JP5850518B2

JP5850518B2 - 高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物の潰瘍性消化管の炎症の処置剤

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Publication number: JP5850518B2
Application number: JP2010260471A
Authority: JP
Inventors: 長崎　幸夫; 幸夫長崎; 徹吉冨; ボン・ビン・ロン; 裕史松井
Original assignee: University of Tsukuba NUC
Current assignee: University of Tsukuba NUC
Priority date: 2010-11-22
Filing date: 2010-11-22
Publication date: 2016-02-03
Anticipated expiration: 2030-11-22
Also published as: JP2012111700A

Description

本発明は、潰瘍性消化管の炎症を予防もしくは治療するための高分子化抗酸化剤、特に高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物の潰瘍性消化管の炎症を予防もしくは治療するための使用に関する。

潰瘍性消化管の炎症の中でも、潰瘍性大腸炎は大腸、特に直腸の粘膜（最も内側の層）にびらんまたは潰瘍ができる炎症性腸疾患であり、症状として、下血を伴うまたは伴わず、下痢だけでなく腹痛等がみられる。この潰瘍性大腸炎は難病に指定されており、わが国の潰瘍性大腸炎の患者数は、１０４，７２１人（平成２０年度特定疾患医療受給者証交付件数より）と報告されており、毎年おおよそ５，０００人増加している。一方、米国の潰瘍性大腸炎の患者数は１００万人と言われている。しかしながら、この疾患の原因は明らかになっておらず、これまでに腸内細菌の関与や本来は外敵から身を守る免疫機構が正常に機能しない自己免疫反応の異常、あるいは食生活の変化、さらには心理的要因の関与などが考えられているが、どれが正確な原因であるかは今日でも不明である。

２０１０年現在、潰瘍性大腸炎を完治に導く内科的治療はない。従来の治療法では、５−アミノサリチル酸製剤、ステロイド薬、免疫抑制薬などに一定の効果が認められているが、治療無効例や日光過敏症による発疹・発熱・悪心・嘔吐・肝機能障害などの副作用が問題となっている。また近年では、抗ＴＮＦα抗体などの生物学的製剤の有効性が注目されているものの、非常にコストが高いといった問題点を有している。さらに、治療無効例での外科手術による人工肛門造設等日常生活の制限や長期慢性活動性炎症による炎症性発がんが問題となっているため、画期的治療法の開発が期待されている。

このような潰瘍性大腸炎の治療とは無関係に、本発明者等は、広範な炎症に関与すると考えられている酸化ストレス障害を引き起こす活性酸素種（ＲＯＳ）を効率的に消去し、また診断できるラジカルナノ粒子（ＲＮＰ）として、高分子化（特に、ポリエチレングリコール化）環状ニトロキシドラジカル化合物に由来する高分子ミセルを提供した（非特許文献１もしくは２、または特許文献１）。これらの高分子ミセルは、水性媒体中で、環状ニトロキシドラジカル、例えば、ＲＯＳを効率的に消去する４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシド（ＴＥＭＰＯ）が粒子内部に封入され、周囲還元性環境下ですら当該特性を長期にわたり維持でき、また、水難溶性のＴＥＭＰＯ等が水性媒体中で可溶化もしくは安定に均質に分散されるので、注入（特に、静脈内または動脈内注入）薬として製剤化するのに適している。また、高分子化に用いたポリマー鎖と環状ニトロキシドラジカルの連結基にイミノ基が導入されたｐＨ応答性のＲＮＰ（Ｎ−ＲＮＰ）は、酸性条件下で壊れてＴＥＭＰＯラジカルを放出するという性質を持っている（概念図を示す図１参照）。一方、炎症・癌・虚血などの組織では、ｐＨが酸性に傾いており、仮に、ＲＮＰがこれらの組織にデリバリーされればその場で崩壊することによって治療効果を向上させると推測される。現に、本発明者等は、上記の特許文献でＲＮＰを投与することにより、虚血・再灌流後の脳・腎臓の障害を効果的に抑制できることを明らかにした。

ＷＯ２００９／１３３６４７Ａ

Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ，ｅｔａｌ．Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：１０（３）５９６（２００９）Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕ．Ｃｈｅｍ．，２０１７９２（２００９）

本発明者等は、仮に、高分子化抗酸化剤、特に上記の高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物が、潰瘍性大腸炎の疾患部位ないしはその周囲に効果的にデリバリーでき、しかも高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物が潰瘍性大腸炎に効能を示す可能性があるなら、当該化合物は潰瘍性大腸炎の治療または予防に使用できるかもしれないと推測した。そこで、当該技術分野で常用される各種賦形剤を用いて調製され当該高分子ミセル製剤や当該高分子ミセルそれ自体の各種投与経路を介する投与試験に供してみた。

その結果、当該高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物を単に水性媒体中で可溶化した溶液（高分子ミセルが形成したもの）を、デキストラン硫酸（ＤＳＳ）を用いて潰瘍性大腸炎を誘発する潰瘍性大腸炎モデルマウスに経口投与したところ、疾患の発症を有意に抑制し、また、疾患を有意に治療できることが確認できた。このことは、上述したように、特定の高分子化抗酸化剤または高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物が酸性条件下で壊れてＴＥＭＰＯラジカルを放出して虚血・再灌流後の脳・腎臓の障害に効能を発揮すると推察されていたことに照らせば、塩酸やペプシン等を含み、ｐＨが１．０〜２．５くらいであるとされる強酸性胃液に曝されるにもかかわらず、所期の効果を示すことは全く驚くべきことである。

したがって、本発明によれば、高分子化抗酸化剤、特に特定の高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物を有効成分として含む、潰瘍性大腸炎を包含する潰瘍性消化管の炎症の予防または治療をするための経口用医薬製剤が提供される。

また、潰瘍性大腸炎を包含する潰瘍性消化管の予防または治療方法であって、処置の必要な患者に、有効量の特定の高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物を投与する工程を含んでなる、方法も提供される。

より具体的には、特定の高分子環状ニトロキシドラジカル化合物は、下記式Ｉで表される。

式中、Ａは、非置換または置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシを表し、置換されている場合の
置換基は、ホルミル基または式Ｒ^１Ｒ^２ＣＨ−の基を表し、ここで、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシまたはＲ^１とＲ^２は一緒になって−ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ_２）_３Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ_２）_４Ｏ−を表し、
Ｌ_１は、結合または連結基を表し、
Ｌ_２は、連結基を表し、
Ｒは、Ｒの総数ｎの少なくとも５０％が２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル−４−イル、２，２，５，５−テトラメチルピロリジン−１−オキシル−３−イル、２，２，５，５−テトラメチルピロリン−１−オキシル−３−イル及び２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イル及び２，４，４−トリメチル−イミダゾリンジン−３−オキシル−２−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのＲが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
ｍは、１５〜１０，０００の整数を表し、そして
ｎは、３〜３，０００の整数を表する。

当該化合物は、好ましくは、水性媒体中で形成された高分子ミセルの形態で用いられる。

発明の詳細な説明

式Ｉで表される高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物は、上記の特許文献１に記載されているか、また、特許文献１に記載されている方法、必要があれば当該技術分野で周知の知見にもとづいて改変する方法により製造することができる。特許文献１は、ここに引用することによりその内容が本明細書の内容として組み入れられる。

式ＩのＬ_１にいう「連結基」は、当該化合物が水性媒体中で高分子ミセルを形成でき、本発明の目的に悪影響を及ぼさないものであれば、限定されるものでないが、一般的に、連結基の長さが原子１６個までの二価の有機基である。このような有機基としては、限定されるものでないが、−（ＣＨ_２）_ｃＳ−、−（ＣＨ_２）_ｃＳ（ＣＨ_２）_ｄ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨ（ＣＨ_２）_ｄ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨＣＯ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨＣＯ（ＣＨ_２）_ｄ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｄ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｃＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｄ−、−（ＣＨ_２）_ｃＯＣＯ−、−（ＣＨ_２）_ｃＯＣＯ（ＣＨ_２）_ｄ−、−（ＣＨ_２）_ｃＯ−、−（ＣＨ_２）_ｃＯ（ＣＨ_２）_ｄ−、−（ＣＨ_２）_ｃ−からなる群より選ばれ、ここでｃは１〜５、好ましくは２の整数である基を挙げることができる。

一方、Ｌ_２にいう「連結基」は、当該化合物が水性媒体中で高分子ミセルを形成でき、本発明の目的に悪影響を及ぼさないものであれば、限定されるものでないが、一般的に、連結基の長さが原子１２個までの二価の有機基である。このような有機基としては、限定されるものでないが、−ＣＨ_２−ＮＨ−、−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＯＣＯ−、−ＣＨ_２ＯＣＯＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｓ−、−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＮＨＣＯ−、−ＣＨ_２ＮＨＣＯＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ−、−ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２−、を挙げることができる（なお、結合の方向性は、左側がポリマー鎖に結合する）。

当該化合物は、式Ｉにおける、エチレングリコールの反復単位が１０〜１０，０００、好ましくは、２０〜５，０００、より好ましくは２０〜１，０００、最も好ましくは４０〜４００のポリ（エチレングリコール）鎖セグメントとスチレンの反復単位が３〜３，０００、好ましくは３〜５００、より好ましくは５〜１００、最も好ましくは１０〜６０の
ポリ（スチレン）鎖セグメントを含んでなり、かつ、該ポリ（スチレン）鎖セグメントにおけるスチレンの反復単位の少なくとも３０％、より好ましくは５０％、さらにより好ましくは８０％、特に好ましくは１００％がフェニル基の４位において上記Ｌ_２の連結基を介して環状ニトロキシドラジカル化合物の残基が共有結合しており、存在するばあいには、該４位の残りがハロゲン原子、水素原子またはヒドロキシル基であり、そして該環状ニトロキシドラジカル化合物の残基が２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル−４−イル、２，２，５，５−テトラメチルピロリジン−１−オキシル−３−イル、２，２，５，５−テトラメチルピロリン−１−オキシル−３−イル及び２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イル及び２，４，４−トリメチル−イミダゾリンジン−３−オキシル−２−イルからなる群より選ばれる、化合物を挙げることができる。

より具体的には、式Ｉ

式中、Ａは、非置換または置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は、ホルミル基または式Ｒ^１Ｒ^２ＣＨ−の基を表し、ここで、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、Ｃ_１−Ｃ_４アルコキシまたはＲ^１とＲ^２は一緒になって−ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ_２）_３Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ_２）_４Ｏ−を表し、
Ｌ_１は、原子化結合、−（ＣＨ_２）_ｃＳ−、−ＣＯ（ＣＨ_２）_ｃＳ−、からなる群より選ばれる連結基を表し、ここでｃは１ないし５、好ましくは２の整数であり、
Ｌ_２は、メチルイミノ、メチルイミノメチル、メチルオキシ、メチルオキシメチル、メチルエステル及びメチルエステルメチルからなる群より選ばれる連結基を表し、
Ｒは、Ｒの総数ｎの少なくとも５０％、好ましくは７０％以上、より好ましくは９０％以上、特に好ましくは実質的に１００％が、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル−４−イル、２，２，５，５−テトラメチルピロリジン−１−オキシル−３−イル、２，２，５，５−テトラメチルピロリン−１−オキシル−３−イル及び２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イル、２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イル及び２，４，４−トリメチル−イミダゾリンジン−３−オキシル−２−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのＲが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
ｍは、２０〜１，０００の整数を表し、そして
ｎは、５〜１００の整数を表す、
で表される、該高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物を挙げることができる。該化合物の好ましいものとしては、一般式Ｉにおける、Ｌ_１が原子化結合または−ＣＨ_２ＣＨ_２
Ｓ−であり、Ｌ_２が−ＣＨ_２−ＮＨ−、−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＯＣＯ−、−ＣＨ_２ＯＣＯＣＨ_２−、好ましくは、−ＣＨ_２−Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＯＣＯ−、−ＣＨ_２ＯＣＯＣＨ_２−であり、そして
Ｒの実質的に全てが、次式

式中、Ｒ’はメチル基である（なお、ここにいう、「実質的に全て」とは、「少なくとも９８％」を包含する概念である。）、
のいずれかで表される化合物を挙げることができる。

本発明によると、投与経路は、経口に特定される。

本発明の経口用医薬製剤は、生理学的に許容され得る賦形剤、すなわち、治療的に不活性な物質またはキャリアを含むことができ、また、未高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物、脂溶性抗酸化剤（ビタミンＥ、β−カロテン、ユビキノン（コエンザイムＱ）、ビリルビン、カテキン、レスベラトール、タンニン、エブセレン、アミノステロイド、ステロイド誘導体、プロブコール、ビタミンＥ類縁化合物、エイコサノイド代謝阻害薬、カテノロイド、レチノイド、ピペリン）、水溶性抗酸化剤（ビタミンＥ（アスコルビン酸）、グルタチオン、フラボノイド、尿酸）、抗酸化能を有するタンパク質（スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、セルロプラスミン、メタロチオネイン、チオレドキシン）、粒子類（白金コロイド、フラーレン、セレン化合物）等の様々な抗酸化剤を含むこともできる。

賦形剤としては、水、脱イオン水、純粋、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、ポリエチレングリコール（重合度５−１０，０００）溶、マンニトール、キシリトール、グルコース、乳糖等の１種以上をふくむことのでき、剤形としては、液剤、懸濁剤、エマルジョン、ゲル剤、分散剤、等であることができ、また、結合剤（例えば、糊化澱粉、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、）増量剤（例えば、乳糖および他の糖、結晶セルロース、ゼラチン、エチルセルロース）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、トウモロコシ澱粉）等を含むことのでき、剤形としては、粉末剤、散剤、錠剤、カプセル剤、であることもできる。

このような剤形を調製する際には、式Ｉの高分子環状ニトロキシドラジカル化合物を予め水性媒体中で処理して高分子ミセルを形成し、必要があれば、凍結乾燥した後、上記の賦形剤、キャリア、または他の成分を含めることができる。高分子ミセルの形成、その凍結乾燥は当該技術分野で周知の方法により実施できる。

また上記した脂溶性抗酸化剤（ビタミンＥ、β−カロテン、ユビキノン（コエンザイムＱ）、ビリルビン、カテキン、レスベラトール、タンニン、エブセレン、アミノステロイド、ステロイド誘導体、プロブコール、ビタミンＥ類縁化合物、エイコサノイド代謝阻害
薬、カテノロイド、レチノイド、ピペリン）、水溶性抗酸化剤（ビタミンＥ（アスコルビン酸）、グルタチオン、フラボノイド、尿酸）、抗酸化能を有するタンパク質（スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、セルロプラスミン、メタロチオネイン、チオレドキシン）、粒子類（白金コロイド、フラーレン、セレン化合物）等の様々な抗酸化剤はそのまま低分子化合物として、また、上記特許文献１に記載されているとおりに、高分子かして、本発明の医薬製剤に加えることにより、本発明の効果をさらに高めることもできる。

高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物の用量は、処置される患者の状態の重篤度および応答性に応じて変動するが、一般には、イン・ビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）およびイン・ビボ（ｉｎｖｉｖｏ）動物モデルで有効であることが確認されるＥＣ_５０に基づき決定し得る。一般に、体重１ｋｇ当り、０．０１μｇから１０００ｇまで、好ましくは、０．１μｇから１ｇまで、より好ましくは、１０μｇから１００ｍｇまでであることができる。投与スケジュールも、イン・ビトロおよびイン・ビボ動物モデル試験の結果を参照に決定できる。

式Ｉの化合物は、好ましくは、水性媒体（水、緩衝化された水、生理食塩水等）中で当該化合物から形成された高分子ミセル（以下、「ナノ粒子」ともいう）の状態で患者に経口投与されるのが好ましい。

このような式Ｉの化合物を含む経口用医薬製剤は、デキストラン硫酸（ＤＳＳ）を用いて誘発される潰瘍性大腸炎モデルマウスに対し、かような大腸炎が誘発されるのを効果的に抑制（もしくは予防）し、かつ、誘発された大腸炎を効果的に治療できる。このような予防または治療効果は、未高分子化低分子環状ニトロキシドラジカルに比べて有意に高い。また、式Ｉの化合物を用いてその他の消化管の炎症性疾患も同様に予防または治療できる。このような疾患として、胃粘膜障害、虚血−再灌流惹起性小腸粘膜障害やＮＳＡＩＤｓ障害、クローン病等を挙げることができる。

さらに、式Ｉの化合物は、水性媒体中で高分子ミセル化することにより、ポリエチレングリコール鎖で構成される外殻（シェル）に環状ニトロキシドラジカルが内包された形態にあると考えられるナノ粒子を形成し、経口投与により血中に吸収されず、消化管内のみを通過するので、環状ニトロキシドラジカルそれ自体が有する、例えば、血圧低下などの副作用・毒性を著しく軽減するか、または殆ど毒性を示さなくなる。したがって、当該化合物は、潰瘍性消化管の炎症の予防または治療のための経口投与用医薬製剤の有効成分となり得る。

低分子ＴＥＭＰＯと高分子化ＴＥＭＰＯの構造式及び後者の形成するナノ粒子の概念図である。実験例１による（１）の下痢・下血・体重減少インデックス（Ｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｄｅｘ；ＤＡＩ）の結果（同時投与）を表すグラフ表示である。実験例１による（２）のＤＳＳ誘発潰瘍性大腸炎モデルマウスの大腸の長さの結果（同時投与）を表すグラフ表示である。実験例２による（１）下痢・下血・体重減少インデックスの結果（ＤＳＳ障害惹起後、薬剤を投与）を表すグラフ表示である。実験例２によるＤＳＳ誘発潰瘍性大腸炎モデルマウスの大腸の長さの結果（ＤＳＳ障害惹起後、薬剤を投与）を表すグラフ表示である。

本発明のより具体的態様の説明

本願発明を具体的に説明するにあたり、説明を簡潔にするため、式Ｉで表される化合物のうち、Ａがエトキシ基であり、Ｌ_１が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−であり、Ｌ_２が−ＣＨ_２ＮＨ−であり、Ｒが２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル−４−イルであり、ｍが平均４４であり、そしてｎが１７であるもの（エトキシ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳ−Ｎ−ＴＥＭＰＯといい、当該化合物より形成されるナノ粒子をＮ−ＲＮＰと略記する）、ならびにＡがエトキシ基であり、Ｌ_１が−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−であり、Ｌ_２が−ＣＨ_２Ｏ−であり、Ｒが２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル−４−イルであり、ｍが平均４４であり、そしてｎが１７であるもの（エトキシ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳ−Ｏ−ＴＥＭＰＯといい、当該化合物より形成されるナノ粒子をＯ−ＲＮＰと略記する）を用いるが、本発明をこれらに限定することを意図するものでない。

また、以下の実験例では、上記の高分子化ＴＥＭＰＯに加えて、低分子Ａｍｉｎｏ−ＴＥＭＰＯ（アミノ基を有するＴＥＭＰＯ誘導体）及びＨｙｄｒｏｘｙ−ＴＥＭＰＯ（ヒドロキシル基を有するＴＥＭＰＯ誘導体）を比較化合物として用いた。

実験例１：ＤＳＳが誘発する潰瘍性大腸炎に対する環状ニトロキシドラジカル含有ナノ粒子の効果（ＤＳＳと有効成分の同時投与）
５週齢で購入したＩＣＲ雄マウス（ＳＰＦ）を３日間予備飼育し、無作為に６匹／群の６群に分けた後、一群目を対照（ｗａｔｅｒ）群、ほかの群をＤＳＳ投与群としました。ＤＳＳ（分子量５，０００、和光純薬工業）を水道水に５％濃度に溶解させ、飲料水として７日間、自由摂取させた。また、エトキシ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳ−Ｏ−ＴＥＭＰＯをジメチルホルムアミド溶液に溶解し、分画分子量３，５００の透析膜に入れ、透析法により調製されたＯ−ＲＮＰ（５ｍｇ／ｍＬ）、エトキシ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳ−Ｎ−ＴＥＭＰＯをジメチルホルムアミド溶液に溶解し、分画分子量３，５００の透析膜に入れ、透析法により調製されたＮ−ＲＮＰ（１０ｍｇ／ｍＬ）、ｈｙｄｒｏｘｙｌ−ＴＥＭＰＯ（１．３ｍｇ／ｍＬ）、ａｍｉｎｏ−ＴＥＭＰＯ（１．３ｍｇ／ｍＬ）を７日間毎日、同様のＴＥＭＰＯ濃度で、１ｍＬずつ投与した。なお、添付する図面の図２〜５では、前記ＴＥＭＰＯをＴＭＥＰＯと表示している。

なお、実験系は次の通りである。
１）Ｗａｔｅｒ群：水道水の７日間投与のみ。
２）ＤＳＳ投与群：７日間ＤＳＳを自由摂取
３）ＤＳＳ＋Ｏ−ＲＮＰ群：７日間ＤＳＳを自由摂取させつつ、１日１回Ｏ−ＲＮＰ（１
ｍＬ）を投与した。
４）ＤＳＳ＋Ｎ−ＲＮＰ群：７日間ＤＳＳを自由摂取させつつ、１日１回Ｎ−ＲＮＰ（１
ｍＬ）を投与した。
５）ＤＳＳ＋ｈｙｄｒｏｘｙｌ−ＴＥＭＰＯ群：ＤＳＳ＋Ｎ−ＲＮＰ群：７日間ＤＳＳを
自由摂取させつつ、１日１回ｈｙｄｒｏｘｙ−ＴＥＭＰＯ（１ｍＬ）を投与した。
６）ＤＳＳ＋ａｍｉｎｏ−ＴＥＭＰＯ群：ＤＳＳ＋Ｎ−ＲＮＰ群：７日間ＤＳＳを自由摂
取させつつ、１日１回ａｍｉｎｏ−ＴＥＭＰＯ（１ｍＬ）を投与した。

投与開始後７日間、表１に示す基準に従い下痢、血便の状態を観察しスコア化した。また最終日（７日後）にマウスを頚椎脱臼で安楽死させ、大腸組織を摘出後、その全長を測定しました。下痢スコア、血便スコアおよび大腸の長さは群毎の平均値±標準誤差を算出した。

実験結果
（１）図２に下痢・下血・体重減少インデックスの結果を示す。このスコア、下痢スコア、血便スコアと体重減少スコアの総計から算出した。下記の結果が示すとおり、ラジカル含有ナノ粒子を投与することにより、症状の軽減示すことが明らかとなった。
（２）図３に大腸の長さ測定の結果を示す。一般的に、潰瘍性大腸炎になると大腸の長さが著しく短くなることが知られている。低分子のＴＥＭＰＯ誘導体とＲＮＰともに、治療効果を示すが、特にＯ−ＲＮＰを投与することにより、潰瘍性大腸炎障害をより強く抑制したことが明らかになった。

実験例２：ＤＳＳが誘発する潰瘍性大腸炎に対するラジカル含有ナノ粒子の効果（ＤＳＳ障害を惹起した後、ＲＮＰ（薬剤）を投与）
５週齢で購入したＩＣＲ雄マウス（ＳＰＦ）を３日間予備飼育し、無作為に６匹／群の６群に分けた後、一群目を対照（ｗａｔｅｒ）群、ほかの群をＤＳＳ投与群とした。ＤＳＳ（分子量５，０００、和光純薬工業）を水道水に５％濃度に溶解させ、飲料水として７日間、自由摂取させた。その後、ＤＳＳの投与をストップし、水道水を自由接取させながら、３日間、Ｏ−ＲＮＰ（５ｍｇ／ｍＬ）、Ｎ−ＲＮＰ（１０ｍｇ／ｍＬ）、ｈｙｄｒｏｘｙｌ−ＴＥＭＰＯ（１．３ｍｇ／ｍＬ）、ａｍｉｎｏ−ＴＥＭＰＯ（１．３ｍｇ／ｍＬ）を、同様のＴＥＭＰＯ濃度で、０．５ｍＬずつ、１日２回経口投与した。

なお、実験系は次の通りである。
１）Ｗａｔｅｒ群：水道水の１０日間自由摂取のみ。
２）ＤＳＳ投与群：ＤＳＳ水溶液を７日間自由摂取した後、３日間水道水を自由接取。
３）ＤＳＳ＋Ｏ−ＲＮＰ群：７日間ＤＳＳを自由摂取させた後、３日間水道水を自由接取
するとともに、１日２回Ｏ−ＲＮＰ（０．５ｍＬ）を投与した。
４）ＤＳＳ＋Ｎ−ＲＮＰ群：７日間ＤＳＳを自由摂取させた後、３日間水道水を自由接取
するとともに、１日２回Ｎ−ＲＮＰ（０．５ｍＬ）を投与した。
５）ＤＳＳ＋ｈｙｄｒｏｘｙｌ−ＴＥＭＰＯ群：ＤＳＳ＋Ｎ−ＲＮＰ群：７日間ＤＳＳを
自由摂取させた後、３日間水道水を自由接取するとともに、１日２回ｈｙｄｒｏｘｙ
−ＴＥＭＰＯ（０．５ｍＬ）を投与した。
６）ＤＳＳ＋ａｍｉｎｏ−ＴＥＭＰＯ群：ＤＳＳ＋Ｎ−ＲＮＰ群：ＤＳＳ＋Ｎ−ＲＮＰ群
：７日間ＤＳＳを自由摂取させた後、３日間水道水を自由接取するとともに、１日２
回ａｍｉｎｏ−ＴＥＭＰＯ（０．５ｍＬ）を投与した。

投与開始後１０日間、表１示す基準に従い下痢、血便の状態を観察しスコア化した。ま
た、最終日（１０日後）にマウスを頚椎脱臼で安楽死させ、大腸組織を摘出後、その全長を測定した。

下痢スコア、血便スコアおよび大腸の長さは群毎の平均値±標準誤差を算出した。

実験結果
（１）図４に下痢スコア、血便スコアと体重減少スコアの総計から算出した結果を示す。図４の結果が示すとおり、ＤＳＳ障害を惹起してからのラジカル含有ナノ粒子投与によっても、症状の軽減示すことが明らかとなった。
（２）大腸の長さ測定の実験結果を図５に示す。図５からも、潰瘍性大腸炎になった後のラジカル含有ナノ粒子投与によっても、著しく高い治療効果が得られることが明らかとなった。

Claims

下記式Ｉで表される高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物を有効成分として含んでなる、潰瘍性消化管の炎症の予防または治療をするための経口用医薬製剤。
式中、Ａは、非置換または置換Ｃ₁−Ｃ₁₂アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は、ホルミル基または式Ｒ¹Ｒ²ＣＨ−の基を表し、ここで、Ｒ¹及びＲ²は独立して、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシまたはＲ¹とＲ²は一緒になって−ＯＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ₂）₃Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ₂）₄Ｏ−を表し、
Ｌ₁は、−（ＣＨ₂）_cＳ−と−（ＣＨ₂）_cＮＨＣＯ−と−（ＣＨ₂）_cＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨ−と−（ＣＨ₂）_cＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−と−（ＣＨ₂）_cＯＣＯ−と−ＣＯ（ＣＨ₂）_cＳ−と−（ＣＨ₂）_cＯ−と−（ＣＨ₂）_c−とからなる群より選ばれ、ここでｃは１〜５の整数である、連結基を表し、
Ｌ₂は、−ＣＨ₂−Ｏ−と−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−と−ＣＨ₂−Ｓ−と−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−とからなる群より選ばれる連結基を表し、
Ｒは、Ｒの総数ｎの少なくとも５０％が２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル−４−イルと２，２，５，５−テトラメチルピロリジン−１−オキシル−３−イルと２，２，５，５−テトラメチルピロリン−１−オキシル−３−イルと２，４，４−トリメチル−１，３−オキサゾリジン−３−オキシル−２−イルと２，４，４−トリメチル−１，３−チアゾリジン−３−オキシル−２−イルと２，４，４−トリメチル−イミダゾリンジン−３−オキシル−２−イルとからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのＲが水素原子またはハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
ｍは、１５〜１０，０００の整数を表し、そして
ｎは、３〜３，０００の整数を表し、かつ、
前記式Ｉで表される化合物が高分子ミセルの形態にあるナノ粒子である。
潰瘍性消化管の炎症が潰瘍性大腸炎である、請求項１記載の経口用医薬製剤。
Ｌ₁の連結基が−（ＣＨ₂）_c−Ｓ−と−ＣＯ（ＣＨ₂）_cＳ−と−（ＣＨ₂）_c−とからなる群より選ばれ、
Ｌ₂の連結基が−ＣＨ₂−Ｏ−である、請求項１または２記載の経口用医薬製剤。
Ｒが、次式
で表され、Ｒ’がメチル基を表す、請求項１〜３のいずれかに記載の経口用医薬製剤。