｎｄ Ｅ．Ｇｉｒａｌｄ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されているような固相ペプチド合成法によって合成できる。

第１の態様の方法では、式（ＩＩ）の化合物は、好ましくは次の式（ＩＩａ）の化合物の脱保護によってインサイチュで生成できる。

式中、Ｍ¹はアルキン保護基であり、Ｉ^*は式（ＩＩ）に関して定義した通りである。式（ＩＩａ）中のＩ^*の好ましい態様は、式（ＩＩ）に関して記載した通りである。

「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない程度に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。好適なアルキン保護基は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ８，ｐａｇｅｓ ９２７−９３３，４^th ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，２００７）に記載されており、トリアルキルシリル基（ここで、各アルキル基は独立にＣ_1-4アルキルである。）、アリールジアルキルシリル基（ここで、アリール基は好ましくはベンジル又はビフェニルであり、各アルキル基は独立にＣ_1-4アルキルである。）、ヒドロキシメチル及び２−（２−ヒドロキシプロピル）を包含する。好ましいかかるアルキン保護基はトリメチルシリルである。式（ＩＩａ）の保護されたヨードアルキンは、放射性ヨードアルキンの揮発性を制御できると共に、式（ＩＩ）の所望アルキンをインサイチュで制御された状態で生成して式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）のアジド誘導体との反応の効率を最大にすることができるという利点を有している。

第１の態様の方法は、好ましくは無菌状態で実施される結果、式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の生成物が放射性医薬組成物として得られる。放射性医薬組成物のさらに詳しい説明は、第３の態様（下記）に示される。このように、本方法を無菌製造条件下で実施することで、所望の無菌で非発熱性の放射性医薬品生成物が得られる。したがって、基本構成部分、特に式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の生成物に接触する装置部分（例えば、バイアル及び移送管）は無菌であることが好ましい。かかる構成部品及び試薬は、無菌濾過或いは（例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる）終末滅菌をはじめとする、当技術分野で公知の方法によって滅菌できる。非放射性の構成部分を予め滅菌しておけば、放射性ヨウ素化された放射性医薬品生成物に関して最小数の操作を実施すれば済むので好ましい。しかし、予防策として、少なくとも最終無菌濾過段階を含めることが好ましい。

式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）及び式（ＩＩ）の化合物、Ｃｕ（Ｉ）触媒並びに他のかかる試薬及び溶媒は、それぞれが適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。かかるバイアル又は容器は、注射器又はカニューレによる溶液の添加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする密封容器からなっている。好ましいかかる容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。クロージャーは、無菌保全性を維持しながら皮下注射針による１回又は数回の穿刺に適したもの（例えば、クリンプ加工した隔壁シールクロージャー）である。かかる容器は、（例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液のガス抜きのために）所望される場合にはクロージャーが真空に耐え得ると共に、外部大気ガス（例えば、酸素又は水蒸気）の侵入を許すことなしに減圧のような圧力変化にも耐え得るという追加の利点を有している。反応器は、かかる容器及びその好ましい実施形態から適宜に選択される。反応器は、好ましくは生体適合性プラスチック（例えば、ＰＥＥＫ）から製造される。

第１の態様の方法は、好ましくは自動合成装置を用いて実施される。「自動合成装置」という用語は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］によって記載されたような単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。「単位操作」という用語は、複雑なプロセスが一連の簡単な操作又は反応に還元されることを意味し、これは一定範囲の材料に適用できる。かかる自動合成装置は、特に放射性医薬品生成物が所望される場合、本発明の方法にとって好ましい。これらは、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ＣＴＩ Ｉｎｃ．、Ｉｏｎ Ｂｅａｍ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｓ．Ａ．（Ｃｈｅｍｉｎ ｄｕ Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ ３，Ｂ−１３４８ Ｌｏｕｖａｉｎ−Ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，ベルギー）、Ｒａｙｔｅｓｔ社（ドイツ）及びＢｉｏｓｃａｎ社（米国）を含む１群の供給業者から商業的に入手できる［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ，上記］。

市販の自動合成装置はまた、放射性医薬品製造の結果として生じる液体放射性廃棄物用の適当な容器を提供する。自動合成装置は通例は放射線遮蔽を備えていないが、それは適宜に構成された放射能作業セル内で使用するように設計されているからである。放射能作業セルは、オペレーターを潜在的な放射線量から保護するために適した放射線遮蔽を与えると共に、化学薬品蒸気及び／又は放射性蒸気を除去するための換気を可能にする。自動合成装置は、好ましくは第８の態様（下記）に記載されるような「カセット」を含んでいる。

第１の態様の放射性ヨウ素化方法は、適当な溶媒（例えば、アセトニトリル、Ｃ_1-4アルキルアルコール、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン又はジメチルスルホキシド或いはこれらのいずれかの水性混合物）或いは水中で実施できる。４〜８、さらに好ましくは５〜７のｐＨ範囲内の水性緩衝液が使用できる。反応温度は、好ましくは５〜１００℃、さらに好ましくは７５〜８５℃、最も好ましくは周囲温度（通例１５〜３７℃）である。クリック環付加は、Ｍｅｌｄａｌ ａｎｄ Ｔｏｒｎｏｅ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１０８，（２００８）２９５２、Ｔａｂｌｅ １（２００８）］によって記載されているように、任意には有機塩基の存在下で実施できる。

好ましいクリック環付加触媒はＣｕ（Ｉ）を含んでいる。Ｃｕ（Ｉ）触媒は、反応が進行するのに十分な量、通例は触媒量又は過剰量（例えば、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）の化合物に対して０．０２〜１．５モル当量）で存在している。好適なＣｕ（Ｉ）触媒には、ＣｕＩ又は［Ｃｕ（ＮＣＣＨ₃）₄］［ＰＦ₆］のようなＣｕ（Ｉ）塩がある。しかし有利には、硫酸銅（ＩＩ）のようなＣｕ（ＩＩ）塩を還元剤の存在下で使用してＣｕ（Ｉ）をインサイチュで生成させることができる。好適な還元剤には、アスコルビン酸又はその塩（例えば、アスコルビン酸ナトリウム）、ヒドロキノン、金属銅、グルタチオン、システイン、Ｆｅ²⁺及びＣｏ²⁺がある。Ｃｕ（Ｉ）はまた、元素態銅粒子の表面上にも内因的に存在しており、したがって例えば粉末又は顆粒の形態の元素態銅を触媒として使用することもできる。管理された粒度を有する元素態銅が好ましいＣｕ（Ｉ）触媒源である。さらに好ましいかかる触媒は、０．００１〜１ｍｍの範囲内、好ましくは０．１〜０．７ｍｍの範囲内、さらに好ましくは約０．４ｍｍの粒度を有する銅粉末としての元素態銅である。別法として、０．０１〜１．０ｍｍの範囲内、好ましくは０．０５〜０．５ｍｍの範囲内、さらに好ましくは０．１ｍｍの直径を有するコイル銅線を使用することができる。Ｃｕ（Ｉ）触媒は、任意には、クリック化学においてＣｕ（Ｉ）を安定化するために使用されるバトフェナントロリンの存在下で使用することができる。

ＢＴＭがペプチド又はタンパク質である式（Ｉａ）及び式（Ｉｂ）の非放射性前駆体化合物は、標準的なペプチド合成法、例えばＡｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．；“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”；ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９に記載されているような固相ペプチド合成法によって製造できる。式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）の化合物中へのアルキン基又はアジド基の導入は、ペプチドのＮ又はＣ末端の反応、或いはペプチド配列に含まれる何らかの他の官能基であって、その修飾がベクターの結合特性に影響を及ぼさない官能基との反応によって達成できる。アジド基は、好ましくは、例えばペプチドのアミン官能基と活性化酸との反応或いは別法としてペプチドの酸官能基とアミン官能基との反応による安定なアミド結合の形成によって導入され、ペプチドの合成中又は合成後に導入される。細胞、ウイルス、細菌のようなベクターにアジド基を導入する方法は、Ｈ．Ｃ．Ｋｏｌｂ ａｎｄ Ｋ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，Ｖｏｌ ８（２４），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００３及びその引用文献に見出すことができる。式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）の化合物にアジド基を導入するために有用である好適な二官能性中間体には以下のものがある。

式中、Ｌ¹及びその好ましい実施形態は上記で定義した通りである。

上記式中、Ｌ¹は好適には存在している。しかし、アジド官能化アミノ酸では、アジド官能基は任意にはいかなるリンカー基も介さずにアミノ酸の側鎖に直接結合していてもよい。

ＢＴＭをアジド基で官能化するためのさらなるアプローチは、Ｎｗｅ ｅｔ ａｌ［Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］によって記載されている。Ｌｉ ｅｔ ａｌは、Ｎ₃−Ｌ¹−ＣＯ₂Ｈ型（式中、Ｌ¹は−（ＣＨ₂）₄−である。）の化合物の合成法及びアミン含有ＢＴＭにコンジュゲートするためのその使用を記載している［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（６），１９８７−１９９４（２００７）］。Ｈａｕｓｎｅｒ ｅｔ ａｌは、Ｎ₃−Ｌ¹−ＣＯ₂Ｈ（式中、Ｌ¹は−（ＣＨ₂）₂−である。）についての関連方法を記載している［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（１９），５９０１−５９０４（２００８）］。Ｄｅ Ｇｒａａｆ ｅｔ ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２０（７），１２８１−１２９５（２００９）］は、アジド側鎖を有する非天然アミノ酸及び続くクリックコンジュゲーションのためのペプチド又はタンパク質中への部位特異的組込みを記載している。

式（Ｉｂ）のニトリルオキシドは、Ｋｕ ｅｔ ａｌ［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，３（２６），４１８５−４１８７（２００１）］及びその引用文献に記載された方法によって得ることができる。即ち、これらは通例、α−ハロアルドキシムをトリエチルアミンのような有機塩基で処理することによってインサイチュで生成される。Ｋ．Ｂ．Ｇ．Ｔｏｒｓｅｌｌ“Ｎｉｔｒｉｌｅ Ｏｘｉｄｅｓ，Ｎｉｔｒｏｎｅｓ ａｎｄ Ｎｉｔｒｏｎａｔｅｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”［ＶＣＨ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）］も参照されたい。

式（ＩＩ）及び式（ＩＩａ）の放射性ヨウ素化アルキンは、第４の態様（下記）に記載されるようにして得ることができる。

本発明は、放射性ヨウ素化のための一層化学選択的なアプローチを提供する。連結反応はＢＴＭ中の所定部位で起こり、ただ１種の可能な生成物を与える。したがって、この方法は化学選択的である。加えて、アルキン及びアジド官能基はいずれも大抵の反応条件下で安定であり、大抵の常用ペプチド官能基と反応せず、したがって放射性標識合成時に要求される保護及び脱保護段階を最少にする。さらに、標識反応時に形成されるトリアゾール環及びイソキサゾール環は加水分解しないと共に、酸化及び還元に対して極めて安定であり、これは標識されたＢＴＭが高いインビボ安全性を有することを意味する。また、トリアゾール環はサイズ及び極性に関してアミドと同等である結果、標識されたペプチド又はタンパク質はその天然対応品に対する良好な模倣品となる。特に、トリアゾール環は公知のアミド模倣基又はバイオアイソスターである。しかし、本発明の式（ＩＩＩａ）及び式（ＩＩＩｂ）の生成物のトリアゾール環及びイソキサゾール環は、ヨードベンゼンより急速にヨードチロシンを代謝することが知られている甲状腺脱ヨウ素化酵素によって認識されるとは予想されず、したがって放射性医薬品イメージング及び放射線療法用としてはインビボで十分に安定であると予想される。

第２の態様では、本発明は次の式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の化合物を提供する。

式中、Ｉ^*、Ｌ¹及びＢＴＭ並びにこれらの好ましい実施形態は第１の態様で定義した通りである。特に、Ｌ¹は存在しても存在しなくてもよい。

好ましくは、第２の態様の化合物は式（ＩＩＩａ）のものである。

本発明はまた、医学用途のための、第２の態様で定義した式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の化合物、好ましくは式（ＩＩＩａ）の化合物を提供する。

第３の態様では、本発明は、第２の態様に係る式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の化合物の有効量を生体適合性キャリヤー媒質と共に含む放射性医薬組成物を提供する。Ｉ^*、Ｌ¹及びＢＴＭの好ましい実施形態は第１の態様（上記）で定義した通りである。第３の態様の化合物もまた、好ましくは式（ＩＩＩａ）のトリアゾールである。

「生体適合性キャリヤー媒質」は、１種以上の薬学的に許容される補助剤、賦形剤又は希釈剤を含んでいる。それは、好ましくは、組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の化合物を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤー媒質は、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤー媒質はまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤー媒質はパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤー媒質のｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。

第４の態様では、本発明は、第１の態様で定義した式（ＩＩ）の化合物の製造方法であって、
（ｉ）酸化剤の存在下で次の式（ＩＶ）又は式（Ｖ）の前駆体を放射性ヨウ化物イオンの供給物と反応させて次の式（ＩＩｂ）の化合物を得る段階、及び
（ｉｉ）Ｍ²がＭ¹基である場合には、脱保護してＭ¹基を除去する段階
を含む方法を提供する。

式中、Ｍ²はＨ又はＭ¹基（ここで、Ｍ¹は第１の態様で定義した通りである。）であり、各Ｒ^aは独立にＣ_1-4アルキルである。

式中、Ｉ^*は第１の態様で定義した通りである。

第４の態様で使用するのに適した保護基Ｍ¹及びその好ましい実施形態は、第１の態様（上記）で記載した通りである。脱保護条件は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ８，ｐａｇｅｓ ９２７−９３３，４^th ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，２００７）に記載されている。

式（ＩＶ）又は式（Ｖ）の前駆体は非放射性である。式（ＩＶ）の化合物の一部は商業的に入手できる。即ち、トリアルキルスズ化合物Ｂｕ₃Ｓｎ−≡−Ｈ及びＢｕ₃Ｓｎ−≡−ＳｉＭｅ₃はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から商業的に入手できる。他の有機スズ中間体は、Ａｌｉ ｅｔ ａｌ［Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４２３−４４５（１９９６）］によって記載されている。好適な酸化剤は、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）によって記載されている。好ましい酸化剤は、ｐＨ約４の過酢酸（商業的に入手可能）及びｐＨ約１の過酢酸水素／水性ＨＣｌである。Ｍ²がＨである場合、式（ＩＩｂ）の化合物はヨードアセチレンである。非放射性（¹²⁷Ｉ）類似体の合成法は、Ｋｕ ｅｔ ａｌ［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，３（２６），４１８５−４１８７（２００１）］によって記載されている。放射性ヨウ素化段階で過酢酸を使用しながら式（Ｖ）に類似したアルキニルトリフルオロホウ酸カリウム前駆体を経て¹²³Ｉ標識アルキニルヨージドを合成する方法は、Ｋａｂａｌｋａ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４８，３５９−３６２（２００５）］によって記載されている。アルキニルトリフルオロホウ酸カリウム前駆体を対応するアルキンから合成する方法は、その文献並びにＫａｂａｌｋａ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４９，１１−１５（２００６）］に記載されている。アルキニルトリフルオロホウ酸カリウム前駆体が、空気及び水の両方に対して安定な結晶質固体であると記載されている。

第５の態様では、本発明は、第１の態様の方法で有用な、次の式（ＩＩｂ）の化合物を提供する。

式中、Ｉ^*は第１の態様に関して定義した通りであり、Ｍ²はＨ又はＭ¹（ここで、Ｍ¹は式（ＩＩａ）（上記）に関して定義した通りである。）である。Ｉ^*及びＭ¹の好ましい実施形態は、第１の態様（上記）に関して定義した通りである。

Ｍ²がＨである場合、式（ＩＩｂ）の化合物は放射性ヨウ素化ヨードアセチレンである。使用されるヨードアセチレン（Ｈ−≡−Ｉ）の揮発性（１気圧で３２℃）は、放射性標識に先立って反応性の放射性ヨウ素化学種を容易に蒸留すると共に、生成物を例えばドライアイスで冷却した容器内に捕捉するため有利に使用できる。それは、放射性ヨウ素化段階に先立つ有用な精製を表している。クリック環付加は高収率であるので、すべての化合物（ＩＩ）は消費され、したがって生成物（即ち、化合物（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ））の放射化学純度（ＲＣＰ）は最大になると予想される。

第６の態様では、本発明は、インビボイメージング方法又はインビボ放射線療法で使用するための放射性医薬品の製造における、第２又は第５の態様に係る化合物の使用を提供する。好ましくは、かかる使用はインビボイメージング方法に関し、さらに好ましくはＰＥＴ又はＳＰＥＣＴによるイメージングに関する。

第７の態様では、本発明は、第１又は第４の態様の方法を実施するための自動合成装置の使用を提供する。

自動合成装置及びその好ましい実施形態は、第１の態様（上記）で記載した通りである。

第８の態様では、本発明は、第１の態様の好ましい実施形態の自動合成装置で使用するのに適した１回使用の無菌カセットであって、第１又は第４の態様の方法を実施するために必要な非放射性試薬を無菌の非発熱原性形態で含むカセットを提供する。

第８の態様で使用するための上記方法の好ましい実施形態は、それぞれ第１及び第４ので記載した通りである。

「カセット」という用語は、合成装置の可動部分の機械的運動がカセットの外側から（即ち、外部から）カセットの動作を制御するようにして、（以下に定義する）自動合成装置上に着脱自在かつ交換可能に装着し得るように設計された装置部分を意味する。
好適なカセットは直線状に並んだ弁の列を含み、その各々は倒立隔壁密封バイアルの針穿刺又は気密連結継手によって試薬又はバイアルを装着することができるポートに結合している。各弁は、自動合成装置の対応する可動アームとかみ合うはめ込み型継手を有している。かくして、カセットを自動合成装置に装着した場合、アームの外部回転が弁の開閉を制御する。自動合成装置の追加の可動部分は、注射器のプランジャー先端をつかみ、それによって注射器外筒を上昇又は降下させるように設計されている。

カセットは融通性の高いものであって、通例は試薬を装着することができる複数の位置、及び試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィー用カートリッジ（例えば、ＳＰＥ）を装着するために適した複数のポートを有している。カセットは常に反応器を含んでいる。かかる反応器は好ましくは１〜１０ｃｍ³、最も好ましくは２〜５ｃｍ³の容積を有しており、カセット上の様々なポートからの試薬又は溶媒の移送を可能にするため、カセットの３以上のポートが反応器に連結されるように構成されている。好ましくは、カセットは直線状に並んだ１５〜４０の弁、最も好ましくは２０〜３０の弁を有しており、２５の弁が特に好ましい。カセットの弁は好ましくはそれぞれ同一であり、最も好ましくは三方弁である。本発明のカセットは放射性医薬品製造に適するように設計されており、したがって医薬品グレードの材料であって理想的には放射線分解にも耐える材料で製造されている。

本発明の好ましい自動合成装置は、放射性ヨウ素化された放射性医薬品の所定バッチの製造を実施するために必要なすべての試薬、反応器及び機器を含む使い捨て又は１回使用のカセットを含むものである。かかるカセットは、単にカセットを交換するだけで、自動合成装置が相互汚染のリスクを最小限に抑えながら各種の放射性ヨウ素標識放射性医薬品を製造できる融通性を有することを意味する。カセットアプローチは以下の利点を有する。即ち、装置構成が単純化されてオペレーターエラーのリスクが低減すること、ＧＭＰコンプライアンスが向上すること、マルチトレーサーの使用が可能になること、製造作業間の変更が迅速になること、カセット及び試薬の作業前自動診断検査が行えること、実施すべき合成に対して化学試薬の自動バーコードクロスチェックが行えること、試薬が追跡可能であること、１回使用であるために相互汚染、不正改造及び誤用による妨害のリスクがないことが挙げられる。

第９の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体の画像を生成する方法であって、第２の態様に係る化合物又は第５の態様に係る放射性医薬組成物を投与する段階、及びＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて前記化合物又は組成物が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含む方法を提供する。

さらに別の態様では、本発明は、薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターする方法であって、第２の態様に係る化合物又は第５の態様に係る組成物を前記身体に投与する段階及びＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて前記化合物又は組成物が分布した前記身体の少なくとも一部による前記化合物又は組成物の取込みを検出する段階を含む方法を提供する。

この最後の態様の投与及び検出は、好ましくは前記薬物による治療前及び治療後に実施される結果、ヒト又は動物患者に対する薬物治療の効果を判定することができる。薬物治療が治療コースを含む場合には、治療中にもイメージングを行うことができる。

以下の実施例によって本発明を例証する。実施例１は、クロマトグラフィー用真正参照標準としての非放射性（¹²⁷Ｉ）ヨードアセチレンの参照試料に関する合成法を示す。実施例２は、ヨードアセチレンとベンジルアジドとのクリックカップリングによるトリアゾール環の形成を示す。実施例３〜５は、様々な酸化剤を用いる¹²³Ｉ−ヨードアセチレンの合成法を示す。実施例６〜８は、本発明の方法を用いる放射性ヨウ素化トリアゾールの合成法の予測例を示す。実施例９は、本発明の方法を用いる放射性ヨウ素化トリアゾールの合成法の予測例を示す。

略語
ＤＩＰＥＡ； ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ： ジメチルホルムアミド
ＨＰＬＣ： 高速液体クロマトグラフィー
ＭｅＣＮ： アセトニトリル
ＰＡＡ： 過酢酸
ＲＰ−ＨＰＬＣ： 逆相ＨＰＬＣ
ＲＴ： 室温
ＴＨＦ： テトラヒドロフラン
実施例１：ヨードアセチレンの合成

０℃のジュウテロクロロホルム（２ｍｌ）中のトリブチル（エチニル）スタンナン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、４００ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）をヨウ素（３２２ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、反応物を１５分かけて室温まで放温すると、ヨウ素の色は急速に消失した。次いで、反応物を蒸留し、ジュウテロクロロホルム中の揮発性ヨードアセチレンを無色液体として集めた。クロロホルム中でのＮＭＲは、それが純粋なヨードアセチレン溶液であることを示した。ヨードアセチレンは揮発性物質であるので、このスケールでは収率を容易に推定できない。

¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ_H ２．１７（１Ｈ，ｓ，ＣＨ）。¹³Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ_C ８３．３（他の炭素は見られない）。

実施例２：１−ベンジル−４−ヨード−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールの合成

ヨードアセチレン（１９３ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ、前回の反応からの収率を１００％と仮定した）を２０℃のジュウテロクロロホルム（２ｍｌ）及びＴＨＦ（２ｍｌ）に溶解した溶液を、アジドメチルベンゼン（ベンジルアジド、１６９ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）［Ａｌｆａ Ａｅｓｅｒ社から商業的に入手可能、Ｆｒ．Ｍｏｕｌｉｎ，Ｈｅｌｖｅｔ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，３５，１６７−８０（１９５２）］、ヨウ化銅（９０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２５６ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、反応物を室温で４８時間撹拌した。次いで、反応物をセライトで濾過して酸化銅（１）を除去し、次いでシリカ上においてガソリン中１５〜５０％酢酸エチルの勾配でクロマトグラフィー処理した。２つの画分を集めた。画分１を蒸発させることで無色油状物（１０２ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ及び¹³Ｃ ＮＭＲは、これが主として未反応のアジドメチルベンゼンであることを示した。

画分２を蒸発させることで、１−ベンジル−４−ヨード−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールを無色液体（１０４ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ、２８％）として得たが、これは静置後に結晶化した。

¹Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ_H ５．６０（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂）、７．２４（２Ｈ，ｍ，２ｘＡｒＨ）、７．３２（３Ｈ，ｍ，３ｘＡｒＨ）、７．７４（１Ｈ，ｓ，ＣＨＡｒＨ）。¹³Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ_C ５３．８、１２７．７、１２８．４、１２８．８、１３４．２、１４１．５。１つの炭素は見られない。

実施例３：過酢酸酸化剤を用いた［ ¹²³ Ｉ］−ヨードアセチレンの製造及び蒸留

氷上のホイートン（Ｗｈｅａｔｏｎ）バイアルに、酢酸アンモニウム緩衝液（１００μｌ、０．２Ｍ、ｐＨ４）、［¹²⁷Ｉ］−ヨウ化ナトリウム（１０μｌ、０．０１Ｍ水酸化ナトリウム中１０ｍＭ溶液、１×１０^-7モル）、［¹²³Ｉ］−ヨウ化ナトリウム（１０μｌ、２０〜８５ＭＢｑ）、過酢酸（１０μｌ、１０ｍＭ溶液、１×１０^-7モル）及びエチニルトリブチルスタンナンのＴＨＦ溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、１００μｌ、０．３８ｍｇ／ｍｌ、１．２×１０^-7モル）を添加した。最後に、４００〜６００μｌのＴＨＦを添加し、ホイートンバイアルを密封し、反応混合物を室温まで放温した後、逆相ＨＰＬＣ分析に付した。

エチニルトリブチルスタンナンの添加から約１０分後におけるＨＰＬＣ分析によれば、７５％の放射化学純度（ＲＣＰ）を有する［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレンが得られた。図１参照。それより長い保持時間を有する不純物は、¹²³Ｉ−ジヨードアセチレンと考えられる。

反応混合物を８０〜１００℃で１５〜２０分間加熱し、その間に［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレン及びＴＨＦは短いチューブを通して氷上の回収バイアルに留出させた。この時間後、加熱バイアルの隔壁を通して低流量の窒素を流すことでチューブから残留液体を除去した。図２参照。

蒸留から約１０分後におけるＨＰＬＣ分析は、９４％のＲＣＰを有する［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレンを示した。図３参照。

実施例４：ヨードゲンチューブを用いた［ ¹²³ Ｉ］−ヨードアセチレンの製造
リン酸ナトリウム緩衝液（１ｍｌ、ｐＨ７．４、２５ｍＭ）で予め濡らしたヨードゲン管（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社）に、リン酸ナトリウム緩衝液（１００μｌ、ｐＨ７．４、２５ｍＭ）、［¹²⁷Ｉ］−ヨウ化ナトリウム（１０μｌ、０．０１Ｍ水酸化ナトリウム中１０ｍＭ溶液、１×１０^-7モル）及び［¹²³Ｉ］−ヨウ化ナトリウム（１０μｌ、１８ＭＢｑ）を添加した。室温で６分間のインキュベーション後、前記反応体を氷上のホイートンバイアルに移し、次いでエチニルトリブチルスタンナンのＴＨＦ溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、３８μｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．２×１０^-7モル）を添加した。バイアルを密封し、反応混合物を室温まで放温した後、逆相ＨＰＬＣ分析に付した。

エチニルトリブチルスタンナンの添加から約１０分後におけるＨＰＬＣ分析によれば、［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレンが５７％の収率で得られた。

実施例５：過酸化水素酸化剤を用いた［ ¹²³ Ｉ］−ヨードアセチレンの製造及び精製
氷上のホイートンバイアルに、［¹²⁷Ｉ］−ヨウ化ナトリウム（１０μｌ、０．０１Ｍ水酸化ナトリウム中１０ｍＭ溶液、１×１０^-7モル）、［¹²³Ｉ］−ヨウ化ナトリウム（１０μｌ、１８ＭＢｑ）、塩酸（１００μｌ、１Ｍ）、過酸化水素（５０μｌ、３％水溶液、４．４×１０^-5モル）及びエチニルトリブチルスタンナンのＴＨＦ溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、３８μｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．２×１０^-7モル）を添加した。バイアルを密封し、反応混合物を室温まで放温した後、逆相ＨＰＬＣ分析に付した。

エチニルトリブチルスタンナンの添加から約１０分後におけるＨＰＬＣ分析によれば、［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレンが８５％の収率で得られた。

実施例６：１−ベンゼン−４−［ ¹²³ Ｉ］−ヨード−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールの製造（予測例）

ＴＨＦ中の［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレン（実施例３、４又は５）を含む冷却したホイートンバイアルに、水、硫酸銅、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム及びリン酸ナトリウム緩衝液を添加する。最後にベンジルアジドの溶液を添加し、氷浴を取り除く。必要に応じて加熱しながら、反応物を室温でインキュベートする。水で希釈した後、１−ベンゼン−４−［¹²³Ｉ］−ヨード−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールを逆相ＨＰＬＣ又はＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジによって精製する。

実施例７：１−ベンゼン−４−［ ¹²³ Ｉ］−ヨード−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールの製造（予測例）

ＴＨＦ中の［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレン（実施例３、４又は５）を含む氷上のホイートンバイアルに、ヨウ化銅（Ｉ）、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、水及びジイソプロピルエチルアミンを添加する。最後にベンジルアジドの溶液を添加し、氷浴を取り除く。必要に応じて加熱しながら、反応物を室温でインキュベートする。水で希釈した後、１−ベンゼン−４−［¹²³Ｉ］−ヨード−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールを逆相ＨＰＬＣ又はＳｅｐ−Ｐａｋカートリッジによって精製する。

実施例８：１−ベンゼン−４−［ ¹²³ Ｉ］−ヨード−１Ｈ−１，２，３−トリアゾールの製造（予測例）

銅粉末（−４０メッシュ）を仕込んで氷上に配置したホイートンバイアルに、［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレン（実施例３、４又は５）及びベンジルアジドを添加する。試薬の添加後、氷浴を取り除き、必要に応じて加熱しながら、反応物を室温でインキュベートする。

実施例９：放射性ヨウ素化イソキサゾールの製造（予測例）

［¹²³Ｉ］−ヨードアセチレン（実施例３、４又は５）を含む冷却した３ｍｌホイートンバイアルに、ＴＨＦ（０．１〜０．５ｍｌ）に溶解したニトリルオキシドの溶液を添加する。反応混合物をさらに０℃で１５分間撹拌した後、室温まで放温し、すべてのヨードアセチレンが消費されるまでさらに３０〜６０分間撹拌する。水で希釈した後、［¹²³Ｉ］−イソキサゾールをＨＰＬＣによって精製する。

Claims (3)

1. 次の式（ＩＩ）の化合物の製造方法であって、
   （式中、Ｉ ^* はヨウ素の放射性同位体である。）
   （ｉ）酸化剤の存在下で次の式（ＩＶ）又は式（Ｖ）の前駆体を放射性ヨウ化物イオンの供給物と反応させて次の式（ＩＩｂ）の化合物を得る段階、及び
   （ｉｉ）Ｍ²がＭ¹基である場合には、脱保護してＭ¹基を除去する段階
   を含む方法。
   式中、
   Ｍ²はＨ又はＭ¹（ここで、Ｍ¹はアルキン保護基である。）であり、各Ｒ^aは独立にＣ_1-4アルキルである。
   式中、Ｉ^*は上記で定義した通りである。
2. Ｉ ^* が ¹²³ Ｉ、 ¹²⁴ Ｉ及び ¹³¹ Ｉから選択される、請求項１記載の方法。
3. 次の式（ＩＩｂ）の化合物。
   式中、Ｉ^*は請求項１又は請求項２で定義した通りであり、Ｍ²は請求項１で定義した通りである。