JP5616396B2 - 水を濾過する膜 - Google Patents
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Description
a)アクアポリン水チャンネルを含む脂質ミクロベシクルであって、前記ミクロベシクルを少なくとも0.1%mol/mol含む脂質ミクロベシクルを得る段階と、
b)前記ベシクルを、親水性表面を有する本質的に平面状の、透過性の支持体上の平面状脂質二分子層内部に融合させ、アクアポリンタンパク質が二分子層領域の少なくとも1%を被覆する段階と、
c)任意に、段階b)を繰り返し、複数の融合二分子層を得る段階と、
d)親水性表面を有する、第2の本質的に平面状の、透過性支持体を、段階b)または段階c)で得られた脂質二分子層上に累積して、サンドイッチ構造体を得る段階と、
e)任意に、得られたサンドイッチ構造体を透過性安定化膜内に封入する段階。
a)アクアポリン水チャンネルを含む脂質ミクロベシクルであって、前記ミクロベシクルを少なくとも0.1%mol/mol含む脂質ミクロベシクルを得る段階と、
b)前記ベシクルを、疎水性表面を有する本質的に平面状の、透過性の支持体周囲に構築された平面状脂質二分子層内部に融合させ、アクアポリンタンパク質が二分子層領域の少なくとも1%を被覆する段階と、
c)任意に、得られたサンドイッチ構造体を透過性安定化膜内に封入する段階。
アエロリシン チャンネル形成トキシン
アグロバクテリアル ターゲット−ホスト 細胞−膜アニオンチャンネル
溶血素 チャンネル形成トキシン
アラメチシンシャンネル
アルギン酸塩排出ポーリン
アモエバポア
両親媒性ペプチドマストパラン
アミロイドb−タンパク質ペプチド
動物内向き整流性K+チャンネル
アネキシン
アポトーシス調節因子
ArpQホリン
AS−48
ATPゲートカチオンチャンネル
オートトランスポータ
バシラス サブチリス j29 ホリン
細菌タイプIII−ターゲットセルポア
殺菌剤透過性増大タンパク質(Bactericidal permeability−increasing protein)
バクテリオシン AS−48 環状ポリペプチド
バクテリオロドプシン
ベチコリン チャンネル
BIyA ホリン
ボツリヌス菌および破傷風菌毒素
ブルセラ−リゾビウム ポーリン
カンピロバクター空腸主外膜ポーリン
カチリシジンカチオンチャンネル
カチオンチャンネル形成熱ショックタンパク質70
セクロピン
チャンネル形成炭疽菌感染防御抗原
チャンネル形成セラミド
チャンネル形成コリシン
チャンネル形成コリシンV
チャンネル形成d−エンドトキシン殺虫性結晶タンパク質
チャンネル形成e−トキシン
チャンネル形成ロイコシジン細胞毒素
クラミジアポーリン
塩素チャンネル
葉緑体膜アニオンチャンネル形成体
葉緑体外膜溶質チャンネル
コレステロール結合、チオール活性化溶血毒素
クロストリジウム細胞毒素
補体タンパク質C9
錯体化ポリヒドロキシブチレート−Ca2+チャンネル
コリネバクテリアポーリン
Cphlホリン
C型ナトリウム排泄増加ペプチド
シアノバクテリアポーリン
シクロデキストリンポーリン
シトヘモリシン
細胞毒素アミリン
デフェンシン
デルマセプチン
ジフテリア毒素
ダイバージシンA
ミミズリセニン毒素
エンベロープウイルスE1チャンネル
上皮塩化物チャンネル
上皮Na+チャンネル
FadL外膜タンパク質
フソバクテリアル外膜ポーリン
ギャップ接合形成コネキシン
ギャップ接合形成イネキシン
ジェネラルバクテリアルポーリン
グルコース選択性OprBポーリン
神経伝達物質受容体のグルタミン酸塩ゲート型イオンチャンネル
gp91phox食細胞NADPH−オキシダーゼ−関連cyt b558 H+チャンネル
グラミシジンAチャンネル
H+−またはNa+−転座(translocating)細菌べん毛モータ
H+−またはNa+−転座(translocating)細菌MotABべん毛モータ/ExbBD外膜輸送
ヘリコバクター外膜ポーリン
HP1ホリン
インフルエンザウイルス マトリックス−2チャンネル
昆虫デフェンシン
細胞内塩化物チャンネル
j11ホリン
jAdhホリン
jU53ホリン
ラクタシンX
ラクチシン481
ラクトシンS
ラクトコッシン972
ラクトコッシンA
ラクトコッシンG
大コンダクタンス機械受容イオンチャンネル
ホリンS
神経伝達物質受容体のリガンドゲート型イオンチャンネル
LrgAホリン
LydAホリン
マガイニン
主要な内在性タンパク質(Major intrinsic protein)
メリッチン
金属イオン輸送体(チャンネル)
マイクロシンE492
ミトコンドリアおよび色素体ポーリン
ミコバクテリアポーリン
ニシン
非選択性カチオンチャンネル−1
非選択性カチオンチャンネル−2
ヌクレオシド特異性チャンネル形成外膜ポーリン
OmpA−OmpFポーリン
OmpGポーリン
細胞小器官塩化物チャンネル
外部バクテリア膜セクレチン
外膜補助タンパク質
外膜因子
外膜線毛アッシャーポーリン
外膜ポーリン
外膜受容体
P2ホリンTM
P21ホリンS
ペディオシン
ホスフォレマン
ピロスリン
植物デフェンシン
植物プラスモデスム
植物チオニン
プランタリシンEF
プランタリシンJK
16kDaのプラスチドアウター−エンベロープポーリン
21kDaのプラスチドアウター−エンベロープポーリン
24kDaのプラスチドアウター−エンベロープポーリン
ポリシスチンカチオンチャンネル
ポリグルタミンイオンチャンネル
孔形成エキナトキシン
孔形成ヘモリシンE
孔形成RTXトキシン
PRD1ホリンM
プリオンペプチドフラグメント
シュードモナスシリンゲHrpZターゲット−ホスト細胞膜
シュードモナスOprPポーリン
ラフィノースポーリン
ロドバクターPorCaポーリン
リアノジン−イノシトール−1,4,5−三リン酸受容体Ca2+チャンネル
サポニンチャンネル
志賀毒素Bチェーン
短鎖アミドおよび尿素ポーリン
小コンダクタンス機械受容イオンチャンネル
糖ポーリン
シリンゴマイシンチャンネル
シリンゴペプチンチャンネル
T4ホリン
T4免疫ホリン
T7ホリン
タチプレシン
トルアシンチャンネル
外膜受容体(OMR)−medi−のエナジャイザーのTonB−ExbB−ExbD/TolA−TolQ−TolR
トランジエントレセプターポテンシャルCa2+チャンネル
トライパタイトヘモリシンBL
ツーパートナー分泌ポーリン
タイプB インフルエンザウイルスNBチャンネル
尿素輸送体(チャンネル)
尿素/アミドチャンネル
空胞化シトトキシン
ビブリオキトポーリン/ナイセリアポーリン
電位開口型イオンチャンネルスーパーファミリー
鞭虫スチコソームポーリン
酵母キラートキシンK1
酵母伸展活性化カチオン選択性Ca2+チャンネル
上述の第1の態様において、水膜は機能性アクアポリン水チャンネルを含む少なくとも一つの脂質二分子層によって分離された少なくとも二つの透過性支持体層を有するサンドイッチ構造体を含む。
例えばテフロン(登録商標)フィルムなど、疎水性表面を有する多孔質支持体膜の周囲に構築された平面脂質二分子層中のアクアポリン水チャンネルを再構成することも可能であり、脂質単分子層が多孔質支持体膜の各側に構築される。多孔質支持体膜の孔中で脂質二分子層が構築され、アクアポリン水チャンネルが再構成されてよい。
膜材料の固有の透過性は安定でなくてはならない。透過性の低い材料は好ましいが、しかしながら、同時に頑強であって、かつアクアポリンを組み込むことができ全体が安定で密度の高い2D濾過配列を構成しなくてはならない。支持された脂質二分子層を調製するために様々な手法が一般的に使用される。参考例としての簡単な技術は、ラングミュア−ブロジェット法である。適切な有機溶媒中の脂質溶液はラングミュアトラフ内の水性副層上に展開され、有機溶媒は蒸発される。一対の可動性隔壁が脂質膜を所望の表面圧力まで横方向に圧縮するのに使用される。その後、基板は膜を通って垂直に通過し、それによって一分子の厚さの脂質層(単分子層)を基板上部に移動する(図12参照)。第2の単分子層は、基板をもう一度フィルムを通して通過させることによって移動されてよい。全部で三つの単分子層が垂直(ラングミュア−ブロジェット)累積法によって移動されるが、第4の膜は最後の層に関して水平累積、いわゆるラングミュア−シェーファー(LS)を用いて移動されてよい。この方法は様々な脂質で使用されてよい。天然の生物学的膜はしばしば非対称である。LBおよびLSのどちらも非対称二分子層の調製の可能性を提供する。これは、累積の間に副層上の脂質膜を変更することによって行なわれる。
本発明の様々な態様に関する多くの特徴がある。
1,2−ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)
1,2−ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)
1,2−ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)
1,2−ジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)
1,2−ジミリストレオイルホスファチジルコリン
1,2−ジパルミトレオイルホスファチジルコリン
1,2−ジペトロセリノイルホスファチジルコリン
1,2−ジエライドイルホスファチジルコリン
1,2−ジリノレオイルホスファチジルコリン
1,2−ジリノレノイルホスファチジルコリン
1,2−ジエイコセノイルホスファチジルコリン
1,2−ジアラチドノイルホスファチジルコリン
1,2−ジエルコイルホスファチジルコリン
1,2−デナボノイルホスファチジルコリン(1,2−dnervonoylphosphatidylcholine)
1−パルミトイル−2−オレオイルホスファチジルコリン(POPC)
1−パルミトイル−2−リノレオイルホスファチジルコリン
1−パルミトイル−2−アラキドノイルホスファチジルコリン
1−パルミトイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルコリン
1−ステアロイル−2−オレオイルホスファチジルコリン(SOPC)
1−ステアロイル−2−リノレオイルホスファチジルコリン
1−ステアロイル−2−アラキドノイルホスファチジルコリン
1−ステアロイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルコリン
1−オレオイル−2−パルミトイルホスファチジルコリン
1−オレオイル−2−パルミトイルホスファチジルコリン
1−オレオイル−2−ステアロイルホスファチジルコリン
1,2−ジドコサヘキサノイルホスファチジルコリン
1,2−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン(DMPE)
1,2−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(DPPE)
1,2−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(DSPE)
1,2−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE)
1−パルミトイル−2−オレオイルホスファチジルエタノールアミン(POPE)
1−パルミトイル−2−リノレオイルホスファチジルエタノールアミン
1−パルミトイル−2−アラキドノイルホスファチジルエタノールアミン
1−パルミトイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルエタノールアミン
1−ステアロイル−2−オレオイルホスファチジルエタノールアミン(SOPE)
1−ステアロイル−2−リノレオイルホスファチジルエタノールアミン
1−ステアロイル−2−アラキドノイルホスファチジルエタノールアミン
1−ステアロイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルエタノールアミン
1,2−ジエライドイルホスファチジルエタノールアミン
1,2−ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン
1,2−ジリノレノイルホスファチジルエタノールアミン
1,2−ジアラキドノイルホスファチジルエタノールアミン
1,2−ジドコサヘキサノイルホスファチジルエタノールアミン
1,2−ジパルミトレオイルホスファチジルエタノールアミン
1,2−ジミリストイルホスファチジルグリセロール(DMPG)
1,2−ジパルミトイルホスファチジルグリセロール(DPPG)
1,2−ジステアロイルホスファチジルグリセロール(DSPG)
1,2−ジオレオイルホスファチジルグリセロール(DOPG)
1−パルミトイル−2−オレオイルホスファチジルグリセロール
1−パルミトイル−2−リノレオイルホスファチジルグリセロール
1−パルミトイル−2−アラキドノイルホスファチジルグリセロール
1−パルミトイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルグリセロール
1−ステアロイル−2−オレオイルホスファチジルグリセロール(SOPG)
1−ステアロイル−2−リノレオイルホスファチジルグリセロール
1−ステアロイル−2−アラキドノイルホスファチジルグリセロール
1−ステアロイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルグリセロール
1−パルミトイル−2−オレオイルホスファチジルセリン(POPS)
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1−パルミトイル−2−アラキドノイルホスファチジルセリン
1−パルミトイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルセリン
1−ステアロイル−2−オレオイルホスファチジルセリン(SOPS)
1−ステアロイル−2−リノレオイルホスファチジルセリン
1−ステアロイル−2−アラキドノイルホスファチジルセリン
1−ステアロイル−2−ドコサヘキサノイルホスファチジルセリン
1,2−ジミリストイルホスファチジルセリン(DMPS)
1,2−ジパルミトイルホスファチジルセリン(DPPS)
1,2−ジステアロイルホスファチジルセリン(DSPS)
1,2−ジオレオイルホスファチジルセリン(DOPS)
1,2−ジドコサヘキサノイルホスファチジルセリン
1,2−ジエルコイルホスファチジルセリン
カルジオリピン
二極性脂質
天然脂質抽出物:
卵黄ホスファチジルコリン
ウシ心臓ホスファチジルコリン
脳ホスファチジルコリン
ウシ肝臓ホスファチジルコリン
大豆ホスファチジルコリン
大腸菌ホスファチジルエタノールアミン
ウシ心臓ホスファチジルエタノールアミン
脳ホスファチジルエタノールアミン
ウシ肝臓ホスファチジルエタノールアミン
卵ホスファチジルエタノールアミン
ウシ肝臓ホスファチジルイノシトール
大豆ホスファチジルイノシトール
脳ホスファチジルセリン
大豆ホスファチジルセリン
1,2−ジ−10,12−トリコサジノイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DTPC)
1,2−ジ−10,12−トリコサジノイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DTPE)
1−パルミトイル−2,10,12−トリコサジノイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(PTPE)
DC8,9PC[l,2−ビス(10,12−トリコサジノイル)−sn−グリセロ−3−ホスホコリン]
diPhyPC[l,2−ジフィタノイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン]
本発明の一つの実施形態は従来のフィルターディスクの形態を有するが、それは機能が容易に評価されるためである。そのようなディスクを作製するために、機能性アクアポリンタンパク質を含むリン脂質膜の二分子層が、ラングミュア−ブロジェットトラフを用いて、25mmの市販の限外濾過ディスク表面上に累積される。本発明の好ましい実施形態において、従来の膜とともに水膜はらせん状に巻かれ、図10および11に参照されるように、らせん巻きROモジュールを形成する。
上記の第2の態様、すなわち脂質単分子層が両側に並ぶ中間支持層に疎水性材料を含む水膜、の開示から分かるように、均一の形状およびサイズを有する孔が均一に分散された疎水性膜の形態で材料を調製することが可能である。そのような疎水性膜はそれ自体独創的である。
DPPC脂質ベシクル内のAPQ−1の再構成(タンパクリポソーム)
1.小さな単層ベシクルの調製(SUV)
a.乾燥DPPC脂質はミリQ水に懸濁され、1.3−1.5mMの濃度にされる。
b.懸濁液は55℃で1時間放置することによって水和され、多重層ベシクルとなる(MLV)。
c.SUVは二つの100nmポリカーボネートフィルタを通してMLV溶液を12回押し出すことによって調製される。
d.SUV溶液は55℃で保存される。
a.約4gのBioBeadsTMはミリQ水で5回すすがれる。
b.すすがれたBioBeadsTMは水を吸入しながら1時間超音波で分解される。
a.適当な体積のSUV溶液がエッペンドルフ管にピペットで移される。
b.20% Triton X−100が50μl添加される。
c.Zeidel et al.(1992)によって記述された方法に従って精製されたリン酸緩衝液内の変性された形態のAQP−1(濃度0,5mg/ml)10μlが添加される。
d.最終的な体積が200μlになるまでミリQ水が添加される。
e.溶液は15分間振とうする間室温に保たれる。
f.約75mgのすすがれたBioBeadsTMが溶液に加えられ、その後30−45分間振とうされる間保温される。
g.溶液は清浄なエッペンドルフ管内部にピペットで移される。
h.段階f.−g.は3回繰り返される(合計4回のBioBeads)。
i.タンパクリポソームの準備ができる。
図1によって概略説明される、水膜を得るための多孔質マスコバイト上の脂質二分子層および場合によりさらなる複数の二分子層の形成
1.マスコバイトマイカ切片(約1cm2)はテープに切断される。
2.切断直後に例1のタンパクリポソーム溶液25μlがマイカ表面に塗布される。
3.サンプルは室温(21℃)で10分間保温され、融合された二分子層を形成する。
4.サンプルは保温後ミリQ水で7回すすがれ、過剰な非結合ベシクルが除かれる。
5.最後に新たに切断されたマスコバイトマイカの第2の切片が形成された脂質二分子層の上に累積される。
大腸菌脂質抽出物ベシクルにおけるAQP−1の再構成
大腸菌全脂質抽出物のクロロホルム溶液はAvanti Polar Lipids(アラバマ州アラバスター)から入手された。溶媒(クロロホルム、エタノール、メタノール、デカン)は全てシグマ−アルドリッチ社(ミズーリ州セントルイス)から購入された。SM−2BioBeadsはBioRad Laboratories(カリフォルニア州ハーキュリーズ)から購入された。全ての調製に使用された水は超純水Milli−Q水(18.2MΩcm−1)であった。ウシ赤血球から精製されたアクアポリン−1はUniversity of AarhusのDr. Jan Enghildにより変性タンパク質の懸濁液として得られた。
平面状の二分子層の形成および電圧固定法:イオン伝導性を増加することなく脂質二分子層内部に組み込まれたAQP−1
電圧固定法は脂質(または細胞膜)の電位Vをあらゆる所望のレベルに制御(または「固定」)する。ここで使用される方法は、二つの水溶液の間の仕切りにおいて形成された二重膜を横切る電位を測定する。AgClコート銀電極が一つのチャンバに配置され、この電圧を保持されるべき電圧(コマンド電圧と呼ばれる)と電子的に比較する。クランプ回路はその後他の電極を通じて他のチャンバに電流を戻す。この電子的フィードバック回路は、透過面が変わったときでさえ二層間の電位を所望のレベルに維持する。最も重要なことに、この装置は与えられた電圧に二層間の電位を保持するために必要とされる電流Iの同時測定を許容する。従って、電圧固定技術は膜電位がどのように膜を横切るイオン電流に影響するかを示す。この影響は電流−電圧(I/V)関係で表現される。
浸透勾配研究:低浸透圧性側の未攪拌層内のイオン濃度の増加をもたらす浸透勾配を与えられた脂質二分子層内部に組み込まれたAQP−1
AQP−1を含む脂質二分子層の形成の後、浸透勾配に駆動された膜を横切る水分流動が、膜近傍の未攪拌層内のK+イオン濃度の変化を測定することによって観察された。
本発明による膜を含むUPWシステム
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2 逆浸透膜
3 透過された液体通路部材
4 供給液体通路部材
5 枠部材
Claims (21)
- 脂質ベシクル及び支持体を含む、水を濾過するための膜であって、
脂質ベシクルが、該脂質ベシクル中に再構成されたアクアポリン水輸送タンパク質を含み、そして支持体上に存在している、水を濾過するための膜。 - 脂質ベシクルが、1,2−ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)および大腸菌全脂質抽出物から選択される両親媒性の脂質を含む、請求項1に記載の水を濾過するための膜。
- 前記アクアポリン水輸送タンパク質がAQP1である、請求項1又は2に記載の水を濾過するための膜。
- 前記AQP1がウシAQP1である、請求項3に記載の水を濾過するための膜。
- 前記支持体が親水性である、請求項1から4の何れか一項に記載の水を濾過するための膜。
- 前記支持体が多孔質である、請求項1から5の何れか一項に記載の水を濾過するための膜。
- 前記支持体が、マイカ、AlO2、および重合体から選択される材料を含む、親水性膜表面を備える、請求項1から6の何れか一項に記載の水を濾過するための膜。
- マイカがマイカテープである、請求項7に記載の水を濾過するための膜。
- 前記重合体がポリスルホンまたはセルロースである、請求項7に記載の水を濾過するための膜。
- 水濾過装置を与えるハウジング内にさらに収容された、請求項1から9の何れか一項に記載の水を濾過するための膜。
- 水溶性の溶液から水を抽出するための、請求項1から10の何れか一項に記載の水を濾過するための膜の使用。
- 前記水溶性の溶液に溶解された溶質の濃度を増加する、請求項11に記載の使用。
- 請求項1から10の何れか一項に記載の水を濾過するための膜を通じた水溶液の濾過を含み、該膜上にイオン、粒子、有機物および/またはコロイドを保持し、それによって濾過物は本質的にイオン、粒子、有機物およびコロイドを含まない水である、超純水濾過物を調製する方法。
- 浸透圧が前記水を濾過するための膜の下流側に適用されている、請求項13に記載の方法。
- 前記浸透圧が精製される水源よりも高い浸透圧を有する濃縮された溶液に由来する、請求項14に記載の方法。
- 非毒性かつ容易に除去可能な溶質を膜の下流側に位置する新鮮な水のチャンバに高濃度で添加して膜を通る通常の浸透を促す、請求項15に記載の方法。
- 請求項1から10の何れか一項に記載の水を濾過するための膜とハウジングとを含む水濾過装置であって、該膜がハウジング内に設置されている、前記水濾過装置。
- 請求項1から10の何れか一項に記載の水を濾過するための膜を備えた水濾過装置を用いることを含む、体液から水を抽出および再生するための方法。
- 前記体液が、尿、乳および汗/発汗から選択される、請求項18に記載の方法。
- 逆浸透水濾過装置を用いることを含む、塩水源から脱塩水を製造するための方法であって、該逆浸透水濾過装置内の最終的な逆浸透濾過膜の少なくとも一つが、請求項1から10の何れか一項に記載の水を濾過するための膜によって代替されている、前記方法。
- 逆浸透水濾過装置を用いることを含む、原水源から純水を製造するための方法であって、該逆浸透水濾過装置内の最終的な逆浸透濾過膜の少なくとも一つが、請求項1から10の何れか一項に記載の水を濾過するための膜によって代替されている、前記方法。
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