JP5815945B2 - Ｓｄｆ−１結合核酸およびその使用 - Google Patents

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Description

本発明は、ＣＸＣケモカイン間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）に結合する核酸分子、疾患の治療のための方法、および医薬の製造におけるそれらの使用に関する。
ケモカイン。ケモカインは、８〜１４ｋＤａの構造的に関連するヘパリン結合塩基性小タンパク質のファミリーである。機能的に、それらは、炎症誘発性、恒常性、またはそれらの二重の機能に分類することができる（Ｍｏｓｅｒ、Ｗｏｌｆら ２００４）。炎症性ケモカインは、病原体、サイトカイン、または成長因子によって誘発され、感染、炎症、組織傷害、および腫瘍の部位にエフェクター白血球を動員する。そのようなケモカインは、白血球細胞の動員、活性化、および増殖を調節する（ＳｃｈａｌｌおよびＢａｃｏｎ １９９４；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ １９９５；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ １９９８）。ケモカインは、好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、肥満細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞の走化性を選択的に誘発する。それらの走化性効果に加えて、ケモカインは、細胞形状の変化、遊離細胞内カルシウムイオンの濃度の一時的な増加、脱顆粒、インテグリンのアップレギュレーション、これらに限定されないが、ロイコトリエン、プロスタグランジン、トロンボキサンなどの生物活性脂質の形成、または呼吸バースト、つまり病原性生物もしくは腫瘍細胞の破壊のための活性酸素種の放出のように、応答性細胞において他の効果を選択的に及ぼし得る。したがって、さらなる炎症誘発性媒介物質の放出、感染または炎症の部位への白血球の走化性および管外遊出を刺激することによって、ケモカインは、炎症応答の増大を引き起こす。恒常性ケモカインは、他方、骨髄およびリンパ組織において主に発現され、造血、免疫監視、および適応免疫応答に関与する（Ｇｏｄｅｓｓａｒｔ ２００５）。
ケモカインのクラス。４つの保存システイン残基の内の最初の２つの配置に基づいて、ケモカインは、４つのクラスに分けられる：システインが縦に並んでいるＣＣケモカインまたはβ−ケモカイン、１つの付加的なアミノ酸残基によって区別される、ＣＸＣケモカインまたはα−ケモカイン、ジスルフィド架橋を１つだけ持つＸＣケモカインまたはγケモカイン、ＸＣＬ１とも呼ばれるリンホタクチンは現在まで唯一の代表物である、および膜結合型フラクタルカインを唯一のクラスメンバーとする、システインの間の３つのアミノ酸残基を特色とするＣＸ３Ｃ−ケモカイン（Ｂａｚａｎ、Ｂａｃｏｎら １９９７）。普通、ケモカインは、２つの名称、それらの機能に関連し、それらの機能により与えられた名称および配列特徴による系統名である名称を持つ。
ＣＸＣケモカイン。ＣＸＣケモカイン、特に、それらのアミノ末端上にアミノ酸配列ＥＬＲを持つそれらのＣＸＣケモカインは、主に好中球に作用する。好中球に対して活性なＣＸＣケモカインの例は、ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ＧＲＯα／ＣＸＣＬ１、ＧＲＯβ／ＣＸＣＬ２、およびＧＲＯγ／ＣＸＣＬ３、ＮＡＰ−２／ＣＸＣＬ７、ＥＮＡ−７８／ＣＸＣＬ５、ＳＤＦ−１／ＣＸＣＬ１２、ならびにＧＣＰ−２／ＣＸＣＬ６である。ＣＸＣケモカインは、単球、マクロファージ、好酸球、好塩基球、ならびにＴリンパ球およびＢリンパ球などの種々様々の白血球に作用する（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ、Ｚａｃｈａｒｉａｅら １９９１；ＭｉｌｌｅｒおよびＫｒａｎｇｅｌ １９９２；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ、Ｄｅｗａｌｄら １９９４；Ｊｏｓｅ、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ−Ｊｏｈｎｓｏｎら １９９４；Ｐｏｎａｔｈ、Ｑｉｎら １９９６）。これらの例は、Ｉ−３０９／ＣＣＬ１；ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２、ＭＣＰ−２／ＣＣＬ８、ＭＣＰ−３／ＣＣＬ７、ＭＣＰ−４／ＣＣＬ１３、ＭＩＰ−１α／ＣＣＬ３およびＭＩＰ−１β／ＣＣＬ４、ＲＡＮＴＥＳ／ＣＣＬ５、ならびにエオタキシン／ＣＣＬ１１である。
ＣＸＣケモカイン受容体。ケモカインは、ＧＰＣＲとも呼ばれる７回膜貫通型Ｇタンパク質共役型受容体のスーパーファミリーに属する受容体を通して作用する（Ｍｕｒｐｈｙ、Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら ２０００））。概して言えば、ケモカインおよびケモカイン受容体の相互作用は、１つのケモカインが複数のケモカイン受容体と結合することができ、逆に、１つのケモカイン受容体が、いくつかの異なるケモカインと相互作用することができるという点で乱雑になる傾向がある。ＣＸＣケモカインについていくつかの知られている受容体は、ＧＲＯα、ＧＣＰ−２およびＩＬ−８に結合するＣＸＣＲ１、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８およびＩＬ−８を含むケモカインに結合するＣＸＣＲ２、ＰＦ４、ＭＩＧ、ＩＰ−１０およびＩ−ＴＡＣを含むケモカインに結合するＣＸＣＲ３、これまで、ＳＤＦ−１に応じてシグナル伝達することのみ分かっているＣＸＣＲ４、ならびにＢＣＡ−１に応じてシグナル伝達することが示されているＣＸＣＲ５を含む（Ｇｏｄｅｓｓａｒｔ ２００５）。ＣＸＣＲ４に加えて、ＲＤＣ１／ＣＸＣＲ７と呼ばれる新しいＳＤＦ−１受容体が同定された（Ｂａｌａｂａｎｉａｎ、Ｌａｇａｎｅら ２００５、Ｂｕｒｎｓ、Ｓｕｍｍｅｒｓら ２００６）。
ＳＤＦ−１。間質細胞由来因子−１（略称：ＳＤＦ−１；別名、ＣＸＣＬ１２；ＰＢＳＦ［プレＢ細胞成長刺激因子］；ＴＰＡＲ−１［ＴＰＡ抑制遺伝子１］；ＳＣＹＢ１２；ＴＬＳＦ［胸腺リンパ腫細胞刺激因子］；ｈＩＲＨ［肝がんにおいて低下したヒトインタークリン］）は、ＩＬ−８様ケモカインの典型的なＥＬＲモチーフを含有しない（Ｓａｌｃｅｄｏ、Ｗａｓｓｅｒｍａｎら １９９９；ＳａｌｃｅｄｏおよびＯｐｐｅｎｈｅｉｍ ２００３）が、Ｇタンパク質共役型受容体ＣＸＣＲ４に結合し、活性化する血管新生ＣＸＣケモカインである。ケモカインは、Ｎ末端シグナル配列を持つｃＤＮＡをクローニングすることによって（Ｔａｓｈｉｒｏ、Ｔａｄａら １９９３）、間質細胞株ＰＡ６によって発現された場合に、初期Ｂ細胞前駆体を刺激するその能力によって（Ｎａｇａｓａｗａ、Ｋｉｋｕｔａｎｉら １９９４）、またはプロテインキナーゼＣ活性化因子テトラドデカノイルホルボールアセテート（略称：ＴＰＡ）で処理されたマウス胚線維芽細胞から構築されるｃＤＮＡライブラリーからの単離によって（Ｊｉａｎｇ、Ｚｈｏｕら １９９４）、３つのグループによって別々に発見された。選択的スプライシングの結果として、ＳＤＦ−１α（６８アミノ酸）およびＳＤＦ−１βというＳＤＦ−１の２つの形態があり、これは、ＳＤＦ−１αと比較して、Ｃ末端に５つの付加的な残基を持つ（Ｓｈｉｒｏｚｕ、Ｎａｋａｎｏら １９９５）。これらの２つのスプライス変異体の生物学的意義は、十分に理解されていない。
ＳＤＦ−１の配列。異なる種からのＳＤＦ−１の間の配列保存は著しい：ヒトＳＤＦ−１α（配列番号１）およびマウスＳＤＦ−１α（配列番号２）は、事実上、同一である。１８位でのＶからＩへの単一の保存的変化のみがある（Ｓｈｉｒｏｚｕ、Ｎａｋａｎｏら １９９５）。
ＳＤＦ−１のＮＭＲ構造。ＮＭＲ構造モデルが、ＳＤＦ−１について存在する（ＰＤＢアクセス、１ＳＤＦ）［８−６８］。ＳＤＦ−１は、不規則なＮ末端領域を有する単量体であることが分かった。他のケモカインに対する差異は、主として、疎水性コアのパッキングおよび表面電荷分布において見出される（Ｃｒｕｍｐ、Ｇｏｎｇら １９９７）。
ＳＤＦ−１の生理活性。ＳＤＦ−１の生理活性：ＳＤＦ−１受容体ＣＸＣＲ４は、白血球、成熟樹状細胞、内皮細胞、脳細胞、および巨核球上に広く発現されるので、ＳＤＦ−１の活性は多面的である。このケモカインは、これまで同定されたあらゆる他のものを超えて、とりわけ免疫系を除いて、最も広い範囲の生物学的機能を示す。ＳＤＦ−１の最も重要な機能的効果は以下のものである：
網膜の脈絡膜側の部分における新生血管部位への上皮細胞のホーミングおよび付着である。ＳＤＦ−１は、眼組織における血管新生の間の、脈絡膜への上皮細胞のホーミングに関与することが示された。これらの細胞の正確な役割は、なお調査中であるが、公開されている仮説は、上皮細胞が異常な血管の形成に関与するということである（Ｓｅｎｇｕｐｔａ、Ｃａｂａｌｌｅｒｏら ２００５）。
幹細胞。ＳＤＦ−１は、幹細胞および前駆細胞、例えば成人の骨髄における造血前駆（通常はＣＤ３４＋）細胞を維持するために必要とされる。選択的ＣＸＣＲ４アンタゴニストであるＡＭＤ３１００は、造血幹細胞移植のために、ＣＤ３４＋細胞を動員するために使用することができる。ＣＤ３４＋細胞は、間質細胞によって生産されるＳＤＦ−１の勾配に沿って、インビトロにおいておよびインビボにおいて移動する（Ａｉｕｔｉ、Ｗｅｂｂら １９９７）。
Ｂ細胞の発生および走化性。ＳＤＦ−１は、プレＢ細胞の増殖を支持し、骨髄Ｂ細胞前駆体の成長を増強する（Ｎａｇａｓａｗａ、Ｋｉｋｕｔａｎｉら １９９４）。それは、プレＢ細胞およびプロＢ細胞の特異的な移動を誘発するが、成熟Ｂ細胞に対する重要な化学誘引物質として作用しない（Ｄ’Ａｐｕｚｚｏ、Ｒｏｌｉｎｋら １９９７；Ｂｌｅｕｌ、Ｓｃｈｕｌｔｚｅら １９９８）。推定上、ＳＤＦ−１は、二次リンパ組織内のＢ細胞の位置調節にとって重要である。
Ｔ細胞走化性。ＳＤＦ−１は、最も効果的なＴ細胞化学誘引物質の内の１つであり、ＣＸＣＲ４は、多くのＴ細胞サブセット上に存在する（Ｂｌｅｕｌ、Ｆａｒｚａｎら １９９６）。
胚発生。ＳＤＦ−１およびその受容体ＣＸＣＲ４は、胚発生にとって不可欠である。ＳＤＦ−１およびＣＸＣＲ４のノックアウトマウスは周産期に死に、それらは、Ｂ細胞および骨髄前駆体の数の低下に加えて、心臓心室中隔欠損症または異常な小脳の発生を示す（Ｎａｇａｓａｗａ、Ｈｉｒｏｔａら １９９６；Ｍａ、Ｊｏｎｅｓら １９９８；Ｚｏｕ、Ｋｏｔｔｍａｎｎら １９９８）。ＳＤＦ−１はまた、胚形成の間の血液発生についての正常な個体発生のために必要とされる（ＪｕａｒｅｚおよびＢｅｎｄａｌｌ ２００４）。
ＨＩＶ感染症。ＳＤＦ−１は、ＣＸＣＲ４を持つ細胞株の中へのＴ細胞指向性ＨＩＶ−１の侵入を阻害することができ、ヒトＳＤＦ−１遺伝子における多型がＡＩＤＳの発症に影響することから、ＳＤＦ−１発現は、ＡＩＤＳの病原と重要な関連がある可能性がある（Ｂｌｅｕｌ、Ｆａｒｚａｎら １９９６）。
他の疾患。ＳＤＦ−１またはその受容体ＣＸＣＲ４の発現レベルの変化またはそれらの分子への応答の変化は、網膜症（Ｂｒｏｏｋｓ、Ｃａｂａｌｌｅｒｏら ２００４；Ｂｕｔｌｅｒ、Ｇｕｔｈｒｉｅら ２００５；Ｍｅｌｅｔｈ、Ａｇｒｏｎら ２００５）；乳がん（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら ２００１；Ｃａｂｉｏｇｌｕ、Ｓａｈｉｎら ２００５）、卵巣がん（Ｓｃｏｔｔｏｎ、Ｗｉｌｓｏｎら ２００２）、膵臓がん（Ｋｏｓｈｉｂａ、Ｈｏｓｏｔａｎｉら ２０００）、甲状腺がん（Ｈｗａｎｇ、Ｃｈｕｎｇら ２００３）、および鼻咽頭がん（Ｗａｎｇ、Ｗｕら ２００５）；神経膠腫（Ｚｈｏｕ、Ｌａｒｓｅｎら ２００２）；神経芽細胞腫（Ｇｅｍｉｎｄｅｒ、Ｓａｇｉ−Ａｓｓｉｆら ２００１）；Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂｕｒｇｅｒ、Ｔｓｕｋａｄａら ２０００）；ＷＨＩＭ症候群（疣贅、低ガンマグロブリン血症、感染、ミエロカセキシス（Ｍｙｅｌｏｋａｔｈｅｘｉｓ）症候群）（Ｇｕｌｉｎｏ、Ｍｏｒａｔｔｏら ２００４；Ｂａｌａｂａｎｉａｎ、Ｌａｇａｎｅら ２００５；Ｋａｗａｉ、Ｃｈｏｉら ２００５）；免疫不全症候群（Ａｒｙａ、Ｇｉｎｓｂｅｒｇら １９９９；Ｍａｒｅｃｈａｌ、Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓら １９９９；Ｓｏｒｉａｎｏ、Ｍａｒｔｉｎｅｚら ２００２）；病的血管新生（Ｓａｌｖｕｃｃｉ、Ｙａｏら ２００２；Ｙａｍａｇｕｃｈｉ、Ｋｕｓａｎｏら ２００３；Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ、Ａｖｒａｈａｍら ２００６）；炎症（Ｍｕｒｄｏｃｈ ２０００；Ｆｅｄｙｋ、Ｊｏｎｅｓら ２００１；Ｗａｎｇ、Ｇｕａｎら ２００１）；多発性硬化症（Ｋｒｕｍｂｈｏｌｚ、Ｔｈｅｉｌら ２００６）；関節リウマチ／変形性関節症（Ｂｕｃｋｌｅｙ、Ａｍｆｔら ２０００；Ｋａｎｂｅ、Ｔａｋａｇｉｓｈｉら ２００２；Ｇｒａｓｓｉ、Ｃｒｉｓｔｉｎｏら ２００４）などの多くのヒト疾患に関連すると言われている。
ＳＤＦ−１およびその受容体のアンタゴニズム。実験動物の設定において、ＳＤＦ−１またはその受容体のアンタゴニストは、膵臓（Ｇｕｌｅｎｇ、Ｔａｔｅｉｓｈｉら ２００５；Ｓａｕｒ、Ｓｅｉｄｌｅｒら ２００５）、結腸（Ｚｅｅｌｅｎｂｅｒｇ、Ｒｕｕｌｓ−Ｖａｎ Ｓｔａｌｌｅら ２００３；Ｇｕｌｅｎｇ、Ｔａｔｅｉｓｈｉら ２００５）、乳房（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら ２００１；Ｌａｐｔｅｖａ、Ｙａｎｇら ２００５）、肺（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、Ｂｕｒｄｉｃｋら ２００３）、神経膠芽腫および髄芽腫（Ｒｕｂｉｎ、Ｋｕｎｇら ２００３）、前立腺（Ｓｕｎ、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら ２００５）、骨肉腫（Ｐｅｒｉｓｓｉｎｏｔｔｏ、Ｃａｖａｌｌｏｎｉら ２００５）、黒色腫（Ｔａｋｅｎａｇａ、Ｔａｍａｍｕｒａら ２００４）、胃（Ｙａｓｕｍｏｔｏ、Ｋｏｉｚｕｍｉら ２００６）、ならびに多発性骨髄腫（Ｍｅｎｕ、Ａｓｏｓｉｎｇｈら ２００６）などの異なる起源からのヒトがん細胞の成長および／または転移性の拡散の阻止に効率的であることが分かった。さらに、抗ＳＤＦ−１療法は、網膜血管新生（Ｂｕｔｌｅｒ、Ｇｕｔｈｒｉｅら ２００５、Ｍａｍｅｓ、Ｍａｔｔｈｅｕｓら ２００６）、腎炎（Ｂａｌａｂａｎｉａｎ、Ｃｏｕｄｅｒｃら ２００３）、および関節炎（Ｍａｔｔｈｙｓ、Ｈａｔｓｅら ２００１；Ｔａｍａｍｕｒａ、Ｆｕｊｉｓａｗａら ２００４；Ｄｅ Ｋｌｅｒｃｋ、Ｇｅｂｏｅｓら ２００５）の予防において、動物モデルにおいて有益であった。さらに、選択的ＣＸＣＲ４アンタゴニストであるＡＭＤ３１００は、造血幹細胞移植のために、ＣＤ３４＋細胞を動員するために使用された。ＣＤ３４＋細胞は、間質細胞によって生産されるＳＤＦ−１の勾配に沿って、インビトロにおいておよびインビボにおいて移動する（Ａｉｕｔｉ、Ｗｅｂｂら １９９７）。
ＳＤＦ−１および眼疾患。ＳＤＦ−１は、糖尿病網膜症（略称ＤＲ）（Ｆｏｎｇ、Ａｉｅｌｌｏら ２００４）および加齢性黄斑変性症（略称ＡＭＤ）（Ａｍｂａｔｉ、Ａｎａｎｄら ２００３）などの、眼の後部の疾患の病理における一員である。これらの疾患は両方とも、眼に損傷を与え、視界の緩やかな損失に至り、失明に達する。損傷は、脈絡膜血管新生（略称ＣＮＶ）として知られているプロセスである、眼の後部における血管の不適当な成長により生じる。ＣＮＶの間に、脈絡膜から生じる新しい血管は、ブルッフ膜における切れ目を通して、網膜下色素上皮（略称ｓｕｂ−ＲＰＥ）または網膜下の空間に移動する。異常な血管は、出血し得、これは網膜内出血とも呼ばれるまたは異常な血管は、網膜の下に体液を漏出させ得る。これは、傷跡を残し得、黄斑を大きくし得、これにより視界が歪む。
糖尿病網膜症。ＤＲは、糖尿病の主な結果であり、１型および２型糖尿病の両方を有する患者において頻繁に生じる。米国において約１６００万人の糖尿病患者がおり、約８００万人がある形態のＤＲを有する。増殖糖尿病網膜症（略称ＰＤＲ）が未治療のままである場合、約６０％の患者は、５年以内に一方または両方の眼が盲目になる。北アメリカ、欧州、および多くの新興国における糖尿病の有病率における驚くべき上昇と共に、患者集団は急速に成長している。例えば、失明の発生率は、一般集団においてよりも糖尿病を有する患者において２５倍高い。さらに、ＤＲは、中年の被験者における失明の最も共通の原因であり、毎年、米国におけるすべての新たな症例の内の少なくとも１２パーセントを占める。糖尿病患者の視力をモニターすることができ、治療が、利用可能であるなどのように、時間内に実行することができるように、スクリーニングプログラムが適所にある。
ＤＲの直接的な原因はよく理解されていないが、この疾患は、組合せの源においてその起源を有すると考えられる：網膜の血流の自己調節障害；網膜細胞内部のソルビトールの蓄積；および細胞外液における終末糖化産物の蓄積。これらの因子はすべて、高血糖症、血流における糖の存在量に直接的または間接的に関連する。
ＤＲの症状は、ＡＭＤの症状に類似している。患者は網膜の細胞を失い、微小動脈瘤、つまり血液漏出が網膜の基底膜において生じる。さらに、血管内皮成長因子（略称ＶＥＧＦ）、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、およびおそらくＳＤＦ−１を含む、他の血液由来因子は、新たな血管細胞を誘引し、有害な血管の形成を促進する。
加齢性黄斑変性症。ＡＭＤは、人の中心視力を破壊する。症状が患者の間で変動するので、この疾患の初期段階は、注目すべきものではないの可能性がある。時に、患者は、一方の眼のみ冒される。または視界は、著しくではないが、両方の眼において損なわれる可能性がある。この疾患は、歪みまたは不完全な色覚を引き起こす。視野の中心に暗点がある場合が多い。
この疾患の病因（これは経過を意味する）は、よく理解されていない。ＡＭＤは、網膜の最外層の老化と考えられることが多い。物理的変化が、黄斑として知られている、網膜の中心において生じ、これは、ほとんどの鋭敏な視力が依存する網膜の一部である。
滲出型ＡＭＤは、この疾患の萎縮形態の結果として始まる。９０％ほどの患者がＡＭＤの萎縮形態に罹り、これは、黄斑組織の薄層化およびその色素沈着における妨害をもたらす。残りは、滲出形態を有し、これは、脈絡膜血管新生を伴い、黄斑浮腫の形成および網膜出血または網膜下出血を伴うことが多い。これらはすべて、視力の急速な悪化に至り得る。
既に、５５歳を超える人々における失明の最も一般的な原因である滲出型ＡＭＤは、６５〜７４歳の米国人口の推定４％〜５％および７５歳以上の米国人口の約１０％を苦しめている。この疾患を有する８０歳以上の人が米国だけで既に５００万人おり、さらに５００万人が２０２０年までに冒されると予想される。
腫瘍。腫瘍（固形新生物および血液新生物ならびに悪性腫瘍を含む）は、単に、がん細胞の集まりではなく、免疫細胞を伴う腫瘍の浸潤は、がんの特徴である。多くのヒトがんは、この浸潤の量および表現型ならびに腫瘍の成長、生存、移動、および血管形成に影響を及ぼす複雑なケモカインネットワークを有する。ほとんどの固形腫瘍は、多くの非悪性間質細胞を含有する。実際に、間質細胞は、時に、がん細胞より数が多い。がんにおいて見出される主な間質細胞は、マクロファージ、リンパ球、内皮細胞、および線維芽細胞である。
腫瘍におけるＳＤＦ−１。異なるがん型の細胞は、ケモカイン受容体発現のプロファイルが異なるが、ＳＤＦ−１受容体ＣＸＣＲ４は、マウスおよび人の腫瘍細胞において最も共通して見出され、上皮、間葉、および造血性起源の少なくとも２３の異なる型のヒトがんからの腫瘍細胞は、ＳＤＦ−１が、ＣＸＣＲ４に対する唯一の知られているリガンドであるＣＸＣＲ４（Ｂａｌｋｗｉｌｌ ２００４）を発現する。恒常的に発現される骨髄および二次リンパ組織とは別に、ＳＤＦ−１は、リンパ腫における原発腫瘍部位（Ｃｏｒｃｉｏｎｅ、Ｏｔｔｏｎｅｌｌｏら ２０００）ならびにニューロン系統およびアストロサイト系統の両方の脳腫瘍において見出される。さらに、それは、卵巣がん（Ｓｃｏｔｔｏｎ、Ｗｉｌｓｏｎら ２００２）および膵臓がん（Ｋｏｓｈｉｂａ、Ｈｏｓｏｔａｎｉら ２０００）においてならびに乳がん（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら ２００１）および甲状腺がん（Ｈｗａｎｇ、Ｃｈｕｎｇら ２００３）、神経芽細胞腫および血液悪性腫瘍（Ｇｅｍｉｎｄｅｒ、Ｓａｇｉ−Ａｓｓｉｆら ２００１）における転移の部位で高レベルで存在する。対照的に、ＣＸＣＲ４発現は、正常な乳房（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら ２００１）、卵巣（Ｓｃｏｔｔｏｎ、Ｗｉｌｓｏｎら ２００２）、および前立腺上皮（Ｓｕｎ、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら ２００５）で低いまたは不在である。
ＣＸＣＲ４に加えて、新たなＳＤＦ−１受容体が同定された：ＲＤＣ１／ＣＸＣＲ７（Ｂａｌａｂａｎｉａｎ、Ｌａｇａｎｅら ２００５、Ｂｕｒｎｓ、Ｓｕｍｍｅｒｓら ２００６）。前立腺がん細胞株を用いるインビトロおよびインビボ研究は、ＣＸＣＲ７／ＲＤＣ１発現における変化が、生存の利点に加えて、粘着性および侵襲性の活性の増強と関連することを示唆する。さらに、ＣＸＣＲ７／ＲＤＣ１レベルは、ＣＸＣＲ４によって調節されることが観察された（Ｗａｎｇら、２００８）。インビトロおよびインビボ研究は、ＳＤＦ−１に対する両方の受容体、すなわち、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７が、多くの腫瘍、例えば、乳がん、神経膠芽腫、卵巣がん、神経芽細胞腫、肺がん、結腸直腸がん、および前立腺がんにおける腫瘍成長、転移能、および（化学療法によって誘発される）アポトーシスに対する抵抗性を促進することを示した（Ｂｕｒｎｓら、２００６；Ｌｉら、２００８；Ｓｃｏｔｔｏｎら、２００２；Ｙａｎｇら、２００８；Ｚａｇｚａｇら、２００８）。
ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７の発現は、したがって、いくつかの腫瘍の一般的な特徴であるように思われる。
がん治療における治療上の選択肢としてのケモカイン受容体シグナル伝達の阻害。腫瘍細胞上のケモカイン受容体シグナル伝達の阻害は、以下の証拠によって示されるように、インビボにおいて、成長停止またはアポトーシスを誘発するならびに侵襲および転移を予防する可能性を有する：ｓｉＲＮＡによるＣＸＣＲ４ノックダウンは、乳房腫瘍成長を抑止した（Ｌａｐｔｅｖａ、Ｙａｎｇら ２００５）；ＣＸＣＲ４の表面の発現を予防する構築物を用いて形質移入されたＴ−ハイブリドーマ細胞は、マウスに静脈内注射された場合、離れた器官にもはや転移することができなかった（Ｚｅｅｌｅｎｂｅｒｇ、Ｒｕｕｌｓ−Ｖａｎ Ｓｔａｌｌｅら ２００１）；結腸直腸がん細胞を用いる類似実験において、肺および肝臓の転移は大幅に低下した（Ｚｅｅｌｅｎｂｅｒｇ、Ｒｕｕｌｓ−Ｖａｎ Ｓｔａｌｌｅら ２００３）；抗ＣＸＣＲ４抗体は、リンパ節への乳がん異種移植片の広がりを阻害した（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら ２００１）；抗ＣＸＣＲ４抗体または抗ＳＤＦ−１抗体を用いるリンパ芽球様細胞の治療は、（ＮＯＤ）／ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍成長を遅らせた（Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉ、Ｄｅｌｌ’Ａｇｎｏｌａら ２００２）；抗ＳＤＦ−１抗体は、非小細胞肺がん（略称ＮＳＣＬＣ）細胞の器官転移の発生を阻害した（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、Ｂｕｒｄｉｃｋら ２００３）；ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３１００（ＡｎｏｒＭＥＤ Ｉｎｃ．による）の全身投与は、脳内の神経膠芽腫異種移植片および髄芽腫異種移植片の成長を阻害し、２４時間以内に腫瘍細胞アポトーシスを増加させた（Ｒｕｂｉｎ、Ｋｕｎｇら ２００３）；抗ＳＤＦ−１抗体は、がん腫関連線維芽細胞と混合されたＭＣＦ−７乳がん細胞の増殖を阻害した（Ｏｒｉｍｏ、Ｇｕｐｔａら ２００５）；抗体を用いるＣＸＣＲ４の中和は、骨部位における前立腺がんの転移および成長を阻止した（Ｓｕｎ、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら ２００５）；骨肉腫細胞の注射の後の肺転移の発生は、ペプチド性ＣＸＣＲ４アンタゴニストＴ１３４の投与によって予防された（Ｐｅｒｉｓｓｉｎｏｔｔｏ、Ｃａｖａｌｌｏｎｉら ２００５）。
異なる著者らは、ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４軸を標的とすることが、新たな治療上の選択肢をがん患者に提供するという結論に達する：
ヒト卵巣腫瘍は、ＳＤＦ−１、そのうえ、より低いレベルでＶＥＧＦを強く発現する。両方のタンパク質は、腫瘍における低酸素によって誘発される。これらのタンパク質のいずれかの病的濃度のみでは、インビボ血管形成を誘発するのに十分ではなかったが、病的濃度のＳＤＦ−１およびＶＥＧＦは、共に、効率的におよび相乗的に血管新生を誘発した。したがって、ＶＥＧＦだけではなく、この相乗的な軸の中断は、がんを治療するための新規な、効率的な抗血管形成戦略となる（Ｋｒｙｃｚｅｋ、Ｌａｎｇｅら ２００５）。
乳がん細胞株は、自己分泌ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４シグナル伝達経路を備える場合、攻撃的な行動を見せる。これは、より速い成長と共に、侵襲性および移動の増加を含む。ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４軸は、したがって、攻撃的な性質を予測するための重要な情報を提供し、ヒト乳がんにおける重要な治療上の標的を構成する（Ｋａｎｇ、Ｗａｔｋｉｎｓら ２００５）。
小細胞肺がん（略称ＳＣＬＣ）細胞−高レベルのＣＸＣＲ４を発現する−の移動および転移は、ＳＤＦ−１によって調節される。ＣＸＣＲ４の活性化は、腫瘍微小環境内で、アクセサリー細胞（間質細胞など）および細胞外マトリックス分子への粘着を促進する。これらの粘着性の相互作用は、化学療法に対するＳＣＬＣ細胞の抵抗性の増加をもたらす。そのため、ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４軸の阻害剤は、ＳＣＬＣ細胞の化学受容性を増加させ、ＳＣＬＣ（Ｈａｒｔｍａｎｎ、Ｂｕｒｇｅｒら ２００４）および他の腫瘍を有する患者に対する新たな治療手段に至る。
ケモカイン受容体シグナル伝達および幹細胞輸送。ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４軸は、体内の様々な型の幹細胞の輸送の中心的な調節因子として現れる。すべてではないが、大部分の悪性腫瘍は、幹／前駆細胞コンパートメントにおいて生じるので、がん幹細胞もまた、それらの表面上にＣＸＣＲ４を発現し、その結果として、ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４軸は、例えばリンパ節、肺、肝臓、および骨などの、ＳＤＦ−１を発現する器官へのそれらの輸送／転移の指示に関与する。その結果、ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４軸の調整を目的とする戦略は、組織に正常な幹細胞を送達するための再生医療およびがん幹細胞の転移を阻害するための臨床腫瘍学の両方において、重要な臨床適用を有する（Ｋｕｃｉａ、Ｒｅｃａら ２００５）。
幹細胞動員。白血球細胞として知られている白血球は、好中球、マクロファージ、好酸球、好塩基球／肥満細胞、Ｂ細胞、およびＴ細胞を含む。白血球細胞は、造血組織における幹細胞および前駆細胞に対するコロニー刺激因子（ＣＳＦ）および様々なサイトカインの作用によって、造血系を介して継続的に補充される。最も広く知られているこれらの因子は、白血球細胞および前駆細胞の生産を刺激することによって（末梢血幹細胞動員）、化学療法の負の効果を打ち消す際の使用について承認されている顆粒球コロニー刺激因子（略称Ｇ−ＣＳＦ）である。幹細胞および前駆細胞の集団の特徴付けのためのマーカーとして使用される多くの細胞表面抗原がある。これらのマーカーはまた、新たな、より特異的なマーカーが発見されるたびに、変更されやすい。造血幹細胞は、ＣＤ３４＋、ｃ−ｋｉｔ＋、Ｓｃａ−１＋、ＣＤ４５＋、ｌｉｎ−、およびＣＤ３８−によって現在、特徴付けられている（ＣＤ３８はまた、系統マーカーでもあり、そのため、これはｌｉｎ−に重複する）。骨髄はまた、造血性ではないが、他の細胞型および組織のもとになる可能性があるいくつかの他の幹細胞型に対する宿主である：間葉幹細胞は、ＣＤ３４＋、Ｓｃａ−１＋、ｌｉｎ−、ＢＭＰＲ＋、および／またはＳＴＲＯ−１＋として特徴付けられ、骨髄からの組織幹細胞（ｔｉｓｓｕｅ−ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）は、ＣＸＣＲ４＋、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５−であるとして現在、定義されている。骨髄からの組織幹細胞の亜集団は、次のとおりである（Ｍａｊｋａら、２００５）。
骨格幹細胞：Ｍｙｆ５＋、ＭｙｏＤ＋
心臓幹細胞：ＮＫｘ２．５＋、ＧＡＴＡ４＋
肝臓幹細胞：ＣＫ１９＋、α−フェトプロテイン＋
神経幹細胞：ネスチン＋、ＧＡＴＡ４＋
いくつかの他の因子は、ヒト被験者および動物被験者の両方において、白血球細胞および前駆細胞を増加させることが報告された。これらの作用物質は、単一の作用物質としてまたは組合せで、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（略称ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン１（略称ＩＬ−１）、インターロイキン３（略称ＩＬ−３）、インターロイキン８（略称ＩＬ−８）、ＰＩＸＹ−３２１（略称ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３融合タンパク質）、マクロファージ炎症タンパク質（略称ＭＩＰ）、ＧＲＯβ（ＣＸＣＬ２）およびＧＲＯβＴ（ＣＸＣＬ２Δ４）、幹細胞因子、トロンボポエチン、ならびに増殖関連のがん遺伝子を含む（Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ、Ｂｅｎｎｉｎｇｅｒら １９９５；Ｇｌａｓｐｙ、Ｄａｖｉｓら １９９６；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ、Ｂｏｌｗｅｌｌら １９９６；Ｇｌａｓｐｙ、Ｓｈｐａｌｌら １９９７；Ｖａｄｈａｎ−Ｒａｊ、Ｍｕｒｒａｙら １９９７；Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ、Ｏｒａｚｉら １９９８；Ｄａｌｅ、Ｌｉｌｅｓら １９９８；Ｐｒｕｉｊｔ、Ｗｉｌｌｅｍｚｅら １９９９；Ｋｉｎｇ、Ｈｏｒｏｗｉｔｚら ２００１）。
内因性成長因子は薬理学的に有効であるが、医薬品としてタンパク質およびペプチドを用いることについてのよく知られている不利益により、その限りにおいて有効である、つまり、白血球の前駆細胞および幹細胞をそれぞれ増加させ、好ましくは、被験者の末梢血におけるそのレベルを増加させるさらなる作用物質を、そのような成長因子のレパートリーに追加する必要性が強められる。したがって、本出願の根底にある１つの課題は、白血球の前駆細胞および幹細胞をそれぞれ増加させるための、より具体的には、被験者の末梢血におけるそのレベルを増加させるための手段および方法を提供することである。本出願の根底にあるさらなる課題は、それぞれ、白血球の前駆細胞および幹細胞の低レベルによって引き起こされる疾患またはそれに関連する疾患の治療のための手段および方法を提供することである。
幹細胞は、損傷を受けた組織の修復を直接的に可能にするために患者に動員されるか、または、幹細胞は、動員され、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合ドナーから収集され、冒された組織に、静脈内にまたは直接的に患者に投与される。後者はまた、患者自身から動員された幹細胞を用いて行うことができる。幹細胞の投与の前に、それらは、インビトロにおいて増殖および／または分化させることができる。
アレルギー性気道疾患および接触アレルギー。ＳＤＦ−１は、成熟肥満細胞および前駆型肥満細胞上で走化性作用物質として作用することが分かった（とりわけ、例えば肥満細胞表面上のＦｃ−イプシロン受容体に結合することを通してのＩｇＥシグナル伝達によって、ヒスタミンが成熟肥満細胞から放出される場合（Ｇｏｄｏｔ、Ａｒｏｃｋら ２００７）において）。アレルギー性気道疾患のマウスモデルにおいて、上記に概説されるように白血球上に発現されるＣＸＣＲ４の抗体媒介性の中和は、気道応答性亢進を低下させた。抗体はまた、特に気管支肺胞洗浄液および間質中で肺好酸球増加を半分に低下させ、これは、ＣＸＣＲ４媒介性のシグナルが肺炎症の一因となることを示す。ＳＤＦ−１α中和は、肺アレルギー性炎および気道応答性亢進の両方における類似の低下をもたらした（Ｇｏｎｚａｌｏ、Ｌｌｏｙｄら ２０００）。ＳＤＦ−１が血管形成の一因となるという証拠もある。これは、血管形成およびＳＤＦ−１発現について気管支の生検材料を分析することによって、喘息においてＨｏｓｈｉｎらによって明確に示された。これらの生検材料の切片についての免疫組織化学的検査は、喘息の被験者が、コントロール被験者と比較して、より高度の血管分布およびより多くのＳＤＦ−１陽性細胞を有したことを示した。（Ｈｏｓｈｉｎｏ、Ａｏｉｋｅら ２００３）。
さらに、臨床的および実験的な証拠は、皮膚浸潤白血球が、アトピー性皮膚炎の開始および維持に決定的な役割を果たすことを示す。ＳＤＦ−１は、Ｔリンパ球および樹状細胞、とりわけランゲルハンス型樹状細胞の動員のための重要な因子であることが示された（Ｇｏｍｂｅｒｔ、Ｄｉｅｕ−Ｎｏｓｊｅａｎら ２００５）。
乾癬。乾癬は、根底にある自己免疫成分を有する炎症性皮膚疾患である。乾癬は、顕著な役割を果たすＴ細胞と共に、患部の皮膚の強力な白血球浸潤によって特徴付けられる。Ｚｈｏｕらは、とりわけ、乾癬皮膚病変におけるＳＤＦ−１のｍＲＮＡ発現の増加を見出した（Ｚｈｏｕ、Ｋｒｕｅｇｅｒら ２００３）。
関節炎。関節炎におけるＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸の関与について、文献における証拠がある。Ｍａｔｔｈｙｓらは、ＣＸＣＲ４の効力のある、特異的なアンタゴニストであるＡＭＤ３１００が、ＩＦＮガンマ受容体欠損マウスにおいて自己免疫性関節炎を阻害したことを示した（Ｍａｔｔｈｙｓ、Ｈａｔｓｅら ２００１）。ＳＤＦ−１の発現はまた、脊椎関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、および変性関節疾患（変形性関節症）によって冒された被験者からの滑膜の生検材料においておよびＲＴ−ＰＣＲによっても観察された。しかしながら、過剰発現は、すべての症例において見られなかった（Ｇｕ、Ｍａｒｋｅｒ−Ｈｅｒｍａｎｎら ２００２）。類似した結果は、ＲＴ−ＰＣＲを使用して、ＣＸＣＲ４について見出された。
関節リウマチ。最近になって、ＳＤＦ−１レベルは、変形性関節症患者と比較して、関節リウマチ患者からの滑液において増加することが分かった（Ｋｉｍ、Ｃｈｏら ２００７）。これらの著者らはまた、細胞培養において、線維芽細胞様滑膜細胞からのＳＤＦ−１発現が、Ｔ細胞とこれらの細胞を同時培養することによってアップレギュレートされたことも記載している。この効果はまた、培養培地への、Ｔ細胞サイトカインであるＩＬ−１７の添加によって観察された。
関節生検材料切片についての免疫組織化学的検査により、乾癬性関節炎によって冒された関節の滑膜においてＳＤＦ−１が発現されることが明らかにされた。急速で重要な臨床的改善は、９人の患者すべてにおいてインフリキシマブ治療の後に観察された。これには、他の成長因子の中で、滑膜のＳＤＦ−１レベルの低下が伴った（生検材料は、８週間の療法の後に採取された）（Ｇｕ、Ｍａｒｋｅｒ−Ｈｅｒｍａｎｎら ２００２）。
白血球浸潤は、アレルギー性疾患、自己免疫疾患におけるアレルギー反応および炎症についての特徴となるという徴候があるが、そのような疾患の有効な治療は、今までのところ開発できていなかった。その場合において、そのような疾患の経過に影響し、好ましくは、白血球浸潤に影響するさらなる作用物質が必要とされる。したがって、本出願の根底にあるさらなる課題は、組織の中への白血球の浸潤を阻害するまたは低下させるための手段および方法を提供することである。本出願の根底にあるさらなる課題は、組織の中への白血球の浸潤または組織の中へのそのような白血球の浸潤のレベルの増加によって引き起こされるまたはそれと関連する疾患の治療のための手段および方法を提供することである。
ＳＤＦ−１およびその受容体のシグナル伝達は、体内での、好ましくは、ある組織から他の組織の中への、組織から末梢血への、および／または末梢血から組織の中への細胞の移動に影響し、いくつかの疾患および障害に至る。特異的な干渉、好ましくは、ＳＤＦ−１および１つまたは複数のＳＤＦ−１受容体の間の相互作用の阻害は、いくつかの疾患および障害の改善を引き起こす可能性がある。上記のものを考慮して、本出願の根底にあるさらなるより一般的な課題は、好ましくは、ある組織から他の組織への、組織から末梢血への、および／または末梢血から組織の中への体内での細胞の移動に影響する手段および方法であって、そのような移動は、いくつかの疾患および障害に至るまたはそれと関連する手段および方法を提供することである。その限りにおいて、本出願の根底にあるさらなる課題は、好ましくは、ある組織から他の組織への、組織から末梢血への、および／または末梢血から組織の中への体内での細胞の移動によって引き起こされる、またはそれと関連し、いくつかの疾患および障害に至る手段および方法を提供することである。
本発明の根底にある課題は、独立請求項の主題によって解決される。好ましい実施形態は、従属請求項から得ることができる。
より具体的には、本出願の根底にある課題は、ＳＤＦ−１に結合する核酸分子による第１の態様において、核酸分子が細胞の移動に影響を及ぼすことにより解決される。
第１の態様の第１の実施形態において、細胞は、ＳＤＦ受容体を発現し、ＳＤＦ−１受容体は、好ましくは、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７から選択される受容体である。
第１の態様の第２の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１の実施形態の実施形態でもあるが、細胞の移動は、前駆細胞、幹細胞、がん細胞、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の被験者の末梢血への動員を含み、好ましくは、Ｂ細胞および／またはＴ細胞は、メモリーＢ細胞および／またはメモリーＴ細胞である。
第１の態様の第３の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２の実施形態の実施形態でもあるが、前駆細胞および／または幹細胞は、ＣＤ３４＋前駆細胞を含む。
第１の態様の第４の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２および第３の実施形態の実施形態でもあるが、前駆細胞および／または幹細胞の動員は、造血組織において起こる。
第１の態様の第５の実施形態において、これはまた、第１の態様の第４の実施形態の実施形態でもあるが、造血組織は、骨髄組織およびリンパ組織の内の少なくとも１つであり、好ましくは、骨髄組織は、骨髄中に位置し、好ましくは、リンパ組織は、消化管の粘膜、気道、リンパ節、脾臓、胸腺、および／または炎症組織におけるリンパ濾胞中に位置する。
第１の態様の第６の実施形態において、核酸分子は、白血球の遊走を阻害する。
第１の態様の第７の実施形態において、これはまた、第１の態様の第６の実施形態の実施形態でもあるが、白血球は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好酸球、好中球、好塩基球、樹状細胞、および／または肥満細胞である。
第１の態様の第８の実施形態において、これはまた、第１の態様の第６および第７の実施形態の実施形態でもあるが、白血球の遊走後に、白血球は、組織中に蓄積され、好ましくは、白血球の蓄積から、上述の組織における炎症に至る。
第１の態様の第９の実施形態において、これはまた、第１の態様の第８の実施形態の実施形態でもあるが、組織は、皮膚、粘膜、以下に限定されないが、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、骨、および／またはリンパ系から選択される器官、好ましくは、皮膚および／または気道の粘膜を含む。
第１の態様の第１０の実施形態において、これはまた、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子を含む群から選択される。
第１の態様の第１１の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１０の実施形態の実施形態でもあるが、Ａ型核酸分子は、以下のコアヌクレオチド配列：
５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
を含み、
ＸＡは、不在またはＡのいずれかである。
第１の態様の第１２の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１１の実施形態の実施形態でもあるが、Ａ型核酸分子は、
５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号２０）、
５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号２１）、および
５’ＡＡＡＧＹＡＡＣＡＨＧＵＣＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号２２）を含む群から選択されるコアヌクレオチド配列を含み、好ましくは、コアヌクレオチド配列は、５’ＡＡＡＧＹＡＡＣＡＨＧＵＣＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号２２）を含む。
第１の態様の第１３の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１１および第１２の実施形態の実施形態でもあるが、核酸分子は、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖を含む。
第１の態様の第１４の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１１および第１２の実施形態の実施形態でもあるが、核酸分子は、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖を含む。
第１の態様の第１５の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１３および第１４の実施形態の実施形態でもあるが、核酸分子は、第１および第２のヌクレオチド伸長鎖を含み、上述の第１および第２のヌクレオチド伸長鎖は、互いに任意選択でハイブリダイズし、ハイブリダイゼーション後に二本鎖構造が形成される。
第１の態様の第１６の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１３〜第１５の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、二本鎖構造は、４〜６個の塩基対、好ましくは、５個の塩基対からなる。
第１の態様の第１７の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１３〜第１６の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列を含み、
Ｘ１は不在もしくはＲのいずれかであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹのいずれかである、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳのいずれかであり、Ｘ３は不在もしくはＳのいずれかであり、Ｘ４は不在である。
第１の態様の第１８の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１３〜第１７の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＲＳＨＲＹＲ３’（配列番号２３）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＹＲＹＤＳＹ３’（配列番号２４）のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＧＣＵＧＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＧＣＡＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第１９の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１３〜第１７の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’Ｘ２ＢＢＢＳ３’（配列番号４２）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＳＢＢＶＸ３３’（配列番号４３）のヌクレオチド配列を含み、
Ｘ２は不在もしくはＳのいずれかであり、Ｘ３は不在もしくはＳのいずれかであり、
好ましくは、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＵＧＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＧＣＡＧ３’のヌクレオチド配列を含む
または第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＧＣＧＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＧＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第２０の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１１〜第１９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、配列番号５〜１８、２５〜４１、１３３、１３７、１３９〜１４１のいずれかに記載の核酸配列を有する。
第１の態様の第２１の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１０の実施形態の実施形態でもあるが、Ｂ型核酸分子は、以下のコアヌクレオチド配列：
５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
を含む。
第１の態様の第２２の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２１の実施形態の実施形態でもあるが、Ｂ型核酸分子は、ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＵＧＧＣＵＧＡＵＣＣＵＡＧＵＣＡＧＧ（配列番号５８）のコアヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第２３の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２１〜第２２のいずれかの実施形態の実施形態でもあるが、核酸分子は、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖を含む。
第１の態様の第２４の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２１〜第２２の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖を含む。
第１の態様の第２５の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２３〜第２４の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、ヌクレオチドの第１および第２の伸長鎖を含み、ヌクレオチドの上述の第１および上述の第２の伸長鎖は、互いに任意選択でハイブリダイズし、ハイブリダイゼーション後に二本鎖構造が形成される。
第１の態様の第２６の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２１〜第２５の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、二本鎖構造は、４〜６個の塩基対、好ましくは、５個の塩基対からなる。
第１の態様の第２７の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２３〜第２６の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列を含み、
Ｘ１は不在もしくはＡのいずれかであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵのいずれかである、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧのいずれかであり、Ｘ３は不在もしくはＣのいずれかであり、Ｘ４は不在である。
第１の態様の第２８の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２３〜第２７のいずれかの実施形態の実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’Ｘ１ＧＣＲＷＧ３’（配列番号５９）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＫＲＹＳＣＸ４３’（配列番号６０）のヌクレオチド配列を含み、
Ｘ１は不在またはＡのいずれかであり、Ｘ４は不在またはＵのいずれかである。
第１の態様の第２９の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２３〜第２８の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’Ｘ１ＧＣＧＵＧ３’（配列番号７５）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＵＡＣＧＣＸ４３’（配列番号７６）のヌクレオチド配列を含み、
Ｘ１は不在またはＡのいずれかであり、Ｘ４は、不在またはＵのいずれかであり、
好ましくは、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＡＧＣＧＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＵＡＣＧＣＵ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第３０の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２３〜第２７の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’Ｘ２ＳＳＢＳ３’（配列番号７３）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＢＶＳＳＸ３３’（配列番号７４）のヌクレオチド配列を含み、
Ｘ２は不在またはＧのいずれかであり、Ｘ３は不在またはＣのいずれかであり、
好ましくは、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＧＣＧＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＵＡＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第３１の実施形態において、これはまた、第１の態様の第２１〜第３０の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、配列番号４６〜５６、６１〜７２、および１３２のいずれかに記載の核酸配列を有する。
第１の態様の第３２の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１０の実施形態の実施形態でもあるが、Ｃ型核酸分子は、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列を含み、
ＸＡは、不在またはＡのいずれかである。
第１の態様の第３３の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３２の実施形態の実施形態でもあるが、Ｃ型核酸分子は、
５’ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＡＡＧＵＣＧＧ３’（配列番号９１）、
５’ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＡＧＵＣＧＧ３’（配列番号９２）、および
５’ＧＧＵＵＡＧＧＧＣＵＨＧＡＡＧＵＣＧＧ３’（配列番号９３）を含む群から選択されるコアヌクレオチド配列を含み、好ましくは、コアヌクレオチド配列は、５’ＧＧＵＵＡＧＧＧＣＵＨＧＡＡＧＵＣＧＧ３’（配列番号９３）を含む。
第１の態様の第３４の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３２〜第３３の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖を含む。
第１の態様の第３５の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３２〜第３３の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖を含む。
第１の態様の第３６の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３５の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、ヌクレオチドの第１および第２の伸長鎖を含み、ヌクレオチドの上述の第１の伸長鎖の少なくとも１つの部分および上述の第２の伸長鎖の少なくとも１つの部分は、互いに任意選択でハイブリダイズし、ハイブリダイゼーション後に二本鎖構造が形成される。
第１の態様の第３７の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３６の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１の伸長鎖の長さおよび第２の伸長鎖の長さは、個々にかつ独立に、０〜１７ヌクレオチドであり、好ましくは、４〜１０ヌクレオチドであり、より好ましくは、４〜６ヌクレオチドである。
第１の態様の第３８の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３６〜第３７の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、二本鎖構造は、４〜１０個の塩基対、好ましくは、４〜６個の塩基対、より好ましくは、５個の塩基対を含む。
第１の態様の第３９の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３８の実施形態の実施形態でもあるが、二本鎖構造は、４〜１０個の連続した塩基対、好ましくは、４〜６個の連続した塩基対、より好ましくは、５個の連続した塩基対を含む。
第１の態様の第４０の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＲＫＳＢＵＧＳＶＧＲ３’（配列番号１２２）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＹＣＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２３）のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第４１の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列を含み、ＸＳは、不在またはＳである。
第１の態様の第４２の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３９および第４１の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＳＳＳＳＲ３’（配列番号１３０）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＹＳＢＳＳ３’（配列番号１３１）のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＳＧＧＳＲ３’（配列番号１２６）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＹＳＣＣＳ３’（配列番号１２７）のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第４３の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３９、第４１、および第４２の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＧＣＳＧＧ３’（配列番号１２８）のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＣＫＧＣ３’（配列番号１２９）のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＧＣＣＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＣＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第４４の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＧＵＧＣＧＣＵＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡＣＧ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第４５の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第４６の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３４〜第３９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、第１のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、第２のヌクレオチド伸長鎖は、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
第１の態様の第４７の実施形態において、これはまた、第１の態様の第３２〜第４６の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、配列番号７９〜８９、９４〜１１９、および１３４〜１３６のいずれかに記載の核酸配列を有する。
第１の態様の第４８の実施形態において、これはまた、第１の態様の第１０の実施形態の実施形態でもあるが、核酸分子は、配列番号１４２〜１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する。
第１の態様の第４９の実施形態において、これはまた、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第４８の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、ＳＤＦ−１に対するアンタゴニストである。
第１の態様の第５０の実施形態において、これはまた、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第４８の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸分子は、ＳＤＦ−１受容体系のアンタゴニストであり、ＳＤＦ−１受容体系のＳＤＦ−１受容体は、好ましくは、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７から選択される受容体である。
第１の態様の第５１の実施形態において、これはまた、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第５０の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、ＳＤＦ−１は、ヒトＳＤＦ−１であり、かつ／またはＳＤＦ−１受容体系のＳＤＦ−１受容体は、ヒトＳＤＦ−１受容体である。
第１の態様の第５２の実施形態において、これはまた、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第５１の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、ＳＤＦ−１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。
第１の態様の第５３の実施形態において、これはまた、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第５２の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸は、修飾を含む。
第１の態様の第５４の実施形態において、これはまた、第１の態様の第５３の実施形態の実施形態でもあるが、修飾は、ＨＥＳ基およびＰＥＧ基を含む群から選択される。
第１の態様の第５５の実施形態において、これはまた、第１の態様の第５４の実施形態の実施形態でもあるが、修飾は、直鎖または分枝ＰＥＧからなるＰＥＧ基であり、ＰＥＧ基の分子量は、好ましくは、約２〜１８０ｋＤ、より好ましくは、約６０〜１４０ｋＤ、最も好ましくは、約４０ｋＤである。
第１の態様の第５６の実施形態において、これはまた、第１の態様の第５４の実施形態の実施形態でもあるが、修飾は、ＨＥＳ基であり、ＨＥＳ基の分子量は、好ましくは、約１０〜１３０ｋＤ、より好ましくは、約３０〜１３０ｋＤ、最も好ましくは、約１００ｋＤである。
第１の態様の第５７の実施形態において、これはまた、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第５６の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、核酸のヌクレオチドは、Ｌ−ヌクレオチドであり、好ましくは、配列番号１９、２０、２１、２２、５７、５８、９０、９１、９２、および９３のいずれかに記載の配列のヌクレオチドである。
本出願の根底にある課題は、第１の態様およびその任意の実施形態に記載の核酸と、任意選択で、少なくとも１つのさらなる構成成分とを含む医薬組成物によって、第２の態様において解決され、さらなる構成成分は、薬学的に許容できる賦形剤および薬学的に活性な作用物質を含む群から選択される。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１の態様およびその任意の実施形態に記載の核酸の使用によって、第３の態様において解決される。
第３の態様の第１の実施形態において、医薬は、前駆細胞および／もしくは幹細胞の末梢血への動員、ならびに／または好ましくは、創傷治癒；火傷；損傷を受けた器官組織および／もしくは損傷を受けた血管系によって引き起こされるもしくはそれと関連する障害を含む群から選択される疾患および／もしくは障害の治療に使用され、そのような障害は、網膜および脈絡膜の損傷、発作、心筋損傷、心筋梗塞、器官移植の後の虚血、外傷ならびに造血障害から選択され、そのような障害は、再生不良性貧血、白血病、薬剤誘発性の貧血、ならびに白血球減少症および白血球減少症における細菌感染から選択される。
第３の態様の第２の実施形態において、医薬は、がん細胞の被験者の末梢血への動員のための医薬である。
第３の態様の第３の実施形態において、これはまた、第３の態様の第２の実施形態の実施形態でもあるが、がん細胞は、白血病細胞、リンパ腫細胞、がん幹細胞、転移能を有するがん細胞、およびがん転移から選択される。
第３の態様の第４の実施形態において、これはまた、第３の態様の第２〜第３の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、医薬は、第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第２の薬学的に活性な作用物質は、がん細胞を、被験者の末梢血に動員するのに適しており、第２の薬学的に活性な作用物質は、好ましくは、がん細胞動員作用物質から選択される。
第３の態様の第５の実施形態において、これはまた、第３の態様の第２〜第４の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、医薬は、第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第３の薬学的に活性な作用物質は、末梢血において、がん細胞に損傷を与え、それを破壊し、かつ／またはそれを標識し、標識により、身体防御の活性化に至る。
第３の態様の第６の実施形態において、これはまた、第３の態様の第２〜第５の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、引き続いてまたは同時に化学療法および／または放射線療法を受けている。
第３の態様の第７の実施形態において、これはまた、第３の態様の第５〜第６の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、医薬は、がん、好ましくは、固形腫瘍および血液がん、より好ましくは、白血病、リンパ腫、および骨髄腫の治療および／または予防に使用される。
第３の態様の第８の実施形態において、医薬は、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の被験者の末梢血への動員のための医薬であり、好ましくは、Ｂ細胞および／またはＴ細胞は、メモリーＢ細胞および／またはメモリーＴ細胞である。
第３の態様の第９の実施形態において、これはまた、第３の態様の第８の実施形態の実施形態でもあるが、医薬は、第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第２の薬学的に活性な作用物質は、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはメモリーＴ細胞の被験者の末梢血への動員に使用され、第２の薬学的に活性な作用物質は、好ましくは、細胞を動員する作用物質から選択される。
第３の態様の第１０の実施形態において、これはまた、第３の態様の第８〜第９の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、医薬は、第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第３の薬学的に活性な作用物質は、末梢血において、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞に損傷を与え、それを破壊し、かつ／またはそれを標識し、標識により、身体防御の活性化に至る。
第３の態様の第１１の実施形態において、これはまた、第３の態様の第８〜第１０の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、被験者は、引き続いてまたは同時に化学療法および／または放射線療法を受けている。
第３の態様の第１２の実施形態において、これはまた、第３の態様の第８〜第１１の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、医薬は、
好ましくは、アレルギー、温式および冷式自己免疫性溶血性貧血、全身性炎症反応症候群、出血性ショック、１型糖尿病、びまん性強皮症、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫症候群、全身性エリテマトーデスおよびその徴候、関節リウマチ、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液、もしくは他の器官におけるリウマチ性疾患から選択される全身性自己免疫疾患、
好ましくは、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、グルテン不耐症、炎症性腸疾患、膵臓炎、好酸球性食道炎から選択される胃腸管の自己免疫疾患、
好ましくは、乾癬、じんましん、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、モルヘア／線状強皮症、白斑、疱疹状皮膚炎もしくはデューリング病、硬化性萎縮性苔癬から選択される皮膚の自己免疫疾患、
脈管炎、好ましくは、側頭動脈炎、血管炎、血管漏出、リウマチ性多発筋痛症、アテローム性動脈硬化症、チャーグ−ストラウス症候群、高安動脈炎、好ましくは、主に腎臓、より具体的には糸球体を冒し、かつ／もしくは主に肺も冒すグッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、ベーチェット病から好ましくは選択される血管系の自己免疫疾患、
多発性硬化症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、神経認知機能障害、スティフマン症候群、ギラン−バレー症候群、重症筋無力症、ランバート−イートン症候群から好ましくは選択される神経系の自己免疫疾患、
好ましくは、強直性脊椎炎、サルコイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、多発性軟骨炎、結合組織炎、若年性関節リウマチ、ライム病、反応性関節炎、脊椎関節症、変性関節疾患から選択される筋肉骨格の自己免疫疾患、
好ましくは、コーガン症候群、自己免疫性副腎炎、メニエール病、局所的炎症、円形脱毛症、急性炎症性疾患、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、びまん性強皮症、クレスト症候群、および／もしくはモルヘア／線状強皮症などの強皮症、自己免疫性ブドウ膜炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性肝炎、糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、特発性肺線維症、自己免疫性不妊症、免疫複合体障害、ならびに腹膜炎から選択される他の自己免疫疾患、
肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、四肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管、膵臓から選択される移植器官の移植拒絶、
ならびに／または骨髄移植の後の移植片対宿主疾患の治療ならびに／または予防に使用される。
第３の態様の第１３の実施形態において、医薬は、白血球の遊走の阻害のための医薬である。
第３の態様の第１４の実施形態において、これはまた、第３の態様の第１３の実施形態の実施形態でもあるが、医薬は、肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、四肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管、および膵臓などの移植器官の移植拒絶の予防および／または治療のための医薬である。
第３の態様の第１５の実施形態において、これはまた、第３の態様の第１３の実施形態の実施形態でもあるが、医薬は、
好ましくは、アレルギー、温式および冷式自己免疫性溶血性貧血、全身性炎症反応症候群、出血性ショック、１型糖尿病、びまん性強皮症、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫症候群、全身性エリテマトーデスおよびその徴候、関節リウマチ、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液、もしくは他の器官におけるリウマチ性疾患から選択される全身性自己免疫疾患、
好ましくは、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、グルテン不耐症、炎症性腸疾患、膵臓炎、好酸球性食道炎から選択される胃腸管の自己免疫疾患、
好ましくは、乾癬、じんましん、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、モルヘア／線状強皮症、白斑、疱疹状皮膚炎もしくはデューリング病、硬化性萎縮性苔癬から選択される皮膚の自己免疫疾患、
脈管炎、好ましくは、側頭動脈炎、血管炎、血管漏出、リウマチ性多発筋痛症、アテローム性動脈硬化症、チャーグ−ストラウス症候群、高安動脈炎、好ましくは、主に腎臓、より具体的には糸球体を冒し、かつ／もしくは主に肺も冒すグッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、ベーチェット病から好ましくは選択される血管系の自己免疫疾患、
多発性硬化症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、神経認知機能障害、スティフマン症候群、ギラン−バレー症候群、重症筋無力症、ランバート−イートン症候群から好ましくは選択される神経系の自己免疫疾患、
好ましくは、強直性脊椎炎、サルコイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、多発性軟骨炎、結合組織炎、若年性関節リウマチ、ライム病、反応性関節炎、脊椎関節症、変性関節疾患から選択される筋肉骨格の自己免疫疾患、
ならびに／または好ましくは、コーガン症候群、自己免疫性副腎炎、メニエール病、局所的炎症、円形脱毛症、急性炎症性疾患、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、びまん性強皮症、クレスト症候群、および／もしくはモルヘア／線状強皮症などの強皮症、自己免疫性ブドウ膜炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性肝炎、糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、特発性肺線維症、自己免疫性不妊症、免疫複合体障害、ならびに腹膜炎から選択される他の自己免疫疾患、
において生じるまたはそれらと関連する炎症の治療ならびに／または予防に使用される。
第３の態様の第１６の実施形態において、これはまた、第３の態様の第１３の実施形態の実施形態でもあるが、医薬は、皮膚および／または気道の粘膜のアレルギー反応、好ましくは、枯草熱、喘息、気道応答性亢進、および／または皮膚炎の治療および／または予防のための医薬である。
第３の態様の第１７の実施形態において、これはまた、第３の態様の第１６の実施形態の実施形態でもあるが、皮膚炎は、接触性皮膚炎および／またはアトピー性皮膚炎である。
本出願の根底にある課題は、第１の被験者から、前駆細胞および／または幹細胞を得るための方法によって第４の態様において解決され、その方法は、
ａ）第１の態様およびその任意の実施形態に記載の核酸を、上述の前駆細胞および／または幹細胞を上述の被験者の末梢血に動員するのに有効な量で、被験者に投与するステップと、
ｂ）その後、上述の被験者から、上述の前駆細胞および／または幹細胞を採取するステップと
を含む。
第４の態様の第１の実施形態において、前駆細胞および／または幹細胞の採取は、アフェレーシス、白血球搬出法、細胞選別、および／またはフローサイトメトリーによって行われる。
第４の態様の第２の実施形態において、これはまた、第４の態様のおよび第４の態様の第１の実施形態の実施形態でもあるが、第１の被験者または第２の被験者は、引き続いてまたは同時に化学療法および／または放射線療法を受けている。
第４の態様の第３の実施形態において、これはまた、第４の態様の第２の実施形態の実施形態でもあるが、第１の被験者または第２の被験者の化学療法および／または放射線療法の後に、第１の被験者または第２の被験者の採取された前駆細胞および／または幹細胞を、第１の被験者または第２の被験者の末梢血に投与する。
第４の態様の第４の実施形態において、これはまた、第４の態様のおよび第４の態様の第１〜第３の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、採取された前駆細胞および／または幹細胞を増殖させ、増殖させた前駆細胞および／または幹細胞は、第１の被験者または第２の被験者に投与し、好ましくは、増殖させた前駆細胞および／または幹細胞を、静脈内注射または局所注射によって投与する。
第４の態様の第５の実施形態において、これはまた、第４の態様のおよび第４の態様の第１〜第４の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、その方法は、がん、好ましくは、固形腫瘍および血液悪性腫瘍の治療に使用される。
本出願の根底にある課題は、第４の態様およびその任意の実施形態に記載の方法における使用のための、第１の態様およびその任意の実施形態に記載の核酸分子によって、第５の態様において解決される。
本出願の根底にある課題は、被験者から、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を除去するための方法によって第６の態様において解決され、その方法は、
ａ）第１の態様およびその任意の実施形態に記載の核酸を、上述の長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を上述の被験者の末梢血に動員するのに有効な量で、被験者に投与するステップと、
ｂ）その後、上述の被験者から上述の長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を採取するステップと
を含み、好ましくは、除去され、採取されたＴ細胞は、メモリーＴ細胞である。
第６の態様の第１の実施形態において、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の採取は、アフェレーシス、細胞選別、および／またはフローサイトメトリーによって、好ましくは、上述の細胞に適切な表面マーカーを用いるフローサイトメトリーによって行われる。
第４の態様の第６の実施形態において、これはまた、第４の態様のおよび第４の態様の第１〜第５の実施形態のいずれかの実施形態でもあり、これはまた、第６の態様のおよび第６の態様の第１の実施形態の実施形態でもある第６の態様の第２の実施形態でもあるが、その方法は、
好ましくは、アレルギー、温式および冷式自己免疫性溶血性貧血、全身性炎症反応症候群、出血性ショック、１型糖尿病、びまん性強皮症、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫症候群、全身性エリテマトーデスおよびその徴候、関節リウマチ、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液、もしくは他の器官におけるリウマチ性疾患から選択される全身性自己免疫疾患、
好ましくは、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、グルテン不耐症、炎症性腸疾患、膵臓炎、好酸球性食道炎から選択される胃腸管の自己免疫疾患、
好ましくは、乾癬、じんましん、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、モルヘア／線状強皮症、白斑、疱疹状皮膚炎もしくはデューリング病、硬化性萎縮性苔癬から選択される皮膚の自己免疫疾患、
脈管炎、好ましくは、側頭動脈炎、血管炎、血管漏出、リウマチ性多発筋痛症、アテローム性動脈硬化症、チャーグ−ストラウス症候群、高安動脈炎、好ましくは、主に腎臓、より具体的には糸球体を冒し、かつ／もしくは主に肺も冒すグッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、ベーチェット病から好ましくは選択される血管系の自己免疫疾患、
多発性硬化症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、神経認知機能障害、スティフマン症候群、ギラン−バレー症候群、重症筋無力症、ランバート−イートン症候群から好ましくは選択される神経系の自己免疫疾患、
好ましくは、強直性脊椎炎、サルコイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、多発性軟骨炎、結合組織炎、若年性関節リウマチ、ライム病、反応性関節炎、脊椎関節症、変性関節疾患から選択される筋肉骨格の自己免疫疾患、
好ましくは、コーガン症候群、自己免疫性副腎炎、メニエール病、局所的炎症、円形脱毛症、急性炎症性疾患、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、びまん性強皮症、クレスト症候群、および／もしくはモルヘア／線状強皮症などの強皮症、自己免疫性ブドウ膜炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性肝炎、糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、特発性肺線維症、自己免疫性不妊症、免疫複合体障害、ならびに腹膜炎から選択される他の自己免疫疾患、
肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、四肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管、膵臓から選択される移植器官の移植拒絶、
ならびに／または骨髄移植の後の移植片対宿主病
の治療ならびに／または予防において使用される。
本出願の根底にある課題は、第６の態様およびその任意の実施形態に記載の方法における使用のための、第１の態様およびその任意の実施形態に記載の核酸分子によって、第７の態様において解決される。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１の態様の第１０〜第５７の実施形態のいずれかの請求項において定義されるような核酸の使用によって、第８の態様において解決され、医薬は、腎症、好ましくは、糖尿病性腎症の治療および／または予防のための医薬である。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１の態様の第１０〜第５７の実施形態のいずれかの請求項において定義されるような核酸の使用によって、第９の態様において解決され、医薬は、高血圧症、好ましくは、肺高血圧症の治療および／または予防のための医薬である。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１の態様の第１０〜第５７の実施形態のいずれかの請求項において定義されるような核酸の使用によって、第１０の態様において解決され、医薬は、線維症、好ましくは、特発性肺線維症の治療および／または予防のための医薬である。
第１０の態様の第１の実施形態において、医薬は、創傷治癒プロセス内での線維症の治療および／または予防のための医薬である。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１０〜第５７の実施形態のいずれかの請求項において定義されるような核酸の使用によって、第１１の態様において解決され、医薬は、血管形成および／または血管新生を伴う疾患および／または障害の治療のための医薬である。
第１１の態様の第１の実施形態において、医薬は、ＶＥＧＦを阻害する作用物質を用いる併用療法に使用される。
第１１の態様の第２の実施形態において、これはまた、第１１の態様の第１の実施形態の実施形態でもあるが、医薬は、ＶＥＧＦを阻害する作用物質を用いる療法に対する応答が弱い被験者において使用される。
第１１の態様の第３の実施形態において、医薬は、ＶＥＧＦを阻害する作用物質を用いる療法に応答しない被験者において使用される。
第１１の態様の第４の実施形態において、疾患および／または障害は、脈絡膜血管新生を伴い、かつ／またはそれと関連する。
第１１の態様の第５の実施形態において、これはまた、第１１の態様のおよび第１１の態様の第１〜第４の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、疾患および／または障害は、網膜疾患、好ましくは、加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、黄斑浮腫、および網膜浮腫を含む群から選択される。
第１１の態様の第６の実施形態において、これはまた、第１１の態様のおよび第１１の態様の第１〜第３の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、疾患は、がん、好ましくは、固形腫瘍および転移を含む群から選択される。
第３の態様の第１８の実施形態において、医薬は、被験者における前駆細胞および／または幹細胞を除去する、好ましくは、末梢血において除去する治療レジメンを受けているまたは受けることとなる被験者に投与される。
第３の態様の第１９の実施形態において、これはまた、第３の態様のおよび第３の態様の第１８の実施形態の実施形態でもあるが、医薬は、化学療法および／または放射線療法を受けているまたは受けることとなる被験者に投与される。
第３の態様の第２０の実施形態において、医薬は、被験者における免疫系の回復または改善のための医薬である。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体の間のシグナル伝達を阻害する分子によって、第１２の態様において解決され、医薬は、腎症、好ましくは、糖尿病性腎症の治療および／または予防のための医薬である。
第１２の態様の第１の実施形態において、分子は、ＳＤＦ−１結合分子またはＳＤＦ−１受容体結合分子であり、アプタマーおよびスピーゲルマー、抗体、ならびに小分子のような標的結合核酸を含む。
第１２の態様の第２の実施形態において、これはまた、第１２の態様のおよび第１２の態様の第１の実施形態の実施形態でもあるが、分子は、第１の態様の第１０〜第５７の実施形態において定義されるような核酸分子である。
第１２の態様の第３の実施形態において、分子は、ＳＤＦ−１またはＳＤＦ−１受容体の発現を阻害する分子であり、ｓｉＲＮＡ分子、リボザイム、アンチセンス分子、および転写因子の阻害剤を含む。
本出願の根底にある課題は、白血球の遊走を阻害するための方法における使用のための、第１の態様の第５〜第５７の実施形態のいずれかに記載の核酸分子によって、第１３の態様において解決される。
本出願の根底にある課題は、骨髄由来幹細胞の動員における使用のため、または医薬、好ましくは、骨髄由来幹細胞の動員のための医薬の製造における使用のための、血液脳関門を通過しないＳＤＦ−１結合分子によって、第１４の態様において解決される。
第１４の態様の第１の実施形態において、医薬は、中枢神経系の傷害の改善、および／または発作、好ましくは、虚血発作の後の組織修復の促進に使用される。
第１４の態様の第２の実施形態において、これはまた、第１４の態様の第１の実施形態の実施形態でもあるが、ＳＤＦ−１結合分子は、アプタマー、スピーゲルマー、抗体、および小分子を含む群から選択される標的結合核酸を含む。
第１４の態様の第３の実施形態において、これはまた、第１４の態様のおよび第１４の態様の第１〜第２の実施形態のいずれかの実施形態でもあるが、分子は、第１の態様の第９〜第５７の実施形態のいずれかにおいて定義されるような核酸分子である。
本出願の根底にある課題は、先の請求項のいずれかにおいて定義されるような疾患の治療における使用のための、第１の態様のおよび第１の態様の第１〜第５７の実施形態のいずれかに記載の核酸分子によって、第１５の態様において解決される。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１の態様の第１０〜第５７の実施形態において定義されるような核酸の使用によって、第１６の態様において解決され、医薬は、ＷＨＩＭ症候群の治療および／または予防のための医薬である。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１の態様の第１０〜第５７の実施形態において定義されるような核酸の使用によって、第１７の態様において解決され、医薬は、がんの成長および転移ならびに新生物の成長の治療および／または予防のための医薬である。
本出願の根底にある課題は、医薬の製造のための、第１の態様の第１０〜第５７の実施形態において定義されるような核酸の使用によって、第１８の態様において解決され、医薬は、化学療法、好ましくは、がんの治療のために施される化学療法前に被験者に投与される。
いかなる理論によっても拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、本発明による核酸分子が、そのＳＤＦ−１受容体へのＳＤＦ−１の結合を阻害し、したがって、細胞の移動、好ましくは、末梢血から１つの組織またはそれ以上の組織へのおよび組織から末梢血への細胞の移動に、直接的または間接的に影響を及ぼすということを仮定する。
しかしながら、いかなる理論によっても拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、ＳＤＦ−１受容体へのＳＤＦ−１の結合を阻害する、本発明による核酸分子により、ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体の間の相互作用を阻害することによって、好ましくは、組織から末梢血への動員によって、前駆細胞、幹細胞、がん細胞、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の移動に至るということをさらに仮定する。
さらに、なお、いかなる理論によっても拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、そのＳＤＦ−１受容体へのＳＤＦ−１の結合を阻害する、本発明による核酸分子が、好ましくは、皮膚または粘膜のような組織において、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好酸球、好中球、好塩基球、ならびに／または樹状細胞および肥満細胞などの白血球の遊走を回避し、好ましくは、皮膚および粘膜の自己免疫疾患およびアレルギー反応を弱めるのを助けるということを仮定する。
さらに、なお、いかなる理論によっても拘束されることを望むものではないが、発明者らは、本発明による核酸分子のようなＳＤＦ−１阻害剤の使用が、腎症、好ましくは、糖尿病性腎症、高血圧症、好ましくは、肺高血圧症、線維症、好ましくは、肺線維症治療においてならびに血管新生、好ましくは、脈絡膜血管新生を伴う疾患および／または障害の治療において使用することができるということを実証することができた。
好ましい実施形態においてその全体がヒトＳＤＦ−１への結合に不可欠である配列モチーフ（「Ａ型」）を示す、ヒトＳＤＦ−１に結合する関連ＲＮＡリガンドの配列比較を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９２−Ａ１０−００１（配列モチーフ「Ａ型」のヒトＳＤＦ−１に結合するＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９２−Ａ１０−００１（配列モチーフ「Ａ型」のヒトＳＤＦ−１に結合するＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 好ましい実施形態においてその全体がヒトＳＤＦ−１への結合に不可欠である配列モチーフ（「Ｂ型」）を示す、ヒトＳＤＦ−１に結合する関連ＲＮＡリガンドの配列比較を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｇ２−００１（配列モチーフ「Ｂ型」のヒトＳＤＦ−１に結合するＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｇ２−００１（配列モチーフ「Ｂ型」のヒトＳＤＦ−１に結合するＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 好ましい実施形態においてその全体がヒトＳＤＦ−１への結合に不可欠である配列モチーフ（「Ｃ型」）を示す、ヒトＳＤＦ−１に結合する関連ＲＮＡリガンドの配列比較を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９０−Ａ３−００１（配列モチーフ「Ｃ型」のヒトＳＤＦ−１に結合するＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９０−Ｄ５−００１（配列モチーフ「Ｃ型」のヒトＳＤＦ−１に結合するＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９０−Ｄ５−００１（配列モチーフ「Ｃ型」のヒトＳＤＦ−１に結合するＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 ＲＮＡリガンド１９７−Ｂ２（配列モチーフ「Ｃ型」のヒトＳＤＦ−１ ＲＮＡリガンド）の誘導体を示す図である。 ヒトＳＤＦ−１に結合するさらなるＲＮＡリガンドを示す図である。 種々の濃度のヒトＳＤＦ−１へのジャーカットヒトＴ細胞性白血病細胞の３時間の移動後にヒトＳＤＦ−１に対する用量反応曲線が得られた、ジャーカットヒトＴ細胞性白血病細胞のヒトＳＤＦ−１誘発走化性を、ヒトＳＤＦ−１の濃度に対する蛍光シグナルとして表すグラフである。 ヒトＳＤＦ−１結合アプタマー１９２−Ａ１０−００１のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１への３７℃での結合分析の結果を、ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度に対するアプタマーの結合として表すグラフである。 走化性アッセイにおけるヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１の有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１と３７℃でプレインキュベートしたヒト０．３ｎＭ ＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１の濃度に対する対照からの百分率として表される。 ヒトＳＤＦ−１結合アプタマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ｆ１０−００１、１９２−Ｃ９−００１、１９２−Ｅ１０−００１、１９２−Ｃ１０−００１、１９２−Ｄ１１−００１、１９２−Ｇ１１−００１、１９２−Ｈ１１−００１、１９２−Ｄ１０−００１、１９２−Ｅ９−００１および１９２−Ｈ９−００１のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１への３７℃での競合結合分析の結果を、１ｎＭおよび５ｎＭ非標識アプタマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ｆ１０−００１、１９２−Ｃ９−００１、１９２−Ｅ１０−００１、１９２−Ｃ１０−００１、１９２−Ｄ１１−００１、１９２−Ｇ１１−００１、１９２−Ｈ１１−００１、１９２−Ｄ１０−００１、１９２−Ｅ９−００１および１９２−Ｈ９−００１での標識アプタマー１９２−Ａ０１０−００１（非標識アプタマーによって置換される基準として使用した）の結合として示すグラフである。 ヒトＳＤＦ−１結合アプタマー１９２−Ａ１０−００８のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１への３７℃での結合分析の結果を、ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度に対するアプタマーの結合として示すグラフである。 アミンカップリング手順によってＰｉｏｎｅｅｒＦ１センサーチップ上に固定したヒトＳＤＦ−１に結合したヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００８のＫＤ値を、経時的な応答（ＲＵ）として示すＢｉａｃｏｒｅ２０００センサーグラムであり、加えてスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００８および１９２−Ａ１０−００１のオンオフ速度およびＫＤ値を列挙する。 走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００８の有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００８と３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００８の濃度に対する対照からの百分率として表される。 アミンカップリング手順によってＰｉｏｎｅｅｒＦ１センサーチップ上に固定したヒトＳＤＦ−１に結合したスピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１のＫＤ値を、経時的な応答（ＲＵ）として示すＢｉａｃｏｒｅ２０００センサーグラムであり、加えてスピーゲルマー１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｃ２−００１のオンオフ速度およびＫＤ値を列挙する。 ヒト抗ＳＤＦ−１アプタマー１９３−Ｇ２−０１２のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１への３７℃での結合分析の結果を、ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度に対するアプタマーの結合として示すグラフである。 ヒトＳＤＦ−１結合アプタマー１９０−Ａ３−００１、１９０−Ａ３−００３、１９０−Ａ３−００４、１９０−Ａ３−００７、１９１−Ｄ５−００１、１９１−Ｄ５−００２、１９１−Ｄ５−００３、１９１−Ｄ５−００４、１９１−Ｄ５−００５、１９１−Ｄ５−００６および１９１−Ｄ５−００７のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１への３７℃での競合結合分析の結果を、５００ｎＭ、５０ｎＭおよび１０ｎＭ非標識アプタマー１９０−Ａ３−００１、１９０−Ａ３−００３、１９０−Ａ３−００４、１９０−Ａ３−００７、１９１−Ｄ５−００１、１９１−Ｄ５−００２、１９１−Ｄ５−００３、１９１−Ｄ５−００４、１９１−Ｄ５−００５、１９１−Ｄ５−００６および１９１−Ｄ５−００７での標識アプタマー１９０−Ａ３−００１または１９１−Ｄ５−００１（非標識アプタマーによって置換される基準として使用した）の結合として示すグラフである。 ヒトＳＤＦ−１結合アプタマー１９０−Ａ３−００４および１９１−Ｄ５−００７のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１への３７℃での結合分析の結果を、ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度に対するアプタマーの結合として示すグラフである。 アミンカップリング手順によってＰｉｏｎｅｅｒＦ１センサーチップ上に固定したヒトＳＤＦ−１に結合したスピーゲルマー１９１−Ｄ５−００７のＫＤ値を、経時的な応答（ＲＵ）として示すＢｉａｃｏｒｅ２０００センサーグラムであり、加えてスピーゲルマー１９１−Ｄ５−００１、１９１−Ｄ５−００７、１９０−Ａ３−００３および１９７−Ｂ２のオンオフ速度およびＫＤ値を列挙する。 走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９０−Ａ３−００４の有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９０−Ａ３−００４と３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９０−Ａ３−００４の濃度に対する対照からの百分率として表される。 走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、１９７−Ｂ２−００６−５’−ＰＥＧ、１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ａ１０−００８−５’−ＰＥＧの有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、１９７−Ｂ２−００６−５’−ＰＥＧ、１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ａ１０−００８−５’−ＰＥＧと３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、１９７−Ｂ２−００６−５’−ＰＥＧ、１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ａ１０−００８−５’−ＰＥＧの濃度に対する対照からの百分率として表される。 走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９７−Ｂ２−００６−５’ＰＥＧおよび１９７−Ｂ２−００６−３１ｂ−５’−ＰＥＧの有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９７−Ｂ２−００６−５’ＰＥＧおよび１９７−Ｂ２−００６−３１ｂ−５’−ＰＥＧと３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９７−Ｂ２−００６−５’ＰＥＧおよび１９７−Ｂ２−００６−３１ｂ−５’−ＰＥＧの濃度に対する対照からの百分率として表される。 アミンカップリング手順によってＰｉｏｎｅｅｒＦ１センサーチップ上に固定したヒトＳＤＦ−１に結合したスピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、１９１−Ａ１０−００８−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ａ１０−００１−５’−ＰＥＧのＫＤ値を、経時的な応答（ＲＵ）として示すＢｉａｃｏｒｅ２０００センサーグラムである。 アミンカップリング手順によってＰｉｏｎｅｅｒＦ１センサーチップ上に固定したヒトＳＤＦ−１に結合したスピーゲルマー１９７−Ｂ２−００６−５’ＰＥＧ、１９７−Ｂ２−００６−３１ｂ−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧのＫＤ値を、経時的な応答（ＲＵ）として示すＢｉａｃｏｒｅ２０００センサーグラムである。 走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ａ１０−００１−５’−ＨＥＳ１３０および１９２−Ａ１０−００１−５’−ＨＥＳ１００の有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ａ１０−００１−５’−ＨＥＳ１３０および１９２−Ａ１０−００１−５’−ＨＥＳ１００と３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ａ１０−００１−５’−ＨＥＳ１３０および１９２−Ａ１０−００１−５’−ＨＥＳ１００の濃度に対する対照からの百分率として表される。 走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ａ１０−００１−５’−ＰＥＧ３０および１９２−Ａ１０−００１−５’−ＰＥＧ４０の有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ａ１０−００１−５’−ＰＥＧ３０および１９２−Ａ１０−００１−５’−ＰＥＧ４０と３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１、１９２−Ａ１０−００１−５’−ＰＥＧ３０および１９２−Ａ１０−００１−５’−ＰＥＧ４０の濃度に対する対照からの百分率として表される。 走化性アッセイにおける対照スピーゲルマーの非有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量の対照スピーゲルマーと３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトまたはマウスＳＤＦ−１に向かって移動でき、対照スピーゲルマーの濃度に対する対照からの百分率として表される。 種々のＳＤＦ−１濃度へのジャーカットヒトＴ細胞性白血病細胞の３時間の移動後にＳＤＦ−１に対する用量反応曲線が得られた、ジャーカットヒトＴ細胞性白血病細胞のマウスＳＤＦ−１誘発走化性を蛍光シグナルとして表すグラフである。 走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１および１９１−Ｄ５−００７−５’ＰＥＧの有効性を示すグラフであり、細胞は種々の量のスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１および１９１−Ｄ５−００７−５’ＰＥＧと３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭマウスＳＤＦ−１に向かって移動でき、スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１および１９１−Ｄ５−００７−５’ＰＥＧの濃度に対する対照からの百分率として表される。 種々の量のスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１と３７℃でプレインキュベートしたヒト［１２５Ｊ］−ＳＤＦ−１αを使用するＣＸＣＲ４受容体結合アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１の有効性を示すグラフであり、特異的に結合した［１２５Ｊ］−ＳＤＦ−１αがスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１の濃度に対してプロットされた。 １ｎＭヒトＳＤＦ−１αでのＣＸＣＲ４発現細胞のＭＡＰキナーゼ刺激の、ヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１による阻害を示す図である。 大動脈リング出芽アッセイにおけるヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧによる、およびＰＥＧ化対照スピーゲルマーによるＳＤＦ−１誘発出芽の阻害を示す図であり、ラット大動脈由来のリングは、コラーゲンマトリックス中に包埋され、スピーゲルマーを含んでまたは含まずにＳＤＦ−１と６日間インキュベートされた（ａ：対照、ｂ：１０ｎＭ ＳＤＦ−１、ｃ：１０ｎＭ ＳＤＦ−１＋１μＭ ヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、ｄ：１０ｎＭ ＳＤＦ−１＋１μＭ ＰＥＧ化対照スピーゲルマー）。 大動脈リング出芽アッセイにおけるヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧによる、およびＰＥＧ化対照スピーゲルマーによるＳＤＦ−１誘発出芽の阻害を示すグラフであり、出芽指数は、１条件あたりリング５個の平均＋／−ＳＤとして示される（＊：ＳＤＦ−１についての値は対照と有意に異なる（マン−ホイットニー検定；ｐ＝０．００９）、＊＊：ＳＤＦ−１＋ヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧについての値はＳＤＦ−１からの値と有意に異なる（マン−ホイットニー検定；ｐ＝０．０２８）。 動物の処置および実施例１０による幹細胞遊離データを作成するために適用する方法の略図である。 ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０、ＮＯＸ−Ａ１２−ＮＯ３０、ｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（対照スピーゲルマー）、ＡＭＤ３１００、Ｇ−ＣＳＦ（ニューポジェン）またはビヒクル（５％グルコース）の静脈内注射の１から４８時間後に遊離された血漿１マイクロリットルあたりのＣＤ１１７＋、Ｌｙ−６ Ａ／Ｅ＋細胞（造血幹細胞／造血前駆細胞）の絶対数を示すグラフであり、平均値および標準偏差を示す。 説明に示すとおりのＮＯＸ−Ａ１２誘導体およびＡＭＤ３１００の注射の６時間後、またはＧ−ＣＳＦ（ニューポジェン）およびビヒクルの注射４８時間後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血液１μＬあたりのコロニー形成単位を示すグラフであり、マウス５匹（各３回反復）の平均値および標準偏差を示す。 マウスでのレーザー誘発脈絡膜血管新生研究の結果を示すグラフであり、ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０で処置した眼における血管新生面積を、同じ動物のビヒクルで処置した眼（リンゲル液）における面積との直接比較において低下させた（左図）、レーザー傷害後のＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０およびビヒクルで処置したマウスの眼における個々の病変の平均血管新生面積は右図に示される。 健康なマウスならびに一側性腎摘出を受けたおよび受けていない糖尿病マウスのビヒクル、ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０、ｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（対照スピーゲルマー）での反復処置の結果を示すグラフであり、ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は糸球体硬化スコアを改善する。 ＶＥＧＦの硝子体投与による誘発および様々な濃度のＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０、ビヒクルまたはケナコルト徐放剤での動物の処置後の、網膜血管漏出についての動物モデルの結果を示すグラフであり、このモデルにおいて網膜血管の透過性は、ＶＥＧＦの硝子体注射の４８時間後の蛍光測光法によって測定された。 糖尿病性網膜症またはＡＭＤにおいて観察される、網膜の低酸素誘発血管新生の模倣のためのモデルである酸素誘発性網膜症のマウスモデルにおける個々のマウスの網膜症スコア（ビヒクル処置眼［ｘ軸］対スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０処置眼［ｙ軸］）を示すグラフである。 糖尿病性網膜症およびＡＭＤにおいて観察される、網膜の低酸素誘発血管新生の模倣のためのモデルである酸素誘発性網膜症のマウスモデルにおいて測定された、個々に測定された網膜症のパラメーターおよび網膜症スコアのスピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０処置およびビヒクル処置の眼の間についての統計的差異に対するｐ値を示す表であり、ｐ−値はウィルコクソン符号順位検定を用いて測定される。 ＳＤＦ−１に対する結合核酸ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０を１３．４ｍｇ（オリゴ部分に関して算出）静脈内に投与した後の白血球数を示すグラフであり、一定であると予測されたことからビヒクル（５％グルコース）投与後は１時点でだけ記録したが、ＮＯＸ−Ａ１２＿ＪＥ４０は可逆的にかなりの量の白血球を動員する。 同種間造血幹細胞移植（略記ＨＳＣＴ）の適応および１９９０〜２０００年での欧州における患者数（Ｇｒａｔｗｏｈｌ，Ｂａｌｄｏｍｅｒｏら、２００２）の概略を示す表である。 自家造血幹細胞移植（略記ＨＳＣＴ）の適応および１９９０〜２０００年での欧州における患者数（Ｇｒａｔｗｏｈｌ，Ｂａｌｄｏｍｅｒｏら、２００２）の概略を示す表である。
本発明による核酸分子または組成物、好ましくは、本発明による核酸分子を含む医薬組成物を使用することによって治療または予防することができる様々な疾患、状態、および障害に関して、そのような疾患、状態、および障害は、本明細書において記載されるものであり、特に、本出願の導入部において記載され、説明されるものを含むことが認められなければならない。その限りにおいて、それぞれの節は、上述の疾患、状態、および障害の予防および治療のための核酸分子の適合性を教示する本開示の不可欠な部分をそれぞれ形成する。
ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０などのＳＤＦ−１に結合する核酸分子の静脈内投与の後に、細胞は、血液に移入し、ＳＤＦ−１に結合する核酸ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０の効果は、血球計数器を使用して全血球計算を実行した後に見られた（実施例１０を参照されたい）。造血幹細胞／造血前駆細胞は、動員された白血球細胞の内の小さな画分に相当したのみであったが、血液に放出された他の細胞型がみられた。これらの中には、単球および好中球顆粒細胞ならびに組織幹細胞／前駆細胞、間葉幹細胞、長命血漿Ｂ細胞があるが、これらの細胞に限定されない。
これらの結果に基づいて、発明者らは、本発明によるＳＤＦ−１に結合する核酸分子による、ＳＤＦ−１受容体へのＳＤＦ−１のシグナル伝達の阻害が、細胞の移動に影響すると結論づけた。好ましくは、細胞は、ＳＤＦ−１受容体を発現する。
したがって、本明細書において好ましくは使用される移動という用語は、ある組織から他の組織の中への、組織から末梢血への、および／または末梢血から組織の中への移動および／または動きを指す。細胞の移動は、実施例５において示されるようなＴＡＸアッセイにおいて（インビトロにおける移動）ならびに／または実施例１０において示されるような血球計数器およびＦＡＣＳ分析を使用して（インビボにおける実験）試験することができる。さらに、組織の免疫組織化学的検査を行うことができ、移動した細胞は、細胞特異的な表面マーカーに向けられる抗体によって検出される。本明細書において使用されるように、ＳＤＦ−１受容体という用語は、複数形または単数で使用されるかどうかには関係なく、ＳＤＦ−１が結合するあらゆる受容体を指す。現在、好ましいＳＤＦ−１結合受容体である２つの受容体、ＣＸＣＲ４（Ｇｏｄｅｓｓａｒｔ ２００５）およびＣＸＣＲ７（Ｂｕｒｎｓ、Ｓｕｍｍｅｒｓら ２００６）が知られている。
血球発生。血球の発生および成熟は、複雑なプロセスである。成熟血球は、前駆細胞とも呼ばれる造血前駆細胞および骨髄を含む特異的な造血組織中に存在する幹細胞に由来する。これらの環境内で、造血細胞は、増殖し、血行路に入る前に分化する。ケモカイン受容体ＣＸＣＲ４およびその天然のリガンドであるＳＤＦ−１は、このプロセスにおいて重要であるように思われる（ＭａｅｋａｗａおよびＩｓｈｉｉ ２０００；Ｎａｇａｓａｗａ ２０００）。これは、ＣＸＣＲ４またはＳＤＦ−１のノックアウトマウスが造血性の欠損を示すという報告によって実証された（Ｍａ、Ｊｏｎｅｓら １９９８；Ｔａｃｈｉｂａｎａ、Ｈｉｒｏｔａら １９９８；Ｚｏｕ、Ｋｏｔｔｍａｎｎら １９９８）。ＣＤ３４＋前駆細胞が、ＣＸＣＲ４を発現し、化学誘引および生着のために、骨髄間質細胞によって生産されるＳＤＦ−１を必要とし、（Ｐｅｌｅｄ、Ｐｅｔｉｔら １９９９）、インビトロにおいて、ＳＤＦ−１は、ＣＤ３４＋細胞（Ａｉｕｔｉ、Ｗｅｂｂら １９９７；Ｖｉａｒｄｏｔ、Ｋｒｏｎｅｎｗｅｔｔら １９９８）および前駆細胞／幹細胞（Ｊｏ、Ｒａｆｉｉら ２０００）の両方に走化性であることもまた知られている。ＳＤＦ−１はまた、いくつかの他の、よりコミット（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ）した前駆体ならびにＴリンパ球および単球（Ｂｌｅｕｌ、Ｆｕｈｌｂｒｉｇｇｅら １９９６）、プロＢリンパ球およびプレＢリンパ球（Ｆｅｄｙｋ、Ｒｙｙａｎら １９９９）、ならびに巨核球（Ｒｉｖｉｅｒｅ、Ｓｕｂｒａら １９９９；Ａｂｉ−Ｙｏｕｎｅｓ、Ｓａｕｔｙら ２０００；Ｈｏｄｏｈａｒａ、Ｆｕｊｉｉら ２０００；Ｍａｊｋａ、Ｊａｎｏｗｓｋａ−Ｗｉｅｃｚｏｒｅｋら ２０００；Ｇｅａｒ、Ｓｕｔｔｉｔａｎａｍｏｎｇｋｏｌら ２００１）を含む成熟血球に対する、ＣＸＣＲ４受容体を介してシグナル伝達する重要な化学誘引物質である。様々な細胞型と、ＳＤＦ−１およびＳＤＦ−１受容体の関与とのこの関係により、様々な細胞型は、本発明による核酸分子によって実際に処理される可能性がある。
したがって、要約すると、ＳＤＦ−１は、ＳＤＦ−１受容体を有する細胞（細胞が幹細胞すなわちＣＤ３４＋である細胞および／または特定の刺激に応じて特定の型のコロニーを形成する前駆細胞であるかどうかにかかわらず、好ましくはＣＸＣＲ４受容体を有する細胞。ＣＤ３４＋またはＣＤ３４−であることができ、いくらか分化した細胞であってもよい。）の位置調節および分化をコントロールすることができるように思われる。
最近では、自己由来幹細胞および同種移植幹細胞の移植に使用された末梢血前駆細胞のプール中に動員されたＣＤ３４＋細胞の数にかなりの注目が集まった。ＣＤ３４＋集団は、化学療法の後の回復時間の改善を主に担うと考えられる成分ならびに長期的な生着および造血の回復を最も担う細胞である（Ｃｒｏｏｐ、Ｃｏｏｐｅｒら ２０００）。ＣＤ３４＋細胞が再生着する（ｒｅ−ｅｎｇｒａｆｔ）機序は、ＣＸＣＲ４発現細胞上でのＳＤＦ−１の走化性効果によるものである可能性がある（Ｐｏｎｏｍａｒｙｏｖ、Ｐｅｌｅｄら ２０００；Ｖｏｅｒｍａｎｓ、Ｋｏｏｉら ２００１）。最近になって、成人造血幹細胞は、マウスにおいて、損傷を受けた心臓組織を回復させることができることが示された（Ｊａｃｋｓｏｎ、Ｍａｊｋａら ２００１；Ｋｏｃｈｅｒ、Ｓｃｈｕｓｔｅｒら ２００１）。
好ましくは本明細書において使用されるように、前駆細胞という用語は、分化した造血細胞または骨髄細胞をある刺激に応じて形成することができる細胞を指す。前駆細胞の存在は、例えば、ＣＦＵ−ＧＭ（コロニー形成単位 顆粒細胞−マクロファージを意味する）；ＣＦＵ−ＧＥＭＭ（コロニー形成単位、多分化能を意味する）；ＢＦＵ−Ｅ（バースト形成単位、赤血球）；ＨＰＰ−ＣＦＣ（高増殖可能コロニー形成細胞を意味する）；または知られているプロトコールを使用して、培養において得ることができる、他の型の分化したコロニーを含む、様々な型のコロニー形成単位を形成するための、サンプルにおける細胞の能力によって評価することができる。
好ましくは本明細書において使用されるように、幹細胞は、前駆細胞のそれほど分化していない形態である。典型的に、そのような細胞は、ＣＤ３４について陽性であることが多い。しかしながら、いくつかの幹細胞は、このマーカーを含有しない。ＣＤ３４＋細胞は蛍光活性化細胞分類（略称ＦＡＣＳ）を使用して、アッセイすることができる。したがって、それらの存在はこの技術を使用して、サンプルにおいて評価することができる。
一般的に、ＣＤ３４＋細胞は、血液中に低レベルで存在するだけであるが、骨髄中に多数、存在する。内皮細胞および肥満細胞などの他の型の細胞もまた、このマーカーを見せる可能性があるが、ＣＤ３４は、幹細胞の存在の指標と考えられる。
いかなる理論によっても拘束されることを望むものではないが、発明者らは、幹細胞および／または前駆細胞に加えて、がん細胞、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞が、ＳＤＦ−１およびそのＳＤＦ−１受容体の間のシグナル伝達について、本発明による核酸の阻害効果によって影響されることを見出した。Ｂ細胞およびＴ細胞は、好ましくは、メモリーＢ細胞およびメモリーＴ細胞である。ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体の間のシグナル伝達の阻害は、末梢血への動員を含む移動に至る。
幹細胞、前駆細胞、がん細胞、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の動員は、好ましくは、造血組織において起こり、造血組織は、骨髄組織およびリンパ組織からなる群から選択される。骨髄組織は、骨髄中に位置する。リンパ組織は、消化管および気道の粘膜、リンパ節、脾臓、ならびに／または胸腺中に位置する。
好ましくは本明細書において使用されるように、がん細胞は、新生細胞であり、好ましくは、白血病細胞、骨髄腫細胞、リンパ腫細胞、がん幹細胞、転移能を有するがん細胞、およびがん転移から選択される。新生細胞は、典型的に、クローン性の証拠である共通の遺伝的または後成的異常を持つ。いくつかの型の新生物、例えばリンパ腫および白血病については、クローン性の実証は、新生物形成として細胞の増殖を定義するのに必要である（十分でないが）と現在、考えられている。
高分化Ｂ細胞（形質細胞）による活性抗体生産を伴う鋭敏な免疫応答の後に、大多数のこれらの細胞は、疾患の回復および／または外来抗原（例えばウイルスタンパク質）の排除と共に死ぬ。しかしながら、Ｔ細胞の助けを借りて形質芽細胞に変わる可能性がある少数のメモリーＢ細胞がある。これらの形質芽細胞は、それらが、長命「記憶」形質細胞として何年間も生存するニッチへ、走化性の刺激に応じて移動するための能力を有する。これらのニッチは、骨髄中および末梢中、例えば炎症組織中のものとすることができる。これらの長命形質細胞は、感染またはワクチン接種の後に何年もの間、維持されることが多い防御抗体血漿力価の維持を最も担う（Ｔａｒｌｉｎｔｏｎら、２００８）。
前駆細胞および／または幹細胞の動員は、好ましくは、造血組織から生じ、造血組織は、骨髄組織およびリンパ組織の群から選択される。骨髄組織は、骨髄中に位置する。リンパ組織は、消化管および気道の粘膜、リンパ節、脾臓、胸腺、ならびに炎症組織におけるリンパ濾胞中に位置する。好ましくは、先に開示されるような細胞の動員は、末梢血への、先に開示されるような細胞の移動を含む。
先に示されるように、ＳＤＦ−１は、（とりわけ、例えば肥満細胞表面上のＦｃ−イプシロン受容体に結合することを通してのＩｇＥシグナル伝達によって、ヒスタミンが成熟肥満細胞から放出される場合（Ｇｏｄｏｔ、Ａｒｏｃｋら ２００７）に）成熟肥満細胞および前駆型肥満細胞上で走化性作用物質として作用することが分かった。枯草熱および喘息、皮膚炎、とりわけ接触性皮膚炎およびアトピー性皮膚炎などの、皮膚および気道の粘膜のアレルギー反応のような疾患は、冒された組織における白血球の遊走および蓄積を伴うことが多い。ＳＤＦ−１の発現はまた、脊椎関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、および変性関節疾患（変形性関節症）のような関節炎によって冒された被験者からの滑膜の生検材料においておよびＲＴ−ＰＣＲによっても観察された。そのため、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸によるＳＤＦ−１に対する干渉は、関節炎に罹っている患者に陽性の効果を有する可能性がある。
これらの手段によってならびにＳＤＦ−１およびＳＤＦ−１受容体について概説された関与を考慮して、ＳＤＦ−１結合ならびにＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体の間の相互作用を阻害する本発明による核酸分子は、そのような疾患を弱めることを助けることができ、本発明による核酸分子によるＳＤＦ−１の阻害は、白血球の遊走の低下および／または阻害に至り、白血球は、好ましくは、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、巨核球、好酸球、好中球、好塩基球、樹状細胞、および／または肥満細胞の群から選択される。
白血球の遊走は、組織における蓄積に至り、好ましくは、白血球の蓄積は、上述の組織の炎症に至り、組織は、皮膚および／または粘膜、好ましくは、気道の粘膜ならびに眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、皮膚、骨、および／またはリンパ系から選択されるがこれらに限定されないいくつかの器官を含む。
ＳＤＦ−１に対するアンタゴニストは、好ましくは、実施例において記載されるような細胞ベースのアッセイまたはインビボモデルにおいてＳＤＦ−１に結合し、ＳＤＦ−１の機能を阻害する分子である。
さらに、本発明は、特異的に、高い親和性でＳＤＦ−１に結合する核酸を生成することが可能であるという驚くべき発見に基づく。そのような核酸はまた、好ましくは、本明細書において、本発明による核酸分子、本発明による核酸、発明の核酸、または発明の核酸分子とも呼ばれる。
ＳＤＦ−１は、配列番号１によるアミノ酸配列を有する塩基性ペプチドである。ＳＤＦ−１の算出されたｐＩは、９．７０である。本明細書において使用されるように、ＳＤＦ−１という用語は、哺乳動物ＳＤＦ−１を含むが、これらに限定されないあらゆるＳＤＦ−１を指す。好ましくは、哺乳動物ＳＤＦ−１は、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、サル、およびヒトのＳＤＦ−１を含む群から選択される。より好ましくは、ＳＤＦ−１は、ＳＤＦ−１α（配列番号１）および／またはヒトＳＤＦ−１β（配列番号２）とも呼ばれるヒトＳＤＦ−１、最も好ましくは、ＳＤＦ−１αとも呼ばれるヒトＳＤＦ−１（配列番号１）である。
この種類の標的が、高いが非特異的なシグナル対ノイズ比を発生させるので、アプタマー、つまり、塩基性タンパク質に向けられる、標的分子に結合するＤ−核酸の生成が、一般的に非常に困難であることをＥａｔｏｎら（Ｅａｔｏｎ、Ｇｏｌｄら １９９７）が観察したように、ＳＤＦ−１に対する高親和性結合核酸を同定することができたという発見は、その限りにおいて、驚くべきことである。この高いシグナル対ノイズ比は、ＳＤＦ−１などの塩基性標的に対する核酸によって示される高い非特異的な親和性に起因する。
本明細書において記載されるような本発明による核酸の特徴は、核酸が、単独でまたは任意の組合せで使用される、本発明のあらゆる態様において実現することができる。
いかなる理論によっても拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸について観察された特異性が、いくつかの構造の特徴および特に、図１〜８および実施例１に言及される、以下においてより詳細に議論されるものとするコア配列ともその中で呼ばれるヌクレオチド配列の１つを共有することを仮定する。しかしながら、上述の図および実施例１は、必ずしも本発明による核酸のそれぞれおよびいずれかにおいて実現される必要はない、上述の構造の特徴のいくつかを組み込んでいることが理解されるべきである。
請求項および実施例１においてより詳細に概説されるように、様々なヒトＳＤＦ−１結合核酸分子は、それぞれ、上述のボックスならびにいくつかの構造の特徴および要素に基づいて分類することができる。したがって、定義された様々な分類はまた、型、より具体的にはＡ型、Ｂ型、およびＣ型とも本明細書において呼ばれる。
好ましい実施形態において、本発明による核酸は、単一核酸分子である。さらなる実施形態において、単一核酸分子は、多数の単一核酸分子として存在する。好ましくは、核酸および核酸分子という用語は、逆に指示されなければ、区別なく本明細書において使用される。
好ましくは、本発明に従う核酸分子は、好ましくは、ホスホジエステル連結または結合を通して、互いに共有結合したヌクレオチドからなることが当業者らによって認められるであろう。
本発明による核酸はまた、本明細書において開示される特定の配列に本質的に相同な核酸をも含むものとする。本質的に相同という用語は、その相同性が、少なくとも７５％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、最も好ましくは、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％を超えるようなものと理解されるものとする。
本発明による核酸中に存在する相同なヌクレオチドの実際の割合は、核酸中に存在するヌクレオチドの総数に依存するであろう。修飾パーセントは、核酸中に存在するヌクレオチドの総数に基づくものとすることができる。
相同性は、当業者に知られているように決定することができる。より具体的には、配列比較アルゴリズムは、次いで、指定されたプログラムパラメーターに基づいて、（１つまたは複数の）試験配列についての配列同一性パーセントを参照配列と比較して算出する。試験配列は、好ましくは、試験配列が、他の核酸分子に対して相同であるかどうか、またそうであれば、どの程度であるかが表されるまたは試験されることとなる配列または核酸分子であり、そのような他の核酸分子はまた、参照配列とも呼ばれる。一実施形態において、参照配列は、本明細書において記載されるような核酸分子、より好ましくは、配列番号５〜１４４のいずれかに記載の配列を有する核酸分子である。比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズムによって（Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ、１９８１）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈの相同性アライメントアルゴリズムによって（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ、１９７０）、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎの類似性検索法によって（Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ、１９８８）、これらのアルゴリズムのコンピューター化実装によって（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， ５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．， Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）、または目視検査によって行うことができる。
配列同一性パーセントを決定するのに適しているアルゴリズムの１つの例は、基本的な局所アライメント検索ツール（以後「ＢＬＡＳＴ」）において使用されるアルゴリズムであり、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら （Ａｌｔｓｃｈｕｌら １９９０およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７）を参照されたい。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（以後「ＮＣＢＩ」）を通して公的に入手可能である。ＮＣＢＩから入手可能なソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列用）およびＢＬＡＳＴＰ（アミノ酸配列用）を使用して、配列同一性を決定するのに使用されるデフォルトパラメーターは、ＭｃＧｉｎｎｉｓら（ＭｃＧｉｎｎｉｓら、２００４）において記載される。
発明の核酸または本発明による核酸という用語はまた、本明細書において開示される核酸配列またはその部分を含むそれらの核酸を、好ましくは、核酸または上述の部分がＳＤＦ−１への結合に関与する程度まで含むものとする。そのような核酸は、例えば切断によって、本明細書において開示されるものに由来してもよい。切断は、本明細書において開示されるような核酸の端末のどちらかまたは両方に関連してもよい。また、切断は、ヌクレオチドの内部の配列に関連してもよい、つまり、切断は、それぞれ、５’および３’末端ヌクレオチドの間の（１つまたは複数の）ヌクレオチドに関連してもよい。さらに、切断は、本明細書において開示される核酸の配列からのわずか１つのヌクレオチドの欠失を含むものとする。切断はまた、（１つまたは複数の）発明の核酸の１つを超える伸長鎖に関連してもよく、伸長鎖は、わずか１ヌクレオチド長とすることができる。本発明による核酸の結合は、ルーチン的な実験を使用してまたは本明細書において記載されるような、好ましくは、実施例の部において本明細書において記載されるような方法を使用するもしくは採用することによって、当業者らによって決定することができる。
本発明による核酸は、Ｄ−核酸またはＬ−核酸のいずれかであってもよい。好ましくは、発明の核酸は、Ｌ−核酸である。さらに、核酸の１つまたはいくつかの部分が、Ｄ−核酸として存在し、核酸の少なくとも１つまたはいくつかの部分を、Ｌ−核酸とすることが可能である。核酸の「部分」という用語は、わずか１つのヌクレオチドを意味するものとする。そのような核酸は、それぞれ、Ｄ−核酸およびＬ−核酸と本明細書において一般に呼ばれる。そのため、特に好ましい実施形態において、本発明による核酸は、Ｌ−ヌクレオチドからなり、少なくとも１つのＤ−ヌクレオチドを含む。そのようなＤ−ヌクレオチドは、好ましくは、核酸の他の部分との相互作用が伴う、本発明による核酸の境界を定める伸長鎖と異なる部分、好ましくは、そのそれらの部分に付着される。好ましくは、そのようなＤ−ヌクレオチドは、それぞれ、本発明による伸長鎖のおよび任意の核酸のいずれかの末端に付着される。さらなる好ましい実施形態において、そのようなＤ−ヌクレオチドは、スペーサーまたはリンカーとして作用してもよく、好ましくは、本発明による核酸にＰＥＧおよびＨＥＳなどの修飾を付着してもよい。
それらの（１つまたは複数の）核酸配列の点からそれらの全体が本明細書において記載される核酸分子のそれぞれおよびいずれかが、（１つまたは複数の）特定のヌクレオチド配列に限定されることもまた本発明の範囲内である。言いかえれば、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」は含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）またはからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）という意味で、そのような実施形態において解釈されるものとする。
本発明による核酸は、より長い核酸の部分であり、このより長い核酸は、いくつかの部分を含み、少なくとも１つのそのような部分は、本発明による核酸またはその部分であることもまた本発明の範囲内である。これらのより長い核酸の（１つまたは複数の）他の部分は、１つまたはいくつかのＤ−核酸またはＬ−核酸のいずれかとすることができる。あらゆる組合せが本発明に関して使用されてもよい。より長い核酸のこれらの他の（１つまたは複数の）部分は、結合、好ましくは、ＳＤＦ−１への結合と異なる機能を見せることができる。１つの可能な機能は、他の分子との相互作用を可能にすることであり、他のそのような分子は、好ましくは、例えば固定、架橋、検出、または増幅のためなどのように、ＳＤＦ−１と異なる。本発明のさらなる実施形態において、発明による核酸は、個々のまたは組み合わせられた部分として、いくつかの本発明の核酸を含む。本発明のいくつかの核酸を含むそのような核酸もまた、より長い核酸という用語によって包含される。
本明細書において使用されるようなＬ−核酸は、Ｌ−ヌクレオチドからなり、好ましくは、完全にＬ−ヌクレオチドからなる核酸である。
本明細書において使用されるようなＤ−核酸は、Ｄ−ヌクレオチドからなり、好ましくは、完全にＤ−ヌクレオチドからなる核酸である。
核酸および核酸分子という用語は、逆に明確に指示されなければ、区別なく本明細書において使用される。
また、逆に指示されなければ、あらゆるヌクレオチド配列は、５’→３’方向で本明細書において説明される。
発明の核酸が、Ｄ−ヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、もしくは例えばランダムな組合せである組合せを有する両方の組合せまたは少なくとも１つのＬ−ヌクレオチドおよび少なくとも１つのＤ−核酸からなる伸長鎖の境界を定める配列からなるかどうかに関係なく、核酸は、（１つまたは複数の）デオキシリボヌクレオチド、（１つまたは複数の）リボヌクレオチド、またはその組合せからなってもよい。
Ｌ−核酸として発明の核酸を設計することは、いくつかの理由で有利である。Ｌ−核酸は、自然発生核酸の鏡像異性体である。しかしながら、Ｄ−核酸は、ヌクレアーゼが広範囲に存在していることにより、水溶液、特に生体系または生体サンプル中であまり安定していない。自然発生ヌクレアーゼ、特に、動物細胞からのヌクレアーゼは、Ｌ−核酸を分解することができない。このために、Ｌ−核酸の生物学的半減期は、動物および人体を含む、そのような系において著しく増加する。Ｌ−核酸の分解性を欠如していることにより、ヌクレアーゼ分解産物は生成されず、したがって、そこから生じる副作用は観察されない。この態様は、ＳＤＦ−１の存在を伴う疾患および／または障害の療法において使用される、事実上、他のすべての化合物からＬ−核酸を区別する。ワトソンクリック型塩基対と異なる機序を通して標的分子に特異的に結合するＬ−核酸または特に、Ｌ−ヌクレオチドから部分的にもしくは完全に成り、アプタマーのそれらの部分が標的分子へのアプタマーの結合に関与するアプタマーもまたスピーゲルマーと呼ばれる。
コアヌクレオチド配列の側面に位置するヌクレオチドの第１および第２の伸長鎖は、原則として、互いにハイブリダイズすることができることは本発明の範囲内である。そのようなハイブリダイゼーション後に二本鎖構造が形成される。そのようなハイブリダイゼーションは、特にインビトロおよび／またはインビボ条件下で生じてもよいまたは生じなくてもよいことが当業者によって認められるであろう。また、そのようなハイブリダイゼーションの場合において、必ずしも、ハイブリダイゼーションが２つの伸長鎖の全長にわたって生じる必要はなく、少なくとも塩基対形成の規則に基づいて、そのようなハイブリダイゼーションおよびしたがって二本鎖構造の形成が生じてもよい。好ましくは本明細書において使用されるように、二本鎖構造は、分子の部分または２つ以上の別個の鎖によって形成される構造であり、好ましくは、ワトソンクリック型塩基対規則に従って塩基対形成している、少なくとも１つ、好ましくは、２つ以上の塩基対が存在する。フーグステン型塩基対形成などの他の塩基対形成が、そのような二本鎖構造において存在するまたはそれを形成してもよいこともまた当業者によって認められるであろう。
発明の核酸は、それらが、Ｄ−核酸、Ｌ−核酸、もしくはＤ，Ｌ−核酸として存在するかどうかまたはそれらがＤＮＡもしくはＲＮＡであるかどうかとは関係なく、一本鎖または二本鎖核酸として存在してもよいこともまた本発明の範囲内である。典型的に、発明の核酸は、一次配列により定義される二次構造を見せる一本鎖核酸であり、したがって三次構造を形成してもよい。しかしながら、発明の核酸はまた、互いに相補的または部分的に相補的である２つの鎖が互いにハイブリダイズするという意味において、二本鎖であってもよい。これは、核酸に安定性を付与し、これは、核酸がＬ形態ではなく自然発生Ｄ形態である場合に特に有利であろう。
発明の核酸は、修飾されてもよい。そのような修飾は、核酸の１つのヌクレオチドに関連してもよく、当技術分野においてよく知られている。そのような修飾の例は、とりわけ、Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎら（Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎ、Ｋｉｍら ２００３）およびＫｕｓｓｅｒ（Ｋｕｓｓｅｒ ２０００）によって記載される。そのような修飾は、核酸がそれからなる個々のヌクレオチドの２’位のＨ原子、Ｆ原子、またはＯ−ＣＨ３基、またはＮＨ２基とすることができる。また、本発明による核酸は、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオチドを含むことができる。一実施形態において、本発明による核酸は、ＬＮＡヌクレオチドからなる。
一実施形態において、本発明による核酸は、多くの部分に分かれている核酸であってもよい。本明細書において使用されるような多くの部分に分かれている核酸は、少なくとも２つの核酸鎖からなる核酸である。これらの少なくとも２つの核酸鎖は、機能単位を形成し、機能単位は、標的分子に対するリガンドとなる。少なくとも２つの核酸鎖は、２つの鎖を生成するために核酸を切断することによりまたは発明の、つまり全核酸の第１の部分に対応するある核酸および全核酸の第２の部分に対応する他の核酸を合成することにより、発明の核酸のいずれかに由来してもよい。切断および合成の両方は、多くの部分に分かれている核酸を生成するために適用されてもよく、上記に例証されるように２つを超える鎖があることが認められるべきである。言いかえれば、少なくとも２つの核酸鎖は、様々な核酸部分の間のある程度の相補性が存在してもよいが、相補的で、互いにハイブリダイズしている２つの鎖とは典型的に異なる。
最後に、本発明による核酸の完全に閉じた、つまり、環状の構造が実現されること、つまり、本発明による核酸が、好ましくは、共有結合を通して閉じており、より好ましくは、そのような共有結合は、本明細書において開示されるような核酸配列の５’端末および３’端末の間で作製されることもまた本発明の範囲内である。
本発明者ら、本発明による核酸が非常に好適なＫｄ値範囲を見せることを発見した。
結合定数を決定するのが可能なのは、いわゆるＢｉａｃｏｒｅデバイス（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）の使用による表面プラズモン共鳴測定であり、これもまた当業者に知られている。好ましくは本明細書において使用されるような親和性もまた、実施例において記載されるような「プルダウン結合アッセイ」の使用によって測定した。核酸および本発明の場合、ＳＤＦ−１である標的の間の結合の強度を表現するための適切な手段は、いわゆるＫｄ値であり、それ自体およびその決定のための方法は、当業者に知られている。
本発明による核酸は、あるＫｄ値によって特徴付けられる。好ましくは、本発明による核酸によって示されるＫｄ値は、１μＭ未満である。約１μＭのＫｄ値は、標的に対する核酸の非特異的な結合にとって特徴であることが表される。当業者らによって認められるであろうように、本発明による核酸などの化合物の群のＫｄ値は、ある範囲内にある。約１μＭの前述のＫｄは、Ｋｄ値の好ましい上限である。標的結合核酸のＫｄの好ましいより低い限界は、約１０ピコモルまたはそれ以上とすることができる。グレリンに結合する個々の核酸のＫｄ値が、好ましくは、この範囲内にあることは、本発明の範囲内にある。好ましい範囲は、この範囲内の任意の第１の数およびこの範囲内の任意の第２の数を選ぶことにより定義することができる。好ましい上の値は、２５０ｎＭおよび１００ｎＭであり、好ましい下の値は、５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、および１０ｐＭである。
本発明による核酸分子は、それらが、標的分子になお結合することができるという条件で、任意の長さを有していてもよい。本発明による核酸の好ましい長さがあることは当技術分野において認められるであろう。典型的に、長さは、１５および１２０の間のヌクレオチドである。１５および１２０の間の任意の整数が、本発明による核酸の可能な長さであることは、当業者らによって認められるであろう。本発明による核酸の長さのより好ましい範囲は、約２０〜１００ヌクレオチド、約２０〜８０ヌクレオチド、約２０〜６０ヌクレオチド、約２０〜５０ヌクレオチド、および約２０〜４０ヌクレオチドの長さである。
本明細書において開示される核酸は、好ましくは、高い分子量部分であるおよび／または好ましくは、とりわけ、動物体、好ましくは、人体における滞留時間の点から核酸の特徴を修飾することを可能にする部分を含むことは、本発明の範囲内にある。そのような修飾の特に好ましい実施形態は、本発明による核酸のＰＥＧ化およびＨＥＳ化である。本明細書において使用されるように、ＰＥＧはポリ（エチレングリコール）、ＨＥＳはヒドロキシエチルデンプンを意味する。好ましくは本明細書において使用されるようなＰＥＧ化は、本発明による核酸の修飾であり、そのような修飾は、本発明による核酸に付着されたＰＥＧ基からなる。好ましくは本明細書において使用されるようなＨＥＳ化は、本発明による核酸の修飾であり、そのような修飾は、本発明による核酸に付着されたＨＥＳ基からなる。これらの修飾およびそのような修飾を使用して核酸を修飾するためのプロセスは、欧州特許出願ＥＰ１３０６３８２において記載され、この開示は、その全体が参照によってここに組み込まれる。
好ましくは、高分子量部分からなるまたはそれを含む修飾の分子量は、特に、ＰＥＧがそのような高分子量部分である場合において、約２，０００〜２００，０００Ｄａ、好ましくは、４０，０００〜１２０，０００Ｄａであり、特に、ＨＥＳがそのような高い分子量部分である場合において、好ましくは、約３，０００〜１８０，０００Ｄａ、より好ましくは、６０，０００〜１４０，０００Ｄａである。ＨＥＳ修飾のプロセスは、例えば、ドイツ特許出願ＤＥ１２００４００６２４９．８において記載され、この開示は、その全体が参照によってここに組み込まれる。
ＰＥＧおよびＨＥＳのどちらも、特許出願ＷＯ２００５０７４９９３およびＰＣＴ／ＥＰ０２／１１９５０においてさらに記載されるように、線状または分枝形態として使用されてもよいことは本発明の範囲内にある。そのような修飾は、原則として、その任意の位置で、本発明の核酸分子に対して成すことができる。好ましくは、そのような修飾は、核酸分子の５’末端ヌクレオチド、３’末端ヌクレオチド、ならびに／または５’ヌクレオチドおよび３’ヌクレオチドの間の任意のヌクレオチドに対して成される。
修飾ならびに好ましくは、ＰＥＧおよび／またはＨＥＳ基は、本発明の核酸分子に、直接的にまたはリンカーを通して付着することができる。本発明による核酸分子が、１つまたは複数の修飾、好ましくは、１つまたは複数のＰＥＧおよび／またはＨＥＳ基を含むこともまた本発明の範囲内である。一実施形態において、個々のリンカー分子は、本発明による核酸分子に、１つを超えるＰＥＧ基またはＨＥＳ基を付着する。本発明に関して使用されるリンカーは、それ自体、線状であってもよいまたは分枝していてもよい。この種類のリンカーは、当業者らに知られており、特許出願ＷＯ２００５０７４９９３およびＰＣＴ／ＥＰ０２／１１９５０においてさらに記載される。
いかなる理論によっても拘束されることを望むものではないが、好ましくは、生理学的に許容できるポリマーおよび特に、本明細書において開示されるポリマーなどの、高分子量部分を有する本発明による核酸を修飾することによって、排出動態が変化すると思われる。特に、そのような修飾された発明の核酸の分子量の増加によりおよび特に、Ｌ形態である場合に、代謝を受けにくい核酸により、動物の体からの、好ましくは、哺乳動物の体からの、およびより好ましくは、人体からの排出は、減少すると思われる。排出が、典型的に、腎臓を介して生じるので、本発明者らは、したがって修飾された核酸の糸球体ろ過率が、身体における滞留時間の増加をもたらすこの種類の高分子量の修飾を有していない核酸と比較して、著しく低下すると仮定する。それと関連して、そのような高分子量の修飾にもかかわらず、本発明による核酸の特異性は、不利益に影響されないことは特に注目すべきことである。その限りにおいて、本発明による核酸は、驚くべき特徴を有し（これは、通常、薬学的に活性な化合物から予想することができない）徐放を提供する医薬製剤は、徐放を提供するために必ずしも必要とされない。むしろ、高分子量部分を含むそれらの修飾形態の、本発明による核酸は、それ自体、既に徐放製剤として使用することができる。その限りにおいて、本明細書において開示されるような核酸分子の（１つまたは複数の）修飾およびしたがって修飾された核酸分子およびそれを含む任意の組成物は、明確な、好ましくは、コントロールされたその薬物動態および体内分布を提供してもよい。これはまた、血行路における滞留時間および組織への分散を含む。そのような修飾は、特許出願ＰＣＴ／ＥＰ０２／１１９５０においてさらに記載される。
しかしながら、本明細書において開示される核酸が、あらゆる修飾、特に、ＰＥＧ化またはＨＥＳ化などの高分子量の修飾を含まないこともまた本発明の範囲内にある。投与の後の身体からの核酸の速いクリアランスが望まれる場合、そのような実施形態は特に好ましい。そのような速いクリアランスは、本発明による核酸またはそれを含む医薬を使用するインビボ画像処理条件または特異的な治療上の投薬条件の場合において望まれる可能性がある。
本発明による核酸とも本明細書において呼ばれる発明の核酸および／または本発明によるアンタゴニストは、医薬の生成または製造に使用されてもよい。そのような医薬は、任意選択でさらなる薬学的に活性な化合物と一緒に、少なくとも１つの発明の核酸を含有し、発明の核酸は、好ましくは、薬学的に活性な化合物自体として作用する。そのような医薬は、好ましい実施形態において、少なくとも１つの薬学的に許容できる担体を含む。そのような担体は、例えば、水、緩衝液、ＰＢＳ、グルコース溶液、スクロース溶液、マンノース溶液、好ましくは、５％スクロース平衡溶液、デンプン、糖、ゼラチン、または任意の他の許容できる担体物質であってもよい。そのような担体は、当業者に一般に知られている。本発明の医薬のまたはそれに関する任意の実施形態、使用、および態様はまた、本発明の医薬組成物に適用可能であり、逆もまた同じであることは当業者によって認められるであろう。
本発明に従うまたはそれに従って調製された核酸、医薬組成物、および医薬での治療および／または予防のための徴候、疾患、および障害は、それぞれの病原的な機序におけるＳＤＦ−１の直接的または間接的な関与に起因する。
もちろん、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸が、ヒトまたはマウスのＳＤＦ−１と相互作用するまたはそれに結合するので、当業者は、一般に、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸は、ヒトおよび動物の、本明細書において記載されるような任意の疾患の治療、予防、および／または診断のために容易に使用することができることを理解するであろう。それと関連して、本発明による核酸分子が、そのような疾患、障害、および状態の根底にある作用機序に関係なく、本明細書において記載される疾患、障害、または状態のいずれかの治療および予防に使用することができることは認められるべきである。
以下において、様々な疾患、障害、および状態に関連する、本発明による核酸分子の使用のための合理性が提供され、したがって、本発明による核酸分子について主張される治療上の、予防的な、および診断の適用性を妥当性のあるものにする。あらゆる不必要な繰り返しを回避するために、それと関連して概説されるようなＳＤＦ−１／ＳＤＦ−１受容体軸の関与により、主張される治療上の、予防的な、および診断の効果が達成されるように、上述の軸が、本発明による核酸分子によって処理されてもよいことは認められるべきである。患者の疾患、障害、および状態の特殊性ならびにそれと関連して記載される治療レジメンのあらゆる詳細は、本出願の好ましい実施形態に依存してもよいことはさらに認められるべきである。
血液、より具体的には末梢血中で、幹細胞および／または前駆細胞を増強することは、白血球減少症をもたらすものなどの、骨髄に悪影響を及ぼすプロトコールの効果を緩和するための治療においてとりわけ有用である。これらは、化学療法および放射線療法について知られている副作用である。本発明の核酸はまた、骨髄移植の成功を増強し、創傷治癒および火傷の治療を増強し、損傷を受けた器官組織の回復を助ける。それらはまた、白血病において蔓延している細菌感染と戦う。その限りにおいて、本発明による核酸分子は、あらゆるそのような疾患および状態の、あらゆるそのような目的および治療および予防のためにそれぞれ使用されてもよい。
組織の再生のための幹細胞動員。例えば機能不全の血管系または外傷による器官損傷の症例において、組織再生は望ましいが、達成されないことが多い。骨髄からの幹細胞、好ましくは、自己由来幹細胞は、疾患の様々な動物モデルにおいて有益な効果を有することが示され、ヒトにおけるいくつかの実例において有益であると分かった。
網膜および網膜色素上皮の修復。骨髄由来幹細胞は、網膜血管変性疾患のマウスモデルにおいて調査された。これらの幹細胞は、硝子体内にまたは網膜下に注射された場合、損傷の部位に付着して、異常な血管系を安定させ、低酸素エリアの血管新生を加速することが示された（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒら、２００７；Ｏｔａｎｉら、２００２）。他の人らは、Ｇ−ＣＳＦを用いて動員された骨髄由来幹細胞のサブグループが、損傷の部位の網膜色素上皮を標的とすることを見出した。全身投与に加えて、必要であることが分かった幹細胞の採取および眼内注射はなかった。一方、傷害／損傷の部位への誘引は、ケモカイン、例えばＳＤＦ−１の一時的な局所的過剰発現によって達成された（Ｌｉら、２００７；Ｌｉら、２００６）。
心臓の修復。累積された証拠は、心筋が、修復および再生のプロセスに関与する幹細胞および／または前駆細胞の動員による成長または傷害に応答することを示す。心筋梗塞のマウスモデルにおいて、Ｆｒａｎｓｉｏｌｉらは、幹細胞であるｃ−ｋｉｔ＋細胞が、おそらく修復プロセスに寄与するために、梗塞したエリアにおいて梗塞後１〜２週間蓄積することを示した（Ｆｒａｎｓｉｏｌｉら、２００８）。Ｄａｗｎらは、骨髄由来Ｓｃａ−１＋／Ｌｉｎ−／ＣＤ４５−の非常に小さな胚様幹細胞（略称ＶＳＥＬ）の潜在的な治療上の有用性について報告した。心筋梗塞（略称ＭＩ）のマウスモデルにおいて、比較的少数のＣＤ４５−ＶＳＥＬの移植は、左心室機能を改善するのに十分であり、ＭＩの後に筋細胞肥大を緩和した（Ｄａｗｎら、２００８）。
虚血発作の後の炎症の修復および改善。Ｓｃｈｗａｒｔｉｎｇらは、虚血脳外傷のマウスモデルにおいて、梗塞サイズ、アポトーシス細胞死、虚血後の炎症、およびサイトカイン遺伝子転写に対する、緑色蛍光ペプチドでマークしたＬｉｎ（−）造血幹細胞注射の効果を調査した。注射の２４時間後に、細胞は、脾臓において、その後、ミクログリアタンパク質を発現するが、神経マーカータンパク質は発現しない虚血の脳実質において見出された。組織傷害評価により、Ｌｉｎ（−）造血幹細胞治療動物の梗塞周囲のエリアにおける著しくより小さな梗塞容量およびより少ないアポトーシスニューロン細胞死が示された。虚血半球における免疫細胞浸潤の分析により、治療マウスにおける、侵入するＴ細胞およびマクロファージの低下が明らかにされた（Ｓｃｈｗａｒｔｉｎｇら、２００８）。Ｉｍｉｔｏｌａらは、ニューロン幹細胞が、ＳＤＦ−１α／ＣＸＣＲ４経路を介して中枢神経系（略称ＣＮＳ）傷害の部位に誘引されることを以前に報告した。
これらの発見を考慮して、骨髄からの十分な数の幹細胞の動員は、修復プロセスを誘発するのに有益であろう（Ｔａｎｇら、２００７）。ＳＤＦ−１またはその受容体ＣＸＣＲ４の阻止は、それが骨髄から様々な幹細胞を動員するので、この分野における有望なアプローチとなる。動員作用物質の正確な用量、投薬計画、および可能な局在化は、ルーチン的な実験を実行する当業者によって決定することができ、好ましくは、幹細胞は、動員されるが、走化性シグナルに、なお応答することができ、それらを、組織傷害の場所に動員することができることが意図される。
本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子が、ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体の間のシグナル伝達を阻害するので、そのようなＳＤＦ−１結合核酸分子は、末梢血への、前駆細胞および／もしくは幹細胞の動員に使用されてもよい医薬の生成のためにならびに／または好ましくは、創傷治癒；火傷；損傷を受けた器官組織および／もしくは損傷を受けた血管系によって引き起こされるもしくはそれと関連する障害を含む群から選択される疾患および／もしくは障害の治療に使用することができ、そのような障害は、網膜および脈絡膜の損傷、発作、心筋損傷、心筋梗塞、器官移植の後の虚血、ならびに外傷ならびに造血障害から選択され、そのような障害は、再生不良性貧血、白血病、薬剤誘発性の貧血、ならびに白血球減少症および白血球減少症における細菌感染から選択される。
前駆細胞および／または幹細胞の動員のために、医薬は、第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用することができ、上述の第２の薬学的に活性な作用物質の機能は、前駆細胞および／または幹細胞の動員することである。細胞動員作用物質は、顆粒細胞−マクロファージコロニー刺激因子（略称ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン８（略称ＩＬ−８）、マクロファージ炎症タンパク質（略称ＭＩＰ）、増殖関連のがん遺伝子、ＡＭＤ３００１のようなＣＸＣＲ４遮断薬（Ａｉｕｔｉ、Ｗｅｂｂら １９９７）、および顆粒球コロニー刺激因子（略称Ｇ−ＣＳＦ）から選択されるが、これらに限定されない。
ＣＮＳ傷害の症例において、骨髄由来幹細胞の動員のための巨大分子ＳＤＦ−１阻害剤の使用は、とりわけ有益である可能性がある。細胞は、ＳＤＦ−１勾配に対してなお感受性であるが、これらは、十分に高い濃度が体内で維持される限り、末梢組織において巨大分子ＳＤＦ−１阻害剤によって遮蔽される。しかしながら、巨大分子ＳＤＦ−１阻害剤は、血液脳関門を通過することができないので、ＣＮＳの低酸素または傷害の部位のＳＤＦ−１過剰発現から生じるＳＤＦ−１勾配は、ＣＮＳにおいて持続し、それらが、上記に記載されるように貢献することができる傷害の部位に、動員された細胞のいくつかを誘引する可能性がある。好ましい実施形態において、そのような巨大分子ＳＤＦ−１阻害剤は、本発明による核酸分子である。
ＳＤＦ−１遮断および化学療法の組合せ。約２０％のＢ系統急性リンパ性白血病は、従来の化学療法によって治癒されない。間質細胞との同時培養における、エクスビボ白血病細胞を使用する臨床前実験は、骨髄成分との白血病芽細胞の相互作用が化学療法から白血病細胞を防御するという証拠を提供した（Ｍｕｄｒｙ、Ｆｏｒｔｎｅｙら ２０００；Ｇａｒｒｉｄｏ、Ａｐｐｅｌｂａｕｍら ２００１；Ｔａｂｅ、Ｊｉｎら ２００７）。細胞粘着およびしたがって（悪性）造血細胞のホーミングにとって重要である細胞表面分子の阻害が、化学療法の効能を改善し、白血病幹細胞の根絶に至るというマウスモデルに関する報告もある（Ｍａｔｓｕｎａｇａ、Ｔａｋｅｍｏｔｏら ２００３；Ｊｉｎ、Ｈｏｐｅら ２００６）。ＳＤＦ−１は、骨髄ニッチにおける幹細胞のホーミングおよび保持において重要な役割を果たすことが知られている。造血細胞上のＳＤＦ−１の受容体であるＣＸＣＲ４の遮断は、骨髄から末梢血への、同急性骨髄性白血病芽細胞の解放に至り、そこで、それらは、化学療法（例えば作用物質シタラビンによって）（Ｆｉｅｒｒｏ、Ｂｒｅｎｎｅｒら ２００８）または腫瘍細胞死に至る他の作用物質（例えば、生物製剤単独でまたは抗体依存性細胞媒介性細胞毒性もしくは補体依存性細胞毒性と共に）によって標的とすることができるという臨床的証拠についての増え続ける臨床前の１つの報告がある。さらに、Ｊｉｎらは、チロシンキナーゼ阻害剤（例えばイマチニブ）を用いる慢性骨髄性白血病の治療が白血病細胞上のＣＸＣＲ４のアップレギュレーションに至ることを最近、観察した。これは、骨髄ホーミングの増加をもたらし、細胞を静止状態にし、かつさらなる化学療法アプローチに対して非感受性にしたＧ０−Ｇ１周期遮断を誘発した（Ｊｉｎ、Ｔａｂｅら ２００８）。これをを考慮して、本発明は、白血病細胞の骨髄ホーミングを減少させ、骨髄に先にホーミングした静止状態の白血病細胞を動員するために、ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０を含むが、これらに限定されない、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子のようなＣＸＣＲ４阻害剤またはＳＤＦ−１阻害剤との化学療法薬の併用療法を示唆する。ニッチシグナルを免れることにより、細胞は、細胞周期を通して進行する可能性があり、そのため、化学療法に対して、より感受性となる。化学療法およびそれと関連して使用されるそれぞれの作用物質は、当技術分野において知られており、例えば、リツキシマブ、イブリツモマブチウキセタン、トシツモマブなどの抗体；シスプラチンおよびカルボプラチンならびにオキサリプラチン、メクロレタミンなどのアルキル化剤；シクロホスファミド、クロラムブチル；プリンアザチオプリン、メルカプトプリンなどの代謝拮抗薬；ビンカアルカロイドおよびタキサンなどの植物のアルカロイドおよびテルペノイド；ポドフィロトキシン；エポチロン；ならびにカンプトセシンなどのトポイソメラーゼ阻害剤がある。
そのため、本明細書において開示されるような医薬は、被験者の末梢血へのがん細胞の動員に使用されてもよく、がん細胞は、白血病細胞、骨髄腫細胞、リンパ腫細胞、がん幹細胞、転移能を有するがん細胞、およびがん転移の群から選択されるが、これらに限定されない。
本発明による医薬は、被験者の末梢血へのがん細胞の動員に使用することができる、第２の医薬または第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用されてもよい。第２の薬学的に活性な作用物質は、本明細書において先に開示されるような細胞動員作用物質を含む。
さらに、本発明による医薬は、第３の医薬または第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用されてもよく、第３の薬学的に活性な作用物質は、（その）がん細胞に損傷を与え、それを破壊し、かつ／またはそれを標識する。そのようながん細胞破壊医薬作用物質は、好ましくは、リツキシマブ、イブリツモマブチウキセタン、トシツモマブなどの抗体；シスプラチンおよびカルボプラチンならびにオキサリプラチン、メクロレタミンなどのアルキル化剤；シクロホスファミド、クロラムブチル；プリンアザチオプリン、メルカプトプリンなどの代謝拮抗薬；ビンカアルカロイドおよびタキサンなどの植物のアルカロイドおよびテルペノイド；ポドフィロトキシン；エポチロン；カンプトセシンなどのトポイソメラーゼ阻害剤の群から選択されるが、これらに限定されない。
第３の医薬または薬学的に活性な作用物質は、化学療法の機能を有する、または提供することができる。
がん細胞を標識する医薬は、それによって標識されたがん細胞に向けられる、身体防御の活性化に至り、がん細胞を標識する医薬は、モノクローナル抗体の群から選択されるが、これらに限定されない。それらは、腫瘍特異的抗原を標的とし、したがって、作用物質がそれ自体、付着する腫瘍細胞への宿主の免疫応答を増強することによって作用する。例として、トラスツズマブ（商品名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、セツキシマブ、およびリツキシマブ（商品名：ＲｉｔｕｘａｎまたはＭａｂｔｈｅｒａ）がある。
本発明による医薬の併用療法は、第２のおよび／または第３の医薬を用いて行うことができる。
がん細胞の動員のために医薬を用いて治療される被験者は、引き続いてまたは同時に放射線療法を受けてもよい。一実施形態において、放射線療法は、第３の医薬または第３の薬学的に活性な作用物質のための代替治療として使用されてもよい。
第２の医薬または第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせたまたは組み合わせない、第３の医薬または第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせたまたは組み合わせない、ならびに放射線療法と組み合わせたまたは組み合わせない本発明による医薬は、がん、好ましくは、固形腫瘍および血液悪性腫瘍、より好ましくは、白血病、リンパ腫、および骨髄腫の治療および／または予防に使用することができ、好ましくは、本発明による医薬は、第３の医薬または放射線療法と組み合わせて使用される。
自己免疫疾患における長命形質細胞、Ｂ細胞、およびメモリーＴ細胞の動員
Ｂ細胞および／またはメモリーＴ細胞は、体から骨髄およびおそらく他の場所、例えばリンパ節に戻るならびに／またはストローマ細胞のＳＤＦ−１発現によって形成されるＳＤＦ−１勾配によってそこに保持される（Ｐａｒｒｅｔｔａ、Ｃａｓｓｅｓｅら ２００５；Ｚｈａｎｇ、Ｎａｋａｊｉｍａら ２００５；Ｒａｄｂｒｕｃｈ、Ｍｕｅｈｌｉｎｇｈａｕｓら ２００６）。ニッチにおいて、これらの細胞は休止状態にあり、それらは、そこで、自己免疫疾患の治療のために通常、使用される疾患緩和剤（例えば細胞分裂阻害薬またはメトトレキサート）に感受性ではない。一旦、ニッチを離れたら、それらは、それらが、おそらく自己免疫疾患の永続化に至る同種の抗原に出会った場合に、直ちに分裂し、新たな免疫応答を増大し始める可能性がある。ＳＤＦ−１結合核酸またはＣＸＣＲ４遮断によって骨髄および他のニッチにおけるＳＤＦ−１勾配に干渉することは、Ｂ細胞および／またはＴ細胞の動員に至る可能性があり、アフェレーシスまたは適切な医薬を用いてそれらを標的とすることを介しての、血液からのそれらの除去を可能にする。
高分化Ｂ細胞（形質細胞）による活性抗体生産を伴う鋭敏な免疫応答の後に、大多数のこれらの細胞は、炎症の回復または外来抗原（例えばウイルスタンパク質）の排除と共に死ぬ。しかしながら、Ｔ細胞の助けを借りて形質芽細胞に変わる可能性がある少数のメモリーＢ細胞がある。これらの形質芽細胞は、それらが、長命「記憶」形質細胞として何年間も生存するニッチへ、走化性の刺激に応じて移動するための能力を有する。移行の間に、細胞は、ＣＸＣＲ５およびＣＣＲ７の発現を失い、それぞれのリガンドに向かってもはや移動しない。しかしながら、ＣＸＣＲ４の発現は、維持される。したがって、細胞は、ＳＤＦ−１発現の部位に移動するであろうし、そこで、それらは、ＳＤＦ−１と異なるまたはそれと相補的である可能性がある長期的な生存シグナルに出会う可能性がある（Ｍｉｎｇｅｓ Ｗｏｌｓら、２００７）。これらのニッチは、骨髄中および末梢中、例えば炎症組織中のものとすることができる。長命形質細胞は、感染またはワクチン接種の後に何年もの間、維持されることが多い防御抗体血漿力価の維持を最も担う（Ｔａｒｌｉｎｔｏｎら、２００８）。形質細胞は、おそらくそれらが分裂しないので、他のＢ細胞およびＴ細胞ほど疾患緩和剤に感受性ではない。さらに、形質細胞がＣＤ２０を持たないので、それらは、抗ＣＤ２０抗体治療によって標的とすることができない。形質細胞および長命形質細胞によって分泌される自己抗体によって維持される自己免疫疾患において、これらの細胞を排除することは有益であろうし、その結果、免疫系は、自己組織を攻撃するのを止めるであろう。患者の形質細胞から血液を除去するための方法は、アフェレーシスによって、例えば親和性マトリックス上（例えばカラムまたはビーズ）の抗ＣＤ１３８（シンデカン−１）抗体を使用して行うことができる（Ｍｉｎｇｅｓ Ｗｏｌｓ＆Ｗｉｔｔｅ、２００８；Ｗｉｊｄｅｎｅｓら、１９９６）。循環する形質細胞だけではなく、常在長命形質細胞も排除するために、それらのニッチから後者を動員することは好都合であろう。これは、ＳＤＦ−１勾配を破壊し、ＳＤＦ−１に向かって移動するこれらの細胞を末梢血に動員する本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子の全身投与によって行うことができる。
そのため、本発明による医薬は、被験者の末梢血への、長命形質細胞、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の動員に使用されてもよい。
本発明による医薬は、被験者の末梢血への、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の動員に使用することができる、第２の医薬または第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用されてもよい。第２の医薬または薬学的に活性な作用物質は、本明細書において先に記載されるが、これに限定されない細胞動員作用物質を含む。
細胞が、上記に記載されるように、単独でまたは第２の医薬もしくは薬学的に活性な作用物質と組み合わせて本発明による医薬によって動員されるが、それらは、アフェレーシス、細胞選別、および／またはフローサイトメトリーによって血液から取り除くことができる（例えば、適切な長命形質細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞の表面マーカーを用いる蛍光活性化細胞選別［ＦＡＣＳ］および／または磁気活性化細胞選別［ＭＡＣＳ］によって）。
さらに、本発明による医薬は、第３の医薬または第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用されてもよく、第３の医薬または第３の薬学的に活性な作用物質は、末梢血において、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞に損傷を与え、それを破壊し、かつ／またはそれを標識する。長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を破壊するそのような医薬は、疾患緩和剤、例えばメトトレキサートまたは細胞毒性薬から選択されるが、これらに限定されない。長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を標識する医薬の例は、その標識された長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞に向けられる身体防御の活性化に至り、リツキシマブ、ＩＬ−６受容体結合抗体、またはシンデカン−１結合抗体からなる群から選択されるが、これらに限定されないものを含む。
本発明による医薬の併用療法は、第２のおよび／または第３の医薬を用いて行うことができる。
長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の動員のために、本発明による医薬を用いて、本発明に従って治療される被験者は、引き続いてまたは同時に、最終的に自身を攻撃する、患者の免疫系の分裂細胞に損傷を与えるまたはそれを破壊する放射線療法を受けてもよい。放射線療法は、第３の医薬のための代替治療として使用されてもよい。第２の医薬または第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせたまたはなしの、第３の医薬または第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせたまたはなしの、ならびに放射線療法と組み合わせたまたはなしの本発明による医薬の使用は、自己免疫疾患の治療および／または予防に使用することができ、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の動員は、単独でまたはより複雑な治療的概念の範囲内で、
好ましくは、アレルギー、温式および冷式自己免疫性溶血性貧血、全身性炎症反応症候群、出血性ショック、１型糖尿病、びまん性強皮症、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫症候群、全身性エリテマトーデスおよびその徴候、関節リウマチ、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液、もしくは他の器官におけるリウマチ性疾患から選択される全身性自己免疫疾患、
好ましくは、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、グルテン不耐症、炎症性腸疾患、膵臓炎、好酸球性食道炎から選択される胃腸管の自己免疫疾患、
好ましくは、乾癬、じんましん、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、モルヘア／線状強皮症、白斑、疱疹状皮膚炎もしくはデューリング病、硬化性萎縮性苔癬から選択される皮膚の自己免疫疾患、
脈管炎、好ましくは、側頭動脈炎、血管炎、血管漏出、リウマチ性多発筋痛症、アテローム性動脈硬化症、チャーグ−ストラウス症候群、高安動脈炎、好ましくは、主に腎臓、より具体的には糸球体を冒し、かつ／もしくは主に肺も冒すグッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、ベーチェット病から好ましくは選択される血管系の自己免疫疾患、
多発性硬化症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、神経認知機能障害、スティフマン症候群、ギラン−バレー症候群、重症筋無力症、ランバート−イートン症候群から好ましくは選択される神経系の自己免疫疾患、
好ましくは、強直性脊椎炎、サルコイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、多発性軟骨炎、結合組織炎、若年性関節リウマチ、ライム病、反応性関節炎、脊椎関節症、変性関節疾患から選択される筋肉骨格の自己免疫疾患、
ならびに好ましくは、コーガン症候群、自己免疫性副腎炎、メニエール病、局所的炎症、円形脱毛症、急性炎症性疾患、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、びまん性強皮症、クレスト症候群、および／もしくはモルヘア／線状強皮症などの強皮症、自己免疫性ブドウ膜炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性肝炎、糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、特発性肺線維症、自己免疫性不妊症、免疫複合体障害、ならびに腹膜炎から選択される他の自己免疫疾患、を含むが、これらに限定されない様々な疾患の治療に有益となり得る。
さらに、第２の医薬または第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせたまたはなしの本発明による医薬の使用は、骨髄移植の後の移植片対宿主疾患ならびに好ましくは、肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、四肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管、および膵臓から選択される移植器官の移植拒絶の治療ならびに／または予防のためにの使用することができる。
アレルギー性気道疾患のマウスモデルにおいて、白血球上のＣＸＣＲ４を標的とする抗体は、気道応答性亢進および肺好酸球増加を低下させ、ＣＸＣＲ４媒介性のシグナルが肺炎症の一因となることを示す（Ｇｏｎｚａｌｏ、Ｌｌｏｙｄら ２０００）。ＳＤＦ−１が血管形成の一因となるという証拠もある。臨床的および実験的な証拠は、皮膚浸潤白血球が、アトピー性皮膚炎の開始および維持に決定的な役割を果たすことを示し、ＳＤＦ−１は、Ｔリンパ球および樹状細胞の動員のための重要な因子であることが示された（Ｇｏｍｂｅｒｔ、Ｄｉｅｕ−Ｎｏｓｊｅａｎら ２００５）。白血球および具体的にはＴ細胞が、ＳＤＦ−１受容体であるＣＸＣＲ４を発現し、ＳＤＦ−１勾配に走化性的に応答するので、本発明によるＳＤＦ−１結合および核酸の中和によるこれらの勾配の破壊は、細菌またはウイルスの起源を有するまたは有していない行き過ぎた炎症、肺および／または皮膚の炎症を有する炎症性疾患、好ましくは、乾癬を助けるのに適している。
関節リウマチは、潜在的に、手および足の小さな関節において普通、始まる全身性自己免疫疾患である。その特徴は、白血球、とりわけマクロファージ、Ｔ細胞、およびＢ細胞による、膜および周囲の組織の浸潤によって特徴付けられる滑膜の炎症である。このプロセスならびにプロテアーゼおよび炎症促進性サイトカインの分泌は、滑膜の肥厚ならびにパンヌスと呼ばれる海綿状組織の成長に至る。それは、関節のまわりで侵襲性に、骨および軟骨に向けて増殖し、それらの不可逆的破壊に至る。パンヌスは、それ自体の血液供給のための、新生血管系の形成を引き起こす。Ｉｗａｍｏｔｏらは、ＲＡ患者の滑膜組織および滑液において多くのケモカインが上昇し、それらの中には、ＳＤＦ−１があることを最近見出した（Ｉｗａｍｏｔｏら、２００８）。ＳＤＦ−１のアップレギュレーションもまた、ＲＡ患者からの滑液を培養線維芽細胞様滑膜細胞に添加することによって以前にインビトロにおいて示された。この体液またはＩＬ−１７の添加は、滑膜細胞によるＳＤＦ−１ ｍＲＮＡ発現を誘発した。ＳＤＦ−１発現の誘発は、抗ＩＬ１７抗体の添加によって抑止することができた（Ｋｉｍら、２００７）。炎症した関節との関連において、ＳＤＦ−１は、３段階で作用する可能性がある。第１に、白血球の化学誘引物質として、第２に、血管形成に必要とされる内皮前駆細胞の誘引物質として、または第３に、新生血管系の成長に次いで至るＶＥＧＦなどの下流成長因子の発現のトリガーとして。
これらの実験に基づいて、発明者らは、好ましくは、末梢血から組織への白血球の遊走の阻害に使用される医薬は、以下のような疾患および／または障害の治療および／または予防を可能にする可能性があることを仮定する。
白血球の遊走は、移植器官の非自己抗原によって開始させることができ、移植器官は、肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、四肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管、および膵臓から選択される。そのため、白血球の遊走の阻害に至る医薬は、本明細書において開示されるような移植器官の移植拒絶の予防および／または治療に使用されてもよい。
さらに、白血球の遊走は、
好ましくは、アレルギー、温式および冷式自己免疫性溶血性貧血、全身性炎症反応症候群、出血性ショック、１型糖尿病、びまん性強皮症、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫症候群、全身性エリテマトーデスおよびその徴候、関節リウマチ、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液、もしくは他の器官におけるリウマチ性疾患から選択される全身性自己免疫疾患、
好ましくは、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、グルテン不耐症、炎症性腸疾患、膵臓炎、好酸球性食道炎から選択される胃腸管の自己免疫疾患、
好ましくは、乾癬、じんましん、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、モルヘア／線状強皮症、白斑、疱疹状皮膚炎もしくはデューリング病、硬化性萎縮性苔癬から選択される皮膚の自己免疫疾患、
脈管炎、好ましくは、側頭動脈炎、血管炎、血管漏出、リウマチ性多発筋痛症、アテローム性動脈硬化症、チャーグ−ストラウス症候群、高安動脈炎、好ましくは、主に腎臓、より具体的には糸球体を冒し、かつ／もしくは主に肺も冒すグッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、ベーチェット病から好ましくは選択される血管系の自己免疫疾患、
多発性硬化症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、神経認知機能障害、スティフマン症候群、ギラン−バレー症候群、重症筋無力症、ランバート−イートン症候群から好ましくは選択される神経系の自己免疫疾患、
好ましくは、強直性脊椎炎、サルコイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、多発性軟骨炎、結合組織炎、若年性関節リウマチ、ライム病、反応性関節炎、脊椎関節症、変性関節疾患から選択される筋肉骨格の自己免疫疾患、
ならびに好ましくは、コーガン症候群、自己免疫性副腎炎、メニエール病、局所的炎症、円形脱毛症、急性炎症性疾患、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、びまん性強皮症、クレスト症候群、および／もしくはモルヘア／線状強皮症などの強皮症、自己免疫性ブドウ膜炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性肝炎、糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、特発性肺線維症、自己免疫性不妊症、免疫複合体障害、ならびに腹膜炎から選択される他の自己免疫疾患、
において生じるまたはそれと関連する炎症によって開始させることができる。
そのため、白血球の遊走の阻害または低下に至る医薬は、本明細書において開示されるように、自己免疫疾患において生じるまたはそれと関連する炎症の予防および／または治療に使用されてもよい。
アレルギー性気道疾患のマウスモデルにおいて示されるように、白血球の遊走の阻害に至る医薬は、皮膚および／または気道の粘膜のアレルギー反応、好ましくは、枯草熱、喘息、気道応答性亢進、および／または皮膚炎、好ましくは、接触性皮膚炎および／またはアトピー性皮膚炎の治療および／または予防において有効であってもよい。
本発明による核酸による前駆細胞および／または幹細胞の動員は、被験者からこれらの細胞を得るための方法を提供する。それによって、有効量の発明による核酸分子は、被験者に投与され、被験者の末梢血への、前駆細胞および／または幹細胞の動員に至る。細胞は、本明細書において開示されるように、アフェレーシス、白血球搬出法、細胞選別、および／またはフローサイトメトリーによって、それぞれ、被験者の末梢血から、被験者から採取することができる。
被験者から前駆細胞および／または幹細胞を採取した後に、被験者、好ましくは、第１の被験者は引き続いてまたは同時に化学療法または放射線療法を受けてもよい。
化学療法および放射線療法は、一般に、急速に分裂する細胞に影響する。がん細胞がほとんどの健常細胞よりも多く分裂するので、それらはがんを治療するために使用される。しかしながら、骨髄細胞もまた頻繁に分裂するので、高用量の治療は患者の骨髄に重度に損傷を与えるまたはそれを破壊し得る。健常な骨髄なしでは、患者は、もはや、酸素を運び、感染と戦い、出血を予防するために必要とされる血球を作製することができない。末梢血幹細胞移植は、治療によって破壊された幹細胞を補充する。健常な移植幹細胞は、患者が必要とする血球を生産するための、骨髄の能力を回復させることができる。
末梢血幹細胞移植は、白血病およびリンパ腫の治療において最も共通して使用される。白血病またはリンパ腫が寛解にある場合（がんの徴候および症状は消えた場合）、非常に有効である。末梢血幹細胞移植はまた、神経芽細胞腫（未成熟神経細胞において生じ、通例、幼児および子供に影響するがん）ならびに多発性骨髄腫などの他のがんを治療するために使用される。研究者らは、様々な型のがんの治療のために臨床試験（調査研究）において末梢血幹細胞移植を評価している（ＮＣＩ、２００１）。
図４１および４３において示されるように、白血病および固形腫瘍のようないくつかの型のがん、リンパ増殖性障害、および自己免疫疾患、造血障害などの非悪性障害は、同種異型および／または自己由来造血幹細胞移植（略称ＨＳＣＴ）によって治療することができる（Ｇｒａｔｗｏｈｌ、Ｂａｌｄｏｍｅｒｏら ２００２）。
化学療法または放射線療法が、好ましくは、第１の被験者において引き続いて行われた場合、化学療法または放射線療法は、好ましくは、腫瘍細胞に損傷を与えるまたは破壊するために行われまたは投与され、好ましくは、第１の被験者の、採取された前駆細胞および／または幹細胞は、好ましくは、第１の被験者の末梢血に、投与して戻すことができる。その代わりに、第２の被験者は、低レベルの前駆細胞および／もしくは幹細胞または例えば化学療法もしくは放射線療法によって先に破壊された前駆細胞および／もしくは幹細胞を有する第１の被験者に、その採取された前駆細胞および／または幹細胞を与えることができる。
その方法は、がん、好ましくは、固形腫瘍、血液腫瘍、または悪性腫瘍の治療に使用することができる。
例えば紅斑性狼瘡、関節リウマチを含むが、これらに限定されない自己免疫疾患において、とりわけ重度の症例において、療法の選択肢の１つは、骨髄破壊的なまたはより選択的なリンパ球破壊的な療法レジメンを行い、その後、患者に造血系を戻すことである（Ｂｕｒｔ、Ｍａｒｍｏｎｔら ２００６）。造血系の移植のために必要とされる造血幹細胞および造血前駆細胞は、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０を含むが、これに限定されない本発明による核酸分子によってまたはＳＤＦ−１もしくはそのそれぞれの受容体ＣＸＣＲ４の他の遮断戦略によって、効率的に固定される。
その代わりに、造血幹細胞／造血前駆細胞は、血液から採取され、化学療法および／または放射線療法による、自己反応性リンパ球を含む造血系の除去の後に患者の免疫系を再構成するために使用される。これは、原則として、自己免疫疾患に対する治癒的療法を構成する。
本発明による核酸による長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の動員は、被験者からこれらの細胞を除去するための方法を提供する。それによって、有効量の本発明による核酸分子は、被験者に投与され、被験者の末梢血への、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の動員に至る。好ましくは、採取されたＴ細胞は、メモリーＴ細胞である。細胞は、本明細書において開示されるように、アフェレーシス、白血球搬出法、細胞選別、および／またはフローサイトメトリーによって、被験者の末梢血から、被験者からそれぞれ除去することができる。好ましくは、除去は、上述の細胞に適切な表面マーカーを用いるフローサイトメトリーによって行われる。
前駆細胞および／もしくは幹細胞ならびに長命形質細胞、Ｂ細胞、および／もしくはＴ細胞を採取するための方法は、全身性自己免疫疾患、胃腸管の自己免疫疾患、皮膚の自己免疫疾患、血管系の自己免疫疾患、神経系の自己免疫疾患、筋肉骨格の自己免疫疾患、および本明細書において開示されるような他の自己免疫疾患の治療ならびに／または予防にそれぞれ使用されてもよい。
糖尿病性腎症（略称ＤＮ）は、末期腎疾患の顕著な原因である。アンジオテンシン阻害剤は多くの症例において疾患進行を予防することができるが、応答しない人々のための実行可能な療法はない。ＤＮにおいて、糸球体係蹄は、糸球体肥大、細胞外糸球体間質マトリックスの結節性でびまん性の蓄積、および有足突起損傷によって特徴付けられる、遅いが進行性の構造のリモデリングを受ける。後者は、顕性のタンパク尿に対する初期段階におけるミクロアルブミン尿症およびＤＮの後期段階における糸球体硬化症の進行を説明すると考えられる。ＤＮの発症および進行は、終末糖化産物の堆積、内皮機能障害、ならびに成長因子および炎症誘発性媒介物質の局所的発現の増加を含む多数の病理機序を伴う。ある種のケモカインは、他の型の腎疾患におけるように、ＤＮにおいて免疫細胞を動員し、活性化することによって炎症を促進するので、一般に、ケモカインは、後者の因子の群に属する。例えば、単球走化性タンパク質ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２の標的とされた欠失または治療上の遮断は、１型または２型の糖尿病（Ｔ１Ｄ／Ｔ２Ｄ）を有するマウスの糸球体へのマクロファージ動員の阻止によって、糸球体硬化症を予防することができる（Ｃｈｏｗら、２００７；Ｃｈｏｗら、２００６；Ｋｕｌｋａｒｎｉら、２００７）。
ＤＮにおけるＳＤＦ−１について何も知られていない。ＤＮは、有足突起増殖または自己免疫のいずれかが欠けており、したがって、前述の研究は、ＤＮにおけるＳＤＦ−１の主な機能的役割をほとんど予測しない。しかしながら、発明者らは、糸球体硬化症、創傷治癒の形態的変化への糸球体の構造の進行性のリモデリングが、ＳＤＦ−１シグナル伝達を伴う可能性があるということを仮定するための理由を有する。他の疾患状態から入手可能なデータに基づくと、ＳＤＦ−１が、例えば組織完全性を維持し、再生を支持することによってＤＮを主に防御するかどうかまたはＳＤＦ−１が、例えば糸球体硬化症を増強することによってＤＮを主に促進するかどうかが不明瞭であるように思われた。糖尿病性腎症のマウスモデルにおいて、本発明による核酸分子の代表的な分子としてＳＤＦ−１に対する結合核酸ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）を使用する発明者らのデータは、後者を支持し、これは、糸球体硬化症の新規な病理機序および実施例１２におけるＤＮにおける潜在的な治療標的としてのＳＤＦ−１を同定する。そのため、ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）は、糖尿病性腎症の治療または予防の療法として有用である可能性がある。作用の機序はまた、潜在的に、骨髄由来前駆体細胞および／または幹細胞の動員によって媒介される可能性がある（Ｉｔｏら、２００１）。そのため、本明細書において開示されるＳＤＦ−１核酸は、医薬の製造に使用されてもよく、医薬は、腎症および好ましくは、糖尿病性腎症の治療および／または予防のための医薬である。
肺動脈高血圧症。
肺高血圧症（略称ＰＨ）は、肺動脈圧の上昇によって特徴付けられる、よく理解されていない病因の重大な疾患であり、進行性の右心不全および最終的に死に至る。ＰＨは、内皮細胞および平滑筋細胞の機能障害および増殖に少なくとも部分的に起因する、微細な肺抵抗動脈（ｓｍａｌｌ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｒｔｅｒｙ）の内膜肥厚に起因する。血管内皮細胞増殖の増加および血管系の筋化（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）は、肺血管リモデリングの病理学的特徴であり、このプロセスは、血管新生因子、炎症媒介物質、および血管収縮作用物質の低酸素誘発性の生産と関連することが実証された。Ｙａｍａｊｉ−Ｋｅｇａｎらは、エクスビボマウス肺器官培養研究において、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１が、アップレギュレートされ、過剰発現された低酸素誘発性の分裂促進因子（略称ＨＩＭＦ）による循環細胞の肺内動員に関与する可能性があることをを見出した（Ｙａｍａｊｉ−Ｋｅｇａｎ、Ｓｕら ２００６）。一般的な高血圧症および肺動脈高血圧症における血管リモデリングにおけるＳＤＦ−１の影響もまた記載されている（ＳｃｈｏｂｅｒおよびＺｅｒｎｅｃｋｅ ２００７）。そのため、本明細書において開示されるようなＳＤＦ結合核酸によるＳＤＦ−１の遮断は、高血圧症、好ましくは、肺高血圧症、より具体的には肺動脈高血圧症の治療および／または予防に使用されてもよい。
特発性肺線維症
特発性肺線維症を有する患者からの肺組織は、正常な肺よりも、ＳＤＦ−１およびＣＸＣＲ４の両方を発現する細胞の数が多いと記載されている。ブレオマイシン誘発性の肺線維症のマウスモデルにおいて、Ｘｕらは、ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（ＴＮ１４００３）の投与が肺線維症を著しく弱めたことを示すデータを生成した。（Ｘｕ、Ｍｏｒａら ２００７）。そのため、開示されるような開示されるようなＳＤＦ結合核酸によるＳＤＦ−１の遮断は、特発性肺線維症の治療および／または予防に使用されてもよい。
創傷治癒における線維症
火傷の後に、ラット、ブタ、およびヒトの皮膚はＳＤＦ−１を過剰発現することが示された。傷害の後の短期間の間は有益であるが、上皮化を促進するのではなく、白血球（例えば好酸球）の誘引および線維化を促進すると考えられる（Ａｖｎｉｅｌ、Ａｒｉｋら ２００６）。本明細書において開示されるようなＳＤＦ−１結合核酸によるＣＸＣＲ４またはＳＤＦ−１の阻害によって、線維化がより少ない創傷治癒が得られる可能性がある。
先に記載されるように、ＳＤＦ−１は、眼組織における血管新生の間の、脈絡膜への内皮細胞のホーミングに関与することが示され、これらの細胞の正確な役割は、なお調査中である（Ｓｅｎｇｕｐｔａ、Ｃａｂａｌｌｅｒｏら ２００５）。しかしながら、発明者らは、２つの独立した動物モデルにおいて、本明細書において開示されるような本発明によるＳＤＦ−１結合核酸によるＳＤＦ−１の遮断は、血管新生の低下に至ることを示すことができた。
「レーザー誘発性の脈絡膜血管新生」動物モデルは、ヒトの網膜および脈絡膜の新生血管系に対する治験薬の効果を予測するために使用される。これは、滲出型または「増殖性」加齢性黄斑変性症（略称ＡＭＤ）、糖尿病網膜症、および網膜静脈閉塞症のような疾患において生じる。ＣＸＣＲ４は、レーザー誘発性のＣＮＶにおいて発現されることが示された（Ｌｉｍａ ｅ Ｓｉｌｖａら．、ＦＡＳＥＢ Ｊ．２１：２００７）。それは、ＣＤ４５およびＦ４／８０発現細胞と共存し、これらの細胞が、ＢＭ由来マクロファージであることを示唆した。ＣＸＣＲ４の阻害剤は、レーザー誘発性のＣＮＶを低下させた。しかし、ＣＸＣＲ４細胞がＳＤＦ１も発現するかどうかは調査されなかった。本明細書における実施例１１において示すのに成功しているように、本発明による代表的な核酸分子としてのＳＤＦ−１に対する結合核酸であるＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）は、ＣＮＶ動物モデルにおける血管新生を阻止する。
酸素誘発性の網膜症のマウスモデルは、ＤＲ、とりわけ増殖性ＤＲおよびＡＭＤにおいて観察されるような網膜の低酸素誘発性の血管新生の模倣するためのモデルである（Ｓｍｉｔｈ、Ｗｅｓｏｌｏｗｓｋｉら １９９４）。保育器中での時間の間におよび正常酸素圧条件にそれらを戻した後に異常な網膜の血管成長に至った、保育器中での多すぎる酸素暴露により、病院において保育器に入れられた未熟児が盲目になったので、このモデルはまた未熟児網膜症とも呼ばれる。実施例１４において記載されるように、マウスモデルにおいて、本発明による代表的な核酸分子としてのＳＤＦ−１に対する結合核酸であるＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）は、本明細書において開示されるように、血管叢形成を著しく阻害し、したがって、Ｐ１７日目に観察されるように、全体的な網膜症スコアを改善した。
さらに、実施例９において示されるように、標準的な血管形成器官培養アッセイ、大動脈輪出芽アッセイにおいて、本発明による代表的な核酸分子であるＳＤＦ−１に対する結合核酸である１９３−Ｇ２−０１２−５’ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）は、ＳＤＦ−１誘発性の出芽を阻止する。
そのため、本明細書において開示されるようなＳＤＦ−１に結合する核酸は、医薬の製造に使用されてもよく、医薬は、血管形成および／または血管新生、好ましくは、脈絡膜血管新生を伴う疾患および／または障害の治療のための医薬である。血管新生の動物モデルは、本明細書において開示されるようなＳＤＦ−１に結合する核酸が、網膜疾患、好ましくは、加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、黄斑浮腫、および網膜浮腫を含む群から選択される疾患および／または障害の治療のための医薬として使用することができることを示した。
血管新生は、好ましくは、赤血球が環流する機能的微小血管網の形成として、本明細書において定義される。血管新生は、血管形成が、毛細血管芽の突出および成長ならびに先在する血管からの出芽によって主として特徴付けられる点で血管形成と異なる。
網膜血管浮腫の阻害
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病網膜症、および網膜血管閉塞の間に、黄斑浮腫の形成が観察されることが多い。一般に、局所的な血管系の透過性の増加は、浮腫の形成の原因である。多くの場合、これは、血管構造を変化させる炎症プロセスまたは未成熟で漏出性の新生血管系の形成の結果である。
黄斑浮腫の形成は、栄養素および他のシグナル伝達分子の網膜への供給が損なわれるので、視力の急速な悪化に至り得る。
ＳＤＦ−１は、浮腫の形成に至る可能性があるいくつかの因子の一因となる。タイトジャンクションタンパク質オクルディンの発現を阻害することによって（Ｂｕｔｌｅｒら、２００５）、血管壁は緩む可能性がある。それは、炎症促進性の環境を作り出す可能性がある、白血球の侵襲をさらに引き起こし、それは、ＶＥＧＦの発現を刺激することができ（Ｌｉａｎｇら、２００７；Ｓａｌｃｅｄｏら、１９９９）、これは、その存在が漏出性の血管の形成に至るので、「血管透過因子」として最初に知られていた。
ＳＤＦ−１が、健常な眼において、低レベルで発現されるのみであるので、例えば、本発明において開示されるようなＳＤＦ−１−結合核酸による、ＳＤＦ−１の阻害が、任意の生理学的効果に至るかどうかは不明瞭であった（Ｌｉｍａ ｅ Ｓｉｌｖａら、２００７）。
１つのＳＤＦ−１結合核酸が、ＶＥＧＦ誘発性の網膜血管透過性のウサギモデルにおいて試験された。蛍光光度法を用いて観察された透過性は、硝子体内ＶＥＧＦ注射の直接的な短時間作用型の効果によるものではなく、引き起こされ、より緩やかに応答するカスケード上のものであった（Ｅｄｅｌｍａｎら、２００５）。ＳＤＦ−１結合核酸は、用量依存的に、網膜血管透過性を著しく低下させた。
ＶＥＧＦ阻害に相補的なまたはその失敗の後の脈管形成の阻害
最近では、Ｒｅｄｄｙらは、ＳＤＦ−１が、少量のＶＥＧＦが存在する状態でさえ腫瘍血管成長を促進することができることを示した。それは、新血管系の促進のための第２のＶＥＧＦ非依存的経路であるように思われる（Ｒｅｄｄｙ、Ｚｈｏｕら ２００８）。そのため、本発明によるものなどのＳＤＦ−１結合核酸によるＳＤＦ−１シグナル伝達の干渉は、抗血管形成治療として有益である可能性がある。これは、抗ＶＥＧＦ非応答者において、抗ＶＥＧＦ療法難治性患者において、または血管形成を伴うすべての徴候のための抗ＶＥＧＦ薬を用いる併用療法において、より具体的には増殖性網膜疾患において、とりわけ有利である可能性があり、増殖性網膜疾患は、ＡＭＤ、ＤＲ、および網膜静脈閉塞症、がんにおいて、好ましくは、固形腫瘍および転移から選択される。
ＶＥＧＦの機能を阻害する薬剤は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、ペガプタニブ（Ｍａｃｕｇｅｎ）、およびラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）を含むが、これらに限定されない。
その限りにおいて、本明細書において開示されるＳＤＦ−１核酸分子は、医薬の製造に使用されてもよく、医薬は、ＶＥＧＦを阻害する医薬を用いる併用療法のためのものであるおよび／またはＶＥＧＦを阻害する医薬を用いる療法に対する応答が弱いもしくはそれに応答しない被験者における使用のためのものである。本出願のあらゆる態様および実施形態に関連するあらゆる療法に対する応答に関連して本明細書において使用されるような弱いは、これに関連して、疾患の寛解が達成されないことを意味する。
ＷＨＩＭ症候群
ＷＨＩＭ症候群は、ＣＸＣＲ４受容体の切断型形態によって特徴付けられることが多い免疫不全である。これは、受容体リガンドＳＤＦ−１（ＣＸＣＬ−１２）に対する、したがってより強力な走化性に対する感作の増加に至る。そのため、正常な幹細胞輸送を達成するために、本発明によるＳＤＦ−１に結合する核酸分子のようなＳＤＦ−１遮断薬を用いて、体内の生物活性ＳＤＦ−１濃度を低下させることまたはＣＸＣＲ４受容体遮断剤を使用することは有益である（Ｌａｇａｎｅ、Ｃｈｏｗら ２００８）。
身体からの、好ましくは、血液からの、前駆細胞および／もしくは幹細胞、長命形質細胞、メモリーＢ細胞、および／またはメモリーＴ細胞のような細胞の分離および／または除去は、アフェレーシス、細胞選別、およびフローサイトメトリーによって行うことができる。
アフェレーシスは、被験者の血液が、１つの特定の構成成分または構成成分の群を分離する装置を通過し、血行路にその残りを戻す技術である。除去されることとなる物質および／または細胞に依存して、幹細胞採取、吸収手順、および親和性クロマトグラフィーを含む異なるプロセスを、アフェレーシスにおいて用いた。
白血球搬出法は、白血球細胞が血液のサンプルから分離される実験手順である。これは、がん（白血病）を有する個人において非常に多い白血球数を減少させるまたは輸血のために白血球細胞を除去するために行われてもよい。
細胞選別は、フローサイトメトリー、好ましくは、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）および磁気活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）について例示的に示されるように、細胞の混合集団が２つ以上の集団に分離するプロセスである。
フローサイトメトリーは、体液流中に懸濁された細胞の異なる集団のような微細粒子を数えて、検査し、選別するための技術である。それは、光学的および／または電子的検出装置を通って流れる単一の細胞の物理的および／または化学的特徴の同時のマルチパラメトリック分析を可能にする。蛍光活性化細胞選別は、特殊な型のフローサイトメトリーである。それは、それぞれの細胞の特異的な光散乱および蛍光の特徴に基づいて、細胞を１つずつ、２つ以上の容器の中に生体細胞の不均一な混合物を選別するための方法を提供する。粒子／細胞の蛍光染色は、粒子／細胞に結合する蛍光染料との粒子／細胞のインキュベーションによって行うことができる。個々の細胞からの蛍光シグナルの速く、客観的で、定量的な記録および特定の興味のある細胞の物理的分離を提供するので、それは有用な科学機器である。頭文字ＦＡＣＳは、商標登録されており、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎによって所有される。磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）は、それらの表面抗原（ＣＤ分子）に依存する、様々な細胞集団の分離のための方法のためのＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃによって登録される商標名称である。それによって、分離されることとなる細胞の混合物は、特定の表面抗原に対する抗体を用いてコーティングされた磁気ビーズと共にインキュベートされる。これにより、この抗原を発現する細胞を磁気ビーズに付着させる。その後、細胞溶液は、強力な磁界に配置されたカラム上に移される。このステップにおいて、ビーズに付着した細胞（抗原を発現する）は、カラム上にとどまるが、他の細胞（抗原を発現しない）は、流れて通り抜ける。この方法を用いると、細胞は、特定の（１つまたは複数の）抗原に関して陽性にまたは陰性に分離することができる。
さらなる実施形態において、医薬は、さらなる薬学的に活性な作用物質を含む。そのようなさらなる薬学的に活性な化合物は、当業者らに知られているものとすることができ、好ましくは、ケモカインまたはサイトカインのアンタゴニスト、コルチコステロイド、およびその他同種のものを含む群から選択される。本発明による核酸によって本発明に従って処理することができる様々な徴候を考慮すれば、（１つまたは複数の）上述のさらなる薬学的に活性な作用物質は、そのような疾患の治療および／または予防に原則として適している任意のものであってもよいことが当業者によって理解されるであろう。本発明による核酸分子は、特に、医薬として存在するまたは使用される場合、好ましくは、単一作用物質としてのまたは組合せにおける顆粒細胞−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、ＰＩＸＹ−３２１（ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３融合タンパク質）、マクロファージ炎症タンパク質（ＭＩＰ）、幹細胞因子、トロンボポエチン、および増殖関連のがん遺伝子と組み合わせられる。
その代わりにまたはさらに、そのようなさらなる薬学的に活性な作用物質は、本発明によるさらなる核酸である。その代わりに、医薬は、ＳＤＦ−１と異なる標的分子に結合するまたは本発明による核酸の内の一方と異なる機能を見せる、少なくとももう１つの核酸を含む。
当業者らによって認められるように、発明の核酸は、ＳＤＦ−１に対するアンタゴニストを、そのようなアンタゴニストを必要とする患者に投与することができ、そのようなアンタゴニストが、疾患もしくは障害の原因を排除するまたは疾患もしくは障害からの効果を少なくとも低下させるのに適している任意の疾患において事実上使用されてもよい。そのような効果は、病的血管新生、炎症、および転移を含むが、これらに限定されない。これらのおよび他の疾患または障害に関連する本発明による核酸の適用性は、あらゆる不必要な繰り返しを回避するために、参照によって本明細書において組み込まれる本明細書の導入部において概説されるように、とりわけ、ＳＤＦ−１の関与に起因する。
本発明の医薬の一実施形態において、そのような医薬は、本明細書において開示される疾患のいずれか、特に本発明の医薬が使用されることとなるもののための他の治療と組み合わせた使用のためのものである。
「併用療法」（または「同時療法」）は、これらの治療薬の相互作用からの有益な効果を提供するように意図される特異的な治療レジメンの一部としての本発明の医薬および少なくとも１つの第２の作用物質の投与、つまり、本発明の医薬および上述の第２の作用物質を含む。組合せの有益な効果は、治療薬の組合せに起因する薬物動態学的または薬力学的相互作用を含むが、これらに限定されない。組合せにおけるこれらの治療薬の投与は、定義された時間（普通、選択される組合せに依存して、分、時間、日、または週）にわたって典型的に行われる。
「併用療法」は、偶発的におよび任意に本発明の組合せをもたらす別個の単独療法レジメンの一部としての２つ以上のこれらの治療薬の投与を包含してもよいが、一般に、包含するように意図されない。「併用療法」は、連続したこれらの治療薬の投与を包含するように意図され、すなわち、それぞれの治療薬は、異なる時間に投与され、また「併用療法」は、実質的に同時の、これらの治療薬または少なくとも２つの治療薬の投与を包含するように意図される。実質的に同時の投与は、例えば、固定比のそれぞれの治療薬を有する単一カプセルまたは治療薬のそれぞれについての、複数の単一カプセルで被験者に投与することによって達成することができる。
それぞれの治療薬の連続したまたは実質的に同時の投与は、局所経路、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、および粘膜組織を通しての直接的な吸収を含むが、これらに限定されない任意の適切な経路によって達成することができる。治療薬は、同じ経路または異なる経路によって投与することができる。例えば、選択される組合せの第１の治療薬は、注射によって投与されてもよいが、組合せの他の治療薬は局所的に投与されていてもよい。
その代わりに、例えば、治療薬はすべて局所的に投与されてもよいまたは治療薬はすべて注射によって投与されてもよい。治療薬が投与される順序は、他に述べられない限り、厳密に重大なものではない。「併用療法」はまた、他の生物活性成分とのさらなる組合せにおける、上記に記載されるような治療薬の投与を包含することができる。併用療法が、非薬物治療をさらに含む場合、治療薬および非薬物治療の組合せの相互作用からの有益な効果が達成される限り、非薬物治療は、任意の適している時間に行われてもよい。例えば、適切な症例において、有益な効果は、非薬物治療を、おそらく数日間または数週間、治療薬の投与から時間的に移動させる場合、なお達成される。
上記の一般的な用語において概説されるように、本発明による医薬は、当業者らに知られている任意の形態で原則として投与することができる。投与の好ましい経路は、全身投与、より好ましくは、非経口的投与によるもの、好ましくは、注射によるものである。その代わりに、医薬は局部的に投与されてもよい。投与の他の経路は、侵襲性が最小であるが、効率を保証する投与の経路を優先して、筋肉内、腹腔内、皮下、口による摂取、鼻腔内、気管内、または肺を含む。
非経口的投与は、皮下、筋肉内、または静脈内の注射および注入に一般に使用される。さらに、非経口的投与のための１つのアプローチは、緩効性または徐放性系の移植を用い、これは、一定レベルの投薬量が維持されることを確実にし、これらは、当業者によく知られている。
さらに、本発明の好ましい医薬は、適している鼻腔内媒体、吸入剤の局所的使用を介して、または当業者らによく知られている経皮的皮膚パッチのそれらの形態を使用する経皮的経路を介して、鼻腔内形態で投与することができる。経皮的送達系の形態で投与するために、投薬量の投与は、もちろん、投薬レジメンの全体にわたって断続的であるというよりむしろ継続的となるであろう。他の好ましい局所的調製物は、クリーム、軟膏、ローション、エアロゾルスプレー、およびゲルを含み、有効成分の濃度は、典型的に、０．０１％〜１５％のｗ／ｗまたはｗ／ｖの範囲であろう。
被験者への直接的な投与に加えて、本発明の好ましい医薬は、被験者の血球を次いで補充するために使用される細胞培養物を調製するために、エクスビボ治療プロトコールにおいて使用することができる。エクスビボ治療は、末梢血もしくは骨髄または適合ドナーからの同種移植片から採取される自己由来細胞に対して行うことができる。本発明のまたはマクロファージ炎症タンパク質などの他の作用物質と組み合わせた好ましい医薬の濃度は、当業者の技術の範囲内にある。
本発明の方法に都合好く応答するであろう被験者は、ヒトおよびヒト患者を含む、医学および獣医学の対象を一般に含む。本発明の方法および手段が有用である他の対象の中には、ネコ、イヌ、大型動物、ニワトリなどのトリ、およびその他同種のものがある。一般的に、前駆細胞および／もしくは幹細胞の上昇から利益を得るであろうまたは対象の前駆細胞および／もしくは幹細胞が幹細胞移植に望ましいであろうあらゆる対象は、本発明の方法の投与に適切である。
本発明の方法および手段によって改善されてもよいあるいは利益を得てもよい典型的な状態は、化学療法または放射線療法からの再生不良性貧血、白血病、薬剤誘発性の貧血、および造血性の欠乏などの造血障害を含む。本発明の方法ならびに手段はまた、免疫抑制治療の間におよびその後に移植の成功を高めるのにならびにより効率的な創傷治癒および細菌性炎症の治療を達成するのに有用である。本発明の方法は、免疫減弱状態であるまたはそうでなければ免疫系が損なわれている被験者を治療するのにさらに有用である。本発明の方法によって改善されるまたはそうでなければ利益を得る典型的な状態は、レトロウイルスに感染している、より具体的には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染しているそれらの被験者を含む。本発明の方法は、したがって、被験者における前駆細胞および／もしくは幹細胞の上昇が有益であろうまたは続く幹細胞移植のための前駆細胞および／もしくは幹細胞の採取が有益であろう広範囲の状態を標的とする。
本発明の核酸はまた、一実施形態において、骨髄幹細胞を動員することによって心筋を再生するためにも投与される。
本発明の医薬は、一般に、薬学的に許容できる媒体中に溶解されたまたは分散された本発明の核酸分子を含むがこれらに限定されない、療法の有効量の（１つまたは複数の）活性成分を含むであろう。薬学的に許容できる媒体または担体は、任意のおよびすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤、ならびにその他同種のものを含む。医薬活性物質のためのそのような媒体および作用物質の使用は、当技術分野においてよく知られている。補足の有効成分もまた、本発明の医薬の中に組み込むことができる。
さらなる態様において、本発明は、医薬組成物に関連する。そのような医薬組成物は、本発明による核酸の少なくとも１つおよび好ましくは、薬学的に許容できる結合剤を含む。そのような結合剤は、当技術分野において使用されるおよび／または知られている任意の結合剤とすることができる。特に、そのような結合剤は、本明細書において開示される医薬の製造に関連して説明されるような任意の結合剤である。さらなる実施形態において、医薬組成物は、さらなる薬学的に活性な作用物質を含む。
医薬および医薬組成物の調製物は、本開示を考慮して当業者らに知られているであろう。典型的に、そのような組成物は、液体溶液もしくは懸濁液として、注射前の液体中の溶液もしくは懸濁液に適している固形形態、経口投与のための錠剤もしくは他の固形物として、持効性カプセルとして、または点眼薬、クリーム、ローション、軟膏、吸入剤、およびその他同種のものを含む、現在使用されている任意の他の形態で、注射液として調製されていてもよい。活動分野における特定のエリアを治療するための、外科医、内科医、または医療従事者による生理食塩水ベースの洗浄などの無菌製剤の使用もまた、特に有用である可能性がある。組成物はまた、マイクロデバイス、微粒子、またはスポンジを介して送達されてもよい。
製剤について、医薬は、投薬製剤と適合する方式においておよび薬理学的に有効であるような量で投与されるであろう。製剤は、上記に記載される注射溶液の型などの様々な投薬形態で容易に投与されるが、薬剤放出カプセルおよびその他同種のものもまた用いることができる。
これに関連して、投与されることとなる有効成分の数量および組成物の容量は、治療されることとなる個人または被験者に依存する。投与に必要とされる活性化合物の特定の量は、従事者の判断に依存し、それぞれの個人に特有である。
活性化合物を分散させるために必要とされる医薬の最小の容量は、典型的に利用される。投与に適しているレジメンもまた変更可能であるが、最初に化合物を投与することおよび結果をモニターすることおよび次いで、さらなる間隔をおいてさらにコントロールされた用量を与えることによって代表されるであろう。
例えば、錠剤またはカプセル（例えばゼラチンカプセル）の形態の経口投与のために、活性な薬剤成分、つまり、本発明の核酸分子および／または（１つもしくは複数の）治療薬または（１つもしくは複数の）活性化合物とも本明細書において呼ばれる任意のさらなる薬学的に活性な作用物質は、エタノール、グリセロール、水、およびその他同種のものなどの経口の、無毒性で、薬学的に許容できる不活性担体と組み合わせることができる。さらに、望まれるまたは必要とされる場合、適している結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色剤もまた混合物の中に組み込むことができる。適している結合剤は、デンプン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン、グルコースまたはベータ−ラクトースなどの天然糖、トウモロコシ甘味料、アカシア、トラガカントゴム、またはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成ゴム、ポリエチレングリコール、ろう、ならびにその他同種のものを含む。これらの投薬形態で使用される潤滑剤は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、シリカ、滑石、ステアリン酸、そのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、ならびに／またはポリエチレングリコールならびにその他同種のものを含む。崩壊薬は、限定を伴うことなく、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムデンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性の混合物およびその他同種のものを含む。希釈剤は、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、および／またはグリシンを含む。
本発明の医薬はまた、持効および徐放の錠剤またはカプセル、丸薬、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤、および乳剤のような経口投薬形態で投与することができる。坐薬は、脂肪性の乳剤または懸濁剤から有利に調製される。
医薬組成物または医薬は、殺菌されてもよいならびに／または保存剤、安定剤、湿潤剤、もしくは乳化剤などの補助剤、溶液促進剤、浸透圧を調節するための塩、および／または緩衝液を含有してもよい。さらに、それらはまた、他の治療上価値のある物質を含有してもよい。組成物は、従来の混合、顆粒化、またはコーティングの方法に従って調製され、約０．１％〜７５％、好ましくは、約１％〜５０％の有効成分を典型的に含有する。
液体、特に注射組成物は、例えば、溶解、分散などによって調製することができる。活性化合物は、例えば水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール、およびその他同種のものなどの薬学的に純粋な溶媒中に溶解されるまたはそれと混合されて、それによって、注射溶液または懸濁剤を形成する。さらに、注射前に液体中に溶解するのに適している固形形態は製剤することができる。
固形組成物については、賦形剤は、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム、およびその他同種のものを含む。上記に定義される活性化合物はまた、例えば、担体としてポリアルキレングリコール、例えばプロピレングリコールを使用して坐薬として製剤されてもよい。いくつかの実施形態において、坐薬は、脂肪性の乳剤または懸濁剤から有利に調製される。
本発明の、それぞれ、医薬および核酸分子はまた、小さな単層の小胞、大きな単層の小胞、および多層状の小胞などのリポソーム送達系の形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンを含有する様々なリン脂質から形成することができる。いくつかの実施形態において、脂質成分のフィルムは、薬剤の水性溶液を用いて水和されて、薬剤をカプセル化する脂質層を形成し、これは、当業者によく知られている。例えば、本明細書において記載される核酸分子は、当技術分野において知られている方法を使用して構築される、親油性化合物または非免疫原性高分子化合物との複合体として提供することができる。さらに、リポソームは、内部的に、細胞の死滅を媒介するために、細胞毒性薬を標的に向け、運ぶためにそれらの表面上にそのような核酸分子を持っていてもよい。核酸関連複合体の例は、米国特許第６，０１１，０２０号において提供される。
本発明の、それぞれ、医薬および核酸分子はまた、標的に向けられる薬剤担体としての可溶性ポリマーと結合されてもよい。そのようなポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパンアミドフェノール（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌａｓｐａｎａｍｉｄｅｐｈｅｎｏｌ）、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンを含むことができる。さらに、本発明の、それぞれ、医薬および核酸分子は、薬剤の制御放出を達成するのに有用である、生分解性のポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリル酸、および架橋または両親媒性ブロックコポリマーのヒドロゲルに結合されてもよい。
望ましい場合、それぞれ投与されることとなる医薬組成物ならびに医薬はまた、少量の湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの無毒性補助物質ならびに例えば酢酸ナトリウムおよびトリエタノールアミンオレイン酸などの他の物質を含有してもよい。
本発明の、それぞれ、核酸分子および医薬を利用する投薬レジメンは、患者の型、種、年齢、体重、性別、および病状；治療されることとなる状態の重症度；投与の経路；患者の腎臓および肝臓の機能；ならびに用いられる特定のアプタマーまたはその塩を含む様々な因子に従って選択される。通常の技能を有する内科医または獣医は、状態の進行を予防する、それに対抗する、またはそれを抑えるために必要とされる有効量の薬剤を直ちに決定し、処方することができる。
本発明による核酸の有効な血漿レベルは、本明細書において開示される疾患のいずれかの治療において、好ましくは、５００ｆＭ〜５００μＭの範囲である。
本発明の、それぞれ、核酸分子および医薬は、好ましくは、１回の１日用量で、２日もしくは３日ごとに、毎週、２週間ごとに、１回の１カ月用量で、または３カ月ごとに投与されてもよい。
本明細書において記載されるような医薬が、本明細書において開示される医薬組成物を構成するのは本発明の範囲内にある。
さらなる態様において、本発明は、そのような治療を必要とする被験者の治療のための方法に関し、その方法は、薬学的に活性な量の、本発明による少なくとも１つの核酸の投与を含む。一実施形態において、被験者は、疾患に罹っておりまたはそのような疾患を発達させる危険性があり、疾患は、本明細書において開示されるもののいずれか、特に、医薬の製造のための、本発明による核酸のいずれかの使用に関連して開示されるそれらの疾患のいずれかである。
好ましくは本明細書において使用されるように、治療という用語は、好ましい一実施形態において、さらにまたはその代わりに、予防および／または経過観察を含む。
好ましくは本明細書において使用されるように、疾患および障害という用語は、逆に指示されなければ、区別なく使用されるものとする。
本明細書において使用されるように、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）という用語は、好ましくは、そのような用語によって理解されるまたは記載される主題を限定するように意図されない。しかしながら、代替の実施形態において、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）という用語は、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）という意味において、したがって、そのような用語によって理解されるまたは記載される主題を限定するとして理解されるものとする。
本発明による核酸分子の様々な配列番号、化学的性質、本明細書において使用されるような標的分子ＳＤＦ−１、その実際の配列、および内部参照番号は、以下の表に要約される。
核酸は、アプタマー、つまり、ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１（配列番号４）を有するＤ−核酸レベル（Ｄ−ＲＮＡ）に基づいてまたはスピーゲルマーレベル、つまり、ＳＤＦ−１、Ｌ−ＳＤＦ−１（ヒトＳＤＦ−１α、配列番号１）の天然の配置を有するＬ−核酸（Ｌ−ＲＮＡ）に基づいて特徴付けられることに注意されなければならない。異なる核酸は、１つの内部参照名称を共有するが、それぞれ、一方の配列番号はＤ−ＲＮＡ（アプタマー）分子のためのものであり、一方の配列番号は、Ｌ−ＲＮＡ（スピーゲルマー）分子についてのものである。
本発明は、さらなる特徴、実施形態および有利点が理解され得る図、実施例および配列表によってさらに例示される。
＜ヒトＳＤＦ−１に結合する核酸＞
ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１を標的として使用して、ヒトＳＤＦ−１に結合するいくつかの核酸を生成でき、その核酸配列を図１から９に示す。核酸をアプタマー、すなわちビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１を含むＤ−核酸レベル、またはスピーゲルマーレベル、すなわち天然立体構造のＳＤＦ−１（Ｌ−ＳＤＦ−１）を含むＬ−核酸について特徴付けた。
アプタマーは、ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１での競合または直接プルダウン結合アッセイを使用してビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１で分析した（実施例４）。スピーゲルマーは、天然立体構造のＳＤＦ−１（Ｌ−ＳＤＦ−１）でＢｉａｃｏｒｅ２０００装置を使用する表面プラズモン共鳴測定によって（実施例６）、および細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイによって（実施例５）検査した。
このように作製した核酸分子は、様々な配列モチーフを示し、主な３種を図１、２Ａおよび２Ｂ（Ａ型）、図３、４Ａおよび４Ｂ（Ｂ型）、図５、６、７Ａ、７Ｂおよび８（Ｃ型）に定義する。ヌクレオチド配列モチーフの定義のために、多義性のヌクレオチドのためのＩＵＰＡＣの略語を使用する：
Ｓ 強い ＧまたはＣ、
Ｗ 弱い ＡまたはＵ、
Ｒ プリン ＧまたはＡ、
Ｙ ピリミジン ＣまたはＵ、
Ｋ ケト ＧまたはＵ、
Ｍ イミノ ＡまたはＣ、
Ｂ Ａではない ＣまたはＵまたはＧ、
Ｄ Ｃではない ＡまたはＧまたはＵ、
Ｈ Ｇではない ＡまたはＣまたはＵ、
Ｖ Ｕではない ＡまたはＣまたはＧ、
Ｎ すべて ＡまたはＧまたはＣまたはＵ。
それに反する記載が無い限り、任意の核酸配列または伸長鎖および囲みの配列のそれぞれは５’→３’方向で示される。
１．１ Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸
図１に示すとおりＡ型のＳＤＦ−１結合核酸のすべての配列は、互いにハイブリダイズできる５’および３’末端伸長鎖に隣接されるコアヌクレオチド配列１個を含む。しかしそのようなハイブリダイゼーションは、必ずしも分子中で得られない。
核酸を、それらの結合挙動に関して分類するためにビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１での直接および競合プルダウン結合アッセイを使用してアプタマーレベルについて特徴付けた（実施例４）。選択した配列を、スピーゲルマーとして合成し（実施例３）、天然立体構造のＳＤＦ−１（Ｌ−ＳＤＦ）を使用して細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイにおいて（実施例５）、およびＢｉａｃｏｒｅ２０００装置を使用する表面プラズモン共鳴測定によって（実施例６）検査した。
定義した囲みおよび伸長鎖の配列は、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸の間で異なってもよく、ＳＤＦ−１への結合親和性に影響を及ぼす。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸としてまとめた様々なＳＤＦ−１結合核酸の結合分析に基づいて、コアヌクレオチド配列および以下に示すそのヌクレオチド配列は、個々が、より好ましくはその全体がＳＤＦ−１への結合に不可欠である。
Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸のすべての同定した配列のコアヌクレオチド配列は、配列
（Ａ型 式−１）を共有しており、ここでＸＡは不在または「Ａ」のいずれかである。「Ａ」が不在である場合、コアヌクレオチド配列の配列は、Ａ型 式−２（
）としてまとめられる。コアヌクレオチド配列内に追加のヌクレオチド「Ａ」を保有するが、ＳＤＦ−１に結合するＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ａ６（コアヌクレオチド配列：
）により、代替コアヌクレオチド配列（
、Ａ型 式−３）
が結論づけられる。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸のすべての他の核酸の例として、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１をヒトＳＤＦ−１へのその結合親和性について特徴付けた。平衡結合定数ＫＤを、プルダウン結合アッセイを使用して（ＫＤ＝１．５ｎＭ、図１１）、および表面プラズモン共鳴測定によって（ＫＤ＝１．０ｎＭ、図１５）決定した。１９２−Ａ１０−００１についてのＩＣ５０（５０％阻害濃度）、０．１２ｎＭを細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した（図１２）。続いて、図１に示すすべてのＡ型ＳＤＦ−１結合核酸を１９２−Ａ１０−００１に対する競合プルダウン結合アッセイにおいて分析した（図１３、検査したすべてのＡ型ＳＤＦ−１結合核酸が図１３に示されてはいない）。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｂ１１および１９２−Ｃ１０は、これらの競合実験において１９２−Ａ１０−００１と同程度の結合親和性を示した。弱い結合親和性はＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｇ１０、１９２−Ｆ１０、１９２−Ｃ９、１９２−Ｅ１０、１９２−Ｄ１１、１９２−Ｇ１１、１９２−Ｈ１１および１９１−Ａ６について決定された。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｄ１０、１９２−Ｅ９および１９２−Ｈ９は、１９２−Ａ１０−００１よりはるかに弱い結合親和性を有する（図１３）。
上に述べたとおり、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｂ１１および１９２−Ｃ１０は、ＳＤＦ−１に対して１９２−Ａ１０−００１と同程度の結合親和性を示す。しかしそれらは、コアヌクレオチド配列のヌクレオチド配列においてわずかな差異を示す。したがってほとんど同じ高い親和性でＳＤＦ−１に結合する３種の分子の共通配列は、ヌクレオチド配列
（Ａ型、式−４）にまとめることができ、１９２−Ａ１０−００１のコアヌクレオチド配列のヌクレオチド配列（ヌクレオチド配列：
）は、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の最良の結合親和性を有するヌクレオチド配列を表す。
Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端伸長鎖の６ヌクレオチドの内の５または６個は、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の３’末端伸長鎖の６ヌクレオチドの内のそれぞれ５または６ヌクレオチドに末端ヘリックスを形成するようにハイブリダイズできる。これらのヌクレオチドは、いくつかの位置で可変であるが、様々なヌクレオチドが５’および３’末端伸長鎖それぞれの６ヌクレオチドの内の５または６個のハイブリダイゼーションを可能にする。図１に示すＡ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端および３’末端伸長鎖は、５’末端伸長鎖について（「ＲＳＨＲＹＲ」、Ａ型 式５−５’）および３’末端伸長鎖について（「ＹＲＹＤＳＹ」、Ａ型 式５−３’）の一般式にまとめることができる。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１の切断誘導体を元の分子１９２−Ａ１０−００１および１９２−Ａ１０−００８に対する競合プルダウン結合アッセイで分析した（図２Ａおよび２Ｂ）。これらの実験は、１９２−Ａ１０−００１の６末端ヌクレオチド
から誘導体１９２−Ａ１０−００２の５ヌクレオチド
への縮小が、結合親和性の低下を伴わずに実行できたことを示した。しかし４末端ヌクレオチド
またはそれより少なく（１９２−Ａ１０−００４／−００５／−００６／−００７）への切断は、ＳＤＦ−１への結合親和性の低下を生じた（図２Ａ）。図２ＡおよびＢに示すＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１の誘導体のヌクレオチド５個および４個の長さを有する決定された５’末端および３’末端伸長鎖は、５’末端伸長鎖について（「Ｘ２ＢＢＢＳ」Ａ型 式６−５’）および３’末端伸長鎖について（「ＳＢＢＶＸ３」Ａ型 式６−３’）の一般式で記載でき、ここでＸ２は不在または「Ｓ」のいずれか、およびＸ３は不在または「Ｓ」のいずれかである。
５’および３’末端伸長鎖のヌクレオチド配列は、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の結合親和性に影響を有する。これは、核酸１９２−Ｆ１０および１９２−Ｅ１０によってのみ示されるのではなく１９２−Ａ１０−００１の誘導体によっても示される（図２Ｂ）。１９２−Ｆ１０および１９２−Ｅ１０のコアヌクレオチド配列は、１９２−Ｂ１１および１９２−Ｃ１０と同じであるが、結合親和性の低下を生じる５’末端伸長鎖の３’端および３’末端伸長鎖の５’端でのわずかな差異を有する。
Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００２の５’および３’末端ヌクレオチド
の
による置換は、結合親和性の低下を生じたが、
による置換は、１９２−Ａ１０−００２について示されたのと同じ結合親和性を生じた（図２Ｂ、図１５、図１２、図１６）。
さらに、それぞれ４個の５’および３’末端ヌクレオチドを保有するＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１の９個の誘導体（１９２−Ａ１０−０１４／−０１５／−０１６／−０１７／−０１８／−０１９／−０２０／−０２１／−０２２／−０２３）をアプタマーとして、１９２−Ａ１０−００１またはその誘導体１９２−Ａ１０−００８（両者はＳＤＦ−１への同じ結合親和性を有する）に対するそれらの結合親和性について検査した。すべてのクローンは、それぞれ１９２−Ａ１０−００１（６ヌクレオチドが末端ヘリックスを形成している）よりも、または５個の末端ヌクレオチドを有する１９２−Ａ１０−００８よりも弱い、はるかに弱いまたは非常に弱いＳＤＦ−１への結合親和性を示した（図２Ｂ）。したがって５’および３’末端伸長鎖のヌクレオチドの配列および数は、ＳＤＦ−１への有効な結合に不可欠である。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００２および１９２−Ａ１０−０８について示されたとおり５’および３’末端伸長鎖の好ましい組合せは、「ＣＵＧＵＧ」および「ＣＧＣＡＧ」（Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００２の５’および３’末端伸長鎖）ならびに「ＧＣＧＵＧ」および「ＣＧＣＧＣ」（Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００８の５’および３’末端伸長鎖）である。
しかし、検査したすべてのＡ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’および３’末端伸長鎖を組み合わせて、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端伸長鎖についての一般式は「Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ」（Ａ型 式７−５’）であり、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の３’末端伸長鎖についての一般式は「ＢＮＢＮＸ３Ｘ４」（Ａ型 式７−３’）であり、ここでＸ１は「Ｒ」もしくは不在、Ｘ２は「Ｓ」、Ｘ３は「Ｓ」およびＸ４は「Ｙ」もしくは不在であるか、
または
Ｘ１は不在、Ｘ２は「Ｓ」もしくは不在、Ｘ３は「Ｓ」もしくは不在およびＸ４は不在である。
１．２ Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸
図３に示すとおりＢ型のＳＤＦ−１結合核酸のすべての配列は、互いにハイブリダイズできる５’および３’末端伸長鎖に隣接されるコアヌクレオチド配列１個を含む。しかしそのようなハイブリダイゼーションは、必ずしも分子中で得られない。
核酸を、それらの結合挙動に関して順位付けるためにビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１での直接および競合プルダウン結合アッセイを使用してアプタマーレベルについて特徴付けた（実施例４）。選択した配列を、スピーゲルマーとして合成し（実施例３）、天然立体構造のＳＤＦ−１（Ｌ−ＳＤＦ）を使用して細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイにおいて（実施例５）、およびＢｉａｃｏｒｅ２０００装置を使用する表面プラズモン共鳴測定によって（実施例６）検査した。
定義した囲みおよび伸長鎖の配列は、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸の間で異なってもよく、ＳＤＦ−１への結合親和性に影響を及ぼす。Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸としてまとめた様々なＳＤＦ−１結合核酸の結合分析に基づいて、コアヌクレオチド配列および以下に示すそのヌクレオチド配列は、個々が、より好ましくはその全体がＳＤＦ−１への結合に不可欠である。
Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸のすべての同定した配列のコアヌクレオチド配列は、配列
（Ｂ型 式−１）を共有する。コアヌクレオチド配列の１カ所で異なるＢ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１、１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｆ２−００１をＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１に対する競合プルダウン結合アッセイにおいて分析した（プルダウン結合アッセイで決定されたＫＤ １．５ｎＭ［図１１］、表面プラズモン共鳴測定で決定されたＫＤ １．０ｎＭ［図１５］、ＩＣ５０ ０．１２ｎＭ［図１２］）。検査した３種のＢ型ＳＤＦ−１結合核酸それぞれは、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１と比較してヒトＳＤＦ−１への優れた結合を示し、１９３−Ｇ２−００１の結合親和性は、１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｆ２−００１と同程度である（図３）。データは、Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１、１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｆ２−００１のコアヌクレオチド配列のヌクレオチド配列における差異がＳＤＦ−１への結合親和性に影響を有さないことを示唆する。例として、Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１をヒトＳＤＦ−１へのその結合親和性について特徴付けた。平衡結合定数ＫＤを、プルダウン結合アッセイを使用して（ＫＤ＝０．３ｎＭ）および表面プラズモン共鳴測定によって（ＫＤ＝０．５ｎＭ、図１７）決定した。１９３−Ｇ２−００１についてのＩＣ５０（５０％阻害濃度）、０．０８ｎＭを細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した。対照的に、コアヌクレオチド配列の配列において異なるＢ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｂ３−００２、１９３−Ｈ３−００２、１９３−Ｅ３−００２および１９３−Ｄ１−００２は、劣った結合特性を有する（図３）。結果としてＳＤＦ−１への改善された結合親和性を有するＢ型ＳＤＦ−１結合核酸は、配列
（Ｂ型 式−２）を含むコアヌクレオチド配列を共有する。
Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端伸長鎖の６ヌクレオチドの内の４、５または６ヌクレオチドは、Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸の３’末端伸長鎖の６ヌクレオチドの内のそれぞれ４、５または６個に末端ヘリックスを形成するようにハイブリダイズできる。ヌクレオチドは、いくつかの位置で可変であるが、様々なヌクレオチドが５’および３’末端伸長鎖のそれぞれの６ヌクレオチドの内の４、５または６ヌクレオチドのハイブリダイゼーションを可能にする。図３に示すＢ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端および３’末端伸長鎖は、５’末端伸長鎖について（Ｂ型 式３−５’、「Ｘ１ＧＣＲＷＧ」ここでＸ１は「Ａ」または不在）および３’末端伸長鎖について（Ｂ型 式３−３’、「ＫＲＹＳＣＸ４」ここでＸ４は「Ｕ」または不在）の一般式にまとめることができる。Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ１−００２、１９３−Ｄ２−００２、１９３−Ａ１−００２および１９３−Ｄ３−００２は、それらが１９３−Ｃ２−００１、１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｆ２−００１と同じコアヌクレオチド配列（Ｂ型 式−２）を共有するにもかかわらず、ＳＤＦ−１へのより弱い結合親和性を有する（図３）。Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ１−００２、１９３−Ｄ２−００２、１９３−Ａ１−００２および１９３−Ｄ３−００２の好ましくない結合特性は、５’および３’末端伸長鎖のヌクレオチド数および配列による可能性がある。
Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｃ２−００１の切断誘導体を、それぞれ１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｇ２−０１２に対する競合プルダウン結合アッセイで分析した（図４Ａおよび４Ｂ）。これらの実験は、Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｃ２−００１の６末端ヌクレオチド
の５ヌクレオチド
への縮小が、同程度の結合親和性を有する分子（１９３−Ｃ２−００２および１９３−Ｇ２−０１２）を生じることを示した。平衡解離定数ＫＤを、プルダウン結合アッセイ（ＫＤ＝０．３ｎＭ、図１８）を使用して決定した。４個
またはそれより少ないヌクレオチド（１９３−Ｃ２−００４、１９３−Ｃ２−００５、１９３−Ｃ２−００６、１９３−Ｃ２−００７）への切断は、競合プルダウン結合アッセイを使用して測定したＳＤＦ−１への結合親和性の低下を生じた（図４Ａ）。５’および３’端での５末端ヌクレオチドのヌクレオチド配列は、それぞれＢ型ＳＤＦ−１結合核酸の結合親和性に影響を有する。５’および３’末端ヌクレオチド
（１９３−Ｃ２−００２、１９３−Ｇ２−１２）の
（１９３−Ｇ２−０１３）による置換は、結合親和性の低下を生じた。さらに４塩基対ヌクレオチド長で末端ヘリックスを有するＢ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１の４種の異なる誘導体（１９３−Ｇ２−０１４、／−０１５／−０１６／−０１７）を検査した。それらすべてがＳＤＦ−１への低下した結合親和性を示した（図４Ｂ）。したがって５’および３’末端ヌクレオチドの配列および長さは、ＳＤＦ−１への有効な結合に不可欠である。図４Ａおよび４Ｂに示すＢ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｃ２−００３および１９３−Ｇ２−０１２の誘導体のヌクレオチド５個および４個の長さである５’末端および３’末端伸長鎖は、５’末端伸長鎖について（「Ｘ２ＳＳＢＳ」Ｂ型 式４−５’）ここでＸ２は不在または「Ｇ」のいずれかであり、および３’末端伸長鎖について（「ＢＶＳＳＸ３」Ｂ型 式４−３’）ここでＸ３は不在または「Ｃ」のいずれかである、の一般式で記載できる。Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｃ２−０１ならびにそれらの誘導体１９３−Ｇ２−０１２および１９３−Ｃ２−００２について示すとおり、５’および３’末端伸長鎖の好ましい組合せは、「Ｘ１ＧＣＧＵＧ」（５’末端伸長鎖、Ｂ型 式５−５’）および「ＵＡＣＧＣＸ４」（３’末端伸長鎖、Ｂ型 式５−３’であり、ここでＸ１は「Ａ」または不在のいずれかおよびＸ４は「Ｕ」または不在のいずれかである。
しかし、検査したすべてのＢ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’および３’末端伸長鎖を組み合わせて、Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端伸長鎖についての一般式は「Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ」（Ｂ型 式６−５’）であり、Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸の３’末端伸長鎖についての一般式は「ＢＶＢＳＸ３Ｘ４」（Ｂ型 式６−３’）であり、ここでＸ１は「Ａ」もしくは不在、Ｘ２は「Ｇ」、Ｘ３は「Ｃ」およびＸ４は「Ｕ」もしくは不在であるか、
または
Ｘ１は不在、Ｘ２は「Ｇ」もしくは不在、Ｘ３は「Ｃ」もしくは不在およびＸ４は不在である。
１．３ Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸
図５に示すとおりＣ型のＳＤＦ−１結合核酸のすべての配列は、互いにハイブリダイズできる５’および３’末端伸長鎖に隣接されるコアヌクレオチド配列１個を含む。しかしそのようなハイブリダイゼーションは、必ずしも分子中で得られない。
核酸を、それらの結合挙動に関して分類するためにビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１での直接および競合プルダウン結合アッセイを使用してアプタマーレベルについて特徴付けた（実施例４）。選択した配列を、スピーゲルマーとして合成し（実施例３）、天然立体構造のＳＤＦ−１（Ｌ−ＳＤＦ）を使用して細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイにおいて（実施例５）、およびＢｉａｃｏｒｅ２０００装置を使用する表面プラズモン共鳴測定によって（実施例６）検査した。
定義した囲みおよび伸長鎖の配列は、Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸の間で異なってもよく、ＳＤＦ−１への結合親和性に影響を及ぼす。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸としてまとめた様々なＳＤＦ−１結合核酸の結合分析に基づいて、コアヌクレオチド配列および以下に示すそのヌクレオチド配列は、個々が、より好ましくはその全体がＳＤＦ−１への結合に不可欠である。
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸のすべての同定した配列のコアヌクレオチド配列は、配列
（Ｃ型 式−１）を共有し、ここでＸＡは不在または「Ａ」のいずれかである。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｄ１を除いて、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸のすべての同定した配列のコアヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列
（Ｃ型 式−２）を共有する。コアヌクレオチド配列中の１ヌクレオチド「Ａ」を欠失しているが、ＳＤＦ−１に結合するＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｄ１（コアヌクレオチド配列
）により、代替コアヌクレオチド配列（
、Ｃ型 式−３）が結論づけられる。最初に図５に示すすべてのＣ型ＳＤＦ−１結合核酸をＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１に対する競合プルダウン結合アッセイにおいて分析した（プルダウンアッセイおよび表面プラズモン共鳴測定で決定されたＫＤ＝１．５ｎＭ、ＩＣ５０＝０．１２ｎＭ）。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｂ２、１９０−Ａ３−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｈ３および１９７−Ｅ３は競合実験で１９２−Ａ１０−００１より弱い結合親和性を示した。はるかに弱い結合親和性が、１９１−Ａ５、１９７−Ｂ１、１９７−Ｄ１、１９７−Ｈ２および１９７−Ｄ２について決定された（図５）。分子またはその誘導体をさらなる競合プルダウン結合アッセイ、プラズモン共鳴測定およびｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイによってさらに特徴付けた。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１をヒトＳＤＦ−１へのその結合親和性について特徴付け、平衡結合定数ＫＤを、表面プラズモン共鳴測定によって決定した（ＫＤ＝０．８ｎＭ、図２１）。１９１−Ｄ５−００１についてのＩＣ５０（５０％阻害濃度）、０．２ｎＭを細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２のヒトＳＤＦ−１に対する結合親和性を、表面プラズモン共鳴測定によって決定し（ＫＤ＝０．９ｎＭ）、そのＩＣ５０（５０％阻害濃度）、０．２ｎＭを細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイにおいて分析した。これらのデータは、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１および１９７−Ｂ２がＳＤＦ−１に対する同程度の結合親和性を有することを示す（図５および８）。
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９０−Ａ３−００１（４８ｎｔ）は、１７ヌクレオチドの５’末端伸長鎖および１２ヌクレオチドの３’末端伸長鎖を含み、それにより一方では５’末端伸長鎖の５’端に４ヌクレオチドと３’末端伸長鎖の３’端の４ヌクレオチドとが末端ヘリックスを形成するように相互にハイブリダイズできる。代替として、５’末端伸長鎖中のヌクレオチド
は、３’末端伸長鎖中のヌクレオチド
と末端ヘリックスを形成するようにハイブリダイズできる。分子１９０−Ａ３−００１（５’および３’末端伸長鎖の８／９ヌクレオチドの内の６個が相互にハイブリダイズできる）の５’末端伸長鎖の８ヌクレオチド
への、および３’末端伸長鎖の９ヌクレオチド
への縮小は、ＳＤＦ−１への結合親和性に影響を有さない（１９０−Ａ３−００４、図６および図１９）。１９０−Ａ３−００４の平衡結合定数ＫＤを、プルダウン結合アッセイを使用して（ＫＤ＝４．６ｎＭ、図２０）および表面プラズモン共鳴測定によって（ＫＤ＝４．７ｎＭ）決定した。１９０−Ａ３−００４についてのＩＣ５０（５０％阻害濃度）、０．１ｎＭを細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した（図２２）。しかし５’末端伸長鎖の２ヌクレオチドへの切断は、結合親和性の非常に強い低下を生じる（１９０−Ａ３−０００７、図６および図１９）。
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｂ２および１９７−Ｈ１（コアヌクレオチド配列：
）、１９７−Ｈ３／１９１−Ａ５（コアヌクレオチド配列：
）および１９７−Ｅ３／１９７−Ｂ１（コアヌクレオチド配列：
）は、ほぼ同じコアヌクレオチド配列（Ｃ型 式−４、ヌクレオチド配列：
）を共有する。１９１−Ｄ５−００１，１９７−Ｂ２および１９７−Ｈ１は、同様の５’および３’末端伸長鎖（１９７−Ｈ３および１９７−Ｅ３は１９７−Ｂ２と同じ５’および３’末端伸長鎖を有する）を共有しない。しかし、それぞれ５’末端伸長鎖の１０ヌクレオチド（１９７−Ｂ２、１９７−Ｅ３、１９７−Ｈ３）または１０ヌクレオチドの内９個（１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１）は、それぞれ３’末端伸長鎖の１０ヌクレオチド（１９７−Ｂ２、１９７−Ｅ３、１９７−Ｈ３）または１０ヌクレオチドの内９個（１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１）とハイブリダイズできる（図５）。したがってＣ型ＳＤＦ−１結合核酸の上に述べた１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３および１９７−Ｈ３に加えて１９１−Ａ５、１９７−Ｂ１、１９７−Ｈ２、１９７−Ｄ１および１９７−Ｄ２の５’末端伸長鎖は、共通の一般的ヌクレオチド配列「ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ」（Ｃ型、式５−５’）を含む。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸の上に述べた１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３および１９７−Ｈ３に加えて１９１−Ａ５、１９７−Ｂ１、１９７−Ｈ２、１９７−Ｄ１および１９７−Ｄ２の３’末端伸長鎖は、共通の一般的ヌクレオチド配列「ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ」（Ｃ型、式５−３’）を含み、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３および１９７−Ｈ３の５’および３’末端伸長鎖は、好ましい。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３および１９７−Ｈ３のこれらの好ましい５’および３’末端伸長鎖は、一般式「ＲＫＳＢＵＧＳＶＧＲ」（Ｃ型、式６−５’、５’末端伸長鎖）および「ＹＣＮＲＣＡＳＳＭＹ」（Ｃ型、式６−３’、３’末端伸長鎖）にまとめることができる。
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１の切断誘導体を構築し、元の分子１９１−Ｄ５−００１に対する競合プルダウン結合アッセイにおいて検査した（図７Ａ、図７Ｂおよび図１９）。最初に５’および３’末端伸長鎖の長さをそれぞれ１０ヌクレオチド（１９１−Ｄ５−００１）からそれぞれ７ヌクレオチド（１９１−Ｄ５−００４）に図７Ａに示すとおり短縮し、それにより５’末端伸長鎖のおよび３’末端伸長鎖の１０ヌクレオチドの内の９個（１９１−Ｄ５−００１）または７ヌクレオチドの内の６個（１９１−Ｄ５−００４）はそれぞれ相互にハイブリダイズできる。５’および３’末端伸長鎖のそれぞれ７ヌクレオチドへの縮小（７ヌクレオチドの内６個は相互にハイブリダイズできる）は、ＳＤＦ−１への結合親和性の低下を生じた（１９１−Ｄ５−００４）。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００４の末端伸長鎖を改変し、１９１−Ｄ５−００４の３’末端伸長鎖中の非対合ヌクレオチド「Ａ」を「Ｃ」で置換した（１９１−Ｄ５−００５）。この改変は、結合の改善をもたらした。この誘導体、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００５は、１９１−Ｄ５−００１と同様のＳＤＦ−１への結合を示した。５’および３’末端伸長鎖のさらなるそれぞれ５ヌクレオチドへの切断は、合計２９ヌクレオチドの長さを有する分子（１９１−Ｄ５−００７）を生じる。１９１−Ｄ５−００１とＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９１−Ａ５、１９７−Ｈ３、１９７−Ｂ１、１９７−Ｅ３、１９７−Ｄ１、１９７−Ｈ２および１９７−Ｄ２との類似性により、ならびに１９１−Ｄ５−００７について示されたデータにより、５’および３’末端伸長鎖が原理上は５ヌクレオチドに切断できることが推定でき、５’末端伸長鎖についてのヌクレオチド配列「ＣＧＧＧＡ」および３’末端伸長鎖についての「ＵＣＣＣＧ」の検査は成功した（Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００７ ０１０）。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００７は、驚くべきことに１９１−Ｄ５−００１よりもいくらか優れたＳＤＦ−１への結合性を示す（競合結合アッセイを使用してアプタマーレベルで決定した）。１９１−Ｄ５−００７の平衡結合定数ＫＤを、プルダウン結合アッセイを使用して（ＫＤ＝２．２ｎＭ、図２０）、および表面プラズモン共鳴測定によって（ＫＤ＝０．８ｎＭ、図２１）決定した。１９１−Ｄ５−００７についてのＩＣ５０（５０％阻害濃度）、０．１ｎＭを細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した。両末端伸長鎖のさらなる切断は、４ヌクレオチドまでに及んだ（１９１−Ｄ５−０１０、図７Ａ）。
それぞれ４ヌクレオチドの５’および３’末端伸長鎖を保有するＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１のさらなる誘導体（１９１−Ｄ５−０１７／−０２４／−０２９）も１９１−Ｄ５−００７に対する競合プルダウン結合アッセイにおいてＳＤＦ−１への結合親和性の低下を示した（図７Ｂ）。それぞれ長さ５ヌクレオチドを有する代替の５’および３’末端伸長鎖もさらに検査した（１９１−Ｄ５−０１７−２９ａ、１９１−Ｄ５−０１７−２９ｂ、１９１−Ｄ５−０１９−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ｂ）。５’末端伸長鎖についてのこれらの誘導体の一般式は、「ＸＳＳＳＳＶ」（Ｃ型、式７−５’）であり、３’伸長鎖については、「ＢＳＳＳＸＳ」Ｃ型、式７−３’）であり、ここでＸＳは不在またはＳ」である。検査した５個の変異の内２個は、１９１−Ｄ５−００７と同じＳＤＦ−１への結合親和性を示した（１９１−Ｄ５−０２４−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ｂ、図７Ｂ）。ＳＤＦ−１への最良の結合親和性を示し、かつそれぞれ５ヌクレオチドの５’末端および３’末端伸長鎖を含む１９１−Ｄ５−００１誘導体（１９１−Ｄ５−００７、１９１−Ｄ５−０２４−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ｂ）の５’末端および３’末端伸長鎖の配列は、一般式（５’末端伸長鎖「ＳＧＧＳＲ」、Ｃ型、式８−５’、３’末端伸長鎖ＹＳＣＣＳ」、Ｃ型、式８−３’）にまとめることができる。
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２の切断誘導体を元の分子１９７−Ｂ２および１９１−Ｄ５−００７に対する競合プルダウン結合アッセイにおいて分析した（図８）。１９１−Ｄ５−００７に対する競合プルダウン結合アッセイを使用して、１９７−Ｂ２が１９１−Ｄ５−００７と同様のＳＤＦ−１への結合親和性を有することが示された。５’および３’末端伸長鎖は、それぞれ１０ヌクレオチド（１９７−Ｂ２）からそれぞれ５ヌクレオチド（１９７−Ｂ２−００５）に結合親和性を失うことなく縮小され、５’末端伸長鎖および３’末端伸長鎖のヌクレオチドは、互いに完全にハイブリダイズできる。１９７−Ｂ２−００５の５’末端
および３’末端
伸長鎖を１９７−Ｂ２−００６の
（５’末端伸長鎖）および
（３’末端伸長鎖）で置換した場合に、ＳＤＦ−１への結合親和性は完全に存続した。１９７−Ｂ２と１９１−Ｄ５−００１（およびその誘導体）が同じコアヌクレオチド配列
を共有することおよびそれぞれ４ヌクレオチドの長さを有する５’および３’末端伸長鎖を有する１９１−Ｄ５のいくつかの誘導体を検査したことから、５’および３’末端伸長鎖のさらなる切断は省いた。５’および３’端（５’および３’末端伸長鎖）それぞれに６ヌクレオチドを含むさらに２個の誘導体を設計した。両分子（１９７−Ｂ２−００６−３１ａおよび１９７−Ｂ２−００６−３１ｂ）のＳＤＦ−１への結合親和性は、１９１−Ｄ５−００７および１９７−Ｂ２−００６について示されたのと同様である（図８）。ＳＤＦ−１への最良の結合親和性を示し、それぞれ５ヌクレオチドの５’末端および３’末端伸長鎖を含む１９７−Ｂ２誘導体の５’末端および３’末端伸長鎖の配列は、一般式（５’末端伸長鎖「ＧＣＳＧＧ」、Ｃ型、式９−５’、３’末端伸長鎖「ＣＣＫＧＣ」、Ｃ型、式９−５’）にまとめることができる。
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１（５’末端伸長鎖「ＳＧＧＳＲ」、Ｃ型、式８−５’、３’末端伸長鎖「ＹＳＣＣＳ」、Ｃ型、式８−３’）および１９７−Ｂ２（５’末端伸長鎖「ＧＣＳＧＧ」、Ｃ型、式９−５’、３’末端伸長鎖「ＣＣＫＧＣ」、Ｃ型、式９−３’）の切断変異体の好ましい５’および３’伸長鎖を組み合わせて、５’末端および３’末端伸長鎖についての共通の好ましい一般式は、「ＳＳＳＳＲ」（５’末端伸長鎖、Ｃ型、式１０−５’）および「ＹＳＢＳＳ」（３’末端伸長鎖、Ｃ型、式１０−３’）である。
１．４ さらなるＳＤＦ−１結合核酸
さらに、「Ａ型」、「Ｂ型」および「Ｃ型」のＳＤＦ−１結合モチーフを共有しないさらなる３種のＳＤＦ−１結合核酸を同定した。それらをアプタマーとしてプルダウン結合アッセイを使用して分析した（図９）。
図１から９に示す任意の配列は、それぞれ切断および伸長された核酸分子がいまだ標的への結合が可能であるとの条件の下でその切断された形態を含み、同様にその伸長された形態をも含む、本発明による核酸であることは理解される。
＜ＳＤＦ結合スピーゲルマーの４０ｋｄａ−ＰＥＧおよび他での修飾＞
スピーゲルマーのｉｎ ｖｉｖｏ血漿滞留時間を延長するために、スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２、１９２−Ａ１０−００８、１９１−Ｄ５−００７、１９７−Ｂ２−００６および１９７−Ｂ２−００６−３１ｂを４０ｋＤａポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に５’端で第３章に記載のとおり共有結合させた。（ＰＥＧ化クローン：１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、１９２−Ａ１０−００８−５’ＰＥＧ、１９１−Ｄ５−００７−５’ＰＥＧ、１９７−Ｂ２−００６−５’ＰＥＧおよび１９７−Ｂ２−００６−３１ｂ−５’ＰＥＧ）
ＰＥＧ化スピーゲルマー分子を細胞培養ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＴＡＸアッセイにおいて（第５章）およびＢｉａｃｏｒｅを使用するプラズモン共鳴測定によって（第６章）分析した。すべての４０ｋＤａ−ＰＥＧ修飾スピーゲルマーは、依然としてＳＤＦ−１誘発走化性を阻害でき、かつ低ナノモル範囲でＳＤＦ−１に結合できる（図２３Ａ、２３Ｂ、２４Ａおよび図２４Ｂ）。
さらに、ＳＤＦ結合スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１を４０ｋＤａ−ＰＥＧ、３０ｋＤａ−ＰＥＧ、１００ｋＤａ−ＨＥＳまたは１３０ｋＤａ−ＨＥＳで修飾した（ＰＥＧ化クローン：１９２−Ａ１０−００１−５’ＰＥＧ４０、１９２−Ａ１０−００１−５’ＰＥＧ３０、１９２−Ａ１０−００１−５’ＨＥＳ１００、１９２−Ａ１０−００１−５’ＨＥＳ１３０、結合手順は第３章）。図２５Ａおよび図２５Ｂに示すとおり、ＰＥＧ基またはＨＥＳ基のいずれもＳＤＦ−１誘発走化性を阻害するスピーゲルマーの強度に影響を有さない。
＜アプタマーおよびスピーゲルマーの合成および誘導体化＞
３．１ 小規模合成
アプタマーおよびスピーゲルマーを、ＡＢＩ３９４合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）で２’ＴＢＤＭＳ ＲＮＡホスホラミダイト化学（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）を使用して固相合成によって産生した。Ｄ−およびＬ−立体構造でのｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、ｒＣ（Ａｃ）−、ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−およびｒＵ−ホスホラミダイトはＣｈｅｍＧｅｎｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡから購入した。アプタマーおよびスピーゲルマーはゲル電気泳動によって精製した。
３．２ 大規模合成に加えて修飾
スピーゲルマーをＡｋｔａＰｉｌｏｔ１００合成機（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）で２’ＴＢＤＭＳ ＲＮＡホスホラミダイト化学（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）を使用する固相合成によって産生した。Ｌ−ｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、Ｌ−ｒＣ（Ａｃ）−、Ｌ−ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−およびＬ−ｒＵ−ホスホラミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。５’−アミノ修飾因子は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。スピーゲルマーの合成は、Ｌ−ｒｉｂｏＧ、Ｌ−ｒｉｂｏＣ、Ｌ−ｒｉｂｏＡ、Ｌ−ｒｉｂｏＵ、それぞれの修飾ＣＰＧ孔径１０００Å（Ｌｉｎｋ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）で開始した。カップリング（１サイクルあたり１５分間）のために、アセトニトリル中０．３Ｍベンジルチオテトラゾール（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）、およびアセトニトリル中のそれぞれ０．２Ｍホスホラミダイト溶液３．５等量を使用した。酸化キャピングサイクルを使用した。オリゴヌクレオチド合成のためにさらなる標準的な溶媒および試薬を、Ｂｉｏｓｏｌｖｅ（Ｖａｌｋｅｎｓｗａａｒｄ，ＮＬ）から購入した。スピーゲルマーは、ＤＭＴ−ＯＮで合成し、脱保護後、Ｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して調製用ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｗｉｎｃｏｔｔ Ｆ．ら、１９９５）を介して精製した。５’ＤＭＴ基は、８０％酢酸（室温、９０分間）で除去した。引き続いて水性２ＭのＮａＯＡｃ溶液を加え、スピーゲルマーを５Ｋ再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用する接線流ろ過によって脱塩した。
３．３ ＰＥＧ化
スピーゲルマーのｉｎ ｖｉｖｏ血漿滞留時間を延長するために，スピーゲルマーを４０ｋＤａポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に５’端で共有結合させた。
ＰＥＧ化のために（ＰＥＧ化のための方法の技術的詳細については欧州特許出願ＥＰ１３０６３８２号を参照されたい）、精製した５’−アミノ修飾スピーゲルマーをＨ２Ｏ（２．５ｍｌ）、ＤＭＦ（５ｍｌ）および緩衝液Ａ（５ｍｌ、クエン酸・Ｈ２Ｏ［７ｇ］、ホウ酸［３．５４ｇ］、リン酸［２．２６ｍｌ］および１Ｍ ＮａＯＨ［３４３ｍｌ］を混合し、最終容量１ｌまで水を加えることによって調製、１ＭのＨＣｌでｐＨ＝８．４に調整）の混合物に溶解した。
スピーゲルマー溶液のｐＨを１ＭのＮａＯＨで８．４にした。次いで４０ｋＤａのＰＥＧ−ＮＨＳエステル（Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）を３７℃、３０分ごとに０．２５等量の６回に分けて、７５から８５％の最大収量に達するまで加えた。反応混合物のｐＨは、ＰＥＧ−ＮＨＳエステルの添加の間は１ＭのＮａＯＨにより８〜８．５に保った。
反応混合物を尿素溶液（８Ｍ）４ｍｌおよび緩衝液Ｂ（Ｈ２Ｏ中の０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム）４ｍｌと混ぜ、１５分間、９５℃に加熱した。ＰＥＧ化スピーゲルマーを次いでＳｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）でのＲＰ−ＨＰＣＬによって、アセトニトリル勾配（緩衝液Ｂ、緩衝液Ｃ：アセトニトリル中の０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム）を使用して精製した。過剰のＰＥＧは５％緩衝液Ｃで、ＰＥＧ化スピーゲルマーは１０〜１５％緩衝液Ｃで溶出した。純度（ＨＰＬＣによって評価）＞９５％の産物画分を合わせ、３ＭのＮａＯＡｃ（４０ｍｌ）と混合した。ＰＥＧ化スピーゲルマーを接線流ろ過（５Ｋ再生セルロース膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）によって脱塩した。
３．４ ＨＥＳ化
スピーゲルマーのｉｎ ｖｉｖｏ血漿滞留時間を延長するために，スピーゲルマーを＞１３０ｋＤａの種々の分子量のヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）に共有結合させ、置換度は＞０．５であった。スピーゲルマーの５’端が複合のための好ましい部位である。
ＨＥＳ化のために（核酸のヘス化のための方法の技術的詳細についてはドイツ特許出願公開（Ｇｅｒｍａｎ Ｏｆｆｅｎｌｅｇｕｎｇｓｓｃｈｒｉｆｔ）ＤＥ１０１１２８２５Ａ１を、Ｄ／Ｌ−核酸についてはＰＣＴ ＷＯ０２／０８０９７９Ａ２を参照されたい）、精製した５’−アミノ修飾スピーゲルマーを炭酸水素ナトリウム（０．３Ｍ、１ｍｌ）に溶解し、ｐＨを８．５に調整する。
スピーゲルマーに関して、５倍過剰量の遊離ＨＥＳ酸（３．３ｍｏｌ、Ｓｕｐｒａｍｏｌ，Ｒｏｓｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および炭酸ジ（Ｎ−サクシンイミジル）（３．３ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍｌ）にＨＥＳの活性化Ｎ−ヒドロキシサクシミドエステルの溶液を得るために加えた。すべての反応物を溶解し、混合物を短時間６０℃で撹拌し、２５℃に冷却し、次いで２５℃で１．５時間撹拌した。スピーゲルマーの溶液を活性化ＨＥＳの溶液に加え、得られた混合物を２５℃、ｐＨ８．５で撹拌した。反応は分析的ＩＥＸ−ＨＰＬＣでモニターした。典型的には複合は１時間以内に＞７５％進行した。
Ｓｏｕｒｃｅ１５Ｑ媒体（ＧＥ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を介するＩＥＸ−ＨＰＬＣ精製のために反応混合物を１０倍量の緩衝液Ａ（水／アセトニトリル ９：１中の１ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのＴｒｉｓ、１０ｍＭのＮａＣｌＯ４、ｐＨ４）と混ぜた。過剰のＨＥＳは５％緩衝液Ａ（水／アセトニトリル＝９：１中の１ｍＭ ＥＤＴＡ、２５ｍＭのＴｒｉｓ、５００ｍＭのＮａＣｌＯ４、ｐＨ４）で、一方ＨＥＳ−スピーゲルマー結合体は２０〜３０％緩衝液Ｂで溶出した。純度（ＨＰＬＣによって評価）＞９５％の産物画分を合わせ、接線流ろ過（５Ｋ再生セルロース膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）によって脱塩した。
＜結合定数の決定（プルダウン結合アッセイ）＞
４．１ 直接プルダウン結合アッセイ
ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１へのアプタマーの親和性をプルダウン結合アッセイ形式で３７℃で測定した。アプタマーをＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で［γ−３２Ｐ］標識ＡＴＰ（Ｈａｒｔｍａｎｎ Ａｎａｌｙｔｉｃ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して５’リン酸標識した。標識アプタマーの特異的放射活性は２０００００〜８０００００ｃｐｍ／ｐｍｏｌであった。アプタマーを変性および再生後に１０、２０、３０または４０ｐＭの濃度で３７℃、選択緩衝液中（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４；１３７ｍＭのＮａＣｌ；５ｍＭのＫＣｌ；１ｍＭのＭｇＣｌ２；１ｍＭのＣａＣｌ２；０．１％［重量／容量］Ｔｗｅｅｎ−２０）で様々な量のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１と４〜１２時間、低濃度で平衡に達するようにインキュベートした。選択緩衝液に１０μｇ／ｍｌヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および１０μｇ／ｍｌ酵母ＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＵＳＡ）を、使用するプラスチック製品または固定化材料の表面への結合パートナーの吸収を抑制するために補充した。ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度範囲は８ｐＭから１００ｎＭに設定し、総反応容量は１ｍｌであった。ペプチドおよびペプチドアプタマー複合体を、選択緩衝液に予め平衡化し、総容量６μｌに再懸濁した１．５μｌのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｕｌｔｒａｌｉｎｋ Ｐｌｕｓ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＵＳＡ）に固定化した。粒子を各温度でのサーモミキサー中で３０分間懸濁液中に保持した。固定化された放射活性を、上清の分離および適切な洗浄の後にシンチレーションカウンターで定量した。結合の百分率をビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度に対してプロットし、解離定数をソフトウェアアルゴリズム（ＧＲＡＦＩＴ；Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ；Ｓｕｒｒｅｙ Ｕ．Ｋ．）を使用することによって１：１化学量論を仮定して得た。
４．２ 競合プルダウン結合アッセイ
様々なＤ−ＳＤＦ−１結合アプタマーを比較するために、競合順位付けアッセイを実施した。この目的のために入手可能な最も親和性の（ａｆｆｉｎｅ）アプタマーを放射性標識し（上記を参照されたい）、基準として使用した。変性および再生後にビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１と３７℃、１ｍｌ選択緩衝液中で、競合させずに固定化およびＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎアガロースまたはＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｕｌｔｒａｌｉｎｋ Ｐｌｕｓ（どちらもＰｉｅｒｃｅから）で洗浄後にペプチドへのおよそ５〜１０％の結合を生じる条件下でインキュベートした。変性および再生させた非標識Ｄ−ＲＮＡアプタマーバリアントの過剰量を平行結合反応のための標識基準アプタマーと共に様々な濃度（例えば、２、１０および５０ｎＭ）まで加えた。検査するアプタマーは、標的結合について基準アプタマーと競合し、したがってその結合特徴に応じて結合シグナルが低下する。このアッセイで最も活性であると見出されたアプタマーは次いでさらなるアプタマーバリアントの競合分析のための新たな基準として使用できた。
＜ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーによるＳＤＦ−１誘発走化性の阻害の分析＞
ジャーカットヒトＴ細胞白血病細胞（ＤＳＭＺ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇから得た）を３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ウシ胎児血清、１００単位／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有するＧｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。実験の前日、細胞を新たなフラスコに１ｍｌあたり０．３×１０６個（３０ｍｌ中に９×１０６個）の密度で標準培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種した。
実験用に細胞を遠心分離し（３００ｇ、５分間）、再懸濁し、計数し、かつ１５ｍｌのＨＢＨ（１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンおよび２０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するハンクス平衡塩溶液、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で１回洗浄した。次いで細胞を使用するフィルタープレートの種類に応じて、１ｍｌあたり３×１０６個または１ｍｌあたり１．３３×１０６個で再懸濁した。次いで細胞をフィルタープレートの多孔性膜を通じて数時間ＳＤＦ−１および種々の量のスピーゲルマーを含有する溶液に向けて移動させた。トランスウェルプレートおよび多孔性ポリカーボネート膜、孔径５μｍ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３４２１）付きのインサート、またはＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ ＭＩＣプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＭＡＭＩＣ５Ｓ１０）を使用した。
５．１ トランスウェルプレート用の手順
刺激溶液（ＳＤＦ−１＋種々の濃度のスピーゲルマー）を、トランスウェルプレートの下側コンパートメント中のＨＢＨ（６００μｌ）に作製し、２０〜３０分間インキュベートした。すべての条件を少なくとも２回行った。インサートを刺激溶液を含むウェルに移し、１ｍｌあたり３×１０６個の細胞懸濁液１００μｌをインサートに加えた（１ウェルあたり細胞３×１０５個）。次いで細胞は３時間、３７℃で移動させた。
その後、インサートを除去し、６０μｌレサズリン（Ｓｉｇｍａ，Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）使用溶液（ＰＢＳ中、４４０μＭ；Ｂｉｏｃｈｒｏｍ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）をウェルに（較正ウェルにも）加えた。次いでプレートを３７℃、２．５から３時間インキュベートした。インキュベーション後、各ウェルの２００μｌを黒色９６ウェルプレートに移した。蛍光シグナルの測定を５４４ｎｍ（励起）および５９０ｎｍ（発光）でＦｌｕｏｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａ ｍｕｌｔｉｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ（ＢＭＧ，Ｏｆｆｅｎｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）において行った。
５．２ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎプレート用手順
刺激溶液（ＳＤＦ−１＋種々の濃度のスピーゲルマー）を、０．２ｍｌの低プロファイル９６チューブプレート中に１０×溶液として作製した。ＨＢＨ（１３５μｌ）をＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎプレートの下側コンパートメントに分注し、刺激溶液１５μｌを加えた。すべての条件を３回反復で行った。２０から３０分後、フィルタープレートを、刺激溶液を含むプレートに挿入し、１ｍｌあたり１．３３×１０６個の細胞懸濁液７５μｌをフィルタープレートのウェルに加えた（１ウェルあたり細胞１×１０５個）。次いで細胞は３時間、３７℃で移動させた。
その後、インサートプレートを除去し、２０μｌレサズリン使用溶液（ＰＢＳ中、４４０μＭ）を下側ウェルに加える。次いでプレートを３７℃、２．５から３時間インキュベートした。インキュベーション後、各ウェルの１００μｌを黒色９６ウェルプレートに移した。蛍光シグナルの測定を上に記載のとおり行った。
５．３ 評価
評価のために、蛍光値をバックグラウンド蛍光（細胞を含まないウェル）に対して補正した。次いでＳＤＦ−１を含むまたは含まない実験条件間の差異を算出した。スピーゲルマーを含まない（ＳＤＦ−１のみ）試料についての値を１００％と設定し、スピーゲルマーを含む試料についての値をこれに対する百分率として算出した。用量反応曲線のために百分率をスピーゲルマーの濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値（スピーゲルマーを含まない場合の活性の５０％が存在するスピーゲルマーの濃度）を得られた曲線から図表で決定した。
５．４ 結果
５．４．１ ヒトＳＤＦ−１によるジャーカット細胞の用量依存刺激
ヒトＳＤＦ−１は、用量依存的に、最大半量の刺激が約０．３ｎＭでジャーカット細胞の移動を刺激することが見出された（図１１）。
５．４．２ ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーによるヒトＳＤＦ−１誘発走化性の用量依存的阻害
ヒトＳＤＦ−１に加えて漸増する濃度のＳＤＦ−１結合スピーゲルマーを含有する溶液に向かって細胞を移動させる場合、用量依存的阻害が観察された。検査したスピーゲルマーそれぞれのＩＣ５０を実施例１に記す。非特異的対照スピーゲルマーをＳＤＦ−１結合スピーゲルマーの代わりに使用する場合、阻害効果は１μＭまで観察されなかった（図２６）。
５．４．３ ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーによるマウスＳＤＦ−１誘発走化性の用量依存的阻害
ＳＤＦ−１は、種の間でよく保存されている：マウス由来ＳＤＦ−１はヒトＳＤＦ−１ａと１アミノ酸異なる（位置１８でバリンの代わりにイソロイシン）。マウスＳＤＦ−１は、ジャーカット細胞の走化性を刺激でき（図２７）、この作用はスピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１および１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧによってヒトＳＤＦ−１の場合と同じ強度で阻害されることが見出された（図２８）。
＜表面プラズモン共鳴測定による結合分析＞
Ｂｉａｃｏｒｅ２０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）をスピーゲルマーのヒトＳＤＦ−１αへの結合を分析するために使用した。ＳＤＦ−１αのカップリングがアミン基を介して達成された場合は、ＳＤＦ−１αを干渉するアミンを除くために水に対して１〜２時間透析した（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＶＳＷＰ ｍｉｘｅｄ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｅｓｔｅｒｓ；孔径０．０２５μＭ）。ＣＭ４センサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）をタンパク質のカップリングの前に０．４ＭのＮＨＳと０．１ＭのＥＤＣとの１：１希釈物の流速５μｌ／分での３５〜μｌの注入によって活性化させた。次いで０．１〜１．５μｌ／ｍｌの濃度のケモカインを流速２μｌ／分で装置の応答が１０００〜２０００ＲＵ（相対単位）の範囲になるまで注入した。未反応ＮＨＳエステルをエタノールアミン塩酸塩溶液（ｐＨ８．５）３５μｌの流速５μｌ／分での注入によって不活性化した。センサーチップを結合緩衝液で２回プライムし、１０μｌ／分で１〜２時間ベースラインが安定するまで平衡化した。すべてのタンパク質について、動態パラメーターおよび解離定数を、選択緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１３７ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１％［ｗ／ｖ］Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）中の濃度１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５および０ｎＭでの一連のスピーゲルマーの注入によって評価した。すべての実験において分析は、３７℃で、流速１０μｌ／分での会合時間１８０秒間および解離時間３６０秒間を定めるＫｉｎｊｅｃｔコマンドを使用して実施した。データ分析および解離定数（ＫＤ）の算出は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ３．０ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢＩＡＣＯＲＥ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）でラングミュア１：１化学量論的適合アルゴリズムを使用して行った。
＜ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーによるＣＸＣＲ４発現細胞への［１２５Ｊ］−ＳＤＦ−１結合の阻害＞
７．１ 方法
ヒトＣＸＣＲ４受容体（ＮＭ＿００３４６７．２）をコードするｃＤＮＡクローンをＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）から購入し、ｐＣＲ３．１ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）にクローン化した。得られたベクターを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＤＳＭＺ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に形質移入し、安定に発現する細胞系をジェネティシンでの処置によって選択した。受容体の発現はＲＴ−ＰＣＲによって確認した。
結合アッセイのためにＣＸＣＲ４発現細胞をポリリジンコート２４ウェルプレートに１ウェルあたり細胞１×１０５個の細胞密度で播種し、５０単位／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび０．５ｍｇ／ｍｌジェネティシンを含有するＣＨＯ−Ｕｌｔｒａ培地（Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）中、３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。
結合実験のために培地を除去し、細胞を、さらに２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン、０．１ｍｇ／ｍｌバシトラシン（ＨＢＢ）を含有するハンクス平衡塩溶液で１回洗浄した。次いで細胞をＨＢＢ ０．２ｍｌ中で１時間、室温で５０ｐＭ［１２５Ｊ］−ＳＤＦ−１（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｒｏｄｇａｕ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および種々の濃度のスピーゲルマーと共にインキュベートした。
非特異的結合を非標識ヒトＳＤＦ−１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を最終濃度０．５μＭまでいくつかのウェルに加えることによって決定した。
インキュベーション後、上清を除去し、ウェルを氷冷ＨＢＢで３回洗浄した。その後細胞を０．１Ｍ ＮａＯＨ ０．１ｍｌで溶解した。溶解物をシンチレーションバイアルに移し、Ｕｎｉｓａｆｅ １ Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｚｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｚｉｎｓｓｅｒ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）４ｍｌの添加後、Ｂｅｃｋｍａｎ ＬＳ６５００シンチレーションカウンターで計数した。
非特異的結合（多量の非標識ＳＤＦ−１の存在下での結合）についての値が高濃度（５００ｐＭ）のスピーゲルマーの存在下での全結合についての値よりも幾分か高かったことから、最大結合（「最大」）と５００ｐＭスピーゲルマー存在下での結合との間の差をＩＣ５０値の算出に使用した。
７．２ 結果
スピーゲルマー濃度に対して結合した［１２５Ｊ］−ＳＤＦ−１をプロットすることは、ＳＤＦ−１の結合が、スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００１によって約６０ｐＭのＩＣ５０で遮断できることを明らかにした（図２９）。
＜ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーによるＳＤＦ−１誘発ＭＡＰキナーゼ活性化の阻害＞
８．１ 方法
ＣＸＣＲ４発現ＣＨＯ細胞を６ウェルプレートに１ウェルあたり細胞０．５×１０６個の密度で播種し、５０単位／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび０．５ｍｇ／ｍｌジェネティシンを含有するＣＨＯ−Ｕｌｔｒａ培地（Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）中、３７℃、５％ＣＯ２で約３時間培養した。細胞接着後、培地を除去し、５０単位／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含有するハムＦ１２培地で置換した。次いで細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。刺激の３時間前に、再度培地を新鮮ハムＦ１２培地で置換した。細胞をヒト１ｎＭ ＳＤＦ−１および種々の量のスピーゲルマーで５または１０分間刺激した。その後培地を除去し、細胞を氷冷リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１ｍｌで迅速に１回洗浄し、続いてＳＤＳ試料緩衝液（６２．５ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ６．８、１０％グリセロール、２％ＳＤＳ、０．０１％ブロモフェノールブルー、５％ベータメルカプトエタノール）で溶解した。０．５ｕ／μｌ Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｍｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）１μｌを各ウェルに加え、５から１０分間の室温でのインキュベーション後、溶解物をエッペンドルフチューブに移し、９５℃５分間インキュベートし、さらなる分析まで−２０℃で保存した。
溶解物２５μｌを１０％変性ＳＤＳポリアクリルアミドゲルで分離した。次いでタンパク質を電気的ブロッティングによってＨｙｂｏｎｄＥＣＬニトロセルロース膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に転写した。ブロッティング後、タンパク質の添加量および転写の対照のために膜をポンソーレッド（３％トリクロロ酢酸中０．２％）で染色し、次いで１０％脱脂粉乳を含有するＴＢＳ−Ｔ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴｒｉｓ緩衝塩溶液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．６、１３７ｍＭ ＮａＣｌ））中での２〜８℃、一晩のインキュベーションによりブロックした。
次いで膜をウサギ抗ホスホＭＡＰキナーゼ抗体（１０％ミルクを含むＴＢＳ−Ｔ中１：１０００）と室温で２時間インキュベートした。ＴＢＳ−Ｔでの５分間、３回の洗浄後、膜を抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ複合体（１０％ミルクを含むＴＢＳ−Ｔ中１：２０００）と室温、１時間インキュベートした。次いで膜を再度ＴＢＳ−Ｔで５分間、３回洗浄し、ＬｕｍｉＧｌｏ（登録商標）化学発光試薬中、１分間のインキュベーションが続いた。発光は、Ｈｙｐｅｒｆｉｌｍ（商標）ＥＣＬ化学発光フィルム（Ａｍｅｒｓｈａｍ／ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）への３０秒間から２分間の露光によって検出した。抗体および発光検出試薬は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ ａ．Ｍ．，Ｇｅｒｍａｎｙ）からのＰｈｏｓｐｈｏＰｌｕｓ ｐ４４／４２ ＭＡＰ Ｋｉｎａｓｅ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）抗体キットの構成材である。
８．２ 結果
ＣＸＣＲ４発現細胞の１ｎＭヒトＳＤＦ−１での５分間の刺激は、活性化ＭＡＰ−キナーゼを反映するバンドの強度の増加によって示されるＭＡＰ−キナーゼの強い刺激を生じた。このＭＡＰ−キナーゼの活性化は、スピーゲルマー１９１−Ａ１０−００１によって用量依存的に阻害できた（図３０）。
ヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧの大動脈リング出芽アッセイにおける機能分析
ヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧが標準的血管新生器官培養アッセイにおいても機能的であるかどうかを検査するために、大動脈リング出芽アッセイを実施した。移植片からの血管様伸長の長さおよび存在量が評価されるこのアッセイは、最も広く使用される血管新生についての器官培養モデルである（Ａｕｅｒｂａｃｈら、２００３）。ＳＤＦ−１がこの種のアッセイにおいて出芽を誘発することは既に示されている（Ｓａｌｃｅｄｏら、１９９９）。
ラット大動脈を輪切りにし、コラーゲンマトリックスに抱埋し、ＳＤＦ−１および、ＳＤＦ−１に加えてヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、またはＳＤＦに加えてＳＤＦ−１に結合しない非機能性ＰＥＧ化対照スピーゲルマーと共にインキュベートした。６から７日後、出芽（すなわち内皮細胞の異常増殖）を写真撮影および出芽指数の決定によって分析した。
９．１ 方法
ラット（オス）由来の大動脈をＢａｇｈｅｒｉ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。大動脈を新たに調製し、５０単位／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（どちらもＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および２．５μｇ／ｍｌファンギゾン（Ｃａｍｂｒｅｘ，ＵＳＡ）を含有するＭＣＤＢ１３１培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中で、氷上で運んだ。
実験用に単一の大動脈を細胞培養皿に培地と共に移し、残存している結合組織を除去した。次いで大動脈をメスで約１から２ｍｍ長の輪切りにした。リングをＭｅｄｉｕｍ１９９（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中で強く洗浄し、次いで１ウェルあたりコラーゲン溶液４５０μｌを含む２４ウェルプレートのウェルに置いた。このコラーゲン溶液は、ラット尾部コラーゲン（０，１％酢酸中３ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ，Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）９ｍｌと、１０×Ｍｅｄｉｕｍ１９９（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）１．１２ｍｌ、１０×コラーゲン緩衝液（０，０５ＮのＮａＯＨ、２００ｍＭのＨＥＰＥＳ、２６０ｍＭのＮａＨＣＯ３）１，１２ｍｌおよび２００ｍＭ グルタミン０．６ｍｌとを混合することによって調製した。切断端がウェルの底に垂直になるようにリングを向かせた。プレートを３７℃で少なくとも１時間インキュベートすることによってコラーゲンを凝固させた。その後、付加物（ＳＤＦ−１およびスピーゲルマー）を含むＭＣＤＢ１３１培地を１ウェルあたり１ｍｌ加えた。次いでリングを３７℃で６から７日間インキュベートした。出芽についての対照としてＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）での実験をさらに実施した。
出芽は、デジタルカメラでの写真撮影によって記録した。いくつかの場合ではリングを１０％パラホルムアルデヒド１ｍｌの添加によって固定し、さらなる記録のために２〜８℃で保存した。写真は、Ｓｃｉｏｎ Ｉｍａｇｅ画像処理ソフトウェアで分析した。マイクロメーターステージで撮影した写真を使用する校正後、リングの一端から０．３３ｍｍごとに線を描いた。この線に沿ってプロットヒストグラムをソフトウェアによって作成した。ヒストグラムを印刷し、ピーク（線に交差する出芽を表す）を計数した。この数を出芽指数とした。条件１つあたりリングを４から５個評価した。統計的分析をＷｉｎＳＴＡＴ ｆｏｒ Ｅｘｃｅｌで実施した。
９．２ 結果
ＳＤＦ−１が出芽誘発すること、およびこの効果がヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧで遮断され得ることが実証できた。ＳＤＦ−１誘発出芽の遮断は、非機能性ＰＥＧ化対照スピーゲルマーによってでは観察されなかった（図３１および３２）。
＜３０または４０ｋＤａのＰＥＧで誘導体化したＮＯＸ−Ａ１２の単回静脈内注射によるマウスでの造血幹細胞／造血前駆細胞（ＨＳＣ／ＨＰＣ）の動員＞
１０．１ 検査物質および投与スキーム
マウスにＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＮＯ３０（配列番号２４２）または、ＳＤＦ−１への結合活性を有さない対照スピーゲルマーｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２（配列番号２４３）の１３．４ｍｇ／ｋｇをｉ．ｖ．注射した。注射の１、６、２４または４８時間後に［物質１つおよび時点１つあたりマウス５匹］動物を屠殺し、血液を得た。対照群は、ビヒクル（５％グルコース）、ＡＭＤ−３１００（Ｓｉｇｍａ，Ｆｒａｎｃｅ，５ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ，ニューポジェン）（マウス１匹、１回注射あたり２．５μｇ、１２時間ごと）を注射した。動物の屠殺は上記と同じ時点で行った（図３３を参照されたい）。Ｇ−ＣＳＦ（ニューポジェン）群について、１２時間ごとに注射１回の注射スキームにより１および６時間後に屠殺される動物は、したがって注射を１回だけ受け、２４時間で屠殺される群は注射を２回受け（０および１２時間）、４８時間で屠殺される群は注射を４回受ける（０、１２、２４および３６時間）（図３３を参照されたい）。血液細胞数を血球計数器で決定した。
１０．２ ＨＳＣ／ＨＰＣの検出
全血５０μｌを最初に、染色緩衝液（ＰＢＳ［Ｒｅｆ １７−５１６Ｆ，Ｌｏｎｚａ］、０．２％ＢＳＡ［Ｒｅｆ Ａ７０３０，Ｓｉｇｍａ］、０．０２％ＮａＮ３［Ｒｅｆ Ｓ２００２，Ｓｉｇｍａ］中のＦｃＲブロッキング試薬（Ｒｅｆ １３０−０９２−５７２、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）とインキュベートし、次いで室温、暗所で３０分間、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ１１７およびＰＥ結合抗Ｌｙ−６Ａ／Ｅ抗体と、または対応するアイソタイプとインキュベートした（以下の表に記載のとおり）。
赤血球を「Ｆｉｘ ａｎｄ Ｌｙｓｅ」手順を使用して溶解した。簡潔には、「Ｆｉｘ ａｎｄ Ｌｙｓｅ」緩衝液をＩＯＴｅｓｔ溶液３（１０×Ｆｉｘａｔｉｖｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ［Ｒｅｆ Ａ０７８００，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｖｉｌｌｅｐｉｎｔｅ，Ｆｒａｎｃｅ］）２５μｌをＶｅｒｓａＬｙｓｅ［Ｒｅｆ Ａ０９７７７，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ］１ｍｌに加えることによって調製し、混合物の１ｍｌを染色した細胞に加えた。ボルテックスおよび暗所、室温での１０分間のインキュベート後、細胞を遠心分離し、染色緩衝液３ｍｌで１回洗浄し、基準マイクロビーズ溶液（ＰＫＨ２６、Ｒｅｆ Ｐ７４５８、１ｍｌあたりビーズ２２００００個、Ｓｉｇｍａ、染色緩衝液に１／２希釈）１ｍｌに再懸濁した。試料を氷上に保存し、ＦＡＣＳ分析まで遮光した。
細胞の表面蛍光をフローサイトメーター装置（ＦＡＣＳ、ＣｙＦｌｏｗ（登録商標）ｓｐａｃｅ）で波長４８８ｎｍレーザー励起を使用して分析した。合計１００００事象を各試料について集めた。
１０．３ １μＬあたりの絶対細胞数の算出
血液試料の容量は５０μｌであった。調製手順の最後に、白血球（血液試料５０μｌに含有されていた）をマイクロビーズ溶液（１ｍＬにビーズ２２００００個を含有する保存溶液の１／２希釈によって得る）０．７５ｍｌに再懸濁した。この後者の溶液１ｍＬあたりの細胞数は（ＣＮ／ＢＮ）×（２２００００／２）であり、細胞の総数は（ＣＮ／ＢＮ）×（２２００００／２）×（０．７５／１）であり、ＣＮは細胞の計測数であり、ＢＮはマイクロビーズについての計測数である。
したがってこの総数の細胞が血液５０μｌ中に含有され、血液１μｌあたりの絶対細胞数（ＡＣＮ）は、（ＣＮ／ＢＮ）×（２２００００／２）×（０．７５／１）×（１／５０）である。
１０．４ コロニー形成単位（ＣＦＵ）の決定
造血前駆細胞（ＨＰＣ）／造血幹細胞（ＨＳＣ）の最大量を有する時点からの血液だけをＣＦＵアッセイの被験者にするために選択した（物質ごとにすべてのマウスについて同じ時点）。正常末梢血試料の赤血球（ＲＢＣ）除去を１０倍量の１０×溶解緩衝液（０．１ｍＭ ＥＤＴＡを含む０．８％ＮＨ４Ｃｌ）（ｒｅｆ ０７８００，ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を末梢血に加え、チューブを３〜４回反転させることによって混合し、氷上で、５〜１５分間インキュベーションすることによって実施した。７分間、１２００ｒｐｍでの遠心分離後、白血球（ＷＢＣ）を２％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｒｅｆ ＤＥ１４−８０２Ｆ，Ｌｏｎｚａ）を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）で２回洗浄した。有核ＷＢＣを血球計数器（ＭＳ９−５ ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｍｅｌｅｔ Ｓｃｈｌｏｅｓｉｎｇ，Ｏｓｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ））を使用して、メチレンブルー（Ｒｅｆ ０７０６０，ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む３％酢酸に１／２０希釈した後に計数した。
細胞を、２％熱不活性化ＦＢＳ、組換えマウス（ｒｍ）幹細胞因子（ＳＣＦ、肥満細胞ならびに骨髄前駆細胞およびリンパ前駆細胞の増殖）、ｒｍＩＬ−３およびｒｈＩＬ−６（すべての分化系列の初期骨髄前駆細胞の増殖）ならびに組換えヒトエリスロポエチン（ｒｈ ＥＰＯ，赤血球の前駆細胞の増殖）も含む、０．９％メチルセルロース含有ＩＭＤＭ（Ｒｅｆ ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ（登録商標）Ｍ０３４３４，ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に３回反復で播種した。簡潔には、１０倍濃縮ＷＢＣ（０．４ｍｌ）をメチルセルロース完全ＩＭＤＭ（最終濃度は検証実験の間に決める）に希釈し、完全にボルテックスし、分注の前に泡が消えるように２〜５分間置いた。細胞混合物を含むメチルセルロース培地１．１ｍｌをルアーロックシリンジおよび１６Ｇ平滑末端針（Ｒｅｆ ２８１１０ ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して３個の３５ｍｍ培養皿（Ｒｅｆ ２７１５０，ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のそれぞれに分注した。皿を穏やかに傾け、メチルセルロースを均一に分散させるために回転させた。３５ｍｍ皿を収容し、蓋をしていない追加の滅菌水を含む大きな皿をインキュベーション中に３５ｍｍ皿を３７℃、９５％湿度である５％ＣＯ２に７から１２日間保つために使用した。
インキュベーションの終了時に、倒立顕微鏡および６０ｍｍグリッド付きスコアリング皿（Ｒｅｆ ２７５００，ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してコロニーをＢＦＵ−Ｅ（赤芽球バースト形成細胞）、ＣＦＵ−ＧＭ（コロニー形成単位−顆粒球および／またはマクロファージ）およびＣＦＵ−ＧＥＭＭ（コロニー形成単位−顆粒球、赤芽球、マクロファージおよび巨核芽球）として手動で計数した。コロニー数は、血液１ｍＬあたりのＣＦＵについて正規化した。
１０．５ フローサイトメトリーの結果
ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０およびＮＯＸ−Ａ１２−ＮＯ３０は、ＦＡＣＳ分析においてＣＤ１１７とＬｙ−６Ａ／Ｅとの二重染色によって測定されたＨＰＣ／ＨＳＣの顕著な増加を生じた（図３４を参照されたい）。ピークは、スピーゲルマー投与の６時間後に観察された。ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、１μＬあたりＣＤ１１７＋Ｌｙ−６Ａ／Ｅ＋細胞７００個の遊離を生じた。ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＮＯ３０は、血液１μＬあたりＣＤ１１７＋Ｌｙ−６Ａ／Ｅ＋細胞３００個を遊離させた。ビヒクル群では、血液１μＬあたりＣＤ１１７＋Ｌｙ−６Ａ／Ｅ＋細胞１００個が計数された。Ｇ−ＣＳＦのＨＳＣ／ＨＰＣ動員効果が、Ｇ−ＣＳＦの４回注射を受け、最初の注射の４８時間後に屠殺されたマウスにおいて見られた（１μＬあたりＣＤ１１７＋Ｌｙ−６Ａ／Ｅ＋細胞２５０個）。ＡＭＤ−３１００およびＳＤＦ−１結合スピーゲルマーｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、いかなる効果も示さなかった（すべての時点およびすべての群のグラフ表示については図３４を参照されたい）。
ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０処置の結果、ＨＳＣ／ＨＰＣの一過的増加は、主にマクロファージ、顆粒球および好中球の数の増加ならびに好酸球に主に由来する全白血球数における一過的増加を伴った。ニューポジェンは、好酸球の減少を伴う白血球数（ＷＢＣ数）の増加［％］を誘発することが見出された（図４１を参照されたい）。
１０．６ ＣＦＵアッセイの結果
ビヒクル（０．８ＣＦＵ／ｍＬ）と比較して、すべての物質は、総ＣＦＵの平均値を増加させた。しかしｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（６時間）およびＡＭＤ３１００（６時間）は、限界効果を示しただけであった（それぞれ１．１および１．５ＣＦＵ／ｍＬ）。ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０の単回注射は６時間後の血液で、Ｇ−ＣＳＦ（最初の注射の４８時間後かつ４回目の注射の１２時間後に測定）の４回の注射の際と同程度のＣＦＵ／ｍＬを生じた（それぞれ３．７および３．２ＣＦＵ／ｍＬ）。これはビヒクルについて見出された値の４倍である。ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＮＯ３０は、ビヒクル（１．９ＣＦＵ／ｍＬ）と比較してＣＦＵカウントが２倍であった。概要について図３５を参照されたい。
＜脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の阻害＞
「レーザー誘発脈絡膜血管新生」動物モデルをヒト網膜および脈絡膜の血管新生についての治験薬の効果を予測するために使用する。これは、滲出性または「増殖性」の加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症および網膜静脈閉塞症などの疾患において生じる。ＣＸＣＲ４は、レーザー誘発ＣＮＶにおいて発現されることが示された（Ｌｉｍａ ｅ Ｓｉｌｖａら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．２１：，２００７）。これは、ＣＤ４５およびＦ４／８０発現細胞と共存し、これらの細胞がＢＭ由来マクロファージであることを示唆する。ＣＸＣＲ４に対する阻害剤は、レーザー誘発ＣＮＶを低減した。しかしこれらの細胞もＳＤＦ１を発現するかどうかは調査されなかった。この研究において本発明者らは、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）が血管新生を遮断するかどうかを評価した。
１１．１ 方法
１２週齢より若くないＣ５７／ＢＬ６Ｊマウス２２匹を麻酔し、１眼あたり３カ所をレーザーで焼いて処置した。動物は、レーザー部位に脈絡膜血管新生を生じる。１日後、リンゲル液に溶解したＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０の４４０μＭ溶液２μｌを１つの眼の硝子体内に注射し（用量：０．８８ｎｍｏｌ＝１２．９μｇ［分子のオリゴ部分のみ］＝４８μｇ［ＰＥＧを含む分子全体］）、他方の眼には対照としてリンゲル液を入れた。レーザー処置の１４日後、動物をデキストラン−フルオレセインで灌流し、脈絡膜全載標本を調製した。全載標本を脈絡膜の血管病変およびＣＮＶ膜の面積について評価した。
各動物の１眼にスピーゲルマーを注射し、他方の眼には緩衝液のみを入れたことから、各動物の処置眼と対照眼との間の差異に関してウィルコクソン符号順位検定を使用した。ウィルコクソン符号順位検定は、２つの関連する測定値の間、本発明者らの場合は各動物の処置眼および対照眼の差異を分析する。それは、一連の処置眼と一連の対照眼とが統計的に異ならなくても、有意差を認める。以下のＲコマンドを使用した：ｗｉｌｃｏｘｓｉｇｎ＿ｔｅｓｔ（Ｖ１〜Ｖ２、データ＝ｄ０、分散＝「厳密（ｅｘａｃｔ）」）ｐ＜０．０５は、９５％レベルで有意である。
１１．２ 結果
マウス２２匹の内１３匹を評価できた。ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０処置眼の血管新生面積の平均はリンゲル液で処置した眼の平均より小さく、スピーゲルマーがＣＮＶ形成を低減したことを示した。ウィルコクソン対応対符号順位検定によって算出されたｐ値は、０．０２１であった。したがってＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、ＣＮＶマウスモデルにおいてレーザー誘発脈絡膜血管新生を有意に低減すると結論され、潜在的な治療的利益を示唆する（図３６を参照されたい）。
糖尿病性腎症における効果
例えば糖尿病における糸球体硬化症は、アンジオテンシン依存性病理機序の標的化が、必ずしも疾患の進行を予防するとは限らないことから依然として末期の腎臓疾患の主な原因である。したがって糸球体硬化症に対する治療方法に加えて他の治療戦略が必要とされている。近年の実験的研究からのデータは、糖尿病のマウスおよびヒトにおける糸球体硬化症の進行と腎臓内の炎症とを関連づける。例えばミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサートまたは照射法は、尿中アルブミン排出およびストレプトゾトシン誘発糖尿病を有するラットにおける糸球体硬化症を低減する。さらに糖尿病性腎症における腎臓内の炎症の分子性および細胞性の機構は、依然としてわずかしか特徴付けられていない。糖尿病性腎症を有する患者は、炎症の急性期マーカーの血清レベルが上昇しているが、これは腎臓内炎症を表さない可能性もある。
この研究において、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）でのＳＤＦ−１の遅発性遮断を、６週齢時に一側性腎摘出を受けたｄｂ／ｄｂマウスにおいて検査した。ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０の投与は、月齢４ヵ月で開始し、用量５０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ（オリゴヌクレオチド部分１３．４ｍｇ／ｋｇに相当）で１週間に３回行った。２ヵ月後、動物を屠殺し、糸球体硬化症スコアを決定した。
このスコアによって、個々の糸球体を白血球の浸潤および組織の瘢痕について採点する。スコア０は、健康な糸球体を示し、スコア４は、完全な線維化形態を示す（Ｎｉｎｉｃｈｕｋ，Ｃｌａｕｓｓら、２００８）。
１２．２ 結果
野生型マウスは、月齢６ヵ月ではほとんど腎臓損傷を有さず、同齢のｄｂ／ｄｂマウスは、顕著な腎臓損傷を示す。６週齢時に一側性腎摘出を受けたｄｂ／ｄｂマウスにおける腎臓損傷は、さらに強い。
一側性腎摘出を受けたｄｂ／ｄｂマウスにおいて６ヵ月後に観察された腎臓損傷をＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号１３２）は、顕著に改善したが、逆配列の非特異的対照スピーゲルマーｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（配列番号２４３）は改善しなかった（最も高い損傷スコア（３および４）を有する糸球体の数が顕著に少なかった）。むしろよりわずかな変化（白血球浸潤）がより多くの糸球体において観察された（図３７を参照されたい）。
ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、有色ウサギにおいてＶＥＧＦ誘発網膜血管漏出を阻害する。
網膜血管の血管漏出は、加齢性黄斑変性および網膜静脈閉塞などのいくつかの眼疾患において生じる。それは視力を損なう黄斑浮腫を生じる。
１３．１ 方法
動物モデルにおいて網膜血管漏出は、ウサギでの硝子体内ＶＥＧＦ注射によって誘発できる。このモデルにおいて網膜血管系の透過性は、フルオレセイン測光法によってＶＥＧＦの硝子体内注射の４８時間後に測定する。検査物質の注射は、ＶＥＧＦ刺激の５日前に行われた。ＶＥＧＦ投与の２日後に観察される透過性は、ＶＥＧＦ刺激後に一過的に観察される透過性の増大に直接関連せず、むしろＶＥＧＦ注射によって引き起こされる持続性の下流過程の影響である（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｌｕｔｚら、２００５）。
この研究において１群あたり有色ウサギ８匹（Ｆａｕｖｅ ｄｅ Ｂｕｒｇｏｇｎｅ，２〜３月齢）を使用した。群は、
ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０の４用量群（１０５ｎｍｏｌ、４０ｎｍｏｌ、８ｎｍｏｌ、１．６ｎｍｏｌ）
基準物質群（ケナコルト徐放剤（Ｒ）（４％トリアムシノロンアセトニド）、２ｍｇ ｉ．ｖｔ．）、および
ビヒクル（輸液用５％グルコース）であった。
すべての群について注射容量は５０μＬであった。右目への物質の投与の５日後、ＶＥＧＦも右目だけに投与した：ＰＢＳ ５０μＬ中の組換えヒトＶＥＧＦ１６５ ５００ｎｇ。４８時間後、網膜の透過性を麻酔した動物で眼球での蛍光光度法によって測定した（フルオレセインナトリウム（０．９％塩化ナトリウム中１０％、５０ｍｇ／ｋｇ）のｉ．ｖ．注射の１時間後）。簡潔には、蛍光強度をｉｎ ｖｉｖｏで両眼の光軸に沿って角膜から網膜へフルオロトロン装置（ＦＭ−２ Ｆｌｕｏｒｏｔｒｏｎ Ｍａｓｔｅｒ）を使用して走査する。得られた強度分布曲線を統合し、処置眼の曲線の下の面積（ＡＵＣ）の未処置眼に対する割合を算出した。次いで群平均値および標準偏差を算出し、グラフに示した。
１３．２ 結果
組換えヒトＶＥＧＦ１６５（５０μｌ中の５００ｎｇ）の注射の５日前でのグルコース５０μｌ中のＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０の１０５および４０ｎｍｏｌの硝子体内注射は、ＶＥＧＦ刺激の４８時間後の網膜血管系のＶＥＧＦ誘発透過性上昇を顕著に阻害した。基準物質トリアムシノロンも血管の透過性における強い低減を示した。以前行われたＢｉａＣｏｒｅ実験は、使用した濃度でＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０のＶＥＧＦ結合が生じなかったことを確認した。したがって、ＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０がＶＥＧＦの下流経路（例えば、ＳＤＦ−１の過剰発現の効果としての白血球の動員、緊密な内皮接合の緩和）を遮断し、血管透過性の延長を生じることが推測できる（図３８を参照されたい）。したがってＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、黄斑もしくは網膜の浮腫それ自体または二次的に加齢性黄斑変性もしくは網膜静脈閉塞の治療のために有用であり得る。
ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、酸素誘発性網膜症における血管新生を阻害する。
酸素誘発性網膜症のマウスモデルは、糖尿病性網膜症、特に増殖性糖尿病性網膜症および加齢性黄斑変性において観察される網膜の低酸素誘発血管新生の模倣のためのモデルである（Ｓｍｉｔｈ，Ｗｅｓｏｌｏｗｓｋｉら、１９９４）。病院で保育器に入れられた未熟児が、保育器内に居る時期および彼らが正常酸素圧条件に戻った後に異常な網膜静脈の増殖を生じる高すぎる濃度の酸素に保育器内でさらされたことによって盲目になることから、未熟児網膜症とも称される。
１４．１ 方法
マウスモデルにおいて、新生仔Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを出生後Ｐ５〜Ｐ１２日に７５％酸素で保育した。正常酸素に戻した後、動物は相対的低酸素によって網膜血管新生を生じた。ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０（リンゲル液２μＬ中８８０ｐｍｏｌ）をＰ１２日目に注射した。Ｐ１７日目にマウスを網膜血管系を可視化するためにデキストラン−フルオレセインで灌流した。網膜の全載標本を採点系によるコード化様式における網膜血管系の血管の変化を評価するために使用した。ＦＩＴＣ−デキストラン灌流は、灌流された血管だけの評価を可能にする。未成熟な、灌流されなかった血管を可視化するために、全載標本をイソレクチン−Ｂ４で染色し、蛍光顕微鏡下でそれに応じて分析した。個体内での方法においてＳＤＦ−１結合スピーゲルマーで処置した眼をビヒクル処置した眼と比較した。有意性は、ウィルコクソン符号順位検定によって算出した。ｐ＝０．０５は９５％信頼に相当する。
以下のパラメーターを採点した：
１．血管クラスター数
２．絶対クラスター面積
３．相対クラスター面積
４．出芽血管数（血管叢）
５．無血管性領域の絶対量
６．無血管性領域の相対量
網膜症スコアをＦＩＴＣ−デキストラン画像でのこれらのパラメーターから算出した（Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｙｕら、１９９９）。パラメーターおよび網膜症スコアの有意レベルを図４０に示す。
１４．２ 結果
検査した３４匹のマウスの内、全載標本２４個がＦＩＴＣ−デキストラン灌流後に評価でき、１５個がイソレクチン染色後に評価できた。ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０ ８８０ｐｍｏｌのＰ１２日での単回注射は、血管叢の形成を有意に阻害し、したがってＰ１７日に観察されたとおり網膜症スコア全体を改善した（図３９および４０を参照されたい）。したがってＮＯＸ−Ａ１２−ＪＥ４０は、低酸素誘発血管新生を、特に眼において伴う疾患（例えば糖尿病性網膜症、ＡＭＤ）に有益な効果を有する可能性がある。
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本明細書に引用するすべての文書の書誌データは、それに反する記載が無い限り、以下のとおりであり、それにより前記参考文献の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
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本明細書、請求項および／または図において開示される本発明の特徴は、別々にでも、それらの任意の組合せにおいても、本発明をその種々の形態で実現するための素材となり得る。

Claims (54)

  1. 幹細胞、がん細胞、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の、被験者の末梢血への動員のための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、ＳＤＦ−１に結合する核酸分子を含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    医薬組成物。
  2. 少なくとも１つのさらなる構成成分を含み、前記さらなる構成成分が、薬学的に許容できる賦形剤および薬学的に活性な作用物質を含む群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 前記細胞がＳＤＦ受容体を発現し、前記ＳＤＦ−１受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７から選択される受容体である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
  4. 幹細胞の動員が、造血組織において起こる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. 造血組織が、骨髄組織およびリンパ組織の少なくとも１つである、請求項４に記載の医薬組成物。
  6. がん細胞が、白血病細胞、リンパ腫細胞、がん幹細胞、転移能を有するがん細胞、およびがん転移から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  7. 前記医薬組成物が、第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第２の薬学的に活性な作用物質が、がん細胞を被験者の末梢血に動員するのに適しており、第２の薬学的に活性な作用物質が、がん細胞動員作用物質から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  8. 前記医薬組成物が、第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第３の薬学的に活性な作用物質は、末梢血において、がん細胞に損傷を与え、それを破壊し、かつ／またはそれを標識し、標識により、身体防御の活性化に至る、請求項７に記載の医薬組成物。
  9. 前記被験者が、引き続いてまたは同時に化学療法および／または放射線療法を受けている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  10. 前記医薬組成物が、がんの治療および／または予防に使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  11. 前記医薬組成物が、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の被験者の末梢血への動員のための医薬組成物であり、かつ、第２の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第２の薬学的に活性な作用物質が、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはメモリーＴ細胞の、被験者の末梢血への動員に使用され、第２の薬学的に活性な作用物質が、細胞動員作用物質から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  12. 前記医薬組成物が、第３の薬学的に活性な作用物質と組み合わせて使用され、第３の薬学的に活性な作用物質は、末梢血において、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞に損傷を与え、それを破壊し、かつ／またはそれを標識し、標識により、身体防御の活性化に至る、請求項１０または１１に記載の医薬組成物。
  13. 前記被験者が、引き続いてまたは同時に化学療法および／または放射線療法を受けている、請求項１０または１２に記載の医薬組成物。
  14. 白血球の遊走を阻害するための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、ＳＤＦ−１に結合する核酸分子を含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    医薬組成物。
  15. 少なくとも１つのさらなる構成成分を含み、前記さらなる構成成分が、薬学的に許容できる賦形剤および薬学的に活性な作用物質を含む群から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
  16. 前記細胞がＳＤＦ受容体を発現し、前記ＳＤＦ−１受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７から選択される受容体である、請求項１４または１５に記載の医薬組成物。
  17. 前記白血球が、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好酸球、好中球、好塩基球、樹状細胞、および／または肥満細胞である、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  18. 白血球の遊走後に、白血球が組織中に蓄積され、白血球の蓄積から、前記組織における炎症に至る、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  19. 前記組織が、皮膚、粘膜、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、骨、および／またはリンパ系から選択される器官を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
  20. アレルギー、温式および冷式自己免疫性溶血性貧血、全身性炎症反応症候群、出血性ショック、１型糖尿病、びまん性強皮症、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫症候群、全身性エリテマトーデスおよびその徴候、関節リウマチ、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、胃腸管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液、もしくは他の器官におけるリウマチ性疾患から選択される全身性自己免疫疾患；
    クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、グルテン不耐症、炎症性腸疾患、膵臓炎、好酸球性食道炎から選択される胃腸管の自己免疫疾患；
    乾癬、じんましん、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、モルヘア／線状強皮症、白斑、疱疹状皮膚炎もしくはデューリング病、硬化性萎縮性苔癬から選択される皮膚の自己免疫疾患；
    血管炎、血管漏出、リウマチ性多発筋痛症、アテローム性動脈硬化症、チャーグ−ストラウス症候群、高安動脈炎、グッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、ベーチェット病から選択される血管系の自己免疫疾患；
    多発性硬化症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、神経認知機能障害、スティフマン症候群、ギラン−バレー症候群、重症筋無力症、ランバート−イートン症候群から選択される神経系の自己免疫疾患；
    強直性脊椎炎、サルコイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、多発性軟骨炎、結合組織炎、若年性関節リウマチ、ライム病、反応性関節炎、脊椎関節症、変性関節疾患から選択される筋肉骨格の自己免疫疾患；
    コーガン症候群、自己免疫性副腎炎、メニエール病、局所的炎症、円形脱毛症、急性炎症性疾患、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、びまん性強皮症、クレスト症候群、および／もしくはモルヘア／線状強皮症などの強皮症、自己免疫性ブドウ膜炎、橋本甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性肝炎、糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、特発性肺線維症、自己免疫性不妊症、免疫複合体障害、ならびに腹膜炎から選択される他の自己免疫疾患；
    肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、四肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管、膵臓から選択される移植器官の移植拒絶；ならびに／または
    骨髄移植の後の移植片対宿主疾患
    の治療ならびに／または予防のための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、ＳＤＦ−１に結合する核酸分子を含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    医薬組成物。
  21. 少なくとも１つのさらなる構成成分を含み、前記さらなる構成成分が、薬学的に許容できる賦形剤および薬学的に活性な作用物質を含む群から選択される、請求項２０に記載の医薬組成物。
  22. 高血圧症および／または線維症の治療ならびに／または予防のための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、ＳＤＦ−１に結合する核酸分子を含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    医薬組成物。
  23. 少なくとも１つのさらなる構成成分を含み、前記さらなる構成成分が、薬学的に許容できる賦形剤および薬学的に活性な作用物質を含む群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
  24. 高血圧症が肺高血圧症である、請求項２２または２３に記載の医薬組成物。
  25. 血管形成および／または血管新生を伴う疾患および／または障害の治療ならびに／または予防のための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、ＳＤＦ−１に結合する核酸分子を含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    医薬組成物。
  26. 少なくとも１つのさらなる構成成分を含み、前記さらなる構成成分が、薬学的に許容できる賦形剤および薬学的に活性な作用物質を含む群から選択される、請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. 前記医薬組成物が、ＶＥＧＦを阻害する作用物質を用いる療法に対する応答が弱い被験者において使用される、請求項２５または２６に記載の医薬組成物。
  28. 前記医薬組成物が、ＶＥＧＦを阻害する作用物質を用いる療法に応答しない被験者において使用される、請求項２５または２６に記載の医薬組成物。
  29. 前記疾患および／または障害が、脈絡膜血管新生を伴うかまたは脈絡膜血管新生と関連する、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  30. 前記疾患および／または障害が、網膜疾患、加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、黄斑浮腫、および網膜浮腫を含む群から選択される、請求項２９に記載の医薬組成物。
  31. 前記疾患および／または障害が、がんである、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  32. 前記がんが、固形腫瘍および転移を含む群から選択される、請求項３１に記載の医薬組成物。
  33. ａ）前記Ａ型核酸分子が、配列番号５〜１８、２５〜４１、１３３、１３７、１３９〜１４１のいずれかに記載の核酸配列を有し、
    ｂ）前記Ｂ型核酸分子が、配列番号４６〜５６、６１〜７２、および１３２のいずれかに記載の核酸配列を有し、
    ｃ）前記Ｃ型核酸分子が、配列番号７９〜８９、９４〜１１９、および１３４〜１３６のいずれかに記載の核酸配列を有する、
    請求項１〜３２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  34. 前記核酸分子が、ＳＤＦ−１に対するアンタゴニストである、または、ＳＤＦ−１受容体系のアンタゴニストである、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  35. 前記ＳＤＦ−１受容体系のＳＤＦ−１受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７から選択される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  36. 前記ＳＤＦ−１がヒトＳＤＦ−１である、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  37. ＨＥＳ基およびＰＥＧ基を含む群から選択される修飾を含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  38. 前駆細胞および／または幹細胞を被験者の末梢血に動員するのに有効な量の核酸分子を投与された被験者由来の前駆細胞および／または幹細胞を得るための方法であって、前記方法は、前記被験者から単離された血液サンプルから前記前駆細胞および／または幹細胞を採取するステップを含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    方法。
  39. 前駆細胞および／または幹細胞の採取が、アフェレーシス、白血球搬出法、細胞選別、および／またはフローサイトメトリーによって行われる請求項３８に記載の方法。
  40. 前記血液サンプルが、前記核酸分子の投与に引き続いてまたは前記核酸分子の投与と同時に化学療法および／もしくは放射線療法を受けている被験者から単離されたものである、請求項３８または３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記細胞が、がんの治療に使用されるものである、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を前記被験者の末梢血に動員するのに有効な量の核酸分子を投与された被験者から単離された血液サンプル中の、長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を除去するための方法であって、前記方法は、前記被験者から単離された血液サンプルから前記長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞を採取するステップを含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    方法。
  43. 長命形質細胞、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞の採取が、アフェレーシス、細胞選別、および／またはフローサイトメトリーによって行われる、請求項４２に記載の方法。
  44. ａ）前記Ａ型核酸分子が、配列番号５〜１８、２５〜４１、１３３、１３７、１３９〜１４１のいずれかに記載の核酸配列を有し、
    ｂ）前記Ｂ型核酸分子が、配列番号４６〜５６、６１〜７２、および１３２のいずれかに記載の核酸配列を有し、
    ｃ）前記Ｃ型核酸分子が、配列番号７９〜８９、９４〜１１９、および１３４〜１３６のいずれかに記載の核酸配列を有する、請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記核酸分子が、ＳＤＦ−１に対するアンタゴニストである、または、ＳＤＦ−１受容体系のアンタゴニストである、請求項３８〜４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記ＳＤＦ−１受容体系のＳＤＦ−１受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７から選択される、請求項３８〜４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記ＳＤＦ−１がヒトＳＤＦ−１である、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. ＨＥＳ基およびＰＥＧ基を含む群から選択される修飾を含む、請求項３８〜４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. ＳＤＦ−１結合分子またはＳＤＦ−１受容体結合分子を含む、糖尿病性腎症の治療および／または予防のための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、ＳＤＦ−１に結合する核酸分子を含み、
    前記核酸分子が、５’→３’方向に、第１のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第２のヌクレオチド伸長鎖からなる、または、５’→３’方向に、第２のヌクレオチド伸長鎖、コアヌクレオチド配列、および第１のヌクレオチド伸長鎖からなり、
    前記核酸分子のヌクレオチドがＬ−ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子の長さが２０〜５０ヌクレオチドであり、
    前記核酸分子が、Ａ型核酸分子、Ｂ型核酸分子、Ｃ型核酸分子、ならびに配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれかに記載の核酸配列を有する核酸分子からなる群から選択され、
    ここで、前記Ａ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号１９）
    からなり、ＸＡは、不在またはＡであり、
    前記Ａ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ３’（配列番号４４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＮＢＮＸ３Ｘ４３’（配列番号４５）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は、不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｂ型核酸分子が、以下のコアヌクレオチド配列：
    ５’ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ３’（配列番号５７）
    からなり、
    前記Ｂ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＶＢＳＸ３Ｘ４３’（配列番号７８）のヌクレオチド配列からなり、
    Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵである、または
    Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在であり、
    前記Ｃ型核酸分子が、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号９０）のコアヌクレオチド配列からなり、
    前記Ｃ型核酸分子の第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＸＳＳＳＳＶ３’（配列番号１２４）のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＢＳＳＳＸＳ３’（配列番号１２５）のヌクレオチド配列からなる、ＸＳは、不在またはＳである、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ３’のヌクレオチド配列からなる、または、
    第１のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＧＡＧＡＵＡＧＧ３’のヌクレオチド配列からなり、第２のヌクレオチド伸長鎖が、５’ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ３’のヌクレオチド配列からなる、
    医薬組成物。
  50. ａ）前記Ａ型核酸分子が、配列番号５〜１８、２５〜４１、１３３、１３７、１３９〜１４１のいずれかに記載の核酸配列を有し、
    ｂ）前記Ｂ型核酸分子が、配列番号４６〜５６、６１〜７２、および１３２のいずれかに記載の核酸配列を有し、
    ｃ）前記Ｃ型核酸分子が、配列番号７９〜８９、９４〜１１９、および１３４〜１３６のいずれかに記載の核酸配列を有する、
    請求項４９に記載の医薬組成物。
  51. 前記核酸分子が、ＳＤＦ−１に対するアンタゴニストである、または、ＳＤＦ−１受容体系のアンタゴニストである、請求項４９または５０に記載の医薬組成物。
  52. 前記ＳＤＦ−１受容体系のＳＤＦ−１受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７から選択される、請求項４９〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  53. 前記ＳＤＦ−１がヒトＳＤＦ−１である、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  54. ＨＥＳ基およびＰＥＧ基を含む群から選択される修飾を含む、請求項４９〜５３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
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