WO2021261601A1 - レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者の選択方法およびレチノイドとがん治療薬との併用医薬 - Google Patents

レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者の選択方法およびレチノイドとがん治療薬との併用医薬 Download PDF

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tumor
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忠 飯田
篤 榎本
泰之 水谷
雅英 ▲高▼橋
光弘 藤城
啓揮 川嶋
宜久 松川
貴之 大脇
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ラクオリア創薬株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a method for selecting a cancer patient for which a combination therapy of a retinoid and a cancer therapeutic agent is effective, and a drug for which a retinoid and a cancer therapeutic agent are effective for the selected cancer patient.
  • Stroma is a general term for cancer-related fibroblasts, extracellular matrix, immune cells, blood vessels, etc. that make up the microenvironment of cancer.
  • malignant tumors such as pancreatic cancer (sometimes referred to as “pancreatic tumor"), bile duct cancer, breast cancer, lung cancer, etc.
  • this stroma is abundant, causing resistance to anticancer drug treatment. I've been told.
  • Cancer-related fibroblasts which are the main components of the stroma, promote the growth of cancer cells by various mechanisms, and the abundant extracellular matrix derived from cancer-related fibroblasts is an anticancer agent. It was thought to be a cancer-promoting factor because it hindered the penetration of cancer. Therefore, an attempt was made to treat cancer by targeting cancer-related fibroblasts, but unexpectedly, highly malignant cancer cells were generated (Non-Patent Document 1).
  • cancer-suppressing cancer-related fibroblasts also exist, and the GPI-anchored type is used as a specific molecular marker.
  • Meflin a membrane molecule, has been identified (Non-Patent Documents 2-4).
  • cancer-suppressing cancer-related fibroblasts are transformed (transformed) into cancer-promoting cancer-related fibroblasts, while cancer-promoting by specific drugs. It was revealed that cancer-related fibroblasts can also return (reprogram) to cancer-suppressing cancer-related fibroblasts.
  • ATRA all-trans retinoic acid
  • vitamin D is known as a drug for reprogramming cancer-promoting cancer-related fibroblasts into cancer-suppressing cancer-related fibroblasts (non-patent literature). 5-9).
  • the present invention provides a highly effective cancer therapeutic drug to a cancer patient having a malignant tumor with many anticancer drug treatment-resistant stroma, and selects a cancer patient for which treatment using the drug is effective.
  • the challenge is to provide a way to do this.
  • the present invention includes the following inventions in order to solve the above problems.
  • Method. [3]
  • the step of selecting a cancer patient is to prepare a histopathological specimen of malignant tumor tissue obtained from a test cancer patient and detect at least one cancer-related fibroblast under microscopic observation.
  • the step of selecting a cancer patient is to observe a histopathological specimen of malignant tumor tissue obtained from a test cancer patient under a microscope, and in an arbitrary strongly magnified field including a cancer cell region and an interstitial region.
  • the cancer therapeutic agent is a chemotherapeutic agent, a molecular target agent, an immunotherapeutic agent or a hormone therapeutic agent.
  • the cancer therapeutic agent is a chemotherapeutic agent, a molecular target agent, an immunotherapeutic agent or a hormone therapeutic agent.
  • the pharmaceutical according to the above [11] or [12], wherein the retinoid is tamibarotene.
  • a drug for enhancing the action of a drug is a drug for enhancing the action of a drug.
  • the drug according to the above [14], wherein the composition for overexpressing mephrin is a viral vector containing a mephrin gene.
  • [17] A drug for inducing suppression of lysyl oxidase activity in the interstitium of cancer and a cancer therapeutic drug for cancer patients selected by the method according to any one of [1] to [6] above.
  • the cancer therapeutic agent is a chemotherapeutic agent, a molecular target agent, an immunotherapeutic agent or a hormone therapeutic agent.
  • a drug that induces suppression of the activity of lysyl oxidase in the interstitium of cancer is used in advance.
  • the active ingredient is a drug that induces suppression of lysyloxidase activity in the interstitium of cancer.
  • the cancer therapeutic agent is a chemotherapeutic agent, a molecular target agent, an immunotherapeutic agent or a hormone therapeutic agent.
  • the present invention it is possible to provide a highly effective cancer therapeutic drug for a cancer patient having a malignant tumor having many anticancer drug treatment-resistant stroma.
  • a method for selecting a cancer patient for whom treatment using the drug is effective it is possible to identify a cancer patient with a high therapeutic effect and treat only the selected cancer patient, so that a high medical cost is paid to the cancer patient with a low therapeutic effect and a wasteful treatment is performed. Can be avoided.
  • pancreatic tumor acinar cell carcinoma
  • pancreatic tumors intrapancreatic papillary mucosal adenocarcinoma (non-invasive cancer)
  • Example 6 the tumor was excised 22 days after transplantation to prepare a tissue section, and the expression of the mephrine gene (Islr) in the tumor was detected by in situ hybridization (ISH).
  • ISH in situ hybridization
  • B is a typical microscopic image of the 3 mg / kg / day group of AM80
  • C is a dot of the Islr positive signal per strongly magnified field of view of both groups. It is a figure which compares numbers.
  • the tumor was excised 22 days after transplantation to prepare a tissue section, and the expression of the actin gene (Acta2) in the tumor was detected by in situ hybridization (ISH).
  • (A) ) Is a representative microscopic image of the control group
  • (B) is a typical microscopic image of the 3 mg / kg / day group of AM80
  • (C) is a dot of Acta2 positive signal per strongly magnified field of view of both groups. It is a figure which compares numbers.
  • the tumor was excised 22 days after transplantation to prepare a tissue section, immunostained with an anti-CD31 antibody, and the vascular lumen area was measured.
  • (A) is a control group.
  • (B) is a representative microscopic image of AM80 in the 3 mg / kg / day group
  • (C) is a diagram comparing the lumen lumen areas of both groups. It is a figure which shows the protocol of Example 7.
  • Example 11 It is a figure which shows the result of having measured the tumor volume after transplantation of each group with time in Example 11 using a mephrin-deficient mouse.
  • the tumor was excised 24 days after transplantation to prepare a tissue section, and the expression of the actin gene (Acta2) in the tumor was detected by in situ hybridization (ISH).
  • ISH in situ hybridization
  • Example 12 shows the protocol of Example 12.
  • Sendai virus (SeV-Meflin) that overexpresses mephrine in infected cells
  • Sendai virus (SeV-GFP) that overexpresses GFP in infected cells
  • ISH in situ hybridization
  • Example 12 is a representative microscopic image of the group to which SeV-GFP was administered, and (B) is a typical microscopic image of the group to which SeV-Meflin was administered.
  • Example 12 it is a figure which compares the tumor volume of both groups 17 days after transplantation. It is a figure which shows the protocol of Example 13.
  • Example 13 using mice subcutaneously transplanted with mouse pancreatic cancer cells, gemcitabine was further added to the group in which SeV-Meflin was intratumorally administered and then gemcitabine was further administered, and the group in which SeV-GFP was intratumorally administered. It is a figure which compares the tumor volume of the administration group on the 17th day after transplantation.
  • Typical second harmonic microscopic observation image of the type KPC group (B) is a typical second harmonic microscopic observation image of the mephrin-deficient KPC group, and (C) is the curvature (linearity) of collagen in both groups. It is a figure comparing. It is a figure which shows the result of having administered tamibarotene or a solvent (DMSO) to a mouse subcutaneously transplanted with mouse pancreatic cancer cells, and measured the collagen arrangement in the tumor stroma with a second harmonic microscope, and (A) is a control group.
  • DMSO tamibarotene or a solvent
  • Example 17 using mice subcutaneously transplanted with mouse pancreatic cancer cells, a group to which gemcitabine was administered after pre-administration of tamibarotene, a group to which tamibarotene and gemcitabine were co-administered after pre-administration of tamibarotene, and a group instead of tamibarotene.
  • Example 18 It is a figure which shows the result of having measured the tumor volume with time of the group to which DMSO and gemcitabine were administered. It is a figure which shows the protocol of Example 18. Results of measuring the tumor volume over time in the group to which the anti-PD-L1 antibody was administered and the group to which the anti-PD-L1 antibody and tamibarotene were administered in Example 18 using mice subcutaneously transplanted with mouse pancreatic cancer cells. It is a figure which shows. In Example 18, it is a figure which shows the transition of the survival rate until the death of all the mice of both groups. It is a figure which shows the protocol of Example 19.
  • Example 19 using mice subcutaneously transplanted with mouse pancreatic cancer cells, the tumor volume of the anti-PD-L1 antibody-administered group, the anti-PD-L1 antibody and tamibarotene-administered group, and the IgG-administered control group. It is a figure which shows the result of having measured with time. In Example 19, it is a figure which shows the transition of the survival rate until the death of all the mice of the whole group. It is a figure which shows the protocol of Example 20.
  • Example 20 Results of measuring the tumor volume over time in the group to which the anti-PD-L1 antibody was administered and the group to which the anti-PD-L1 antibody and tamibarotene were administered in Example 20 using mice subcutaneously transplanted with mouse bladder cancer cells. It is a figure which shows. In Example 19 using mice subcutaneously transplanted with mouse lung cancer cells, the results of measuring the tumor volume over time in the group to which the anti-PD-L1 antibody was administered and the group to which the anti-PD-L1 antibody and tamibarotene were administered are shown. It is a figure. It is a figure which shows the protocol of Example 23.
  • Example 23 using a mephrin-deficient mouse subcutaneously transplanted with mouse pancreatic cancer cells, a group to which the anti-PD-L1 antibody was administered, a group to which the anti-PD-L1 antibody and tamibarotene were administered, and a control group to which IgG was administered. It is a figure which shows the result of having measured the tumor volume with time. In Example 23, it is a figure which shows the transition of the survival rate until the death of all the mice of the whole group.
  • the present invention provides a drug for treating cancer, which is administered in combination with a retinoid and a therapeutic drug for cancer (hereinafter referred to as "the first drug of the present invention").
  • the subject of administration of the first drug of the present invention is a cancer patient having a malignant tumor with infiltration of cancer-related fibroblasts in the stroma. Cancer patients with malignant tumors with infiltration of cancer-related fibroblasts in the stroma can be selected by the methods described below. Also included in the present invention is a method of selecting a cancer patient for whom such combination therapy of a retinoid and a cancer therapeutic agent is effective.
  • the method for selecting a cancer patient for which combination therapy of retinoid and a cancer therapeutic agent is effective (hereinafter referred to as "the method for selecting a cancer patient of the present invention") is to infiltrate cancer-related fibroblasts into the stroma.
  • the step of selecting a cancer patient with a malignant tumor associated with is to select at least one cancer-associated fibroblast (hereinafter abbreviated as "CAF") in the malignant tumor tissue obtained from the test cancer patient. Any step may be performed including detection.
  • the malignant tumor tissue may be one obtained by biopsy or may be obtained by surgery as long as it is a malignant tumor tissue obtained from a test cancer patient.
  • a histopathological specimen may be prepared from a malignant tumor tissue obtained from a test cancer patient, a cell suspension may be prepared, or a cell disruption solution may be prepared.
  • the means for detecting CAF is not particularly limited, and may be one that detects a CAF-specific nucleic acid, one that detects a CAF-specific protein, or one that detects a CAF-specific morphology.
  • a histopathological specimen of malignant tumor tissue obtained from a test cancer patient is prepared. , May include detecting at least one CAF under microscopic observation.
  • the method for preparing the histopathological specimen is not particularly limited, and a known method can be appropriately selected depending on the staining method or the detection method to be used. Microscopic observation may be performed over the entire area of the histopathological specimen, and if at least one CAF is detected in the microscopic observation, the test patient is considered to be a cancer patient to whom administration of the first drug of the present invention is effective. You can choose.
  • test patient When a plurality of histopathological specimens are prepared, if at least one CAF is detected in any of the histopathological specimens, the test patient is regarded as a cancer patient for whom administration of the first drug of the present invention is effective. You can choose.
  • the histopathological specimen of the malignant tumor tissue obtained from the test cancer patient is observed under a microscope.
  • the step may include detecting one or more CAFs in any strongly magnified field including a cancer cell region and an interstitial region.
  • the number of CAFs in one strongly magnified field of view may be at least one, even if it is 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 9, or 10 or more. good.
  • "High-power field" in microscopic observation means observing at 400x using a 40x objective lens and a 10x eyepiece, and is also called a high-power field (HPF).
  • CAF may be detected by staining the histopathological specimen with Hematoxylin Eosin (hereinafter, may be abbreviated as "HE staining").
  • HE staining Hematoxylin Eosin
  • a pathologist usually observes the HE-stained specimen under a microscope to morphologically determine the presence or absence of CAF.
  • a method of detecting a CAF marker molecule by immunohistochemistry (hereinafter, may be abbreviated as “IHC”) may be used, and the CAF marker molecule may be detected in situ.
  • a method of detecting by hybridization (hereinafter, may be abbreviated as "ISH") may be used.
  • IHC an IHC sample can be prepared according to a conventional method using an antibody that specifically binds to a marker molecule of CAF.
  • ISH specimens can be prepared according to a conventional method using a probe that specifically hybridizes to the mRNA of the marker molecule of CAF.
  • the marker molecules for CAF include ⁇ -smooth muscle actin ( ⁇ SMA), meflin, fibroblast activation protein (FAP), platelet-derived growth factor receptor ⁇ (PDGFR ⁇ ), platelet-derived growth factor receptor ⁇ (PDGFR ⁇ ), and fibroblast.
  • ⁇ SMA smooth muscle actin
  • FAP fibroblast activation protein
  • PDGFR ⁇ platelet-derived growth factor receptor ⁇
  • PDGFR ⁇ platelet-derived growth factor receptor ⁇
  • FSP1 specificprotein1
  • Probes that hybridize to these marker molecules in an mRNA-specific manner can be produced by a known method based on the base sequence of the gene encoding these marker molecules.
  • the base sequences of the genes encoding these marker molecules can be obtained from known databases (NCBI, etc.).
  • Examples of the retinoid used in the first drug of the present invention include acitretinoin, adapalene, AGN194204 (also referred to as IRX4204, NRX194204, VTP194204), AGN195183, and alitretinoin (9-cis-Retinoic).
  • amsilarotene amsilarotene, AM580, bexarotene, Bisphenol A diglycidyl ether (also called BADGE), fenretinide, 4-Hydroxyretinoic acid, Isotretinoin (also known as 13-cis-Retinoic acid), LG268, LGD1550, peretinoin, Retinylacetate, tamibarotene (also known as AM80), tazarotene, tretinoin Transretinoic acid (ATRA)), TTNPB, etc. can be mentioned.
  • retinoid includes “vitamin A derivative”, “vitamin A analog”, “retinoic acid receptor (RAR) agonist” and “retinoic X receptor (RXR) agonist”, and “retinoic acid”. It does not include “acid receptor (RAR) antagonists” and “retinoic X receptor (RXR) antagonists”.
  • the retinoid may form a salt, and the salt is preferably a pharmaceutically acceptable salt.
  • a pharmaceutically acceptable salt for example, hydrochloric acid, sulfuric acid, lactic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, oxalic acid, malic acid, citric acid, oleic acid, palmitic acid, nitrate, phosphoric acid, trifluoroacetic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p- Salts with acids such as toluene sulfonic acid; salts with alkali metals or alkaline earth metals such as sodium, potassium, calcium, or with hydroxides or carbonates of aluminum; triethylamine, benzylamine, diethanolamine, t-butylamine, Examples thereof include salts with dicyclohexylamine, arginine and the like.
  • the present inventors improve the delivery of retinoids to malignant tumors associated with infiltration of CAF into the stroma of the concomitant cancer therapeutic agent, thereby that the cancer therapeutic agent is used. It has been found to enhance the action. Therefore, it can be said that the retinoid is an active ingredient of a drug for enhancing the action of a cancer therapeutic drug used in combination. In addition, it can be said that the retinoid is an active ingredient of a drug for promoting delivery of a concomitant cancer therapeutic drug to a target tumor tissue.
  • the present invention includes a drug for enhancing the action of a cancer therapeutic agent, which comprises a retinoid as an active ingredient, for a cancer patient having a malignant tumor with infiltration of CAF in the stroma. Further, the present invention includes a drug for promoting delivery of a cancer therapeutic agent to a target tumor tissue, which comprises a retinoid as an active ingredient, for a cancer patient having a malignant tumor with CAF infiltration in the stroma. Is done.
  • the retinoid used in the first pharmaceutical product of the present invention is appropriately blended with a pharmaceutically acceptable carrier or additive according to a method known as a method for producing a pharmaceutical preparation (for example, the method described in the Japanese Pharmacopoeia).
  • a pharmaceutical preparation for example, the method described in the Japanese Pharmacopoeia.
  • Troches suppositories, liquids, emulsions, suspensions, release-controlled preparations (eg, immediate-release preparations, sustained-release preparations, sustained-release microcapsules, etc.), aerosols, film preparations (eg, orally disintegrating film).
  • release-controlled preparations eg, immediate-release preparations, sustained-release preparations, sustained-release microcapsules, etc.
  • aerosols eg, orally disintegrating film.
  • Oral mucosa patch film, etc. Injection (eg, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, etc.), drip, transdermal absorption type preparation, ointment, lotion, patch , Suppositories (for example, anal suppositories, vaginal suppositories, etc.), pellets, nasal agents, pulmonary agents (inhalants), oral agents such as eye drops, or parenteral agents.
  • the blending ratio of the carrier or the additive can be appropriately set based on the range usually adopted in the pharmaceutical field.
  • the carriers or additives that can be blended are not particularly limited, but various carriers such as water, physiological saline, other aqueous solvents, aqueous or oily bases; excipients, binders, pH adjusters, disintegrants, absorption promoters, etc. Examples thereof include various additives such as agents, lubricants, colorants, flavoring agents, and fragrances.
  • Additives that can be mixed with tablets, capsules, etc. include, for example, gelatin, cornstarch, tragant, binders such as gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, cornstarch, gelatin, arginic acid and the like. Swelling agents, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, flavors such as peppermint, reddish oil or cherry are used.
  • the dispensing unit form is a capsule, the above-mentioned type of material can further contain a liquid carrier such as oil and fat.
  • Aseptic compositions for injection can be prepared according to conventional formulation procedures (eg, dissolving or suspending the active ingredient in a solvent such as water for injection, natural vegetable oil, etc.).
  • aqueous solution for injection for example, a physiological saline solution, an isotonic solution containing glucose and other auxiliary agents (for example, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.) and the like are used, and an appropriate solubilizing agent, for example, is used. It may be used in combination with alcohol (ethanol, etc.), polyalcohol (propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), nonionic surfactant (polysorbate 80, HCO-50, etc.).
  • oily liquid for example, sesame oil, soybean oil and the like are used, and may be used in combination with benzyl benzoate, benzyl alcohol and the like as solubilizing agents.
  • buffers eg phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.
  • soothing agents eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.
  • stabilizers eg, human serum albumin, polyethylene glycol, etc.
  • preservatives eg, human serum albumin, polyethylene glycol, etc.
  • it may be blended with benzyl alcohol, phenol, etc.), an antioxidant, or the like.
  • Retinoids are less toxic to humans and other mammals (eg, rats, mice, rabbits, sheep, pigs, cows, cats, dogs, monkeys, etc.) and can be safely administered.
  • the content of retinoid in the preparation varies depending on the dosage form, administration method, carrier, etc., but is usually 0.01 to 100% (w / w) with respect to the total amount of the preparation, and is 0.1 to 95% (w / w). It may be a ratio.
  • the dose of retinoid varies depending on the subject, symptoms, administration route, etc., but in the case of oral administration, for example, in a human with a body weight of about 60 kg, about 0.01 to 1000 mg, preferably about 0.1 to 100 mg per day, More preferably, it is about 0.5 to 500 mg.
  • the single dose varies depending on the patient's condition, symptoms, administration method, etc., but for example, in the case of injection, it is usually about 0.01 to 1000 mg, preferably about 0.01 to 500 mg per 1 kg of body weight. More preferably, about 0.01 to 20 mg is administered intravenously.
  • the total daily dose may be a single dose or a divided dose.
  • the cancer therapeutic agent used in the first drug of the present invention is not particularly limited, but for example, a chemotherapeutic agent, an immunotherapeutic agent or a hormone therapeutic agent is preferable. These cancer therapeutic agents may be liposome preparations. Further, these cancer therapeutic agents may be nucleic acid drugs or antibody drugs.
  • the chemotherapeutic agent is not particularly limited, and is, for example, nitrogenmastered, nitrogenmastered hydrochloride-N-oxide, chlorambutyl, cyclophosphamide, iposfamide, thiotepa, carbocon, improsulfan tosylate, busulfan, nimustin hydrochloride, mitobronitol.
  • Methotrexate Pemetrexed, Enocitabin, Citarabin, Citarabin octofostate, Ansitabin hydrochloride, 5-FU drugs (eg, fluorouracil, Tegafur, UFT, Doxyflulysine, Carmofur, Galocitabin, Emitefur, Capecitabin, etc.)
  • Antimetabolites such as, tabloid, butosine, forinate calcium, levofolinate calcium, cladribine, emitefur, fludalabine, gemcitabine, hydroxycarbamide, pentostatin, pyritrexim, idoxyuridine, mitguazone, thiazofulin, ambamustin, bendamstin; for example, actinomycin D.
  • Actinomycin C Mitomycin C, Chromomycin A3, Breomycin Hydrochloride, Breomycin Sulfate, Peplomycin Sulfate, Daunorubicin Hydrochloride, Doxorubicin Hydrochloride, Acralvisin Hydrochloride, Pirarubicin Hydrochloride, Epirubicin Hydrochloride, Neocultinostatin, Misramycin, Zarkomycin, Cartinophylline, Anticancer antibiotics such as mitotan, sorbicin hydrochloride, mitoxanthron hydrochloride, idarubicin hydrochloride; for example, etoposide, etoposide phosphate, vinblastin sulfate, bincristin sulfate, bindesin sulfate, teniposide, paclitaxel, docetaxel, binorelbin, irinotecan, irinotecan hydrochloride. Derived from plants such as
  • Molecular-targeted drugs are not particularly limited, but are, for example, afatinib, erlotinib, gefitinib, cetuximab, panitzumumab, necitsumumab, crizotinib, rectinib, rapatinib, trastuzumab, trastuzumab, emtancin, trastuzumab, trastuzumab , Temusirolimus, Shirolimus, Imatinib, Dasatinib, Nilotinib, Bostinib, Ponatinib, Ibritumomab Chiukisetan, Ofatumumab, Rituximab, Brentuximab Bedotin, Gemutuximab Ozogamuri , bortezomib, lenvatinib, vandetanib, Serichinibu, Iburuchinibu, Oshimeruchinibu, carfilzom
  • the immunotherapeutic agent is not particularly limited, and is, for example, pisibanil, crestin, cizophyllan, lentinan, ubenimex, interferon, interleukin, macrophage colony stimulating factor, granulocyte colony stimulating factor, erythropoietin, phosphotoxin, BCG vaccine, corynebacterium.
  • Examples include parbum, levamisol, polysaccharide K, procodazole, ipilimumab, tremelimumab, nivolumab, pembrolizumab, spartarizumab, semiplimab, avelumab, atezolizumab, and durvalumab.
  • the immunotherapeutic agent may be an immune checkpoint inhibitor.
  • Target molecules of immune checkpoint inhibitors include, for example, CTLA-4, PD-1, LAG-3, BTLA, KIR, TIM-3, PD-L1, PD-L2, B7-H3, B7-H4, HVEM. , GAL9, CD160, VISTA, BTNL2, TIGIT, PVR, BTN1A1, BTN2A2, BTN3A2, CSF-1R, etc.
  • the target molecule of the immune checkpoint inhibitor may be CTLA-4, PD-1 or PD-L1.
  • Anti-CTLA-4 antibody includes ipilimumab, tremelimumab, etc.
  • anti-PD-1 antibody includes nivolumab, pembrolizumab, spartarizumab, semiprimumab, etc.
  • anti-PD-L1 antibody includes avelumab, atezolizumab, durvalumab, etc. And so on.
  • the hormone therapeutic agent is not particularly limited, and for example, phosfestol, diethylstilbestrol, chlorotrianisen, medroxyprogesterone acetate, megestrol acetate, chlormaginone acetate, ciproterone acetate, danazole, allylestradiol, guestlinone, etc.
  • Mepartricin, laroxifene, olmeroxyphene, levormeroxyphene, anti-estrogens eg tamoxifen citrate, tremiphen citrate, etc.
  • pills mepitiostane, testrolactone, aminoglutetiimide, LH-RH agonists (eg goselelin acetate, etc.) Buserelin, leuprorelin, etc.), droroxyfen, epithiostanol, ethinyl estradiol sulfonate, aromatase inhibitors (eg, fadrazole hydrochloride, anastrosol, retrozol, exemethan, borozole, formestan, etc.), anti-androgens (eg, flutamid).
  • fadrazole hydrochloride anastrosol, retrozol, exemethan, borozole, formestan, etc.
  • anti-androgens eg,
  • Bicalutamide, niltamide, etc. Bicalutamide, niltamide, etc.
  • 5 ⁇ -reductase inhibitors eg, finasteride, epristeride, etc.
  • corticohormonal agents eg, dexamethasone, prednisolone, betamethasone, triamsinolone, etc.
  • androgen synthesis inhibitors eg, avilateron, etc.
  • the retinoid and the cancer therapeutic agent used in the first drug of the present invention may be administered to the administration target at the same time or at different times.
  • the term "administered in combination” means that the retinoid is applied at the same time as the cancer therapeutic agent is applied at the same time, and it is not necessary to administer the retinoid at the same time.
  • the time difference between the start of retinoid administration and the start of cancer treatment is not particularly limited, but the time difference is 1 day or more, 2 days or more, 3 days or more, 4 days or more, 5 days or more, 6 days or more, 7 days or more. There may be.
  • the dose of the cancer therapeutic agent may be based on the clinically used dose, and may be appropriately selected depending on the administration target, the age and weight of the administration target, the symptoms, the administration time, the dosage form, the administration method, the combination and the like. be able to.
  • the present invention provides a drug for enhancing the action of a cancer therapeutic drug, which comprises a composition for overexpressing mephrine in cells of a tumor tissue as an active ingredient (hereinafter, referred to as "second drug of the present invention").
  • the subject to which the second drug of the present invention is administered is a cancer patient having a malignant tumor with infiltration of CAF in the stroma, which is the same as the subject to which the first drug of the present invention is administered. Therefore, the administration target of the second drug of the present invention can be selected by the above-mentioned cancer patient selection method of the present invention.
  • compositions for overexpressing mephrine in the cells of the tumor tissue a composition containing a plasmid vector in which a DNA encoding mephrin is expressively inserted, a viral vector, or the like can be preferably used.
  • the base sequence of the gene encoding mephrin can be easily obtained from a known database (NCBI, etc.).
  • the accession number of the base sequence of the human mephrine gene (ISLR) is NM_201526.2 or NM_005545.4.
  • a plasmid vector or viral vector expressing mephrin can be prepared by using a known genetic engineering technique based on the obtained nucleotide sequence of the human mephrin gene (ISLR).
  • a method for introducing a mephrin expression plasmid using liposomes lipocytosis method, HVJ-lipocytosis method, cationic liposome method, lipofection).
  • lipofectamine method, etc. microinjection method, method of transferring mephrin expression plasmid into cells together with carriers (metal particles) with a gene gun (Gene Gun), etc.
  • Gene Gun Gene gun
  • a viral vector When administered in the form of a viral vector, it can be applied to DNA or RNA viruses such as detoxified retrovirus, adenovirus, adeno-associated virus, herpesvirus, vaccinia virus, poxvirus, poliovirus, Sindobis virus, Sendai virus, SV40.
  • the mephrin gene can be introduced by introducing a mephrin expression cassette and infecting the target tumor with a viral vector.
  • a viral vector containing a mephrine gene is preferable.
  • the dose of the composition that overexpresses mephrine in the cells of the tumor tissue is preferably set appropriately in consideration of the type of vector, expression efficiency, tumor size, and the like.
  • the second drug of the present invention is a drug for enhancing the action of a cancer therapeutic drug, it is preferably administered in combination with the cancer therapeutic drug.
  • the cancer therapeutic agent to be combined is the same as the cancer therapeutic agent used in the first drug of the present invention.
  • the present invention provides a drug for treating cancer, which is administered in combination with a drug that induces suppression of the activity of lysyloxidase in the interstitium of cancer and a therapeutic drug for cancer (hereinafter, "the third drug of the present invention”. ").
  • the subject to which the third drug of the present invention is administered is a cancer patient having a malignant tumor with infiltration of CAF in the stroma, which is the same as the subject to which the first drug of the present invention is administered. Therefore, the administration target of the third drug of the present invention can be selected by the above-mentioned cancer patient selection method of the present invention.
  • Lysyl oxidase (hereinafter referred to as "LOX") is a copper-containing amine oxidase that oxidizes a primary amine substrate into a reactive aldehyde. Lysyl oxidase catalyzes the oxidative deamination of peptidyllysine and hydroxylysine residues in collagen and peptidyllysine residues in elastin and is essential for the formation of extracellular matrix. The resulting peptidyl aldehyde spontaneously condenses and undergoes an oxidative reaction to form the lysine-derived covalent crosslinks required for the normal structural integrity of the extracellular matrix.
  • LOX Lysyl oxidase
  • the drug that induces the suppression of LOX activity in the interstitium of cancer may be a drug that directly inhibits LOX or a drug that indirectly inhibits LOX.
  • examples of the drug that directly inhibits LOX include LOX inhibitors and anti-LOX neutralizing antibodies.
  • LOX inhibitors include, for example, antibodies disclosed in WO2011097513 such as suppressuzumab; compounds disclosed in WO2016144703 such as GB2064; disclosed in WO2020024017 such as PXS-5505, PXS-5446, PXS-6302.
  • LOX inhibitors also include primary amines that react with the carbonyl group at the active site of lysyloxidase, including those that produce resonance-stabilized products such as the following primary amines after binding to the carbonyl.
  • BAPN ⁇ -aminopropionitrile
  • 2-nitroethylamine 2-bromoethylamine
  • 2-chloroethylamine 2-Saturated or saturated haloamines
  • 2-trifluoroethylamine 3-bromopropylamine
  • p-halobenzylamine selenohomocysteine lactone.
  • LOX inhibitors also include thiolamines such as D-penicillamine, or 2-amino-5-mercapto-5-methylhexanoic acid, D-2-amino-3-methyl-3-((2-acetamidoethyl)).
  • thiolamines such as D-penicillamine, or 2-amino-5-mercapto-5-methylhexanoic acid, D-2-amino-3-methyl-3-((2-acetamidoethyl)).
  • Dithio) butanoic acid p-2-amino-3-methyl-3-((2-aminoethyl) dithio) butanoic acid, sodium-4-((p-1-dimethyl-2-amino-2-carboxyethyl)) Dithio)
  • Oxidative removal of lysyl and hydroxylysyl residues by its analogs such as butane sulfinate, 2-acetamidoethyl-2-acetamide ethanethiol sulfanate, sodium-4-mercaptobutanesulfinate trihydrate.
  • Examples of drugs that indirectly inhibit LOX include drugs that induce the expression of mephrin in cancer-related fibroblasts in the interstitium of malignant tumors.
  • mephrin inhibits the activity of LOX (see Example 14).
  • the present inventors increased the expression level of the mephrin gene by treating pancreatic stellate cells and mesenchymal stem cells, which are considered to be the cells of origin of CAF, with retinoids (see Examples 4 and 5). It has been confirmed that when retinoid is administered to mice in which pancreatic cancer cells are subcutaneously transplanted to form a tumor, the expression of the mesenchymal gene in the tumor is significantly increased (Example 6).
  • the retinoid used in the first drug of the present invention can be suitably used as a drug that indirectly inhibits LOX.
  • the retinoid can be carried out in the same manner as the first medicine of the present invention.
  • a composition that overexpresses mephrine in the cells of tumor tissue which is the active ingredient of the second drug of the present invention, can also be suitably used as a drug that indirectly inhibits LOX.
  • a composition that overexpresses mephrine in the cells of tumor tissue which is the active ingredient of the second drug of the present invention
  • a drug that indirectly inhibits LOX include a plasmid vector into which a DNA encoding mephrine is inserted so as to be expressible, a composition containing a viral vector, and the like.
  • the composition for overexpressing mephrine in the cells of a tumor tissue is used as the third drug of the present invention, the composition can be carried out in the same manner as the second drug of the present invention.
  • LOX is known to have the activity of cross-linking collagen molecules. It is considered that the cross-linking of collagen molecules increases the strength of collagen fibers and hardens the tissue. Therefore, by inhibiting or suppressing the function of LOX in the cancer stroma, the hardening of cancer tissue is suppressed, the tumor blood vessels are dilated, and the delivery of the concomitant cancer therapeutic agent to the tumor is improved. It is thought that the action of cancer therapeutic agents can be enhanced.
  • the present inventors refer to this concept as "interstitial conditioning", and believe that the therapeutic effect can be enhanced by administering a cancer therapeutic agent after subjecting the target tumor to "interstitial conditioning" in advance. There is. Therefore, the drug that induces the suppression of LOX activity in the cancer stroma used in the third drug of the present invention can be referred to as a drug having an "interstitial conditioning" action.
  • the drug used in the third drug of the present invention that induces suppression of LOX activity in the cancer stroma is an active ingredient of a drug for enhancing the action of a concomitant cancer therapeutic drug, and the concomitant cancer treatment It can be said that it is an active ingredient of a drug for promoting delivery of a drug to a target tumor tissue. Therefore, the present invention is intended for cancer patients having malignant tumors with CAF infiltration in the stroma, and the active ingredient is a drug that induces suppression of lysyloxidase activity in the stroma of the cancer. Includes drugs for enhancing the action of therapeutic agents.
  • the present invention is intended for cancer patients having malignant tumors with CAF infiltration in the stroma
  • the active ingredient is a drug that induces suppression of lysyloxidase activity in the stroma of the cancer.
  • the cancer therapeutic agent used in the third drug of the present invention is the same as the cancer therapeutic agent used in the first drug of the present invention.
  • the drug for inducing the suppression of the activity of lysyl oxidase in the interstitium of cancer and the cancer therapeutic drug used in the third drug of the present invention may be administered to the administration target at the same time or with a time lag. May be administered.
  • the term "administered in combination” means that the timing of application of a drug that induces suppression of the activity of lysyl oxidase in the interstitium of cancer and the timing of application of a therapeutic drug for cancer overlap at the same time. It does not require administration.
  • the third drug of the present invention it is preferable to start the administration of the drug that induces the suppression of the activity of lysyl oxidase in the interstitium of the cancer in advance, and to start the administration of the cancer therapeutic drug with a time lag.
  • the time difference between the start of administration of the drug that induces the suppression of lysyl oxidase activity in the cancer stroma and the start of administration of the cancer therapeutic drug is not particularly limited, but 1 day or more, 2 days or more, 3 days or more, 4 days or more, The time difference may be 5 days or more, 6 days or more, and 7 days or more.
  • a hyaluronidase preparation such as PEGylated hyaluronan degrading enzyme PEGPH20 disclosed in WO2012012300; 4-methylumbelli disclosed in US20180201640.
  • Hypoxia synthesis inhibitors such as ferron (4-methylumbelliferone) derivatives; IPI-926 (Patidegib, Saridegib) disclosed in WO2006026430, Sonidegib (Odomzo) disclosed in WO2007131201, Vismodegib (Erivedge) disclosed in WO2006028958.
  • PF-04449913 (Daurismo) disclosed in US2009005416
  • LY-2940680 (Taladegib) disclosed in WO2010147917
  • NLM-001 disclosed in WO2009107850
  • 4SC-208 disclosed in WO2014001464, etc.
  • Hogg signal inhibitor derived from stromal cells such as the nucleic acid drug NOX-A12 disclosed in WO2008009437, WO2009019007, WO2012031773, the compound USL-311 disclosed in WO2012049277, WO2016157149, and the compound LIT-927 disclosed in WO2018011376.
  • stromal cell-derived factor 1 inhibitor Hypoxia inducible factor such as compound IDF-11774 disclosed in WO2013048164 and compound PX-478 disclosed in WO2005007828. 1-alpha inhibitor); Hypoxia inducible factor 2-alpha inhibitor such as compound PT-2977 (Belzutifan) disclosed in WO2015035223 can be mentioned.
  • the present invention also includes such a combination drug of a drug having an “interstitial conditioning” action without LOX inhibition and a cancer therapeutic drug.
  • the present invention includes the following inventions.
  • a cancer treatment method comprising administering a retinoid and a cancer therapeutic agent in combination to a cancer patient selected by the cancer patient selection method of the present invention.
  • the present invention comprises administering to a cancer patient selected by the method for selecting a cancer patient of the present invention in combination with a drug that induces suppression of the activity of lysyloxidase in the interstitium of cancer and a cancer therapeutic drug.
  • Cancer treatment method Cancer treatment method.
  • a method for enhancing the action of a cancer therapeutic agent which comprises administering a drug that induces suppression of the activity of lysyl oxidase in.
  • a retinoid or a drug that induces suppression of the activity of lysyloxidase in the stroma of cancer is administered to a patient selected by the above-mentioned method for selecting a cancer patient according to the above-mentioned method for selecting a cancer patient and receiving a cancer therapeutic drug.
  • a method for promoting delivery of a cancer therapeutic agent to a target tumor tissue including the above.
  • a retinoid or a drug that induces suppression of the activity of lysyloxidase in a cancer stroma for producing a drug for treating cancer which is selected by the above-mentioned method for selecting a cancer patient of the present invention. Used for patients who have been treated with cancer drugs.
  • Example 1 Determination of malignant tumor with infiltration of CAF in the stroma by HE staining
  • FIGS. 1 to 4 show examples of pancreatic tumors with CAF infiltration in the stroma of surgical specimens.
  • FIG. 1 is anaplastic cancer
  • FIG. 2 is intraductal papillary mucinous adenocarcinoma
  • FIGS. 3 and 4 are tubular glandular cancers.
  • the arrows indicate the positions of the CAFs.
  • FIGS. 5 to 14 examples of pancreatic tumors without CAF infiltration in the stroma of surgical specimens are shown in FIGS. 5 to 14.
  • 5 and 6 are adenocarcinomas
  • FIG. 7 is intrapancreatic papillary mucinous adenoma (non-invasive cancer)
  • FIG. 1 is anaplastic cancer
  • FIG. 2 is intraductal papillary mucinous adenocarcinoma
  • FIGS. 3 and 4 are tubular glandular cancers.
  • the arrows indicate the positions of the CAFs.
  • FIGS. 5 to 14 examples of pancreatic tumors
  • FIG. 8 is intrapancreatic papillary mucinous adenoma (IPMA), and FIG. 9 is mucinous cyst tumor.
  • FIG. 10 is a neuroendocrine tumor (G1, insulinoma)
  • FIG. 11 is a neuroendocrine tumor (G1, gastrinoma)
  • FIG. 12 is a pancreatic intraepithelial neoplastic lesion (PanIN)
  • FIG. 13 is a serous cyst adenoma
  • the low magnification is 100 times and the high magnification is 200 times.
  • FIGS. 15 to 17 show examples of pancreatic tumors with CAF infiltration in the stroma of biopsy specimens.
  • FIG. 15 is a tubular adenocarcinoma
  • FIG. 16 is an anaplastic cancer
  • FIG. 17 is an intraductal papillary mucous adenocarcinoma (invasive cancer).
  • FIGS. 18 to 21 examples of pancreatic tumors without CAF infiltration in the stroma of biopsy specimens are shown in FIGS. 18 to 21.
  • FIG. 18 is acinar cell carcinoma
  • FIG. 19 is a solid pseudopapillary tumor (SPN)
  • FIG. 20 is a neuroendocrine tumor
  • FIG. 21 is an intraductal papillary mucinous adenoma (IPMA).
  • IPMA intraductal papillary mucinous adenoma
  • Example 2 Determination of malignant tumor with infiltration of CAF in the stroma by IHC or ISH
  • Tissue specimens prepared from tumor tissue obtained by surgery or biopsy are subjected to ISH using an antibody against the CAF marker molecule or an ISH using a probe that hybridizes to the mRNA of the CAF marker molecule and observed under a microscope. Judgment is based on the presence or absence of a positive signal.
  • mephrine is adopted as a marker molecule for CAF, and IHC using an anti-mephrin antibody and ISH using a probe that hybridizes to mRNA of the mephrin gene are performed.
  • FIGS. 22 and 23 show an example of a mephrin-positive pancreatic tumor
  • FIG. 24 shows an example of a mephrin-negative pancreatic tumor.
  • Both figures are images obtained by performing IHC and ISH on the same sample, and the high magnification is a strongly magnified field of view (400 times).
  • the arrows indicate the location of positive cells.
  • the IHC high-magnification image of FIG. 24 it is the non-specific reaction to the necrotic cells that is deeply stained in the round cells.
  • Example 3 Tumor shrinkage effect of tamibarotene on malignant tumors with infiltration of CAF in the stroma
  • Human pancreatic cancer cells BxPC-3 (1.0 x 10 6 ) are subcutaneously transplanted into BALB / c-nu female nude mice to form a cancer cell single transplant group.
  • human pancreatic cancer cells BxPC-3 (1.0 x 10 6 ) and human pancreatic stellate cells (5.0 x 10 6 ) are subcutaneously transplanted into BALB / c-nu female nude mice to form a co-transplant group.
  • Pancreatic stellate cells are pancreatic fibroblasts and are considered to be the origin of CAF.
  • the cancer cell single transplant group and co-transplant group are divided into two groups, a group to receive gemcitabine (Gem) and tamibarotene (AM80) (Gem + AM80 group) and a group to receive Gem and DMSO (Gem + DMSO group), respectively.
  • AM80 (3.0 mg / kg) or DMSO is orally administered daily from the 3rd day to the 14th day after transplantation.
  • Gem 50 mg / kg
  • Tumor volume is measured 15 days after transplantation.
  • the protocol is shown in FIG.
  • Example 4 Effect of retinoid reprogramming on human pancreatic stellate cells and mouse mesenchymal stem cells
  • the primary human pancreatic stellate cells used are those provided by Dr. Masamune of Tohoku University.
  • the primary mouse mesenchymal stem cells used are those purchased from Cyagen Co., Ltd. Both pancreatic stellate cells and mesenchymal stem cells are considered to be the origin cells of CAF.
  • the retinoid the retinoid contained in SCREEN-WELL Nuclear Receptor ligand library (ENZO) is used.
  • DMEM + 10% FBS is used as the culture medium.
  • the cells are seeded in a collagen-coated dish and cultured until they are 100% confluent, and various retinoids are added to a concentration of 1 ⁇ M. After 48 hours, cells are harvested, RNA is extracted using RNeasyPLUS KIT (QIAGEN), and cDNA is synthesized using ReverseTra Ace qPCR RT Master Mix (TOYOBO). The expression level of the mephrine gene (ISLR and Islr) is measured by qPCR using the Gene expression assay (Thermo Fisher scientific).
  • Results Table 1 shows the results of primary human pancreatic stellate cells.
  • the ISLR expression level is shown as a relative expression level when the ISLR expression level of the control (DMSO-treated cells) is 1. All retinoids used increase ISLR expression.
  • the marker for cancer-promoting CAF is ⁇ SMA (gene name: ACTA2)
  • the marker for tumor suppressor CAF is mephrin (gene name: ISLR)
  • the expression levels of both markers in CAF are inversely proportional. I know. Therefore, this result indicates that retinoids reprogram human cancer-promoting CAFs into cancer-inhibitory CAFs.
  • Table 2 shows the results of primary mouse mesenchymal stem cells.
  • the Islr expression level is shown as a relative expression level when the Islr expression level of the control (DMSO-treated cells) is 1. All retinoids used increase Islr expression.
  • the marker for cancer-promoting CAF is ⁇ SMA (gene name: Acta2)
  • the marker for tumor suppressor CAF is mephrin (gene name: Islr)
  • the expression levels of both markers in CAF are inversely proportional. I know. Therefore, this result indicates that retinoids reprogram mouse cancer-promoting CAFs into cancer-inhibitory CAFs.
  • Example 5 Effect of reprogramming on mouse mesenchymal stem cells
  • ATRA, AM80 and AM580 are used as retinoids.
  • the expression levels of the mephrine gene (Islr), actin gene (Acta2), type I collagen gene (Col1a1) and type III collagen gene (Col3a1) are measured by qPCR.
  • Example 6 Effect of tamibarotene (AM80) on mouse pancreatic cancer cells
  • Pancreatic cancer cell mT5 which was distributed by Dr. David Tuveson of Cold Spring Harbor Laboratory, is used.
  • mT5 is a pancreatic cancer cell established from a pancreatic tumor that developed in KPC mice, which is a spontaneous model of pancreatic cancer (Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. 2015 Jan 15; 160 (1-2)) : 324-38. Doi: 10.1016 / j.cell.2014.12.021. Epub 2014 Dec 31.).
  • AM80 is orally administered to mice with confirmed tumor formation for 15 days.
  • AM80 0.1 mg / kg / day, 0.5 mg / kg / day, 1 mg / kg / day, 3 mg / kg / day
  • mice were euthanized, tumors were removed, tissue specimens were prepared, and in situ hybridization (ISH) was performed to detect expression of the mephrine gene (Islr) and actin gene (Acta2). Count the number of signals. Furthermore, a tissue specimen of the tumor is prepared, immunostained with an anti-CD31 antibody, and CD31, which is a marker of vascular endothelial cells, is stained to measure the vascular lumen area. The protocol is shown in FIG.
  • FIG. 30 shows the results of ISH detection of Islr expression in tumor specimens.
  • A is a representative microscopic image of the control group
  • B is a typical microscopic image of the AM80 3 mg / kg / day group
  • C is a control group and AM80 3 mg / kg / day. It is a figure which compares the number of dots of the Islr positive signal per strongly magnified field (400 times) in a group.
  • the expression of Islr, a marker of inhibitory CAF was increased by administration of AM80, and the number of dots of the Islr positive signal in the 3 mg / kg / day group of AM80 was significantly higher than that in the control group.
  • FIG. 31 shows the results of ISH detection of Acta2-expressing cells in tumor specimens.
  • A is a representative microscopic image of the control group
  • B is a typical microscopic image of the AM80 3 mg / kg / day group
  • C is a control group and AM80 3 mg / kg / day. It is a figure which compares the number of dots of Acta2 positive signal per strongly magnified field (400 times) in a group.
  • the expression of Acta2 a marker of accelerated CAF, was reduced by administration of AM80, and the number of dots of Acta2 positive signal in the 3 mg / kg / day group of AM80 was significantly lower than that in the control group.
  • FIG. 32 shows the results of immunostaining of tumor specimens with anti-CD31 antibody.
  • A is a representative microscopic image of the control group
  • B is a typical microscopic image of the AM80 3 mg / kg / day group
  • C is a control group and AM80 3 mg / kg / day. It is a figure which compares the vascular lumen area of a group. The vascular lumen area of the 3 mg / kg / day group of AM80 was significantly higher than that of the control group.
  • Example 7 Effect of combined use of tamibarotene and gemcitabine on mouse pancreatic cancer cells
  • gemcitabine 50 mg / kg is intraperitoneally administered once each on Day15, Day18, and Day21 to the Gem group and the Gem + AM80 group.
  • DMSO is orally administered to the control group instead of tamibarotene, and saline is intraperitoneally administered instead of gemcitabine.
  • Tumor volume is measured before the start of AM80 administration (Day8), Day12, Day15, Day18, Day21, and Day24. The protocol is shown in FIG.
  • FIG. 34 shows that the Gem group significantly suppresses tumor growth than the control group, and the Gem + AM80 group significantly suppresses tumor growth than the Gem group. This result indicates that tamibarotene significantly enhances the tumor growth inhibitory effect of gemcitabine.
  • Example 8 Effect of combined use of tamibarotene, gemcitabine and nabpaclitaxel on human pancreatic cancer cells
  • Tamibarotene (3.0 mg / kg) is orally administered to the Gem + nabPTX + AM80 group once daily for 17 days from the grouping day (Day 1).
  • gemcitabine 50 mg / kg was intraperitoneally administered once each on Day7, Day10 and Day13
  • nabpaclitaxel 5 mg / kg was administered once each on Day7, Day10 and Day13 in the Gem + nabPTX group and Gem + nabPTX + AM80 group.
  • DMSO is orally administered instead of tamibarotene
  • saline is intraperitoneally administered instead of gemcitabine
  • saline is intravenously administered instead of nabupaclitaxel.
  • Tumor volume is measured before the start of AM80 administration (Day1), Day4, Day7, Day10, Day13, and Day16. The protocol is shown in FIG.
  • Example 9 Effect of combined use of tamibarotene and gemcitabine in a mouse pancreatic cancer spontaneous onset model (KPC mouse)]
  • KPC mouse Mouse pancreatic cancer spontaneous onset model (KPC mouse) (SR Hingorani et al., Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer Cell 7, 469-483 (2005) From the time when it was confirmed by abdominal echo examination that the pancreatic tumor major axis became 1 mm or more (Day 1), tamibarotene (3.0 mg / kg) was orally administered once a day for 17 days.
  • gemcitabine (50 mg / kg) is intraperitoneally administered once each on Day 7, Day 10 and Day 13, but tamibarotene is not administered.
  • the tumor major axis is measured before the start of AM80 administration (Day1), Day8, Day15, and Day22. The protocol is shown in FIG. 37.
  • FIG. 38 shows that the Gem + AM80 group significantly suppresses tumor growth than the control group (Gem group).
  • KPC mice have more abundant stroma with infiltration of CAF and are the closest mouse model to human pancreatic tumors. It is shown that tamibarotene significantly enhances the tumor growth inhibitory effect of gemcitabine in this spontaneous model.
  • Example 10 Effect of combined use of tamibarotene and immune checkpoint inhibitor in a mouse pancreatic cancer spontaneous onset model (KPC mouse)]
  • KPC mouse pancreatic cancer spontaneous onset model
  • Example 11 Effect of combined use of tamibarotene and gemcitabine in mice lacking mephrine]
  • Tamibarotene (3.0 mg / kg) is orally administered to the Gem + AM80 group once daily for 17 days from Day 8.
  • Gemcitabine 50 mg / kg is intraperitoneally administered once each on Day15, Day18, and Day21 in the Gem group and Gem + AM80 group.
  • Body weight and tumor volume will be measured before the start of AM80 administration (Day8), Day12, Day15, Day18, Day21, and Day24.
  • mice are euthanized, tumors are removed, tissue specimens are prepared, and in situ hybridization (ISH) is performed to detect the expression of the actin gene (Acta2), and positive signals are counted for each.
  • ISH in situ hybridization
  • FIG. 41 shows the results of ISH detection of Acta2-expressing cells in tumor specimens.
  • A is a representative microscopic image of the Gem group
  • B is a typical microscopic image of the Gem + AM80 group
  • C is the number of dots of Acta2 positive signal per strongly magnified field of view (400 times) of both groups. It is a figure which compares. There is no difference in the number of dots of the positive signal between the two groups. This result indicates that tamibarotene enhances the effect of the concomitant anticancer drug via mephrin.
  • Example 12 Preparation of mephrin overexpressing tumor
  • ISH in situ hybridization
  • Example 13 Effect of gemcitabine on a tumor overexpressing mephrin
  • retinoids other than tamibarotene show similar effects when used in combination with gemcitabine.
  • tamibarotene shows similar effects when used in combination with cancer therapeutic agents other than gemcitabine.
  • retinoids other than tamibarotene show similar effects when used in combination with anticancer drugs other than gemcitabine.
  • Example 14 Functional analysis of mephrin 1
  • (1) Experimental method Collect the culture supernatant of the control Flp-In-293 cells or cells stably expressing mouse mephrin (control condition medium, mephrin condition medium). Next, each condition medium is mixed with recombinant human LoxL2 at a specified concentration, and LOX activity is quantified using the LOX activity assay kit (Abcam, ab112139). Since recombinant LOX is inactive, LOXL2 is used.
  • Example 15 Functional analysis of mephrin 2
  • mice 15-24 weeks old are euthanized and the pancreas is removed to prepare a tissue specimen of the tumor.
  • Eight to sixteen images are randomly selected from the tissue specimen of the tumor, the arrangement of collagen is measured with a second harmonic microscope, the coefficient of curvature is calculated, and the linearity of collagen is analyzed.
  • FIG. (A) is a representative second harmonic microscopic image of the wild-type KPC group
  • (B) is a typical second harmonic microscopic observation image of the mephrin-deficient KPC group
  • (C) is a representative second harmonic microscopic image of the collagen of both groups. It is a figure comparing the curvature of curvature, and N in the figure is the number of observation fields. This result indicates that collagen linearity is significantly increased in the mephrin-deficient KPC group.
  • Example 16 Effect of tamibarotene on collagen in tumor interstitium
  • Tamibarotene (3.0 mg / kg) is orally administered to the AM80 group once daily for 7 days from Day 8.
  • DMSO is orally administered to the control group instead of tamibarotene.
  • mice are euthanized, tumors are removed, and tissue specimens are prepared. Eight to sixteen images are randomly selected from the tumor tissue specimen, the collagen sequence is measured with a second harmonic microscope, and the curvature (linearity) is analyzed.
  • Example 17 Examination of the effect of tamibarotene and gemcitabine depending on the administration time]
  • tamibarotene 3.0 mg / kg is orally administered once daily for 10 days from Day 15.
  • Gemcitabine 50 mg / kg is administered intraperitoneally once each on Day15, Day18 and Day21.
  • DMSO is orally administered on the same day as the pre- and co-administration of tamibarotene. Tumor volume is measured before the start of AM80 administration (Day8), Day12, Day15, Day18, Day21, and Day24. The protocol is shown in FIG.
  • Example 18 Effect of tamibarotene, gemcitabine, and immune checkpoint inhibitor combined use
  • PDL1 group an anti-PD-L1 antibody-administered group
  • PDL1 + AM80 group an anti-PD-L1 antibody and tamibarotene-administered group
  • Gemcitabine (100 mg / kg) is administered intraperitoneally on Day7, and 250 ⁇ g / animal of anti-PD-L1 antibody (10F.9G2) is intraperitoneally administered on Day8, Day10, Day12, Day14, Day16 and Day18. Tumor volume is measured every other day from Day1, Day4, Day7 to Day27. The protocol is shown in FIG. In addition, the survival rate until the death of all mice is calculated.
  • Example 19 Effect of combined use of tamibarotene and immune checkpoint inhibitor
  • mice are subcutaneously transplanted with mouse pancreatic cancer cells mT5 (1.0 x 10 6).
  • the tumors are divided into three groups, a control group, an anti-PD-L1 antibody administration group (PDL1 group), and an anti-PD-L1 antibody and tamibarotene administration group (PDL1 + AM80 group) so that the tumor volume becomes even.
  • Each group n 7).
  • the day of grouping is designated as Day 1
  • tamibarotene (3 mg / kg) is orally administered once daily for 7 days from Day 1.
  • IgG is administered to the control group instead of the anti-PD-L1 antibody.
  • Tumor volume is measured every other day from Day 8 to Day 26. The protocol is shown in FIG. 55. In addition, the survival rate until the death of all mice is calculated.
  • Example 20 Effect of tamibarotene and immune checkpoint inhibitor combined use on bladder cancer
  • PDL1 group anti-PD-L1 antibody-administered group
  • PDL1 + AM80 group anti-PD-L1 antibody and tamibarotene-administered group
  • Example 21 Effect of combined use of tamibarotene and immune checkpoint inhibitor on lung cancer
  • LCC-luc 1.0 ⁇ 10 6 cells
  • luciferase was forcibly expressed in the Lewis lung carcinoma cell line (LCC), which is a mouse lung cancer cell line.
  • tamibarotene (3 mg / kg) is orally administered once daily for 7 days.
  • Example 22 Effect of combined use of tamibarotene and immune checkpoint inhibitor on gastric cancer
  • PDL1 group anti-PD-L1 antibody-administered group
  • PDL1 + AM80 group anti-PD-L1 antibody and tamibarotene-administered group
  • Tamibarotene is orally administered at 3 mg / kg once daily for 7 days. From the day after the end of tamibarotene administration, 250 ⁇ g / animal of PD-L1 antibody (10F.9G2) is intraperitoneally administered once every 3 days, 3 or 6 times in total. Tumor volume is measured once every 3 days from the start of tamibarotene administration. Compared with the PDL1 group, the PDL1 + AM80 group significantly suppresses tumor growth.
  • Example 23 Effect of tamibarotene and immune checkpoint inhibitor combination in mice lacking mephrine]
  • PDL1 group an anti-PD-L1 antibody administration group
  • PDL1 + AM80 group anti-PD-L1 antibody and tamibarotene administration group
  • IgG is administered to the control group instead of the anti-PD-L1 antibody.
  • Tumor volume is measured every other day from Day 8 to Day 26. The protocol is shown in FIG. In addition, the survival rate until the death of all mice is calculated.
  • Example 24 Effect of combined use of tamibarotene and immune checkpoint inhibitor on gastric cancer
  • PD1 group an anti-PD1 antibody-administered group
  • PD1 + AM80 group an anti-PD1 antibody and tamibarotene-administered group
  • PD1 antibody (10F.9G2) 200 ⁇ g / animal intraperitoneally once every 3 days for a total of 3 times. Tumor volume is measured once every 3 days from the start of tamibarotene administration.

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Abstract

本発明は、レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者を選択する方法であって、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を選択する工程を含む方法を提供する。また、本発明は、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を対象とし、レチノイドとがん治療薬とを組み合わせて投与されることを特徴とする医薬を提供する。

Description

レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者の選択方法およびレチノイドとがん治療薬との併用医薬
　本発明は、レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者の選択方法、および選択されたがん患者に有効なレチノイドとがん治療薬との併用医薬に関するものである。
　間質は、がんの微小環境を構成するがん関連線維芽細胞、細胞外基質、免疫細胞、血管などの総称である。膵がん（「膵腫瘍」とも表現する場合がある）、胆管がん、乳がん、肺がん等の一部の悪性腫瘍ではこの間質が多く、抗がん剤治療抵抗性の原因となっていると言われてきた。間質の主要な構成要素であるがん関連線維芽細胞は、様々な機序でがん細胞の増殖を促進することやがん関連線維芽細胞由来の豊富な細胞外基質が抗がん剤の浸透を妨げること等から、がん促進性因子であると考えられていた。そこで、がん関連線維芽細胞を標的とするがん治療が試みられたが、予想に反して悪性度の高いがん細胞が発生した（非特許文献１）。
　一方、最近の研究により、上記のがん促進性がん関連線維芽細胞以外に、がん抑制性がん関連線維芽細胞も存在することが分かり、その特異的な分子マーカーとしてGPIアンカー型の膜分子であるメフリン（Meflin）が同定された（非特許文献２～４）。また、がんの進行に伴い、がん抑制性がん関連線維芽細胞ががん促進性がん関連線維芽細胞に変化（形質転換）すること、一方で特定の薬剤によって、がん促進性がん関連線維芽細胞は、がん抑制性がん関連線維芽細胞に戻る（リプログラミングされる）ことも可能であることが明らかになった。現在、がん促進性がん関連線維芽細胞をがん抑制性がん関連線維芽細胞にリプログラミングする薬剤として、ATRA（all-trans retinoic acid）またはビタミンDが知られている（非特許文献５～９）。
　上記のような抗がん剤治療抵抗性の間質が多い悪性腫瘍を有する一部のがん患者に対して特異性の高い治療法を開発し、さらに当該治療法が有効な一部のがん患者を正確に選択できる方法を開発することができれば、がん患者に対して効果の低い治療を行う機会を減らすことができ、医療費の低減に寄与すると共に、最適な治療による患者の予後改善にも寄与することができると考えられる。
https://www.sec.gov/Archives/edgar/data/1113148/000119312512026049/d290658dex991.htm（米国証券取引委員会ホームページ） Cancer Cell. 2014; 25: 719-734. Cancer cell. 2014; 25: 735-747. Meflin-positive cancer-associated fibroblasts inhibit pancreatic carcinogenesis. Cancer Res 79:5367-81, 2019 Biochem Pharmacol. 2003 Aug 15;66(4):633-41. doi: 10.1016/s0006-2952(03)00390-3. Gut. 2006 Jan; 55(1): 79-89. doi: 10.1136/gut.2005.064543 Gastroenterology. 2011 Oct;141(4):1486-97, 1497.e1-14. doi: 10.1053/j.gastro.2011.06.047. Epub 2011 Jun 24. Cell. 2014 Sep 25;159(1):80-93. doi: 10.1016/j.cell.2014.08.007. Nat Commun. 2016 Sep 7;7:12630. doi: 10.1038/ncomms12630.
　本発明は、抗がん剤治療抵抗性の間質が多い悪性腫瘍を有するがん患者に効果の高いがん治療用医薬を提供すること、当該医薬を用いる治療が有効ながん患者を選択する方法を提供することを課題とする。
　本発明は、上記の課題を解決するために以下の各発明を包含する。
［１］レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者を選択する方法であって、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を選択する工程を含む方法。
［２］前記がん患者を選択する工程が、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織において、少なくとも１個のがん関連線維芽細胞を検出することを含む、前記［１］に記載の方法。
［３］前記がん患者を選択する工程が、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織の病理組織標本を作製し、顕微鏡観察下で少なくとも１個のがん関連線維芽細胞を検出することを含む、前記［１］または［２］に記載の方法。
［４］前記がん患者を選択する工程が、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織の病理組織標本を顕微鏡観察し、がん細胞領域と間質領域が含まれる任意の強拡大視野中に１個以上のがん関連線維芽細胞を検出することを含む、前記［１］～［３］のいずれかに記載の方法。
［５］がん関連線維芽細胞の検出が、ヘマトキシリン・エオジン染色を行った病理組織標本を顕微鏡観察することにより行われる、前記［３］または［４］に記載の方法。
［６］がん関連線維芽細胞の検出が、がん関連線維芽細胞のマーカー分子に対する免疫組織化学染色またはin situ hybridizationにより行われる、前記［３］または［４］に記載の方法。
［７］前記［１］～［６］のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、レチノイドとがん治療薬とを組み合わせて投与されることを特徴とする医薬。
［８］がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、前記［７］に記載の医薬。
［９］レチノイドがタミバロテンである、前記［７］または［８］に記載の医薬。
［１０］レチノイドが先行投与されるように用いられる前記［７］～［９］のいずれかに記載の医薬。
［１１］前記［１］～［６］のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、レチノイドを有効成分とする、がん治療薬の作用増強用および／またはがん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬。
［１２］がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、前記［１１］に記載の医薬。
［１３］レチノイドがタミバロテンである、前記［１１］または［１２］に記載の医薬。
［１４］前記［１］～［６］のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物を有効成分とする、がん治療薬の作用増強用医薬。
［１５］メフリンを過剰発現させる組成物がメフリン遺伝子を含有するウイルスベクターである、前記［１４］に記載の医薬。
［１６］がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、前記［１４］または［１５］に記載の医薬。
［１７］前記［１］～［６］のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤とがん治療薬とを組み合わせて投与されることを特徴とする医薬。
［１８］がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、前記［１７］に記載の医薬。
［１９］がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤が先行投与されるように用いられる前記［１７］または［１８］に記載の医薬。
［２０］前記［１］～［６］のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤を有効成分とする、がん治療薬の作用増強用および／またはがん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬。
［２１］がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、前記［２０］に記載の医薬。
　本発明により、抗がん剤治療抵抗性の間質が多い悪性腫瘍を有するがん患者に効果の高いがん治療用医薬を提供することができる。また、当該医薬を用いる治療が有効ながん患者を選択する方法を提供することができる。本発明により、治療効果が高いがん患者を特定して、選択されたがん患者のみに治療を行うことができるので、治療効果が低いがん患者に高額な医療費を支払い、無駄な治療を行うことを回避することができる。
手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍（退形成がん）のヘマトキシリン・エオジン（HE）染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍（膵管内乳頭粘液性腺がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍（管状腺がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍（管状腺がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（腺房細胞がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（腺房細胞がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（膵管内乳頭粘液性腺がん（非浸潤がん））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（膵管内乳頭粘液性腺腫（IPMA））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（粘液性嚢胞腫瘍）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（神経内分泌腫瘍（G1、insulinoma））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（神経内分泌腫瘍（G1、gastrinoma））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（膵上皮内腫瘍性病変（PanIN））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（漿液性嚢胞腺腫）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 手術により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（充実性偽乳頭状腫瘍（SPN））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 生検により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍（管状腺がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 生検により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍（退形成がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 生検により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍（膵管内乳頭粘液性腺がん（浸潤がん））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 生検により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（腺房細胞がん）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 生検により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（充実性偽乳頭状腫瘍（SPN））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 生検により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（神経内分泌腫瘍）のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 生検により得られた、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍（膵管内乳頭粘液性腺腫（IPMA））のHE染色標本を観察した結果を示す図である。 間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍の組織標本について、抗メフリン抗体を用いる免疫組織染色（左）およびメフリン遺伝子のmRNAにハイブリダイズするプローブを用いたin situ hybridization（ISH）を行った結果を示す図である。 間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う膵腫瘍の組織標本について、抗メフリン抗体を用いる免疫組織染色（左）およびメフリン遺伝子のmRNAにハイブリダイズするプローブを用いたin situ hybridization（ISH）を行った結果を示す図である。 間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴わない膵腫瘍の組織標本について、抗メフリン抗体を用いる免疫組織染色（左）およびメフリン遺伝子のmRNAにハイブリダイズするプローブを用いたin situ hybridization（ISH）を行った結果を示す図である。 実施例３のプロトコールを示す図である。 移植から15日目の腫瘍体積を測定した結果を示す図であり、（A）はヒトすい臓がん細胞を単独移植したヌードマウスにおけるゲムシタビンとタミバロテンを投与した群（Gem＋AM80群）およびゲムシタビンとDMSOを投与した群（Gem＋DMSO群）の結果、（B）はヒトすい臓がん細胞とヒト膵星細胞とを共移植したヌードマウスにおけるGem＋AM80群とGem＋DMSO群の結果である。 初代マウス間葉系幹細胞を100％コンフルエントになるまで培養し、ATRA、AM80またはAM580を培地に添加して48時間後の遺伝子発現を測定した結果を示す図であり、（A）がメフリン遺伝子（Islr）、（B）がアクチン遺伝子（Acta2）、（C）がI型コラーゲン遺伝子（Col1a1）、（D）がIII型コラーゲン遺伝子（Col3a1）の結果である。 実施例６のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例６において、各群の移植後の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例６において、移植後22日目に腫瘍を摘出して組織切片を作製し、腫瘍におけるメフリン遺伝子（Islr）の発現をin situ hybridization（ISH）で検出した結果を示す図であり、（A）はコントロール群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はAM80の3 mg/kg/day群の代表的な顕微鏡観察像、（C）は両群の強拡大視野あたりのIslr陽性シグナルのドット数を比較する図である。 実施例６において、移植後22日目に腫瘍を摘出して組織切片を作製し、腫瘍におけるアクチン遺伝子（Acta2）の発現をin situ hybridization（ISH）で検出した結果を示す図であり、（A）はコントロール群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はAM80の3 mg/kg/day群の代表的な顕微鏡観察像、（C）は両群の強拡大視野あたりのActa2陽性シグナルのドット数を比較する図である。 実施例６において、移植後22日目に腫瘍を摘出して組織切片を作製し、抗CD31抗体で免疫染色して血管内腔面積を測定した結果を示す図であり、（A）はコントロール群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はAM80の3 mg/kg/day群の代表的な顕微鏡観察像、（C）は両群の血管内腔面積を比較する図である。 実施例７のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例７において、各群の移植後の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例８のプロトコールを示す図である。 ヒトすい臓がん細胞を皮下移植したヌードマウスを用いた実施例８において、各群の移植後の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例９のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん自然発症モデル（KPCマウス）を用いた実施例９において、各群の群分け後の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例１１のプロトコールを示す図である。 メフリン欠失マウスを用いた実施例１１において、各群の移植後の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例１１において、移植後24日目に腫瘍を摘出して組織切片を作製し、腫瘍におけるアクチン遺伝子（Acta2）の発現をin situ hybridization（ISH）で検出した結果を示す図であり、（A）はゲムシタビンを投与した群（Gem群）の代表的な顕微鏡観察像、（B）はゲムシタビンとタミバロテンを投与した群（Gem＋AM80群）の代表的な顕微鏡観察像、（C）は両群の強拡大視野あたりのActa2陽性シグナルのドット数を比較する図である。 実施例１２のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例１２において、感染細胞にメフリンを過剰発現させるセンダイウイルス（SeV-Meflin）および感染細胞にGFPを過剰発現させるセンダイウイルス（SeV-GFP）をそれぞれ腫瘍内投与し、移植後17日目に腫瘍を摘出して組織切片を作製し、腫瘍におけるメフリン遺伝子（Islr）の発現をin situ hybridization（ISH）で検出した結果を示す図であり、（A）はSeV-GFPを投与した群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はSeV-Meflinを投与した群の代表的な顕微鏡観察像である。 実施例１２において、移植後17日目の両群の腫瘍体積を比較する図である。 実施例１３のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例１３において、SeV-Meflinを腫瘍内投与して、さらにゲムシタビンを投与した群、およびSeV-GFPを腫瘍内投与した群に、さらにゲムシタビンを投与した群の、移植後17日目の腫瘍体積を比較する図である。 マウスメフリンを安定して発現している細胞の培養上清とコントロール細胞の培養上清をそれぞれ組換えヒトリシルオキシダーゼL2（LoxL2）と混合し、ヒトリシルオキシダーゼ活性を測定した結果を示す図である。 野生型のマウスすい臓がん自然発症モデル（KPCマウス）およびメフリン欠失KPCマウスのすい臓腫瘍間質におけるコラーゲンの配列を第二高調波顕微鏡で測定した結果を示す図であり、（A）は野生型KPC群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（B）はメフリン欠失KPC群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（C）は両群のコラーゲンの曲率（直線性）を比較した図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスにタミバロテンまたは溶媒（DMSO）を投与し、腫瘍間質におけるコラーゲンの配列を第二高調波顕微鏡で測定した結果を示す図であり、（A）はコントロール群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（B）はタミバロテン投与群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（C）は両群のコラーゲンの曲率（直線性）を比較した図である。 実施例１７のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例１７において、タミバロテンを事前投与した後にゲムシタビンを投与した群、タミバロテンを事前投与した後にタミバロテンとゲムシタビンを同時投与した群、およびタミバロテンに代えてDMSOとゲムシタビンを投与した群の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例１８のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例１８において、抗PD-L1抗体を投与した群、および抗PD-L1抗体とタミバロテンを投与した群の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例１８において、両群の全マウスが死亡するまでの生存率の推移を示す図である。 実施例１９のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例１９において、抗PD-L1抗体を投与した群、抗PD-L1抗体とタミバロテンを投与した群、およびIgGを投与したコントロール群の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例１９において、全群の全マウスが死亡するまでの生存率の推移を示す図である。 実施例２０のプロトコールを示す図である。 マウス膀胱がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例２０において、抗PD-L1抗体を投与した群、および抗PD-L1抗体とタミバロテンを投与した群の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 マウス肺がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例１９において、抗PD-L1抗体を投与した群、および抗PD-L1抗体とタミバロテンを投与した群の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例２３のプロトコールを示す図である。 マウスすい臓がん細胞を皮下移植したメフリン欠失マウス用いた実施例２３において、抗PD-L1抗体を投与した群、抗PD-L1抗体とタミバロテンを投与した群、およびIgGを投与したコントロール群の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。 実施例２３において、全群の全マウスが死亡するまでの生存率の推移を示す図である。 マウス胃がん細胞を皮下移植したマウスを用いた実施例２４において、抗PD1抗体を投与した群、および抗PD1抗体とタミバロテンを投与した群の腫瘍体積を経時的に測定した結果を示す図である。
〔レチノイドとがん治療薬との組み合わせ医薬〕
　本発明は、レチノイドとがん治療薬とを組み合わせて投与されるがん治療用医薬を提供する（以下、「本発明の第１の医薬」と記す）。本発明の第１の医薬の投与対象は、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者である。間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者は、以下で説明する方法により選択することができる。このようなレチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者を選択する方法も、本発明に含まれる。
　レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者を選択する方法（以下、「本発明のがん患者選択方法」と記す）は、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を選択する工程を含む。当該がん患者を選択する工程は、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織において、少なくとも１個のがん関連線維芽細胞（Cancer associated fibroblast、以下「CAF」と略記する場合がある）を検出することを含む工程であればよい。悪性腫瘍組織は、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織であれば、生検で得られたものでもよく、手術により得られたものでもよい。被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織から、病理組織標本を作製してもよく、細胞懸濁液を調製してもよく、細胞破砕液を調製してもよい。CAFの検出手段は特に限定されず、CAF特異的な核酸を検出するものでもよく、CAF特異的なタンパク質を検出するものでもよく、CAF特異的な形態を検出するものでもよい。
　本発明のがん患者選択方法において、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を選択する工程は、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織の病理組織標本を作製し、顕微鏡観察下で少なくとも１個のCAFを検出することを含む工程であってもよい。病理組織標本の作製方法は特に限定されず、用いる染色方法または検出方法に応じて公知の方法から適宜選択することができる。顕微鏡観察は、病理組織標本の全領域にわたって行えばよく、その中に少なくとも１個のCAFが検出された場合に、当該被験患者は本発明の第１の医薬の投与が有効ながん患者として選択することができる。複数の病理組織標本を作製した場合は、いずれかの病理組織標本に少なくとも１個のCAFが検出された場合に、当該被験患者は本発明の第１の医薬の投与が有効ながん患者として選択することができる。
　本発明のがん患者選択方法において、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を選択する工程は、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織の病理組織標本を顕微鏡観察し、がん細胞領域と間質領域が含まれる任意の強拡大視野中に１個以上のCAFを検出することを含む工程であってもよい。１つの強拡大視野中のCAFの個数は、少なくとも1個あればよく、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個以上であってもよい。顕微鏡観察における「強拡大視野」は、40倍の対物レンズと10倍の接眼レンズを用いて400倍で観察することを意味し、高倍率視野（high power field; HPF）とも称される。
　病理組織標本にヘマトキシリン・エオジン（Hematoxylin Eosin）染色（以下、「HE染色」と略記する場合がある）を行って、CAFを検出してもよい。この場合は、通常、病理診断医がHE染色標本を顕微鏡で観察し、形態学的にCAFの有無を判定する。
　本発明のがん患者選択方法では、CAFのマーカー分子を免疫組織化学染色（Immunohistochemistry、以下「IHC」と略記する場合がある）で検出する方法を用いてもよく、CAFのマーカー分子をin situ hybridization（以下、「ISH」と略記する場合がある）で検出する方法を用いてもよい。IHCで検出する場合は、CAFのマーカー分子に特異的に結合する抗体を用いて、定法に従いIHC標本を作製することができる。ISHで検出する場合は、CAFのマーカー分子のmRNAに特異的にハイブリダイズするプローブを用いて、定法に従いISH標本を作製することができる。
　CAFのマーカー分子としては、α平滑筋アクチン（αSMA）、メフリン（Meflin）、 fibroblast activation protein（FAP）、血小板由来増殖因子受容体α（PDGFRα）、血小板由来増殖因子受容体β（PDGFRβ）、fibroblast specific protein 1（FSP1）、ポドプラニン（Podoplanin）、ペリオスチン（Periostin）、グレムリン（Gremlin）、デスミン（Desmin）、CXCL12、ビメンチン（Vimentin）、テネイシンC（Tenascin-C）、NG2、ASPN、スタニオカルシン-1（STC-1）、Gli1、I型コラーゲン（Col1a1）などが挙げられる。これらのマーカー分子に特異的に結合する抗体は、市販の抗体を用いることができる。これらのマーカー分子のmRNA特異的にハイブリダイズするプローブは、これらのマーカー分子をコードする遺伝子の塩基配列に基づいて、公知の方法により作製することができる。これらのマーカー分子をコードする遺伝子の塩基配列は、公知のデータベース（NCBIなど）から取得することができる。
　本発明の第１の医薬に用いられるレチノイドとしては、例えば、アシトレチン（Acitretin）、アダパレン（adapalene）、AGN194204（IRX4204、NRX194204、VTP 194204ともいう）、AGN195183、アリトレチノイン（alitretinoin、9-cis-Retinoic acidともいう）、アムシラロテン（amsilarotene）、AM580、ベキサロテン（bexarotene）、ビスフェノールAジグリシジルエーテル（Bisphenol A diglycidyl ether、BADGEともいう）、フェンレチニド（fenretinide）、4-ヒドロキシレチン酸（4-Hydroxyretinoic acid）、イソトレチノイン（isotretinoin、13-cis-Retinoic acidともいう）、LG268、LGD1550、ペレチノイン（peretinoin）、酢酸レチノール（Retinyl acetate）、タミバロテン（tamibarotene、AM80ともいう）、タザロテン（tazarotene）、トレチノイン（tretinoin、オールトランスレチノイン酸（ATRA）ともいう）、TTNPBなどが挙げられる。好ましくは、タミバロテンである。本明細書において、「レチノイド」には「ビタミンＡ誘導体」、「ビタミンＡ類似物質」、「レチノイン酸受容体（RAR）アゴニスト」および「レチノイドX受容体（RXR）アゴニスト」が含まれ、「レチノイン酸受容体（RAR）アンタゴニスト」および「レチノイドX受容体（RXR）アンタゴニスト」は含まれない。
　レチノイドは塩を形成していてもよく、その塩としては、薬学的に許容される塩が好ましい。例えば、塩酸、硫酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、リンゴ酸、クエン酸、オレイン酸、パルミチン酸、硝酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸等の酸との塩；ナトリウム、カリウム、カルシウム等のアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の、またはアルミニウムの水酸化物または炭酸塩との塩；トリエチルアミン、ベンジルアミン、ジエタノールアミン、ｔ－ブチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、アルギニン等との塩等が挙げられる。
　本発明者らは、後段の実施例で示すように、レチノイドは、併用するがん治療薬の間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍への送達を向上させることより、がん治療薬の作用を増強させることを見出している。それゆえ、レチノイドは、併用するがん治療薬の作用増強用医薬の有効成分であるといえる。また、レチノイドは、併用するがん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬の有効成分であるといえる。したがって、本発明には、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を対象とし、レチノイドを有効成分とする、がん治療薬の作用増強用医薬が含まれる。さらに、本発明には、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を対象とし、レチノイドを有効成分とする、がん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬が含まれる。
　本発明の第１の医薬に用いられるレチノイドは、医薬製剤の製造法として公知の方法（例えば、日本薬局方に記載の方法等）に従って、薬学的に許容される担体または添加剤を適宜配合して製剤化することができる。具体的には、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠、舌下錠、口腔内崩壊錠、バッカル錠等を含む）、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤を含む）、トローチ剤、シロップ剤、液剤、乳剤、懸濁剤、放出制御製剤（例えば速放性製剤、徐放性製剤、徐放性マイクロカプセル剤等）、エアゾール剤、フィルム剤（例えば口腔内崩壊フィルム、口腔粘膜貼付フィルム等）、注射剤（例えば皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤等）、点滴剤、経皮吸収型製剤、軟膏剤、ローション剤、貼付剤、坐剤（例えば肛門坐剤、膣坐剤等）、ペレット、経鼻剤、経肺剤（吸入剤）、点眼剤等の経口剤または非経口剤が挙げられる。担体または添加剤の配合割合については、医薬分野において通常採用されている範囲に基づいて適宜設定することができる。配合できる担体または添加剤は特に制限されないが、例えば水、生理食塩水、その他の水性溶媒、水性または油性基剤等の各種担体；賦形剤、結合剤、ｐＨ調整剤、崩壊剤、吸収促進剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、香料等の各種添加剤が挙げられる。
　錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は通常の製剤化手順（例えば有効成分を注射用水、天然植物油等の溶媒に溶解または懸濁させる等）に従って調製することができる。注射用の水性液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えばD-ソルビトール、D-マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール（エタノール等）、ポリアルコール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、非イオン性界面活性剤（ポリソルベート80、HCO-50等）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液等）、無痛化剤（例えば塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイン等）、安定剤（例えばヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコール等）、保存剤（例えばベンジルアルコール、フェノール等）、酸化防止剤などと配合してもよい。
　レチノイドは、ヒトや他の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して毒性が低く、安全に投与することができる。製剤中のレチノイドの含量は、剤型、投与方法、担体等により異なるが、製剤全量に対して通常0.01～100％（w/w）の割合であり、0.1～95％（w/w）の割合であってもよい。
　レチノイドの投与量は、投与対象、症状、投与ルートなどにより差異はあるが、経口投与の場合、例えば体重約60kgのヒトにおいては、１日当たり約0.01～1000 mg、好ましくは約0.1～100 mg、より好ましくは約0.5～500 mgである。非経口投与の合は、その１回投与量は患者の状態、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば注射剤では、通常体重1kg当たり約0.01～1000 mg、好ましくは約0.01～500 mg、より好ましくは約0.01～20 mgを静脈に投与する。１日当たりの総投与量は、単一投与量であっても分割投与量であってもよい。
　本発明の第１の医薬に用いられるがん治療薬は特に限定されないが、例えば化学療法剤、免疫療法剤またはホルモン療法剤が好ましい。これらのがん治療薬はリポソーム製剤でもよい。また、これらのがん治療薬は核酸医薬、抗体医薬であってもよい。
　化学療法剤としては、特に限定されないが、例えばナイトロジェンマスタード、塩酸ナイトロジェンマスタード-N-オキシド、クロラムブチル、シクロフォスファミド、イホスファミド、チオテパ、カルボコン、トシル酸インプロスルファン、ブスルファン、塩酸ニムスチン、ミトブロニトール、メルファラン、ダカルバジン、ラニムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、トリエチレンメラミン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ピポブロマン、エトグルシド、カルボプラチン、シスプラチン、ミボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、アルトレタミン、アンバムスチン、塩酸ジブロスピジウム、フォテムスチン、プレドニムスチン、プミテパ、リボムスチン、テモゾロミド、トレオスルファン、トロフォスファミド、ジノスタチンスチマラマー、アドゼレシン、システムスチン、ビゼレシン等のアルキル化剤；例えば、メルカプトプリン、6-メルカプトプリンリボシド、チオイノシン、メトトレキサート、ペメトレキセド、エノシタビン、シタラビン、シタラビンオクフォスファート、塩酸アンシタビン、5-FU系薬剤（例、フルオロウラシル、テガフール、UFT、ドキシフルリジン、カルモフール、ガロシタビン、エミテフール、カペシタビン等）、アミノプテリン、ネルザラビン、ロイコボリンカルシウム、タブロイド、ブトシン、フォリネイトカルシウム、レボフォリネイトカルシウム、クラドリビン、エミテフール、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、ペントスタチン、ピリトレキシム、イドキシウリジン、ミトグアゾン、チアゾフリン、アンバムスチン、ベンダムスチン等の代謝拮抗剤；例えば、アクチノマイシンD、アクチノマイシンC、マイトマイシンC、クロモマイシンA3、塩酸ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン、塩酸ピラルビシン、塩酸エピルビシン、ネオカルチノスタチン、ミスラマイシン、ザルコマイシン、カルチノフィリン、ミトタン、塩酸ゾルビシン、塩酸ミトキサントロン、塩酸イダルビシン等の抗がん性抗生物質；例えば、エトポシド、リン酸エトポシド、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、テニポシド、パクリタキセル、ドセタクセル、ビノレルビン、イリノテカン、塩酸イリノテカン等の植物由来抗がん剤などが挙げられる。
　分子標的薬としては、特に限定されないが、例えばアファチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ネシツムマブ、クリゾチニブ、アレクチニブ、ラパチニブ、トラスツズマブ、トラスツズマブ エムタンシン、ペルツズマブ、ベバシズマブ、アキシチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、エベロリムス、テムシロリムス、シロリムス、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ボスチニブ、ポナチニブ、イブリツモマブ チウキセタン、オファツムマブ、リツキシマブ、ブレンツキシマブ ベドチン、ゲムツズマブオゾガ マイシン、モガムリズマブ、アレムツズマブ、ダラツムマブ、イノツズマブオゾガマイシン、デノスマブ、ボルテゾミブ、レンバチニブ、バンデタニブ、セリチニブ、イブルチニブ、オシメルチニブ、カルフィルゾミブ、エロツズマブ、イキサゾミブ、パルボシクリブ、オラパリブ、アベマシクリブ、ギルテリチニブ、ロルラチニブ、エヌトレクチニブ、キザルチニブ、ダコミチニブ、ベネトクラクス、カボザンチニブ、オビヌツズマブ、ブリナツモマブ、ロミデプシン、ボリノスタット、パノビノスタット、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ビニメチニブ、トラメチニブ、トシリズマブ、シルツキシマブ、インフリキシマブ、ラムシルマブなどが挙げられる。
　免疫療法剤としては、特に限定されないが、例えばピシバニール、クレスチン、シゾフィラン、レンチナン、ウベニメクス、インターフェロン、インターロイキン、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポイエチン、リンホトキシン、ＢＣＧワクチン、コリネバクテリウムパルブム、レバミゾール、ポリサッカライドＫ、プロコダゾール、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、セミプリマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブなどが挙げられる。
　免疫療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤であってもよい。免疫チェックポイント阻害剤の標的分子としては、例えば、CTLA-4、PD-1、LAG-3、BTLA、KIR、TIM-3、PD-L1、PD-L2、B7-H3、B7-H4、HVEM、GAL9、CD160、VISTA、BTNL2、TIGIT、PVR、BTN1A1、BTN2A2、BTN3A2、CSF-1Rなどが挙げられる。免疫チェックポイント阻害剤の標的分子は、CTLA-4、PD-1またはPD-L1であってもよい。抗CTLA-4抗体としてはイピリムマブ、トレメリムマブなどが挙げられ、抗PD-1抗体としては、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、セミプリマブなどが挙げられ、抗PD-L1抗体としては、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブなどが挙げられる。
　ホルモン療法剤としては、特に限定されないが、例えばホスフェストロール、ジエチルスチルベストロール、クロロトリアニセン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸シプロテロン、ダナゾール、アリルエストレノール、ゲストリノン、メパルトリシン、ラロキシフェン、オルメロキシフェン、レボルメロキシフェン、抗エストロゲン（例えばクエン酸タモキシフェン、クエン酸トレミフェン等）、ピル製剤、メピチオスタン、テストロラクトン、アミノグルテチイミド、LH-RHアゴニスト（例えば酢酸ゴセレリン、ブセレリン、リュープロレリン等）、ドロロキシフェン、エピチオスタノール、スルホン酸エチニルエストラジオール、アロマターゼ阻害薬（例えば塩酸ファドロゾール、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ボロゾール、フォルメスタン等）、抗アンドロゲン（例えばフルタミド、ビカルタミド、ニルタミド等）、５α－レダクターゼ阻害薬（例えばフィナステリド、エプリステリド等）、副腎皮質ホルモン系薬剤（例えばデキサメタゾン、プレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン等）、アンドロゲン合成阻害薬（例えばアビラテロン等）などが挙げられる。
　本発明の第１の医薬に用いられるレチノイドとがん治療薬は、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。本明細書において「組み合わせて投与される」とは、レチノイドの適用時期とがん治療薬適用時期が重複していることを意味し、同時に投与することを要するものではない。本発明の第１の医薬において、レチノイドの投与を先行して開始し、時間差をおいてがん治療薬の投与を開始することが好ましい。レチノイドの投与開始とがん治療薬の投与開始の時間差は特に限定されないが、1日以上、2日以上、3日以上、4日以上、5日以上、6日以上、7日以上の時間差であってもよい。がん治療薬の投与量は、臨床上用いられている投与量に準ずればよく、投与対象、投与対象の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、組み合わせ等により適宜選択することができる。
〔メフリンを過剰発現させる組成物を有効成分とする医薬〕
　本発明は、腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物を有効成分とする、がん治療薬の作用増強用医薬を提供する（以下、「本発明の第２の医薬」と記す）。本発明の第２の医薬の投与対象は、本発明の第１の医薬の投与対象と同じ、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者である。したがって、本発明の第２の医薬の投与対象は、上述の本発明のがん患者選択方法によって選択することができる。
　腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物としては、メフリンをコードするDNAを発現可能に挿入したプラスミドベクター、ウイルスベクターなどを含む組成物を好適に用いることができる。メフリンをコードする遺伝子の塩基配列は公知のデータベース（NCBIなど）から容易に取得することができる。例えば、ヒトメフリン遺伝子（ISLR）の塩基配列のアクセッション番号は、NM_201526.2またはNM_005545.4である。メフリンを発現するプラスミドベクターまたはウイルスベクターは、取得したヒトメフリン遺伝子（ISLR）の塩基配列に基づいて、公知の遺伝子工学的手法を用いて作製することができる。
　腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物を、非ウイルスベクターの形態で投与する場合、リポソームを用いてメフリン発現プラスミドを導入する方法（リポソーム法、HVJ-リポソーム法、カチオニックリポソーム法、リポフェクション法、リポフェクトアミン法など）、マイクロインジェクション法、遺伝子銃（Gene Gun）でキャリア（金属粒子）とともにメフリン発現プラスミドを細胞に移入する方法などを利用することができる。ウイルスベクターの形態で投与する場合、無毒化したレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス、センダイウイルス、SV40などのDNAウイルスまたはRNAウイルスに、メフリン発現カセットを導入し、標的の腫瘍にウイルスベクターを感染させることにより、メフリン遺伝子を導入することができる。本発明の第２の医薬の有効成分としては、メフリン遺伝子を含有するウイルスベクターが好ましい。
　腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物の投与量は、ベクターの種類、発現効率、腫瘍の大きさ等を考慮して、適宜設定することが好ましい。
　本発明の第２の医薬は、がん治療薬の作用増強用医薬であるので、がん治療薬と組み合わせて投与されることが好ましい。組み合わせるがん治療薬については、上記本発明の第１の医薬で用いられるがん治療薬と同じである。
〔がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤とがん治療薬との組み合わせ医薬〕
　本発明は、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤とがん治療薬とを組み合わせて投与されるがん治療用医薬を提供する（以下、「本発明の第３の医薬」と記す）。本発明の第３の医薬の投与対象は、本発明の第１の医薬の投与対象と同じ、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者である。したがって、本発明の第３の医薬の投与対象は、上述の本発明のがん患者選択方法によって選択することができる。
　リシルオキシダーゼ（lysyl oxidase、以下「LOX」と記す）は、第一級アミン基質を反応性アルデヒドに酸化する銅含有アミンオキシダーゼである。リシルオキシダーゼは、コラーゲンにおけるペプチジルリシンおよびヒドロキシリシン残基、ならびにエラスチンにおけるペプチジルリシン残基の酸化的脱アミノ化を触媒し、細胞外マトリックスの形成に必須である。発生するペプチジルアルデヒドは、自発的に縮合し、酸化反応を受けて、細胞外マトリックスの正常な構造上の完全性に必要なリシン由来の共有結合性架橋を形成する。
　がんの間質におけるLOXの活性抑制を誘導する薬剤としては、直接的にLOXを阻害する薬剤であってもよく、間接的にLOXを阻害する薬剤であってもよい。直接的にLOXを阻害する薬剤としては、LOX阻害薬、抗LOX中和抗体などが挙げられる。LOX阻害薬としては、例えば、シムツズマブ（simtuzumab）などのWO2011097513に開示されている抗体；GB2064などのWO2016144703に開示されている化合物；PXS-5505、PXS-5446、PXS-6302などのWO2020024017に開示されている化合物；PXS-5120A、PXS-5153A、PXS-5129AなどのWO2017136870に開示されている化合物；WO2017136871に開示されているアザインドールハロアリルアミン誘導体；WO2018157190に開示されているハロアリルアミンピラゾール誘導体；WO2021012014に開示されているジフルオロハロアリルアミン誘導体；WO2011097513、WO2009017833、米国特許出願公開第2009/0053224号に開示されている抗体AB-0023；米国特許第4,965,288号、米国特許第4,997,854号、米国特許第4,943,593号、米国特許第5,021,456号、米国特許第5059714号、米国特許第5,120,764号、米国特許第5,182,297号、米国特許第5,252,608号、米国特許出願公開第2004/0248871号に開示されている化合物；PXS-5382A、PXS-5033A；PAT-1251 (CAS番号:2007885-39-2)などが挙げられる。また、LOX阻害薬は、カルボニルと結合した後に以下の第一級アミンのような共鳴により安定化する生成物を生成するものを含む、リシルオキシダーゼの活性部位のカルボニル基と反応する第一級アミンを含む：エチレンジアミン、ヒドラジン、フェニルヒドラジン、およびそれらの誘導体、セミカルバジド、ならびに尿素誘導体、β-アミノプロピオニトリル（BAPN）などのアミノニトリル、または2-ニトロエチルアミン、2-ブロモエチルアミン、2-クロロエチルアミン、2-トリフルオロエチルアミン、3-ブロモプロピルアミン、p-ハロベンジルアミンなどの不飽和もしくは飽和ハロアミン、セレノホモシステインラクトン。また、LOX阻害薬は、チオールアミン、例えば、D-ペニシラミン、または2-アミノ-5-メルカプト-5-メチルヘキサン酸、D-2-アミノ-3-メチル-3-((2-アセトアミドエチル)ジチオ)ブタン酸、p-2-アミノ-3-メチル-3-((2-アミノエチル)ジチオ)ブタン酸、ナトリウム-4-((p-1-ジメチル-2-アミノ-2-カルボキシエチル)ジチオ)ブタンスルフィナート、2-アセトアミドエチル-2-アセトアミドエタンチオールスルファナート、ナトリウム-4-メルカプトブタンスルフィナート三水和物などのその類似体によるリシルおよびヒドロキシリシル残基の酸化的脱アミノ化によりアルデヒド誘導体が生ずることを阻止する、そのような化合物の間接的阻害薬を含む。
　間接的にLOXを阻害する薬剤としては、例えば、悪性腫瘍の間質中のがん関連線維芽細胞にメフリンの発現を誘導する薬剤などが挙げられる。本発明者らは、メフリンがLOXの活性を阻害することを確認している（実施例１４参照）。また、本発明者らは、CAFの起源細胞と考えられる膵星細胞および間葉系幹細胞をレチノイドで処理することにより、メフリン遺伝子の発現量が上昇すること（実施例４、５参照）、マウスすい臓がん細胞を皮下移植して腫瘍を形成させたマウスにレチノイドを投与すると、腫瘍内のメフリン遺伝子の発現が有意に上昇すること（実施例６）を確認している。したがって、本発明の第１の医薬に用いられるレチノイドは、間接的にLOXを阻害する薬剤として好適に用いることができる。本発明の第３の医薬にレチノイドを用いる場合、レチノイドは本発明の第１の医薬と同様に実施することができる。
　さらに、本発明の第２の医薬の有効成分である腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物も、間接的にLOXを阻害する薬剤として好適に用いることができる。具体的には、メフリンをコードするDNAを発現可能に挿入したプラスミドベクター、ウイルスベクターなどを含む組成物などが挙げられる。本発明の第３の医薬に腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物を用いる場合、該組成物は本発明の第２の医薬と同様に実施することができる。
　LOXはコラーゲン分子同士を架橋する活性を有することが知られている。コラーゲン分子同士が架橋されることにより、コラーゲン繊維の強度が増し、組織が硬化すると考えられる。それゆえ、がんの間質におけるLOXの機能を阻害または抑制することにより、がん組織の硬化が抑制され、腫瘍血管が拡張し、併用するがん治療薬の腫瘍への送達を向上させ、がん治療薬の作用を増強できると考えられる。本発明者らは、この概念を「間質コンディショニング」と称し、予め対象腫瘍に「間質コンディショニング」を施した後、がん治療薬を投与することで治療効果を高めることができると考えている。したがって、本発明の第３の医薬で用いられるがんの間質におけるLOXの活性抑制を誘導する薬剤は、「間質コンディショニング」作用を有する薬剤と称することができる。
　本発明の第３の医薬で用いられるがんの間質におけるLOXの活性抑制を誘導する薬剤は、併用するがん治療薬の作用増強用医薬の有効成分であるといえ、併用するがん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬の有効成分であるといえる。したがって、本発明には、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を対象とし、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤を有効成分とする、がん治療薬の作用増強用医薬が含まれる。さらに、本発明には、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を対象とし、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤を有効成分とする、がん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬が含まれる。
　本発明の第３の医薬で用いられるがん治療薬は、上記本発明の第１の医薬で用いられるがん治療薬と同じである。本発明の第３の医薬に用いられるがんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤とがん治療薬は、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。本明細書において「組み合わせて投与される」とは、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の適用時期とがん治療薬適用時期が重複していることを意味し、同時に投与することを要するものではない。本発明の第３の医薬において、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の投与を先行して開始し、時間差をおいてがん治療薬の投与を開始することが好ましい。がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の投与開始とがん治療薬の投与開始の時間差は特に限定されないが、1日以上、2日以上、3日以上、4日以上、5日以上、6日以上、7日以上の時間差であってもよい。
　なお、LOX阻害を伴わないが「間質コンディショニング」作用を有する薬剤としては、例えば、WO2012012300に開示されているPEG化ヒアルロナン分解酵素PEGPH20などのヒアルロニダーゼ製剤；US20180201640に開示されている4-メチルウンベリフェロン（4―methylumbelliferone）誘導体などのヒアルロン酸合成阻害剤；WO2006026430に開示されているIPI-926（Patidegib、Saridegib）、WO2007131201に開示されているSonidegib（Odomzo）、WO2006028958に開示されているVismodegib（Erivedge）、US2009005416に開示されているPF-04449913（Daurismo）、WO2010147917に開示されているLY-2940680（Taladegib）、WO2009107850に開示されているNLM-001、WO2014001464に開示されている4SC-208などのヘッジホッグシグナル阻害剤；WO2008009437、WO2009019007、WO2012031773に開示されている核酸医薬NOX-A12、WO2012049277、WO2016157149に開示されている化合物USL-311、WO2018011376に開示されている化合物LIT-927などの間質細胞由来因子1阻害剤（stromal cell-derived factor 1 inhibitor）；WO2013048164に開示されている化合物IDF-11774、WO2005007828に開示されている化合物PX-478などの低酸素誘導因子1-アルファ阻害剤（hypoxia inducible factor 1-alpha inhibitor）；WO2015035223に開示されている化合物PT-2977（Belzutifan）などの低酸素誘導因子2-アルファ阻害剤（hypoxia inducible factor 2-alpha inhibitor）などが挙げられる。このような、LOX阻害を伴わないが「間質コンディショニング」作用を有する薬剤とがん治療薬との組み合わせ医薬も本発明に含まれる。
　本発明には以下の各発明が含まれる。
（１）上記本発明のがん患者選択方法により選択されたがん患者に、レチノイドとがん治療薬とを組み合わせて投与することを含む、がん治療方法。
（２）上記本発明のがん患者選択方法により選択されたがん患者に、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤とがん治療薬とを組み合わせて投与することを含む、がん治療方法。
（３）上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者に、レチノイド、腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物、または、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤を投与することを含む、がん治療薬の作用増強方法。
（４）上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者に、レチノイド、または、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤を投与することを含む、がん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進方法。
（５）がん治療用医薬を製造するための、レチノイド、または、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の使用であって、上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者を対象とする使用。
（６）がん治療薬の作用増強用医薬を製造するための、レチノイド、腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物、または、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の使用であって、上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者を対象とする使用。
（７）がん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬を製造するための、レチノイド、または、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の使用であって、上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者を対象とする使用。
（８）レチノイドおよびがん治療薬を含むがん治療キットであって、レチノイドとがん治療薬が別の容器に入っており、上記本発明のがん患者選択方法により選択されたがん患者を治療対象とする、キット。
（９）上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者のがん治療に使用するための、レチノイド。
（１０）上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者のがん治療に使用するための、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤。
（１１）上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者におけるがん治療薬の作用増強のための、レチノイド、腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物、または、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の使用。
（１２）上記本発明のがん患者選択方法により選択され、がん治療薬を投与されている患者におけるがん治療薬の標的腫瘍組織への送達を促進するための、レチノイド、または、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤の使用。
　以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
〔実施例１：HE染色による間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍の判定〕
　手術または生検で得られる腫瘍組織から、定法に従って組織標本を作製し、HE染色を行う。病理診断医がHE染色標本を顕微鏡で観察し、形態学的にCAFの有無を判定する。
　手術標本における間質中にCAFの浸潤を伴う膵腫瘍の例を図１～図４に示す。図１は退形成がん、図２は膵管内乳頭粘液性腺がん、図３および図４は管状腺がんである。図１～４において、矢印はCAFの位置を示す。また、手術標本における間質中にCAFの浸潤を伴わない膵腫瘍の例を図５～図１４に示す。図５および図６は腺房細胞がん、図７は膵管内乳頭粘液性腺がん（非浸潤がん）、図８は膵管内乳頭粘液性腺腫（IPMA）、図９は粘液性嚢胞腫瘍、図１０は神経内分泌腫瘍（G1、insulinoma）、図１１は神経内分泌腫瘍（G1、gastrinoma）、図１２は膵上皮内腫瘍性病変（PanIN）、図１３は漿液性嚢胞腺腫、図１４は充実性偽乳頭状腫瘍（SPN）である。なお、いずれの図においても低倍率は100倍、高倍率は200倍である。
　生検標本における間質中にCAFの浸潤を伴う膵腫瘍の例を図１５～図１７に示す。図１５は管状腺がん、図１６は退形成がん、図１７は膵管内乳頭粘液性腺がん（浸潤がん）である。また、生検標本における間質中にCAFの浸潤を伴わない膵腫瘍の例を図１８～図２１に示す。図１８は腺房細胞がん、図１９は充実性偽乳頭状腫瘍（SPN）、図２０は神経内分泌腫瘍、図２１は膵管内乳頭粘液性腺腫（IPMA）である。なお、いずれの図においても上段は100倍、下段は200倍である。
〔実施例２：IHCまたはISHによる間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍の判定〕
　手術または生検で得られた腫瘍組織から作製した組織標本に対して、CAFのマーカー分子に対する抗体を用いるIHCまたはCAFのマーカー分子のmRNAにハイブリダイズするプローブを用いるISHを行い、顕微鏡で観察して陽性シグナルの有無により判定する。本実施例では、CAFのマーカー分子としてメフリンを採用し、抗メフリン抗体を用いるIHCとメフリン遺伝子のmRNAにハイブリダイズするプローブを用いるISHを行う。
　図２２および図２３にメフリン陽性の膵腫瘍の例を示し、図２４にメフリン陰性の膵腫瘍の例を示す。いずれの図も同一サンプルについてIHCとISHを行った画像であり、高倍率は強拡大視野（400倍）である。図２２および図２３において、矢印は陽性細胞の位置を示す。なお、図２４のIHC高倍率画像において類円形の細胞に濃く染まっているのは壊死細胞への非特異的反応である。
〔実施例３：間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍に対するタミバロテンの腫瘍縮小効果〕
（１）実験方法
　BALB/c-nu雌性ヌードマウスにヒトすい臓がん細胞BxPC-3（1.0×106個）を皮下移植し、がん細胞単独移植群とする。また、BALB/c-nu雌性ヌードマウスにヒトすい臓がん細胞BxPC-3（1.0×106個）とヒト膵星細胞（5.0×106個）を皮下移植し、共移植群とする。膵星細胞は膵臓の線維芽細胞であり、CAFの起源細胞と考えられている。がん細胞単独移植群および共移植群をそれぞれゲムシタビン（Gem）とタミバロテン（AM80）を投与する群（Gem＋AM80群）およびGemとDMSOを投与する群（Gem＋DMSO群）の2群に分ける。AM80（3.0mg/kg）またはDMSOは移植後3日目より14日目まで連日経口投与する。Gem（50mg/kg）は移植後6日目より3日に1回腹腔内投与する。移植後15日目に腫瘍体積を測定する。プロトコールを図２５に示す。
（２）結果
　結果を図２６に示す。（A）はがん細胞単独移植群の結果、（B）は共移植群の結果である。がん細胞単独移植群では、Gem＋AM80群とGem＋DMSO群との間に有意差は認められない。共移植群では、Gem＋AM80群で有意に縮小効果が得られる。この結果は、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍では抗がん剤の腫瘍縮小効果をAM80が増強することを示す。
〔実施例４：ヒト膵星細胞およびマウス間葉系幹細胞に対するレチノイドのリプログラミングの効果〕
（１）実験方法
　初代ヒト膵星細胞は、東北大学・正宗博士から分与を受けたものを使用する。初代マウス間葉系幹細胞はCyagen株式会社より購入したものを使用する。膵星細胞および間葉系幹細胞は、どちらもCAFの起源細胞と考えられている。レチノイドは、SCREEN-WELL Nuclear Receptor ligand library（ENZO）に含まれるレチノイドを使用する。培養液は、DMEM+10％FBSを使用する。コラーゲンコートディッシュに細胞を播種して100％コンフルエントになるまで培養し、各種レチノイドを濃度が1μMとなるように添加する。48時間後に細胞を回収し、RNeasyPLUS KIT（QIAGEN）を使用しRNAを抽出し、ReverseTra Ace qPCR RT Master Mix（TOYOBO）を使用してcDNAを合成する。Gene expression assay（Thermo Fisher scientific）を使用して、qPCRでメフリン遺伝子（ISLRおよびIslr）の発現量を測定する。
（２）結果
　初代ヒト膵星細胞の結果を表１に示す。ISLR発現量は、コントロール（DMSO処理細胞）のISLR発現量を1としたときの相対発現量で示している。用いたレチノイドは、すべてISLR発現量を上昇させる。ここで、がん促進性CAFのマーカーはαSMA（遺伝子名：ACTA2）であり、がん抑制性CAFのマーカーはメフリン（遺伝子名：ISLR）であり、CAFにおける両マーカーの発現量は反比例することがわかっている。したがって、この結果はレチノイドがヒトのがん促進性CAFをがん抑制性CAFにリプログラミングすることを示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　初代マウス間葉系幹細胞の結果を表２に示す。Islr発現量は、コントロール（DMSO処理細胞）のIslr発現量を1としたときの相対発現量で示している。用いたレチノイドは、すべてIslr発現量を上昇させる。ここで、がん促進性CAFのマーカーはαSMA（遺伝子名：Acta2）であり、がん抑制性CAFのマーカーはメフリン（遺伝子名：Islr）であり、CAFにおける両マーカーの発現量は反比例することがわかっている。したがって、この結果はレチノイドがマウスのがん促進性CAFをがん抑制性CAFにリプログラミングすることを示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
〔実施例５：マウス間葉系幹細胞に対するレチノイドによるリプログラミングの効果〕
（１）実験方法
　実施例４の初代マウス間葉系幹細胞を用いた実験と同じ方法で行う。レチノイドとしてATRA、AM80およびAM580を用いる。メフリン遺伝子（Islr）、アクチン遺伝子（Acta2）、I型コラーゲン遺伝子（Col1a1）およびIII型コラーゲン遺伝子（Col3a1）の発現量をqPCRで測定する。
（２）結果
　結果を図２７に示す。（A）がメフリン遺伝子（Islr）、（B）がアクチン遺伝子（Acta2）、（C）がI型コラーゲン遺伝子（Col1a1）、（D）がIII型コラーゲン遺伝子（Col3a1）の結果である。コントロール（DMSO）では、Acta2、Col1a1およびCol3a1の発現量が高く、Islrの発現量が低い。一方レチノイド（ATRA、AM80、AM580）処理群は、Islrが高くなり、Acta2、Col1a1およびCol3a1の発現量が低くなる。この結果は、がん促進性CAFが、レチノイドによりがん抑制性CAFにリプログラミングされることを示す。
〔実施例６：マウスすい臓がん細胞に対するタミバロテン（AM80）の効果〕
（１）実験方法
　コールド・スプリング・ハーバー研究所のDavid Tuveson博士から分与を受けた、すい臓がん細胞mT5を使用する。mT5は、すい臓がん自然発症モデルであるKPCマウスに発症したすい腫瘍から樹立したすい臓がん細胞である（Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. 2015 Jan 15;160(1-2):324-38. doi: 10.1016/j.cell.2014.12.021. Epub 2014 Dec 31.）。
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。8日後（Day8）に、腫瘍の形成が確認されたマウスに対して、AM80を15日間経口投与する。AM80の投与量（0.1 mg/kg/day、0.5 mg/kg/day、1 mg/kg/day、3 mg/kg/day）により4つのAM80投与群と、コントロール群（DMSO投与）の合計5群を設ける（各群n=5）。AM80投与開始前（Day8）、Day11、Day15、Day18、Day22に体重と腫瘍体積を測定する。Day22にマウスを安楽死させて腫瘍を摘出し、組織標本を作製してメフリン遺伝子（Islr）の発現およびアクチン遺伝子（Acta2）の発現を検出するためにin situ hybridization（ISH）を行い、それぞれ陽性シグナル数をカウントする。さらに、腫瘍の組織標本を作製して、抗CD31抗体で免疫染色を行い、血管内皮細胞のマーカーであるCD31を染色して血管内腔面積を測定する。プロトコールを図２８に示す。
（２）結果
（2-1）腫瘍体積
　腫瘍体積の推移を図２９に示す。各群間に有意差はなく、いずれの濃度のAM80を投与しても、すい臓がん細胞の増殖を抑制しない。また、AM80の投与はマウスの体重に影響を及ぼさない。
（2-2）腫瘍におけるメフリン遺伝子（Islr）の発現
　腫瘍標本におけるIslrの発現をISHで検出した結果を図３０に示す。（A）はコントロール群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はAM80の3 mg/kg/day群の代表的な顕微鏡観察像、（C）はコントロール群およびAM80の3 mg/kg/day群における強拡大視野（400倍）あたりのIslr陽性シグナルのドット数を比較する図である。AM80投与により、抑制性CAFのマーカーであるIslrの発現は上昇しており、AM80の3 mg/kg/day群のIslr陽性シグナルのドット数は、コントロール群より有意に多い。
（2-3）腫瘍におけるアクチン遺伝子（Acta2）の発現
　腫瘍標本におけるActa2の発現細胞をISHで検出した結果を図３１に示す。（A）はコントロール群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はAM80の3 mg/kg/day群の代表的な顕微鏡観察像、（C）はコントロール群およびAM80の3 mg/kg/day群における強拡大視野（400倍）あたりのActa2陽性シグナルのドット数を比較する図である。AM80投与により、促進性CAFのマーカーであるActa2の発現は減少しており、AM80の3 mg/kg/day群のActa2陽性シグナルのドット数は、コントロール群より有意に少ない。
（2-4）腫瘍標本における抗CD31抗体を用いた免疫染色
　腫瘍標本を抗CD31抗体で免疫染色した結果を図３２に示す。（A）はコントロール群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はAM80の3 mg/kg/day群の代表的な顕微鏡観察像、（C）はコントロール群とAM80の3 mg/kg/day群の血管内腔面積を比較する図である。AM80の3 mg/kg/day群の血管内腔面積は、コントロール群の血管内腔面積より有意に増加している。
（2-5）小括
　C57BL/6J雌性マウスの皮下にマウスすい臓がん細胞mT5を移植して形成された腫瘍は、CAFマーカーであるIslrまたはActa2が発現していることから、間質中にCAFの浸潤を伴う悪性腫瘍と判定される。実施例６の結果は、がん促進性CAFがある状態（コントロール群、Acta2陽性）では間質内圧が高く血管は圧により押しつぶされていると考えられ、AM80投与によりがん抑制性CAFにリプログラミングされると（Islr陽性）、コラーゲン産生等が変化して間質のリモデリングが起こり、間質内圧が低下して押しつぶされていた血管が開くと考えられる。これにより、腫瘍へのドラッグデリバリーが改善されると考えられる。
〔実施例７：マウスすい臓がん細胞に対するタミバロテンとゲムシタビン併用の効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。8日後（Day8）に、腫瘍体積が均等になるようにコントロール群、ゲムシタビン投与群（Gem群）およびゲムシタビンとタミバロテン投与群（Gem＋AM80群）の3群に群分けする（各群n=8）。Gem＋AM80群には、Day8から1日1回17日間、タミバロテン（3.0mg/kg）を経口投与する。また、Gem群およびGem＋AM80群には、ゲムシタビン（50mg/kg）をDay15、Day18およびDay21に各1回ずつ腹腔内投与する。コントロール群には、タミバロテンの代わりにDMSOを経口投与し、ゲムシタビンの代わりに生理食塩水を腹腔内投与する。AM80投与開始前（Day8）、Day12、Day15、Day18、Day21、Day24に腫瘍体積を測定する。プロトコールを図３３に示す。
（２）結果
　結果を図３４に示す。図３４は、Gem群はコントロール群より有意に腫瘍増殖を抑制し、Gem＋AM80群はGem群より有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。この結果は、タミバロテンがゲムシタビンの腫瘍増殖抑制作用を顕著に増強することを示す。
〔実施例８：ヒトすい臓がん細胞に対するタミバロテンとゲムシタビンとナブパクリタキセル併用の効果〕
（１）実験方法
　BALB/c-nu雌性ヌードマウスに、ヒトすい臓がん細胞BxPC-3（1.0×106個）を皮下移植する。腫瘍体積が50～150 mm3に達した時点で、腫瘍体積が均等になるようにコントロール群、ゲムシタビンとナブパクリタキセル投与群（Gem＋nabPTX群）、およびゲムシタビンとナブパクリタキセルとタミバロテン投与群（Gem＋nabPTX＋AM80群）の3群に群分けする（各群n=7）。Gem＋nabPTX＋AM80群には、群分け日（Day1）から1日1回17日間、タミバロテン（3.0mg/kg）を経口投与する。また、Gem＋nabPTX群およびGem＋nabPTX＋AM80群には、ゲムシタビン（50mg/kg）をDay7、Day10およびDay13に各1回ずつ腹腔内投与し、ナブパクリタキセル（5mg/kg）をDay7、Day10およびDay13に各1回ずつ静脈内投与する。コントロール群には、タミバロテンの代わりにDMSOを経口投与し、ゲムシタビンの代わりに生理食塩水を腹腔内投与し、ナブパクリタキセルの代わりに生理食塩水を静脈内投与する。AM80投与開始前（Day1）、Day4、Day7、Day10、Day13、Day16に腫瘍体積を測定する。プロトコールを図３５に示す。
（２）結果
　結果を図３６に示す。図３６は、Gem＋nabPTX群はコントロール群より有意に腫瘍増殖を抑制し、Gem＋nabPTX＋AM80群はGem＋nabPTX群より有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。この結果は、タミバロテンがゲムシタビンとナブパクリタキセル併用の腫瘍増殖抑制作用を、さらに顕著に増強することを示す。
〔実施例９：マウスすい臓がん自然発症モデル（KPCマウス）におけるタミバロテンとゲムシタビン併用の効果〕
（１）実験方法
　マウスすい臓がん自然発症モデル（KPCマウス）（S. R. Hingorani et al., Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer Cell 7, 469-483 (2005).）において腹部エコー検査で膵腫瘍長径が1mm以上になったことを確認した時点（Day1）から、1日1回17日間、タミバロテン（3.0mg/kg）を経口投与する。ゲムシタビンとタミバロテン投与群（Gem＋AM80群、n=5）には、ゲムシタビン（50mg/kg）をDay7、Day10およびDay13に各1回ずつ腹腔内投与する。コントロール群（Gem群、n=5）には、ゲムシタビン（50mg/kg）をDay7、Day10およびDay13に各1回ずつ腹腔内投与するが、タミバロテンは投与しない。AM80投与開始前（Day1）、Day8、Day15、Day22に腫瘍長径を測定する。プロトコールを図３７に示す。
（２）結果
　結果を図３８に示す。図３８は、Gem＋AM80群はコントロール群（Gem群）より有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。KPCマウスはCAFの浸潤を伴うより多くの豊富な間質を有しておりヒト膵腫瘍に最も近いマウスモデルである。この自然発症モデルにおいてもタミバロテンがゲムシタビンの腫瘍増殖抑制作用を顕著に増強することを示す。
〔実施例１０：マウスすい臓がん自然発症モデル（KPCマウス）におけるタミバロテンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　ゲムシタビンに代えて抗PD1抗体または抗PDL1抗体を用いる以外は、実施例９と同じ方法で実験を行う。その結果、タミバロテンと抗PD1抗体または抗PDL1抗体との併用群はコントロール群（抗PD1抗体単独投与群または抗PDL1抗体単独投与群）より有意に腫瘍増殖を抑制する。
〔実施例１１：メフリン欠失マウスにおけるタミバロテンとゲムシタビン併用の効果〕
（１）実験方法
　メフリン欠失マウス（Maeda K. et al., Sci Rep. 2016 Feb 29;6:22288. doi: 10.1038/srep22288.）に、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。8日後（Day8）に、腫瘍体積が均等になるようにゲムシタビン単独投与群（Gem群、n=6）、ゲムシタビンとタミバロテン投与群（Gem＋AM80群、n=6）の2群に群分けする。Gem＋AM80群にはDay8から1日1回17日間、タミバロテン（3.0mg/kg）を経口投与する。Gem群およびGem＋AM80群には、ゲムシタビン（50mg/kg）をDay15、Day18およびDay21に各1回ずつ腹腔内投与する。AM80投与開始前（Day8）、Day12、Day15、Day18、Day21、Day24に体重と腫瘍体積を測定する。Day24にマウスを安楽死させて腫瘍を摘出し組織標本を作製して、アクチン遺伝子（Acta2）の発現を検出するためにin situ hybridization（ISH）を行い、それぞれ陽性シグナルをカウントする。プロトコールを図３９に示す。
（２）結果
（2-1）腫瘍体積
　腫瘍体積の推移を図４０に示す。両群間に有意差はなく、ゲムシタビンとタミバロテンの併用は、メフリン欠失マウスに移植されたすい臓がん細胞の増殖を抑制しない。両群間の体重にも有意差はない。
（2-2）腫瘍におけるアクチン遺伝子（Acta2）の発現
　腫瘍標本におけるActa2の発現細胞をISHで検出した結果を図４１に示す。（A）はGem群の代表的な顕微鏡観察像、（B）はGem＋AM80群の代表的な顕微鏡観察像、（C）は両群の強拡大視野（400倍）あたりのActa2陽性シグナルのドット数を比較する図である。両群の陽性シグナルのドット数に差は認められない。この結果は、タミバロテンはメフリンを介して併用抗がん薬の効果を増強することを示す。
〔実施例１２：メフリン過剰発現腫瘍の作製〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。腫瘍体積が50～100 mm3に達した時点で、腫瘍体積が均等になるように2群に分ける（各群n=7）。群分け日（Day1）、Day5およびDay9に、感染細胞にメフリンを過剰発現させるセンダイウイルス（SeV-Meflin）、および、感染細胞にGFPを過剰発現させるセンダイウイルス（SeV-GFP）をそれぞれ腫瘍内投与する。Day17に腫瘍体積を測定した後、マウスを安楽死させて腫瘍を摘出して組織標本を作製し、メフリン遺伝子（Islr）の発現を検出するためにin situ hybridization（ISH）を行う。プロトコールを図４２に示す。
（２）結果
　ISHの結果を図４３に示す。（A）SeV-GFP群の代表的な顕微鏡観察像であり、（B）はSeV-Meflin群の代表的な顕微鏡観察像である。SeV-Meflin群ではメフリンが過剰発現している。腫瘍体積の推移を図４４に示す。両群間に有意差はない。
〔実施例１３：メフリン過剰発現腫瘍におけるゲムシタビンの効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。腫瘍体積が50～100 mm3に達した時点で、腫瘍体積が均等になるように2群に分ける（各群n=8）。群分け日（Day1）、Day5およびDay9に、感染細胞にメフリンを過剰発現させるセンダイウイルス（SeV-Meflin）、感染細胞にGFPを過剰発現させるセンダイウイルス（SeV-GFP）をそれぞれ腫瘍内投与する。また、ゲムシタビン（50mg/kg）をDay5、Day8、Day11およびDay14に各1回ずつ腹腔内投与する。Day17に腫瘍体積を測定する。プロトコールを図４５に示す。
（２）結果
　結果を図４６に示す。SeV-Meflin群にゲムシタビンを投与すると、SeV-GFP群にゲムシタビンを投与するより有意に腫瘍増殖を抑制する。この結果は、腫瘍にメフリン遺伝子を導入してメフリンを過剰発現させることにより、抗がん剤の効果が増強されることを示す。
　本発明の思想に従ってがん患者を選択すれば、タミバロテン以外のレチノイドもゲムシタビンとの併用に同様な効果を示す。また、タミバロテンはゲムシタビン以外のがん治療薬との併用に同様な効果を示す。くわえて、タミバロテン以外のレチノイドはゲムシタビン以外の抗がん治療薬との併用に同様な効果を示す。これらの効果は、上記の実施例に準じて容易に確認できる。
〔実施例１４：メフリンの機能解析１〕
（１）実験方法
　コントロールのFlp-In-293細胞またはマウスメフリンを安定して発現している細胞の培養上清を回収する（コントロールコンディション培地、メフリンコンディション培地）。次に、各コンディション培地を指定の濃度で組換えヒトLoxL2と混合し、LOX activity assay kit（Abcam社, ab112139）を用いてLOX活性を定量する。なお、組換えLOXは活性がないためLOXL2を使用する。
（２）結果
　結果を図４７に示す。この結果は、メフリンが有意にLOX活性を阻害することを示す。
〔実施例１５：メフリンの機能解析２〕
（１）実験方法
　マウスすい臓がん自然発症モデルであるKPCマウス（野生型）とメフリン欠失KPCマウス（Maeda K, et al. Identification of Meflin as a potential marker for mesenchymal stromal cells. Sci Rep 2016;6:22288.）を使用する（各群n=6）。腫瘍による死亡直前のマウス（15～24週齢）を安楽死させてすい臓を摘出し、腫瘍の組織標本を作製する。腫瘍の組織標本からランダムに8～16枚の画像を選択し、第二高調波顕微鏡でコラーゲンの配列を測定し、曲率係数（coefficient of curvature）を算出してコラーゲンの直線性を解析する。
（２）結果
　結果を図４８に示す。（A）は野生型KPC群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（B）はメフリン欠失KPC群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（C）は両群のコラーゲンの曲率係数（coefficient of curvature）を比較した図であり、図中Nは観察視野数である。この結果はメフリン欠失KPC群において有意にコラーゲンの直線性が増加することを示す。
〔実施例１６：腫瘍の間質中のコラーゲンに対するタミバロテンの効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。8日後（Day8）に、腫瘍体積が均等になるように、コントロール群およびタミバロテン投与群（AM80群）の2群に群分けする（各群n=5）。AM80群にはDay8から1日1回7日間、タミバロテン（3.0mg/kg）を経口投与する。コントロール群には、タミバロテンの代わりにDMSOを経口投与する。Day15にマウスを安楽死させて腫瘍を摘出し、組織標本を作製する。腫瘍の組織標本からランダムに8～16枚の画像を選択し、第二高調波顕微鏡でコラーゲンの配列を測定し、曲率（直線性）を解析する。
（２）結果
　結果を図４９に示す。（A）はコントロール群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（B）はAM80群の代表的な第二高調波顕微鏡観察像、（C）は両群のコラーゲンの曲率（直線性）を比較した図である。この結果は、コントロール群において有意にコラーゲンの直線性が増加することを示す。この結果から、AM80群ではタミバロテンの投与によりCAFのメフリン発現が誘導されて間質のLOXの活性を阻害することで、コラーゲンの直線性が低下することが示唆される。
〔実施例１７：タミバロテンとゲムシタビンの投与時期による効果の検討〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。8日後（Day8）に、腫瘍体積が均等になるように、ゲムシタビン単独投与群（Gem群）、タミバロテン事前投与＋ゲムシタビン投与群（AM80事前＋Gem群）およびタミバロテン事前・同時投与＋ゲムシタビン投与群（AM80事前&同時＋Gem群）の3群に群分けする（各群n=5）。タミバロテン事前投与はDay8から1日1回7日間タミバロテン（3.0mg/kg）を経口投与する。タミバロテン同時投与はDay15から1日1回10日間タミバロテン（3.0mg/kg）を経口投与する。ゲムシタビン（50mg/kg）はDay15、Day18およびDay21に各1回ずつ腹腔内投与する。タミバロテン非投与マウス（Gem群）にはタミバロテンの事前・同時投与と同日にDMSOを経口投与する。AM80投与開始前（Day8）、Day12、Day15、Day18、Day21、Day24に腫瘍体積を測定する。プロトコールを図５０に示す。
（２）結果
　腫瘍体積の推移を図５１に示す。この結果は、AM80事前＋Gem群は、AM80事前&同時＋Gem群と同程度に腫瘍増殖を抑制することを示す。
〔実施例１８：タミバロテンとゲムシタビンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。移植後8日目に腫瘍体積が均等になるように、抗PD-L1抗体投与群（PDL1群）および抗PD-L1抗体とタミバロテン投与群（PDL1＋AM80群）の2群に群分けする（各群n=7）。群分けした日をDay1とし、Day1から1日1回7日間タミバロテン（3 mg/kg）を経口投与する。Day7にゲムシタビン（100mg/kg）、Day8、Day10、Day12、Day14、Day16およびDay18に抗PD-L1抗体（10F.9G2）250 μg/匹を腹腔内投与する。Day1、Day4、Day7からDay27まで1日おきに腫瘍体積を測定する。プロトコールを図５２に示す。さらに、全部のマウスが死亡するまでの生存率を求める。
（２）結果
　腫瘍体積の推移を図５３に示す。この結果は、PDL1群と比較してPDL1＋AM80群は有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。生存率の推移を図５４に示す。この結果は、PDL1群と比較してPDL1＋AM80群では有意な生存の延長が認められることを示す。
〔実施例１９：タミバロテンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。移植後8日目に腫瘍体積が均等になるように、コントロール群、抗PD-L1抗体投与群（PDL1群）および抗PD-L1抗体とタミバロテン投与群（PDL1＋AM80群）の3群に群分けする（各群n=7）。群分けした日をDay1とし、Day1から1日1回7日間タミバロテン（3 mg/kg）を経口投与する。Day8、Day10、Day12、Day14、Day16およびDay18に抗PD-L1抗体（10F.9G2）250 μg/匹を腹腔内投与する。コントロール群には抗PD-L1抗体に代えてIgGを投与する。Day8からDay26まで1日おきに腫瘍体積を測定する。プロトコールを図５５に示す。さらに、全部のマウスが死亡するまでの生存率を求める。
（２）結果
　腫瘍体積の推移を図５６に示す。この結果は、PDL1群と比較してPDL1＋AM80群は有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。生存率の推移を図５７に示す。この結果は、PDL1群と比較してPDL1＋AM80群では有意な生存の延長が認められることを示す。
〔実施例２０：膀胱がんに対するタミバロテンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウス膀胱がん細胞MB49（1.0×106個）を皮下移植する（Day1）。Day5に腫瘍体積が均等になるように、抗PD-L1抗体投与群（PDL1群）および抗PD-L1抗体とタミバロテン投与群（PDL1＋AM80群）の2群に群分けする（各群n=5）。Day5から1日1回7日間タミバロテン（3 mg/kg）を経口投与する。Day12、Day15、Day18およびDay21に抗PD-L1抗体（10F.9G2）250 μg/匹 を腹腔内投与する。Day2からDay40まで3日に1回腫瘍体積を測定する。プロトコールを図５８に示す。
（２）結果
　腫瘍体積の推移を図５９に示す。この結果は、PDL1群と比較してPDL1＋AM80群は有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。
〔実施例２１：肺がんに対するタミバロテンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウス肺がん細胞株であるLewis lung carcinoma cell line（LCC）にルシフェラーゼ (Luciferase)を強制発現させた細胞LCC-luc（1.0×106個）を皮下移植する（Day1）。Day5に腫瘍体積が均等になるように、抗PD-L1抗体投与群（PDL1群）および抗PD-L1抗体とタミバロテン投与群（PDL1＋AM80群）の2群に群分けする（各群n=5）。Day9から1日1回7日間タミバロテン（3 mg/kg）を経口投与する。Day16、Day19およびDay22に抗PD-L1抗体（10F.9G2）250 μg/匹 を腹腔内投与する。Day9からDay40まで3日に1回腫瘍体積を測定する。
（２）結果
　腫瘍体積の推移を図６０に示す。この結果は、PDL1群と比較してPDL1＋AM80群は有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。
〔実施例２２：胃がんに対するタミバロテンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウス胃がん細胞株YTN5またはYTN16（1.0～5.0×106個）を皮下移植する（Day1）。Day5に腫瘍体積が均等になるように、抗PD-L1抗体投与群（PDL1群）および抗PD-L1抗体とタミバロテン投与群（PDL1＋AM80群）の2群に群分けする（各群n=5）。Day5-9のいずれかにタミバロテンの投与を開始する。タミバロテンは1日1回7日間、3 mg/kgを経口投与する。タミバロテンの投与終了翌日から3日に1回、合計3回または6回PD-L1抗体（10F.9G2）250 μg/匹を腹腔内投与する。タミバロテンの投与開始から3日に1回腫瘍体積を測定する。PDL1群と比較してPDL1＋AM80群は有意に腫瘍増殖を抑制する。
〔実施例２３：メフリン欠失マウスにおけるタミバロテンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　メフリン欠失マウス（Maeda K. et al., Sci Rep. 2016 Feb 29;6:22288. doi: 10.1038/srep22288.）に、マウスすい臓がん細胞mT5（1.0×106個）を皮下移植する。移植後8日目に腫瘍体積が均等になるように、コントロール群、抗PD-L1抗体投与群（PDL1群）および抗PD-L1抗体とタミバロテン投与群（PDL1＋AM80群）の3群に群分けする（各群n=7）。群分けした日をDay1とし、Day1から1日1回7日間タミバロテン（3 mg/kg）を経口投与する。Day8、Day10、Day12、Day14、Day16およびDay18に抗PD-L1抗体（10F.9G2）250 μg/匹を腹腔内投与する。コントロール群には抗PD-L1抗体に代えてIgGを投与する。 Day8からDay26まで1日おきに腫瘍体積を測定する。プロトコールを図６１に示す。さらに、全部のマウスが死亡するまでの生存率を求める。
（２）結果
　腫瘍体積の推移を図６２に示す。この結果は、腫瘍増殖を抑制効果に関し、PDL1群とPDL1＋AM80群との間に有意差は認められないことを示す。生存率の推移を図６３に示す。この結果は、生存率に関し、PDL1群とPDL1＋AM80群との間に有意差は認められないことを示す。
〔実施例２４：胃がんに対するタミバロテンと免疫チェックポイント阻害剤併用の効果〕
（１）実験方法
　C57BL/6J雌性マウスに、マウス胃がん細胞株YTN5（5.0×106個）を皮下移植する（Day1）。Day7に腫瘍体積が均等になるように、抗PD1抗体投与群（PD1群）および抗PD1抗体とタミバロテン投与群（PD1＋AM80群）の2群に群分けする（各群n=6）。Day7にタミバロテンの投与を開始する。タミバロテンは1日1回6日間、3 mg/kgを経口投与する。タミバロテンの投与終了翌日から3日に1回、合計3回PD1抗体（10F.9G2）200 μg/匹を腹腔内投与する。タミバロテンの投与開始から3日に1回腫瘍体積を測定する。
（２）結果
　腫瘍体積の推移を図６４に示す。この結果は、PD1群と比較してPD1＋AM80群は有意に腫瘍増殖を抑制することを示す。
　なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。

Claims (21)

  1. 　レチノイドとがん治療薬との併用療法が有効ながん患者を選択する方法であって、間質中にがん関連線維芽細胞の浸潤を伴う悪性腫瘍を有するがん患者を選択する工程を含む方法。
  2. 　前記がん患者を選択する工程が、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織において、少なくとも１個のがん関連線維芽細胞を検出することを含む、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記がん患者を選択する工程が、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織の病理組織標本を作製し、顕微鏡観察下で少なくとも１個のがん関連線維芽細胞を検出することを含む、請求項１または２に記載の方法。
  4. 　前記がん患者を選択する工程が、被験がん患者から得られた悪性腫瘍組織の病理組織標本を顕微鏡観察し、がん細胞領域と間質領域が含まれる任意の強拡大視野中に１個以上のがん関連線維芽細胞を検出することを含む、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
  5. 　がん関連線維芽細胞の検出が、ヘマトキシリン・エオジン染色を行った病理組織標本を顕微鏡観察することにより行われる、請求項３または４に記載の方法。
  6. 　がん関連線維芽細胞の検出が、がん関連線維芽細胞のマーカー分子に対する免疫組織化学染色またはin situ hybridizationにより行われる、請求項３または４に記載の方法。
  7. 　請求項１～６のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、レチノイドとがん治療薬とを組み合わせて投与されることを特徴とする医薬。
  8. 　がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、請求項７に記載の医薬。
  9. 　レチノイドがタミバロテンである、請求項７または８に記載の医薬。
  10. 　レチノイドが先行投与されるように用いられる請求項７～９のいずれかに記載の医薬。
  11. 　請求項１～６のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、レチノイドを有効成分とする、がん治療薬の作用増強用および／またはがん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬。
  12. 　がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、請求項１１に記載の医薬。
  13. 　レチノイドがタミバロテンである、請求項１１または１２に記載の医薬。
  14. 　請求項１～６のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、腫瘍組織の細胞にメフリンを過剰発現させる組成物を有効成分とする、がん治療薬の作用増強用医薬。
  15. 　メフリンを過剰発現させる組成物がメフリン遺伝子を含有するウイルスベクターである、請求項１４に記載の医薬。
  16. 　がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、請求項１４または１５に記載の医薬。
  17. 　請求項１～６のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤とがん治療薬とを組み合わせて投与されることを特徴とする医薬。
  18. 　がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、請求項１７に記載の医薬。
  19. 　がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤が先行投与されるように用いられる請求項１７または１８に記載の医薬。
  20. 　請求項１～６のいずれかに記載の方法により選択されたがん患者を対象とし、がんの間質におけるリシルオキシダーゼの活性抑制を誘導する薬剤を有効成分とする、がん治療薬の作用増強用および／またはがん治療薬の標的腫瘍組織への送達促進用医薬。
  21. 　がん治療薬が化学療法剤、分子標的薬、免疫療法剤またはホルモン療法剤である、請求項２０に記載の医薬。
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