JP5620905B2 - 多能性幹細胞及び心筋細胞以外の分化細胞に対する細胞死誘導方法 - Google Patents
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Description
(1)多能性幹細胞、多能性幹細胞由来の心筋細胞以外の細胞、及び多能性幹細胞由来心筋細胞を含む細胞集団を、370mOsm/kg以上の浸透圧を有する高張液で培養することにより、多能性幹細胞及び多能性幹細胞由来の心筋細胞以外の細胞を細胞死に導く方法。
(2)高張液での培養を2時間以上行う、上記(1)に記載の方法。
(3)370mOsm/kg以上の浸透圧を有する高張液が、培養液に対して糖質(炭水化物)を添加することにより調製されたものである、上記(1)又は(2)に記載の方法。
(4)370mOsm/kg以上の浸透圧を有する高張液が、0.1〜1Mの糖質を含有するものである、上記(3)に記載の方法。
(5)糖質が、糖アルコール類、糖類、又はベタイン類である、上記(3)又は(4)に記載の方法。
(6)糖アルコール類、糖類、又はベタイン類が、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセロール、スクロース、グルコース及びトリメチルグリシンからなる群から選択される、上記(5)に記載の方法。
(7)370mOsm/kg以上の浸透圧を有する高張液が、0.1〜0.6Mのグリセロールを含有するものである、上記(4)に記載の方法。
(8)培養を10時間以上行う、上記(7)に記載の方法。
(9)細胞集団を高張液で培養した後、200〜300mOsm/kgの通常浸透圧を有する培養液に戻して更に培養する、上記(1)〜(8)のいずれか1項に記載の方法。
図2は、胚性幹細胞由来心筋細胞と、残存する胚性幹細胞が混入した培養系におけるマンニトール処理を示す。
図3は、マンニトール処理後の細胞におけるNkx2.5及びOct−3/4に対する免疫染色を示す。
図4は、マウス胚性幹細胞に対する、マンニトール0.45Mの細胞死誘導作用を示す。
図5は、マーモセット胚性幹細胞に対するマンニトールの作用を示す。ミトコンドリア膜電位感受性色素TMRMを用いて生死判定を行った。
図6は、マーモセット胚性幹細胞に対するマンニトールの効果を示す。
図7は、ヒト胚性幹細胞に対するマンニトールの作用(FACS解析)を示す。
図8は、ヒト胚性幹細胞に対するマンニトールの効果(直後)を示す。
図9は、ヒト胚性幹細胞に対するマンニトールの効果(5時間後)を示す。
図10は、は、ヒト胚性幹細胞胚様体のマンニトール処理を示す。
図11は、ヒト胚性幹細胞細胞胚様体のマンニトール処理による、Oct−3/4陽性細胞の死滅を示す。
図12は、ヒト誘導性多能性幹細胞(iPS細胞)に対するマンニトールの作用(FACS解析)を示す。
図13は、マンニトール以外の種々の糖質における、ヒト胚性幹細胞に対する細胞死誘導作用を示す。
図14は、ヒト胚性幹細胞由来心筋・非心筋細胞に対するグリセロールの作用を示す。
図15は、0.2Mマンニトールを含有する培養液で、48時間または72時間処理した細胞の状態を示す。下段にそれぞれのコロニーの拡大像を示し、代表的な細胞形態を図示した。
本実施例においては、幹細胞から心筋細胞を含む細胞塊(胚様体)を形成した場合の、細胞塊(胚様体)中の心筋細胞と未分化細胞との混在状態を確認することを目的とした。
本実施例においては、胚性幹細胞から形成された心筋細胞を含む細胞塊(胚様体)に対して糖質(糖アルコール類)処理を行った後の、心筋細胞の培養状態とそれ以外の細胞の培養状態とを確認することを目的とした。
本実施例においては、マウス胚性幹細胞を糖質(糖アルコール類)にて処理した後の幹細胞の生存状態を確認することを目的とした。
本実施例においては、マーモセット胚性幹細胞を糖質(糖アルコール類)にて処理した後の幹細胞の生存状態を確認することを目的とした。
本実施例においては、ヒト胚性幹細胞を糖質(糖アルコール類)にて処理した後の幹細胞の生存状態を確認することを目的とした。
本実施例においては、ヒト胚性幹細胞から形成された心筋細胞を含む細胞塊(胚様体)に対して糖質(糖アルコール類)処理を行った後の、心筋細胞の培養状態とそれ以外の細胞の培養状態とを確認することを目的とした。
本実施例においては、ヒト誘導性多能性幹細胞(iPS細胞)を糖質(糖アルコール類)にて処理した後のiPS細胞の生存状態を確認することを目的とした。
本実施例においては、ヒト胚性幹細胞をマンニトール以外の糖質(糖アルコール類、糖類、ベタイン類)にて処理した後の幹細胞の生存状態を確認することを目的とした。
本実施例においては、ヒト胚性幹細胞から形成された心筋細胞を含む細胞塊(胚様体)に対してマンニトール以外の糖質(糖アルコール類、糖類、ベタイン類)にて処理を行った後の、心筋細胞の培養状態とそれ以外の細胞の培養状態とを確認することを目的とした。
本実施例においては、ヒト胚性幹細胞から形成された心筋細胞を含む細胞塊(胚様体)に対して糖質(糖アルコール類)にて処理を行った後の、心筋細胞の培養条件下での細胞の形態を確認することを目的とした。
本実施例においては、マウス胚性幹細胞を低濃度のマンニトールにて処理した後の幹細胞の生存状態を確認することを目的とした。
Claims (7)
- 多能性幹細胞、多能性幹細胞由来の心筋細胞以外の細胞、及び多能性幹細胞由来心筋細胞を含む細胞集団を、糖類、グリコサミノグリカン類、アミノグリコシド類、糖アルコール類、およびベタイン類から選択される糖質(炭水化物)を添加することにより調製された370 mOsm/kg以上の浸透圧を有する高張液で培養することにより、多能性幹細胞及び多能性幹細胞由来の心筋細胞以外の細胞を細胞死に導く方法。
- 糖質が、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセロール、スクロース、グルコース及びトリメチルグリシンからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 高張液での培養を2時間以上行う、請求項1または2に記載の方法。
- 370 mOsm/kg以上の浸透圧を有する高張液が、0.1〜1 Mの糖質を含有するものである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 370 mOsm/kg以上の浸透圧を有する高張液が、0.1〜0.6 Mのグリセロールを含有するものである、請求項4に記載の方法。
- 培養を10時間以上行う、請求項5に記載の方法。
- 細胞集団を高張液で培養した後、200〜300 mOsm/kgの通常浸透圧を有する培養液に戻して更に培養する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
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